CN111132705A

CN111132705A - 一种含有交联透明质酸以及阿替卡因的无菌注射用组合物

Info

Publication number: CN111132705A
Application number: CN201880050508.9A
Authority: CN
Inventors: 塞缪尔·加瓦尔·莫利亚德; 贝娜迪特·文森特·陶津
Original assignee: Kh Medtech Sarl
Current assignee: Kh Medtech Sarl
Priority date: 2017-05-29
Filing date: 2018-03-02
Publication date: 2020-05-08
Also published as: WO2018220283A1; WO2018220288A1; EP3634510A1

Abstract

本发明的涉及含有交联透明质酸或其盐以及阿替卡因或其盐的水凝胶形式的无菌注射用组合物，所述无菌注射用组合物的制备方法，所述无菌注射用组合物在美容和医学领域的用途，在美容和医学领域中通过注射所述无菌注射用组合物进行治疗的方法。

Description

一种含有交联透明质酸以及阿替卡因的无菌注射用组合物

本发明的主题是：

-一种含有交联透明质酸或其盐以及阿替卡因或其盐的水凝胶形式的无菌注射用组合物，

-一种所述无菌注射用组合物的制备方法，

-一种所述无菌注射用组合物在美容和医学领域中的用途，

-在美容和医学领域中通过注射所述无菌注射组合物进行治疗的方法。

透明质酸是通过重复由D-葡萄糖醛酸和N-乙酰基葡糖胺组成的二糖单元形成的多糖。其具有线性结构，没有物种特异性。透明质酸广泛存在于人类和动物生物体内，在其中发挥多种生物功能，例如控制水合率或维持体液或组织的粘弹性。发现其特别是在滑液、眼睛玻璃体和真皮中的浓度较高。一个70kg的人有约15g的透明质酸，其中一半包含在皮肤中，并且随着年龄的增长而减少。

透明质酸水凝胶已为人所知，并且多年来已广泛用于美容和医学领域。这些凝胶通常主要用于注射：

-在眼科手术期间，注射到眼睛中，以维持眼内空间并保护眼组织，

-在骨关节炎情况下，注射到关节中，以补充不足的滑液并暂时恢复所述生物液的软骨保护特性，

-注射到皮内或皮下，以填充皱纹或充实面部或身体某些部位的体积。

透明质酸在生物体内的半衰期很短(不到1周)。

在诸多美容和医学应用中，它以其天然形式注射到患者体内的，也就是说，它没有经过交联和/或化学改性。

在其他应用中，它以交联的稳定形式施用于患者。交联可以显著提高透明质酸的体内寿命(也称为持久性)，而且交联还可以通过使透明质酸更具弹性来改变其机械和流变特性，从而在透明质酸被注入到目标组织中时，增强其体积充实的能力。因此，通过交联改性，基于交联透明质酸的水凝胶具有例如可维持数月的皱纹填充能力。

由从业人员施用产品期间，交联透明质酸注射通常会使受治患者同时产生疼痛感。实际上，在大多数情况下，在组织(真皮、皮下组织等)或体液(滑液、眼房水等)中注射具有高粘度水凝胶这一行为，均会导致注射过程中或注射后数分钟内，产生轻到中度的疼痛感。为了减轻这种痛苦，特别是在美容操作中，现今用于皱纹填充的基于交联透明质酸的大多数注射用产品(

等)均含有利多卡因(一种局部麻醉剂)，更确切地说是浓度为0.3％(3mg/mL)的盐酸利多卡因。如过去10年间各种临床研究所表明，与不含利多卡因的产品相比，在基于交联透明质酸的凝胶中添加利多卡因，能够显著改善受治患者的舒适度(减轻疼痛)，这无疑使其成为当今美容填充产品市场上的标准治疗方案。

鉴于交联透明质酸在美容和医学领域所扮演的重要角色(全世界每年实行数百万次注射)，本领域技术人员正在不断寻求改善基于交联透明质酸的注射用产品的安全性和性能。本领域技术人员还力求提供随时间推移而稳定的无菌注射用产品，而众所周知的是，在基于透明质酸的注射组合物中添加麻醉剂活性成分，如利多卡因，会使活性成分变得不稳定。在无菌注射用组合物的制备过程中以及该组合物的有效期内，发现其具有不稳定性；为了使该组合物能够施用于人，必须抑制该不稳定性。

具体地，本发明旨在提出：

-一种基于透明质酸或其盐，以及局部麻醉剂阿替卡因或其盐的水凝胶形式的无菌注射用组合物，使其在用于美容和医学领域时，与基于交联透明质酸并含有利多卡因的现有注射产品相比，在安全性(副作用低小化)以及性能(疗效最大化)上得到显著改善。

-一种无菌注射用组合物，其中，麻醉剂阿替卡因或其盐在组合物制备过程中及其整个有效期内是稳定的，也就是说在室温下的稳定期通常为24个月或更长，从而满足产品安全性的要求，同时又能够使该产品可以在所有目标销售国家/地区合法注册。

因此，在这样的背景下，本发明公开了一种方案，该方案提出一种稳定的组合物，其中在本发明的特定条件下使用阿替卡因来替代利多卡因，从而能够显著改善基于交联透明质酸并含有麻醉剂的注射用产品的安全性，其中该阿替卡因是一种局部麻醉剂，其毒理学特性明显优于利多卡因(与利多卡因相比，机体对阿替卡因麻醉剂的代谢速度更快，而不会像利多卡因那样产生高毒性代谢产物，等)，另外还能够提供一种临床作用更好的组合物(麻醉剂起效所需时间更短，麻醉剂功效和作用时间均优于利多卡因，等)。这些主要优点以及本说明书中强调和证明的其他诸多优点，使得这种新型无菌注射用组合物成为注射交联透明质酸和麻醉剂的可选方案，其不但具有更优的性能，并且对于每年数百万接受这类产品治疗的患者来说，还具有更高的安全性。

因此，根据本发明的第一方面，本发明涉及一种水凝胶形式的新型无菌注射用水质组合物，其随时间推移是稳定的，其中含有交联透明质酸或其盐以及局部麻醉剂阿替卡因或其盐。

根据本发明，该组合物含有透明质酸或其盐，尤其是其生理学上可接受的盐，例如钠盐、钙盐、锌盐、钾盐，有利地为钠盐。透明质酸可以是动物来源的或者通过细菌发酵来获得。其分子量可以为几道尔顿至几百万道尔顿，有利地约为0.01到500万道尔顿，更有利地约为0.1到350万道尔顿。

