CN111187737B - 一种耐盐碱促生菌及其在盐碱地改良中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于环境微生物技术领域，特别是涉及一种耐盐碱促生菌及其在盐碱地改良中的应用。本发明的海水盐单胞菌Halomonas aquamarina DB01，其保藏编号CCTCC NO：M 2019511；并且对高盐、高碱环境适应性强，可在盐碱土壤环境中生长良好；能有效降低盐碱地中可溶性盐含量，提高植物生物量和产量；可用于改良农田、林地等原生和次生盐碱土壤，降低盐碱胁迫对植物的毒害作用，具有较高的应用价值。

Description

一种耐盐碱促生菌及其在盐碱地改良中的应用
技术领域
本发明涉及环境微生物技术领域，特别是涉及一种耐盐碱促生菌及其在盐碱地改良中的应用。
背景技术
土地盐碱化是一个世界性的土壤退化问题，盐碱化不仅降低了耕地的生产力，而且严重制约着耕地利用的永续性，直接影响着农业的可持续发展。盐碱化土地在我国的分布十分广阔，广泛分布于我国华北、西北、东北西部和长江以北沿海等地区，总面积约有1×108hm2。除自然形成的盐碱地外，人们对化肥和杀虫剂的滥用以及不当的耕作方式，也会造成盐分在耕作层的累积从而导致土地次生盐渍化的形成。目前国内外对盐碱地改良的研究主要集中在物理和化学改良法，但是这两种方法的费用较高，生物改良具有成本低且无二次污染等优点，因此生物改良法中的微生物修复法具有广阔的应用前景。
耐盐碱促生微生物具有改善盐碱地的能力，耐盐碱促生微生物分泌的胞外聚合物(EPS)能通过范德华力和静电引力与土壤颗粒形成土壤团聚体，增加土壤的透气性，同时减少盐离子对作物的毒害作用。它们能通过分泌植物激素等物质来引发一系列植物内部的系统调控。此类微生物能够分泌吲哚-3-乙酸(IAA)等促植物生长激素来调控盐胁迫下植物的系统反应，增加抗氧化酶(过氧化物酶、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶)和脯氨酸的合成量，从而清除盐胁迫所增加的活性氧的数量和抵消盐胁迫给植物带来的渗透压的威胁，同时还能减少膜过氧化的代谢产物丙二醛的生成量。除此之外，耐盐碱促生菌还具有溶磷、解钾、固氮、产生铁载体等功能。因此，耐盐碱微生物作为一种无污染、可持续并且环境友好型的微生物，受到越来越多的关注。
发明内容
鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种耐盐碱促生菌及其在盐碱地改良中的应用，用于解决现有技术中的问题。
为实现上述目的及其他相关目的，本发明第一方面提供一种耐盐碱促生菌种，经鉴定为海水盐单胞菌(Halomonas aquamarina)，保藏于中国典型培养物保藏中心CCTCC，菌种名称为Halomonas aquamarina DB01，保藏日期为2019.7.3，保藏编号为CCTCC NO：M2019511，保藏地址为中国武汉武汉大学。
优选的，所述的海水盐单胞菌Halomonas aquamarina DB01，含有如SEQ ID NO.1所示的基因序列。
所述海水盐单胞菌Halomonas aquamarina DB01耐受盐浓度为100g/L的NaCl，pH值为10的生长环境。
所述海水盐单胞菌Halomonas aquamarina DB01耐受盐浓度为100g/L的NaCl，pH值为10的生长环境是指：
1)将所述海水盐单胞菌Halomonas aquamarina DB01接种至含100g/L的NaCl、pH＝10的LB固体培养基的平板上，30℃培养96h；
2)96h后，所述海水盐单胞菌Halomonas aquamarina DB01正常生长繁殖，即视为其耐受100g/L的NaCl、pH＝10的环境。
所述海水盐单胞菌Halomonas aquamarina DB01在NaCl 100g/L时培养72h时，胞外聚合物的积累量达到0.21g/g。
所述胞外聚合物的积累量通过以下方法检测得到：
1)将所述海水盐单胞菌Halomonas aquamarina DB01接种至含100g/L NaCl的发酵培养基，装液量为50mL/250mL，接种量为装液量体积的5％，30℃培养72h；
2)取培养72h后的发酵培养基离心，沉淀烘干称重即为菌体干重；
3)取步骤2)中的上清液加入3倍体积95％乙醇，4℃过夜，再将混合液离心，沉淀烘干称重即为EPS干重。
