CN111202847A - Pax6基因或其表达产物在制备抑制纤维化的药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了PAX6基因或其表达产物在制备抑制纤维化的药物中的应用。本发明的实验证实PAX6能够通过抑制纤维化促进因子TGFβ，促进纤维化抑制因子IL1R2、CXCL10，从而起到保护心脏抑制纤维化的作用，因此PAX6在心脏中是一个潜在的全新的治疗心脏纤维化从而预防心衰的重要靶点。

Description

PAX6基因或其表达产物在制备抑制纤维化的药物中的应用

技术领域

本发明涉及基因领域，尤其涉及PAX6基因或其表达产物在制备抑制纤维化的药物中的应用。

背景技术

心脏纤维化是大量心脏疾病中常见的一种重要的病理过程。心脏纤维化最主要的特点是心肌中细胞外基质的大量聚集。细胞外基质的过度沉积会导致心脏顺应性降低以及舒张功能障碍。心脏纤维化的进一步发展会导致心输出量的降低最终导致心力衰竭。心脏成纤维细胞是心肌组织中提供结构支持的主要细胞类型。在各种类型的心脏损伤下，心脏成纤维细胞可被激活分化为肌成纤维细胞，从而具有更有效的分泌细胞外基质蛋白的兼具成纤维细胞以及平滑肌细胞特性的特殊细胞类型。重要的是，调控心脏成纤维细胞分化从而促进细胞外基质沉积的分子机制尚未完全阐明。

转录因子PAX6的基因定位在染色体11p13区域，它是一个在演化过程中高度保守的PAIRED BOX家族的成员。全长的PAX6包含422个氨基酸，它的蛋白结构特点是包含一个长配对结构域(long paired domain，PD)以及一个同源异性结构域(homeodomain，HD)，并且有两个DNA结合域。关于PAX6目前的研究主要围绕在眼睛、中枢神经系统、胰岛细胞、嗅觉系统的早期发育过程中。然而关于PAX6在心脏中，特别是心脏成纤维细胞中的作用尚不清楚。值得注意的是，一项研究报道了转录因子PAX6对于DNA的结合活性在生理性和病理性心肌肥大中具有相反的调节作用。生理性肥厚的特点是收缩功能正常或者增强，心脏结构和组织结构均正常。相反的，病理性肥大常常伴随着纤维化重塑的增加，以及其他经常发展为心力衰竭的细胞功能障碍。因此，以上内容提示PAX6可能在心脏纤维化的过程中发挥作用。通常认为TGFβ在多种组织和器官中是促纤维化因子。在晶状体中，TGFβ诱导上皮间质转化，研究发现在此过程中PAX6表达水平降低。另外，有研究报道在神经外胚层发育过程中，PAX6可能通过激活miR135b的作用从而抑制TGFβ和BMP信号通路。然而，PAX6能否抑制心脏纤维化成为一个全新的临床治疗心脏纤维化的靶点尚不得而知，亟需进一步的研究。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新的抑制细胞纤维化的药物。为了实现本发明的目的，拟采用如下技术方案：

本发明的目的之一是提供PAX6基因或其表达产物在制备抑制纤维化的药物中的应用。本申请的发明人通过生物化学、分子生物学、细胞学研究手段，研究发现PAX6表达水平在小鼠以及小鼠成纤维细胞纤维化模型等病理模型中显著下降。后续使用小干扰RNA的技术手段通过小干扰RNA转染成纤维细胞的方式，利用siRNA敲减降低细胞PAX6蛋白水平，从而明确PAX6对小鼠心脏功能的作用。这一发现是本申请的发明人首次发现的，并且是出乎意料的。

本发明另一方面涉及PAX6基因表达促进剂在制备抑制纤维化的药物中的应用。

对于PAX6基因表达促进剂而言，没有特别的限定，包括但不限于过表达PAX6、含有PAX6基因的载体。有报道高胰岛素水平会上调Pax6表达，同样IGF-2也可以。有报道microRNA可以促进PAX6基因表达，例如过表达miR-7、miR-375以及拮抗miR-365均可促进PAX6基因表达。因此，PAX6基因表达促进剂还可以包括胰岛素上调剂、IGF-2、过表达miR-7、miR-375以及拮抗miR-365等。在本发明的一个优选实施方式中，所述的纤维化是指心脏纤维化、胰脏纤维化或肺脏纤维化。

