CN111184782A - 一种保肝降脂的中药组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提出了一种保肝降脂的中药组合物，其特征在于，以重量比计，所述中药组合物包括：垂盆草1～100份，海藻1～100份，煅牡蛎1～100份，山楂1～100份，酒豨莶草1～100份，醋五味子1～100份，虎杖1～100份。该组合物能明显降低肝病模型大鼠中，甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白‑胆固醇的含量(P<0.05)，同时明显升高高密度脂蛋白‑胆固醇的水平(P<0.05)，这表明本发明制得的组合物具有治疗非酒精性脂肪性肝炎的作用。而且，本发明还通过实验证实了所述中药组合物，明显降低模型小鼠中血清中谷丙转氨酶、谷草转氨酶活力，和肝组织中IL‑6分泌量，这也表明本发明所述中药组合物对CCl4所致小鼠肝损伤有明显的保护作用。

Description

一种保肝降脂的中药组合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及中药技术领域，具体涉及一种保肝降脂的中药组合物及其制备方法和应用。
背景技术
脂肪性肝炎是由于脂肪性肝病日益严重，脂肪细胞侵袭影响肝脏功能，导致的肝脏非感染性炎症，表现为转氨酶明显增高，肝细胞呈炎性表现。
传统中医学中并无“脂肪性肝炎”病名，中医学相关理论常见于“积证”、“痞满”、“胁痛”、“肥气”、“痰湿”等疾病认识当中。古今医家对其病因病机的认识各有不同，并未统一。2002版《中药新药临床研究指导原则》中将单纯性脂肪肝分为肝郁脾虚证、痰瘀互结证、痰湿内阻证、肝肾不足证、湿热蕴阻证等五型，并分列主症和辨证要点。多数认为本病病因主要是饮酒过度或嗜食肥甘厚味或饱食无度或久卧久坐、体丰痰盛或情志失常或久病体虚、他病转化等。肝失疏泄，脾失健运，湿热内蕴，痰浊郁结，气滞血瘀，最终形成湿、痰、瘀互结，痹阻肝脏脉络，这是脂肪肝病机演变的基本规律。其病位主要在肝，病机为本虚标实，本虚以脾肾为主，标实主要与气滞、痰湿、血瘀有关。肝气不疏是痰湿瘀血阻滞于肝络的重要因素。而痰浊、瘀血在本病发生发展过程中亦起着关键作用。
目前，西医治疗的药物临床常用护肝片、壳脂胶囊、强肝胶囊、水飞蓟素类等治疗单纯性脂肪肝，但尚无针对脂肪性肝炎的治疗用药。中医治疗脂肪性肝炎以化痰祛湿、活血化瘀、疏肝健脾、补肾是本病的基本治法。目前在中药新药开发领域，治疗单纯性脂肪肝的药物开发已经饱和，开发重点正转向脂肪性肝炎药物。
发明内容
本发明的目的在于弥补现有技术的不足，提供一种用于肝病的中药组合物，其特征在于，以重量比计，所述中药组合物包括：垂盆草1～ 100份，海藻1～100份，煅牡蛎1～100份，山楂1～100份，酒豨莶草1～100份，醋五味子1～100份，虎杖1～100份。所述用于，可以是包括治疗或预防在内的一切有益于改善患者相应症状的方式。本发明的组合物可以直接研磨成粉，也可以是经过本领域常规手段制得的提取物等。本发明组合物中使用的中药也可以以直接研磨成粉、提取物、或者其它加工形态的方式使用。
进一步地，所述中药组合物包括：垂盆草1～100份，海藻1～100 份，煅牡蛎1～100份，山楂1～100份，酒豨莶草1～100份，醋五味子1～100份，虎杖1～100份。
进一步地，所述中药组合物包括：垂盆草20～80份，海藻10～40 份，煅牡蛎20～50份，山楂10～30份，酒豨莶草20～40份，醋五味子10～25份，虎杖15～50份。
优选地，所述中药组合物包括：垂盆草15～25份，海藻8～12份，煅牡蛎15～25份，山楂8～12份，酒豨莶草15～25份，醋五味子8～ 12份，虎杖12～18份。
更优选地，所述中药组合物包括：垂盆草18～22份，海藻9～11 份，煅牡蛎18～22份，山楂9～11份，酒豨莶草18～22份，醋五味子 9～11份，虎杖14～16份。
最优选地，所述中药组合物包括：垂盆草20份，海藻10份，煅牡蛎20份，山楂10份，酒豨莶草20份，醋五味子10份，虎杖15份。
本发明还提出了一种前述任一组合物在制备保肝降脂的药物中的应用。
具体地，所述保肝降脂的药物包括用于脂肪性肝炎、脂肪肝或急性肝损伤的药物。所述肝部疾病可主要表现“积证”、“痞满”、“胁痛”、“肥气”、“痰湿”等。