4)EPS干重与菌体干重的比值得出菌株EPS的产量，单位g/g，即为72h时每克菌体细胞产出的胞外聚合物的质量。
所述海水盐单胞菌Halomonas aquamarina DB01在氯化钠50g/L时培养48h产生吲哚-3-乙酸，产量达8.97mg/L。
所述吲哚-3-乙酸的产量通过以下方法检测得到：
1)将所述海水盐单胞菌Halomonas aquamarina DB01接种至含50g/L NaCl的LB液体培养基，30℃下180r/min培养48h；
2)步骤1)的菌液离心，取上清液加入相同体积的Salkowski试剂，于黑暗处反应30min；
3)反应结束后，测定溶液在530nm处的吸光值；
4)通过纯吲哚-3-乙酸梯度稀释制备标准曲线，根据标准曲线计算LB液体培养基中吲哚-3-乙酸的含量。
所述海水盐单胞菌Halomonas aquamarina DB01在氯化钠10g/L、pH＝10时培养12h时降碱率达8.7％。
所述12小时时降碱效率的检测方法如下：
将海水盐单胞菌Halomonas aquamarina DB01菌株在pH＝10的LB培养基中培养12h，取样测定培养基pH值，并利用公式①计算其降碱率。
降碱率(％)＝(pH始-pH终)/pH始×100％ ①
其中pH始为培养基初始pH值，即pH始＝10；pH终为取样检测时培养基pH值。
本发明第二方面提供一种液体菌剂，所述液体菌剂包括海水盐单胞菌Halomonasaquamarina DB01，所述海水盐单胞菌Halomonas aquamarina DB01的浓度至少为2×l08cfu/mL。
本发明第三方面提供所述液体菌剂的制备方法，包括如下步骤：将海水盐单胞菌Halomonas aquamarina DB01纯菌活化后培养即获得液体菌剂。
本发明第四方面提供一种固体菌剂，所述固体菌剂包括海水盐单胞菌Halomonasaquamarina DB01，所述海水盐单胞菌Halomonas aquamarina DB01的浓度至少为1×l09cfu/g。
本发明第五方面提供一种固体菌剂的制备方法，包括如下步骤：将包含海水盐单胞菌Halomonas aquamarina DB01的液体菌剂经干燥后即获得固体菌剂。
本发明第六方面提供海水盐单胞菌Halomonas aquamarina DB01在盐碱地改良中的应用。
优选的，所述应用包括如下步骤：将所述固体菌剂直接或用水悬浮成菌液后施至土壤中。
优选的，所述固体菌剂的施用量为10～20斤/亩。
优选的，所述海水盐单胞菌Halomonas aquamarina DB01能改良盐碱地中的可溶性盐含量、有机质含量、有效磷含量、全氮含量、速效钾含量中的一种或几种。
如上所述，本发明的耐盐碱促生菌及其在盐碱地改良中的应用，具有以下有益效果：
(1)该菌株耐高盐、高碱，能有效降低盐碱地土壤中的可溶性盐含量，同时可产促生长激素吲哚-3-乙酸，能有效改善土壤盐碱化，提高植物生物量和产量；
(2)处理效率高、经济效益好、操作方便、无污染。
附图说明
图1显示为本发明的耐盐碱促生菌株DB01的菌落形态图。
图2显示为本发明的耐盐碱促生菌株DB01的降碱能力。
图3显示为本发明的耐盐碱促生菌株DB01的系统进化树图谱。
具体实施方式
本发明第一方面提供一种耐盐碱促生菌种，经鉴定为海水盐单胞菌(Halomonasaquamarina)，保藏于中国典型培养物保藏中心CCTCC，菌种名称为Halomonas aquamarinaDB01，保藏日期为2019.7.3，保藏编号为CCTCC NO：M 2019511，保藏地址为中国武汉武汉大学。
所述的海水盐单胞菌Halomonas aquamarina DB01，含有如SEQ ID NO.1所示的基因序列。
所述海水盐单胞菌Halomonas aquamarina DB01生长的最高盐耐受浓度为100g/L氯化钠，碱耐受pH值为10。
所述海水盐单胞菌Halomonas aquamarina DB01生长的最高盐耐受浓度和碱耐受pH是通过以下方法检验：
1)配制含100g/L的NaCl、pH＝10的LB固体培养基；
2)将所述海水盐单胞菌Halomonas aquamarina DB01在含有步骤1)培养基的平板上涂布；
3)将步骤2)平板倒置放入30℃恒温培养箱中培养96h；
4)96h后，所述海水盐单胞菌Halomonas aquamarina DB01正常生长繁殖，即视为其耐受100g/L的NaCl、pH＝10的环境。
所述含100g/L的NaCl、pH＝10的LB固体培养基成分为蛋白胨10g/L、酵母膏5g/L、氯化钠100g/L，琼脂15g/L，灭菌后用碳酸钠将pH调至10。
