CN111171170A - 一种绿萝花多糖的提取方法 - Google Patents
一种绿萝花多糖的提取方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种绿萝花多糖的提取方法，该方法先将绿萝花浸泡于氯化钠溶液中，再进行超声处理后置于透析袋中处理，然后倾倒出透析袋内的液体，再进行蒸馏处理，然后加入乙醇溶液进行多次提纯，得绿萝花多糖。本发明操作方法简单，利用氯化钠溶液破碎绿萝花的细胞壁，使细胞内的内容物溶解出来；利用透析袋快速浓缩过滤液，以获得含杂质较少的液体；利用乙醇溶液多次提纯，以获得高纯度的绿萝花多糖。
Description
技术领域
本发明涉及多糖提取领域。更具体地说，本发明涉及一种绿萝花多糖的提取方法。
背景技术
绿萝花又名黄金葛、藤芋、石柑子、马蹄金，为天南星科植物，属西藏特有珍贵植物。产于西藏寒冷地带，喜马拉雅山脉，每年七至八月开花，花期三十天左右，性微寒。绿萝花多糖具有抗氧化、保湿的功效，现有的绿萝花多糖提取方法一般是直接用水提取，再用乙醇溶液纯化，得到的绿萝花多糖杂质含量多，且提取效率低。
发明内容
本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。
本发明的一个目的是提供一种绿萝花多糖的提取方法，该方法先将绿萝花浸泡于氯化钠溶液中，再进行超声处理后置于透析袋中处理，然后倾倒出透析袋内的液体，再进行蒸馏处理，然后加入乙醇溶液进行多次提纯，得绿萝花多糖。本发明操作方法简单，利用氯化钠溶液破碎绿萝花的细胞壁，使细胞内的内容物溶解出来；利用透析袋快速浓缩过滤液，以获得含杂质较少的液体；利用乙醇溶液多次提纯，以获得高纯度的绿萝花多糖。
为了实现根据本发明的目的和其它优点，提供了一种绿萝花多糖的提取方法，包括以下步骤：
S1、取绿萝花清洗、粉碎，得粉碎物，将粉碎物浸泡于质量分数为20％的氯化钠溶液中2～4h，得第一混合液，其中，绿萝花与质量分数为20％的氯化钠溶液的重量比为1:3；
S2、将第一混合液置于-20℃下冷冻2～4h，再置于20～40℃和25～40kHz下超声波处理40～80min，再加热至85～100℃保持50～80min后过滤，得过滤液；
S3、将过滤液置于截留分子量为3500Da的透析袋中，并将封口后的透析袋置于质量分数为80％的聚乙二醇溶液中放置60～80min，然后取出透析袋，再倾倒出透析袋内的液体，得第二混合液，然后向第二混合液中加入瓷片，再置于50～60℃下蒸馏30～50min后干燥，得浓缩物，所述第二混合液与瓷片的重量比为5:1；
S4、向浓缩物中加入质量分数为60％的乙醇溶液，然后搅拌20～30min，再过滤，得第一滤渣，向第一滤渣中加入质量分数为80％的乙醇溶液，然后搅拌20～30min，再过滤，得第二滤渣，向第二滤渣中加入质量分数为90％的乙醇溶液，然后搅拌20～30min，再过滤，得第三滤渣，将第三滤渣干燥，得绿萝花多糖，其中，浓缩液与质量分数为60％的无水乙醇溶液、质量分数为80％的无水乙醇溶液、质量分数为90％的无水乙醇溶液的体积比为1:3:3:3。
优选的是，所述的绿萝花多糖的提取方法，步骤S1中绿萝花清洗过程为：采用杀菌水浸泡10～20min后，再用无菌蒸馏水进行冲洗，其中，杀菌水的制备方法如下：取石竹叶清洗干净后，覆盖湿棉布并置于25～40℃下放置2～4h，再撤去湿棉布，然后置于水中煮沸2～4h，过滤，取滤下物，得杀菌水，其中，湿棉布在覆盖竹叶之前浸没于淘米水中8～10min后，取出拧干至不滴水，其中，石竹叶与水的重量比为1:4。
