CN111110703A - 动物双歧杆菌及其制备的复合菌制剂在制备治疗或预防禽流感病毒感染的药物中的应用 - Google Patents

动物双歧杆菌及其制备的复合菌制剂在制备治疗或预防禽流感病毒感染的药物中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及生物制剂领域，具体公开了动物双歧杆菌及其制备的复合菌制剂在制备治疗或预防禽流感病毒感染的药物中的应用，本发明发现动物双歧杆菌（Bifidobacterium animalis）ATCC 25527可用于治疗H7N9感染的动物，将其与假长双歧杆菌（Bifidobacterium pseudolongum）ATCC 25526复配后，效果更好，该复合制剂能够调节机体免疫应答，显著改善H7N9流感病毒感染引起的体重丢失和肺组织损伤，能够明显提高小鼠感染H7N9流感病毒的存活率。本发明提供的复合益生菌制剂具备显著的抗H7N9流感病毒感染的效果，可有效用于禽流感病毒感染的预防和治疗。

Description

动物双歧杆菌及其制备的复合菌制剂在制备治疗或预防禽流 感病毒感染的药物中的应用
技术领域
本发明涉及抗流感病毒感染的生物制剂领域，特别涉及动物双歧杆菌及其制备的复合菌制剂在制备治疗或预防禽流感病毒感染的药物中的应用。
背景技术
禽流感病毒属正粘病毒科甲型流感病毒属，是一种全球范围内的高度接触性的传染性疾病。该病主要发生于家禽及野生禽类，严重阻碍了养禽业的发展。同时，其某些亚型(H5、H7、H9、H10)也可跨种传播至人，引起发烧、咳嗽、肌肉酸痛、结膜炎、呼吸道疾病等症状，严重的甚至出现死亡，给人类健康造成严重威胁。
一直以来，禽流感病毒都比较温和，只在动物间传播，然而，于2013年3月在上海和安徽两地却首次发现了人感染H7N9流感的病例，证明这种病毒具备了跨越种间隔离从禽类传染给人类的能力。H7N9感染的家禽宿主包括鸡、鸭、鹅、鹌鹑等，野生宿主包括江、湖、海周围的水鸟以及各种迁徙野鸟。密切接触感染的禽类，其分泌物、排泄物或经病毒污染的环境可造成人感染H7N9禽流感病毒。据世界卫生组织(WHO)统计，截止到2018年3月，全球感染H7N9人数已达1564，其中，我国共报道1438例，死亡570例，病死率高达39.63％。因而,做好禽流感H7N9的防控工作,不仅可以促进畜禽养殖产业的健康发展,同时可以有效维护社会经济的稳定,保障公共卫生安全。
目前，国内外对于禽流感的防控技术主要包括：扑杀、消毒、生物安全与疫苗接种等。虽然扑杀感染的畜禽能够在一定程度上遏制禽流感疫情的蔓延，但是野生禽类作为禽流感的另一种重要宿主却很难通过扑杀对其进行控制，同时，大规模的畜禽扑杀也会造成巨大的经济损失。预防禽流感发生的另一种有效措施是接种疫苗，当接种的疫苗与临床流行的毒株亚型一致时，可获得理想的保护效果，但接种的疫苗与流行的毒株不同时，则无法提供有效的免疫保护。禽流感病毒血清型众多，且不同亚型的A型流感病毒混合感染时时常会发生基因重组，形成新的禽流感病毒，给疫苗的研制和应用带来了很大困难。生产实践中经常发生因接种的疫苗与流行毒株亚型不同而导致的免疫失败。
因此，在预防禽流感的过程中，除了加强疫苗研制以外，还应该积极开发其它具有高效抗流感作用的生物制剂。双歧杆菌被普遍认为是益生菌，当摄入足够数量的双歧杆菌时，能够促进机体的健康。文献报道，摄入双歧杆菌可以改善胃肠道环境，预防和治疗一些肠道微生态失调造成的疾病，包括胃肠道感染、便秘、肠易激综合征(IBS)、炎症性肠炎(IBD)、溃疡性结肠炎、过敏、抗生素诱导的腹泻、心血管疾病、结直肠癌等等。Alvin Ibarra等(2017)的报道，在一项随机双盲和安慰剂对照试验中，通过各项相关指标的评价，补充动物双歧杆菌可以改善排便频率。郭慧慧等人(2017)研究发现双歧杆菌能够有效抑制溃疡性结肠炎引起的小鼠血中血红蛋白浓度的下降，抑制溃疡性结肠炎引起的结肠长度的缩短，通过调节肠道微生态平衡，对溃疡性结肠炎发挥治疗作用。Gloria Solano-Aguilar等(2018)研究报道饲喂动物双歧杆菌乳酸亚种对猪蛔虫感染小猪具有局部免疫调节作用，在线虫感染期间，通过减少猪体内2型过敏性反应的成分而改变局部免疫反应并改善肠道功能。Jung Min Chae等(2018)研究报道动物双歧杆菌乳酸亚种BB12可显著改善DSS诱导的结肠炎，并提示益生菌BB12通过调节促凋亡细胞因子的表达来提高肠细胞的存活率。HüseyinSancar Bozkurt等(2019)的报道表明双歧杆菌能够用于结直肠癌的预防。