根据本发明的一个方面，该组合物可以基于透明质酸衍生物，即，基于通过化学或其他任何方法对透明质酸分子进行改性后所得到的分子。

根据本发明，透明质酸或其盐的总浓度在0.001到70mg/mL之间、0.01到50mg/mL之间、1到40mg/mL之间、5到35mg/mL之间、8到33mg/mL之间、9到30mg/mL之间、10到29mg/mL之间、11到28mg/mL之间、12到27mg/mL之间、13到26.5mg/mL之间，有利地在14到26mg/mL之间。

根据本发明，该组合物中所含的透明质酸为全部或部分交联，优选地根据现有技术所描述的交联技术进行交联。交联中涉及的交联剂可以相同或不同。它们通常为各类双官能或多官能交联剂，可以选自例如二乙烯基砜、双官能或多官能环氧化物、碳二亚胺和甲醛。优选地，选用双官能或多官能环氧化物类交联剂，特别是1,4-丁二醇二缩水甘油醚(BDDE)、二环氧辛烷或1,2-双-(2,3-环氧丙基)-2,3-乙烯。具体地优选使用BDDE。交联温度通常大约为15℃到60℃之间，交联时间通常为数小时，有利地在1小时以上，最长为约24小时。

尤其要注意的是，用于透明质酸链桥接的交联剂通常为毒性水平不可忽略的分子。交联后，应该在水凝胶纯化过程(通常通过生理盐水渗析)中尽量除去的残留交联剂(未与透明质酸反应的交联剂)，从而使注射用组合物对于患者来说具有可实现的最佳安全性。使用前述BDDE的情况下，发明人在所进行的研究中完全出乎意料地发现，灭菌后成品中的残留BDDE含量应该小于或等于10ppm，优选小于或等于5ppm，更优选小于或等于2ppm，以便最大程度地抑制阿替卡因在无菌注射用组合物制备过程中降解。因此，对于根据本发明的无菌注射用产品，其基于经BDDE交联的透明质酸，BDDE的残留浓度应该小于或等于10ppm，优选小于或等于5ppm，更优选小于或等于2ppm，这样能够获得稳定的组合物，并具有最高安全性。

根据本发明，透明质酸为全部或部分交联。因此，根据本发明的组合物有利地含有质量大于80％的交联形式的透明质酸以及质量小于20％的非交联形式的透明质酸。优选地，非交联形式的透明质酸的质量分数小于或等于成品中透明质酸总质量的15％。

根据本发明，该组合物的主要成分为水，因此根据本发明的新型组合物的性质为水性组合物或水凝胶。根据本发明的组合物中，水的质量含量大于总质量的51％，有利地大于总质量的60％，有利地大于总质量的70％，有利地大于总质量的75％，有利地大于总质量的80％，有利地大于总质量的85％。缓冲液尤其有利地用于在其整个有效期内更好地控制制剂的pH值和渗透压。例如，可以使用基于氯化钠和磷酸根的缓冲液。

根据本发明，无菌注射用组合物有利地具有一定的生理渗透压，即渗透压在200到400mOsm/kg之间。

尤其要说明的是，发明人的研究已经证实，根据本发明的水凝胶的pH值为该组合物的一个极为重要的因素。实际上，已经表明，pH值小于6.0时，产品灭菌过程中发现水凝胶的生物物理特性显著下降(用弹性模量G’表示凝胶的弹性的情况下)。另外，还表明，pH值大于7.9时，成品中发现白色颗粒，而pH值小于或等于7.9时则没有发现这些颗粒(经鉴别为阿替卡因)。因此，在本发明中，要求pH值大于或等于6.0且小于或等于7.9，从而获得具有最佳安全性和作用的稳定产品。有利地，根据本发明的无菌注射用组合物的pH值大于或等于6.2且小于或等于7.8。

根据本发明，该组合物含有任何对映体形式的局部麻醉剂阿替卡因。有利地，采用盐酸阿替卡因的形式，主要是因为其在水中具有良好的溶解度，因此在根据本发明的水性组合物中也具有良好的溶解度。

根据本发明，水凝胶中的阿替卡因浓度是均一的，并且为0.1到50mg/mL(即质量含量为0.01％到5％)，优选地为1到50mg/mL(即质量含量为0.1％到5％)，更优选地为2到45mg/mL(即质量含量为0.2％到4.5％)。根据本发明，在注射用于美容的情况下，可以有利地将其定为3mg/mL(即质量含量为0.3％)，也就是说，浓度等于基于交联透明质酸并含有利多卡因的注射用产品的规定麻醉剂浓度。在医学应用的情况下，例如在牙科手术中，可以有利地将其定为4％(即40mg/mL)。

发明人的研究表明，与交联透明质酸水凝胶中使用利多卡因的情况一样，阿替卡因在根据本发明的无菌注射用组合物中是游离状态的(也就是说，阿替卡因分子未与透明质酸共价结合)，并且这种局部麻醉剂能够从水凝胶中迅速释放(＝释放动力等同于利多卡因，这一点是令人意外的，因为与利多卡因相比，阿替卡因的脂溶度更高，导致分子释放更慢)，这样可以在对受治患者进行注射后更快地作用于植入部位的周围组织。

根据本发明，该组合物是无菌的。其根据现有技术中所述的技术进行灭菌。其有利地经过热灭菌，优选经过湿热灭菌(也称为高压蒸汽灭菌)。

优选地，湿热灭菌是在高于100℃的温度下进行的，有利地高于110℃，更有利地高于120℃。

通常，灭菌时间可以在几秒钟到几分钟之间。例如以下湿热灭菌循环：121℃下持续20分钟，或者125℃下持续7分钟，或者127℃下持续4分钟，或者130℃下持续3分钟。

尤其要注意的是，有利地选用热灭菌，这是因为其可以使选定组合物具有极高的无菌性，从而可以确保受治患者的安全性。

发明人的研究已经能够表明，在下述条件下，在根据本发明的组合物的热灭菌过程中，阿替卡因分子是稳定的，因此不会热解：

-产品中残留交联剂的浓度较低。使用BDDE的情况下，这些研究已经证明，灭菌后的BDDE残留浓度应该小于或等于10ppm，以便有效抑制根据本发明的无菌注射用组合物中阿替卡因的降解。

-组合物的pH值应该大于或等于6.0。实际上，如前所述，pH值小于6.0时会导致交联透明质酸水凝胶的生物物理特性显著下降，另外，pH值低于该值时，会在组合物灭菌过程中催化阿替卡因的降解；在产品有效期内贮存过程中产生不良催化作用，并且因此产生随时间推移变得不稳定的产物。