优选地，所述脂肪性肝炎可以是非酒精性脂肪性肝炎。
本发明还提出了前述任一组合物在制备降血脂药物中的应用。
本发明还提出了一种药物，其特征在于，该药物由前述任一中药组合物与药学上可接受的辅料或添加剂制得。
具体地，该药物选自汤剂、颗粒剂、胶囊剂、片剂、口服液、丸剂、软胶囊、滴丸、酊剂、糖浆剂、栓剂、凝胶剂、喷雾剂、注射剂。
本发明还提出了一种前述任一中药组合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法为以下方法a,b或c中的任意一种：
a.取垂盆草、海藻、煅牡蛎、山楂、虎杖、酒豨莶草、醋五味子，加入4～12倍量水回流提取1～3次，每次0.5～3小时，合并提取液，减压浓缩得水提浸膏；或，
b.(1)取垂盆草、海藻、煅牡蛎加入4～12倍量水提取1～3次，每次0.5～3小时，合并提取液，浓缩得水提浸膏；
(2)取山楂、酒豨莶草、醋五味子、虎杖加入4～12倍量50％～ 90％乙醇提取1～3次，每次0.5～3小时，合并提取液，浓缩得醇提浸膏；
(3)将所述水提浸膏和所述醇提浸膏合并后浓缩即得；或，
c.取垂盆草、海藻、煅牡蛎、山楂、虎杖、酒豨莶草、醋五味子，加入4～12倍量水提取1～3次，每次0.5～3小时，合并提取液，浓缩得浸膏，加入乙醇至含醇量为50％～90％，静置8～48小时，吸取醇沉上清液，浓缩即得。
前述浓缩后所得浸膏可根据需要进行干燥、粉碎，得到用于制备所需中药制剂的中间体。
本发明还提出了一种中药颗粒剂的制备方法，其特征在于，该制备方法为以下方法a,b或c中的任意一种：
a.取垂盆草20份，海藻10份，煅牡蛎20份，山楂10份，酒豨莶草 20份，醋五味子10份，虎杖15份，加入10倍量水回流提取2次，每次1～ 2小时，合并提取液，减压浓缩至相对密度为1.10～1.40的浸膏，减压干燥、粉碎，得中间体组合物1，加入乳糖，混匀，利用干法制粒即得；或，
b.(1)取垂盆草20份、海藻10份、煅牡蛎20份加入10倍量水提取2次，每次1～2小时，合并提取液，减压浓缩至相对密度为1.00～ 1.30的水提浸膏；
(2)取山楂10份、酒豨莶草20份、醋五味子10份、虎杖15份加入10倍量80％乙醇提取2次，每次1～2小时，减压浓缩至相对密度为1.00～1.30醇提浸膏；
(3)将水提浸膏和醇提浸膏合并浓缩至相对密度为1.10～1.40，减压干燥，粉碎，得中间体组合物2，加入乳糖，混匀，利用干法制粒即得；或，
c.取垂盆草20份，海藻10份，煅牡蛎20份，山楂10份，酒豨莶草 20份，醋五味子10份，虎杖15份，加入10倍量水提取2次，每次1～2 小时，合并提取液，浓缩至相对密度为1.00～1.20的浸膏，加入乙醇至含醇量为60％～80％，静置12～36小时，吸取醇沉上清液，浓缩至相对密度为1.10～1.40，减压干燥，粉碎，得中间体组合物3，加入乳糖，混匀即得。
本发明提出了一种中药组合物，并给出了制备组合物的活性提取物中间体组合物的制备方法。利用本发明提取的方法得到的组合物，能明显降低模型大鼠中，甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白-胆固醇的含量(P<0.05)，同时明显升高高密度脂蛋白-胆固醇的水平(P<0.05)。这表明本发明制得的组合物具有治疗非酒精性脂肪性肝炎的作用以及对高脂饲料诱导的高血脂模型大鼠具有良好的保护作用。
而且，本发明还通过实验证实了本发明所述中药组合物，明显降低模型小鼠中血清中谷丙转氨酶、谷草转氨酶活力，和肝组织中IL-6分泌量。这表明本发明所述中药组合物对CCl4所致小鼠肝损伤有明显的保护作用，对MDA等指标的影响也反映了其能够改善肝功能、改善脂质代谢，对高脂饲料诱导的脂肪肝模型小鼠具有良好的保护作用。
具体实施方式
如前所述，本发明旨在提供一种用于肝病的中药组合物及其制备方法和应用。以下将结合实验例的内容进行具体描述。
特别需要指出的是，针对本发明所做出的类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。
本发明如未注明具体条件者，均按照常规条件或制造商建议的条件进行，所用原料药或辅料，以及所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例1中药复方颗粒
组方：垂盆草20份，海藻10份，煅牡蛎20份，山楂10份，酒豨莶草20份，醋五味子10份，虎杖15份。
