CN111184684B - 一种红细胞凝胶递释系统及其制备方法与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种红细胞凝胶递释系统及其制备方法与应用，属于生物材料技术领域。本发明通过将活性成分或含有活性成分的递送载体与新鲜血液混匀，在初步凝结后进行温和干燥制备所述的红细胞凝胶递释系统。本发明中红细胞凝胶递释系统地制备方法简单快捷，载药量高，生物安全性和生物可降解性高。红细胞凝胶自身具有免疫刺激和免疫细胞招募作用，可在植入部位形成免疫龛。本发明制备的红细胞凝胶疫苗中所载的免疫调节剂和肿瘤相关抗原，经埋植后，刺激招募免疫细胞分化成为具有肿瘤抗原特异性的免疫细胞，诱导产生高效的抗肿瘤免疫反应。

Description

一种红细胞凝胶递释系统及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及一种红细胞凝胶递释系统及其制备方法与应用，属于生物材料技术领域。
背景技术
疾病的常规治疗方式往往需要给予患者重复高剂量的给药，才能达到良好的预后效果。然而，常规给药方式所产生的整体效率较低，病人顺应性差，极易造成严重的毒副作用。经静脉注射的药物无需跨越任何屏障即可进入血液循环，存在一定全身毒性风险，且无法及时缓解和清除。口服给药起效时间较慢，生物利用度较低，通常缺乏靶向性。
近年来，材料工程的迅速发展为生物医药领域提供了新的机遇。经合理设计的生物材料能用于构建纳米/微米尺寸的递释系统及药物储库系统用于递送药物。常见的药物载体包括：有机/无机纳米颗粒、脂质体、细胞膜和水凝胶等。基于生物材料构建的新型递释系统能够提高药物在体内的长循环时间、持续释放多种活性药物、靶向特定病灶部位、大大提高药物在病灶组织和病变细胞中的富集。目前，新型药物递释系统已经在临床上展现了卓越的治疗效果。其中，水凝胶已经被应用于多个医学领域，包括心脏病治疗、肿瘤治疗、免疫治疗、伤口修复和疼痛治疗等。传统水凝胶由大量水和交联的聚合物网络组成，高含水量的水凝胶(含水量约70–99％)与组织存在一定的相似性，具有良好生物相容性，易于装载多重药物。此外，水凝胶通常是在水溶液中制备的，能避免药物因接触有机试剂所造成的变性和聚集风险。由传统聚合物通过交联形成的水凝胶具有优良的力学性能。部分水凝胶递释系统已经进入临床应用，如Medtronic公司开发的INFUSE胶原凝胶(用于骨修复)的销售额已经达到7.5亿美元。
然而，与已经报道的水凝胶材料相比，真正进入临床应用的水凝胶递释系统非常有限。水凝胶递释系统依然面临着临床转化的问题。传统高分子水凝胶载体的制备过程复杂，往往需要多重合成步骤。水凝胶的高含水量特性会使终端灭菌变得困难，因此，必须对所有原材料和制造工艺进行无菌检测。同时水凝胶的保存工艺也需要进行详细的考察，易水解的材料或药物需要在凝胶制备后进行脱水处理，而需要在水合状态保存的凝胶则要避免水分蒸发，防止药物的损失。因此，水凝胶的监管问题和商业化成本也限制了其临床转化。此外，由合成材料构建的水凝胶在生物相容性和生物安全性方面存在一定的潜在风险，其降解行为、体内转运行为和代谢产物不明确。因此，寻求高生物安全性的生物材料用于构建水凝胶递释系统，增强对疾病的治疗效果，降低安全性风险是目前药物递释系统的研究重点之一。
血液离体后可触发凝集反应形成红细胞凝胶，该红细胞凝胶具有来源丰富、制备简单和生物相容性好等优点。红细胞凝胶能够在体内被完全代谢，而不产生毒副产物。此外，凝胶内网罗的红细胞还具有参与免疫调控的作用，维持机体稳态。通常情况下，红细胞最常见的功能是运载氧气。然而，当发生炎症或氧化应激时，红细胞可促进免疫激活。与健康红细胞的功能相反，氧化或衰老的红细胞促使脂多糖(LPS)诱导的树突状细胞(DCs)表现出完全成熟的表型。老化或受损的红细胞能够被组织驻留巨噬细胞完全清除。从受损的红细胞或储存的红细胞中释放的血红蛋白和血红素，会诱导巨噬细胞向促炎(M1)状态极化，同时分泌促炎细胞因子。此外，氧化/老化的红细胞也能促进T细胞的增殖和活化。目前尚未有基于血液构建的红细胞凝胶用于生物领域的相关报道。