尽管双歧杆菌在预防和治疗肠道内感染等方面有一些报道，但是作为益生菌制剂在抗肠外感染方面特别是在呼吸道感染疾病方面的报道还很少，而关于动物双歧杆菌的抗病毒作用还未见报道，本发明首次报道了动物双歧杆菌抗流感病毒的应用。
发明内容
本发明的目的是针对流感病毒感染难以预防和治疗的问题，提供了动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)ATCC 25527在制备治疗或预防禽流感病毒感染的药物中的应用。
本发明的另一个目的在于提供了一种治疗或预防禽流感病毒感染的药物，所述的药物包括动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)ATCC 25527和假长双歧杆菌(Bifidobacterium pseudolongum)ATCC 25526。
本发明的最后一个目的在于提供了包括ATCC25527和ATCC25526的制剂在制备治疗或预防禽流感病毒感染的药物中的应用。
为了达到上述目的，本发明采用以下技术措施：
动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)ATCC 25527在制备治疗或预防禽流感病毒感染的药物中的应用，包括利用ATCC 25527作为唯一有效成分或是有效成分之一，用于制备治疗或预防禽流感病毒感染的疾病的药物。
以上所述的应用中，优选的，所述的动物双歧杆菌的有效菌浓度≥1×109CFU/ml。
一种治疗或预防禽流感病毒感染的药物，所述的药物包括动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)ATCC 25527和假长双歧杆菌(Bifidobacteriumpseudolongum)ATCC 25526；
以上所述的药物，优选的，所述的动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)ATCC 25527和假长双歧杆菌(Bifidobacterium pseudolongum)ATCC 25526的有效菌浓度的比例为1：0.5-2。
以上所述的药物，动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)ATCC 25527和假长双歧杆菌(Bifidobacterium pseudolongum)ATCC 25526的有效菌浓度的最佳比例为1：1，二者混合后的有效菌浓度≥1×109CFU/ml。
包括ATCC25527和ATCC25526的制剂在制备治疗或预防禽流感病毒感染的药物中的应用也属于本发明的保护范围；
包括ATCC25527和ATCC25526的制剂还可用于制备禽流感病毒感染后的干扰素刺激剂。
以上所述的感染的症状，包括，由于禽流感病毒的感染导致的体重降低、死亡，肺部病理性损伤，以及禽流感病毒在肺部的增值。
口服动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)ATCC 25527治疗或预防禽流感病毒感染；口服动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)ATCC 25527和假长双歧杆菌(Bifidobacterium pseudolongum)ATCC 25526治疗或预防禽流感病毒感染，也属于本发明的保护范围。
口服动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)ATCC 25527治疗由于禽流感病毒的感染导致的体重降低、死亡，肺部病理性损伤，或H7N9流感病毒在肺部的增值；
