CN111150853B - 一种肿瘤联合治疗药物载体的制备及应用 - Google Patents

一种肿瘤联合治疗药物载体的制备及应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种肿瘤联合治疗药物载体的制备及应用，通过化学合成二氧化硅纳米粒子，并将其作为模板与高锰酸钾反应，获得二氧化硅表面负载二氧化锰的纳米粒子，再以碳酸钠刻蚀掉二氧化硅，从而获得特定粒径的中空介孔二氧化锰纳米粒子。随后在二氧化锰纳米粒子表面连接羧基基团，再与Ce6和DOX混合反应，然后与三种5'连有氨基的核苷酸混合反应，从而得到可以发挥多种抗癌效果的靶向肺癌细胞的载药二氧化锰纳米粒子。本发明能有效减轻化疗药物对正常组织的毒性和副作用。肿瘤联合治疗药物载体在发挥药物精准靶向作用、基因治疗、免疫疗法的同时解决纳米颗粒的生物相容性问题，并确保它们能被癌细胞正常内吞，克服单一疗法局限性的优越性。

Description

一种肿瘤联合治疗药物载体的制备及应用
技术领域
本发明属于纳米药物领域，涉及一种肿瘤联合治疗药物载体的制备及应用，具体涉及一种用于非小型肺癌靶向治疗的中空介孔二氧化锰载药及其制备方法及应用。
背景技术
随着吸烟人群的增多和环境污染的加剧，肺癌在世界上的发病率和病死率正在逐年升高，目前，肺癌的致死率居于所有恶性肿瘤之首。常见的治疗方法有光动力治疗、化学药物治疗、基因治疗、免疫治疗，但是单一的治疗方法总存在不足并且已不能满足目前肺癌发展的需要，因此发展多功能更有效的治疗方法迫在眉睫。
二氧化锰可以与肿瘤细胞内的过氧化氢反应生成氧气从而改善肿瘤的乏氧环境，同时反应产生的锰离子可被肾脏排出可被肾脏排出不会影响机体健康。并且，反应制成的中空介孔二氧化锰纳米粒子具有足够大的中空结构和较充足的比表面积，可用作良好的药物负载运输载体。
光动力治疗(PDT)，利用光敏剂二氢卟吩e6(Ce6)，在光照下将氧气转化成单线态氧(1O)从而杀死癌症细胞。由于PDT可治疗深层癌症，并对正常组织细胞没有损害，因此临床应用非常广泛。
Aptamer-S6核酸适体，是由DNA组成的短片段单链核苷酸序列，与A549细胞表面受体特异性结合从而实现靶向性。
miR-145是近年来研究的热点之一，它在人体中广泛存在且在多种肿瘤细胞中表达下调，因此miR-145上调有可能可以抑制肺癌。并且作为Klf4、Cct4的上游调控关键因子，通过调控Klf4、Cct4的表达，调控细胞的增殖、分化和凋亡。
未甲基化的胞嘧啶-鸟嘌呤寡核苷酸(CPG)作为免疫调节性癌症治疗方法已被广泛研究。CPG触发toll样受体9(TLR9)途径激活APCs，如树突状细胞(DC)和巨噬细胞。
发明内容
本发明所要解决的技术问题为：合成表面有羧基基团的中空介孔二氧化锰纳米粒子，从而在中空结构中和表面同时负载抗癌药物并靶向A549细胞，通过在肿瘤微酸环境下释放负载药物从而达到抗癌效果。
本发明的技术方案为：
一种肿瘤联合治疗药物载体，所述载体为中空腔体，该载体最内层为表面介孔且中空结构的二氧化硅纳米笼，所述二氧化硅纳米笼表面修饰一层二氧化锰纳米粒子。
进一步的，所述载体直径为90-110nm。
进一步的，所述载体表面均匀分布介孔，同时连接羧基基团。
进一步的，所述二氧化锰纳米粒子通过碳酸蚀刻的方式包裹在二氧化硅纳米笼表面。
一种肿瘤联合治疗药物载体的制备方法，该方法包括如下步骤：
(1)将无水乙醇25ml、超纯水0.5ml、氨水1.8ml混合加入圆底烧瓶中，在油浴锅里加热至40℃，加入0.75ml原硅酸四乙酯，150rpm下搅拌12h，得二氧化硅；
(2)在100KHZ超声环境下向二氧化硅中加入47ml浓度为0.02mol/L的高锰酸钾，并超声6h，反应结束后，14800rpm离心10min，水洗3次，得二氧化锰包裹的二氧化硅纳米粒子；
