CN111141855A - 一种对乙酰半胱氨酸口服溶液中甜蜜素的检测方法 - Google Patents

一种对乙酰半胱氨酸口服溶液中甜蜜素的检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及药品检测分析领域，具体为一种高效液相色谱法测定乙酰半胱氨酸口服溶液中甜蜜素含量的方法。此方法克服了现有技术操作繁琐与精确性低的缺陷，以pH为2.5‑3.5的磷酸二氢铵缓冲液与乙腈为流动相；在波长195‑205nm处进行检测；流速0.8‑1.2ml/min；进样体积10‑50μL；柱温25‑35℃。该检测方法操作简单，能够实现对实际样品中甜蜜素的快速检测，并且检测结果准确性高，重复性好，此外此方法的最低检测浓度，精密度，溶液稳定性，耐用性均可以满足实际生产的需要。

Description

一种对乙酰半胱氨酸口服溶液中甜蜜素的检测方法
技术领域
本发明涉及药品检测分析领域，尤其是对乙酰半胱氨酸口服溶液中甜蜜素含量的检测方法。
背景技术
乙酰半胱氨酸具有黏痰溶解作用，是一种疗效好，安全性高的治疗呼吸道疾病的祛痰药，乙酰半胱氨酸口服溶液是一种专门为儿童上呼吸道感染而使用的临床用药，原研制剂由意大利赞邦(ZAMBON ITALIA S.R.L)研发和生产，在国内目前还没有上市，为改善口味，添加了一种添加剂为甜蜜素。
甜蜜素(化学名为环己基氨基磺酸钠，又名环拉酸钠)是食品和药品生产中常用的添加剂，其分子式为C6H13NO3S·Na，相对分子质量201.22，其甜度是蔗糖的30～40倍，消费者如果经常食用甜蜜素含量超标的饮料或其他食品和药品，研究表明，过量摄入甜蜜素具有潜在的致癌、致畸风险，能对肝脏和神经系统造成危害，特别是对代谢排毒能力较弱的老人、孕妇、儿童危害更明显。在我国现行GB 2760-2014《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》明确规定了甜蜜素使用范围和限量要求，目前允许其在冷冻饮品、水果罐头、果酱、蜜饯凉果、凉果类、话化类、果糕类、腌渍的蔬菜、熟制豆类、腐乳类、面包、糕点、饼干、复合调味料、饮料类、配制酒等食品中以及溶液类药品中限量使用。但是，为了改善产品的口感，社会上仍然存在过量违规添加甜蜜素的现象。因而，对食品和药品中甜蜜素含量的监测成为监管的重要项目。
对于甜蜜素的检测，目前主要包括电位滴定法、离子色谱法、液相色谱法、气相色谱法、气质联用法、液质联用法、液相串联质谱法等。其中最常用的检测方法为气相色谱法和液相色谱法，最新的国标(GB5009.97-2003)采用气相色谱法，然而目前的方法中所采用的仪器大多较昂贵，并且费时费力，不利于大规模地应用于实际生产中。
在现有的技术中，专利申请CN 103105445 A公开了一种液相色谱检测食品添加剂中甜蜜素的方法，采用液相色谱配紫外检测器对衍生化后的甜蜜素标准品进行检测，该甜蜜素检测方法具有操作简便、灵敏快速、成本低廉的特点，但是该专利申请仍然存在着操作步骤过于繁琐、耗时、而且衍生化过程中会有很多干扰因素；此外，专利申请CN 105628818A公开了一种采用高效液相色谱仪对饲料添加剂中的六种甜味剂进行检测的方法，所述的六种甜味剂为A-K糖、糖精钠、甜蜜素、阿斯巴甜、纽甜和新甲基橙皮苷二氢查耳酮NHDC；该专利申请的技术方案省时省力、价格低、能够快速地对饲料添加剂中的甜蜜素进行定性和定量检测。但该专利申请中所述的方案操作步骤过于繁琐、而且所述的方案专属性和灵敏性较差，既不利于快速分析又无法获得良好的准确性，这些方面有待进一步提高。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，克服现有技术的操作繁杂，测试不准确的缺陷，提供一种采用高效液相色谱，免去衍生化处理过程，操作简单，灵敏性高，价格低廉，准确快速地检测甜蜜素的方法。
为实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：一种对乙酰半胱氨酸口服溶液中甜蜜素的检测方法，该法以磷酸二氢氨溶液和乙腈分别作为流动相A和B，检测波长为195-205nm。