该中药组合物颗粒剂的制备方法可选自如下方法中的任一种：
a、取垂盆草、海藻、煅牡蛎、山楂、虎杖、酒豨莶草、醋五味子，加入10倍量水回流提取2次，每次1～2小时，合并提取液，减压浓缩至相对密度为1.10～1.40的浸膏，减压干燥、粉碎，得中药组合物1，加入乳糖，混匀，利用干法制粒获得颗粒1。
b、(1)取垂盆草、海藻、煅牡蛎加入10倍量水提取2次，每次1～ 2小时，合并提取液，减压浓缩至相对密度为1.00～1.30的水提浸膏；
(2)取虎杖、山楂、酒豨莶草、醋五味子加入10倍量80％乙醇提取2次，每次1～2小时，减压浓缩至相对密度为1.00～1.30醇提浸膏；
(3)将水提浸膏和醇提浸膏合并浓缩至相对密度为1.10～1.40，减压干燥，粉碎，得中药组合物2，加入乳糖，混匀，利用干法制粒获得颗粒 2。
c、取垂盆草、海藻、煅牡蛎、山楂、虎杖、酒豨莶草、醋五味子，加入10倍量水提取2次，每次1～2小时，合并提取液，浓缩至相对密度为 1.00～1.20的浸膏，加入乙醇至含醇量为60％～80％，静置12～36小时，吸取醇沉上清液，浓缩至相对密度为1.10～1.40，减压干燥，粉碎，得中药组合物3，加入乳糖，混匀，利用干法制粒获得颗粒3。
实施例2中药复方胶囊
组方：垂盆草30份，海藻10份，煅牡蛎30份，山楂20份，虎杖 30份，酒豨莶草40份，醋五味子15份。
该中药组合物胶囊剂的制备方法如下可选自如下方法中的任一种：
a、取垂盆草、海藻、煅牡蛎、山楂、虎杖、酒豨莶草、醋五味子，加入8倍量水回流提取3次，每次1～2小时，合并提取液，减压浓缩至相对密度为1.00～1.30的浸膏，喷雾干燥制粒，制成胶囊1。
b、(1)取垂盆草、海藻、煅牡蛎加入8倍量水提取3次，每次1～ 2小时，合并提取液，减压浓缩至相对密度为1.00～1.30的水提浸膏；
(2)取虎杖、山楂、酒豨莶草、醋五味子加入8倍量70％乙醇提取3次，每次0.5～2小时，减压浓缩至相对密度为1.00～1.30醇提浸膏；
(3)将水提浸膏和醇提浸膏合并浓缩至相对密度为1.00～1.40 的浸膏，喷雾干燥制粒，制成胶囊2。
c、取垂盆草、海藻、煅牡蛎、山楂、虎杖、酒豨莶草、醋五味子，加入8倍量水提取3次，每次0.5～2小时，合并提取液，浓缩至相对密度为1.00～1.20的浸膏，加入乙醇至含醇量为60％，静置24小时，吸取醇沉上清液，浓缩至相对密度为1.00～1.40，喷雾干燥制粒，制成胶囊3。
实施例3中药复方片剂
组方：垂盆草80份，海藻40份，煅牡蛎50份，山楂30份，虎杖 50份，酒豨莶草40份，醋五味子20份。
该中药组合物片剂的制备方法可选自如下方法中的任一种：
a、取垂盆草、海藻、煅牡蛎、山楂、虎杖、酒豨莶草、醋五味子，加入12倍量水回流提取2次，每次1～2小时，合并提取液，减压浓缩至相对密度为1.00～1.30的浸膏，减压带式干燥，粉碎，得中间体组合物1，加入微晶纤维素等辅料，制成片剂1。
b、(1)取垂盆草、海藻、煅牡蛎加入8倍量水提取3次，每次1～ 2小时，合并提取液，减压浓缩至相对密度为1.00～1.30的水提浸膏；
(2)取虎杖、山楂、酒豨莶草、醋五味子加入8倍量70％乙醇提取3次，每次0.5～2小时，减压浓缩至相对密度为1.00～1.30醇提浸膏；
(3)将水提浸膏和醇提浸膏合并浓缩至相对密度为1.00～1.40 的浸膏，减压带式干燥，粉碎，得中间体组合物2，加入微晶纤维素等辅料，制成片剂2。
c、取垂盆草、海藻、煅牡蛎、山楂、虎杖、酒豨莶草、醋五味子，加入8倍量水提取3次，每次1～2小时，合并提取液，浓缩至相对密度为1.00～1.20的浸膏，加入乙醇至含醇量为60％，静置24小时，吸取醇沉上清液，浓缩至相对密度为1.00～1.40，减压带式干燥，粉碎，得中间体组合物3，加入微晶纤维素等辅料，制成片剂3。
实施例4中药复方软胶囊
组方：垂盆草50份，海藻20份，煅牡蛎30份，山楂20份，虎杖40 份，酒豨莶草35份，醋五味子25份。
该中药组合物的软胶囊的制备方法可选自如下方法中的任一种：
a、取垂盆草、海藻、煅牡蛎、山楂、虎杖、酒豨莶草、醋五味子，加入6倍量水回流提取3次，每次1～2小时，合并提取液，减压浓缩至相对密度为1.00～1.30的浸膏，加入一定辅料，制成软胶囊1。
b、(1)取垂盆草、海藻、煅牡蛎加入6倍量水提取3次，每次0.5～2小时，合并提取液，减压浓缩至相对密度为1.00～1.30的水提浸膏；