所述海水盐单胞菌Halomonas aquamarina DB01在产胞外聚合物发酵培养基中，30℃培养72h时，胞外聚合物的积累量达到0.21g/g。
所述胞外聚合物的积累量通过以下方法检测得到：
1)将所述海水盐单胞菌Halomonas aquamarina DB01接种至含100g/L NaCl的发酵培养基，装液量为50mL/250mL，接种量为装液量体积的5％，30℃培养72h；
2)取培养72h后的10mL发酵培养基4000r/min离心15min，沉淀105℃烘干称重即为菌体干重；
3)取步骤2)中的上清液加入3倍体积95％乙醇进行醇沉，4℃过夜，再将混合液4000r/min离心30min，倒去上清液，沉淀在105℃下烘干称重即为EPS干重。
4)EPS干重与菌体干重的比值得出菌株EPS的产量，g/g为72h时每克菌体细胞产出的胞外聚合物的质量。
其中，所述产胞外聚合物发酵培养基：蔗糖20g/L，K2HPO4 0.2g/L，KH2PO4 0.5g/L，NaCl 100g/L，MgSO4·7H2O 0.5g/L，酵母膏3g/L。
所述海水盐单胞菌Halomonas aquamarina DB01在高盐LB液体培养基中，30℃，180r/min培养48h时，产生吲哚-3-乙酸的量达8.97mg/L。
所述吲哚-3-乙酸的产量通过以下方法检测得到：
1)将所述海水盐单胞菌Halomonas aquamarina DB01接种至含50g/L NaCl的LB液体培养基，30℃下180r/min培养48h；
2)取培养48h后的菌液10000r/min离心10min，取2mL上清液加入相同体积的Salkowski试剂(浓H2SO4 10.8mol/L，FeCl3 4.5mol/L)混合均匀，于黑暗处反应30min；
3)反应结束后测定溶液在530nm处的吸光值，通过吲哚-3-乙酸梯度稀释制作好的标准曲线计算出发酵液中吲哚-3-乙酸的含量。
其中，所述高盐LB液体培养基：蛋白胨10g/L、酵母膏5g/L、氯化钠50g/L。
所述海水盐单胞菌Halomonas aquamarina DB01在pH＝10的LB液体培养基中，12h时降碱率可达8.7％。
所述12h时降碱率通过以下方法检测得到：
将耐盐碱促生的菌株在pH＝10的LB培养基中培养12h，取样测定培养基pH值，并利用公式①计算其降碱率。
降碱率(％)＝(pH始-pH终)/pH始×100％ ①
其中pH始为培养基初始pH值，即pH始＝10；pH终为取样检测时培养基pH值。
其中，所述pH＝10的LB液体培养基：蛋白胨10g/L、酵母膏5g/L、氯化钠10g/L，灭菌后用碳酸氢钠将pH调至10。
本发明第二方面提供一种液体菌剂，所述液体菌剂包括海水盐单胞菌Halomonasaquamarina DB01，所述海水盐单胞菌Halomonas aquamarina DB01的浓度至少为2×l08cfu/mL。
本发明第三方面提供一种液体菌剂的制备方法，至少包括如下步骤：将海水盐单胞菌Halomonas aquamarina DB01纯菌经活化和种子培养后，接种于LB液体培养基中，30℃下180r/min培养48h，获得液体菌剂。
其中，所述LB液体培养基：蛋白胨10g/L、酵母膏5g/L、氯化钠10g/L。
本发明第四方面提供一种固体菌剂，所述固体菌剂包括海水盐单胞菌Halomonasaquamarina DB01，所述海水盐单胞菌Halomonas aquamarina DB01的浓度至少为1×l09cfu/g。
本发明第五方面提供一种固体菌剂的制备方法，至少包括如下步骤：将包含海水盐单胞菌Halomonas aquamarina DB01的液体菌剂经干燥后获得固体菌剂。
进一步的，干燥可采用喷雾干燥、真空干燥或冷冻干燥，干燥至固体菌剂含水量＜10％。
本发明第六方面提供海水盐单胞菌Halomonas aquamarina DB01在盐碱地改良中的应用。
所述应用至少包括如下步骤：将所述固体菌剂直接或用水悬浮成菌液后施至土壤中。
进一步的，所述固体菌剂直接或悬浮成菌液的施用量均为10～20斤/亩。
进一步的，所述海水盐单胞菌Halomonas aquamarina DB01可以改良盐碱地中的可溶性盐含量、有机质含量、有效磷含量、全氮含量、速效钾含量中的一种或几种。
本发明还提供海水盐单胞菌Halomonas aquamarina DB01在改善农作物生长中的应用。