优选地，检测所用的色谱柱为Agilent ZORBAX SB-AQ。
优选地，所述色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶作为填充剂。
优选地，所述色谱柱的柱温为25-35℃，优选30℃。
优选地，所述检测波长为200nm。
优选地，所述磷酸二氢氨溶液浓度为4.0-6.0g/L。
优选地，所述的磷酸二氢氨溶液是由稀磷酸调pH至2.5-3.5，用0.45μm滤膜过滤所得。
优选地，流动相A为1L水中含磷酸二氢氨5.0g，其pH值为3。
优选地，流动相A和B的流速为0.8-1.2ml/min。
进一步优选地，流动相A和B的流速为1.0ml/min。
优选地，进样量为10-50μL。
进一步优选地，进样量为25μL。
流动相A和B的混合起始比例为100:0，甜蜜素出峰之后流动相A和B的比例调整为20:80以洗脱样品溶液中的其它杂质。
进一步优选地，一种对乙酰半胱氨酸口服溶液中甜蜜素的检测方法，包括如下步骤：
高效液相色谱参数的设置：
色谱柱采用Agilent ZORBAX SB-AQ色谱柱，检测器为紫外检测器，检测波长为195-205nm，填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，柱温为25-35℃，流速为0.8-1.2ml/min，流动相A为磷酸二氢氨溶液，浓度为4-6g/L，pH为2.5-3.5，流动相B为乙腈，进样量为10-50μL。流动相A和B的混合起始比例为100:0，甜蜜素出峰之后，流动相A和B的比例调整为20:80以洗脱样品溶液中的其它杂质；
待测样品的准备：
精密移取乙酰半胱氨酸口服液1.0mL至20mL量瓶中，用流动相A稀释至刻度，混匀即可；
对照溶液的准备：
精密称取甜蜜素对照品67.0mg至100mL量瓶中，用流动相A溶解并稀释至刻度，混匀，作为母液。精密移取母液2.0mL至20mL量瓶中，用流动相A稀释至刻度，混匀即可；
标准曲线的测定：
将甜蜜素分别稀释到浓度为40.2μg/L，53.6μg/L，67.0μg/L，80.4μg/L，93.8μg/L系列标准溶液，进行分析测定，以色谱峰面积与相应浓度，绘制标准曲线回归方程；
对照溶液和待测样品的测定：
对对照溶液以及待测样品中的甜蜜素进行检测，得到对照溶液图谱和甜蜜素的仪器响应值谱图，根据标准曲线计算得出待测样品中甜蜜素含量。
本发明通过高效液相色谱，建立了一种对乙酰半胱氨酸口服溶液中的甜蜜素含量进行检测的方法，该发明操作简单，能够实现快速分析。通过对液相色谱的参数设置，标准曲线的绘制，检出限，回收率，精密度的测定，定性和定量分析可得，该方法专属性强，耐用性好，灵敏度高，以及高精密度和高准确性的特点，能够实现甜蜜素的准确快速地检测。
附图说明
图1为甜蜜素的标准曲线图；
图2为甜蜜素对照溶液图谱；
图3为甜蜜素待测样品溶液图谱；
图4为甜蜜素回收率样品溶液图谱；
图5为空白溶液图谱；
具体实施方式
结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案作进一步清晰地描述，所描述的实施例只是本发明的一部分，用于解释本发明，但不用于限定本发明，因此本领域其他技术人员在没有创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，均属于本发明的保护范围。
实施例1
高效液相色谱参数的设置：
色谱柱采用Agilent ZORBAX SB-AQ色谱柱，检测器为紫外检测器，检测波长为200nm，填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，柱温为30℃，流速为1.0ml/min，流动相A为磷酸二氢氨溶液，浓度为5g/L，pH为3.0，流动相B为乙腈，进样量为25μL。流动相A和B的混合起始比例为100:0，甜蜜素出峰时间在10min，之后流动相A和B的比例调整为20:80以洗脱样品溶液中的其它杂质。