虽然本发明的发现优选应用于人体或动物体的细胞纤维化，但是，本发明还涉及PAX6基因或其表达产物在抑制体外心脏成纤维细胞增殖中的应用。

本发明同样还涉及PAX6基因敲除试剂在促进体外心脏成纤维细胞增殖中的应用。

更进一步的，本发明还涉及PAX6基因或其表达产物在体外心脏成纤维细胞中抑制纤维化促进因子TGFβ以及促进纤维化抑制因子IL1R2和CXCL10中的应用。本申请的实验结果显示使用小RNA干扰PAX6后，纤维化抑制因子IL1R2、CXCL10的蛋白水平降低，纤维化促进因子TGFβ的蛋白水平升高。

本发明还涉及PAX6基因或其表达产物通过抑制纤维化促进因子TGFβ以及促进纤维化抑制因子IL1R2和CXCL10在保护心脏以及抑制细胞纤维化中的应用。实验证实PAX6能够通过抑制纤维化促进因子TGFβ，促进纤维化抑制因子IL1R2、CXCL10，从而起到保护心脏抑制纤维化的作用，因此PAX6在心脏中是一个潜在的全新的治疗心脏纤维化从而预防心衰的重要靶点。

本发明首次提供了PAX6作为新的重要的治疗心脏纤维化的靶点的新应用。特别是，本发明首先通过小干扰RNA干扰转录因子PAX6的表达，从而阻断其对下游基因的转录的促进作用，使得其下游多个纤维化抑制因子丧失功能，从而验证了PAX6对于纤维化的抑制作用，因此促进PAX6对下游基因靶基因的调控活性有助于抑制纤维化的发生。本申请的实验证实PAX6能够通过抑制纤维化促进因子TGFβ，促进纤维化抑制因子IL1R2、CXCL10，从而起到保护心脏抑制纤维化的作用，因此PAX6在心脏中是一个潜在的全新的治疗心脏纤维化从而预防心衰的重要靶点。

附图说明

图1：实时荧光定量PCR检测心脏纤维化心脏组织中转录因子PAX6的mRNA的水平。

图2：蛋白质印迹法验证转录因子PAX6在小鼠AngII刺激构建的心脏纤维化模型中的蛋白水平。图2A：蛋白质印迹法利用PAX6抗体检测健康心脏组织以及纤维化心脏组织中的PAX6蛋白水平。图2B：PAX6蛋白印迹法检测的蛋白含量的定量及统计分析结果。

图3：实时荧光定量PCR检测血管紧张素刺激后心脏成纤维细胞中转录因子PAX6的mRNA的水平。

图4：免疫荧光染色分析转录因子PAX6在成纤维细胞的AngII刺激环境下的蛋白表达水平。圈出的荧光表示细胞核的位置，其余荧光表示PAX6的位置以及荧光强度。

图5：蛋白质印迹法验证转录因子PAX6、纤维化标志物fibronectin、αSMA和Col I在成纤维细胞的AngII病理刺激环境下蛋白质的表达水平。图5A：蛋白质印迹法利用PAX6、fibronectin、αSMA和Col I抗体检测心脏成纤维细胞血管紧张素II刺激后的PAX6、fibronectin、αSMA和Col I蛋白水平。图5B：PAX6、fibronectin、αSMA和Col I蛋白印迹法检测的蛋白含量的定量及统计分析结果。

图6：蛋白质印迹法检测siRNA转染敲减成纤维细胞中的PAX6后，转录因子PAX6、纤维化标志物fibronectin、αSMA和Col I的蛋白表达水平。图6A：敲减PAX6以后，PAX6、纤维化标志物fibronectin、αSMA和Col I的蛋白水平。图6B：PAX6、fibronectin、αSMA和Col I蛋白印迹法检测的蛋白含量的定量及统计分析结果。

图7：染色质免疫共沉淀实验检测转录因子PAX6对其可能的下游基因的启动子的结合能力。图7A-图7C：利用对照IgG和PAX6抗体进行染色质免疫共沉淀实验，检测PAX6蛋白对IL1R2、CXCL10启动子以及TGFβ内含子的结合能力。