不希望束缚于某种解释的前提下，在本发明的特定条件下，pH值极有可能对组合物中透明质酸和阿替卡因之间的分子相互作用起主要作用，特别是通过影响氢键的致密网状结构来起作用，该氢键存在于两种分子之间，并且在根据本发明的无菌注射用组合物的制备过程中以及组合物的有效期内确保这两种分子的稳定性。

在这种情况下，要注意的是，发明人的研究已经表明，在本发明的条件下，该无菌注射用组合物在室温下贮存期间是稳定的。因此，根据本发明的无菌注射用组合物的关键参数的稳定性表明，该组合物能完全兼顾18到36个月的有效期，也就是说，该时间等于基于交联透明质酸并含有麻醉剂利多卡因的产品的有效期。

根据本发明，该组合物是可注射的。其优选地采用注射器或小药瓶包装，以便能够方便地通过针头或导管来施用。

根据本发明，基于交联透明质酸的无菌注射用组合物优选地为称为单相水凝胶的形式，而不是称为双相水凝胶的形式。

根据本发明，基于交联透明质酸的无菌注射用组合物在0.7Hz时的弹性G’有利地在10Pa到880Pa之间，优选20Pa到700Pa之间，优选30Pa到500Pa之间，更优选50Pa到400Pa之间。无论是用于美容还是医学用途，基于透明质酸的凝胶的粘弹性对于产品安全性和有效性来说都是必不可少的。在本发明的情况下，无菌注射用组合物在0.7Hz时下的弹性G’不应该小于10Pa，因为在这种特定情况下，它不能有效地填充组织，并且凝胶在受治部位处过度展开/扩散。根据本发明的无菌注射用组合物，在0.7Hz时的弹性G’不应大于880Pa，因为在这种情况下会出现：

-凝胶难以从细针头中挤出(必须用力推动注射器柱塞以挤出凝胶)，并且注射过程不规律，可能出现组合物严重不均匀而导致针头堵塞。

-凝胶外观坚硬，与周围软组织不协调，特别是其在组织中的触感会过于明显。

因此，具有这些特征的组合物(0.7Hz时的G’小于10Pa或大于880Pa)不能满足根据本发明的注射用组合物的高安全性和预期作用，因此将其排除在本发明的范围之外。

根据本发明的一个方面，除了透明质酸或其盐以及阿替卡因或其盐以外，根据本发明的组合物不含任何水溶性有机物。因此，在这种特定情况下，除了透明质酸和阿替卡因以外，该无菌注射用组合物不能含有其他水溶性有机分子，例如多元醇。

根据本发明的一个方面，根据本发明的组合物含有一种或多种天然或合成来源的活性物质，它们具有或不具有药理作用，例如抗炎剂、防腐剂、抗菌剂、抗真菌剂、抗癌剂、蛋白质、激素、脂肪酸、生物学上可接受的脂质，可以单独或组合使用。这些活性物质可以分散到水凝胶中，可以接枝到一种或多种水凝胶聚合物上，可以包含/包封到分散于水凝胶中的脂质体/类脂质体中，还可以包含/包封到分散于水凝胶中的其他材料中。

根据本发明的一个方面，根据本发明的组合物含有一种或多种生物来源的化合物，例如细胞、富集血小板、基因、DNA片段或生长因子。这些化合物优选地分散到水凝胶中，但是也可以接枝到一种或多种水凝胶聚合物上，可以包含/包封到分散于水凝胶中的脂质体/类脂质体中，还可以包含/包封到分散于水凝胶中的其他材料中。

根据本发明的一个方面，根据本发明的组合物含有聚合物，它们分散到水凝胶的交联基质中。实例包括多糖族的聚合物、聚酯、聚酸酐、聚磷腈、聚ε-己内酯、聚乳酸及其衍生物、聚乙烯酸、聚丙烯酰胺、N-乙烯基吡咯烷酮、生物学上可接受的丙烯酸聚合物及其衍生物。

根据本发明的一个方面，根据本发明的组合物含有矿物，它们分散到水凝胶的交联基质中。实例包括羟基磷灰石或磷酸三钙，例如β磷酸三钙。

根据本发明的一个方面，根据本发明的组合物可以与一种或多种其他物质混合，优选可能对机体存在有利作用的无菌物质，这些物质可以在向患者施用前即时添加。而该混合是由最终使用者，即由从业人员或有资质人员，根据适当的方法，使用一个或多个混合装置来完成的，从而获得令人满意的混合物并保持其无菌性。一个实例是最终用户将本发明的水凝胶与一种或多种化合物，如脂肪酸、脂类、活性物质、生物物质或矿物质进行混合：

-在两个容器(一个容器装有根据本发明的水凝胶，另一个容器装有需要分散到水凝胶中的化合物)之间进行来回混合，这些容器可以是例如注射器，

-同时挤出这两个容器(一个容器装有根据本发明的水凝胶，另一个容器装有需要分散到水凝胶中的化合物)中的内容物，以便在对患者施用前将不同化合物合并和/或混合到另一容器中。

本发明公开的新型无菌稳定注射用组合物的目的是，显著提高基于交联透明质酸并含具有局部麻醉剂的注射用产品的安全性和临床作用/功效，特别是在涉及麻醉效果方面提供了以下益处：

-与利多卡因相比，阿替卡因的麻醉作用起效更快、效力更强。这是由于阿替卡因的pKa(pKa＝7.8)低于利多卡因(pKa＝7.9)，而阿替卡因的脂溶度(49.5％)高于利多卡因(2.9％)(特别是由于阿替卡因分子中存在噻吩基团并且能够形成更多的分子间氢键)。这一点成为治疗过程中改善患者舒适度的显著优势。实际上，交联透明质酸的注射过程通常持续10到20分钟，能够在注射过程中使麻醉剂尽快起效，对于患者和从业人员而言都是至关重要的，这可以使操作在可能达到的最佳条件下完成。

-阿替卡因的细胞毒性水平低于利多卡因(获得最佳局部和全身安全性的关键所在)，例如Malet et al.,The comparative cytotoxic effects of different localanesthetics on a human neuroblastoma cell line,Anesth analg(各种局部麻醉剂对人神经母细胞瘤细胞系的对照细胞毒性作用，麻醉剂类似物),120(3):589-96,2015中描述的。

