CN110951629A - 低产酒精的产香酵母及其筛选方法及应用 - Google Patents

低产酒精的产香酵母及其筛选方法及应用 Download PDF

Info

Publication number
CN110951629A
CN110951629A CN201911231666.7A CN201911231666A CN110951629A CN 110951629 A CN110951629 A CN 110951629A CN 201911231666 A CN201911231666 A CN 201911231666A CN 110951629 A CN110951629 A CN 110951629A
Authority
CN
China
Prior art keywords
aroma
rose
yeast
producing
fermentation
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201911231666.7A
Other languages
English (en)
Other versions
CN110951629B (zh
Inventor
倪春林
倪庆伟
蔡旭东
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Ni's International Rose Industry Co ltd
Original Assignee
Ni's International Rose Industry Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ni's International Rose Industry Co ltd filed Critical Ni's International Rose Industry Co ltd
Priority to CN201911231666.7A priority Critical patent/CN110951629B/zh
Publication of CN110951629A publication Critical patent/CN110951629A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN110951629B publication Critical patent/CN110951629B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/145—Fungal isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L2/00—Non-alcoholic beverages; Dry compositions or concentrates therefor; Their preparation
    • A23L2/38—Other non-alcoholic beverages
    • A23L2/382—Other non-alcoholic beverages fermented
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/16—Yeasts; Culture media therefor

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明涉及生物技术领域，公开了低产酒精的产香酵母，保藏名称为中川酵母(Nakazawaea ishiwadae)‑Rose‑倪。本发明具有以下优点和效果：该菌株是从湖北枣阳地区玫瑰原料中分离得到，其筛选方法是获取枣阳地区玫瑰原料，使用培养基方法对酵母进行分离和纯化，然后经过初筛、复筛、产酒精能力试验和发酵实验，该菌株在工业生产玫瑰花汁液发酵中，能够有选择性的利用玫瑰花汁液的内容物，其发酵得到的玫瑰发酵液中果香特征物质乙酸乙酯含量为＞1000㎎/L，玫瑰花特征香气物质β‑苯乙醇＞8000μg/L，具有菌种生长与产香效率高，且低产酒精的优良酿造特性，保持发酵香气与玫瑰香气协调叠加，香气持久；发酵液及成品采用GC以及SPME‑GC‑MS检测微生物代谢风味和玫瑰花香气成分，表明生产中采用该菌株能有效提高玫瑰发酵饮料的香气特性。