优选的是，所述的绿萝花多糖的提取方法，步骤S1中绿萝花粉碎过程为：向清洗后的绿萝花置于60～70℃和8～10mmHg的真空度下烘烤20～30min，再置于0～8℃的无水乙醇中并搅拌、过滤，取滤上物，得粉碎物，其中，绿萝花与黄油的重量比为5:2。
优选的是，所述的绿萝花多糖的提取方法，步骤S1粉碎物浸泡于质量分数为20％的氯化钠溶液之前，还需向粉碎物中加入乙醇-乙醚，并搅拌均匀，再置于50～60℃下水浴加热1～3h，过滤，取滤上物，其中，乙醇-乙醚中无水乙醇和无水乙醚的体积比为1:2，粉碎物与乙醇-乙醚的重量比为1:3。
优选的是，所述的绿萝花多糖的提取方法，步骤S4中浓缩液在加入无水乙醇之前，还需滴加1mol/L盐酸溶液调节浓缩液的pH至3，并置于0～10℃下以200～400r/min的速度搅拌18～24h，然后离心，取滤下物。
优选的是，所述的绿萝花多糖的提取方法，步骤S4中第三滤渣在干燥之前还需进行清洗，清洗过程具体为：向第三滤渣中加入丙酮，再置于4℃下以2000～4000r/min的速度离心20～40min，过滤，得第一离心物，向第一离心物加入无水乙醚，再置于4℃下以2000～4000r/min的速度离心20～40min，过滤，得第二离心物，向第三离心物加入无水乙醇，再置于4℃下以2000～4000r/min的速度离心20～40min，过滤，得第三离心物，将第三离心物干燥，得绿萝花多糖，其中，第三滤渣与丙酮、无水乙醚、无水乙醇的重量比为1:4:4:4。
本发明至少包括以下有益效果：
1、本发明中将粉碎后的绿萝花浸泡于质量分数为20％的氯化钠溶液中2～4h，从而将绿萝花细胞置于一个盐环境中，使绿萝花的细胞失水二破裂，以便于细胞内容物流出，获得的第一混合液中溶解的细胞内容物多，以便于后续的提取纯化操作。
2、本发明中将过滤液置于透析袋中，再将透析袋置于聚乙二醇溶液，从而除去了过滤液中的大部分氯化钠，也快速使水分子从透析袋内流到透析袋外，以便于快速浓缩过滤液，且浓缩过程损耗小，操作简单。
3、本发明利用乙醇溶液对浓缩物进行多次提取纯化，以使获得高纯度的绿萝花多糖。
4、本发明中还利用杀菌水清洗绿萝花，以便于减少绿萝花在提纯的过程中滋生细菌，细菌消耗大量的糖类，从而降低获得的绿萝花多糖的产量和纯度。
本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
需要说明的是，下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
实施例1：
绿萝花多糖的提取方法，包括以下步骤：
S1、取绿萝花清洗、粉碎，得粉碎物，将粉碎物浸泡于质量分数为20％的氯化钠溶液中2h，得第一混合液，其中，绿萝花与质量分数为20％的氯化钠溶液的重量比为1:3；
S2、将第一混合液置于-20℃下冷冻2h，再置于20℃和25kHz下超声波处理40min，再加热至85℃保持50min后过滤，得过滤液；
S3、将过滤液置于截留分子量为3500Da的透析袋中，并将封口后的透析袋置于质量分数为80％的聚乙二醇溶液中放置60min，然后取出透析袋，再倾倒出透析袋内的液体，得第二混合液，然后向第二混合液中加入瓷片，再置于50℃下蒸馏30min后干燥，得浓缩物，所述第二混合液与瓷片的重量比为5:1；
S4、向浓缩物中加入质量分数为60％的乙醇溶液，然后搅拌20min，再过滤，得第一滤渣，向第一滤渣中加入质量分数为80％的乙醇溶液，然后搅拌20min，再过滤，得第二滤渣，向第二滤渣中加入质量分数为90％的乙醇溶液，然后搅拌20min，再过滤，得第三滤渣，将第三滤渣干燥，得绿萝花多糖，其中，浓缩液与质量分数为60％的无水乙醇溶液、质量分数为80％的无水乙醇溶液、质量分数为90％的无水乙醇溶液的体积比为1:3:3:3。
实施例2：
绿萝花多糖的提取方法，包括以下步骤：