发明内容
为解决传统水凝胶的相关问题，本发明提供一种高生物安全性的红细胞凝胶递释系统。血液离体后，血浆中的可溶性纤维蛋白原逐渐转变为不可溶的纤维蛋白，网罗大量红细胞，导致流动的血液变成凝胶状态，此过程可用来装载活性成分形成红细胞凝胶递释系统。红细胞凝胶不仅制备简单，有更好的生物安全性和生物相容性，而且凝胶内部受损的红细胞自身具备参与免疫调控的作用。
本发明的第一个目的是提供一种红细胞凝胶递释系统，包括红细胞凝胶；以及，所述红细胞凝胶装载的活性成分，或所述红细胞凝胶装载的含有活性成分的递送载体。
进一步地，所述的活性成分包括赋形剂、化疗药物、放疗增敏剂、免疫调节药物、光敏剂分子、磁性分子、抗原中的一种或多种成分组合。
进一步地，所述的递送载体包括聚合物微球、有机纳米粒、无机纳米粒、胶束、多肽衍生物中的一种或多种组合。
进一步地，所述的红细胞凝胶递释系统的载药率为90～99％。
进一步地，所述的红细胞凝胶递释系统的给药方式为注射、埋植或直接填充病灶部位。
本发明的第二个目的是提供所述的红细胞凝胶递释系统的制备方法，包括如下步骤：通过将活性成分或含有活性成分的递送载体与新鲜血液混匀，在初步凝结后进行温和干燥制备所述的红细胞凝胶递释系统。
进一步地，所述的制备方法具体包括如下步骤：
(1)将活性成分或含有活性成分的递送载体混入新鲜血液中，得到混合液；
(2)将步骤(1)的混合液在20～30℃放置5～15min，进行初步凝结；
(3)将步骤(2)初步凝结的混合血液在35～40℃干燥至脱水50～90％，得到所述的红细胞凝胶递释系统。
本发明的第三个目的是提供所述的红细胞凝胶递释系统在制备预防、治疗和诊断疾病的产品中的应用。
进一步地，所述疾病为传染病、寄生虫病、血液疾病、内分泌系统失调症、营养和代谢疾病、精神和行为障碍、呼吸系统疾病、消化系统疾病或癌症。
本发明的第四个目的是提供一种抗肿瘤凝胶疫苗，所述的抗肿瘤凝胶疫苗是通过将肿瘤新抗原和免疫调节剂与新鲜血液混匀，在初步凝结后进行温和干燥制备得到。
进一步地，所述的肿瘤新抗原是将切除的肿瘤通过反复冻融4～6次并辅以超声裂解等方式得到。
进一步地，所述抗肿瘤凝胶疫苗中所载的免疫调节剂包括免疫原性佐剂、免疫抑制剂、免疫增强剂中的一种或多种组合。
进一步地，所述抗肿瘤凝胶疫苗可通过注射或埋植进行给药。
进一步地，所述的抗肿瘤凝胶疫苗可治疗的多种肿瘤，包括但不局限于膀胱癌、骨癌、脑癌、结肠癌、前列腺癌、皮肤癌、胃癌、乳腺癌、卵巢癌。
为进一步提高肿瘤疫苗的治疗效果，本发明提供了一种基于红细胞凝胶疫苗的抗肿瘤联合疗法，将所述的红细胞凝胶肿瘤疫苗联合免疫检查点抑制剂，增强特异性的抗肿瘤免疫反应，产生持久的免疫记忆效应，高效地预防和治疗多种肿瘤。
本发明的第五个目的是提供一种抗肿瘤的联合用药组合物，包括抗肿瘤凝胶疫苗与免疫检查点抑制剂。
进一步地，免疫检查点抑制剂包括CTLA-4抗体、PD-1抗体、PD-L1抗体、LAG-3抗体、TIM-3抗体、TIGIT抗体、VISTA抗体中的一种或多种组合。
进一步地，免疫检查点抑制剂可通过载入红细胞凝胶疫苗或经静脉注射方式发挥联合免疫反应。
本发明的有益效果：
(1)本发明中红细胞凝胶递释系统地制备方法简单快捷，载药量高，生物安全性和生物可降解性高。
(2)红细胞凝胶自身具有免疫刺激和免疫细胞招募作用，可在植入部位形成免疫龛。