Description

低产酒精的产香酵母及其筛选方法及应用
技术领域
本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种低产酒精的产香酵母及其筛选方法及应用。
背景技术
玫瑰是蔷薇科蔷薇属落叶丛生灌木，广泛种植于世界各地，中国是玫瑰的主产国之一， 在湖北、山东、云南、新疆和甘肃等省均有一定的种植规模，尤其以山东平阴、湖北枣阳、 云南滇南的重瓣玫瑰和甘肃苦水的玫瑰最为知名。玫瑰花不仅具有清新优雅的玫瑰香，而且 营养丰富，富含多种必需氨基酸、蛋白质、维生素和矿物质等营养成分，而且富含玫瑰精油 (主要成分为β-苯乙醇、香茅醇、香叶醇、丁子香酚、芳樟醇等挥发性香气物质，具有玫瑰 花的自然花香)、多酚、黄酮和多糖等活性成分，兼具食用价值和药用价值于一身的多功能经 济植物，是一种典型的“药食同源”花朵，食品行业采用玫瑰花制作玫瑰蜜饯、玫瑰饼、玫瑰 饮料、玫瑰发酵饮品等食品。
现有关于玫瑰发酵饮品专利所公布的微生物发酵方式，主要是乳酸菌发酵方式，或者乳 酸菌酵母菌复合发酵方式。比如：CN103750487B公开了以保加利亚乳酸杆菌冻干粉为发酵 菌，在35～37℃条件下厌氧发酵45～48小时，然后经过滤、调配、灌装、灭菌所得玫瑰花保 健饮料；CN109247474A公开了以一株植物乳杆菌为发酵菌，在35～40℃条件下恒温发酵40～60 小时，经调配、灭菌、灌装得到一种玫瑰花发酵饮料；CN108041586A公开了以乳酸菌复合 菌液(保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌)进行一次发酵，啤酒酵母菌液进行二次发酵后，经调 配、杀菌、灌装制备而成的一种玫瑰发酵饮料；CN108936164A公开了一种乳酸菌玫瑰花酵 素饮料的制备方法，经过乳酸菌发酵、调配、杀菌、灌装制备而成的一种玫瑰花酵素酵素。
根据实际生产情况与经验，生产过程中乳酸菌菌种性能容易退化，扩大培养条件苛刻繁 琐，不适合连续生产操作，且产香不足，其发酵液主要以原料香气为主，发酵香气为辅，产 品香气单一，不协调，造成玫瑰香气持久性差，不够馥郁。
为解决上述问题，本发明的目的在于根据现有技术中的情况与问题，通过以下筛选方法， 分离筛选出一株易于培养和生产操作，且能够与玫瑰香协调叠加，显著提高玫瑰发酵饮料中 香气成分的低产酒精的产香酵母菌菌株，对于开发高档优质且香气成分复杂的玫瑰发酵饮料 具有重要意义。
发明内容
本发明的目的是提供一株产香酵母，在玫瑰发酵饮料生产中应用，该酵母具有易于培养 和生产，在玫瑰花汁液发酵底物中低产酒精，且发酵香气能够与玫瑰香协调叠加，显著提高 了玫瑰发酵饮料的香气特性，开发一款高档优质且香气成分复杂的玫瑰发酵饮料
本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：低产酒精的产香酵母，保藏名 称为中川酵母(Nakazawaea ishiwadae)-Rose-倪，保藏号为：GDMCC NO.60786，保藏单位 为广东省微生物菌种保藏中心，保藏单位地址是广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5 楼，保藏时间为2019年9月23日。
本发明的进一步设置为：该低产酒精的产香酵母在YEPD培养基上的菌落为圆形、乳白 色、有光泽、边缘整齐。
通过采用上述技术方案，该低产酒精的产香酵母，生命力强，能够在较恶劣的环境下生 长，提供基本的氮源和碳源，即可生长，易于工业生产。
