CN111172087A - 一种复合微生物除臭剂及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及除臭剂技术领域，尤其为一种复合微生物除臭剂及其应用，包括除臭剂和培养基，所述除臭剂包括乳酸菌（95%~98%）、芽孢杆菌（1%~2%）和酵母菌（0.5%~1%），所述培养基包括分离细菌培养基、分离放线菌培养基、分离酵母菌培养基、分离真菌培养基，微生物除臭剂中的乳酸菌为植物乳杆菌、菌种形态为杆状，不产生芽孢，所述芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌、菌种形态为杆状、产芽孢，无荚膜，所述酵母菌为酿酒酵母、菌种形态为球型、单细胞、无鞭毛，通过复合微生物除臭剂比普通的除臭剂有效脱臭时间长，从而可减少原料用量，应用时可将复合微生物除臭剂放置在臭气的源头上方，设备简单、原料用量少、无二次污染、投资和运行费用低，更适合工业化实际运用。
Description
技术领域
本发明涉及除臭剂技术领域，尤其涉及一种复合微生物除臭剂及其应用。
背景技术
随着规模化畜禽养殖业的快速发展,产生大量的畜禽废弃物,最主要的污染物是粪尿及其所产生的臭气氨、硫化氢、硫醇和甲硫醇等是养殖场臭气的主要成分,目前,畜禽养殖场脱除臭气采用的方法有3类①掩蔽和稀释扩散等物理法。②安装除臭设备。③除臭剂,如化学除臭剂、植物除臭剂或微生物除臭剂4,第一种虽简单,但是治标不治本的方法。第二种方法投资巨大,对于排放浓度较高的点源效果明显,而对于畜禽养殖场这样的低排放浓度的面源,不仅经济上无法承受,而且效果也并不理想。目前采用的除臭剂是直接喷洒于畜禽舍或粪便上,或添加在饲料或饮水中。饲喂方法简单,但造成养殖成本增大。喷洒除臭,喷洒的次数也必须达到一定的频率,否则上升的臭气又会扩散,因此必须有专人负责喷洒工作,或者安装自动喷洒设备。这势必增加运行费用,而且还将影响到养殖方式以及畜禽舍的养殖环境。这些因素使得目前养殖场的臭气问题无法得到根本性的解决，因此提出一种复合微生物除臭剂及其应用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种复合微生物除臭剂及其应用，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种复合微生物除臭剂及其应用，其特征在于，包括除臭剂和培养基，所述除臭剂包括乳酸菌（95%~98%）、芽孢杆菌（1%~2%）和酵母菌（0.5%~1%），所述培养基包括分离细菌培养基、分离放线菌培养基、分离酵母菌培养基、分离真菌培养基。
优选的，所述微生物除臭剂中的乳酸菌为植物乳杆菌、菌种形态为杆状，不产生芽孢，所述芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌、菌种形态为杆状、产芽孢，无荚膜，所述酵母菌为酿酒酵母、菌种形态为球型、单细胞、无鞭毛。
优选的，所述分离细菌培养基采用牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏3g/L，蛋白胨10g/L，NaCl 5g/L，琼脂20g/L，PH7.0~7.2，所述分离放线菌培养基采用20%土壤抽提液加2%琼脂。
优选的，所述分离酵母菌培养基采用麦芽汁琼脂培养基：麦芽汁（5~6°Be´糖度），加入2%琼脂。
优选的，所述分离真菌培养基采用PDA培养基：马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，琼脂20g/L，PH值自然。
优选的，包括以下制备步骤：
S1：将养猪场猪舍旁的表层土壤用无菌水稀释成土壤质量浓度为10-2的溶液，采用平板涂布法将上述溶液分别涂布在不同的固体分离培养基上，置于30℃恒温培养箱内培养，5d后，将分离平板中的菌落采用平板稀释分离法进一步纯化，将特征不同的菌落分别转移到相应的斜面培养基上培养后，保存备用；
S2：将所有分离得到的菌株，分别接种到相应的液体培养基中，置于220r/min摇床上30℃恒温培养3~7d后，在装有50g风干猪粪的1000mL搪瓷杯中，调节猪粪水分为50%左右，按10%（V/V）喷洒培养物，双层塑料膜密封，30℃恒温培养，分别在第3、6、9、12、15d后用感官法初步判定微生物的除臭效果，对有明显除臭能力的微生物，进一步进行筛选试验；
