CN110964643A - 一种转化制备玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐的菌及其应用 - Google Patents

一种转化制备玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐的菌及其应用 Download PDF

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杨华
贾冰璇
张巧艳
刘娜
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Abstract

本发明提供了一种转化制备玉米赤霉烯酮‑14‑硫酸盐的菌及其应用，具体地，本发明的顶孢霉菌(Acremonium sclerotigenum)及其衍生菌株可将玉米赤霉烯酮转化为玉米赤霉烯酮‑14‑硫酸盐。

Description

一种转化制备玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐的菌及其应用
技术领域
本发明涉及微生物领域，具体地，涉及一种转化制备玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐的方法。
背景技术
玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)主要是由禾谷镰刀菌通过聚酮反应产生的次级代谢产物，又称为F-2毒素。其分布广泛，全世界大部分地区均受到不同程度的污染，常见于欧州、非洲、亚洲、美洲和大洋洲温带地区的食物和饲料中，在玉米、小麦、高粱、大米等作物中均有检出。作为一种雌激素类似物，ZEN可以与雌激素受体结合引起动物高雌激素症状。作用于生殖系统会导致生殖器官功能障碍，损害生殖细胞，造成流产、死胎、后代数量减少等危害。此外ZEN还具有肝毒性、血液毒性、免疫毒性和遗传毒性，与癌症的发生发展也有一定关系。因此ZEN污染不仅会对畜牧业造成损害，还可以通过粮食及肉类进入人体，对人体产生危害。
为了保证人畜安全，很多国家已经制定了关于玉米赤霉烯酮的限量标准，但世界各地关于玉米赤霉烯酮的限量标准有所不同，在不同产品中的标准也有所差别。在食品相关规定中，澳大利亚规定谷物中ZEN的含量不能超过50ppb，意大利规定谷物和谷类产品中ZEN的含量不能超过100ppb，我国则规定谷物中ZEN的含量不能超过60ppb；在饲料相关规定中，欧盟规定仔猪日粮中ZEN的最高限量为100ppb，日本规定所有家畜饲料中ZEN含量要低于20ppb，我国的标准则是500ppb。
玉米赤霉烯酮口服后迅速被吸收，主要在猪和人的肠道中进行代谢，ZEN具有多种代谢形式，主要包括α-玉米赤霉醇(α-Zearalanol,α-ZAL)，β-玉米赤霉醇(β-Zearalanol,β-ZAL)，α-玉米赤霉烯醇(α-Zearalenol,α-ZOL)，β-玉米赤霉烯醇(β-Zearalenol,β-ZOL)和玉米赤霉酮(Zearalanone，ZAN)五种代谢产物。除上述5种主要衍生物之外，还存在着一类特殊的形式，该种形式改变了ZEN原有的化学特征，用传统的检测方法无法检测到，称为“隐蔽性毒素”。
目前已发现的玉米赤霉烯酮的隐蔽型形式主要包括玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐(Zearalenone-14-sulfate,Z-14-S)、玉米赤霉烯酮-16-硫酸盐(Zearalenone-16-sulfate,Z-14-S)、玉米赤霉烯酮-14-葡糖苷(Zearalenone-14-Glucoside，Z-14-G)，玉米赤霉烯酮-16-葡糖苷(Zearalenone-16-Glucoside，Z-16-G)，其中以14位取代最为常见，最近还发现了玉米赤霉烯酮代谢物的隐蔽型形式，如α-玉米赤霉烯醇-硫酸盐(α-Zearalenol-sulfate,α-ZOL-S)。
玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐的结构主要是在玉米赤霉烯酮的14位碳上连上一个硫酸根，使其结构和化学性质的变化，导致一些传统方法检测不到。但近年来的研究发现，玉米赤霉烯酮的隐蔽型形式在哺乳动物体内可以被微生物转化成其原型玉米赤霉烯酮进而产生毒性。
食品安全监控及玉米赤霉烯酮隐蔽型毒理学研究需要很多标准品。但由于合成困难、造价昂贵，目前尚无商品化的玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐，因此玉米赤霉烯酮制备鉴定纯化技术是目前该类毒素定量与定性分析的重点和难点。目前关于制备提纯玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐的方法比较少，目前我国尚无玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐标准品制备的方法报道。
因此，本领域迫切需要开发制备纯化玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐的方法来填补该领域的空缺，从而促进对玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐的相关研究。
发明内容
本发明的目的在于提供一株可以专一高效的将玉米赤霉烯酮转化为玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐的菌株，并提供了一种分离原型及隐蔽型的方法。
在本发明的第一方面提供了一种顶孢霉菌，所述顶孢霉菌为顶孢霉菌(Acremonium sclerotigenum)。
在另一优选例中，所述的顶孢霉菌具有以下特性：
在生长条件和玉米赤霉烯酮存在下，可将玉米赤霉烯酮转化为玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐。
在另一优选例中，所述的顶孢霉菌的5.8S rDNA和28S rDNA基因间隔序列(ITS)的序列如SEQ ID NO.:1所示。
在另一优选例中，所述的顶孢霉菌为Acremonium sclerotigenum abw40501。