(2)取虎杖、山楂、酒豨莶草、醋五味子加入6倍量75％乙醇提取 3次，每次0.5～2小时，减压浓缩至相对密度为1.00～1.30醇提浸膏；
(3)将水提浸膏和醇提浸膏合并浓缩至相对密度为1.00～1.40的浸膏，减压带式干燥，粉碎，得中间体，加入一定辅料，制成软胶囊2。
c、取垂盆草、海藻、煅牡蛎、山楂、虎杖、酒豨莶草、醋五味子，加入6倍量水提取3次，每次1～2小时，合并提取液，浓缩至相对密度为1.00～ 1.30的浸膏，加入乙醇至含醇量为70％，静置36小时，吸取醇沉上清液，浓缩至相对密度为1.00～1.40，加入一定辅料，制成软胶囊3。
实施例5本发明组合物对大鼠非酒精性脂肪性肝炎的影响
1、实验材料
1.1药物及试剂
受试药物：实施例1中制备的中药组合物1、中药组合物2、中药组合物3，江苏康缘药业股份有限公司，批号18501；水飞蓟宾胶囊，天津天士力圣特制药有限公司，批号750711266，规格30粒/盒；GOT测试盒(酶标仪法)，南京建成生物工程研究所，批号20180404，规格96T；GPT试剂盒(酶标仪法)，南京建成生物工程研究所，批号20180402，规格96T；甘油三酯(TG)测试盒，南京建成生物工程研究所，批号20180329，规格 96T；总胆固醇(T-CHO)测试盒，南京建成生物工程研究所，批号20180403，规格96T；高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)测试盒，南京建成生物工程研究所，批号20180329，规格96T；低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)测试盒，南京建成生物工程研究所，批号20180329，规格96T；Rat IL-6 QuantikineELISA，R&D，批号P165216，规格96T；水合氯醛，国药集团化学试剂有限公司，批号20171222，规格250g；0.9％氯化钠，江苏淮安双鹤药业有限责任公司，批号1703132C，规格100ml。
1.2动物
SD大鼠，SPF级，雄性，体重180～220g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号：SCXK(京)2016-0011。饲养条件：室温20～ 26℃，湿度50～70％，自由进食、饮水，每周更换两次垫料，饮水均经消毒处理。高脂饲料：84％基础饲料+10％猪油+1％胆固醇+5％蛋黄粉，购自北京华阜康生物科技股份有限公司，保存于动物房4℃冰箱。
1.3仪器
BS224S型电子分析天平，北极赛多利斯仪器系统有限公司；ACS-DII 电子计重称，上海三峰；XMTD-8222型电热恒温水浴锅，上海精宏实验设备有限公司；Centrifuge 5804R高速冷冻离心机，Eppendorf公司；FlexStation 3钙流工作站，美国MolecularDevices公司。
2、实验方法
造模给药：60只大鼠正常喂养1周后，除正常对照组10只给予正常饲料外，其余大鼠开始造模，给予高脂饲料。12周后造模大鼠随机分为5组，每组10只，分别为模型组、阳性对照水飞蓟宾组、中药组合物1、中药组合物2、中药组合物3。模型组和正常对照组给予纯化水，各用药组大鼠分别给予相应药液，水飞蓟宾组给予28.35mg/kg，各组合物组分别给予6.3g 生药/kg，给药体积为10ml/kg体重，一日1次，连续4周。给药期间除正常组外继续给予高脂饲料。至第4周末，末次给药前禁食不禁水18h，各组大鼠称重麻醉后腹主动脉取血，分离血清，待测血清相关指标。
指标观察：取各组大鼠血清进行谷草转氨酶(GOT)、谷丙转氨酶(GPT)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(T-CHO)、高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)，ELISA法测定血清IL-6水平。
本研究采用SPSS13.0统计学软件进行数据处理与分析，计量资料采用x±s表示，采用t检验，以P<0.05为差异具有统计学意义。
3、实验结果：
