CN111187226B

CN111187226B - 一种特异性杀伤革兰氏阴性菌的化合物及制备方法和应用

Info

Publication number: CN111187226B
Application number: CN202010044949.7A
Authority: CN
Inventors: 冯丽恒; 秦涛; 王云侠
Original assignee: Shanxi University
Current assignee: Shanxi University
Priority date: 2020-01-15
Filing date: 2020-01-15
Publication date: 2021-03-30
Anticipated expiration: 2040-01-15
Also published as: CN111187226A

Abstract

本发明涉及新型、高效、特异性抗菌剂领域，具体涉及一种特异性杀伤革兰氏阴性菌的抗菌剂及制备方法和应用。该抗菌剂以三(4‑溴苯基)胺和2,5‑二羟基苯硼酸频哪酯为原料，经Suzuki偶联反应、Click反应、脱保护和成盐反应得到最终产物4‑(三(2,5‑双(2‑(4‑(亚甲胺盐酸盐)1H‑1,2,3‑三唑)乙氧基))苯)三苯胺(TEBT)。本发明得到的抗菌剂是一种含有三氮唑和三苯胺的伯胺类盐酸盐，所采用的制备方法操作简单，反应条件温和，产率较高。该抗菌剂是一种无细胞毒性且具有良好水溶性的胺类盐酸盐，且对革兰氏阴性菌有特异性杀伤。

Description

一种特异性杀伤革兰氏阴性菌的化合物及制备方法和应用

技术领域

本发明涉及新型、高效、特异性抗菌剂领域，具体涉及一种特异性杀伤革兰氏阴性菌的化合物及制备方法和应用。

背景技术

革兰氏阴性菌具有多层结构的细胞壁，这种特殊的结构导致许多抗生素不能通过革兰氏阴性菌的外膜到达靶点。因此，抗革兰氏阴性菌的药物研发难度巨大。过去50年来，还没有针对革兰氏阴性菌的新机制抗生素获得批准。抗生素在临床上的长期使用导致细菌发生变异和耐药。另外，抗生素在医疗及农业领域的过度使用或不当使用加剧细菌耐药性的发生。

大肠杆菌和沙门氏菌是主要人畜共患革兰氏阴性病原菌，能够引起人体或动物胃肠道感染，主要是由特定的菌毛抗原、致病性毒素等感染引起的，除胃肠道感染以外，还会引起尿道感染、关节炎、脑膜炎以及败血型感染等。大肠杆菌和沙门氏菌在各种炎症性疾病和感染中起着至关重要的作用，这些疾病和感染对人类健康和全球环境都构成了重大威胁。对于仔猪和禽类，致病性大肠杆菌和沙门氏菌的发病率约5％～30％，严重者可致死亡，病死率达90％以上，给畜禽养殖业带来了极大危害，每年给我国造成的经济损失数以亿元计。人感染致病性大肠杆菌和沙门氏菌每年导致170万～250万患者死亡。因此，发明抗菌剂抑制致病性革兰氏阴性菌的生长对改善人类生活环境和减少疾病发生具有十分重要的意义。

发明内容

本发明针对上述问题提供了一种特异性杀伤革兰氏阴性菌的化合物及制备方法和应用，所采用的制备方法操作简单，反应条件温和，产率较高。该化合物是一种含有三氮唑和三苯胺、无细胞毒性且具有良好水溶性的胺类盐酸盐，在抗菌治疗方面有较高的应用价值。

为了达到上述目的，本发明采用了下列技术方案：

一种特异性杀伤革兰氏阴性菌的化合物是一种含有三氮唑和三苯胺的伯胺类盐酸盐，结构式为：

一种特异性杀伤革兰氏阴性菌的化合物的制备方法，包括以下步骤：

步骤1，在氮气保护下，将2,5-二羟基苯硼酸频哪酯、三(4-溴苯)胺、四三苯基磷钯、N,N-二甲基甲酰胺和K₂CO₃溶液混合，回流反应过夜，反应完成后，将蒸馏水加到反应液中，萃取，再用水洗有机相，干燥有机相，旋除溶剂，经柱色谱分离，得紫黑色固体4-(三(2,5-二羟基苯))三苯胺；反应式如下：