在另一优选例中，所述的顶孢霉菌来自土壤。
在另一优选例中，所述的顶孢霉菌包括衍生菌株。
在另一优选例中，所述的衍生菌株与所述顶孢霉菌具有相同的或基本相同的(即同一性≥99.5％)5.8S rDNA和28S rDNA基因间隔序列(ITS)。
本发明第二方面提供了一种本发明第一方面所述的顶孢霉菌的用途，用于制备玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐。
本发明第三方面提供了一种制备玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐的方法，包括步骤：
(a)在玉米赤霉烯酮存在的条件下，培养本发明第一方面所述的菌株，从而产生所述玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐；和
(b)从发酵产物中分离出所述的玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐。
在另一优选例中，在步骤(a)中，在以下条件下进行转化：
转化温度为20-30℃，较佳地，24-28℃，更佳地，24-26℃，更佳地，25—26℃；
转化时间为12-60h，较佳地，24h-48h。
在另一优选例中，所述的方法还包括：
(c)对分离的玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐进行纯化，从而获得玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐纯品或标准品。
在另一优选例中，所述的玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐纯品或标准品中，玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐的纯度≥99％(较佳地≥99.5％，更佳地≥99.9％)。
本发明第四方面提供了一种分离制备玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐的方法，包括步骤：
(a)提供一原料，所述原料含有玉米赤霉烯酮和玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐，所述原料为发酵液的上清；
(b)用萃取剂对所述原料进行萃取，获得第一混合液；
(c)对所述第一混合液进行色谱分离，从而获得含玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐的洗脱组分。
在另一优选例中，所述萃取剂选自下组：乙腈、乙酸乙酯、或其混合物。
在另一优选例中，所述的萃取剂中还含有无机盐(例如硫酸镁、氯化钠、或其组合)。
在另一优选例中，所述步骤(c)中，色谱分离的条件选自下组：
(i)色谱柱选自下组：Thermo Part No 25005-259070、Venusil MP C18(2)、或其组合；
(ii)流动相A包括甲酸水(如0.1-0.5wt％的甲酸水)；
(iii)流动相B包括甲醇。
在另一优选例中，玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐的洗脱时间t1与玉米赤霉烯酮的洗脱时间t2的相差(即|Δt|)为1-10分钟，较佳地2-8分钟。
在另一优选例中，玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐的洗脱时间为3-30min，较佳地4-10min，更佳地，6-8min。
在另一优选例中，当所述洗脱时间为6-7min时，洗脱组分为玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐。
在另一优选例中，当所述洗脱时间为8-10min时，洗脱组分为玉米赤霉烯酮。
在另一优选例中，所述方法还包括纯化玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐的步骤。
在另一优选例中，所述经纯化后的玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐的纯度≥95％，较佳地，≥99％或99.5％。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述
附图说明
图1显示了玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐的LC-MS/MS图谱。
图2显示了不同时间洗脱液所含玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐LC-MS/MS图谱的响应值。
图3显示了不同培养时间玉米赤霉烯酮的含量。
图4显示了玉米赤霉烯酮(上)、玉米赤霉烯酮-硫酸盐(中)和玉米赤霉烯酮-葡糖苷(下)的LC-MS/MS图谱。
具体实施方式
本发明人经过广泛而深入的研究，通过大量筛选，首次意外地发现，本发明的顶孢霉菌(Acremonium sclerotigenum)及其衍生菌株可将玉米赤霉烯酮转化为玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐。此外，本发明人还意外的发现，利用本发明的分离纯化方法，可从发酵液中完全分离玉米赤霉烯酮和玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐，从而获得高纯度(≥95％，较佳地，≥99％或99.5％)的玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐。在此基础上，本发明人完成了本发明。
顶孢霉菌(Acremonium sclerotigenum)及其应用
在本发明中，提供一种经筛选的、可将玉米赤霉烯酮转化为玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐，并且可获得高纯度的玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐的顶孢霉菌。