更进一步的，所述海水盐单胞菌Halomonas aquamarina DB01可以改善农作物的产量、株高、植株生物量中的一种或多种。
所述农作物可以为粮食作物，也可以为经济作物。
例如，所述粮食作物可以为小麦、玉米、水稻等。
所述经济作物可以为油料作物、蔬菜作物、花、草、树木中的一种或几种。
以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。
在进一步描述本发明具体实施方式之前，应理解，本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围；在本发明说明书和权利要求书中，除非文中另外明确指出，单数形式“一个”、“一”和“这个”包括复数形式。
当实施例给出数值范围时，应理解，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本发明中使用的所有技术和科学术语与本技术领域技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、材料外，根据本技术领域的技术人员对现有技术的掌握及本发明的记载，还可以使用与本发明实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本发明。
实施例1：耐盐碱促生菌DB01的分离筛选及性能测定
(1)采集不同区域来源的盐碱地土壤，取1～5g样品加入装有100mL无菌水的锥形瓶中，于30℃下180r/min恒温振荡30min使供试土壤中的微生物充分分散于无菌水中，得到土壤混合液。
(2)将获得的混合液按梯度进行稀释，选择浓度梯度为10-2、10-3、10-4、10-5、10-6的土壤混合液，在高盐高碱LB固体培养基(蛋白胨10g/L、酵母膏5g/L、氯化钠100g/L，琼脂15g/L，灭菌后用碳酸钠将pH调至10)平板上涂布，用于初筛分离耐盐碱微生物，将平板倒置放入30℃恒温培养箱中培养48h～96h。
(3)根据菌落形态、颜色以及大小的区别，挑取单个微生物菌落，之后进行多次纯化直至获得单克隆菌株，获得耐盐碱的初筛菌株8株。
(4)之后将获得的初筛菌株接入产胞外聚合物发酵培养基(蔗糖20g/L，K2HPO40.2g/L，KH2PO4 0.5g/L，NaCl 100g/L，MgSO4·7H2O 0.5g/L，酵母膏3g/L)，装液量为50mL/250mL，接种量为装液量体积的5％，培养温度为30℃，培养时间为72h。培养后的发酵液，取10mL发酵液4000r/min离心15min，沉淀105℃烘干称重即为菌体干重；上清液加入3倍体积95％乙醇进行醇沉，4℃过夜，再将混合液4000r/min离心30min，倒去上清液，沉淀在105℃下烘干称重即为EPS干重。通过EPS干重与菌体干重的比值得出菌株EPS的产量，从而得到5株EPS的产量较高的复筛菌株。
(5)将复筛得到的5株菌株再接入高盐LB液体培养基(蛋白胨10g/L、酵母膏5g/L、氯化钠50g/L)，在30℃下180r/min培养48h后测定吲哚-3-乙酸产量，从而得到耐盐碱促生的菌株1株，该菌株菌落形态见图1。
吲哚-3-乙酸的测定方法：菌液10000r/min离心10min，取2mL上清液加入相同体积的Salkowski试剂(浓H2SO4 10.8mol/L，FeCl3 4.5mol/L)混合均匀，于黑暗处反应30min后测定溶液在530nm处的吸光值，通过不同梯度浓度吲哚-3-乙酸标准品制作好的标准曲线计算出发酵液中吲哚-3-乙酸的含量。
(6)将耐盐碱促生的菌株在pH＝10的LB培养基(蛋白胨10g/L、酵母粉5g/L、氯化钠10g/L，灭菌后用碳酸钠将pH调至10)中培养12h，取样用pH计测定培养基pH值，并利用公式①测定其降碱率，该菌株的降碱能力见图2，最高可达8.7％。
降碱率(％)＝(pH始-pH终)/pH始×100％ ①
其中pH始为培养基初始pH值，即pH始＝10；pH终为取样检测时培养基pH值。
实施例2：耐盐碱促生菌DB01的分子生物学鉴定
菌株鉴定采用16S rDNA序列比对法。按照现有技术提取菌株DB01的基因组DNA，并以此为模板，利用一对通用引物(27F，1492R)扩增菌株16S rRNA。
上游引物为27F(5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCA-3’)，
下游引物为1492R(5’-GGTTACCTTGTTACGACTT-3’)。