(3)本发明制备的红细胞凝胶疫苗中所载的免疫调节剂和肿瘤相关抗原，经埋植后，刺激招募免疫细胞分化成为具有肿瘤抗原特异性的免疫细胞，诱导产生高效的抗肿瘤免疫反应。
(4)本发明的红细胞凝胶肿瘤疫苗与免疫检查点抑制剂的组合物，有效地增强抗肿瘤效果，产生持久的免疫记忆效应，防止肿瘤复发和转移。
附图说明
图1为本发明中红细胞凝胶的外观形貌；
图2为本发明中流变仪验证红细胞凝胶的胶体性质；
图3为本发明中SEM显示红细胞凝胶具有规整地内部结构；
图4为本发明中红细胞凝胶在体外的降解；
图5为本发明中红细胞凝胶在体内降解时的凝胶体积变化；
图6为本发明中红细胞凝胶在小鼠体内的降解情况；
图7为本发明中红细胞凝胶植入体内于第0、1、3、5、7天时的体积变化；
图8为本发明中红细胞凝胶植入体内于第0、1、3、5、7天时的外观形貌变化；
图9为本发明中SEM表征红细胞凝胶植入体内于第0、1、3、5、7天时的内部微观变化；
图10为本发明中红细胞凝胶植入第0、3、7天后的HE切片；
图11为本发明中红细胞凝胶植入第0、3、7天后的免疫荧光切片；
图12为本发明中红细胞凝胶植入第0、3、7天后的免疫荧光切片上红线标记部位的荧光强度；
图13为本发明中红细胞凝胶植入第0、3、7天后的免疫荧光切片的整体定量分析；
图14为本发明中红细胞凝胶植入第0、3、7天后骨架中浸润的免疫细胞分析；
图15为本发明中红细胞凝胶对OVA和CpG的载药效率研究；
图16为本发明中FITC标记的OVA在红细胞凝胶中的分布；
图17为本发明中红细胞凝胶控制的OVA和CpG的释放；
图18为本发明中红细胞凝胶疫苗对树突状细胞的刺激作用；
图19为本发明中红细胞凝胶疫苗对巨噬细胞的刺激作用；
图20为本发明中红细胞凝胶疫苗植入第0、3、7天后的HE切片；
图21为本发明中红细胞凝胶疫苗植入第0、1、3、7天后的免疫荧光切片；
图22为本发明中红细胞凝胶疫苗植入3天后浸润的免疫细胞表型分析；
图23为本发明中红细胞凝胶疫苗及其与免疫检查点阻断剂的联合预防肿瘤的效果
图24为本发明中红细胞凝胶疫苗及其与免疫检查点阻断剂的联合疗法对B16-OVA黑色素瘤进行干预后的治疗效果分析；
图25为本发明中红细胞凝胶疫苗及其与免疫检查点阻断剂的联合疗法对4T1肿瘤进行干预后的治疗效果分析；
图26为本发明中红细胞凝胶疫苗及其与免疫检查点阻断剂的联合疗法对小鼠B16-luc黑色素瘤切除后复发模型的肿瘤荧光成像；
图27为本发明中红细胞凝胶疫苗及其与免疫检查点阻断剂的联合疗法对小鼠B16-luc黑色素瘤切除后复发模型的治疗效果分析。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好地理解本发明并能予以实施，但所举实施例不作为对本发明的限定。
本发明各实施例中的材料来源为：
免疫佐剂CpG-1826(5'-TCC ATG ACG TTC CTG ACG TT-3'，tlrl-1826-5)购自Invivogen公司。小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子GM-CSF(315-03-50)购自PeproTech公司。FITC荧光标记的卵清白蛋白(FITC-OVA)购自于索莱宝公司。Cy5.5标记的CpG由上海生工有限公司合成和纯化。小鼠乳腺癌细胞4T1购自美国模式菌种保藏中心(简称ATCC)。表达OVA的B16细胞(B16-OVA)受赠于苏州大学刘海燕博士。荧光素酶标记的黑色B16-luc细胞受赠于苏州大学朱文俊博士。4T1于添加有10％胎牛血清、100U/ml青霉素和100U/ml的链霉素的Roswell Park Memorial Institute培养基中培养。B16-OVA及B16-luc于添加有10％胎牛血清、100U/ml青霉素和100U/ml的链霉素的DMEM高糖培养基中培养。
