CN111060628A - 他克莫司残留溶剂的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了他克莫司残留溶剂的检测方法，包括以下步骤：色谱柱选用DB‑624毛细管柱；载气选用氢气和空气；配有氢火焰离子化检测器；以及利用气相色谱对所述他克莫司残留溶剂进行检测。以第一针为空白样，接着连续五针对照品溶液，最后一针供试品溶液的进样顺序依次进样检测；步骤五：根据公式测算他克莫司中残留溶剂的限度。本发明时限了连续检测他克莫司中乙腈、甲苯、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、异丙醇残留量，提高了检测的准确度及重复性。
Description
领域
本发明涉及药物分析技术领域，特别涉及他克莫司残留溶剂的检测方法。
背景
气相色谱分析方法是用气体作为流动相的色谱法，具有使用范围广、分离效率高等特点，近几年来被广泛应用于药物的残留有机溶剂的测定。
他克莫司，又名FK506，是从链霉菌中分离出的发酵产物，其化学结构23元大环内酯类抗生素。为一种强力的新型免疫抑制剂，主要通过抑制白介素-2的释放，全面抑制T淋巴细胞的作用，较环孢素强100倍。同时 FK506在治疗特应行皮炎、系统性红斑狼疮、自身免疫性眼病等自身免疫性疾病中也发挥着积极的作用。
根据ICH指南的要求：乙腈、甲苯、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、异丙醇的残留限度为0.041％、0.089％、0.3％、0.5％、0.5％、0.5％、0.5％，因此，他克莫司中乙腈、甲苯、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、异丙醇的测定对于他克莫司的质量、患者的健康方面均具有重要的意义。
概述
本公开涉及他克莫司残留溶剂的检测方法，其包括：
色谱柱选用DB-624毛细管柱；
载气选用氢气和空气；
配有氢火焰离子化检测器；以及
利用气相色谱对所述他克莫司残留溶剂进行检测。
附图说明
图1示出了本公开实施例1的对照品溶液的气相色谱图。
图2示出了本公开实施例1的供试品溶液的气相色谱图。
详述
在以下的说明中，包括某些具体的细节以对各个公开的实施方案提供全面的理解。然而，相关领域的技术人员会认识到，不采用一个或多个这些具体的细节，而采用其他方法、部件、材料等的情况下仍实现实施方案。
除非本公开中另有要求，在整体说明书和所附的权利要求中，词语“包括”、“包含”、“含有”和“具有”应解释为开放式的、含括式的意义，即“包括但不限于”。
在整体说明书中提到的“一实施方案”、“实施方案”、“在另一实施方案中”或“在某些实施方案中”意指在至少一实施方案中包括与该实施方案所述的相关的具体参考要素、结构或特征。因此，在整个说明书中不同位置出现的短语“在一实施方案中”或“在实施方案中”或“在另一实施方案中”或“在某些实施方案中”不必全部指同一实施方案，此外，具体要素、结构或特征可以任何适当的方式在一个或多个实施方案中结合。
定义
在本公开中，术语“外标法”是指用待测组分的纯品作对照物质，以对照物质和样品中待测组分的响应信号相比较进行定量的方法。
在本公开中，术语“等度洗脱”是指在样品组分的分析周期中，流动相的组成和流速恒定不变的洗脱方式。
具体实施方式
本公开涉及他克莫司残留溶剂的检测方法，其包括：
色谱柱选用DB-624毛细管柱；
载气选用氢气和空气；
配有氢火焰离子化检测器；以及
利用气相色谱对所述他克莫司残留溶剂进行检测。
在某些实施方案中，还包括气相色谱检测前溶液的制备，所述溶液包括：
空白溶液，所述空白溶液是由N,N-二甲基甲酰胺组成；
对照品溶液，所述对照品溶液是由对照品储备液和N,N-二甲基甲酰胺组成；以及
供试品溶液，所述供试品溶液是由他克莫司和N,N-二甲基甲酰胺组成。
在某些实施方案中，对照品储备液的制备方法，包括：
将乙腈、甲苯和空白溶液混合，得到第一混合物；
将乙醇、丙酮、乙酸乙酯、异丙醇、甲醇和空白溶液混合，得到第二混合物；以及