(3)20ml浓度为2mol/L的碳酸钠溶液，与二氧化锰包裹的二氧化硅纳米粒子混合加入圆底烧瓶中，油浴锅中150rpm转速60℃反应12h，反应结束后，14800rpm离心10min，水洗3次，即得肿瘤联合治疗药物载体。
本发明还公开了一种上述任一制备方法制得的肿瘤联合治疗药物载体。
一种肿瘤联合治疗药物载体作为靶向诊断治疗药物载体中的应用。
一种具有靶向诊断治疗制剂的药物，由上述肿瘤联合治疗药物载体装载药物组成。
进一步的，该制剂负载的药物包括但不限于：光敏剂Ce6和化疗药物DOX，并在纳米粒子表面连接三种寡核苷酸链，分别是：发挥靶向作用的Aptamer-S6核酸适体；发挥基因治疗的miR-145；激发细胞免疫反应的CPG。
一种具有靶向诊断治疗制剂的药物的制备方法，该方法包括如下步骤：
(1)取5ml浓度为2mg/ml的中空介孔二氧化锰纳米粒子溶液，在100KHZ超声的情况下加入10mL的聚烯丙氨酸盐(PAH)，搅拌2h，反应结束后，离心，水洗3次；
(2)将步骤(1)所得溶液在100KHZ超声的情况下逐滴加入到10mL的聚丙烯酸(PAA)中，搅拌2h，反应结束后进行离心水洗，获得表面连接有羧基的肿瘤联合治疗药物载体；
(3)将步骤(2)所得表面连接有羧基的肿瘤联合治疗药物载体溶于50ml水中，获得浓度为0.2mg/ml的H-M-pp溶液，称取H-M-pp溶液按浓度比1：4：1.25与光敏剂二氢卟吩e6(Ce6)和阿霉素(DOX)混合反应12h，反应结束后离心水洗去除未加载的药物；
(4)活化寡核苷酸5’连接的氨基，取80ul浓度为0.2mg/ml的H-M-pp分别添加20ul浓度为1×10-8mol/L的Aptamer-S6r、CPG和miR-145，在37℃下反应12h，结束后，在6000rpm离心5min，水洗3次去除未连接的寡核苷酸，即得一种具有靶向治疗非小型肺癌的肿瘤联合治疗药物载体。
本发明的有益效果在于：
1、本发明药物载体是二氧化锰纳米粒子，具有足够的中空结构用于载药并有较大的比表面积连接靶向和治疗作用的寡核苷酸链：Aptamer-S6、miR-145、CPG。由寡核苷酸包覆的纳米粒子具有很好的生物相容性，Aptamer-S6具有靶向A549细胞的特异性，在被癌症细胞胞吞后，在肿瘤细胞的微酸环境和过氧化氢的存在下，二氧化锰壳反应裂解释放负载药物的同时消耗过氧化氢产生氧气改善肿瘤细胞的酸性环境并可增强光动力治疗。本发明同时集聚了改善肿瘤微环境、光动力治疗、化学药物治疗、抗癌药物的靶向性、免疫治疗、基因治疗六大功效于一体，对靶向的A549细胞的生长具有很好的抑制作用，将在抗癌领域具有非常广阔的前景。
2、本发明涉及的中空二氧化锰的合成是根据以往研究报道合成的，我们创新性的赋予二氧化锰精确肺癌细胞的靶向性，并结合基因治疗和免疫疗法，将多种癌症治疗手段同时集聚一体，克服单一治疗的局限性，联合多种治疗方法并使其发挥最大效能，更大程度上提高了合成纳米粒子的细胞毒性，在以后的癌症治疗方面有广阔的前景。
附图说明
图1为H-M-pp/C&D+3纳米粒子对肺癌体外及体内的诊疗示意图；
图2为中空介孔二氧化锰纳米粒子的透射电镜表征图；
图3为纳米粒子负载三种寡核苷酸的电镜表征图；
图4为H-MnO2-pp样品的N2吸附/脱附等温线和插图中的孔径分布曲线；
图5为不同纳米粒子的Zeta值图；
图6为激光共聚焦成像图；
图7、图8为细胞毒性图；
图9、图10为小鼠体重及肿瘤大小的追踪图；
图11为小鼠肿瘤解剖图；
图12小鼠肿瘤的H&E染色分析图；
图13小鼠肿瘤的Tunel染色分析图。
具体实施方式
本发明中采用的寡核苷酸序列见表1
表1采用寡核苷酸序列
实施例1
用于非小型肺癌靶向治疗的中空介孔二氧化锰纳米粒子载体，包括：
(1)由原硅酸四乙酯合成二氧化硅硬模板，
(2)在二氧化硅表面合成二氧化锰，并通过碳酸钠刻蚀掉二氧化锰包裹住的二氧化硅，得到中空介孔二氧化锰纳米粒子。