口服动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)ATCC 25527和假长双歧杆菌(Bifidobacterium pseudolongum)ATCC 25526治疗由于H7N9的感染导致的体重降低、死亡，肺部病理性损伤，或禽流感病毒在肺部的增值。
以上所述的禽流感病毒优选H7N9。
与现有技术相比，本发明优点如下：
(1)本发明中的复合益生菌制剂能够调节宿主机体的免疫应答，在禽流感病毒感染的前期促进多种细胞因子的表达，增加机体对病毒的清除；在感染中期降低某些细胞因子的表达，减少因细胞因子的过度表达而造成的炎性损伤。
(2)本发明中的益生菌制剂在动物机体感染禽流感病毒后能够快速提高机体产生干扰素的能力，及时清除病毒。
(3)灌服本发明复合益生菌制剂能够显著抑制H7N9流感病毒在小鼠体内的增殖，改善因感染H7N9造成的体重丢失，提升感染小鼠的存活率，具有明显的抗H7N9流感病毒感染的作用。
附图说明
图1为假长双歧杆菌和动物双歧杆菌的菌落形态图。
图2为益生菌制剂灌胃对H7N9感染后SPF小鼠存活率的影响示意图。
图3为益生菌制剂灌胃对H7N9感染后SPF小鼠体重的影响示意图。
图4为益生菌制剂灌胃对H7N9感染后无菌小鼠存活率的影响示意图。
图5为益生菌制剂灌胃对H7N9感染后SPF小鼠肺脏病毒增殖的影响示意图。
图6为益生菌制剂灌胃对H7N9感染后SPF小鼠肺脏病理变化的影响示意图。
图7为益生菌制剂灌胃对H7N9感染后SPF小鼠肺脏细胞因子变化的影响示意图。
图8为益生菌制剂灌胃对H7N9感染后SPF小鼠血清细胞因子变化的影响示意图。
具体实施方式
本发明实施例中的试验方法和条件如无特殊说明，均为常规方法。这些实施例仅用于说明本发明，本发明的保护范围不受这些实施例的限制。本发明所述的技术方案，如无特殊说明，均为领域的常规方案；所述试剂或材料如无特殊说明，均来源于商业渠道。
本发明以禽流感病毒H7N9为例，来阐述动物双歧杆菌(Bifidobacteriumanimalis)ATCC25527及其复合制剂在制备预防或治疗禽流感病毒感染的药物中的应用。
以下具体实施例对本发明做进一步阐述：
实施例1：
抗H7N9禽流感病毒感染的益生菌制剂的制备方法：
1.动物双歧杆菌和假长双歧杆菌单菌制剂制备
动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)ATCC 25527和假长双歧杆菌(Bifidobacterium pseudolongum)ATCC 25526。用无菌PBS对菌株冻干粉进行重悬，用接种环挑取适量菌液于MRS固体平板培养基上进行划线复壮，37℃厌氧条件下培养24-48小时。将复壮的动物双歧杆菌和假长双歧杆菌分别在MRS划线培养，37℃厌氧条件下培养24小时后，用PBS分别对MRS培养基平板上的菌苔进行冲洗，收集菌悬液，4℃、5000rpm离心10分钟，弃掉上清，将收集的动物双歧杆菌和假长双歧杆菌菌泥重悬于PBS中，MRS平板计数，调整菌悬液浓度使其活菌数均为1×109CFU/ml，作为抗流感病毒的单菌制剂，4℃保存备用。
2.抗H7N9禽流感病毒感染的复合益生菌制剂的制备方法
将上述方法制备的单菌制剂按1:1(V/V)混合，制备成复合益生菌制剂，该复合益生菌制剂中动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)ATCC 25527和假长双歧杆菌(Bifidobacterium pseudolongum)ATCC 25526浓度均为5×108CFU/ml，总的菌体浓度为1×109CFU/ml。
实施列1中制备的益生菌单菌制剂和复合制剂用于以下实施例。
实施例2：
实施例1中制备的益生菌制剂对H7N9禽流感病毒感染后小鼠死亡率和体重的影响
1.对SPF小鼠的死亡率和体重的影响
试验动物为8周龄雌性C57BL/6无特定病原体(SPF)小鼠，总计80只，随机分为4组，每组20只，所有动物均在生物安全三级实验室(ABSL3)中进行饲养。第一组为灌服无菌PBS对照组，每只小鼠100ul；第二组为灌服假长双歧杆菌(Bifidobacterium pseudolongum)ATCC 25526单菌制剂组,每只小鼠100ul；第三组为灌服动物双歧杆菌(Bifidobacteriumanimalis)ATCC 25527单菌制剂组,每只小鼠100ul；第四组为灌服双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)ATCC 25527和假长双歧杆菌(Bifidobacteriumpseudolongum)ATCC 25526复合制剂组,每只小鼠100ul。