待测样品的准备：
精密移取乙酰半胱氨酸口服液1.0mL至20mL量瓶中，用流动相A稀释至刻度，混匀即可。
对照溶液的准备：
精密称取甜蜜素对照品67.0mg至100mL量瓶中，用流动相A溶解并稀释至刻度，混匀，作为母液。精密移取母液2.0mL至20mL量瓶中，用流动相A稀释至刻度，混匀即可。
标准曲线的测定：
将甜蜜素分别稀释到浓度为40.2μg/L，53.6μg/L，67.0μg/L，80.4μg/L，93.8μg/L系列标准溶液，进行分析测定，以色谱峰面积与相应浓度，绘制标准曲线回归方程，结果见图1。
对照溶液和待测样品的测定：
对对照溶液以及待测样品中的甜蜜素进行检测，得到对照溶液图谱和甜蜜素的仪器响应值谱图，分别如图2和图3所示，根据标准曲线计算得出待测样品中甜蜜素含量。
空白溶液的图谱如图5所示。
精密度的测定：
取乙酰半胱氨酸口服液(ZAMBON ITALIA S.R.L，批号：20037842)，用流动相A稀释20倍后测定，平行测定六份，如表1所示。
表1
Figure BDA0002372448590000041
回收率的测定：
向不含甜蜜素的乙酰半胱氨酸口服溶液中分别添加1.06mg/mL、1.32mg/mL、1.59mg/mL的甜蜜素1mL，用流动相A稀释20倍后，按照所建立的方法进行测定，每个浓度测定3份，甜蜜素回收率样品溶液测定如图4所示，计算回收率，结果见表2。
表2
Figure BDA0002372448590000051
实施例2
高效液相色谱参数的设置：
色谱柱采用Agilent ZORBAX SB-AQ色谱柱，检测器为紫外检测器，检测波长为200nm，填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，柱温为35℃，流速为1.2ml/min，流动相A为磷酸二氢氨溶液，浓度为6g/L，pH为3.5，流动相B为乙腈，进样量为50μL。流动相A和B的混合起始比例为100:0，甜蜜素出峰时间在8min，之后流动相A和B的比例调整为20:80以洗脱样品溶液中的其它杂质。
待测样品的准备：
精密移取乙酰半胱氨酸口服溶液1.0mL至20mL量瓶中，用流动相A稀释至刻度，混匀即可。
对照溶液的准备：
精密称取甜蜜素对照品67.0mg至100mL量瓶中，用流动相A溶解并稀释至刻度，混匀，作为母液。精密移取母液2.0mL至20mL量瓶中，用流动相A稀释至刻度，混匀即可。
标准曲线的测定：
将甜蜜素分别稀释到浓度为40.2μg/L，53.6μg/L，67.0μg/L，80.4μg/L，93.8μg/L系列标准溶液，进行分析测定，以色谱峰面积与相应浓度，绘制标准曲线回归方程。
待测样品和对照溶液的测定：
对对照溶液以及待测样品中的甜蜜素进行检测，得到对照溶液图谱和甜蜜素的仪器响应值谱图，根据标准曲线计算得出待测样品中甜蜜素含量。
精密度的测定：
取乙酰半胱氨酸口服溶液(ZAMBON ITALIA S.R.L，批号：20037842)，用流动相A稀释20倍后测定，平行测定六份，如表3所示。
表3
Figure BDA0002372448590000061
回收率的测定：
向不含甜蜜素的乙酰半胱氨酸口服溶液中分别添加1.06mg/mL、1.32mg/mL、1.59mg/mL的甜蜜素1mL，用流动相A稀释20倍后,按照所建立的方法进行测定，每个浓度测定3份，计算回收率，结果见表4。
表4
Figure BDA0002372448590000062
实施例3
高效液相色谱参数的设置：
色谱柱采用Agilent ZORBAX SB-AQ色谱柱，检测器为紫外检测器，检测波长为200nm，填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，柱温为25℃，流速为0.8ml/min，流动相A为磷酸二氢氨溶液，浓度为4g/L，pH为2.5，流动相B为乙腈，进样量为10μL。流动相A和B的混合起始比例为100:0，甜蜜素出峰时间在12min，之后流动相A和B的比例调整为20:80以洗脱样品溶液中的其它杂质。