与正常对照组相比，模型组大鼠血清中谷丙转氨酶、谷草转氨酶和IL-6 的数值显著升高(P<0.01)。与模型组比较，中药组合物1、中药组合物2、中药组合物3的谷丙、谷草活力明显降低(P<0.05)，3个中药组合物组的IL-6分泌量也均有统计学意义(P<0.01)。血脂方面与模型组比较，3个中药组合物可明显降低甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白-胆固醇的含量 (P<0.05)，同时明显升高高密度脂蛋白-胆固醇的水平(P<0.05)。结果见表1、表2。
表1组合物对非酒精性脂肪肝大鼠血清谷丙、谷草及IL-6的影响(X+SD)
Figure BDA0001866883220000101
△△P<0.01与正常对照组比较，*P<0.05、**P<0.01与模型组比较。
表2组合物对非酒精性脂肪肝大鼠血脂的影响(X+SD)
Figure BDA0001866883220000102
△△P<0.01与正常对照组比较，*P<0.05、*P<0.01与模型组比较。
NASH是指在无过量饮酒史的情况下，发生的以肝细胞脂肪变性、气球样变，弥散性肝小叶轻度炎症和/或肝中央静脉、肝窦周围胶原沉积为病理特征的慢性肝脏炎症性疾病。本实验采用高脂饲料诱导制作大鼠非酒精性脂肪性肝炎模型，造模12周，检测发现模型组大鼠血清ALT、AST、TG、TC等含量升高，肝细胞明显的变性、坏死，与报道的NASH大鼠模型基本一致。因此，从表1和表2数据可知三个中药组合物均具有治疗非酒精性脂肪性肝炎的作用。
实施例6：本发明组合物对脂肪肝模型小鼠的影响
1、实验材料
1.1药物及试剂
受试药物：实施例1中制备的中药组合物1、中药组合物2、中药组合物3，江苏康缘药业股份有限公司，批号18501；辛伐他汀片，上海信谊万象药业股份有限公司，批号170701，规格10mg/片；GPT试剂盒(酶标仪法)，南京建成生物工程研究所，批号20180402，规格96T；甘油三酯(TG) 测试盒，南京建成生物工程研究所，批号20180329，规格96T；总胆固醇 (T-CHO)测试盒，南京建成生物工程研究所，批号20180403，规格96T；丙二醛(MDA)测试盒，南京建成生物工程研究所，批号20180406，规格 96T。
1.2动物
ICR小鼠，SPF级，雄性，体重18～22g，由扬州大学比较医学中心提供，合格证号：SCXK(苏)2012-0004。饲养条件：室温20－26℃，湿度50-70％，自由进食、饮水，每周更换两次垫料，饮水均经消毒处理。高脂饲料：84％基础饲料+10％猪油+1％胆固醇+5％蛋黄粉，购自北京华阜康生物科技股份有限公司，保存于动物房4℃冰箱。
1.3仪器
BS224S型电子分析天平，北极赛多利斯仪器系统有限公司；ACS-DII 电子计重称，上海三峰；XMTD-8222型电热恒温水浴锅，上海精宏实验设备有限公司；Centrifuge 5804R高速冷冻离心机，Eppendorf公司；FlexStation 3钙流工作站，美国Molecular Devices公司。
2、实验方法
造模给药：60只小鼠正常喂养3天后，除正常对照组10只给予正常饲料外，其余小鼠开始造模，给予高脂饲料。造模小鼠随机分为5组，每组10只，分别为模型组、阳性对照辛伐他汀组、中药组合物1、中药组合物2、中药组合物3组。造模期间模型组和正常对照组给予纯化水，各用药组小鼠分别给予相应药液，辛伐他汀组给予1.3mg/kg，各组合物组分别给予9.1g生药/kg，给药体积为0.2mL/10g体重，一日1次，连续8周。给药期间除正常组外继续给予高脂饲料。至第8周末，末次给药前禁食不禁水24h，各组小鼠称重麻醉后腹主动脉取血，分离血清，待测血清相关指标。
指标观察：取各组小鼠血清进行谷丙转氨酶、甘油三酯、总胆固醇、丙二醛测定。
本研究采用SPSS13.0统计学软件进行数据处理与分析，计量资料采用x±s表示，采用t检验，以P<0.05为差异具有统计学意义。
3、实验结果
与正常对照组相比，模型组小鼠血清中谷丙转氨酶、甘油三酯、胆固醇及MDA的数值显著升高(P<0.01)。与模型组比较，中药组合物1、中药组合物2、中药组合物3的谷丙转氨酶、甘油三酯、胆固醇及MDA含量明显降低(P<0.05，P<0.01)。结果见表3。
表3组合物对脂肪肝模型小鼠谷丙及血脂等的影响(X+SD)
Figure BDA0001866883220000121
△△P<0.01与正常对照组比较，*P<0.05、**P<0.01与模型组比较