6-10周龄的BALB/c和C57BL/6小鼠购自常州卡文斯实验动物有限公司。小鼠按照中国科学院生化与细胞所实验动物管理委员会(IACUC)的指导操作方法进行处理。
PD-1抗体(Anti-PD-1)购自Biox cell公司，(抗体编号为BE0033-2-5MG)。
实施例1：红细胞凝胶的合成和表征
(1)从生物体静脉迅速取出200μL血液；
(2)立即将步骤(1)得到的新鲜血液注入无菌的模具中，在室温中放置10min；
(3)将步骤(2)中初步凝结的血液转移至无菌的真空干燥箱中，于37℃条件下，温和干燥，得到红细胞凝胶，见图1；
(4)使用流变仪证明步骤(3)所得凝胶的流变学特性，证明本发明的红细胞凝胶具有良好机械性能(图2)；
(5)使用扫描电子显微镜(Scanning Electron Microscope，SEM)对红细胞凝胶进行微观成像(图3)，证明红细胞凝胶具有规整的内部结构；
(6)记录红细胞凝胶载体在体内外的降解情况，图4可见红细胞凝胶在中性PBS溶液中，缓慢降解。图5可见红细胞凝胶在小鼠植入体内的前三天降解缓慢，约15天左右时降解完全(图6)，证明了红细胞凝胶具有优良的生物可降解性和生物相容性。
(7)为进一步研究红细胞凝胶体内降解过程，于红细胞凝胶植入后的第0、1、3、5、7天，将其取出，称重和拍照。图7显示红细胞凝胶的质量逐渐减少，同时外观形貌也呈现减小趋势(图8)。并用SEM对血凝胶的内部降解行为进行直接分析，从图9中可以看出，红细胞凝胶随着时间的变化逐渐被白细胞吞噬。
实施例2：红细胞凝胶的免疫刺激和免疫细胞招募作用
(1)C57BL/6J小鼠经2.5％异氟烷麻醉后，将实施例(1)中制备的红细胞凝胶植入到小鼠皮下；
(2)将植入体内0、1、3、7天的红细胞凝胶同时取出，分别包埋在石蜡中进行HE组织切片和包埋在OCT胶中进行荧光染色分析。可见本发明的红细胞凝胶具有免疫细胞招募作用(图10)，大量白细胞由红细胞凝胶边缘向内部浸润(图11)，白细胞的荧光信号从红细胞凝胶边缘向内部逐渐增强(图12)，整体荧光强度随着时间增加而增强(图13)；
(3)进一步运用流式细胞术分析红细胞凝胶招募的免疫细胞及其亚群(图14)。结果显示，红细胞凝胶植入体内后招募了大量白细胞，包括巨噬细胞、树突状细胞、T细胞、B细胞及NK细胞等。
实施例3：红细胞凝胶的药物缓释效果分析
(1)分别将Cy5.5-CpG-OND和FITC-OVA放入实施例1步骤(2)相应模具中，按实施例1中的步骤，与新鲜离体血液混合后，温和干燥制备载药红细胞凝胶；
(2)吸取载药红细胞凝胶析出的微量液体，通过酶标仪检测未装载的药物含量，计算红细胞凝胶的载药效率。红细胞凝胶装载OVA和CpG的效率可达95％和83％(图15)；
(3)将制备的载药红细胞凝胶进行OCT胶包埋，切片后，通过共聚焦显微镜观测载药情况，结果显示OVA能够被有效装载入红细胞凝胶中(图16)；
(4)将载药红细胞凝胶分别置于2mL 37℃磷酸盐缓冲溶液(Phosphate BufferedSolution，PBS)中，在相应时间点取出100μL并补充100μL等温PBS溶液，使用酶标仪检测其中的Cy5.5-CpG-OND和FITC-OVA的荧光含量，做出药物释放曲线。图17显示CpG-OND和FITC-OVA能够持续释放7天左右，具有缓释效果。
实施例4：红细胞凝胶疫苗的构建及体外细胞水平上的免疫刺激作用
(1)将5μg CpG-OND、0.05μg GM-CSF及5μg OVA放入实施例1步骤(2)相应的无菌模具中，按实施例1中的步骤，与新鲜离体血液混合后，温和干燥制备载药红细胞凝胶疫苗；
