CN111166758A - 一种利用哇巴因的组合抗癌药物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及抗癌药物技术领域，具体是公开了一种利用哇巴因的组合抗癌药物，所述抗癌药物包括哇巴因、PD1抗体和CD40抗体；所述抗癌药物1ml中哇巴因的含量为0.2mg，所述抗癌药物1ml中PD‑1抗体的含量为0.1‑0.6mg，所述CD40抗体的含量与PD‑1抗体的含量相同，所述哇巴因与(PD‑1抗体+CD40抗体)的质量配比为1：(1‑6)。本发明克服了现有技术的不足，抗癌药物中哇巴因联合PD1抗体和CD40抗体，三者的结合使用提高了药物的抗癌效果、扩大了覆盖肿瘤的类型。

Description

一种利用哇巴因的组合抗癌药物
技术领域
本发明涉及抗癌药物技术领域，具体属于一种利用哇巴因的组合抗癌药物。
背景技术
恶性肿瘤是危害人类健康的重大疾病。江苏国近几年开展了以恶性肿瘤为主的全人口死因回顾性调查，结果显示男女性第1位死因均为恶性肿瘤，其死亡率占全部死因的27.41％。资料显示，2003年江苏国城市地区位于恶性肿瘤死亡前4位的分别是肺癌、胃癌、肝癌、食管癌；而农村地区为肝癌、肺癌、食管癌、胃癌。肺癌和胃癌死亡率城市明显高于农村。尤其是通过分析1973至2004年几种主要恶性肿瘤的死亡情况发现，肺癌死亡率大幅上升，2004年肺癌死亡率是1973年的5.65倍。由此可见，肺癌已经成为我国恶性肿瘤数一数二的“杀手”，严重威胁着我国人民的生存健康。
近年来有研究指出，强心苷如digoxin，oleandrin以及ouabain能诱导多种肿瘤细胞，如淋巴瘤细胞、前列腺癌细胞、神经胶质瘤细胞的凋亡或坏死，从而具有明显的抗肿瘤效果。
强心苷的这种抗肿瘤作用通常认为是由强心苷的细胞毒性引起的，因此人们对钠钾ATP酶物质是否能用于肿瘤治疗产生怀疑。但是越来越多的研究表明，强心苷，如哇巴因在非毒性剂量下也能显著性抑制肿瘤细胞的生长和转移。
但是如何使用哇巴因生产抗癌药物，使其适用于治疗各种实体肿瘤，是业内亟待解决的问题。
发明内容
本发明的目的是提供了一种利用哇巴因的组合抗癌药物，克服了现有技术的不足，抗癌药物中哇巴因联合PD1抗体和CD40抗体，三者的结合使用提高了药物的抗癌效果、扩大了覆盖肿瘤的类型。
为解决上述问题，本发明所采取的技术方案如下：
一种利用哇巴因的组合抗癌药物，所述抗癌药物包括哇巴因、PD1抗体和CD40抗体；所述抗癌药物1ml中哇巴因的含量为0.2mg，所述抗癌药物1ml中PD-1抗体的含量为0.1-0.6mg，所述CD40抗体的含量与PD-1抗体的含量相同，所述哇巴因与(PD-1抗体+CD40抗体)的质量配比为1：(1-6)。
进一步，所述抗癌药物1ml中哇巴因的含量为0.2mg，所述抗癌药物1ml中PD-1抗体的含量为0.2-0.5mg，所述CD40抗体的含量与PD-1抗体的含量相同，所述哇巴因与(PD-1抗体+CD40抗体)的质量配比为1：(2-5)。
进一步，所述抗癌药物1ml中哇巴因的含量为0.2mg，所述抗癌药物1ml中PD-1抗体的含量为0.35mg，所述CD40抗体的含量与PD-1抗体的含量相同，所述哇巴因与(PD-1抗体+CD40抗体)的质量配比为1：3.5。
进一步，所述PD1抗体选自尼鲁单抗、派姆单抗、拉姆单抗、匹地单抗和AMP-224其中的一种。
进一步，所述CD40抗体选自SEA-CD40、APX005M、鲁卡木单抗、达西珠单抗、ABBV-428其中的一种。
进一步，所述抗癌药物用于治疗霍奇金淋巴瘤、黑色素瘤、肾细胞癌、多发性骨髓瘤、或其他肿瘤。
本发明与现有技术相比较，本发明的实施效果如下：
本发明所述一种利用哇巴因的组合抗癌药物，哇巴因联合PD1抗体和CD40抗体，PD1抗体是一种免疫检查点抑制剂，CD40可以有效摧毁癌细胞且不让健康细胞受到伤害，三者的结合使用提高了药物的抗癌效果、扩大了覆盖肿瘤的类型。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的描述，但本发明不仅限于这些实例，在为脱离本发明宗旨的前提下，所为任何改进均落在本发明的保护范围之内。
实施例1