本发明的进一步设置为：低产酒精的产香酵母的筛选方法，步骤①：湖北省枣阳市地区， 在玫瑰采花期中选取玫瑰园中不同品种、完全绽放的玫瑰鲜花，以无菌操作的方式在不同位 置采摘整朵玫瑰鲜花，然后从每朵玫瑰鲜花的外部、中部、内部分别摘取花瓣，总计100朵 玫瑰鲜花；捣碎混匀并添加无菌水，然后取混合均匀的玫瑰鲜花汁液，梯度稀释涂布于分离 培养基中，于25℃培养箱中培养3d，随机选取具有典型酵母菌菌落特征的单菌落，划线分离 纯化2～3次，斜面保存备用；步骤②：将分离的酵母菌株进行初筛、复筛、产酒精能力试验 和发酵试验，获得低产酒精高产香气的产香酵母。
本发明的进一步设置为：步骤①中，划线分离纯化所使用的分离培养基为YEPD培养基， 所含组分为：酵母浸粉1％，蛋白胨2％，葡萄糖2％，琼脂2％，氯霉素0.1g/L。
本发明的进一步设置为：步骤①中，斜面保存备用所使用的斜面保存培养基为YPD培养 基，所含组分为：酵母浸粉1％，蛋白胨2％，葡萄糖2％，琼脂2％。
本发明的进一步设置为：步骤②中，初筛是酵母菌的糖类发酵试验，试验过程为：采用 杜氏管发酵法，将12.5％的豆芽汁无糖基础液分装于含有杜氏管的试管中，灭菌冷却，测试 的糖类分别用无菌水配制成10％的糖液，煮沸15min，待冷后，用无菌移液管吸取一定量的 糖液分装于含有杜氏管的无糖基础液中，糖浓度达到2％，然后将菌种接入试管中，25～28℃ 下培养，每天观察结果，选择产气量等于杜氏管体积的菌株。
本发明的进一步设置为：步骤②中，复筛是酵母菌的产乙酸乙酯试验，具体过程为：采 用液体法，在含有2％的碳源的培养基中，接入菌种，25～28℃下培养，发酵48～72小时，GC 检测风味物质，选择香气浓郁且乙酸乙酯含量1000㎎/L以上的菌株。
本发明的进一步设置为：步骤②中，酵母菌的产酒精能力试验，过程为：采用液体法， 在含有2％、4％、6％、8％和10％的数种碳源的培养基中，接入菌种，25～28℃下培养，发酵 48～72小时，选择试验组中酒精含量能够≤0.5％vol的菌株。
本发明的进一步设置为：步骤②中，发酵试验为，
第一步，玫瑰花汁液制备：玫瑰干花2～5％，冰糖15～20％和水75～83％，95℃浸提45分 钟，降温至常温，添加一定数量的苹果酸，柠檬酸和乳酸调节pH值降至3.6～3.7，待接种酵 母菌进行发酵。
第二步，玫瑰花汁液发酵：将步骤②中产酒精能力试验筛选得到的酵母活化后接到含有 500ml玫瑰花汁的三角瓶中，使接种量达到2.5～5.0×106个/mL，在18～22℃下发酵48小时， 发酵结束灭菌调配，取发酵液样品以及调配成品进行GC和SPME-GS-MS分析风味和香气物 质，并进行感官品评。
本发明的进一步设置为：上述低产酒精的产香酵母作为发酵菌株在玫瑰发酵饮料生产中 的应用。
本发明的有益效果是：利用本发明的产香酵母在工业生产玫瑰花汁液发酵中，能够有选 择性的利用玫瑰花汁液的内容物，其发酵得到的玫瑰发酵液中果香特征物质乙酸乙酯含量为 ＞1000㎎/L，玫瑰花特征香气物质β-苯乙醇＞8000μg/L，具有菌种生长与产香效率高，且低 产酒精的优良酿造特性，保持发酵香气与玫瑰香气协调叠加，香气持久。本发明应用价值高， 具有极高的社会和经济效益。
附图说明
图1是实施例1中筛选得到低产酒精的产香酵母的400X显微镜下菌体形态。
图2是实施例1中筛选得到低产酒精的产香酵母的菌落形态。
图3是实施例1中筛选得到低产酒精的产香酵母的PCR电泳图。
图4是实施例1中筛选得到低产酒精的产香酵母的序列分析结果。
具体实施方式
下述实施例中的方法，如无特别说明，均为常规方法。
下述实施例中的YEPD培养基配方如下：
酵母浸粉1％，蛋白胨2％，葡萄糖2％，琼脂2％，氯霉素0.1g/L。
下述实施例中的YPD培养基配方如下：
酵母浸粉1％，蛋白胨2％，葡萄糖2％，琼脂2％
下述实施例中的玫瑰花汁液如下：
玫瑰干花3.5％，冰糖20％和水76.5％，95℃浸提45分钟，降温至常温，花汁分离，添加一 定量的苹果酸，柠檬酸和乳酸，调节pH值降至3.7，待接种酵母菌进行发酵。
实施例1：产香酵母的分离、纯化及鉴定
对湖北枣阳地区玫瑰原料中所分离的多株野生酵母菌株进行鉴定和筛选。