步骤2，将4-(三(2,5-二羟基苯))三苯胺、1,2-二溴乙烷、K₂CO₃、丙酮和水混合后，回流反应过夜，反应完成后旋除溶剂，加入蒸馏水，萃取，收集有机相干燥，旋除有机溶剂，经柱色谱分离，得白色固体4-(三(2,5-双(2-溴乙氧基))苯)三苯胺；反应式如下：

步骤3，将4-(三(2,5-双(2-溴乙氧基))苯)三苯胺、叠氮化钠和N,N-二甲基甲酰胺混合，反应回流过夜，反应完成后待反应液冷却到室温，加入蒸馏水后，萃取，水洗有机相，干燥有机相，旋除溶剂，得淡黄色固体4-(三(2,5-双(2-叠氮基乙氧基))苯)三苯胺；反应式如下：

步骤4，在氮气保护下，将4-(三(2,5-双(2-叠氮基乙氧基))苯)三苯胺、N-Boc-氨基丙炔、甲苯、碘化亚铜和DBU混合，反应过夜，反应后旋除溶剂，经柱色谱分离，得淡黄色固体4-(三(2,5-双(2-(4-(N-叔丁基氧羰亚甲胺基)1H-1,2,3-三唑)乙氧基))苯)三苯胺；反应式如下：

步骤5，将4-(三(2,5-双(2-(4-(N-叔丁基氧羰亚甲胺基)1H-1,2,3-三唑)乙氧基))苯)三苯胺、四氢呋喃、HCl的1,4-二氧六环溶液混合，在室温下搅拌反应，反应完成后，稀释反应液，抽滤，洗涤滤饼，得淡黄色固体4-(三(2,5-双(2-(4-(亚甲胺盐酸盐)1H-1,2,3-三唑)乙氧基))苯)三苯胺(TEBT)。反应式如下：

进一步，所述步骤1中2,5-二羟基苯硼酸频哪酯、三(4-溴苯)胺、四三苯基磷钯的质量比为3:1:0.05～8:1:0.2，N,N-二甲基甲酰胺为20～50mL，K₂CO₃溶液为5～20mL，K₂CO₃溶液的浓度为1～4mol/L，回流反应的温度为110～130℃；所述萃取用乙酸乙酯，萃取次数为1～5次，干燥用无水硫酸钠，柱色谱分离展开剂乙酸乙酯:二氯甲烷的体积比为1:4～1:2。

进一步，所述步骤2中4-(三(2,5-二羟基苯))三苯胺、1,2-二溴乙烷、K₂CO₃的质量比为1:6:20～1:50:60，丙酮为40～60mL、水为5～20mL，回流反应的温度为50～70℃；所述蒸馏水为30～50mL，萃取用二氯甲烷，萃取次数为1～5次，有机相干燥用无水硫酸钠，柱色谱分离展开剂二氯甲烷:石油醚体积比为2:1～4:1。

进一步，所述步骤3中4-(三(2,5-双(2-溴乙氧基))苯)三苯胺、叠氮化钠的质量比为1:6～1:50，N,N-二甲基甲酰胺为10～40mL，回流反应的温度为80～120℃；所述蒸馏水为10～30mL，萃取用二氯甲烷，萃取次数为1～5次，干燥有机相用无水硫酸钠。

再进一步，所述步骤4中4-(三(2,5-双(2-叠氮基乙氧基))苯)三苯胺、N-Boc-氨基丙炔、碘化亚铜、DBU的质量比为1:6:0.05:0.05～1:50:0.2:0.2，甲苯为5～30mL，回流反应的温度为50～70℃；柱色谱分离展开剂甲醇:二氯甲烷的体积比为1:35～1:20。