肝脏是脂质代谢的中心器官，当来源于饮食中的FFA急剧增加，超过了肝脏脂质代谢动力循环平衡时，脂肪就会在肝细胞内开始大量堆积而形成脂肪肝。本实验通过高脂饲料诱导建立脂肪肝模型小鼠，发现其谷丙数值显著增高、血脂紊乱、MDA升高，符合脂肪肝的诊断标准。三种中药组合物能明显降低谷丙水平、具有显著的降脂效果，能够改善肝功能、改善脂质代谢，对高脂饲料诱导的脂肪肝模型小鼠具有良好的保护作用。
实施例7：本发明组合物对高血脂模型大鼠的影响
1、实验材料
1.1药物及试剂
受试药物：实施例1中制备的中药组合物1、中药组合物2、中药组合物3，江苏康缘药业股份有限公司，批号18501；辛伐他汀片，上海信谊万象药业股份有限公司，批号170701，规格10mg/片；甘油三酯(TG)测试盒，南京建成生物工程研究所，批号20180329，规格96T；总胆固醇(T-CHO) 测试盒，南京建成生物工程研究所，批号20180403，规格96T；高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)测试盒，南京建成生物工程研究所，批号20180329，规格96T；低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)测试盒，南京建成生物工程研究所，批号20180329，规格96T。
1.2动物
SD大鼠，SPF级，雄性，体重180～220g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号：SCXK(京)2016-0011。饲养条件：室温20～ 26℃，湿度50～70％，自由进食、饮水，每周更换两次垫料，饮水均经消毒处理。高脂饲料：84％基础饲料+10％猪油+1％胆固醇+5％蛋黄粉，购自北京华阜康生物科技股份有限公司，保存于动物房4℃冰箱。
1.3仪器
BS224S型电子分析天平，北极赛多利斯仪器系统有限公司；ACS-DII 电子计重称，上海三峰；XMTD-8222型电热恒温水浴锅，上海精宏实验设备有限公司；Centrifuge 5804R高速冷冻离心机，Eppendorf公司；FlexStation 3钙流工作站，美国Molecular Devices公司。
2、实验方法
造模给药：60只大鼠正常喂养3天后，除正常对照组10只给予正常饲料外，其余大鼠开始造模，给予高脂饲料。14天后造模大鼠随机分为5 组，每组10只，分别为模型组、阳性对照辛伐他汀组、中药复方组合物一、中药复方组合物二、中药复方组合物三组。模型组和正常对照组给予纯化水，各用药组大鼠分别给予相应药液。辛伐他汀组给予0.9mg/kg，各组合物组分别给予6.3g生药/kg，给药体积为10mL/kg体重，一日1次，连续 14日，给药期间，除正常组外继续给予高脂饲料至实验结束。给药第14日，末次给药前禁食不禁水18h，各组大鼠称重麻醉后腹主动脉取血，分离血清，待测血清相关指标。
指标观察：取各组大鼠血清检测甘油三酯(TG)、总胆固醇(T-CHO)、高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)。
本研究采用SPSS13.0统计学软件进行数据处理与分析，计量资料用x ±s表示，采用t检验，以P<0.05为差异具有统计学意义。
3、实验结果
与正常对照组相比，模型组大鼠血清中甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白-胆固醇的数值显著升高(P<0.01)、高密度脂蛋白-胆固醇的水平明显下降(P<0.01)。与模型组比较，中药组合物1、中药组合物2、中药组合物3的甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白-胆固醇的数值含量明显降低 (P<0.05)，同时明显升高密度脂蛋白-胆固醇的水平(P<0.05)。结果见表4。
表4组合物对高血脂模型大鼠的影响(X+SD)
Figure BDA0001866883220000141
Figure BDA0001866883220000151
△△P<0.01与正常对照组比较，*P<0.05、*P<0.01与模型组比较