低产酒精的产香酵母的筛选方法包括步骤①：湖北省枣阳市地区，在玫瑰采花期中选取 玫瑰园中不同品种、完全绽放的玫瑰鲜花，以无菌操作的方式在不同位置采摘整朵玫瑰鲜花， 然后从每朵玫瑰鲜花的外部、中部、内部分别摘取花瓣，总计100朵玫瑰鲜花；捣碎混匀并 添加无菌水，然后取混合均匀的玫瑰鲜花汁液，梯度稀释涂布于分离培养基中，分离培养基 为YEPD培养基，所含组分为：酵母浸粉1％，蛋白胨2％，葡萄糖2％，琼脂2％，氯霉素 0.1g/L；于25℃培养箱中培养3d，随机选取具有典型酵母菌菌落特征的单菌落，划线分离纯 化2～3次，斜面保存备用，斜面保存备用所使用的斜面保存培养基为YPD培养基，所含组分 为：酵母浸粉1％，蛋白胨2％，葡萄糖2％，琼脂2％；步骤②：将分离的酵母菌株进行初筛、 复筛、产酒精能力试验和发酵试验，获得低产酒精高产香气的产香酵母。
具体筛选过程如下：
1.初筛为酵母菌的糖类发酵试验，具体过程为：采用杜氏管发酵法，将12.5％的豆芽汁无 糖基础液分装于含有杜氏管的试管中，灭菌冷却，测试的糖类(葡萄糖、果糖、蔗糖和麦芽 糖)分别用无菌水配制成10％的糖液，煮沸15min，待冷后，用无菌移液管吸取一定量的糖类 溶液分装于含有杜氏管的无糖基础液中，糖浓度达到2％，然后将菌种接入试管中，26℃下培 养48小时，观察结果，选择产气量等于杜氏管体积的菌株。
2.复筛为酵母菌的产乙酸乙酯试验，具体过程为：采用液体法，在含有2％的数种碳源(葡 萄糖、果糖、蔗糖和麦芽糖)的培养基(酵母浸粉1％、蛋白胨2％、碳源2％，pH值6.0，121℃ 灭菌20min)中，接入菌种，26℃下培养，发酵48小时，GC检测风味物质，选择乙酸乙酯含 量1000㎎/L以上的菌株。
3.酵母菌的产酒精能力试验，具体过程为：采用液体法，在含有2％、4％、6％、8％和10％) 的各种碳源(葡萄酒、果糖、蔗糖和麦芽糖)的培养基中，接入菌种，26℃下培养，发酵48 小时，选择试验组中酒精含量能够≤0.5％vol的菌株。
5.酵母菌的发酵试验：第一步，玫瑰花汁液制备：玫瑰干花2～5％，冰糖15～20％和水 75～83％，95℃浸提45分钟，降温至常温，添加一定数量的苹果酸，柠檬酸和乳酸调节pH值降 至3.6～3.7，待接种酵母菌进行发酵；
第二步，供试酵母活化扩培后接到含有500ml玫瑰花汁的三角瓶中，使接种量达到4.0×106个/mL，在20℃下发酵48小时，发酵结束灭菌调配，取发酵液样品以及调配成品进行GC和 SPEM-GS-MS分析风味和玫瑰香气物质，并进行感官品评。
鉴定方法采用传统形态学并结合26SrDNA D1/D2区域序列分析。具体鉴定过程如下：
该菌株经形态学并结合26SrDNA D1/D2区域序列分析，鉴定为：Nakazawaeaishiwadae。 音译为：中川酵母，具体过程及结果如下：
1、形态学观察方法和结果：该菌种经过48小时固体YEPD培养基上生长的菌落为圆形、 乳白色，有光泽，边缘整齐，菌体粘稠，易挑起。
2、26SrDNA D1/D2区域序列分析方法和结果：
⑴酵母菌基因组DNA的提取采用玻璃珠法，具体方法如下所述：
①取液体YPD培养基活化好的酵母菌悬液于1.5mL离心管中，10000rpm离心1min收集细 胞，湿细胞体积达200μL即可，用去离子水洗涤一次；
②细胞用200μL破菌缓冲液重悬，加0.3g玻璃珠(约200μL体积)及200μL酚∶氯仿∶异戊 醇，漩涡混合器上振荡5min；
③加200μL TE缓冲液，振荡1min，高速离心5min，将水相转移到干净离心管中，加lmL 冰乙醇，颠倒混匀；
④高速(13000rpm)离心10min，去上清液，干燥沉淀，用40μL TE缓冲液重悬沉淀；
⑤加30μL的1mg/mLRNA酶A，用微量取样器混匀，37℃温育30min；
⑥加10μL4mol/L乙酸铵及1mL冰乙醇，颠倒混匀；
⑦高速离心3min，弃上清液，干燥沉淀，DNA用40μL TE缓冲液重悬。