本发明的菌株属于顶孢霉菌，命名为Acremonium sclerotigenum abw40501，经鉴定，本发明的顶孢霉菌的5.8S rDNA和28S rDNA基因间隔序列(ITS)的序列如SEQ ID NO.:1所示：
GGGCTTCGACGTAAACTCCCAACCATTGTGACCTACCACTGTTGCTTCGGCGGCCTCGCCCCGGGCGCGTTCGCGCGGCCCGGACCCAGGCGTCCGCCGGAGGCTCCAAACTCTTGTCTTTTAGTGTATTTCTGAGTGGCATAAGCAAATAAATCAAAACTTTCAGCAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCAAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCGCCAGTATTCTGGCGGGCATGCCTGTCTGAGCGTCATTTCAACCCTCAGGACCCGTTCGCGGGACCTGGCGTTGGGGATCAGCCTGCCCCTGGCGGCGGCTGGCCCTGAAATCCAGTGGCGGTTCCCTCGCGAACTCCTCCGTGCAGTAATTAAACCTCTCGCGGCAGGATAGCGGTTGAACCACGCCGTTAAACCCCCCACTTCTCAAGGTTGACCTCAGATCAGGTAGGAATACCCGCTGAACTTAAGCATATCAAAAGGCCGGAGGAA(SEQ ID NO.:1)。
具体地，本发明的顶孢霉菌从土壤中分离得到，本发明的顶孢霉菌的生理特性如下：该菌株在固体培养基PDA及液体培养基PDB中培养，适宜生长温度为26℃。在固体培养基上生长比较缓慢，为白色丝状，中间易形成褶皱；在液体培养基上生长快速，先形成白色丝状，后形成白色球状。
从发酵液中分离纯化玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐的方法
本发明还提供了一种从发酵液中分离纯化玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐的方法，具体地，所述方法包括步骤：
(a)提供一原料，所述原料含有玉米赤霉烯酮和玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐，所述原料为发酵液的上清；
(b)用萃取剂对所述原料进行萃取，获得第一混合液；
(c)对所述第一混合液进行色谱分离，从而获得含玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐的洗脱组分。
本发明的方法不仅可获得高纯度的玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐，还可精确区分玉米赤霉烯酮和玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐。
本发明的主要优点包括：
1)本发明首次发现，本发明的顶孢霉菌(Acremonium sclerotigenum)及其衍生菌株可将玉米赤霉烯酮转化为玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐。
2)本发明首次意外的发现，利用本发明的分离纯化方法，可从发酵液中高效分离玉米赤霉烯酮和玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐，并且可获得高纯度(≥95％，较佳地，≥99％或99.5％)的玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York:Cold Spring HarborLaboratory Press,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数是重量百分比和重量份数。
如无特别说明，实施例所用的材料和试剂均为市售产品。
菌株的鉴定
鉴定方法：
从PDA平板上取少许菌丝放入1.5mL EP管中；
使用TransDirect Plant Tissue PCR kit试剂盒，加入20μL PD1溶液，95℃加热10min，然后加入等体积的PD2溶液，混合均匀，即为模板；
按下述比例配置PCR体系(50μL)：2×Mix，25μL；ITS1，1μL；ITS4,μL；模板，2μL；ddH2O，稀释到50μL；
进行PCR反应，反应体系为：预变性，95℃，5min；(变性，95℃，30s；退火，55℃，30s；延伸，72℃，30s)进行30次循环；后延伸，72℃，2min；保存，16℃，∞。
PCR完成后进行测序，序列为：
GGGCTTCGACGTAAACTCCCAACCATTGTGACCTACCACTGTTGCTTCGGCGGCCTCGCCCCGGGCGCGTTCGCGCGGCCCGGACCCAGGCGTCCGCCGGAGGCTCCAAACTCTTGTCTTTTAGTGTATTTCTGAGTGGCATAAGCAAATAAATCAAAACTTTCAGCAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCAAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCGCCAGTATTCTGGCGGGCATGCCTGTCTGAGCGTCATTTCAACCCTCAGGACCCGTTCGCGGGACCTGGCGTTGGGGATCAGCCTGCCCCTGGCGGCGGCTGGCCCTGAAATCCAGTGGCGGTTCCCTCGCGAACTCCTCCGTGCAGTAATTAAACCTCTCGCGGCAGGATAGCGGTTGAACCACGCCGTTAAACCCCCCACTTCTCAAGGTTGACCTCAGATCAGGTAGGAATACCCGCTGAACTTAAGCATATCAAAAGGCCGGAGGAA(SEQ ID NO.:1)
所获得的序列在NCBI中Targeted Loci Nucleotide BLAST进行序列比对，选择ITS序列，根据比对结果判断该株菌为Acremonium sclerotigenum。