更进一步，所述步骤5中4-(三(2,5-双(2-(4-(N-叔丁基氧羰亚甲胺基)1H-1,2,3-三唑)乙氧基))苯)三苯胺的质量为5～50mg，四氢呋喃为2～10mL，HCl的1,4-二氧六环溶液为1～5mL，HCl的1,4-二氧六环溶液的浓度为2～6mol/L，搅拌反应的时间为24～72h；所述稀释反应液用4～20mL的乙醚，洗涤滤饼用乙醚，洗涤次数为2～5次。

一种特异性杀伤革兰氏阴性菌的化合物的应用，应用于抗菌治疗方面。

与现有技术相比本发明具有以下优点：

本发明得到的是一种含有三氮唑和三苯胺的伯胺盐类化合物(TEBT)。首先，该化合物分子中有六个伯胺盐，与有机化合物本身相比，含有机化合物分子的盐表现出更强的生物活性(由于盐通常是很容易制备和合成，可用于修改的溶解性，提高稳定性，降低有机化合物的吸湿性)，更有利于其在细菌表面的吸附；其次，三氮唑类化合物不但具有抗菌、抗肿瘤、抗惊厥、消炎镇痛等多种生物活性，而且具有高效低毒、不良反应少、多药耐药性小、药物代谢动力学性质好、生物利用率高等特点；最后，在三苯胺为化合物的支链提供一个骨架结构，细菌和化合物结合后，疏水链能够插入细菌的细胞膜，有利于化合物分子与细菌作用，更好的发挥抗菌性能。这些结构使其具有良好的抗菌作用。该化合物无细胞毒性，水溶性好，使得该化合物可以应用于生物体内，且可特异性杀伤革兰氏阴性菌。

附图说明

图1本发明化合物TEBT在水中的紫外吸收光谱图；

图2本发明化合物TEBT在水中的荧光发射光谱图；

图3本发明化合物TEBT的细胞毒性测试图；

图4本发明化合物TEBT在不同浓度下对大肠杆菌的抗菌性能研究图；

图5本发明化合物TEBT在不同浓度下对金黄色葡萄球菌的抗菌性能研究图；

图6本发明化合物TEBT在不同浓度下对白色念球菌的抗菌性能研究图。

具体实施方式

实施例1

1、在100mL的圆底烧瓶中加入2,5-二羟基苯硼酸频哪酯(1.92g,8mmol)，三(4-溴苯)胺(0.96g,2mmol)，四三苯基磷钯(0.12g,0.1mmol)，抽真空通氮气三次，再加入35mLDMF和10mL 2M的K₂CO₃溶液，120℃下回流反应过夜。反应完成后，将50mL蒸馏水加到反应液中，用乙酸乙酯萃取反应液3次，之后水洗乙酸乙酯以除去少量的DMF，用无水硫酸钠干燥乙酸乙酯，旋除乙酸乙酯，用极性为乙酸乙酯:二氯甲烷＝1:4过柱，得紫黑色固体4-(三(2,5-二羟基苯))三苯胺0.86g，产率75.4％。¹H NMR(600MHz,D₂O)δ8.77(d,J＝19.9Hz,6H),7.51(d,J＝8.5Hz,6H),7.09(d,J＝8.5Hz,6H),6.74(d,J＝8.6Hz,3H),6.69(d,J＝2.8Hz,3H),6.56(dd,J＝8.6,2.9Hz,3H)。

2、在250mL的圆底烧瓶中加入4-(三(2,5-二羟基苯))三苯胺(2.59g,4.55mmol)，1,2-二溴乙烷(25.64g,136.5mmol)，K₂CO₃(12.58g,91mmol),50mL丙酮和10mL水，在60℃下反应回流过夜，反应完成后旋除溶剂，加入50mL蒸馏水，用二氯甲烷萃取三次，收集有机相用无水硫酸钠干燥，旋除有机溶剂，用极性为二氯甲烷:石油醚＝2:1过柱，得白色固体4-(三(2,5-双(2-溴乙氧基))苯)三苯胺2.55g，产率46.3％。¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ7.55(d,J＝8.5Hz,6H),7.25(d,J＝8.5Hz,6H),7.02(d,J＝2.9Hz,3H),6.95(d,J＝8.9Hz,3H),6.86(dd,J＝8.8,2.9Hz,3H),4.32(t,J＝6.2Hz,6H),4.23(t,J＝6.1Hz,6H),3.67(t,J＝6.2Hz,6H),3.58(t,J＝6.1Hz,6H)。