图8：实时荧光定量PCR检测心脏成纤维细胞中使用小干扰RNA敲减转录因子PAX6后IL1R2、CXCL10以及TGFβ的mRNA水平。图8A：敲减PAX6后CXCL10的mRNA水平，图8B：敲减PAX6后IL1R2的mRNA水平，图8C：敲减PAX6后TGFβ的mRNA水平。

图9：蛋白质印迹法检测心脏成纤维细胞中使用小干扰RNA敲减转录因子PAX6后IL1R2、CXCL10以及TGFβ的蛋白水平。图9A：敲减PAX6后IL1R2、CXCL10以及TGFβ的蛋白水平，图9B：敲减PAX6后，IL1R2、CXCL10以及TGFβ蛋白印迹法检测的蛋白含量的定量及统计分析结果。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步的详细说明，以下是对本发明的解释而不是限定，本发明中所用的方法及其相关的试剂，可以有其他可选择和替代方案，能够达到相同技术结果即可。

下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照所属领域的常规操作进行，或按照制造厂商所建议的条件进行。

实施例1、动物病理模型实验，构建小鼠心脏纤维化模型，取材心脏组织，利用实时定量PCR以及蛋白质印记实验的方法，检测PAX6 mRNA表达以及蛋白表达含量。

血管紧张素II诱导小鼠心脏纤维化模型的制备：10周周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为两组，手术组和假手术组，小鼠使用血管紧张素(3mg·kg-1·day-1)微渗透泵埋泵(Alzet MODEL 1007D,DURECT,Cupertino,CA)7天的方式构建纤维化模型。微渗透压泵的准备：手术前1天，将血管紧张素II(无菌PBS缓冲液溶解)用1mL注射器注入微渗泵，将微渗透压泵浸泡于无菌PBS缓冲液中，37摄氏度平衡过夜。手术时，用2％～3％的异氟烷麻醉小鼠，在小鼠后颈部剪开一长约0.7cm的横切口，用镊子伸入皮下，钝性分离皮下组织，将微渗透压泵埋入，缝合伤口，涂上新霉素软膏防止感染。手术组持续输注血管紧张素II，浓度为3mg/kg/d，持续7天。

实时荧光定量PCR：实验使用TRIzol Reagent(Invitrogen,Carlsbad,CA,USA)提取心脏成纤维细胞的总RNA。之后使用20μl反转录体系(M-MLV Reverse TranscriptionSystem,Promega Corporation,Fitchburg,WI,USA)进行反转录合成cDNA，使用SYBRGreenMix(TransGen Biotech,Beijing,China)进行荧光定量PCR，仪器型号为Mastercycler ep realplex² Real-Time PCR System(Eppendorf)。PAX6基因的相对表达量由其基因和看家基因GAPDH的CT值的比值计算得出。

心肌组织总蛋白的提取：取保存于液氮中的心肌组织，放入研钵中用液氮研磨，取三分之二(另外三分之一用来提取RNA)加入组织裂解液中(20mmol/LTris-HCl pH 7.4，150mmol/LNaCl,2.5mmol/L EDTA,50mmol/LNaF，0.1mmol/L Na₄P₂O₇，1mmol/L Na₃VO₄,1％Triton X-100,10％Glycerol,0.1％SDS,1％deoxycholic acid,1mmol/LPMSF，1g/mLaprotinin.)混匀后冰上静置15分钟，大约每50毫克心肌组织加入800微升裂解液。收集匀浆液，超声破碎(45％，5s on,5s offfor4 cycles)后于4摄氏度12000rpm离心15分钟，将上清一部分移入新EP管中，蛋白定量后-80摄氏度冻存，一部分加入四分之一体积的5Xloadingbuffer，混匀，100摄氏度煮5分钟，冻存，留作后续用westernblot检测相关蛋白。

蛋白质印迹实验：使用10％SDS-PAGE胶电泳后硝酸纤维素膜转膜，5％脱脂牛奶室温封闭1小时，一抗4摄氏度冷室过夜孵育，一抗货号分别为：Fibronectin(ab2413,abcam,Cambridge,MA,USA),αSMA(ab32575,abcam,Cambridge,MA,USA),Col I(203002,MDBiosciences),PAX6(ab5790,abcam,Cambridge,MA,USA),TGFβ(10804-MM33,Sinobiological,Beijing,China)，IL1R2(sc-376247,Santa Cruz Biotech,CA,USA),CXCL10(ab9938,abcam,Cambridge,MA,USA),GAPDH(2118S,CST).TBST洗膜洗三遍后换对应的种属二抗，室温1小时，TBST再洗膜后显影，将膜至于显影液中(Millipore Corporation)，然后控干放入发光检测机器中曝光。条带强度使用NIH ImageJ software软件定量。