-机体对阿替卡因的代谢速度更快(＝清除时间更短)，这可能是因为分子中存在酯键。这一特性主要涉及产品的安全性，因为它可以降低受治患者体内阿替卡因全身毒性的风险，

-阿替卡因不会产生毒性代谢产物，这一特征成为其优于利多卡因的显著优势。实际上，利多卡因会产生代谢产物(这也是利多卡因原料的合成杂质，因此天然地存在于基于交联透明质酸并含有麻醉剂的成品中)，即2,6-二甲基苯胺(DMA)，其对机体有剧毒性(致癌分子)。不会产生像DMA这样的有毒代谢产物，而且其在机体内的清除时间较短，因此这意味着与利多卡因相比，阿替卡因在安全性方面具有相当显著的益处。这些因素在很大程度上解释了为什么在需要缓解疼痛的局部麻醉中(牙科手术时)，一般按4％的浓度来注射阿替卡因而通常不宜采用利多卡因，还解释了为什么用于相同的临床应用时其浓度应大于2％。这些益处可以是例如：

-在获得同等麻醉效果的前提下，与利多卡因相比，可减少所需阿替卡因麻醉剂的用量(并因此减少麻醉剂的潜在副作用，例如减轻注射后的发红程度)，

-对于2种活性成分，在麻醉剂浓度/剂量相同的条件下，与利多卡因相比，可提高麻醉剂的临床功效，

-与利多卡因相比，阿替卡因还被认为是一种作用时间更长的分子，这是因为已经证明阿替卡因的蛋白质结合率(95％)高于利多卡因(65％)。相比目前采用的方案，即采用基于透明质酸并含有利多卡因的产品，该优点适用于美容和医学方面的适应症，使得注射后止痛作用持续更长时间。

另外，发明人所进行的研究能够表明，根据本发明的无菌注射用组合物具有以下各种出乎意料的因素：

-对阿替卡因进行高压热灭菌过程中，该分子在根据本发明的基于交联透明质酸的组合物中比在生理盐水中更为稳定。该优点很关键，这是因为无论出于产品安全性的原因，还是考虑到含此类物质产品的相关法规要求，阿替卡因等活性成分都必须具有最佳的稳定性。不希望束缚于某种解释的前提下，可以假设透明质酸通过与活性成分形成氢键的致密网状结构来起到稳定剂的作用，这特别是有助于稳定分子的酯键(＝根据本发明的组合物的水性环境中，阿替卡因分子中最脆弱的化学键)。

-如前所述，无论是在制备过程中(尤其是在灭菌过程中)，还是组合物在室温下贮存期间，根据本发明的组合物的pH值都对阿替卡因的稳定性(和溶解度)以及交联透明质酸的稳定性起到主要作用。

-用于透明质酸链桥接的交联剂在无菌成品中应该是痕量状态(采用BDDE时应该小于10ppm-不希望束缚于某种解释的前提下，假设凝胶中残留BDDE的环氧官能团与阿替卡因的反应性官能团发生反应，从而引起活性成分不稳定)，这需要在灭菌前尽量除去交联剂，以避免在根据本发明的组合物热灭菌过程中以及在室温下贮存期间，催化阿替卡因的降解。

-在交联透明质酸凝胶中添加阿替卡因对其灭菌前流变性的影响可以忽略不计，但是在水凝胶加热灭菌后，可以看到明显的差异。另外，与本领域技术人员基于现有技术所述使用利多卡因或更广泛地使用氨基酰胺类局部麻醉剂的预期结果相反，阿替卡因与利多卡因一样，无法在热灭菌后获得具有高弹性(与不含麻醉剂的参比凝胶相比)的水凝胶，而是获得低弹性水凝胶。根据本发明的含阿替卡因凝胶所获得的这一特殊性质具有以下重要优点：

-获得预期流变特性的热灭菌时间更短，这对于此类组合物的工业生产来说有极为有利的一点(灭菌周期更短＝生产率和制造成本更低)，

-热灭菌时间更短，这样可以产生更少的小分子量透明质酸(透明质酸对热敏感，这意味着切断透明质酸链的时间与加热时间成正比)，已知这些小分子量透明质酸具有促炎作用，因此可能使受治患者产生不良影响，

-热灭菌时间更短，这样可以更少地破坏组合物中所含的非交联透明质酸(比交联透明质酸更脆弱)，并对交联透明质酸起到润滑剂的作用，从而可以获得更易于从细针头中挤出的产品，因此更便于从业人员使用，

-然而，由于根据本发明的组合物在热灭菌过程中的这种表现差异(＝灭菌时间更短)，所获得的流变/机械性能(粘弹性模量G’和G”的情况)和粘合性完全接近基于交联透明质酸并含有利多卡因的组合物，只要适当地调整灭菌时间(＝灭菌时间短于基于交联透明质酸并含有利多卡因的产品，并且确切灭菌时间取决于相关特定生物物理特性)即可。这些特性在文献中是被作为基于交联透明质酸的注射用产品的安全性和临床作用的关键因素来描述的(例如Sundaram et al.,Plast Reconst Surg,2013,132:5S-21S)。这一点特别有意义，因为它实现了向从业人员提供含有阿替卡因的注射用产品的可能性，即，产品特性接近目前已知的含利多卡因产品的特性，因此可用于治疗相同的适应症，同时具有更好的安全性和临床作用。

-根据本发明的无菌注射用组合物是稳定的(制备过程中和贮存期间)，并且完全兼顾到室温下18到36个月的有效期，而制剂中不含例如多元醇等稳定剂(现有技术中描述的用于改善基于透明质酸的组合物的稳定性的溶液)，

-对于根据本发明的组合物，尽管阿替卡因的溶解度高于与利多卡因，但阿替卡因的释放动力与基于交联透明质酸并含有利多卡因的产品的释放动力相当(一样快)。

另外，有意义的是，证实了根据本发明的无菌注射用组合物的以下相关协同作用：在本发明的条件下，在组合物制备过程中以及贮存期间(如前所述)，交联透明质酸对阿替卡因有稳定作用。由于具有高粘度，交联透明质酸还可以使阿替卡因保持在注射部位，从而使麻醉作用集中/局限在该部位(这样可以使麻醉更有针对性并且更有效)。由于具有抗氧化作用，因此阿替卡因分子能够通过捕获自由基(因此使它们无法通过切断透明质酸链来使其降解)并抑制周围组织炎症(特别是促使自由基产生的炎症)，在注射后最初几个小时(即机体自由基释放能力最强的时间段)“保护”受治部位的交联透明质酸，这样可以从植入开始时减少透明质酸的降解并因此使其在组织内保留更长时间。

根据本发明的第二个方面，本发明涉及前述无菌注射用组合物的制备方法。

根据本发明的组合物的制备方法，其特征在于包括以下连续步骤：

a)制备基于交联透明质酸或其盐的水凝胶

b)通过混合操作向水凝胶中加入阿替卡因

c)灭菌

步骤(a)通常从透明质酸溶解开始，然后利用交联剂对其进行交联，最后通常为对所得水凝胶进行纯化。

透明质酸交联步骤指能够使透明质酸通过共价键彼此桥接的步骤。通常，透明质酸交联步骤从交联剂与透明质酸接触开始，在本领域技术人员认为透明质酸链桥接反应动力已达到可以忽略的水平时结束。