3、在100mL圆底烧瓶中加入4-(三(2,5-双(2-溴乙氧基))苯)三苯胺(0.13g,0.11mmol)，(0.21g,3.3mmol)叠氮化钠和20mL DMF，在100℃下反应回流过夜，反应完成后待反应液冷却到室温，加入20mL蒸馏水后用二氯甲烷(3×40mL)萃取三次，用蒸馏水多次水洗二氯甲烷以除去少量的DMF，用无水硫酸钠干燥有机相，旋除溶剂，得黄色固体4-(三(2,5-双(2-叠氮基乙氧基))苯)三苯胺0.11g,产率99％。¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ7.49(s,6H),7.24(s,6H),7.01(s,3H),6.94(s,3H),6.86(s,3H),4.19(s,6H),4.07(s,6H),3.63(s,6H),3.53(s,6H)。

4、在50mL圆底烧瓶中加入4-(三(2,5-双(2-叠氮基乙氧基))苯)三苯胺(0.10g,0.1mmol)和N-Boc-氨基丙炔(0.47g,3mmol)，抽真空通氮气三次，加入10mL甲苯，十分钟后加入(0.01g,0.06mmol)碘化亚铜，十分钟后加入(0.06g,0.4mmol))DBU，60℃下反应过夜，反应完成后旋除溶剂，用柱色谱分离(甲醇/二氯甲烷＝1/30,v/v)，得黄色固体4-(三(2,5-双(2-(4-(N-叔丁基氧羰亚甲胺基)1H-1,2,3-三唑)乙氧基))苯)三苯胺0.17g,产率90.0％。¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ7.74(s,6H),7.44(s,6H),7.35(s,6H),7.21(s,6H),6.90(s,3H),6.82(d,J＝7.5Hz,3H),6.77(s,3H),4.74(s,6H),4.64(s,6H),4.40(s,6H),4.36(s,6H),4.26(s,12H),1.42(s,27H),1.35(s,27H)。

5、在50mL圆底烧瓶中加入4-(三(2,5-双(2-(4-(N-叔丁基氧羰亚甲胺基)1H-1,2,3-三唑)乙氧基))苯)三苯胺(110mg,0.06mmol)和4mL THF，之后加入2mL的4M HCl的1,4-二氧六环溶液，在室温下搅拌反应36h，反应完成后用10mL乙醚稀释反应液，抽滤，用乙醚洗涤滤饼三次，得淡黄色固体4-(三(2,5-双(2-(4-(亚甲胺盐酸盐)1H-1,2,3-三唑)乙氧基))苯)三苯胺(TEBT)62mg，产率67.4％。¹H NMR(600MHz,DMSO)δ8.60(d,J＝21.4Hz,18H),8.34(s,3H),8.18(s,3H),7.42(d,J＝8.2Hz,6H),7.09(d,J＝8.2Hz,6H),7.03(d,J＝9.0Hz,3H),6.96(s,3H),6.89(d,J＝8.4Hz,3H),4.80(s,6H),4.76(s,6H),4.39(s,6H),4.34(s,6H),4.11(d,J＝5.1Hz,6H),4.02(d,J＝4.8Hz,6H)；HRMS-ESI for C₆₆H₈₁C_l6N₂₅O₆(m/z)219.9433[M-6Cl]6⁺。