使用血管紧张素II微渗透泵埋泵的方式，选用10周雄性C57BL/6小鼠构建小鼠心脏纤维化模型，检测心脏纤维化模型中心脏组织中PAX6的表达水平。

首先使用TRIZOL裂解小鼠的心脏组织，提取RNA进行反转录，利用实时荧光定量PCR检测比较健康小鼠心脏和心脏纤维化小鼠心脏组织中PAX6的mRNA水平。图1实验结果显示与健康的心脏组织相比较，PAX6的mRNA水平在血管紧张素II刺激构建的纤维化心脏组织中显著降低。

此后利用心脏组织总蛋白样本进行了蛋白质免疫印迹实验，检测了PAX6的蛋白水平。实验结果如图2所示，转录因子PAX6蛋白水平在在血管紧张素II刺激构建的纤维化心脏组织中明显下降(图2A)，定量和统计的结果提示转录因子PAX6的蛋白水平在心脏纤维化组织中显著地降低(图2B)。以上结果提示心脏纤维化过程中转录因子PAX6可能通过mRNA水平受到抑制从而导致蛋白含量减少，但PAX6的减少与心脏纤维化之间的关系，以及与心脏成纤维细胞的关系尚不清楚，仍需进一步的探索。

实施例2、利用心脏成纤维细胞，使用1μM血管紧张素处理细胞三天后，利用免疫荧光和蛋白质印记实验检测PAX6、纤维化标志物fibronectin、αSMA和Col I的蛋白水平。

成年小鼠心脏成纤维细胞的分离和培养：将约8周龄的雄性C57/BL6小鼠断颈处死，迅速浸泡于75％的酒精约半分钟，立即于超净工作台中开胸取出心脏，置入4摄氏度的PBS缓冲液中清洗两次，剪掉心房和心底部的血管，然后将心室剪碎成小块，用PBS洗一遍洗去残血。加入PBS平衡盐溶液配制的0.1％II型胶原酶(330U,Worthington,Columbia,NJ,USA/Sigma,St.Louis,MO,USA)进行消化。整个消化过程在36-37摄氏度恒温搅拌条件下进行，每消化8分钟后取上清消化液，加入到等量的含10％FBS的DMEM培养液中，混合均匀。重复该过程约7～8次直到组织块消化完全，将收集的几管细胞室温1000rpm离心5分钟，弃上清，用含10％FBS的DMEM培养液重悬细胞，合并每次所得心肌细胞悬液，接种于直径100mm的培养皿中，在37摄氏度、5％CO2的培养箱内放置2小时使成纤维细胞基本贴壁。吸弃培养皿中的培养液，加入新的含10％FBS的DMEM培养液继续培养。3天后细胞长满，传代并进行后续实验。

心脏成纤维细胞蛋白质的提取方法：细胞先用胰酶从基底胶上消化下来，离心后取上清，使用冷PBS清洗三遍，后用细胞裂解液(20mmol/LTris-HCl PH7.4,150mmol/LNaCl,2.5mmol/L EDTA,50mmol/L NaF,0.1mmol/L Na₄P₂O₇,1mmol/L Na₃VO₄,1％Triton X-100,10％glycerol,0.1％SDS,1％deoxycholic acid,1mmol/L PMSF,and 1mg/mlaprotinin)裂解细胞，超声破碎后在4摄氏度条件下，12000g离心15分钟。收上清。取5微升进行蛋白定量后，其余上清加入5X凝胶上样缓冲液，100摄氏度5分钟确保蛋白变性后立即放冰上。