通过水凝胶纯化可以在交联后除去所制备凝胶中的杂质，特别是交联剂残留。该纯化是根据本领域技术人员已知的技术进行的，例如通过渗析水浴、连续水流洗涤或沉淀。

基于交联透明质酸的水凝胶制备有利地是根据现有技术所述来完成的。实例包括专利申请WO 97/04012、WO 2004/092222、WO 2005/085329和WO 2009/071697来制造基于交联透明质酸的水凝胶。

步骤(b)在于向先前制备的基于交联透明质酸的水凝胶中添加阿替卡因(或其盐，尤其是盐酸阿替卡因)。

可以根据以下两种方案中的一种进行添加：

-阿替卡因以粉末形式添加到凝胶中，然后进行混合(添加期间和/或添加后)，以使分子在凝胶中混匀，

-阿替卡因以含活性成分的水溶液形式添加到凝胶中，然后进行混合(添加期间和/或添加后)，以使分子在凝胶中混匀，

尤其要注意的是，在阿替卡因添加过程中，可以向凝胶中添加碱(NaOH、KOH等)，以获得预期pH值，同时注意根据本发明的无菌注射用组合物的pH值不应超过7.9。碱有利地以水溶液的形式进行添加，并且优选地与阿替卡因添加同时进行和/或阿替卡因添加到水凝胶中之后进行。

阿替卡因添加的同时进行混合操作，以使活性成分(和碱)在水凝胶中混匀。该混合可以在添加过程中和/或添加之后进行。

混合操作是通过本领域技术人员已知的技术来完成的，例如通过在混合槽中进行机械混合。

混合可以在高于室温的温度下和/或高压和/或在超声条件下进行，以使组合物均质达到最佳。

步骤(c)在于通过本领域技术人员已知的技术对组合物进行灭菌；其中灭菌有利地通过高压蒸汽热湿灭菌来完成。

为了制造根据本发明的无菌注射用水性组合物，根据本发明的有利方法至少包括以下步骤：

-透明质酸水溶液制备

-透明质酸交联

-水凝胶纯化，利用通过在生理盐水中进行渗析

-通过混合操作向水凝胶中添加阿替卡因

-用注射器包装

-灭菌

根据本发明的第三个方面，本发明涉及前述新型无菌注射用组合物在人类或动物的美容或治疗应用中的用途。

根据本发明的无菌注射用水性组合物主要用于：

-充盈体积

-在某些组织内产生空间，从而有利于发挥其最佳功能

-更换生理液或缺陷组织

-刺激或促进组织再生

-滋润和保护组织

-提供可能对机体有益的物质，特别是活性物质和/或生物物质。

例如，该水凝胶可用于以下情况：

-皮内、粘膜或皮下注射用组合物制剂，用于改善肤质或填充皱纹或充盈面部或身体(苹果肌、下巴、嘴唇、鼻子等)，

-牙科用注射组合物制剂，例如用于填充牙周袋和/或刺激牙齿周围组织再生，

-眼内注射用组合物制剂，特别是用于白内障、青光眼、老花眼或玻璃体手术，

-用于整形外科或风湿病的关节内注射用组合物制剂，特别是在滑液缺乏情况下进行粘液补充，以治疗骨关节炎，还用于骨重建或软骨再生，

-泌尿科注射用组合物制剂，用于治疗尿失禁或大便失禁，

-内科或普通外科注射用组合物制剂，用于治疗纤维化或改善伤口愈合，

-注射用药物组合物制剂，能够针对各种医学应用实现活性物质和/或生物物质的控释。

根据本发明的第四个方面，本发明涉及通过注射前述无菌注射用组合物对人类或动物进行治疗的方法，旨在：

-治疗皮肤表面外观，特别是皮肤受损的情况下

-治疗时间流逝和/或由外部因素导致的皮肤老化迹象，所述外部因素可以是例如应激、空气污染、烟草或长时间暴露于紫外线(UV)

-治疗皮肤粘弹性和生物力学特性，特别是皮肤受损的情况下

-长期性填补皮肤体积缺陷，尤其是填充皱纹或充盈面部和身体

-使软骨再生

-治疗骨关节炎

-用于眼内手术，包括白内障摘除、人工晶状体植入和取出、角膜手术、青光眼手术、眼整形手术和眼肌手术

-充盈体积

-在某些组织内产生空间，从而有利于发挥其最佳功能

-更换生理液或缺陷组织

-刺激或促进组织再生

-滋润和保护组织

-提供可能对机体有益的物质，特别是活性物质和/或生物物质

例如可以考虑采用以下治疗方法，即通过向皮内和/或粘膜内和/或皮下组织注射前述无菌注射用组合物，改善人体面部和/或全身的肤质和/或填充皱纹或凹陷和/或充盈体积(苹果肌、下巴、嘴唇、鼻子等)。

实施例

下面将通过以下实施例，非限制性地描述本发明。

以下实施例中所用的透明质酸钠、盐酸利多卡因、盐酸阿替卡因以及所有其他化合物均具有较高纯度。

所用的磷酸盐缓冲液含有以下成分：每升注射制用水中含有8.5g NaCI、0.041gNaH₂P0₄二水合物、0.292g Na₂HP0₄二水合物。

凝胶中的阿替卡因浓度通过HPLC-UV测得，凝胶中的残留BDDE浓度通过HPLC-MS测得。

凝胶的流变特性(弹性模量G’的测量)是在25℃下，利用屈服应力流变仪(TAAR2000)以及间隙1000微米的4cm-2°锥/平面几何测量仪测得的。

实施例1：根据本发明的凝胶GEL1A和GEL1B以及凝胶GEL1C(对照品)的制备

称取1.27g透明质酸钠(NaHA)粉末，其分子量约为1.5MDa，含水量为8.2％，向其中加入12.9g的0.25N NaOH水溶液。使粉末水合1小时30分钟，同时定时用刮板手动混匀。将0.39g稀释5倍的0.25N 1,4-丁二醇二缩水甘油醚(BDDE)溶液加入到反应介质中，再机械混匀15分钟，然后在50℃的恒温水浴浸渍2小时30分钟。将含有HCl的磷酸盐缓冲液加入由此获得的交联物中，以使pH＝7.3、透明质酸浓度等于25mg/mL。在室温下使凝胶在该溶液中溶胀24小时，然后，用刮板手动混匀10分钟，再利用纤维素膜(截留阈值＝10000Da)，通过在磷酸盐缓冲溶液中渗析24小时对其进行纯化。用刮板对凝胶手动混合10分钟。所得凝胶即为REF1。REF1的透明质酸浓度为16.8mg/mL。