实施例2

化合物TEBT的紫外吸收和荧光发射光谱测试：

配制1.00mg·mL^-1的TEBT的水溶液5mL，稀释至10倍后，准确移取2.00mL浓度为0.10mg·mL^-1的TEBT的水溶液至紫外杯中，然后在HITACHI UH5300紫外吸收仪上测定，最大吸收峰为332nm；再准确移取2.00mL的浓度为0.10mg·mL-1的TEBT的水溶液至比色皿中，然后在HITACHI F-4600荧光仪上测定，激发狭缝宽度为2.5nm，发射狭缝宽度为5.0nm；测试是在室温和外界大气压下进行，激发为360nm，发射为458nm；紫外吸收和荧光发射光谱测试结果分别见图1和图2。

实施例3

化合物TEBT的细胞毒性测试：

对Hela细胞的细胞毒性用MTT法测得，将混合均匀的细胞铺在96孔板中，每孔约7000个细胞，CO₂培养箱培养24h后细胞贴壁，弃去旧的培养基，加入不同浓度的TEBT(最终浓度分别为12.5μg·mL^-1、25μg·mL^-1、50μg·mL^-1、100μg·mL^-1)的培养基，继续培养12h后，弃去培养基，每孔加入10μL的浓度为5mg·mL^-1的MTT溶液和90μL新鲜培养基的混合溶液，再继续培养4h后，弃去培养基，每孔加入100μLDMSO，将其放入酶标仪中，震荡2min，测得每孔在490nm处的吸光度值。细胞活力CR的计算方法为：

CR＝A/A₀×100％

其中A为TEBT处理的实验组细胞的吸光度值，A₀为不加TEBT的对照组细胞的吸光度值。测量结果见图3。

实施例4

对大肠杆菌的杀菌效果测试：

1)大肠杆菌(Top 10)的培养：

超净台开紫外灯消毒20～30min，超净台表面用75％酒精擦净，将灭菌的50mL离心管、LB培养基、氨苄西林钠、1×PBS以及菌液拿到超净台中，取出一支50mL离心管，吸取10mLLB液体培养基到50mL无菌离心管中，加入10μL浓度为50mg·mL^-1氨苄西林钠和10μL大肠杆菌菌种，在温度为37℃，180rpm震荡培养6～8小时。

2)对大肠杆菌的杀菌率测试：

将大肠杆菌在LB液体培养基中培养6～8小时，在超净台中吸取2mL菌液进行离心(7100rpm,2min)，对大肠杆菌进行沉淀，将沉淀的大肠杆菌用1×PBS洗涤后再离心沉淀，重复两次后，弃去上清液，将菌液重新悬浮于1×PBS中，调OD₆₀₀为1，在1.5mL的离心管中，加入100μL(OD₆₀₀＝1)的菌液和一定量的化合物TEBT(最终浓度分别为2.5μg·mL^-1、5μg·mL^-1、10μg·mL^-1)，用无菌1×PBS将体积补充到500μL，并在暗处37℃下孵育20min，空白组不加药，孵育结束后，稀释1×104倍后吸取100μL菌液均匀涂布于90mmLB固体培养基(含50μg·mL^-1的氨苄西林钠)上，37℃培养18h后，计数菌落形成单位，测试结果见图4。

3)对大肠杆菌杀菌性能测试结果(见图4)：

在化合物TEBT浓度为10μg·mL^-1时，对大肠杆菌的杀菌率能达到90％左右。

实施例5

对金黄色葡萄球菌的杀菌效果测试：

1)金黄色葡萄球菌(ATCC6358)的培养：

超净台开紫外灯消毒20～30min，超净台表面用75％酒精擦净，将灭菌的50mL离心管、NB培养基、1×PBS以及金黄色葡萄球菌的菌液拿到超净台中，取出一支50mL离心管，吸取10mLNB液体培养基到50mL无菌离心管中，再加入20μL金黄色葡萄球菌的菌种，37℃下，180rpm震荡培养10小时左右。