S3：将50g拌有5%米糠的风干猪粪放入1000mL搪瓷杯中，调节含水率到50%左右，121℃下消毒30min，按10%（V/V）喷洒培养物，用双层塑料膜密封后，置于30℃恒温室中发酵培养。每个菌株设2个处理，处理1：在发酵杯内放置一个装有20mL10%硼酸溶液的50mL小烧杯，用以吸收氨气；处理2：放置一个装有20mL10%锌铵络盐溶液的50mL小烧杯，用以吸收硫化氢，均以不接种作空白对照，每个处理设3个重复，培养过程中每隔5d，取出小烧杯检测氨气和硫化氢的产生量，用以比较菌株抑制臭气产生的效果；
S4：将筛选出的具有明显除臭能力的微生物菌种经斜面活化后，分别接入相应的装有500mL液体培养基的1000mL三角瓶中，置于220r/min的摇床上，在30℃恒温条件下培养至对数生长期(3~7d)。8000rmin下离心25min收获菌体细胞，并将其全部转移悬浮到120mL基础培养基中，混合备用；
S5：取陶瓷颗粒，蒸馏水洗涤数次后于110℃恒温干燥2h，备用。将米糠和陶瓷颗粒按1：20混合均匀，调节含水率至45%~50%，121℃下消毒30min，冷却后与上述混合菌液充分拌匀，即得复合微生物吸附除臭剂。
优选的，包括以下步骤：
S1：用细铁丝编做长、宽、高均为45cm×45cm×5cm的盘18个，底部铺普通白纸，将复合微生物吸附除臭剂摊铺在盘中的白纸上，平均每个盘1kg左右；
S2：将上述6个安装有复合微生物吸附除臭剂的盘放置在猪舍内，猪舍内有6个猪圈，猪圈大小为3.8m×3.8m，内有3月龄生猪6头。每个猪圈的天花板上各吊放一个，共安放6个，将其余12个安装有复合微生物吸附除臭剂的盘均匀放置在猪场堆肥上方，从堆肥大棚顶部吊下安装前测定NH3、H2S含量，并用感官判别恶臭程度，作为对照，5d后再次测定，考察除臭效果；
S3：采用CD-1大气采样器，吸收液10mL(0.005mol/L硫酸)，流量1L/min，采气30min后立即分析测定，氨气采用次氯酸钠一水杨酸分光光度法测定，硫化氢采用聚乙烯醇磷酸铵一亚甲基蓝比色法测定，臭气浓度指恶臭气体(异味)用无臭空气稀释，稀释到刚好无臭时，所需的稀释倍数。无臭空气为经过活性炭过滤的空气，无臭袋为3L聚酯塑料袋，取样后到实验室内采用注射法稀释臭气，使用稀释倍数为3，10，30，100，1000，3000，10000的气袋微生物量(DCW)采用烘干称重法测定。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明中，通过复合微生物除臭剂比普通的除臭剂有效脱臭时间长，从而可减少原料用量，应用时可将复合微生物除臭剂放置在臭气的源头上方，设备简单、原料用量少、无二次污染、投资和运行费用低，更适合工业化实际运用。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例，基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明提供一种技术方案：
一种复合微生物除臭剂及其应用，包括除臭剂和培养基，除臭剂包括乳酸菌（95%~98%）、芽孢杆菌（1%~2%）和酵母菌（0.5%~1%），培养基包括分离细菌培养基、分离放线菌培养基、分离酵母菌培养基、分离真菌培养基。
微生物除臭剂中的乳酸菌为植物乳杆菌、菌种形态为杆状，不产生芽孢，芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌、菌种形态为杆状、产芽孢，无荚膜，所述酵母菌为酿酒酵母、菌种形态为球型、单细胞、无鞭毛。
分离细菌培养基采用牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏3g/L，蛋白胨10g/L，NaCl 5g/L，琼脂20g/L，PH7.0~7.2，分离放线菌培养基采用20%土壤抽提液加2%琼脂。
分离酵母菌培养基采用麦芽汁琼脂培养基：麦芽汁（5~6°Be´糖度），加入2%琼脂。
分离真菌培养基采用PDA培养基：马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，琼脂20g/L，PH值自然。
通过复合微生物除臭剂比普通的除臭剂有效脱臭时间长，从而可减少原料用量，应用时可将复合微生物除臭剂放置在臭气的源头上方，设备简单、原料用量少、无二次污染、投资和运行费用低，更适合工业化实际运用。