抗生素处理：在对试验小鼠进行益生菌制剂灌服前，先用复合抗生素溶液对小鼠进行处理，在小鼠饮用的无菌水中加入复合抗生素制剂，其中包括氨苄青霉素(1mg/ml)，链霉素(5mg/ml),万古霉素(0.25mg/ml)，粘杆菌素(1mg/ml)，连续添加3天，在灌服益生菌制剂前1天停止添加，所有抗生素菌购买与sigma-Aldrich公司。
给小鼠灌服PBS或益生菌制剂后，所有小鼠滴鼻感染1个LD50 H7N9禽流感病毒，流感病毒感染后连续15天观察小鼠状态并测量体重，记录存活情况。
结果显示，和灌服PBS的对照组相比较，给SPF小鼠灌服动物双歧杆菌单菌制剂(P＝0.0259)、灌服动物双歧杆菌和假长双歧杆菌复合制剂(P＝0.0015)都可以显著提高小鼠感染H7N9禽流感病毒后的存活率，存活率分别提高了20％和40％；但灌服假长双歧杆菌单菌制剂对小鼠感染H7N9流感病毒后的存活率没有明显的影响(表1，图2)。
表1益生菌制剂对H7N9禽流感病毒感染后SPF小鼠存活率的影响
Figure BDA0002364359530000051
在体重方面，灌服动物双歧杆菌和假长双歧杆菌复合制剂的小鼠在感染H7N9流感病毒后的6-10天，体重丢失情况得到明显改善，灌服动物双歧杆菌单菌制剂的小鼠在感染H7N9流感病毒后的6-10天，体重丢失情况也得到一定程度的改善(表2，图3)。
表2益生菌制剂对H7N9禽流感病毒感染后SPF小鼠体重的影响
Figure BDA0002364359530000061
注：天数为小鼠感染流感病毒后的天数。
2.对无菌小鼠死亡率的影响
根据前述益生菌制剂对SPF小鼠感染H7N9流感病毒后的死亡率和体重的影响结果，本次试验用19只无菌小鼠来检测实施例1中益生菌制剂对无菌小鼠感H7N9禽流感病毒的影响，19只无菌小鼠随机分为3组，第一组6只，为灌服无菌PBS对照组，每只小鼠100ul；第二组6只，为灌服动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)ATCC 25527单菌制剂组，每只小鼠100ul；第三组7只，为灌服双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)ATCC 25527和假长双歧杆菌(Bifidobacterium pseudolongum)ATCC 25526复合制剂组，每只小鼠100ul。抗生素处理同SPF小鼠。给无菌小鼠灌服PBS或益生菌制剂1天后，所有小鼠腹腔注射感染0.5个LD50剂量的H7N9禽流感病毒，感染后连续15天观察无菌小鼠状态并记录存活情况。
根据前述本发明中益生菌制剂对SPF小鼠感染H7N9流感病毒后存活率的结果，即灌服动物双歧杆菌单菌制剂和复合制剂能够显著提高小鼠的存活率，为了进一步排除抗生素处理后肠道残存微生物的影响，本实施例中使用无菌小鼠进行动物试验。结果同样显示，给无菌小鼠灌服动物双歧杆菌单菌制剂(P＝0.0201)、动物双歧杆菌和假长双歧杆菌复合菌制剂(P＝0.0323)均显著提高了无菌小鼠的存活率，和PBS对照组相比较，存活率分别提高了50％和40.47％。SPF小鼠和无菌小鼠结果相比较，唯一的区别是，在无菌小鼠中，单独灌服动物双歧杆菌的保护作用(66.67％)甚至要略微高于复合菌制剂的保护作用(57.14％)，但在SPF小鼠中，与复合菌制剂灌服组相比，单独灌服动双歧杆菌的保护作用只有复合菌制剂的一半。这些结果表明，仅给动物灌服动物双歧杆菌就能够增强其对H7N9流感病毒感染的抵抗作用，对于非无菌动物，另外添加假长双歧杆菌可以增强这种保护作用(表3，图4)。
表3益生菌制剂对H7N9禽流感病毒感染后无菌小鼠存活率的影响
Figure BDA0002364359530000071
实施例3：
实施例1中制备的益生菌制剂对H7N9禽流感病毒感染后小鼠肺脏流感病毒含量的影响、对小鼠肺脏组织结构的影响以及对肺脏细胞因子和血液细胞因子含量的影响