2)对金黄色葡萄球菌的杀菌率测试：

在超净台中，将在NB液体培养基中培养10小时左右的金黄色葡萄球菌吸取2mL菌液进行离心(7100rpm，2min)对金黄色葡萄球菌进行沉淀，将沉淀的金黄色葡萄球菌用1×PBS洗涤后离心沉淀，重复两次后，弃去上清液，将菌液重新悬浮于1×PBS中，调OD₆₀₀为1.0，取100μL菌液(OD₆₀₀＝1.0)和一定量的化合物TEBT(最终浓度分别为50μg·mL^-1、100μg·mL^-1、150μg·mL^-1)在1.5mL离心管中作用，用无菌1×PBS将体积补充到500μL，并在暗处37℃下孵育20min，空白组不加药，孵育结束后，稀释1×104倍后吸取100μL菌液均匀涂布于90mmNB固体培养基，37℃培养16h后计数菌落形成单位，测试结果见图5。

3)对金黄色葡萄球菌的杀菌性能测试结果(见图5)：

化合物TEBT对金黄色葡萄球菌没有明显杀菌效果。

实施例6

对白色念珠菌的杀菌效果测试：

1)白色念珠菌的培养：

超净台开紫外灯消毒20～30min，超净台表面用75％酒精擦净，将灭菌的50mL离心管、YPD培养基、1×PBS以及白色念珠菌的菌液拿到超净台中，取出一支50mL离心管，吸取10mLYPD液体培养基到50mL无菌离心管中，再加入20μL白色念珠菌的菌种，37℃下，180rpm震荡培养15小时左右。

2)对白色念珠菌的杀菌率测试：

在超净台中，将在YPD液体培养基中培养14～16小时的白色念珠菌吸取2mL菌液进行离心(7100rpm,2min)对白色念珠菌进行沉淀，将沉淀的白色念珠菌用1×PBS洗涤后离心沉淀，重复两次后，弃去上清液，将菌液重新悬浮于1×PBS中，调OD₆₀₀为2.0。取100μL菌液(OD₆₀₀＝2.0)和一定量的化合物TEBT(最终浓度分别为50μg·mL^-1、100μg·mL^-1、150μg·mL^-1)在1.5mL离心管中作用，用无菌1×PBS将体积补充到500μL，并在暗处37℃下孵育20min，空白组不加药，孵育结束后，稀释1×10³倍后吸取100μL菌液均匀涂布于90mmYPD固体培养基，37℃培养20h后计数菌落形成单位，测试结果见图6。

3)对白色念珠菌的杀菌性能测试结果(见图6)：

化合物TEBT对白色念珠菌没有明显杀菌效果。

Claims

1.一种特异性杀伤革兰氏阴性菌的化合物，其特征在于，所述特异性杀伤革兰氏阴性菌的抗菌剂是一种含有三氮唑和三苯胺的伯胺类盐酸盐，结构式为：

2.一种特异性杀伤革兰氏阴性菌的化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1，在氮气保护下，将2,5-二羟基苯硼酸频哪酯、三(4-溴苯)胺、四三苯基磷钯、N,N-二甲基甲酰胺和K₂CO₃溶液混合，回流反应过夜，反应完成后，将蒸馏水加到反应液中，萃取，再用水洗有机相，干燥有机相，旋除溶剂，经柱色谱分离，得紫黑色固体4-(三(2,5-二羟基苯))三苯胺；

步骤2，将4-(三(2,5-二羟基苯))三苯胺、1,2-二溴乙烷、K₂CO₃、丙酮和水混合后，回流反应过夜，反应完成后旋除溶剂，加入蒸馏水，萃取，收集有机相干燥，旋除有机溶剂，经柱色谱分离，得白色固体4-(三(2,5-双(2-溴乙氧基))苯)三苯胺；

步骤3，将4-(三(2,5-双(2-溴乙氧基))苯)三苯胺、叠氮化钠和N,N-二甲基甲酰胺混合，反应回流过夜，反应完成后待反应液冷却到室温，加入蒸馏水后，萃取，水洗有机相，干燥有机相，旋除溶剂，得淡黄色固体4-(三(2,5-双(2-叠氮基乙氧基))苯)三苯胺；