免疫荧光染色实验：细胞在37摄氏度条件下，用37摄氏度温热4％多聚甲醛固定15分钟后，使用温热PBS清洗3次，再用0.2％Triton X-100破膜20-30分钟。温热PBS清洗3次后加入封闭液(5％BSA)封闭30分钟。此后使用一抗αSMA(ab32575,abcam,Cambridge,MA,USA),fibronectin(ab2413,abcam,Cambridge,MA,USA),POU2F1(ab178869,abcam,Cambridge,MA,USA)在4摄氏度条件下过夜孵育。回收储存一抗后，PBS清洗3次，然后室温孵育二抗Alexa Fluor4881小时。室温条件下使用Hoechst(Invitrogen,Carlsbad,CA,USA)染核8分钟。使用高内涵筛选成像系统Cellomics ArrayScan VTI HCS Reader(ThermoFisher Scientific,Rockford,IL,USA)的Morphology Explorer BioApplication模块统计和分析荧光强度。

细胞水平，提取原代小鼠心脏成纤维细胞，在12孔板中培养至P2代，使用1微摩尔浓度血管紧张素II刺激细胞，三天后收样。首先收集样本，提取mRNA,利用实时荧光定量PCR检测mRNA水平的变化。实验结果显示，血管紧张素II处理使得PAX6 mRNA显著地下降(图3)。

于此同时，选用同批次处理的样品，固定样本，再利用免疫荧光检测其内源PAX6蛋白水平。图4A中圈出的荧光为细胞核位置，其余荧光分别表示特定抗体识别的PAX6蛋白的定位和含量。实验结果可以看到转录因子PAX6主要表达于细胞核中。实验结果提示在血管紧张素II刺激下，PAX6荧光强度均有不同程度的下降。图4B中定量结果显示在血管紧张素II刺激三天后，转录因子PAX6含量显著减少。

此后利用同处理条件下培养的心脏成纤维细胞总蛋白进行蛋白质印迹实验，检测转录因子PAX6以及纤维化标志物fibronectin、αSMA和Col I的蛋白水平。实验结果如图5所示，PAX6检测得到了与免疫荧光实验相似的结果，转录因子PAX6蛋白水平在血管紧张素II刺激后降低，与此相反的是，纤维化标志物fibronectin、αSMA和Col I的蛋白水平在血管紧张素II刺激后升高(图5A)。定量的结果统计分析表明其蛋白水平升高的程度具有显著性。纤维化标志物在血管紧张素II刺激后，较对照组蛋白水平显著的升高(图5B)。

实施例3、在心脏成纤维细胞水平敲减PAX6，使用蛋白质印迹实验检测PAX6对于肌成纤维细胞标志物fibronectin、αSMA和Col I的蛋白水平的影响。

心脏成纤维细胞转染小干扰RNA：心脏成纤维细胞P2代由实验转染小干扰RNA的前一日晚上由P1代传代到6孔板中，37摄氏度，5％二氧化碳环境下过夜培养，确保成纤维细胞形态铺展，并且尚未产生过得影响转染效率的细胞外基质。转染当日一早实验37摄氏度温热PBS温和清洗6孔板中的成纤维细胞，重复清洗三遍，确保彻底洗去培养液,之后每孔加入500μl OPTI-MEM(Opti-MEM I Reduced Serum Medium,31985070,Life)，再分别加入80nmol/L PAX6 siRNA(SMARTpool：ON-TARGETplus Pax6 siRNA，L-062890-00-0005，dharmacon)或者对照siRNA(AllStars Neg.Control siRNA(20nmol)，1027281，QIAGEN)和3μl HiPerFect转染试剂(301705,QIAGEN,Beijing,China)。转染6小时后加含10％胎牛血清的DMEM培养液培养。检测蛋白的实验使用转染小干扰RNA三天时的细胞样品。

为了进一步确定PAX6在心脏成纤维细胞中的作用，首先设计实验通过在心脏成纤维细胞中转染PAX6 siRNA的方式敲减PAX6，蛋白质印迹实验证实心脏成纤维细胞中敲减PAX6有效，与此同时检测纤维化标志物fibronectin、αSMA和Col I的蛋白水平(图6)。实验结果表明敲减PAX6后，纤维化标志物fibronectin、αSMA和Col I蛋白水平均有不同程度的升高(图6A)，并且定量和统计的结果显示这种纤维化标志物的升高具有显著性差异(图6B)。该结果提示PAX6参与纤维化的过程，具体起到抑制纤维化的作用。