实施例：除臭剂包括乳酸菌（95%~98%）、芽孢杆菌（1%~2%）和酵母菌（0.5%~1%），培养基包括分离细菌培养基、分离放线菌培养基、分离酵母菌培养基、分离真菌培养基，微生物除臭剂中的乳酸菌为植物乳杆菌、菌种形态为杆状，不产生芽孢，芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌、菌种形态为杆状、产芽孢，无荚膜，所述酵母菌为酿酒酵母、菌种形态为球型、单细胞、无鞭毛，分离细菌培养基采用牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏3g/L，蛋白胨10g/L，NaCl 5g/L，琼脂20g/L，PH7.0~7.2，分离放线菌培养基采用20%土壤抽提液加2%琼脂，分离酵母菌培养基采用麦芽汁琼脂培养基：麦芽汁（5~6°Be´糖度），加入2%琼脂，分离真菌培养基采用PDA培养基：马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，琼脂20g/L，PH值自然，将养猪场猪舍旁的表层土壤用无菌水稀释成土壤质量浓度为10-2的溶液，采用平板涂布法将上述溶液分别涂布在不同的固体分离培养基上，置于30℃恒温培养箱内培养，5d后，将分离平板中的菌落采用平板稀释分离法进一步纯化，将特征不同的菌落分别转移到相应的斜面培养基上培养后，保存备用；将所有分离得到的菌株，分别接种到相应的液体培养基中，置于220r/min摇床上30℃恒温培养3~7d后，在装有50g风干猪粪的1000mL搪瓷杯中，调节猪粪水分为50%左右，按10%（V/V）喷洒培养物，双层塑料膜密封，30℃恒温培养，分别在第3、6、9、12、15d后用感官法初步判定微生物的除臭效果，对有明显除臭能力的微生物，进一步进行筛选试验；将50g拌有5%米糠的风干猪粪放入1000mL搪瓷杯中，调节含水率到50%左右，121℃下消毒30min，按10%（V/V）喷洒培养物，用双层塑料膜密封后，置于30℃恒温室中发酵培养。每个菌株设2个处理，处理1：在发酵杯内放置一个装有20mL10%硼酸溶液的50mL小烧杯，用以吸收氨气；处理2：放置一个装有20mL10%锌铵络盐溶液的50mL小烧杯，用以吸收硫化氢，均以不接种作空白对照，每个处理设3个重复，培养过程中每隔5d，取出小烧杯检测氨气和硫化氢的产生量，用以比较菌株抑制臭气产生的效果；将筛选出的具有明显除臭能力的微生物菌种经斜面活化后，分别接入相应的装有500mL液体培养基的1000mL三角瓶中，置于220r/min的摇床上，在30℃恒温条件下培养至对数生长期(3~7d)。8000rmin下离心25min收获菌体细胞，并将其全部转移悬浮到120mL基础培养基中，混合备用；取陶瓷颗粒，蒸馏水洗涤数次后于110℃恒温干燥2h，备用。将米糠和陶瓷颗粒按1：20混合均匀，调节含水率至45%~50%，121℃下消毒30min，冷却后与上述混合菌液充分拌匀，即得复合微生物吸附除臭剂。
用细铁丝编做长、宽、高均为45cm×45cm×5cm的盘18个，底部铺普通白纸，将复合微生物吸附除臭剂摊铺在盘中的白纸上，平均每个盘1kg左右；将上述6个安装有复合微生物吸附除臭剂的盘放置在猪舍内，猪舍内有6个猪圈，猪圈大小为3.8m×3.8m，内有3月龄生猪6头。每个猪圈的天花板上各吊放一个，共安放6个，将其余12个安装有复合微生物吸附除臭剂的盘均匀放置在猪场堆肥上方，从堆肥大棚顶部吊下安装前测定NH3、H2S含量，并用感官判别恶臭程度，作为对照，5d后再次测定，考察除臭效果；采用CD-1大气采样器，吸收液10mL(0.005mol/L硫酸)，流量1L/min，采气30min后立即分析测定，氨气采用次氯酸钠一水杨酸分光光度法测定，硫化氢采用聚乙烯醇磷酸铵一亚甲基蓝比色法测定，臭气浓度指恶臭气体(异味)用无臭空气稀释，稀释到刚好无臭时，所需的稀释倍数。无臭空气为经过活性炭过滤的空气，无臭袋为3L聚酯塑料袋，取样后到实验室内采用注射法稀释臭气，使用稀释倍数为3，10，30，100，1000，3000，10000的气袋微生物量(DCW)采用烘干称重法测定。
通过复合微生物除臭剂比普通的除臭剂有效脱臭时间长，从而可减少原料用量，应用时可将复合微生物除臭剂放置在臭气的源头上方，设备简单、原料用量少、无二次污染、投资和运行费用低，更适合工业化实际运用。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (7)
1.一种复合微生物除臭剂，其特征在于，包括除臭剂和培养基，所述除臭剂包括乳酸菌（95%~98%）、芽孢杆菌（1%~2%）和酵母菌（0.5%~1%），所述培养基包括分离细菌培养基、分离放线菌培养基、分离酵母菌培养基、分离真菌培养基。