S1、取绿萝花清洗、粉碎，得粉碎物，将粉碎物浸泡于质量分数为20％的氯化钠溶液中4h，得第一混合液，其中，绿萝花与质量分数为20％的氯化钠溶液的重量比为1:3；
S2、将第一混合液置于-20℃下冷冻4h，再置于40℃和40kHz下超声波处理80min，再加热至100℃保持80min后过滤，得过滤液；
S3、将过滤液置于透截留分子量为3500Da的透析袋中，并将封口后的透析袋置于质量分数为80％的聚乙二醇溶液中放置80min，然后取出透析袋，再倾倒出透析袋内的液体，得第二混合液，然后向第二混合液中加入瓷片，再置于60℃下蒸馏50min后干燥，得浓缩物，所述第二混合液与瓷片的重量比为5:1；
S4、向浓缩物中加入质量分数为60％的乙醇溶液，然后搅拌30min，再过滤，得第一滤渣，向第一滤渣中加入质量分数为80％的乙醇溶液，然后搅拌30min，再过滤，得第二滤渣，向第二滤渣中加入质量分数为90％的乙醇溶液，然后搅拌30min，再过滤，得第三滤渣，将第三滤渣干燥，得绿萝花多糖，其中，浓缩液与质量分数为60％的无水乙醇溶液、质量分数为80％的无水乙醇溶液、质量分数为90％的无水乙醇溶液的体积比为1:3:3:3。
实施例3：
绿萝花多糖的提取方法，包括以下步骤：
S1、取绿萝花清洗、粉碎，得粉碎物，将粉碎物浸泡于质量分数为20％的氯化钠溶液中3h，得第一混合液，其中，绿萝花与质量分数为20％的氯化钠溶液的重量比为1:3；
S2、将第一混合液置于-20℃下冷冻3h，再置于30℃和32kHz下超声波处理60min，再加热至90℃保持65min后过滤，得过滤液；
S3、将过滤液置于截留分子量为3500Da的透析袋中，并将封口后的透析袋置于质量分数为80％的聚乙二醇溶液中放置70min，然后取出透析袋，再倾倒出透析袋内的液体，得第二混合液，然后向第二混合液中加入瓷片，再置于55℃下蒸馏40min后干燥，得浓缩物，所述第二混合液与瓷片的重量比为5:1；
S4、向浓缩物中加入质量分数为60％的乙醇溶液，然后搅拌25min，再过滤，得第一滤渣，向第一滤渣中加入质量分数为80％的乙醇溶液，然后搅拌25min，再过滤，得第二滤渣，向第二滤渣中加入质量分数为90％的乙醇溶液，然后搅拌25min，再过滤，得第三滤渣，将第三滤渣干燥，得绿萝花多糖，其中，浓缩液与质量分数为60％的无水乙醇溶液、质量分数为80％的无水乙醇溶液、质量分数为90％的无水乙醇溶液的体积比为1:3:3:3。
实施例4：
绿萝花多糖的提取方法，包括以下步骤：
S1、取绿萝花采用杀菌水浸泡15min后，再用无菌蒸馏水进行冲洗、粉碎，得粉碎物，将粉碎物浸泡于质量分数为20％的氯化钠溶液中3h，得第一混合液，其中，绿萝花与质量分数为20％的氯化钠溶液的重量比为1:3；杀菌水的制备方法如下：取石竹叶清洗干净后，覆盖湿棉布并置于28℃下放置3h，再撤去湿棉布，然后置于水中煮沸3h，过滤，取滤下物，得杀菌水，其中，湿棉布在覆盖竹叶之前浸没于淘米水中9min后，取出拧干至不滴水，其中，石竹叶与水的重量比为1:4；
S2、将第一混合液置于-20℃下冷冻3h，再置于30℃和32kHz下超声波处理60min，再加热至90℃保持65min后过滤，得过滤液；
S3、将过滤液置于透截留分子量为3500Da的透析袋中，并将封口后的透析袋置于质量分数为80％的聚乙二醇溶液中放置70min，然后取出透析袋，再倾倒出透析袋内的液体，得第二混合液，然后向第二混合液中加入瓷片，再置于55℃下蒸馏40min后干燥，得浓缩物，所述第二混合液与瓷片的重量比为5:1；