(2)为研究红细胞凝胶疫苗对树突状细胞(DC)的免疫刺激作用，1×106髓源性树突状细胞(DC)与PBS、空白红细胞凝胶、游离疫苗组或红细胞凝胶疫苗共培养。约20小时后，立即收集细胞培养上清液，于-80℃保存，待测。采用流式细胞术对DC的成熟水平进行分析，用FITC-CD11c、APC-CD80及PE-CD86对DC进行染色。上清液中的细胞因子浓度(TNF-α、IL-6和IL–12)根据Elisa标准操作手册进行检测。结果显示与对照组相比，从红细胞凝胶疫苗中释放的免疫调节药物可以有效地刺激DC细胞的成熟，促进DC细胞分泌大量免疫相关细胞因子(图18)；
(3)为研究红细胞凝胶疫苗对巨噬细胞的免疫刺激作用，5×105腹腔巨噬细胞与空白红细胞凝胶、游离疫苗组或红细胞凝胶疫苗共培养。约24小时后，立即收集细胞培养上清液，于-80℃保存，待测。采用流式细胞术对巨噬细胞的极化水平进行分析，用FITC-F4/80、PE-CD206、APC-CD80对巨噬细胞进行染色。上清液中的细胞因子浓度(TNF-α及IL-6)根据Elisa标准操作手册进行检测。结果显示红细胞凝胶疫苗能够促进巨噬细胞往M1促炎状态极化，使巨噬细胞分泌促炎细胞因子(图19)。
实施例5：红细胞凝胶疫苗的体内免疫刺激作用
(1)将10μg CpG-OND、0.1μg GM-CSF及10μg OVA放入实施例1步骤(2)相应的无菌模具中，按实施例1中的步骤，与新鲜离体血液混合后，温和干燥制备载药红细胞凝胶疫苗；
(2)C57BL/6J小鼠经2.5％异氟烷麻醉后，将实施例5步骤(1)中制备的红细胞凝胶植入到小鼠皮下；
(3)将植入体内0、1、3、7天的红细胞凝胶疫苗同时取出，分别包埋在石蜡中进行HE组织切片分析及包埋在OCT胶中进行荧光染色。可见载有免疫调节剂的红细胞凝胶疫苗，进一步扩大了免疫细胞招募作用(图20)，更多的免疫细胞浸润到血凝胶骨架的内部(图21)；
(4)运用流式细胞术进一步分析红细胞凝胶疫苗招募的免疫细胞变化及其表型。结果显示红细胞凝胶疫苗不仅显著增加招募的免疫细胞的数量，而且能够有效地激活招募的免疫细胞(图22)。
实施例6：红细胞凝胶疫苗及由其构建的抗肿瘤联合疗法在肿瘤预防方面的效果分析
(1)将100μg CpG-OND、1μg GM-CSF及100μg OVA放入实施例1步骤(2)相应的无菌模具中，按实施例1中的步骤，与新鲜离体血液混合后，经温和干燥制备载药红细胞凝胶疫苗；
(2)将C57BL/6J小鼠称重，随机分为6组，分别为PBS组、红细胞凝胶组、游离疫苗组、红细胞凝胶疫苗组、Anti-PD-1组和红细胞凝胶疫苗与Anti-PD-1联合治疗组。于第-7天，将步骤(1)中制备的红细胞凝胶疫苗及按实施例1中制备的空白红细胞凝胶埋植到小鼠皮下，PBS组则注射相同体积约200μl的中性PBS，游离疫苗组则将相同剂量的免疫调节剂和抗原(100μg CpG-OND、1μg GM-CSF及100μg OVA)用PBS稀释至200μl后，直接注射至小鼠皮下。于第5、7、9、11天分别给Anti-PD-1组和联合治疗组的小鼠尾静脉注射20μg PD-1抗体。3.5×105B16-OVA黑色素瘤细胞于第0天皮下注射于小鼠右侧。每两天测量肿瘤大小和小鼠体重。肿瘤体积计算公式为:短径2×长径×0.5。当肿瘤体积超过1.5cm3或肿瘤出现破裂或出血时对动物实施安乐死。结果显示红细胞凝胶疫苗具有显著的预防效果，有效抑制肿瘤生长。联合免疫检查点抑制剂PD-1抗体后，抗肿瘤效果明显增强，延长了小鼠的存活时间(图23)。
实施例7：红细胞凝胶疫苗及由其构建的抗肿瘤联合疗法在肿瘤治疗方面的研究
(1)建立C57BL/6J小鼠B16-OVA黑色素瘤模型