首先，通过化学合成的方法制得所需尺寸大小的二氧化硅纳米粒子，反应所得的二氧化硅立即作为模板与高锰酸钾反应获得二氧化硅表面负载二氧化锰的纳米粒子，随后加入一定浓度的碳酸钠刻蚀掉二氧化硅，从而获得具有一定尺寸大小的中空介孔二氧化锰纳米粒子。
具体步骤如下：
(1)将无水乙醇、超纯水、氨水按比例混合加入圆底烧瓶中，在油浴锅里加热至40℃，加入适量的原硅酸四乙酯，转速150rpm搅拌12h；
(2)事先配置所需浓度的高锰酸钾，待二氧化硅反应结束后立即与高锰酸钾反应，在超声环境下缓慢添加高锰酸钾，并超声6h。反应结束后，14800rpm离心10min，水洗3次获得二氧化锰包裹的二氧化硅纳米粒子；
(3)配置所需浓度的碳酸钠溶液，并与上述反应制得的纳米粒子混合加入圆底烧瓶中，油浴锅中150rpm转速60℃反应12h。反应结束后，14800rpm离心10min，水洗3次获得中空介孔二氧化锰纳米粒子。
实施例2
用于非小型肺癌靶向治疗的中空介孔二氧化锰纳米粒子载药平台，包括：
(1)二氧化锰纳米粒子表面连接羧基基团；
(2)中空介孔二氧化锰负载光敏剂Ce6和化学药物DOX；
(3)在粒子表面通过酰胺反应连接寡核苷酸。
负载多种抗癌药物的中空介孔二氧化锰纳米粒子的制备方法，首先在二氧化锰纳米粒子表面连接羧基基团，再与与Ce6和DOX混合反应，然后与三种5'连有氨基的核苷酸混合反应，从而得到可以发挥多种抗癌效果的靶向肺癌细胞的载药二氧化锰纳米粒子。
具体步骤如下：
(1)取适量的中空介孔二氧化锰纳米粒子溶液，在超声的情况下加入10mL的PAH，搅拌两小时。反应结束后，离心，水洗3次；
(2)将上述溶液在超声的情况下逐滴加入到10mL的PAA中，搅拌2h，离心水洗后获得表面连接有羧基的中空介孔二氧化锰纳米粒子；
(3)取适量上述溶液，按比例与Ce6和DOX混合反应12h，反应结束后离心水洗去除未加载的药物；
(4)活化寡核苷酸5，连接的氨基，再与上述实验所得的溶液按比例混合在37℃下反应12h。反应结束后，6000rpm离心5min，水洗3次去除未连接的寡核苷酸。
试验例
(1)为确保各阶段纳米粒子的形态与性质，我们对各阶段的纳米粒子分别进行了透射电子显微镜成像实验(图2是中空二氧化锰纳米粒子，图3是负载3种寡核苷酸的二氧化锰纳米粒子)；N2吸附/脱附实验(图4是H-M-pp的表面积及介孔大小表征图)；动态光散射实验(图5是各阶段纳米粒子的Zeta电位表征图)
(2)为确保设计的二氧化锰载药平台能准确地靶向肺癌细胞，我们对其进行了如下操作表征：
将浓度为2×104个/mL的A549细胞置于35mm的玻璃纽扣培养皿中，在37℃，CO2浓度为5％的孵育箱中孵育24h，待细胞成长到所需密度时，加入10ul的H-M-pp/C&D+3纳米粒子孵育不同的时间段后加入Hoechest细胞核染色剂，用来标定细胞核的位置，共孵育30min后，用PBS冲洗3次将残留的染色剂去除，加入1mL的PBS，对细胞进行共聚焦成像。图4中分别是A549细胞与纳米药物共孵育1h，4h，6h，8h的共聚焦成像图，与此同时，我们拍摄了4个通道下细胞的成像图片如图6所示。通过对比我们获得的信息有：药物能够成功的进入细胞内部；随着共孵育时间的增长，细胞摄入的药物量也增多。
(1)细胞毒性试验
在96孔板中加入100μL浓度为2×105个/mL的A549细胞，置于37℃，CO2浓度为5％的孵育箱中孵育12h，并设置空白对照组(将只加培养液与CCK-8的孔作为对照组用字母“B”表示；将加入细胞悬液和CCK-8的孔作为空白组用字母“P”表示；将实验组用字母“S”表示)。加入5μL不同种类的待试验药品，再将培养板置于孵育箱中孵育2h，4h，6h，8h。再弃掉细胞培养液，加入100μL新的培养液与此同时加入10μLCCK-8溶液，继续将培养板在孵育箱中孵育1h，用酶标仪测定在450nm下的吸光度。