步骤4，在氮气保护下，将4-(三(2,5-双(2-叠氮基乙氧基))苯)三苯胺、N-Boc-氨基丙炔、甲苯、碘化亚铜和DBU混合，反应过夜，反应后旋除溶剂，经柱色谱分离，得淡黄色固体4-(三(2,5-双(2-(4-(N-叔丁基氧羰亚甲胺基)1H-1,2,3-三唑)乙氧基))苯)三苯胺；

步骤5，将4-(三(2,5-双(2-(4-(N-叔丁基氧羰亚甲胺基)1H-1,2,3-三唑)乙氧基))苯)三苯胺、四氢呋喃、HCl的1,4-二氧六环溶液混合，在室温下搅拌反应，反应完成后，稀释反应液，抽滤，洗涤滤饼，得淡黄色固体4-(三(2,5-双(2-(4-(亚甲胺盐酸盐)1H-1,2,3-三唑)乙氧基))苯)三苯胺。

3.根据权利要求1所述的一种特异性杀伤革兰氏阴性菌的化合物的制备方法，其特征在于，所述步骤1中2,5-二羟基苯硼酸频哪酯、三(4-溴苯)胺、四三苯基磷钯的质量比为3:1:0.05～8:1:0.2，N,N-二甲基甲酰胺为20～50mL，K₂CO₃溶液为5～20mL，K₂CO₃溶液的浓度为1～4mol/L，回流反应的温度为110～130℃；所述萃取用乙酸乙酯，萃取次数为1～5次，干燥用无水硫酸钠，柱色谱分离展开剂乙酸乙酯:二氯甲烷的体积比为1:4～1:2。

4.根据权利要求1所述的一种特异性杀伤革兰氏阴性菌的化合物的制备方法，其特征在于，所述步骤2中4-(三(2,5-二羟基苯))三苯胺、1,2-二溴乙烷、K₂CO₃的质量比为1:6:20～1:50:60，丙酮为40～60mL、水为5～20mL，回流反应的温度为50～70℃；所述蒸馏水为30～50mL，萃取用二氯甲烷，萃取次数为1～5次，有机相干燥用无水硫酸钠，柱色谱分离展开剂二氯甲烷:石油醚体积比为2:1～4:1。

5.根据权利要求1所述的一种特异性杀伤革兰氏阴性菌的化合物的制备方法，其特征在于，所述步骤3中4-(三(2,5-双(2-溴乙氧基))苯)三苯胺、叠氮化钠的质量比为1:6～1:50，N,N-二甲基甲酰胺为10～40mL，回流反应的温度为80～120℃；所述蒸馏水为10～30mL，萃取用二氯甲烷，萃取次数为1～5次，干燥有机相用无水硫酸钠。

6.根据权利要求1所述的一种特异性杀伤革兰氏阴性菌的化合物的制备方法，其特征在于，所述步骤4中4-(三(2,5-双(2-叠氮基乙氧基))苯)三苯胺、N-Boc-氨基丙炔、碘化亚铜、DBU的质量比为1:6:0.05:0.05～1:50:0.2:0.2，甲苯为5～30mL，回流反应的温度为50～70℃；柱色谱分离展开剂甲醇:二氯甲烷的体积比为1:35～1:20。

7.根据权利要求1所述的一种特异性杀伤革兰氏阴性菌的化合物的制备方法，其特征在于，所述步骤5中4-(三(2,5-双(2-(4-(N-叔丁基氧羰亚甲胺基)1H-1,2,3-三唑)乙氧基))苯)三苯胺的质量为5～50mg，四氢呋喃为2～10mL，HCl的1,4-二氧六环溶液为1～5mL，HCl的1,4-二氧六环溶液的浓度为2～6mol/L，搅拌反应的时间为24～72h；所述稀释反应液用4～20mL的乙醚，洗涤滤饼用乙醚，洗涤次数为2～5次。

8.权利要求1所述的一种特异性杀伤革兰氏阴性菌的化合物的应用，其特征在于，应用于制备抗菌的药物。