实施例1
1、产毒菌的培养：本发明的菌株在固体培养基PDA上培养，26℃培养产生菌丝，取直径约6mm菌块在无菌条件下接入灭菌后的50ml液体培养基PDB中，温度26℃，摇床运转速度为100rpm，培养时间1天。
2、毒素的转化：将玉米赤霉烯酮标准品加入上述含菌的培养基中进行转化，温度26℃，摇床运转速度为100rpm，转化时间为2天；
3、毒素的收集：培养液4000rpm下离心10min，按与上清液1：1的比例加入乙腈萃取，震荡均匀后4000rpm离心10min，用0.22μm有机相针式滤器过滤；
4、毒素鉴定：粗提液进入制备型色谱，以含0.2％的甲酸水为流动相A，甲醇为流动相B在线性梯度条件下进行洗脱，进样量为2ml，流速为3ml/min，洗脱液按每分钟进行收集，相同时间的洗脱液汇合经氮吹仪吹干，用甲醇：水＝3：1的溶液重新溶解，过0.22μm有机相滤膜，通过LC-MS/MS检测获取准确收集时间。
5、毒素的制备：粗提液进入制备型色谱，以含0.2％的甲酸水为流动相A，甲醇为流动相B在线性梯度条件下进行洗脱，流速为3ml/min，洗脱液收集时间为6-7min，用自动收集器收集；洗脱液浓缩蒸干后复溶进行纯度鉴定。
其中，步骤4中所使用的色谱制备条件具体如下：
(1)色谱柱：Thermo Part No 25005-259070，250×10mm；柱温：30℃；波长：236nm；压力：144bar
(2)流动相：A相：0.2％的甲酸水；B相：甲醇；
(3)梯度洗脱程序：0-15min 75％B相，15-20min 100％B相，20-24min 75％B相。流动相流速为3ml/min；进样量为2ml。
步骤4中所使用的LC-MS/MS分析条件具体如下：
(1)色谱柱：Agi lent Extend-C18，3.5μm，3.0×150mm；流速：350μl/min；
(2)流动相：A相：5mM乙酸铵的水；B相：甲醇；
(3)梯度洗脱程序：0-1min等度20％B相，1-2min线性升到50％B相，2-8min线性升到100％B相，8-10min等度100％B相，10-13min降回20％B相，13-15min等度20％B相；流动相流速为350μl/min；进样量为10μL；
(4)离子源程序：ESI，负电离模式，采用Full Scan全扫描模式；喷雾电压：2500V；气化温度：200℃；鞘气压力：10psi；辅助气压：15arb；毛细管温度：300℃；去簇电压：0V；碰撞气压：1.0mTorr；碰撞能量：35V。
实施例2
玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐毒素收集如实施例1。用乙酸乙酯：硫酸镁：氯化钠为10：4：1的比例1：1萃取上清液，其余步骤同实施例1。
结果与讨论
1、产毒时间优化
如图3所示，对菌株加药后的ZEN含量按天进行测定，培养一天后ZEN含量明显下降，培养两天后大致达到最低值，培养三天ZEN含量重新升高，到第四天达到比较稳定的状态，因此加药后菌株培养时间控制在两天以内。
2、毒素粗体液的分离
采用制备型色谱对毒素粗提液进行盲筛，进样量为2ml，流速为3ml/min，按每分钟进行收集，共收集四次，相同时间的洗脱液汇合到一起用氮吹仪吹干后用甲醇：水＝3：1的溶液1ml重新溶解，过0.22μm滤膜，通过LC-MS/MS检测。玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐洗脱时间如表1所示，如图2拟合曲线所示，最高响应值位于6～7min，确定为收集时间。
表1：不同收集时间Z-14-S的响应值
Figure BDA0001818224300000081
Figure BDA0001818224300000091
3、Z-14-S的LC-MS/MS图谱
如图1所示为Z-14-S的LC-MS/MS图谱，m/z为397.0，质量跃迁为397.1→317.0和397.1→174.76，与已有报道一致，判定为Z-14-S。
4、可精确区分ZEN和Z-14-S
结果如图4所示，玉米赤霉烯酮的出峰时间为8.85分钟左右，玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐的出峰时间为6.30分钟左右，未检测到玉米赤霉烯酮-葡糖苷。其中图4中6.31分钟出现的峰经分析为玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐断裂产生玉米赤霉烯酮而检测到的峰。
结果表明，我们发现的这株菌可以专一的将玉米赤霉烯酮转化为其硫酸盐形式，不产生葡糖苷等形式。
结论：
本发明发现一株可以将玉米赤霉烯酮高效的转化为玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐的菌株，通过优化培养条件，可以高效率的进行转化制备玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐；在样本纯化过程中优化制备条件，提高了纯化效率，最终提供了一种制备玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐的方法。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
序列表
<110> 中国科学院上海生命科学研究院
浙江省农业科学院
<120> 一种转化制备玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐的菌及其应用
<130> P2018-1793
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 546
<212> DNA
<213> 顶孢霉菌(Acremonium sclerotigenum)
<400> 1
gggcttcgac gtaaactccc aaccattgtg acctaccact gttgcttcgg cggcctcgcc 60
ccgggcgcgt tcgcgcggcc cggacccagg cgtccgccgg aggctccaaa ctcttgtctt 120