S4、向浓缩物中加入质量分数为60％的乙醇溶液，然后搅拌25min，再过滤，得第一滤渣，向第一滤渣中加入质量分数为80％的乙醇溶液，然后搅拌25min，再过滤，得第二滤渣，向第二滤渣中加入质量分数为90％的乙醇溶液，然后搅拌25min，再过滤，得第三滤渣，将第三滤渣干燥，得绿萝花多糖，其中，浓缩液与质量分数为60％的无水乙醇溶液、质量分数为80％的无水乙醇溶液、质量分数为90％的无水乙醇溶液的体积比为1:3:3:3。
实施例5：
绿萝花多糖的提取方法，包括以下步骤：
S1、取绿萝花采用杀菌水浸泡10～20min后，再用无菌蒸馏水进行冲洗，将冲洗后的绿萝花置于65℃和9mmHg的真空度下烘烤25min，再置于4℃的无水乙醇中并搅拌、过滤，取滤上物，得粉碎物，将粉碎物浸泡于质量分数为20％的氯化钠溶液中3h，得第一混合液，其中，绿萝花与质量分数为20％的氯化钠溶液的重量比为1:3；杀菌水的制备方法如下：取石竹叶清洗干净后，覆盖湿棉布并置于28℃下放置3h，再撤去湿棉布，然后置于水中煮沸3h，过滤，取滤下物，得杀菌水，湿棉布在覆盖竹叶之前浸没于淘米水中9min后，取出拧干至不滴水，石竹叶与水的重量比为1:4；绿萝花与黄油的重量比为5:2；
S2、将第一混合液置于-20℃下冷冻3h，再置于30℃和32kHz下超声波处理60min，再加热至90℃保持65min后过滤，得过滤液；
S3、将过滤液置于截留分子量为3500Da的透析袋中，并将封口后的透析袋置于质量分数为80％的聚乙二醇溶液中放置70min，然后取出透析袋，再倾倒出透析袋内的液体，得第二混合液，然后向第二混合液中加入瓷片，再置于55℃下蒸馏40min后干燥，得浓缩物，所述第二混合液与瓷片的重量比为5:1；
S4、向浓缩物中加入质量分数为60％的乙醇溶液，然后搅拌25min，再过滤，得第一滤渣，向第一滤渣中加入质量分数为80％的乙醇溶液，然后搅拌25min，再过滤，得第二滤渣，向第二滤渣中加入质量分数为90％的乙醇溶液，然后搅拌25min，再过滤，得第三滤渣，将第三滤渣干燥，得绿萝花多糖，其中，浓缩液与质量分数为60％的无水乙醇溶液、质量分数为80％的无水乙醇溶液、质量分数为90％的无水乙醇溶液的体积比为1:3:3:3。
实施例6：
绿萝花多糖的提取方法，包括以下步骤：
S1、取绿萝花采用杀菌水浸泡10～20min后，再用无菌蒸馏水进行冲洗，将冲洗后的绿萝花置于65℃和9mmHg的真空度下烘烤25min，再置于4℃的无水乙醇中并搅拌、过滤，取滤上物，得粉碎物，向粉碎物加入乙醇-乙醚，并搅拌均匀，再置于55℃下水浴加热1.5h，过滤，取滤上物，再将滤上物浸泡于质量分数为20％的氯化钠溶液中3h，得第一混合液，其中，绿萝花与质量分数为20％的氯化钠溶液的重量比为1:3；杀菌水的制备方法如下：取石竹叶清洗干净后，覆盖湿棉布并置于28℃下放置3h，再撤去湿棉布，然后置于水中煮沸3h，过滤，取滤下物，得杀菌水，湿棉布在覆盖竹叶之前浸没于淘米水中9min后，取出拧干至不滴水，石竹叶与水的重量比为1:4；绿萝花与黄油的重量比为5:2；乙醇-乙醚中无水乙醇和无水乙醚的体积比为1:2，粉碎物与乙醇-乙醚的重量比为1:3；
S2、将第一混合液置于-20℃下冷冻3h，再置于30℃和32kHz下超声波处理60min，再加热至90℃保持65min后过滤，得过滤液；
S3、将过滤液置于截留分子量为3500Da的透析袋中，并将封口后的透析袋置于质量分数为80％的聚乙二醇溶液中放置70min，然后取出透析袋，再倾倒出透析袋内的液体，得第二混合液，然后向第二混合液中加入瓷片，再置于55℃下蒸馏40min后干燥，得浓缩物，所述第二混合液与瓷片的重量比为5:1；