待测样品的准备：
精密移取乙酰半胱氨酸口服溶液1.0mL至20mL量瓶中，用流动相A稀释至刻度，混匀即可。
对照溶液的准备：
精密称取甜蜜素对照品67.0mg至100mL量瓶中，用流动相A溶解并稀释至刻度，混匀，作为母液。精密移取母液2.0mL至20mL量瓶中，用流动相A稀释至刻度，混匀即可。
标准曲线的测定：
将甜蜜素分别稀释到浓度为40.2μg/L，53.6μg/L，67.0μg/L，80.4μg/L，93.8μg/L系列标准溶液，进行分析测定，以色谱峰面积与相应浓度，绘制标准曲线回归方程。
待测样品和对照溶液的测定：
对对照溶液以及待测样品中的甜蜜素进行检测，得到对照溶液图谱和甜蜜素的仪器响应值谱图，根据标准曲线计算得出待测样品中甜蜜素含量。
精密度的测定：
取乙酰半胱氨酸口服液(ZAMBON ITALIA S.R.L，批号：20037842)，用流动相A稀释20倍后测定，平行测定六份，如表5所示。
表5
Figure BDA0002372448590000071
回收率的测定：
向不含甜蜜素的乙酰半胱氨酸口服液中分别添加1.06mg/mL、1.32mg/mL、1.59mg/mL的甜蜜素1mL，用流动相A稀释20倍后，按照所建立的方法进行测定，每个浓度测定3份，计算回收率，结果见表6。
表6
Figure BDA0002372448590000072
Figure BDA0002372448590000081
耐用性和最低检测浓度的考察：
(1)该方法在柱温30±5℃，流速1.0±0.2ml/min,波长200±5nm和流动相pH3.0±0.5的条件下所测定的甜蜜素结果均在98.0％-102.0％之间，说明该方法具有较好的耐用性。
(2)通过调整进样量为50μL，该方法的最低检测限度可以达到0.002mg/mL的级别，可以满足绝大数产品的检测需求。
综上所述，本发明的乙酰半胱氨酸口服溶液中甜蜜素的检测方法，具有操作简单，样品不需要特别的衍生化处理，可以直接进行测定，既节约成本又环保，同时该方法专属性强，耐用性好，灵敏度高，以及高精密度和高准确性的特点，能够实现甜蜜素的准确快速地检测，更好地满足实际检测的需要。
上述详细说明是针对本发明优选的可行实施例的具体说明，该实施例并非用以限制本发明的专利范围，凡未脱离本发明所为的等效实施或变更，均应包含于本发明技术方案的范围内。

Claims (10)

1.一种采用高效液相检测甜蜜素含量的方法，其特征在于：以磷酸二氢氨溶液和乙腈分别作为流动相A和B，检测波长为195-205nm。
2.根据权利要求书1所述检测甜蜜素含量的方法，其特征在于，检测波长为200nm。
3.根据权利要求1所述检测甜蜜素含量的方法，其特征在于，色谱柱采用的AgilentZORBAX SB-AQ，以十八烷基硅烷键合硅胶作为填充剂，柱温为25-35℃，优选30℃。
4.根据权利要求1所述检测甜蜜素含量的方法，其特征在于，磷酸二氢氨溶液浓度为4.0-6.0g/L。
5.根据权利要求1所述检测甜蜜素含量的方法，其特征在于，其中的磷酸二氢氨溶液是由稀磷酸调pH至2.5-3.5，用0.45μm滤膜过滤所得。
6.根据权利要求书4或者5所述检测甜蜜素含量的方法，其特征在于，流动相A磷酸二氢氨的浓度为5.0g/L，其pH值为3。
7.根据权利要求1所述检测甜蜜素含量的方法，其特征在于，流动相A和B的流速为0.8-1.2ml/min，优选1.0ml/min。
8.根据权利要求书1所述检测甜蜜素含量的方法，其特征在于，进样量为10-50μL。
9.根据权利要求书8所述检测甜蜜素含量的方法，其特征在于，进样量为25μL。
10.根据权利要求书1-5任一项所述检测甜蜜素含量的方法，其特征在于，流动相A和B的混合起始比例为100:0，甜蜜素出峰之后，流动相A和B的比例调整为20:80。
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