在60.0g凝胶REF1中，加入2.5g盐酸阿替卡因粉末，并用刮板对凝胶手动混合10分钟。所得含阿替卡因的凝胶即为REF1A。

在凝胶REF1A中，加入0.2N氢氧化钠(NaOH)溶液，直至pH值达到7.4。用刮板对凝胶手动混合10分钟。所得凝胶即为GEL1AA。

在凝胶GEL1AA中，再加入0.2N氢氧化钠(NaOH)溶液，直至pH值达到7.9。用刮板对凝胶手动混合10分钟。所得凝胶即为GEL1BB。

在凝胶GEL1BB中，再加入0.2N氢氧化钠(NaOH)溶液，直至pH值达到8.2。用刮板对凝胶手动混合10分钟。所得凝胶即为GEL1CC。

将凝胶GELIAA、GEL1BB、GEL1CC装入1mL塑料注射器，然后在121℃的高压蒸汽灭菌器中灭菌20分钟。灭菌后的凝胶即为GEL1A和GEL1B(＝根据本发明的凝胶)以及GEL1C，分别来自GELIAA、GEL1BB、GEL1CC。

灭菌后，凝胶GEL1A、GEL1B、GEL1C的pH值分别等于7.3、7.9、8.1。

实施例2：根据本发明的凝胶GEL1A和GEL1B以及凝胶GEL1C(对照品)的显微镜观察

对(在实施例1中制备得到的)GEL1A、GEL1B、GEL1C的光学显微镜(35倍放大率)观察表明，对于根据本发明的两种无菌注射用组合物GEL1A和GEL1B，未发现基于透明质酸(透明)的水凝胶中有白色颗粒，而对于组合物GEL1C，由于其pH值高于或等于7.9而不在本发明范围内，则发现白色颗粒，经鉴别为阿替卡因颗粒。

实施例3：根据本发明的凝胶GEL1A和GELID、凝胶GEL1E(对照品)以及透明质酸生理盐水溶液(对照品)中阿替卡因的稳定性

在实施例1中制备得到的凝胶REF1A中，加入0.2N HCl溶液，直至pH值达到6.2。用刮板对凝胶手动混合10分钟。所得凝胶即为GEL1DD。

在凝胶GEL1DD中，再加入0.2N HCl，直至pH值达到5.3。用刮板对凝胶手动混合10分钟。所得凝胶即为GEL1EE。

另外还利用40mg/mL盐酸利多卡因制备了灭菌前pH值为6.2(所制备溶液即为TP-AA)以及pH值为5.3(所制备溶液即为TP-BB)的磷酸盐缓冲液。

将凝胶GEL1DD、GEL1EE以及溶液TP-AA、TP-BB装入1mL塑料注射器，然后在121℃的高压蒸汽灭菌器中灭菌20分钟。灭菌后的凝胶即为GELID(＝根据本发明的凝胶)和GEL1E，分别来自GEL1DD和GEL1EE，而灭菌后的溶液即为TP-A和TP-B，分别来自TP-AA和TP-BB。

灭菌后，凝胶GELID和GEL1E的pH值分别等于6.0和4.9。

灭菌后，溶液TP-A和TP-B的pH值分别等于6.1和4.9。

通过HPLC-UV测得(实施例1和本实施例中制备得到的)以下产品灭菌前后的阿替卡因浓度：

上述含量测定表明，在灭菌过程中，在根据本发明的注射用组合物中，阿替卡因是稳定的。

这些含量测定还表明：

-在灭菌过程中，pH值对于阿替卡因的稳定性中起着重要作用。pH值低于6.0(不在本发明的范围内)意味着阿替卡因的降解，阿替卡因浓度更低(灭菌前后数值对比)就证明了这一点，另外阿替卡因降解产物的峰面积增大也证明了这一点。

-与不含透明质酸的磷酸盐缓冲溶液相比，在本发明的条件下，交联透明质酸对阿替卡因热解起到保护作用。

还需要注意的是，与无菌或非无菌的所有其他受试组合物相比，pH等于4.9的凝胶GEL1E具有极高的流体稠度。除了催化活性成分阿替卡因的降解以外，基于交联透明质酸和阿替卡因的制剂的pH值小于6.0时，似乎还会催化交联透明质酸网络的降解，这会导致组合物粘弹性损失。

实施例4：根据本发明的凝胶GEL2A、GEL2C、GEL2D以及凝胶GEL2B和REF2B1(对照品)的制备

称取9.97g透明质酸钠(NaHA)粉末，其分子量约为1.7MDa，含水量为4.9％，向其中加入89.0g的0.25N NaOH水溶液。使粉末水合1小时30分钟，同时定时用刮板手动混匀。将4.12g稀释5倍的0.25N 1,4-丁二醇二缩水甘油醚(BDDE)溶液加入到反应介质中，再机械混匀15分钟，然后在50℃的恒温水浴浸渍2小时30分钟。将含有HCl的磷酸盐缓冲液加入由此获得的交联物中，以使pH＝7.3、透明质酸浓度等于30mg/mL。在室温下使凝胶在该溶液中溶胀24小时，用刮板手动混匀10分钟，然后在下述条件A(用于一种待纯化成分)或条件B(用于另一种待纯化成分)下，通过渗析对其进行纯化：

-条件A：在磷酸盐缓冲溶液中，利用纤维素膜(截留阈值＝10000Da)纯化24小时，

-条件B：在磷酸盐缓冲溶液中，利用纤维素膜(截留阈值＝10000Da)纯化48小时。

分别渗析纯化24小时和48小时后的凝胶即为REF2A和REF2B，两者的透明质酸浓度达到24.5mg/mL，然后每种用刮板手动混合10分钟。

在凝胶REF2A中，加入盐酸阿替卡因的磷酸盐缓冲液溶液，以使该凝胶中的阿替卡因浓度达到3mg/mL，并用刮板对凝胶手动混合10分钟。然后加入0.2N氢氧化钠(NaOH)溶液，直至pH值达到7.4。用刮板对凝胶手动混合10分钟。所得凝胶即为GEL2AA。