S4、向浓缩物中加入质量分数为60％的乙醇溶液，然后搅拌25min，再过滤，得第一滤渣，向第一滤渣中加入质量分数为80％的乙醇溶液，然后搅拌25min，再过滤，得第二滤渣，向第二滤渣中加入质量分数为90％的乙醇溶液，然后搅拌25min，再过滤，得第三滤渣，将第三滤渣干燥，得绿萝花多糖，其中，浓缩液与质量分数为60％的无水乙醇溶液、质量分数为80％的无水乙醇溶液、质量分数为90％的无水乙醇溶液的体积比为1:3:3:3。
实施例7：
绿萝花多糖的提取方法，包括以下步骤：
S1、取绿萝花采用杀菌水浸泡10～20min后，再用无菌蒸馏水进行冲洗，将冲洗后的绿萝花置于65℃和9mmHg的真空度下烘烤25min，再置于4℃的无水乙醇中并搅拌、过滤，取滤上物，得粉碎物，向粉碎物加入乙醇-乙醚，并搅拌均匀，再置于55℃下水浴加热1.5h，过滤，取滤上物，再将滤上物浸泡于质量分数为20％的氯化钠溶液中3h，得第一混合液，其中，绿萝花与质量分数为20％的氯化钠溶液的重量比为1:3；杀菌水的制备方法如下：取石竹叶清洗干净后，覆盖湿棉布并置于28℃下放置3h，再撤去湿棉布，然后置于水中煮沸3h，过滤，取滤下物，得杀菌水，湿棉布在覆盖竹叶之前浸没于淘米水中9min后，取出拧干至不滴水，石竹叶与水的重量比为1:4；绿萝花与黄油的重量比为5:2；乙醇-乙醚中无水乙醇和无水乙醚的体积比为1:2，粉碎物与乙醇-乙醚的重量比为1:3；
S2、将第一混合液置于-20℃下冷冻3h，再置于30℃和32kHz下超声波处理60min，再加热至90℃保持65min后过滤，得过滤液；
S3、将过滤液置于截留分子量为3500Da的透析袋中，并将封口后的透析袋置于质量分数为80％的聚乙二醇溶液中放置70min，然后取出透析袋，再倾倒出透析袋内的液体，得第二混合液，然后向第二混合液中加入瓷片，再置于55℃下蒸馏40min后干燥，得浓缩物，所述第二混合液与瓷片的重量比为5:1；
S4、向浓缩物浓缩液中滴加1mol/L盐酸溶液调节浓缩液的pH至3，并置于5℃下以300r/min的速度搅拌20h，然后离心，取滤下物，在将滤下物中加入质量分数为60％的乙醇溶液，然后搅拌25min，再过滤，得第一滤渣，向第一滤渣中加入质量分数为80％的乙醇溶液，然后搅拌25min，再过滤，得第二滤渣，向第二滤渣中加入质量分数为90％的乙醇溶液，然后搅拌25min，再过滤，得第三滤渣，将第三滤渣干燥，得绿萝花多糖，其中，浓缩液与质量分数为60％的无水乙醇溶液、质量分数为80％的无水乙醇溶液、质量分数为90％的无水乙醇溶液的体积比为1:3:3:3。
实施例8：
绿萝花多糖的提取方法，包括以下步骤：
S1、取绿萝花采用杀菌水浸泡10～20min后，再用无菌蒸馏水进行冲洗，将冲洗后的绿萝花置于65℃和9mmHg的真空度下烘烤25min，再置于4℃的无水乙醇中并搅拌、过滤，取滤上物，得粉碎物，向粉碎物加入乙醇-乙醚，并搅拌均匀，再置于55℃下水浴加热1.5h，过滤，取滤上物，再将滤上物浸泡于质量分数为20％的氯化钠溶液中3h，得第一混合液，其中，绿萝花与质量分数为20％的氯化钠溶液的重量比为1:3；杀菌水的制备方法如下：取石竹叶清洗干净后，覆盖湿棉布并置于28℃下放置3h，再撤去湿棉布，然后置于水中煮沸3h，过滤，取滤下物，得杀菌水，湿棉布在覆盖竹叶之前浸没于淘米水中9min后，取出拧干至不滴水，石竹叶与水的重量比为1:4；绿萝花与黄油的重量比为5:2；乙醇-乙醚中无水乙醇和无水乙醚的体积比为1:2，粉碎物与乙醇-乙醚的重量比为1:3；
S2、将第一混合液置于-20℃下冷冻3h，再置于30℃和32kHz下超声波处理60min，再加热至90℃保持65min后过滤，得过滤液；
S3、将过滤液置于截留分子量为3500Da的透析袋中，并将封口后的透析袋置于质量分数为80％的聚乙二醇溶液中放置70min，然后取出透析袋，再倾倒出透析袋内的液体，得第二混合液，然后向第二混合液中加入瓷片，再置于55℃下蒸馏40min后干燥，得浓缩物，所述第二混合液与瓷片的重量比为5:1；