PCR反应体系(20μL)如下：模板DNA 0.5μL，PCR Taqmix 10μL，上下游引物各0.6μL，加ddH2O至反应体系为20μL。
PCR程序：94℃预变性5min，94℃变性30s、55℃退火30s、72℃延伸1min30 s，以上共循环30次，72℃延伸10min，最后在4℃保存。
由上海杰李生物技术有限公司进行PCR产物的纯化和测序。在NCBI提交通过测序获得的16S rRNA序列，通过软件Blast与GenBank进行同源性序列比对分析，应用MEGA 7软件构建该菌株系统发育树(如图3所示)。
菌株DB01的基因有效序列长度为1622bp，见基因序列表SEQ ID NO.1。经过比对，该序列与NCBI数据库的Halomonas aquamarina(NCBI登录号为：EF143431.1)同源性达100％，属于海水盐单胞菌(Halomonas aquamarina)，将其命名为海水盐单胞菌Halomonasaquamarina DB01。
实施例3：耐盐碱促生菌DB01的盆栽验证试验
利用LB液体培养基将菌株DB01进行活化，在30℃下180r/min培养48h。培养好的种子液在4℃冷冻离心机内4000r/min下离心15min，离心后的菌体沉淀干燥即可获得菌粉。将制得的菌粉用自来水悬浮制成浓度为2×l08 cfu/mL的菌液，以备使用。
实验土壤采集于江苏南通盐碱土壤，该土壤盐度0.7％，pH值8.2～8.5。实验设置为两组，实验组(DB01)用耐盐碱促生菌DB01菌剂处理，对照组(CK)则采用不加菌剂的等量自来水处理。每组8盆，每盆种植20株小麦。实验组在培养的不同时间段(0d、7d、14d、21d)喷施菌液，28d后收获植株。实验结束后分别测定植物的株高、植株生物量、植物体内的脯氨酸、过氧化物酶、丙二醛含量。
株高：测量植株的土壤上面的高度。
植株生物量：测量每盆植株地上部分的湿重。
脯氨酸：取0.1g小麦幼苗用1mL 3％的磺基水杨酸研磨成匀浆，将匀浆放入95℃水浴10min，10000r/min离心5min，之后将0.5mL样品和0.5mL冰乙酸以及0.5mL 2.5％茚三酮溶液混合于95℃水浴30min，冷却，加入1mL甲苯振荡30s待溶液分层后将上清液于波长520nm测定吸光值，并通过标曲计算脯氨酸含量。
过氧化物酶：采用愈创木酚法，根据测定每分钟在470nm处H2O2分解愈创木酚产生的茶褐色产物的量确定。
丙二醛：用1mL 5％的三氯乙酸将0.1g小麦幼苗磨成匀浆，匀浆以8000r/min在4℃下离心10min，取0.2mL上清液与0.6mL 0.5％硫代巴比妥酸混合，混合物在95℃放置30min，冰浴冷却至室温，在10000r/min离心5min，测定上清液在450、532和600nm波长处的吸光度，根据丙二醛含量＝6.45×(A532-A600)×0.56×A450来计算丙二醛含量。
测定结果如表1所示。
表1 耐盐碱促生菌DB01对盆栽植物的影响
Figure GDA0002447583840000091
从表1可以看出，耐盐碱促生菌DB01能够增加植物体内的脯氨酸和过氧化物酶的含量，同时减少丙二醛的积累量，从而提高植株生物量，减少盐胁迫对作物的毒害作用。该盆栽实验表明耐盐碱促生菌DB01不仅能够适应高盐碱的环境，而且能够改善作物的生长环境从而促进作物在盐碱地上的生长。
实施例4：耐盐碱促生菌DB01在盐碱地中的应用试验
利用LB液体培养基将菌株DB01进行活化，在30℃下180r/min培养48h。按体积比5％接种量接入到50L种子罐中，培养条件为180r/min，pH 7.0，通气量0.8L/min，培养48h。培养后的液体菌剂离心，经干燥后获得固体菌剂，固体菌剂中的活菌浓度为1×l09 cfu/g。施用量12斤/亩，将固体菌剂与水等比例混合后，贴地喷施。
大田实验在江苏南通市进行小麦种植，该实验田土壤基本化学性质为pH 8.7，盐度0.7％，有机质含量9.32g/kg，全氮179.2mg/kg，有效磷含量1.1mg/kg，试验时间2018年12月-2019年6月。设置6块样地，每个样地面积为6m×6m，实验组的3块样地施加DB01菌剂，喷撒时间为播种前7d、播种后21d、播种后42d、播种后63d。其余三个样地为对照组，以等量的水代替菌剂喷施。实验开展前，水稻秸秆返田，深耕，旋耕深度30～35cm，田间常规管理。小麦收获前后计算株高、产量以及土壤理化指标(可溶性盐、有机质、全氮、有效磷)。
株高：测量植株的地上高度；小麦产量：采用割方测产称量小麦的干重。