实施例4、利用染色质免疫共沉淀实验确定转录因子PAX6对其可能的下游基因IL1R2、CXCL10的启动子以及TGFβ的内含子具有结合能力。

染色质免疫共沉淀实验：1％的甲醛用来交联活心脏成纤维细胞中蛋白质和与它们相连的DNA。细胞固定后细胞裂解物通过超声破碎，并且用琼脂糖凝胶电泳的方式确定DNA片段的大小在500-600个碱基的大小。PAX6的抗体以及对照的兔单抗IgG(ab172730,abcam,Cambridge,MA,USA)用来进行免疫结合，后再加入A/G珠子进行免疫沉淀。沉淀离心后用不同盐浓度漂洗液清洗后，再进行洗脱和接交联，之后利用实时定量PCR检测IL1R2、CXCL10的启动子以及TGFβ的内含子的水平。

由于细胞实验的结果显示敲减PAX6能够促进心脏成纤维细胞中纤维化标志物蛋白水平升高。这提示PAX6在心脏成纤维细胞中是纤维化的抑制因子。然而PAX6发挥作用的机制尚不清楚。TRANSFAC生物信息学分析的结果预测PAX6能够结合在纤维化抑制因子IL1R2、CXCL10的启动子以及纤维化促进因子TGFβ内含子上，因此设计进行了染色质免疫共沉淀实验，实验的结果如图7所示，使用PAX6的抗体去免疫沉淀总蛋白中的PAX6,在使用实时荧光定量PCR检测与PAX6结合的IL1R2、CXCL10启动子以及TGFβ内含子的含量。与对照IgG组相比，POU2F1抗体沉淀下的蛋白确实会结合更多的IL1R2、CXCL10启动子以及TGFβ内含子。以上结果提示转录因子PAX6能够结合在这三个基因的染色质上，但PAX6对这三个基因的结合能力究竟起怎样的作用仍需要进一步的探究。

实施例5、在心脏成纤维细胞中，利用小RNA干扰的方式敲减细胞内PAX6的蛋白水平，从而利用实时荧光定量PCR以及蛋白质印记实验的手段检测其下游调控基因IL1R2、CXCL10以及TGFβ的表达水平。

由于此前的实验已经确定PAX6能够对心脏功能起到保护作用。然而其中的作用机制尚不清楚。因此利用生物信息学手段分析找到了PAX6可能调控的三个参与心脏纤维化的作用靶点IL1R2、CXCL10以及TGFβ。因此首先利用实时荧光定量PCR检测了敲减PAX6时这三个基因的mRNA水平。如图8所示，敲减PAX6后，纤维化抑制因子IL1R2、CXCL10的mRNA水平降低，纤维化促进因子TGFβ的mRNA水平升高。

后续使用蛋白质印迹实验验证敲减PAX6时这三个基因IL1R2、CXCL10以及TGFβ的蛋白水平。实验结果得到和mRNA类似的趋势，使用小RNA干扰PAX6后，纤维化抑制因子IL1R2、CXCL10的蛋白水平降低，纤维化促进因子TGFβ的蛋白水平升高(图9A)，并且这种变化的差异均有统计学显著性(图9B)。以上实验证实PAX6能够通过抑制纤维化促进因子TGFβ，促进纤维化抑制因子IL1R2、CXCL10，从而起到保护心脏抑制纤维化的作用，因此PAX6在心脏中是一个全新的治疗心脏纤维化从而预防心衰的重要靶点。

以上具体实施方式仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神及原则之内所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。以上所述是本发明的优选实施例，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明所述原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (8)

1.PAX6基因或其表达产物在制备抑制纤维化的药物中的应用。

2.PAX6基因表达促进剂在制备抑制纤维化的药物中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，所述的PAX6基因表达促进剂包括过表达PAX6、含有PAX6基因的载体。

4.根据权利要求1～3任意一项所述的应用，所述的纤维化是指心脏纤维化、胰脏纤维化或肺脏纤维化。

5.PAX6基因或其表达产物在抑制体外心脏成纤维细胞增殖中的应用。

6.PAX6基因敲除试剂在促进体外心脏成纤维细胞增殖中的应用。

7.PAX6基因或其表达产物在体外心脏成纤维细胞中抑制纤维化促进因子TGFβ以及促进纤维化抑制因子IL1R2和CXCL10中的应用。

8.PAX6基因或其表达产物通过抑制纤维化促进因子TGFβ以及促进纤维化抑制因子IL1R2和CXCL10在保护心脏以及抑制细胞纤维化中的应用。

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