S4、向浓缩物浓缩液中滴加1mol/L盐酸溶液调节浓缩液的pH至3，并置于5℃下以300r/min的速度搅拌20h，然后离心，取滤下物，在将滤下物中加入质量分数为60％的乙醇溶液，然后搅拌25min，再过滤，得第一滤渣，向第一滤渣中加入质量分数为80％的乙醇溶液，然后搅拌25min，再过滤，得第二滤渣，向第二滤渣中加入质量分数为90％的乙醇溶液，然后搅拌25min，再过滤，得第三滤渣，向第三滤渣中加入丙酮，再置于4℃下以3000r/min的速度离心30min，过滤，得第一离心物，向第一离心物加入无水乙醚，再置于4℃下以3000r/min的速度离心30min，过滤，得第二离心物，向第三离心物加入无水乙醇，再置于4℃下以3000r/min的速度离心30min，过滤，得第三离心物，将第三离心物干燥，得绿萝花多糖其中，浓缩液与质量分数为60％的无水乙醇溶液、质量分数为80％的无水乙醇溶液、质量分数为90％的无水乙醇溶液的体积比为1:3:3:3；第三滤渣与丙酮、无水乙醚、无水乙醇的重量比为1:4:4:4。
对比例1：
与实施例3相比，S1中取绿萝花清洗、粉碎，得粉碎物，将粉碎物浸泡于水中3h，得第一混合液，其他与实施例3均相同。
对比例2：
与实施例3相比，S3中向过滤液加入瓷片，再置于55℃下蒸馏40min后干燥，得浓缩物，所述第二混合液与瓷片的重量比为5:1，其他与实施例3均相同。
对比例3：
与实施例8相比，S1中绿萝花直接用无菌蒸馏水进行冲洗、粉碎，得粉碎物，其他与实施例8均相同。
对比例4：
与实施例8相比，S1中将清洗后的绿萝花置于研钵中研磨30min，得粉碎物，其他与实施例8均相同。
对比例5：
与实施例8相比，S1中直接将粉碎物浸泡于质量分数为20％的氯化钠溶液中3h，得第一混合液，其他与实施例8均相同。
对比例6：
与实施例8相比，S4中浓缩液直接加入质量分数为60％的乙醇溶液，然后搅拌25min，再过滤，得第一滤渣，其他与实施例8均相同。
对比例7：
与实施例8相比，S4中直接将向第三滤渣干燥，得绿萝花多糖。
<结果分析>
1、对对比例1～7和实施例3、实施例8所得的绿萝花多糖进行感官评定，结果见表1。
表1绿萝花多糖的感官评定
由表1可知，比例1～7和实施例3、实施例8所得的绿萝花多糖颜色为黄色或淡黄色，质地为颗粒有大有小，均符合一般的生产和应用需求。对比例1-3和对比例6、对比例7所得的绿萝花多糖均为黄色是因为对比例1-3和对比例6均未用丙酮、无水乙醚和无水乙醇进行脱色处理，故颜色较深，而对比例7中未除去蛋白质，蛋白质氧化后容易发黄影响绿萝花多糖的颜色；对比例1-2和实施例3、对比例5的绿萝花多糖的壳体比较大，主要是因为对比例1-2和实施例3中含有的蛋白质、脂类等杂质比较多，糖类之间粘着力比较大，故壳体比较大，对比例5中主要是没有进行蛋白质除杂处理，蛋白质分子将糖类分子包裹，容易形成大而不透亮的颗粒物。
2、对对比例1～7和实施例3、实施例8所得的绿萝花多糖进行提取率评定，提取率＝绿萝花多糖的重量/绿萝花的量×％，评定方法为：①绘制标准曲线：取无水葡萄糖对照品适量，精密称重，加水制成每1mL含无水葡萄糖0.3mg、0.6mg、0.9mg、1.2mg、1.5mg的溶液，并编号为A、B、C、D、E。精密量取上A、B、C、D、E溶液各2mL，并分别置于5支试管中，分别加质量分数为4％苯酚溶液1mL，混匀，迅速加入硫酸7.0mL，摇匀，于40℃水浴中保温30分钟，取出，置冰水浴中5分钟，取出，以相应试剂为空白(水2mL，质量分数为4％苯酚溶液1mL，硫酸7.0mL)，按照紫外-可见分光光度法，在490nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；②测定取绿萝花多糖的量：取样品约1g，精密称重，置50mL于容量瓶中，并稀释至刻度，摇匀。