96只SPF小鼠随机分为4组，每组24只，第一组为灌服无菌PBS对照组，每只小鼠100ul；第二组为灌服假长双歧杆菌(Bifidobacterium pseudolongum)ATCC 25526单菌制剂组,每只小鼠100ul；第三组为灌服动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)ATCC25527单菌制剂组,每只小鼠100ul；第四组为灌服双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)ATCC 25527和假长双歧杆菌(Bifidobacterium pseudolongum)ATCC 25526复合制剂组,每只小鼠100ul。
同实施例2，所有SPF小鼠均在生物安全三级实验室(ABSL3)中进行饲养，经过同样步骤的抗生素处理、益生菌制剂灌服和H7N9流感病毒感染。
流感病毒感染后分别于第0天，第3天，第5天采血并解剖取肺部样品，每组8只小鼠。每组8份肺脏样品中取5份用来测定细胞因子含量和流感病毒含量，其余3份肺脏样品用4％甲醛溶液固定做组织切片观察。
血样处理：采集的非抗凝血样静置放在4℃过夜，待析出血清后，4℃、1000rpm离心5min，取上清，冻存于-80℃，用于检测细胞因子含量。
肺部组织处理：采集的肺部组织样品加入1ml无菌PBS(1mlPBS/肺)，匀浆仪匀浆破碎，离心取上清，冻存于-80℃，用于检测细胞因子含量和流感病毒含量。
所检测的细胞因子包括TNF-α，IL-1β，IL-6，IL-10，IFN-γ，IFN-β。其中TNF-α，IL-1β，IL-6，IL-10，IFN-γ使用Magnetic
Figure BDA0002364359530000082
Assay multiplex kits(R&D Systems)试剂盒检测，IFN-β使用VeriKine Mouse IFN-βenzyme-linked immunosorbent assay kit(BioLegend)试剂盒检测。
1.益生菌制剂对H7N9禽流感病毒感染后小鼠肺脏流感病毒含量的影响
将保存的肺部组织匀浆上清液接种于9-11日龄SPF鸡胚，进行肺部组织流感病毒含量测定，接毒鸡胚在37℃孵育72小时，收集尿囊液进行血凝试验。使用Reed和Muench所描述的方法计算病毒滴度。
检测结果显示，在H7N9流感病毒感染后的第3天和第5天，与PBS对照组相比较，灌服动物双歧杆菌单菌制剂组、灌服动物双歧杆菌和假长双歧杆菌复合菌制剂组肺部病毒含量显著降低，但灌服假长双歧杆菌单菌制剂对肺部组织病毒含量没有影响(表4，图5)。
表4益生菌制剂对H7N9禽流感病毒感染后小鼠肺脏流感病毒含量的影响(log10EID50/ml)
Figure BDA0002364359530000081
2.益生菌制剂对H7N9禽流感病毒感染后小鼠肺脏组织结构的影响
肺部组织切片镜检结果显示，在H7N9流感病毒感染后的第3天和第5天，与灌服PBS对照组相比较，灌服动物双歧杆菌单菌制剂以及灌服动物双歧杆菌和假长双歧杆菌复合菌制剂均明显减少了因感染流感病毒对肺脏组织的病理性损害，而单独灌服假长双歧杆菌却没了改善流感病毒感染对肺脏组织的损害，进一步证实了动物双歧杆菌的抗流感作用(图6)。
3.益生菌制剂对H7N9禽流感病毒感染后小鼠肺脏细胞因子含量的影响
肺部组织样品处理上清液中细胞因子含量测定结果显示，在感染后第0天，灌服PBS对照组和灌服3种益生菌制剂组之间TNF-α，IL-1β，IL-6，IL-10，IFN-γ，IFN-β细胞因子含量均没有差别。在感染流感病毒后第3天和第5天，灌服动物双歧杆菌单菌制剂、灌服动物双歧杆菌和假长双歧杆菌复合菌制剂组在所测定大部分细胞因子含量上有显著差异，但在感染后的第3天和第5天2个时间点上，细胞因子的变化趋势有所不同。与对照组先比较，在感染流感病毒第3天时，灌服动物双歧杆菌单菌制剂、灌服动物双歧杆菌和假长双歧杆菌复合菌制剂组大部分细胞因子表现出显著的增加趋势，但在感染后的第5天，这2个组的细胞因子含量表现出下降趋势，特别是灌服复合菌制剂组下降趋势更显著。