土壤理化指标的测定方法分别为，可溶性盐：NY/T 1121；有机质：NY/T 1121；全氮：HJ 717-2014；有效磷：HJ 704-2014。
表2 耐盐碱促生菌DB01对盐碱地土壤以及植物的影响
Figure GDA0002447583840000101
从表2可知，实验组通过添加耐盐碱促生菌DB01，降低土壤中的可溶性盐含量，并且能够分解秸秆和难溶性磷增加土壤有机质和有效磷的含量来改善土壤的肥力，从而增加作物的株高和产量。因此，大田实验表明耐盐碱促生菌DB01能够降低盐毒害并增加土壤肥力从而促进作物的生长。
实施例5：耐盐碱促生菌DB01的次生盐渍化土壤的应用试验
利用LB液体培养基将菌株DB01进行活化，在30℃下180r/min培养48h。按体积比5％接种量接入到50L种子罐中，培养条件为180r/min，pH 7.0，通气量0.8L/min，培养48h。培养后的液体菌剂离心，经干燥后获得固体菌剂，固体菌剂中的活菌浓度为1×l09 cfu/g。施用量12斤/亩，将固体菌剂与水等比例混合后，贴地喷施。
实验在上海市崇明区次生盐渍化土壤进行番茄种植，该实验田土壤基本化学性质pH 8.3，盐度0.35％，有机质含量11.73g/kg，全氮629.90mg/kg，有效磷含量1.78mg/kg，速效钾含量77.34mg/kg，试验时间2019年5月-2019年10月。设置6块样地，每块样地面积为6m×6m，实验组的3块样地施加DB01菌剂，时间为播种前7d、播种后21d、播种后42d、播种后63d。其余三块样地为对照组，以等量水代替菌剂喷施。番茄收获后计算产量。
土壤理化指标的测定方法，可溶性盐：NY/T 1121；有机质：NY/T 1121；全氮：HJ717-2014；有效磷：HJ 704-2014；速效钾：NY/T 889-2004。
表3 耐盐碱促生菌DB01对次生盐渍化土壤以及植物产量的影响
Figure GDA0002447583840000102
可见本发明所得耐盐碱促生菌DB01能有效提升次生盐渍化农田肥力及作物的产量。
以上的实施例是为了说明本发明公开的实施方案，并不能理解为对本发明的限制。此外，本文所列出的各种修改以及发明中方法、组合物的变化，在不脱离本发明的范围和精神的前提下对本领域内的技术人员来说是显而易见的。虽然已结合本发明的多种具体优选实施例对本发明进行了具体的描述，但应当理解，本发明不应仅限于这些具体实施例。事实上，各种如上所述的对本领域内的技术人员来说显而易见的修改来获取发明都应包括在本发明的范围内。
序列表
<110> 中国科学院上海高等研究院
<120> 一种耐盐碱促生菌及其在盐碱地改良中的应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1445
<212> DNA
<213> 海水盐单胞菌(Halomonas aquamarina)
<400> 1
ccccccgtaa aaaccgtggt gatcgccctc ttgcgttagg ctaaccactt ctggtgcagt 60
ccactcccat ggtgtgacgg gcggtgtgta caaggcccgg gaacgtattc accgtagcat 120
tctgatctac gattactagc gattccgact tcacggagtc gagttgcaga ctccgatccg 180
gactgagatc ggcttttcgg gattggctca ctctcgcgag ttggcaaccc tttgtaccga 240
ccattgtagc acgtgtgtag ccctactcgt aagggccatg atgacttgac gtcgtcccca 300
ccttcctccg gtttgtcacc ggcagtctcc ttagagttcc cgccattacg cgctggcaaa 360
taaggacaag ggttgcgctc gttacgggac ttaacccaac atttcacaac acgagctgac 420
gacagccatg cagcacctgt ctctgcgttc ccgaaggcac taaggtatct ctaccaaatt 480
cgcaggatgt caagagtagg taaggttctt cgcgttgcat cgaattaaac cacatgctcc 540
accgcttgtg cgggcccccg tcaattcatt tgagttttaa ccttgcggcc gtactcccca 600