精密量取2mL，照标准曲线制作的方法，加质量分数为4％苯酚溶液1mL，混匀，迅速加入硫酸7.0mL，摇匀，于40℃水浴中保温30分钟，取出，置冰水浴中5分钟，取出，以相应试剂为空白(水2mL，质量分数为4％苯酚溶液1mL，硫酸7.0mL)，按照紫外-可见分光光度法，在49 0nm的波长处测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中无水葡萄糖的重量(mg)。结果见表2。
表2绿萝花多糖的提取率
由表2可知，实施例3相比于对比例1，实施例3的绿萝花多糖的提取率高达9.25％，这是因为对比例1未将粉碎物浸泡于质量分数为20％的氯化钠溶液中，使粉碎物中的细胞成分破裂，细胞的内容物完全逸出而溶解在氯化钠溶液中，而对比例2中未采用透析袋处理过滤液，获得的绿萝花多糖于实施例3相近，但是耗费的时间长，且在加热干燥中容易造成多糖被分解氧化；对比例3采用蒸馏水冲洗绿萝花，造成绿萝花在提取过程中滋生的细菌易消耗多糖，使获得的多糖量减少；对比例4直接将清洗后的绿萝花置于研钵中研磨30min，得粉碎物，未使绿萝花的细胞成分破裂，细胞的内容物完全逸出，使获得的多糖量减少；对比例5-7主要用于除去获得的绿萝花多糖中的脂类、蛋白质、色素等杂质，故对比例5-7与实施例8的绿萝花多糖的提取率相近，但是实施例8的绿萝花多糖的纯度高。
3、分别取实施例3、实施例8制备的产品，用去离子水配制成10％(w/v)溶液A1、A2，以甘油用去离子水配制成10％(w/v)溶液作为对照组B，选取同一规格的载玻片，并在载破片上放上少许纱布，再将A1、A2溶液、B溶液分别50μ0均匀涂布在纱布上，然后置于相对湿度为50％的干燥器中干燥，24h后称量载玻片上剩余A1、A2溶液、B溶液的量，以计算绿萝花多糖的保湿率(保湿率(％)＝放置24小时后的样品质量/放置前的样品质量×100％)，结果见表3。
表3保湿率
由表3可知，实施例3、实施例8制备的产品在24h内的保湿效果优于甘油，可以将实施例3、实施例8制备的产品配合在皮肤外用剂中，作为保持皮肤水分的保湿剂使用。
4、分别将实施例3、实施例8制备的产品用去离子水配制成10mg/mL的水溶液，取2mL水溶液于10mL试管中，再加人2mL DPPH乙醇溶液(1×10-4mol/L)，充分混匀，室温静置，30min后用分光光度计测定517nm波长的吸光度A517(以乙醇为参比)；同时测定2mL DPPH溶液与2mL乙醇混合后的吸光度Ac，以及2mL绿萝花多糖与2mL乙醇溶液混合后的吸光度A0，平行测定三次，取平均值，根据以下公式计算自由基清除率，自由基清除率＝(1-(A517-A0)/Ac)×100％。
表4绿萝花多糖的自由基清除率(％)
由表4可知，实施例3、实施例8制备的产品具有较好的自由基清除作用，作为抗氧化剂是有效的。因此，可以将绿萝花多糖配合在皮肤外用剂中，作为防止肌肤老化、维持年轻健康的肌肤状态的抗氧化活性物使用。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节。
Claims (6)
1.一种绿萝花多糖的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、取绿萝花清洗、粉碎，得粉碎物，将粉碎物浸泡于质量分数为20％的氯化钠溶液中2～4h，得第一混合液，其中，绿萝花与质量分数为20％的氯化钠溶液的重量比为1:3；