最后运用以下公式对细胞的存活率进行计算：细胞存活率％＝[S-B]/[P-B]×100％。结果如图7，8所示，结果表明结合了光动力治疗、化学药物治疗、免疫治疗等的纳米粒子随着时间的增加更能对肿瘤细胞起到抑制效果。
(2)小鼠活体实验
首先建立A549细胞小鼠皮下荷瘤模型，肿瘤长到约为100mm3是开始对小鼠进行治疗。共设置四组实验：组1，对照组，注射PBS；组2，实验1组，注射H-M-pp/C&D并给与激光照射肿瘤；组3，实验2组，注射H-M-pp/C&D+3；组4，实验3组，H-M-pp/C&D+3并给与激光照射肿瘤。每组注射药物的剂量均为30μL，每隔一天注射一次，并每隔一天测小鼠肿瘤大小与小鼠体重情况并进行汇总(图9记录小鼠肿瘤大小的变化情况；图10是小鼠在治疗过程中体重的变化情况)。在治疗21天后对小鼠进行解剖并取出肿瘤进行拍照如图11。由以上数据我们可以看到，四组小鼠的体重都未出现明显的变化基本维持在18～20g之间，其中注射PBS的对照组小鼠肿瘤生长速度非常快，在治疗结束时小鼠的肿瘤比未治疗钱增大了近10倍；而注射H-M-pp/C&D+3并给予激光照射的小鼠肿瘤大小基本没变，维持在100mm3左右。在肿瘤解剖的对比图上我们也可以看出，实验3组的治疗效果非常的明显。
接下来，我们对四组小鼠的肿瘤进行H&E染色分析和Tunel分析(1号为注射PBS的对照组；2号为H-M-pp/C&D+L组；3号为H-M-pp/C&D+3组；4号为H-M-pp/C&D+3+L组)，分析结果如图12，，13所示。图12中实验3组较对照组及其他实验组肿瘤细胞形态迫害更严重。图13中实验3组的凋亡细胞数较前三组实验要多的多，所以也更验证了实验3组小鼠注射的药物对肿瘤细胞有治疗效果。
综上所述，设计研究的中空二氧化锰作为载药平台，负载多种抗癌药物联合光动力治疗、化学药物治疗、基因治疗和免疫治疗多种治疗手段，并赋予纳米粒子靶向肺癌的特异性，并且二氧化锰改善肿瘤的乏氧环境同时反应产生锰离子可被肾脏排出，对机体无损害，实现了六效合一的治疗效果，对肿瘤细胞进行精准抗击。中空介孔二氧化锰纳米粒子在本实验中的作用：(1)包覆运载光敏剂Ce6和化学药物DOX；(2)连接运输寡核苷酸链S6-Aptamer、miR-145、CPG；(3)消耗肿瘤细胞的过氧化氢，为光动力治疗提供氧气，改善癌细胞的乏氧微酸环境。采用共聚焦成像对肺癌细胞对药物摄入情况进行分析，通过细胞毒性实验对药物进行毒性测验，并通过小鼠体内实验，小鼠肿瘤H&E和Tunel染色分析对药物进行活体研究，我们通过对各组小鼠肿瘤大小及肿瘤组织分析等的结果得出该抗癌药物对癌症治疗有很好的效果，必将具有非常广阔的应用前景。

Claims (2)

1.一种非小型肺癌靶向治疗药物的制备方法，其特征在于，由以下步骤制备而成：
(1)取5ml浓度为2mg/ml的中空介孔二氧化锰纳米粒子溶液，在100KHZ超声的情况下加入10mL的聚烯丙氨酸盐，搅拌2h，反应结束后，离心，水洗3次；
(2)将步骤(1)所得溶液在100KHZ超声的情况下逐滴加入到10mL的聚丙烯酸中，搅拌2h，反应结束后进行离心水洗，获得表面连接有羧基的肿瘤联合治疗药物载体；
(3)将步骤(2)所得表面连接有羧基的肿瘤联合治疗药物载体溶于50ml水中，获得浓度为0.2mg/ml的H-M-pp溶液，称取H-M-pp溶液按浓度比1:4:1.25与光敏剂二氢卟吩e6和阿霉素混合反应12h，反应结束后离心水洗去除未加载的药物；
(4)活化寡核苷酸5’连接的氨基，取80ul浓度为0.2mg/ml的H-M-pp分别添加20ul浓度为1×10-8mol/L的Aptamer-S6r、CPG和miR-145，在37℃下反应12h，结束后，在6000rpm离心5min，水洗3次去除未连接的寡核苷酸；
所述中空介孔二氧化锰纳米粒子的制备方法如下：
(1)将无水乙醇25ml、超纯水0.5ml、氨水1.8ml混合加入圆底烧瓶中，在油浴锅里加热至40℃，加入0.75ml原硅酸四乙酯，150rpm下搅拌12h，得二氧化硅；