在凝胶GEL2AA中，向该凝胶中掺入了BDDE：向凝胶中加入50ppm的BDDE，并用刮板对凝胶手动混合10分钟。所得凝胶即为GEL2AA-DOP。

在凝胶REF2B中，加入盐酸利多卡因的磷酸盐缓冲液溶液，以使该凝胶中的利多卡因浓度达到3mg/mL，并用刮板对凝胶手动混合10分钟。然后加入0.2N氢氧化钠(NaOH)溶液，直至pH值达到7.4。用刮板对凝胶手动混合10分钟。所得凝胶即为GEL2BB。

在凝胶REF2B中，加入盐酸阿替卡因的磷酸盐缓冲液溶液，以使该凝胶中的阿替卡因浓度达到3mg/mL，并用刮板对凝胶手动混合10分钟。然后加入0.2N氢氧化钠(NaOH)溶液，直至pH值达到7.4。用刮板对凝胶手动混合10分钟。所得凝胶即为GEL2CC。

在凝胶REF2B中，加入含有盐酸阿替卡因和α-生育酚的磷酸盐缓冲液溶液，以使该凝胶中的阿替卡因浓度达到3mg/mL，α-生育酚浓度达到0.3mg/mL，并用刮板对凝胶手动混合10分钟。然后加入0.2N氢氧化钠(NaOH)溶液，直至pH值达到7.4。用刮板对凝胶手动混合10分钟。所得凝胶即为GEL2DD。

由于3种制剂中所加入的氢氧化钠溶液体积是相等的，由此可以推断出GEL2AA、GEL2BB、GEL2CC、GEL2DD具有相同的透明质酸浓度。

在凝胶REF2B中，加入一定体积(等于凝胶GEL2AA、GEL2BB、GEL2CC、GEL2DD所用的氢氧化钠体积)的磷酸盐缓冲液，并用刮板对凝胶手动混合10分钟。所得凝胶即为REF2B1B。

将凝胶GEL2AA、GEL2AA-DOP、GEL2BB、GEL2CC、GEL2DD、REF2B1B装入1mL塑料注射器，然后在125℃的高压蒸汽灭菌器中灭菌9分钟。灭菌后的凝胶即为GEL2A、GEL2C、GEL2D(＝根据本发明的凝胶)以及GEL2A-DOP、GEL2B、REF2B1，分别来自GEL2AA、GEL2CC、GEL2DD、GEL2AA-DOP、GEL2BB、REF2B1B。

灭菌后，凝胶GEL2A、GEL2B、GEL2C、GEL2D的pH值分别等于7.3、7.3、7.4、7.3。

实施例5：BDDE残留浓度对根据本发明的无菌注射用组合物中阿替卡因稳定性的影响

凝胶GEL2A、GEL2C、GEL2A-DOP中的BDDE残留浓度是通过HPLG-MS测得的。凝胶GEL2A的BDDE残留浓度为9.4，凝胶GEL2C为1.2ppm，凝胶GEL2D为1.4ppm，凝胶GEL2A-DOP为56.7ppm。

通过HPLC-UV测得(实施例4中制备得到的)以下产品灭菌后的阿替卡因浓度：

这些含量测定还表明，无菌注射用组合物中的残留BDDE浓度对阿替卡因在灭菌过程中(以及贮存期间，即使本实施例中未做说明)的稳定性起着重要作用。残留BDDE浓度高于10ppm时，会催化阿替卡因的降解，阿替卡因浓度更低(灭菌前后数值对比)就证明了这一点，另外阿替卡因降解产物的峰面积增大也证明了这一点。

实施例6：阿替卡因与利多卡因对根据本发明的无菌注射用组合物中流变特性的影响

通过流变仪测得(实施例4中制备得到的)以下产品灭菌前后在0.7Hz时的弹性模量G’：

上述弹性模量G’的测量表明：

-3种受试产品在灭菌前具有相同的流变性，

-但是在灭菌后，与含有利多卡因的产品不同，含有阿替卡因的本发明组合物的弹性低于不含麻醉剂的相应组合物。

因此，对于利用根据本发明的无菌注射用组合物获得的产品来说，热灭菌在其结构中起着主要作用。

如前所述，对于根据本发明的组合物，所得的较低弹性是令人意外的，这是因为这与基于交联透明质酸并含有利多卡因的产品的表现(现有技术中有所描述并在本实施例中得到确认)相反。

这一特殊表现可以使根据本发明的无菌注射用组合物只需要更短的灭菌时间，从而表现出多项优势，例如：

-最佳生产率及较低的制造成本，这在工业生产方面具有优势，

-获得预期流变特性所需要提供的热量较少，这极大地有利于阿替卡因的稳定、被认为具有促炎作用的小分子量透明质酸的出现、或者还有利于从针头或导管中挤出组合物的容易程度。

需要说明的是，还进行了另一项补充试验，即在125℃下对组合物GEL2CC灭菌7分钟，而不是9分钟(如实施例4中那样)。通过这项补充试验可以看出，我们获得了根据本发明的无菌注射用组合物，其在0.7Hz时的弹性模量G'等于181Pa，也就是说等于基于透明质酸和利多卡因的组合物GEL2B的弹性模量。因此，该项试验表明，尽管根据本发明的注射用组合物的表现存在差异(＝热灭菌过程中的凝胶降解情况存在差异)，但是仍然可以看到其流变特性等同于现有技术的参比组合物，即基于交联透明质酸和利多卡因的组合物。

实施例7：根据本发明的无菌注射用组合物在室温下贮存期间的稳定性评价

将(实施例4中制备得到的)根据本发明并含有阿替卡因的凝胶GEL2C与含有利多卡因的凝胶GEL2B在室温下贮存期间的稳定性进行了比较。

我们发现，在室温下贮存9个月后，含有利多卡因的凝胶GEL2B以及根据本发明并含有阿替卡因的凝胶GEL2C的弹性损失相当。这种低弹性损失，显示了根据本发明的注射用组合物的稳定性以及将有效期确定为18到36个月的可能性(和市场上现有的基于交联透明质酸并含有利多卡因的产品一样)。

实施例8：弹性模量G’对根据本发明的无菌注射用组合物产品特性的影响

称取1.35g透明质酸钠(NaHA)粉末，其分子量约为1.5MDa，含水量为8.2％，向其中加入5.4g的0.25N NaOH水溶液。使粉末水合1小时30分钟，同时定时用刮板手动混匀。将0.39g稀释5倍的0.25N 1,4-丁二醇二缩水甘油醚(BDDE)溶液加入到反应介质中，再机械混匀15分钟，然后在50℃的恒温水浴浸渍2小时30分钟。将含有HCl的磷酸盐缓冲液加入由此获得的交联物中，以使pH＝7.3、透明质酸浓度等于25mg/mL。在室温下使凝胶在该溶液中溶胀24小时，然后，用刮板手动混匀10分钟，再利用纤维素膜(截留阈值＝10000Da)，通过在磷酸盐缓冲溶液中渗析24小时对其进行纯化。用刮板对凝胶手动混合10分钟，从而得到凝胶G0。