S2、将第一混合液置于-20℃下冷冻2～4h，再置于20～40℃和25～40kHz下超声波处理40～80min，再加热至85～100℃保持50～80min后过滤，得过滤液；
S3、将过滤液置于截留分子量为3500Da的透析袋中，并将封口后的透析袋置于质量分数为80％的聚乙二醇溶液中放置60～80min，然后取出透析袋，再倾倒出透析袋内的液体，得第二混合液，然后向第二混合液中加入瓷片，再置于50～60℃下蒸馏30～50min后干燥，得浓缩物，所述第二混合液与瓷片的重量比为5:1；
S4、向浓缩物中加入质量分数为60％的乙醇溶液，然后搅拌20～30min，再过滤，得第一滤渣，向第一滤渣中加入质量分数为80％的乙醇溶液，然后搅拌20～30min，再过滤，得第二滤渣，向第二滤渣中加入质量分数为90％的乙醇溶液，然后搅拌20～30min，再过滤，得第三滤渣，将第三滤渣干燥，得绿萝花多糖，其中，浓缩液与质量分数为60％的无水乙醇溶液、质量分数为80％的无水乙醇溶液、质量分数为90％的无水乙醇溶液的体积比为1:3:3:3。
2.如权利要求1所述的绿萝花多糖的提取方法，其特征在于，步骤S1中绿萝花清洗过程为：采用杀菌水浸泡10～20min后，再用无菌蒸馏水进行冲洗，其中，杀菌水的制备方法如下：取石竹叶清洗干净后，覆盖湿棉布并置于25～40℃下放置2～4h，再撤去湿棉布，然后置于水中煮沸2～4h，过滤，取滤下物，得杀菌水，其中，湿棉布在覆盖竹叶之前浸没于淘米水中8～10min后，取出拧干至不滴水，其中，石竹叶与水的重量比为1:4。
3.如权利要求2所述的绿萝花多糖的提取方法，其特征在于，步骤S1中绿萝花粉碎过程为：向清洗后的绿萝花置于60～70℃和8～10mmHg的真空度下烘烤20～30min，再置于0～8℃的无水乙醇中并搅拌、过滤，取滤上物，得粉碎物，其中，绿萝花与黄油的重量比为5:2。
4.如权利要求3所述的绿萝花多糖的提取方法，其特征在于，步骤S1粉碎物浸泡于质量分数为20％的氯化钠溶液之前，还需向粉碎物中加入乙醇-乙醚，并搅拌均匀，再置于50～60℃下水浴加热1～3h，过滤，取滤上物，其中，乙醇-乙醚中无水乙醇和无水乙醚的体积比为1:2，粉碎物与乙醇-乙醚的重量比为1:3。
5.如权利要求4所述的绿萝花多糖的提取方法，其特征在于，步骤S4中浓缩液在加入无水乙醇之前，还需滴加1mol/L盐酸溶液调节浓缩液的pH至3，并置于0～10℃下以200～400r/min的速度搅拌18～24h，然后离心，取滤下物。
6.如权利要求5所述的绿萝花多糖的提取方法，其特征在于，步骤S4中第三滤渣在干燥之前还需进行清洗，清洗过程具体为：向第三滤渣中加入丙酮，再置于4℃下以2000～4000r/min的速度离心20～40min，过滤，得第一离心物，向第一离心物加入无水乙醚，再置于4℃下以2000～4000r/min的速度离心20～40min，过滤，得第二离心物，向第三离心物加入无水乙醇，再置于4℃下以2000～4000r/min的速度离心20～40min，过滤，得第三离心物，将第三离心物干燥，得绿萝花多糖，其中，第三滤渣与丙酮、无水乙醚、无水乙醇的重量比为1:4:4:4。
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Citations (1)
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| CN105267058A (zh) * | 2014-07-17 | 2016-01-27 | 伽蓝（集团）股份有限公司 | 一种绿萝花多糖及其应用 |
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