一种利用哇巴因的组合抗癌药物，抗癌药物包括哇巴因、PD1抗体和CD40抗体；抗癌药物1ml中哇巴因的含量为0.2mg，抗癌药物1ml中PD-1抗体的含量为0.1mg，CD40抗体的含量与PD-1抗体的含量相同，哇巴因与(PD-1抗体+CD40抗体)的质量配比为1：1。
PD1抗体选自尼鲁单抗、派姆单抗、拉姆单抗、匹地单抗和AMP-224其中的一种。
CD40抗体选自SEA-CD40、APX005M、鲁卡木单抗、达西珠单抗、ABBV-428其中的一种。
抗癌药物用于治疗霍奇金淋巴瘤、黑色素瘤、肾细胞癌、多发性骨髓瘤、或其他肿瘤。
实施例2
与实施例1的组分配比基本相同，唯有不同的是抗癌药物1ml中PD-1抗体和CD40抗体的含量为0.2mg。
实施例3
与实施例1的组分配比基本相同，唯有不同的是抗癌药物1ml中PD-1抗体和CD40抗体的含量为0.35mg
实施例4
与实施例1的组分配比基本相同，唯有不同的是抗癌药物1ml中PD-1抗体和CD40抗体的含量为0.5mg
实施例5
与实施例1的组分配比基本相同，唯有不同的是抗癌药物1ml中PD-1抗体和CD40抗体的含量为0.6mg
实验例1：
实验所用材料：肺癌细胞株95-D；哇巴因,10％FBS+90％DMEM培养基溶解后分装，4℃保存；PD1抗体+CD40抗体，10％FBS+90％DMEM培养基溶解后分装，4℃保存；CCK8细胞增值与活性检测；10％FBS+90％DMEM培养基。
细胞实验流程：
(1)取状态良好的95-D细胞，调节密度为的2.0×104/mL，将细胞悬液接种于96孔板(0.1mL/孔)(设置空白实验，仅加培养基)；
(2)贴壁生长48小时，弃去原来培养基。对照组加入培养基(0.1mL)，实验组加入哇巴因(0.1mL哇巴因含量0.2mg),实验组加入哇巴因与抗PD1抗体+CD40抗体(0.1mL哇巴因含量0.2mg，PD1抗体+CD40抗体的含量均为0.2mg、0.4mg、0.7mg、1.0mg、1.2mg)，空白实验组换掉培养基即可，培养48小时；
(3)弃去所有孔的培养基，于孔中加入CCK8溶液(10uL)，继续培养2小时；
(4)用酶标仪在450nm波长处测其吸光度；
(5)计算细胞活力：
细胞活力＝(A实验-A空白)/(A对照-A空白)
实验结果见表1：
表1 95-D肺癌细胞株成活率统计表
Figure BDA0002311866970000051
结果分析：
95-D肺癌细胞株经过培养基处理成活率100％，经过哇巴因处理成活率为62％，经过哇巴因联合PD1抗体+CD40抗体(0.2mg、0.4mg、0.7mg、1.0mg、1.2mg)使用成活率为57％、52％、46％、43％、49％。与哇巴因单独处理成活率62％相比，哇巴因联合PD1抗体+CD40抗体(0.2mg、0.4mg、0.7mg、1.0mg、1.2mg)使用差异无统计学意义(P＞0.05)，哇巴因联合PD1抗体+CD40抗体(1.0mg)使用差异有统计学意义(P＜0.05)；综合不同用量的哇巴因单独处理及与哇巴因联合PD1抗体+CD40抗体使用的实验结果，可选择质量比1:5为后续实验所用比例。
实验例2：
实验所用材料：肺癌细胞株95-D、H596、A549；哇巴因，10％FBS+90％DMEM培养基溶解后分装，4℃保存；PD1抗体+CD40抗体，10％FBS+90％DMEM培养基溶解后分装，4℃保存；CCK8细胞增值与活性检测；10％FBS+90％DMEM培养基。本实验所用试剂均为市面常见试剂。
细胞实验流程：
(1)取状态良好的细胞，调节密度为的2.0×104/mL，将细胞悬液接种于96孔板(0.1mL/孔)(设置空白实验，仅加培养基)；
(2)贴壁生长48小时，弃去原来培养基。分组后分别加入：对照组仅培养基(0.1mL/孔)、实验组哇巴因(0.1mL哇巴因含量2.0mg)、实验组哇巴因与PD1抗体+CD40抗体联合使用(0.1mL哇巴因含量0.2mg和PD1抗体+CD40抗体含量1.0mg)，空白实验组换掉培养基即可(0.1mL/孔)，培养48小时；
(3)弃去所有孔的培养基，于孔中加入CCK8溶液(10ul)，继续培养2小时；
(4)用酶标仪在450nm波长处测其吸光度；
(5)计算细胞活力；