具体表现为，在流感病毒感染第3天，与PBS对照组相比较，灌服动物双歧杆菌单菌组IL-6、IFN-γ、IFN-β明显增加，且有统计学差异，TNF-α显著增加；灌服动物双歧杆菌和假长双歧杆菌复合菌制剂组，TNF-α、IL-6、IFN-γ、IFN-β显著增加，IL-10也明显增加。在流感病毒感染第5天，与PBS对照组相比较，灌服动物双歧杆菌单菌组IL-1β明显下降，IL-6显著下降；灌服动物双歧杆菌和假长双歧杆菌复合菌制剂组TNF-α、IL-10、IL-1β、IL-6显著下降。在所测定不同时间点，灌服假长双歧杆菌单菌制剂组各细胞因子含量和PBS对照组均没有差异(表5，图7)。
表5益生菌制剂对H7N9禽流感病毒感染后小鼠肺脏细胞因子含量的影响(pg/ml)
Figure BDA0002364359530000091
Figure BDA0002364359530000101
4.益生菌制剂对H7N9禽流感病毒感染后小鼠血清细胞因子含量的影响
小鼠血清中细胞因子含量测定结果显示，在H7N9流感病毒感染后第0天、第3天和第5天，与PBS对照组比较，灌服假长双歧杆菌制剂组，各细胞因子含量基本没有差异，仅在感染后第3天，IL-1β显著下降，在感染后第5天，IFN-β有所增加，但灌服动物双歧杆菌制剂组、灌服动物双歧杆菌和假长双歧杆菌复合制剂组在流感感染后第3天和第5天，大部分细胞因子含量与对照组比较有显著差异。在感染后第3天，与对照组相比较，灌服动物双歧杆菌制剂组血清中TNF-α、IFN-γ显著增加，IFN-β已明显增加；灌服动物双歧杆菌和假长双歧杆菌复合制剂组TNF-α、IL-10、IFN-γ、IL-6、IFN-β细胞因子均显著增加，但IL-1β显著下降。在感染后第5天，与PBS对照比较，灌服动物双歧杆菌制剂组IFN-γ显著增加，TNF-α、IFN-β明显增加，IL-1β、IL-6显著下降，灌服动物双歧杆菌和假长双歧杆菌复合制剂组IFN-γ、IFN-β显著增加，IL-1β、IL-6显著下降(表6，图8)。可以看到，动物双歧杆菌和假长双歧杆菌复合制剂组可显著提高机体产生干扰素的能力，从而达到清除病毒的目的。
表6益生菌制剂对H7N9禽流感病毒感染后小鼠血清细胞因子含量的影响(pg/ml)
Figure BDA0002364359530000102
Figure BDA0002364359530000111

Claims (9)

1.动物双歧杆菌（Bifidobacterium animalis）ATCC 25527在制备治疗或预防禽流感病毒感染的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，所述的动物双歧杆菌的有效菌浓度≥1×109CFU/ml。
3.一种治疗或预防禽流感病毒感染的药物，所述的药物包括动物双歧杆菌（Bifidobacterium animalis）ATCC 25527和假长双歧杆菌（Bifidobacterium pseudolongum）ATCC 25526。
4.根据权利要求3所述的药物，所述的动物双歧杆菌（Bifidobacterium animalis）ATCC 25527和假长双歧杆菌（Bifidobacterium pseudolongum）ATCC 25526的有效菌浓度的比例为1：0.5-2。
5.根据权利要求4所述的药物，所述的动物双歧杆菌（Bifidobacterium animalis）ATCC 25527和假长双歧杆菌（Bifidobacterium pseudolongum）ATCC 25526的有效菌浓度的比例为1：1，二者混合后的有效菌浓度≥1×109CFU/ml。
6.权利要求3所述的药物在制备治疗或预防禽流感病毒感染的药物中的应用。
7.根据权利要求1或权利要求6所述的应用，所述的药物用于提高由禽流感病毒的感染导致的体重降低、或减少由禽流感病毒的感染导致的死亡，或由禽流感病毒的感染导致的肺部病理性损伤，或抑制禽流感病毒在肺部的增值。
8.根据权利要求1或6所述的应用，所述的禽流感病毒为H7N9。
9.权利要求3所述的药物在制备禽流感病毒感染后的干扰素刺激剂中的应用。
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