(2)在100KHZ超声环境下向二氧化硅中加入47ml浓度为0.02mol/L的高锰酸钾，并超声6h，反应结束后，14800rpm离心10min，水洗3次，得二氧化锰包裹的二氧化硅纳米粒子；
(3)20ml浓度为2mol/L的碳酸钠溶液，与二氧化锰包裹的二氧化硅纳米粒子混合加入圆底烧瓶中，油浴锅中150rpm转速60℃反应12h，反应结束后，14800rpm离心10min，水洗3次，得到中空介孔二氧化锰纳米粒子。
2.根据权利要求1所述非小型肺癌靶向治疗药物的制备方法，其特征在于，所述表面连接有羧基的肿瘤联合治疗药物载体为直径90-110nm的中空腔体；
载体最内层为表面介孔且中空结构的二氧化硅纳米笼，同时连接羧基基团；
该二氧化硅纳米笼表面修饰一层二氧化锰纳米粒子。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113318236B (zh) * 2021-05-17 2022-07-08 浙江大学杭州国际科创中心 一种MSNAs-TPP多功能纳米颗粒及其制备方法、应用
CN115429772B (zh) * 2021-06-01 2024-04-30 复旦大学 一种调控脑缺血微环境的巨噬细胞膜包被二氧化锰纳米粒
CN113332311A (zh) * 2021-06-01 2021-09-03 山东第一医科大学(山东省医学科学院) 一种锰离子-CpG寡核苷酸纳米颗粒的制备方法及应用
CN114788862B (zh) * 2022-02-28 2024-01-26 上海市第十人民医院 一种锰基放疗增敏剂及其制备方法和应用
CN114940512B (zh) * 2022-05-18 2023-06-16 西南医科大学 一种中空二氧化锰纳米粒及其制备方法、用途
CN115054685A (zh) * 2022-05-26 2022-09-16 湖南中医药大学 一种超声辅助的二氧化锰疫苗递送系统及其制备方法与应用
CN115770295A (zh) * 2022-12-09 2023-03-10 哈尔滨医科大学 开放式中空二氧化锰基纳米酶复合材料的制备方法及应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107349211A (zh) * 2017-07-26 2017-11-17 苏州大学 一种空心MnO2复合纳米材料、其制备方法及其应用

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009137660A2 (en) * 2008-05-07 2009-11-12 Abraxis Bioscience, Llc Enhancement of drug therapy by mirna

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107349211A (zh) * 2017-07-26 2017-11-17 苏州大学 一种空心MnO2复合纳米材料、其制备方法及其应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
基于纳米材料的CpG 核酸药物载运系统;魏敏 等;《科学通报》;20140120;第59卷(第2期);摘要、第134页左栏最后一段 *
李晓芳.靶向制剂.《2019国家执业药师考试教材精讲 药学专业知识 1 第2版》.李晓芳,2019,第82-83页. *
焦桂梅 等.核酸适配体（Aptamer）与肿瘤靶向治疗.《常见肿瘤的诊断与治疗》.吉林科学技术出版社,2019,第124页. *

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