细胞活力＝(A实验-A空白)/(A对照-A空白)
实验结果见表2：
表2不同肺癌细胞株成活率统计表
Figure BDA0002311866970000071
结果分析：
3组不同细胞株实验结果分析，与对照组100％细胞活率相比哇巴因与PD1抗体+CD40抗体联合使用组有显著统计学差异(P＜0.01)，单独使用哇巴因组实验结果与对照组差异均小于联合使用组的差异，有统计学差异(P＜0.05)。说明哇巴因与PD1抗体+CD40抗体联合使用比哇巴因单独使用抑癌效果更好。
实验例3：
小鼠实验流程：
取正常6周龄裸鼠若干只，雄性，每只老鼠体重约为20g；A549细胞株；哇巴因，无菌PBS溶液溶解后分装，4℃保存；PD1抗体+CD40抗体，无菌PBS溶液溶解后分装，4℃保存；
取细胞密度为1.0×107/mL的A549细胞，消毒小鼠欲注射部位的皮肤，在每只小鼠尾静脉注射0.1mL细胞悬液，5周后观察小鼠肺部瘤块，当大小为2-3mm时，小鼠肺癌模型制作成功。
将建模成功的小鼠随机分成4组，PBS对照组、哇巴因实验组、PD1抗体+CD40抗体实验组、哇巴因与PD1抗体+CD40抗体联合使用实验组。对照组给药无菌PBS(腹腔注射0.1mL),实验组给药哇巴因(腹腔注射0.1ml10mg/kg/d)、PD1抗体+CD40抗体(腹腔注射0.1ml 2mg/kg/d)、哇巴因与PD1抗体+CD40抗体联合使用(腹腔注射0.1ml哇巴因10mg/kg/d与PD1抗体+CD40抗体2mg/kg/d)，对照组和实验组均连续给药3周。
停药24小时称重后处死小鼠，剥离肿瘤块，观察转移情况，称重并保存。按平均瘤重计算抑瘤率。抑瘤率＝[(对照组肿瘤体积-实验组肿瘤体积)/对照组肿瘤体积]×100％。
小鼠实验结果见表3：
表3小鼠抑瘤率统计表
Figure BDA0002311866970000081
结果显示，PD1抗体+CD40抗体与哇巴因联合使用实验组的抑瘤率明显高于PBS对照组，差异有统计学意义(P＜0.05)，PD1抗体+CD40抗体与哇巴因联合使用实验组的抑瘤率高于哇巴因实验组和PD1抗体+CD40抗体实验组，差异有统计学意义(P＜0.05)
以上内容仅仅是对本发明构思所作的举例和说明，所属本技术领域的技术人员对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，只要不偏离发明的构思或者超越本权利要求书所定义的范围，均应属于本发明的保护范围。

Claims (6)

1.一种利用哇巴因的组合抗癌药物，其特征在于：所述抗癌药物包括哇巴因、PD1抗体和CD40抗体；所述抗癌药物1ml中哇巴因的含量为0.2mg，所述抗癌药物1ml中PD-1抗体的含量为0.1-0.6mg，所述CD40抗体的含量与PD-1抗体的含量相同，所述哇巴因与(PD1抗体+CD40抗体)的质量配比为1：(1-6)。
2.根据权利要求1所述的一种利用哇巴因的组合抗癌药物，其特征在于：所述抗癌药物1ml中哇巴因的含量为0.2mg，所述抗癌药物1ml中PD-1抗体的含量为0.2-0.5mg，所述CD40抗体的含量与PD-1抗体的含量相同，所述哇巴因与(PD-1抗体+CD40抗体)的质量配比为1：(2-5)。
3.根据权利要求1所述的一种利用哇巴因的组合抗癌药物，其特征在于：所述抗癌药物1ml中哇巴因的含量为0.2mg，所述抗癌药物1ml中PD-1抗体的含量为0.35mg，所述CD40抗体的含量与PD-1抗体的含量相同，所述哇巴因与(PD-1抗体+CD40抗体)的质量配比为1：3.5。
4.根据权利要求1所述的一种利用哇巴因的组合抗癌药物，其特征在于：所述PD1抗体选自尼鲁单抗、派姆单抗、拉姆单抗、匹地单抗和AMP-224其中的一种。
5.根据权利要求1所述的一种利用哇巴因的组合抗癌药物，其特征在于：所述CD40抗体选自SEA-CD40、APX005M、鲁卡木单抗、达西珠单抗、ABBV-428其中的一种。
6.根据权利要求1所述的一种利用哇巴因的组合抗癌药物，其特征在于：所述抗癌药物用于治疗霍奇金淋巴瘤、黑色素瘤、肾细胞癌、多发性骨髓瘤、或其他肿瘤。
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