将所述第一混合物与所述第二混合物混合，得到所述对照品储备液。
在某些实施方案中，乙腈的浓度为6.0至10.0mg/ml。
在某些实施方案中，乙腈的浓度为8.2mg/ml。
在某些实施方案中，甲苯的浓度为15至20mg/ml。
在某些实施方案中，甲苯的浓度为17.8mg/ml。
在某些实施方案中，乙醇的浓度为3至8mg/ml。
在某些实施方案中，乙醇的浓度为5mg/ml。
在某些实施方案中，丙酮的浓度为3至8mg/ml。
在某些实施方案中，丙酮的浓度为5mg/ml。
在某些实施方案中，乙酸乙酯的浓度为3至8mg/ml。
在某些实施方案中，乙酸乙酯的浓度为5mg/ml。
在某些实施方案中，异丙醇的浓度为3至8mg/ml。
在某些实施方案中，异丙醇的浓度为5mg/ml。
在某些实施方案中，甲醇的浓度为3至8mg/ml。
在某些实施方案中，甲醇的浓度为5mg/ml。
在某些实施方案中，色谱柱规格为60m*0.32mm*1.8um。
在某些实施方案中，气化温度为230至280℃。
在某些实施方案中，气化温度为250℃。
在某些实施方案中，氢气流量为30至50ml/min。
在某些实施方案中，氢气流量为40ml/min。
在某些实施方案中，空气流量为300至500ml/min。
在某些实施方案中，空气流量为400ml/min。
在某些实施方案中，检测器温度为230至280℃。
在某些实施方案中，检测器温度为250℃。
在某些实施方案中，分流比为15:1至25:1。
在某些实施方案中，分流比为20:1。
在某些实施方案中，进样体积为0.5至2.0uL。
在某些实施方案中，进样体积为1.0uL。
在某些实施方案中，气相色谱仪型号为岛津GC-2010Plus，选用 Labsolution工作站。
在某些实施方案中，气相色谱柱采用程序升温，50℃保持17min，以 25℃/min的速率升至100℃，保持5min；以30℃/min的速率升至160℃，保持5min；以10℃/min的速率升至210℃，保持5min。
在某些实施方案中，气相色谱的进样检测顺序为：以第一针为空白样，接着连续五针对照品溶液，最后一针供试品溶液的进样顺序依次进样检测。
在某些实施方案中，气相色谱的连续进样针数不超过十针。
在某些实施方案中，气相色谱的连续进样针数超过十针的，每十针之间交叉进一针对照品溶液。
在某些实施方案中，他克莫司中残留溶剂的限度测定按以下公式计算：
式中：
A样—供试品溶液中残留溶剂的峰面积，
A标—对照品溶液中溶剂的峰面积，
C样—供试品溶液中他克莫司的浓度，g/ml，
C标—对照品溶液中溶剂的浓度，g/ml。
实施例1
采用的气相色谱仪：岛津GC-2010Plus，Labolution工作站，色谱柱为 DB-624毛细管柱，配有氢火焰离子化检测器；包括如下几个步骤：
步骤一：取所述乙腈82mg(约84μl)、甲苯178mg(约206μl)置10ml量瓶B中，加入空白溶剂稀释至刻度，摇匀，作为溶液B；分别精密称取乙醇、丙酮、乙酸乙酯、异丙醇各100mg(约乙醇127μl、丙酮128 μl、乙酸乙酯111μl、异丙醇128μl)及甲醇60mg(约76μl)置20ml 量瓶C中，加入适量空白溶剂溶解，再精密吸取溶液B1ml置量瓶C中，加入空白溶剂稀释至刻度，摇匀，作为溶液C(即对照品储备液)；精密吸取对照品储备液1.0ml至10ml容量瓶中，加N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
步骤二：取所述他克莫司1g至10ml容量瓶中，加入N,N-二甲基甲酰胺稀释，制成供试品溶液。
步骤三：取对照品溶液和供试品溶液分别在气相色谱仪中进行气相色谱测定，记录色谱图，记录乙腈、甲苯、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、异丙醇的峰面积。
步骤四：所述步骤三中的进样检测顺序为：以第一针为空白样，接着连续五针对照品溶液，最后一针供试品溶液的进样顺序依次进样检测；
步骤五：他克莫司中残留溶剂的限度测定按以下公式计算：