ggcggtcgac ttatcgcgtt aacttcgcca caaagtgcgc taggcaccca acggctggtc 660
gacatcgttt acggcgtgga ctaccagggt atctaatcct gtttgctacc cacgctttcg 720
cacctcagtg tcagtgtcag tccagaaggc cgccttcgcc actggtattc ctcccgatct 780
ctacgcattt caccgctaca ccgggaattc taccttcctc tcctgcactc tagcttgaca 840
gttccggatg ccgttcccag gttgagcccg gggctttcac aaccggctta tcaagccacc 900
tacgcgcgct ttacgcccag taattccgat taacgcttgc accctccgta ttaccgcggc 960
tgctggcacg gagttagccg gtgcttcttc tgcgagtgat gtctttccta gcgggtatta 1020
accgctaggc gttcttcctc gctgaaagtg ctttacaacc cgagggcctt cttcacacac 1080
gcggcatggc tggatcaggg ttccccccat tgtccaatat tccccactgc tgcctcccgt 1140
aggagttcgg gccgtgtctc agtcccgatg tggctgatca tcctctcaga ccagctacgg 1200
atcgtggcct tggtgagccg ttacctcacc aactagctaa tccgacatag gctcatccga 1260
tagcgggagc cgaagccccc tttctcccgt aggacgtatg cggtattagc ctgggtttcc 1320
ccaggttatc ccccactacc gggcagattc ctatgcatta ctcacccgtc cgccgctcgt 1380
cagcatccag caagctggat ctgttaccgc tcgacttgca tgtgtaggcc tgccccccac 1440
cggct 1445

Claims (8)

1.一种海水盐单胞菌(Halomonas aquamarina)DB01，保藏编号为CCTCC NO：M2019511。
2.一种液体菌剂，其特征在于，所述液体菌剂包括如权利要求1所述的海水盐单胞菌(Halomonas aquamarina)DB01，所述海水盐单胞菌(Halomonas aquamarina)DB01的浓度至少为2×l08 cfu/mL。
3.一种如权利要求2所述液体菌剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将权利要求1所述的海水盐单胞菌(Halomonas aquamarina)DB01纯菌活化后培养即获得液体菌剂。
4.一种固体菌剂，其特征在于，所述固体菌剂包括如权利要求1所述的海水盐单胞菌(Halomonas aquamarina)DB01，所述海水盐单胞菌(Halomonas aquamarina)DB01的浓度至少为1×l09 cfu/g。
5.一种如权利要求4所述固体菌剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将权利要求2所述的液体菌剂经干燥后即获得固体菌剂。
6.一种如权利要求1所述的海水盐单胞菌(Halomonas aquamarina)DB01在盐碱地改良中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述应用包括如下步骤：将权利要求4所述的固体菌剂直接或用水悬浮成菌液后施加至土壤中。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，还包括以下特征：
1)所述固体菌剂的施用量为10～20斤/亩；
2)所述海水盐单胞菌(Halomonas aquamarina)DB01能改良盐碱地中的可溶性盐含量、有机质含量、有效磷含量、全氮含量、速效钾含量中的一种或几种。
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