在30g凝胶G0中，加入100mg盐酸阿替卡因粉末，并用刮板对凝胶手动混合10分钟。得到成分F1。

在30g凝胶G0中，加入8.0g磷酸盐缓冲液和100mg盐酸阿替卡因粉末，并用刮板对凝胶手动混合10分钟。得到成分F2。

将成分F1和F2装入1mL塑料注射器，然后在121℃的高压蒸汽灭菌器中灭菌20分钟。来自成分F1和F2的无菌组合物即GEL-F1A和GEL-F2A。

测得0.7Hz时的弹性G’：根据本发明的注射用组合物GEL-F2A的弹性为880Pa，而组合物GEL-F1A的弹性为970Pa(不在本发明的范围内)。

由同一操作员进行了五次手动挤出测试，即将组合物GEL-F1A和GEL-F2A中的每一种从27G1/2号针头中挤出。所得结果如下表所示：

上述结果表明，如果0.7Hz时的弹性G’大于880Pa，则含有透明质酸和阿替卡因的无菌组合物会变得难以挤出并且不均匀。因此，这样的组合物不再符合高水平无菌性和作用的无菌注射用组合物的要求，因此被排除在本发明的范围之外。

实施例9：阿替卡因在根据本发明的无菌注射用组合物中的游离状态

利用根据本发明的注射用组合物GEL2C实施了活性成分释放研究。

实施这项体外析出动力研究所遵循的方法如Mondon et al.,Influence of theMacro-and/or Microstructure of Cross-Linked Hyaluronic Acid Hydrogels on theRelease of Two Model Drugs(交联透明质酸水凝胶的宏观和/或微观结构对两种模型药物释放的影响)J Glycobiol 5:119.,2016。

通过HPLC-UV实施了阿替卡因含量测定。这项研究所得结果表明，阿替卡因的释放曲线与Mondon等人的文章中获得并公布的(基于交联透明质酸的凝胶中)利多卡因的释放曲线完全一致。我们的确发现，析出研究开始后的最初几分钟内，根据本发明的凝胶中有大量的阿替卡因释放，在几小时后阿替卡因全部释放，这和现有技术凝胶中利多卡因的情况完全一样。

因此，尽管与利多卡因相比，阿替卡因的脂溶度更高，但是根据本发明的注射用组合物中的阿替卡因却被极快地释放出来(与利多卡因一样快)，并且该特征完全可以兼顾注射期间及注射后迅速麻醉患者受治部位的能力。

Claims

1.一种水凝胶形式的无菌注射用水性组合物，含有至少交联透明质酸或其盐，以及阿替卡因或其盐，其特征在于：

o水的质量含量大于总质量的51％；

o交联透明质酸或其盐的浓度小于70mg/mL；

o阿替卡因或其盐的浓度小于50mg/mL；

o pH值大于或等于6.0且小于或等于7.9；

o 1,4-丁二醇二缩水甘油醚(BDDE)的残留浓度小于或等于10ppm；

o 0.7Hz时所述无菌注射用水性组合物的弹性G’在10Pa到880Pa之间；

o所述无菌注射用水性组合物中的阿替卡因是稳定的且耐降解。

2.根据权利要求1所述的无菌注射用水性组合物，其特征在于，所述透明质酸或其盐为透明质酸钠。

3.根据权利要求1至2中任一项所述的无菌注射用水性组合物，其特征在于，所述阿替卡因或其盐为盐酸阿替卡因。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的无菌注射用水性组合物，其特征在于，所述无菌注射用水性组合物经过湿热灭菌。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的无菌注射用水性组合物，其特征在于，pH值大于或等于6.2且小于或等于7.8。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的无菌注射用水性组合物，其特征在于，所述透明质酸或其盐通过双官能或多官能交联剂进行交联。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的无菌注射用水性组合物，其特征在于，所述透明质酸或其盐通过1,4-丁二醇二缩水甘油醚(BDDE)进行交联。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的无菌注射用水性组合物，其特征在于，所述1,4-丁二醇二缩水甘油醚(BDDE)的残留浓度小于或等于2ppm。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的无菌注射用水性组合物，其特征在于，除了透明质酸或其盐以及阿替卡因或其盐以外，所述无菌注射用水性组合物不含任何水溶性有机物。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的无菌注射用水性组合物，其特征在于，所述透明质酸或其盐的浓度在9到30mg/mL之间。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的无菌注射用水性组合物，其特征在于，所述阿替卡因或其盐的浓度等于3mg/mL。

12.根据权利要求1至11中任一项所述的无菌注射用水性组合物，其特征在于，所述无菌注射用水性组合物在室温下贮存18至36个月的时间段时是稳定的。

13.一种无菌注射用水性组合物的制备方法，所述无菌注射用水性组合物的pH值在6.0到7.9之间，且含有至少一种交联透明质酸或其盐，以及阿替卡因或其盐，其特征在于，所述方法至少包括以下连续步骤：

-透明质酸水溶液制备；

-透明质酸交联；

-水凝胶纯化；

-通过混合操作向水凝胶中添加阿替卡因；

-用注射器包装；

-高压蒸汽灭菌。

14.根据权利要求13所述的制备方法，其特征在于，所述阿替卡因以粉末形式添加到所述无菌注射用水性组合物中。

15.根据权利要求13至14中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述阿替卡因是以水溶液形式加入到所述无菌注射用水性组合物中的。

16.根据权利要求1至12中任一项所述的无菌注射用水性组合物在美容应用中的用途。

17.根据权利要求1至12中任一项所述的无菌注射用水性组合物在治疗领域中的用途。

18.一种可以通过注射施用于人类或动物的水凝胶形式的无菌注射用水性组合物，含有至少一种交联透明质酸或其盐，以及阿替卡因或其盐，其特征在于：

o水的质量含量大于总质量的51％；

o交联透明质酸或其盐的浓度小于70mg/mL；

o阿替卡因或其盐的浓度小于50mg/mL；

o pH值大于或等于6.0且小于或等于7.9；

o 1,4-丁二醇二缩水甘油醚(BDDE)的残留浓度小于或等于10ppm；

19.根据权利要求18的无菌注射用水性组合物，用于治疗：(a)皮肤表面外观；(b)时间流逝和/或由外部因素导致的皮肤老化迹象，所述外部因素可以是例如应激、空气污染、烟草或长时间暴露于紫外线；(c)皮肤的粘弹性和生物力学特性；(d)皮肤体积缺陷。