2.根据权利要求1所述的一种复合微生物除臭剂，其特征在于，所述微生物除臭剂中的乳酸菌为植物乳杆菌、菌种形态为杆状，不产生芽孢，所述芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌、菌种形态为杆状、产芽孢，无荚膜，所述酵母菌为酿酒酵母、菌种形态为球型、单细胞、无鞭毛。
3.根据权利要求1所述的一种复合微生物除臭剂，其特征在于，所述分离细菌培养基采用牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏3g/L，蛋白胨10g/L，NaCl 5g/L，琼脂20g/L，PH7.0~7.2，所述分离放线菌培养基采用20%土壤抽提液加2%琼脂。
4.根据权利要求1所述的一种复合微生物除臭剂，其特征在于，所述分离酵母菌培养基采用麦芽汁琼脂培养基：麦芽汁（5~6°Be´糖度），加入2%琼脂。
5.根据权利要求1所述的一种复合微生物除臭剂，其特征在于，所述分离真菌培养基采用PDA培养基：马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，琼脂20g/L，PH值自然。
6.根据权利要求1所述的一种复合微生物除臭剂，其特征在于，包括以下制备步骤：
S1：将养猪场猪舍旁的表层土壤用无菌水稀释成土壤质量浓度为10-2的溶液，采用平板涂布法将上述溶液分别涂布在不同的固体分离培养基上，置于30℃恒温培养箱内培养，5d后，将分离平板中的菌落采用平板稀释分离法进一步纯化，将特征不同的菌落分别转移到相应的斜面培养基上培养后，保存备用；
S2：将所有分离得到的菌株，分别接种到相应的液体培养基中，置于220r/min摇床上30℃恒温培养3~7d后，在装有50g风干猪粪的1000mL搪瓷杯中，调节猪粪水分为50%左右，按10%（V/V）喷洒培养物，双层塑料膜密封，30℃恒温培养，分别在第3、6、9、12、15d后用感官法初步判定微生物的除臭效果，对有明显除臭能力的微生物，进一步进行筛选试验；
S3：将50g拌有5%米糠的风干猪粪放入1000mL搪瓷杯中，调节含水率到50%左右，121℃下消毒30min，按10%（V/V）喷洒培养物，用双层塑料膜密封后，置于30℃恒温室中发酵培养。每个菌株设2个处理，处理1：在发酵杯内放置一个装有20mL10%硼酸溶液的50mL小烧杯，用以吸收氨气；处理2：放置一个装有20mL10%锌铵络盐溶液的50mL小烧杯，用以吸收硫化氢，均以不接种作空白对照，每个处理设3个重复，培养过程中每隔5d，取出小烧杯检测氨气和硫化氢的产生量，用以比较菌株抑制臭气产生的效果；
S4：将筛选出的具有明显除臭能力的微生物菌种经斜面活化后，分别接入相应的装有500mL液体培养基的1000mL三角瓶中，置于220r/min的摇床上，在30℃恒温条件下培养至对数生长期(3~7d)。8000rmin下离心25min收获菌体细胞，并将其全部转移悬浮到120mL基础培养基中，混合备用；
S5：取陶瓷颗粒，蒸馏水洗涤数次后于110℃恒温干燥2h，备用。将米糠和陶瓷颗粒按1：20混合均匀，调节含水率至45%~50%，121℃下消毒30min，冷却后与上述混合菌液充分拌匀，即得复合微生物吸附除臭剂。
7.根据权利要求1所述的一种复合微生物除臭剂的应用，其特征在于，包括以下步骤：
S1：用细铁丝编做长、宽、高均为45cm×45cm×5cm的盘18个，底部铺普通白纸，将复合微生物吸附除臭剂摊铺在盘中的白纸上，平均每个盘1kg左右；
S2：将上述6个安装有复合微生物吸附除臭剂的盘放置在猪舍内，猪舍内有6个猪圈，猪圈大小为3.8m×3.8m，内有3月龄生猪6头。每个猪圈的天花板上各吊放一个，共安放6个，将其余12个安装有复合微生物吸附除臭剂的盘均匀放置在猪场堆肥上方，从堆肥大棚顶部吊下安装前测定NH3、H2S含量，并用感官判别恶臭程度，作为对照，5d后再次测定，考察除臭效果；
S3：采用CD-1大气采样器，吸收液10mL(0.005mol/L硫酸)，流量1L/min，采气30min后立即分析测定，氨气采用次氯酸钠一水杨酸分光光度法测定，硫化氢采用聚乙烯醇磷酸铵一亚甲基蓝比色法测定，臭气浓度指恶臭气体(异味)用无臭空气稀释，稀释到刚好无臭时，所需的稀释倍数。无臭空气为经过活性炭过滤的空气，无臭袋为3L聚酯塑料袋，取样后到实验室内采用注射法稀释臭气，使用稀释倍数为3，10，30，100，1000，3000，10000的气袋微生物量(DCW)采用烘干称重法测定。
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