式中：
A样—供试品溶液中残留溶剂的峰面积，
A标—对照品溶液中溶剂的峰面积，
C样—供试品溶液中他克莫司的浓度，g/ml，
C标—对照品溶液中溶剂的浓度，g/ml。
结果检验
由图1可知，对照品溶液中乙腈、甲苯、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、异丙醇的峰面积A标分别为：45378、218497、161525、389539、413713、 342055、425080。
由图2可知，供试品溶液中乙腈、甲苯、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、异丙醇未检出，丙酮的峰面积A样为：7231。
实验中，对照品溶液中丙酮的浓度C标为：5.125×10-4g/ml。
供试品溶液中丙酮的浓度C样为：0.10253g/ml。
根据公式
计算出残留溶剂甲醇含量为0.0087％，未检测到残留溶剂甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、异丙醇、环己烷，符合ICH 指南的要求。
从前述中可以理解，尽管为了示例性说明的目的描述了本公开的具体实施方案，但是在不偏离本公开的精神和范围的条件下，本领域所述技术人员可以作出各种变形或改进、这些变形或修改都应落入本公开所附权利要求的范围。
Claims (9)
1.他克莫司残留溶剂的检测方法，其包括：
色谱柱选用DB-624毛细管柱；
载气选用氢气和空气；
配有氢火焰离子化检测器；以及
利用气相色谱对所述他克莫司残留溶剂进行检测。
2.如权利要求1所述的检测方法，其还包括气相色谱检测前溶液的制备，所述溶液包括：
空白溶液，所述空白溶液是由N,N-二甲基甲酰胺组成；
对照品溶液，所述对照品溶液是由对照品储备液和N,N-二甲基甲酰胺组成；以及
供试品溶液，所述供试品溶液是由他克莫司和N,N-二甲基甲酰胺组成。
3.如权利要求1或2所述的检测方法，其中所述对照品储备液的制备方法，包括：
将乙腈、甲苯和空白溶液混合，得到第一混合物；
将乙醇、丙酮、乙酸乙酯、异丙醇、甲醇和空白溶液混合，得到第二混合物；以及
将所述第一混合物与所述第二混合物混合，得到所述对照品储备液。
4.如权利要求1至3中任一权利要求所述的检测方法，其中：所述乙腈的浓度为6.0至10.0mg/ml，优选为8.2mg/ml；所述甲苯的浓度为15至20mg/ml，优选为17.8mg/ml；所述乙醇的浓度为3至8mg/ml，优选为5mg/ml；所述丙酮的浓度为3至8mg/ml，优选为5mg/ml；所述乙酸乙酯的浓度为3至8mg/ml，优选为5mg/ml；所述异丙醇的浓度为3至8mg/ml，优选为5mg/ml；所述甲醇的浓度为3至8mg/ml，优选为5mg/ml。
5.如权利要求4所述的检测方法，其中所述色谱柱规格为60m*0.32mm*1.8um；气化温度为230至280℃，优选为250℃；氢气流量为30至50ml/min，优选为40ml/min；空气流量为300至500ml/min，优选为400ml/min；检测器温度为230至280℃，优选为250℃；分流比为15:1至25:1，优选为20:1；进样体积为0.5至2.0uL，优选为1.0uL。
6.如权利要求4或5所述的检测方法，其中所述气相色谱柱采用程序升温，50℃保持17min，以25℃/min的速率升至100℃，保持5min；以30℃/min的速率升至160℃，保持5min；以10℃/min的速率升至210℃，保持5min。
7.如权利要求4至6中任一权利要求所述的检测方法，其中所述气相色谱的进样检测顺序为：以第一针为空白样，接着连续五针对照品溶液，最后一针供试品溶液的进样顺序依次进样检测。
8.如权利要求7所述的检测方法，其中所述气相色谱的连续进样针数不超过十针。
9.如权利要求7或8所述的检测方法，其中所述气相色谱的连续进样针数超过十针的，每十针之间交叉进一针对照品溶液。
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