高脂血症为人体脂质代谢紊乱出现的异常反应，是一种全身性疾病，表现为血液中总胆固醇和(或)甘油三酯过高，或高密度脂蛋白过低等。本实验通过高脂饲料诱导建立高血脂大鼠模型，发现其甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白-胆固醇的数值明显升高、高密度脂蛋白-胆固醇的水平明显下降。三种中药组合物能明显降低血脂水平、改善脂质代谢，对高脂饲料诱导的高血脂模型大鼠具有良好的保护作用。
实施例8：本发明组合物对四氯化碳诱导的小鼠急性肝损伤的影响
1、实验材料
1.1药物及试剂
受试药物：实施例1中制备的中药组合物1、中药组合物2、中药组合物3，江苏康缘药业股份有限公司，批号：180501；联苯双酯，上海信宜天平药业有限公司，批号171201，规格25mg/片；GOT测试盒(酶标仪法)，南京建成生物工程研究所，批号20180404，规格96T；GPT试剂盒(酶标仪法)，南京建成生物工程研究所，批号20180402，规格96T；Mouse IL-6Quantikine ELISA，R&D，批号P165018，规格96T；0.9％氯化钠，江苏淮安双鹤药业有限责任公司，批号1703132C，规格100ml。
1.2动物
ICR小鼠，SPF级，雄性，体重18～22g，由扬州大学比较医学中心提供，合格证号：SCXK(苏)2012-0004。饲养条件：室温20－26℃，湿度50-70％，自由进食、饮水，每周更换两次垫料，饮水均经消毒处理。
1.3仪器
BS224S型电子分析天平，北极赛多利斯仪器系统有限公司；ACS-DII 电子计重称，上海三峰；XMTD-8222型电热恒温水浴锅，上海精宏实验设备有限公司；Centrifuge 5804R高速冷冻离心机，Eppendorf公司；FlexStation 3钙流工作站，美国Molecular Devices公司。
2、实验方法
2.1分组、造模及给药
60只小鼠随机分为6组，每组10只，分别为空白对照组、模型组、阳性对照联苯双酯组、中药组合物1、中药组合物2、中药组合物3。空白对照组和模型组给予纯化水，各用药组小鼠分别给予相应药液，联苯双酯组给予200mg/kg，各组合物组分别给予9.1g生药/kg，给药体积为0.2mL/10g 体重，连续灌胃7d，末次给药后1h，除空白对照组外，其余小鼠以10mL/kg 体质量腹腔注射体积分数为0.2％的CCL4/橄榄油溶液造模。
2.2观察指标
于末次给药后24h，摘眼球取血(取血前禁食不禁水)，3000r/min离心，取上清，检测生化指标ALT、AST，同时迅速剖取肝脏，取小鼠肝左叶，在冰浴条件下制备10％肝匀浆，检测IL-6。
本研究采用SPSS13.0统计学软件进行数据处理与分析，计量资料采用 x±s表示，采用t检验，以P<0.05为差异具有统计学意义。
3、实验结果：
与空白对照组相比，模型组小鼠血清中谷丙转氨酶、谷草转氨酶和肝组织中IL-6的数值显著升高(P<0.01)。与模型组比较，中药组合物1、中药组合物2、中药组合物3血清中的谷丙、谷草活力明显降低(P<0.05)， 3个中药组合物组肝组织中的IL-6分泌量也明显下降(P<0.01)。结果见表 5。
表5组合物对非酒精性脂肪肝大鼠血清谷丙、谷草及肝组织IL-6的影响(X+SD)
Figure BDA0001866883220000161
Figure BDA0001866883220000171
△△P<0.01与正常对照组比较，*P<0.05、**P<0.01与模型组比较。
CCl4所致肝损伤是一种经典的肝损伤模型，被广泛应用于中西药药效、药理及机制的研究。肝细胞受到损害后，细胞变性、坏死，细胞膜破碎或细胞膜的通透性增加，导致ALT和AST等可溶酶从细胞中释放出来，使血清ALT和AST升高。IL-6作为由单核及巨噬细胞等对IL-1和TNF-α反应的产物，主要促进肝细胞合成几种能够参与肝脏炎性损伤，进而促进对肝脏的损害。由表5数据可知，三个中药组合物对CCl4所致小鼠肝损伤均有明显的保护作用。
上述披露的各技术特征并不限于已披露的与其它特征的组合，本领域技术人员还可根据发明之目的进行各技术特征之间的其他组合，以实现本发明之目的为准。

Claims (10)

1.一种保肝降脂的中药组合物，其特征在于，以重量比计，所述中药组合物包括：垂盆草1～100份，海藻1～100份，煅牡蛎1～100份，山楂1～100份，酒豨莶草1～100份，醋五味子1～100份，虎杖1～100份。