ttagtgtatt tctgagtggc ataagcaaat aaatcaaaac tttcagcaac ggatctcttg 180
gttctggcat cgatgaagaa cgcagcaaaa tgcgataagt aatgtgaatt gcagaattca 240
gtgaatcatc gaatctttga acgcacattg cgcccgccag tattctggcg ggcatgcctg 300
tctgagcgtc atttcaaccc tcaggacccg ttcgcgggac ctggcgttgg ggatcagcct 360
gcccctggcg gcggctggcc ctgaaatcca gtggcggttc cctcgcgaac tcctccgtgc 420
agtaattaaa cctctcgcgg caggatagcg gttgaaccac gccgttaaac cccccacttc 480
tcaaggttga cctcagatca ggtaggaata cccgctgaac ttaagcatat caaaaggccg 540
gaggaa 546

Claims (10)

1.一种顶孢霉菌，其特征在于，所述顶孢霉菌为顶孢霉菌(Acremoniumsclerotigenum)。
2.如权利要求1所述的顶孢霉菌，其特征在于，所述的顶孢霉菌具有以下特性：
在生长条件和玉米赤霉烯酮存在下，可将玉米赤霉烯酮转化为玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐。
3.如权利要求1所述的顶孢霉菌，其特征在于，所述的顶孢霉菌的5.8S rDNA和28SrDNA基因间隔序列(ITS)的序列如SEQ ID NO.:1所示。
4.如权利要求1所述的顶孢霉菌，其特征在于，所述的顶孢霉菌为Acremoniumsclerotigenum abw40501。
5.一种权利要求1所述的顶孢霉菌的用途，其特征在于，用于制备玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐。
6.一种制备玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐的方法，其特征在于，包括步骤：
(a)在玉米赤霉烯酮存在的条件下，培养权利要求1所述的菌株，从而产生所述玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐；和
(b)从发酵产物中分离出所述的玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，在步骤(a)中，在以下条件下进行转化：
转化温度为20-30℃，较佳地，24-28℃，更佳地，24-26℃，更佳地，25—26℃；
转化时间为12-60h，较佳地，24h-48h。
8.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述的方法还包括：
(c)对分离的玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐进行纯化，从而获得玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐纯品或标准品。
9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述的玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐纯品或标准品中，玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐的纯度≥99％(较佳地≥99.5％，更佳地≥99.9％)。
10.一种分离制备玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐的方法，其特征在于，包括步骤：
(a)提供一原料，所述原料含有玉米赤霉烯酮和玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐，所述原料为发酵液的上清；
(b)用萃取剂对所述原料进行萃取，获得第一混合液；
(c)对所述第一混合液进行色谱分离，从而获得含玉米赤霉烯酮-14-硫酸盐的洗脱组分。
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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20120225494A1 (en) * 2009-08-21 2012-09-06 Linda Chryseis Le Dna ligands for aflatoxin and zearalenone
CN108251309A (zh) * 2016-12-29 2018-07-06 中粮营养健康研究院有限公司 一种菌剂及其在降解玉米赤霉烯酮中的应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20120225494A1 (en) * 2009-08-21 2012-09-06 Linda Chryseis Le Dna ligands for aflatoxin and zearalenone
CN108251309A (zh) * 2016-12-29 2018-07-06 中粮营养健康研究院有限公司 一种菌剂及其在降解玉米赤霉烯酮中的应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ANTJE BORZEKOWSKI 等: ""Biosynthesis and Characterization of Zearalenone-14-Sulfate, Zearalenone-14-Glucoside and Zearalenone-16-Glucoside Using Common Fungal Strains"", 《TOXINS》 *
王国兵等: ""玉米赤霉烯酮降解菌的分离及降解特性研究"", 《中国粮油学报》 *

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