通过将B16-OVA肿瘤细胞(5×105/只)注射到C57BL/6J小鼠的背部一侧建立小鼠B16-OVA肿瘤模型。在肿瘤注射3天后，按实施例6步骤(2)中的方法对小鼠进行治疗，分别设置PBS组、红细胞凝胶组、游离疫苗组、红细胞凝胶疫苗组、Anti-PD-1组及红细胞凝胶疫苗与Anti-PD-1联合治疗组。随后对小鼠体重及肿瘤大小进行监测。由图24可看出，本发明的红细胞凝胶疫苗及由其构建的抗肿瘤联合疗法对B16-OVA黑色素瘤的生长也具有抑制作用，联合治疗效果最佳，肿瘤组织体积增长缓慢(图24)。
(2)建立Balb/c小鼠4T1乳腺癌模型
通过将4T1肿瘤细胞(1×106/只)注射到Balb/c小鼠的背部一侧建立小鼠4T1乳腺癌肿瘤模型。在肿瘤注射3天后，按实施例6步骤(2)中的方法对小鼠进行治疗，分别设置PBS组、红细胞凝胶组、游离疫苗组、红细胞凝胶疫苗组、Anti-PD-1组及红细胞凝胶疫苗与Anti-PD-1联合治疗组。随后对治疗效果进行监测，记录小鼠存活率。结果显示，本发明的红细胞凝胶疫苗及由其构建的抗肿瘤联合疗法在小鼠4T1肿瘤模型上同样展现了较好的抗肿瘤效果，小鼠的生存时间得到延长(图25)。
实施例8：红细胞凝胶疫苗及由其构建的抗肿瘤联合疗法在肿瘤术后复发模型上的治疗效果分析
(1)将B16-luc肿瘤细胞(5×105/只)注射到C57BL/6J小鼠的背部一侧建立小鼠B16-luc肿瘤模型。10天后对小鼠肿瘤进行手术完全移除。分别于皮下注射或植入PBS、游离疫苗、红细胞凝胶、红细胞凝胶疫苗。同时将1×106个B16-luc细胞注射到小鼠的背部另一侧。从手术切除后的第3天起，分别给予PD-1抗体组和联合治疗组的小鼠尾静脉注射20μg的PD-1抗体。此后，分别于第17、20、23天对治疗后的C57BL/6J黑鼠进行荧光成像评价。每隔两天进行肿瘤大小测量，肿瘤体积计算公式为:短径2×长径×0.5。当肿瘤体积超过1.5cm3或肿瘤出现破裂或出血时对动物实施安乐死。图26显示红细胞凝胶疫苗及由其构建的抗肿瘤联合疗法治疗的肿瘤组织在23天后荧光成像面积明显小于其它对照组，由此可见，本发明的抗肿瘤方式对黑色素瘤复发模型也可发挥抑制作用。此外，红细胞凝胶疫苗构建的联合治疗组的治疗效果优于单一的红细胞凝胶疫苗组，进一步证明本发明中免疫联合疗法的抗肿瘤优越性(图27)。
以上所述实施例仅是为充分说明本发明而所举的较佳的实施例，本发明的保护范围不限于此。本技术领域的技术人员在本发明基础上所作的等同替代或变换，均在本发明的保护范围之内。本发明的保护范围以权利要求书为准。

Claims (3)

1.一种红细胞凝胶递释系统，其特征在于，包括红细胞凝胶；以及，所述红细胞凝胶装载的活性成分；所述的红细胞凝胶递释系统通过将活性成分与新鲜血液混匀，在20~30oC放置5~15min初步凝结后，在35~40oC干燥至脱水50~90%制备得到；所述的红细胞凝胶递释系统的给药方式为埋植或直接填充病灶部位，所述的活性成分为CpG-OND、GM-CSF、OVA中的一种或多种。
2.根据权利要求1所述的红细胞凝胶递释系统，其特征在于，所述的红细胞凝胶递释系统的载药率为90~99%。
3.一种权利要求1~2任一项所述的红细胞凝胶递释系统的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：通过将活性成分与新鲜血液混匀，在20~30oC放置5~15min初步凝结后，在35~40oC干燥至脱水50~90%制备所述的红细胞凝胶递释系统，所述的活性成分为CpG-OND、GM-CSF、OVA中的一种或多种。
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