2.根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物包括：
垂盆草20～80份，海藻10～40份，煅牡蛎20～50份，山楂10～30份，酒豨莶草20～40份，醋五味子10～25份，虎杖15～50份。
3.根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物包括：
垂盆草15～25份，海藻8～12份，煅牡蛎15～25份，山楂8～12份，酒豨莶草15～25份，醋五味子8～12份，虎杖12～18份。
4.根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物包括：
垂盆草20份，海藻10份，煅牡蛎20份，山楂10份，酒豨莶草20份，醋五味子10份，虎杖15份。
5.权利要求1-4任一项所述的中药组合物在制备保肝降脂的药物中的应用；所述保肝降脂的药物优选包括用于脂肪性肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、脂肪肝或急性肝损伤的药物。
6.权利要求1-4任一项所述的中药组合物在制备用于降血脂药物中的应用。
7.一种药物，其特征在于，该药物由权利要求1-4任一所述的中药组合物与药学上可接受的辅料或添加剂制得。
8.根据权利要求7所述的药物，其特征在于，该药物选自汤剂、颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂、口服液、酊剂、糖浆剂、栓剂、凝胶剂、喷雾剂、注射剂。
9.一种如权利要求1-4任一所述的中药组合物的制备方法，其特征在于，所述中药组合物制备方法为以下方法a,b或c中的任意一种：
a.取垂盆草、海藻、煅牡蛎、山楂、虎杖、酒豨莶草、醋五味子，加入4～12倍量水回流提取1～3次，每次0.5～3小时，合并提取液，减压浓缩得水提浸膏；或，
b.(1)取垂盆草、海藻、煅牡蛎加入4～12倍量水提取1～3次，每次0.5～3小时，合并提取液，浓缩得水提浸膏；
(2)取山楂、酒豨莶草、醋五味子、虎杖加入4～12倍量50％～90％乙醇提取1～3次，每次0.5～3小时，合并提取液，浓缩得醇提浸膏；
(3)将所述水提浸膏和所述醇提浸膏合并后浓缩即得；或，
c.取垂盆草、海藻、煅牡蛎、山楂、虎杖、酒豨莶草、醋五味子，加入4～12倍量水提取1～3次，每次0.5～3小时，合并提取液，浓缩得浸膏，加入乙醇至含醇量为50％～90％，静置8～48小时，吸取醇沉上清液，浓缩即得。
10.一种如权8所述药物的制备方法，其特征在于，所述药物选自颗粒剂，其制备方法为以下方法a,b或c中的任意一种：
a.取垂盆草20份，海藻10份，煅牡蛎20份，山楂10份，酒豨莶草20份，醋五味子10份，虎杖15份，加入10倍量水回流提取2次，每次1～2小时，合并提取液，减压浓缩至相对密度为1.10～1.40的浸膏，减压干燥、粉碎，得中间体组合物1，加入乳糖，混匀，利用干法制粒即得；或，
b.(1)取垂盆草20份、海藻10份、煅牡蛎20份加入10倍量水提取2次，每次1～2小时，合并提取液，减压浓缩至相对密度为1.00～1.30的水提浸膏；
(2)取山楂10份、酒豨莶草20份、醋五味子10份、虎杖15份加入10倍量80％乙醇提取2次，每次1～2小时，减压浓缩至相对密度为1.00～1.30醇提浸膏；
(3)将水提浸膏和醇提浸膏合并浓缩至相对密度为1.10～1.40，减压干燥，粉碎，得中间体组合物2，加入乳糖，混匀，利用干法制粒即得；或，
c.取垂盆草20份，海藻10份，煅牡蛎20份，山楂10份，酒豨莶草20份，醋五味子10份，虎杖15份，加入10倍量水提取2次，每次1～2小时，合并提取液，浓缩至相对密度为1.00～1.20的浸膏，加入乙醇至含醇量为60％～80％，静置12～36小时，吸取醇沉上清液，浓缩至相对密度为1.10～1.40，减压干燥，粉碎，得中间体组合物3，加入乳糖，混匀即得。
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CN115969892B (zh) * 2021-10-15 2023-10-20 北京中医药大学东直门医院 豨莶草水提物在制备改善心肌再灌注损伤药物中的应用

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