⑵酵母26SrDNA D1/D2区域特异性片段的扩增采用通用引物NL1/NL4由上海生物工程技 术服务有限公司合成；PCR扩增条件为94℃×1min，52℃×2min，72℃×2min，35个循环；72℃ ×10min；PCR扩增体系(50uL)的组成为：模板DNA2μL，10×PCR反应缓冲液5.0μL，25mmoL/L MgCl24μL，25mmoL/L dNTPS0.4μL，5U/μLTaq DNA聚合酶0.5μL，双蒸水补充体系至50μL， 混匀。随后对PCR扩增产物进行检测：取5μLPCR扩增产物点样于1.4％琼脂糖凝胶上。电泳缓 冲液为1×TAE，100V电压下，电泳40min，溴化乙锭(EB)染色后，由凝胶成像系统对电泳 图谱拍照并进行分析，采用100-bp DNA Marker判断PCR扩增产物的大小，结果显示酵母的 特异性片段长度约为600bp。
③酵母26SrDNA D1/D2序列分析：26SrDNA PCR扩增产物由上海生物工程技术服务有限 公司进行测序，根据测序结果，利用BLAST软件从Genbank核酸序列数据库中进行同源序列 搜索，比较试验菌株与已知酵母菌株相应序列的相似程度。
根据目前酵母菌分子系统学研究领域的观点：即具有相同或相似ITS序列(序列同源性 ≥99％)的菌株属于同一物种，根据序列分析结果确定与基因库参考菌株的序列同源性≥99％ 的菌株为Nakazawaea ishiwadae，音译并命名为：中川酵母-Rose-倪。具体菌种信息见图1 (400X显微镜下菌体形态)，图2(菌落形态)，图3(PCR电泳图)和图4(序列分析结果)。
实施例2：产香酵母在玫瑰发酵饮料中的应用
1.产香酵母活化扩培：中川酵母-Rose-倪接种于PDA(酵母浸粉1％、蛋白胨2％、碳源2％，pH值6.0，121℃灭菌20min)液体培养基，26℃，扩培时间24小时，然后转接于玫瑰花汁溶液， 26℃，摇床120r/min，扩培时间24小时，得到扩培液。
2.选取20g玫瑰干花(重瓣玫瑰花)，115g冰糖和500g水混合均匀，于95℃浸提45分钟， 浸提完成后快速冷却至20℃，添加一定量的柠檬酸、苹果酸和乳酸，调节发酵底液pH值至3.7。
3.将上述酵母扩培液接入玫瑰浸提液，酵母接种量4.0×106个/mL，20℃下发酵48小时， 发酵结束后，灭菌、调配和灌装，得到玫瑰发酵饮料。
4.采用GC(气相色谱法)对酵母菌玫瑰发酵液和玫瑰发酵饮料成品中的风味物质组分及 其含量进行检查，采用SPEM-GC-MS(固相微萃取-气相-质谱联用法)对酵母菌玫瑰发酵液 和玫瑰发酵饮料成品中的玫瑰香气物质组分及其含量进行检查，并组织具有国家级品酒师资 质的感官人员对其进行感官品评，具体信息见表1、表2和表3。
表1产香酵母(中川酵母-Rose-倪)生产的玫瑰发酵液以及饮料成品各种风味成分的检 测
结果(单位：㎎/L)
Figure BDA0002303725580000061
备注：ND：未检出
表2产香酵母(中川酵母-Rose-倪)生产的玫瑰发酵液以及饮料成品各种玫瑰香气成分 的
检测结果(单位：μg/L)
Figure BDA0002303725580000062
Figure BDA0002303725580000071
备注：ND：未检出
表3产香酵母(中川酵母-Rose-倪)生产的玫瑰发酵液以及饮料成品的感官品评
Figure BDA0002303725580000072
从表2、表3的实验结果可知，产香酵母(中川酵母-Rose-倪)生产的玫瑰发酵液中，果香特 征物质乙酸乙酯含量为1532.52mg/，玫瑰花特征香气物质β-苯乙醇含量为10356.97μg/L。玫瑰 饮料成品中果香特征物质乙酸乙酯含量为285.66mg/L，玫瑰花特征香气物质β-苯乙醇的含量 为10012.52mg/Lμg/L。由此可知，产香酵母(中川酵母-Rose-倪)在玫瑰发酵饮料生产中应用， 能显著提高玫瑰发酵液及玫瑰饮料成品中的玫瑰香气特性。

Claims (10)

1.低产酒精的产香酵母，其特征在于：保藏名称为中川酵母(Nakazawaea ishiwadae)-Rose-倪，保藏号为：GDMCC NO.60786，保藏单位为广东省微生物菌种保藏中心，保藏时间为2019年9月23日。
2.根据权利要求1所述的低产酒精的产香酵母，其特征在于：该低产酒精的产香酵母在YEPD培养基上的菌落为圆形、乳白色、有光泽、边缘整齐。
3.权利要求1或2所述的低产酒精的产香酵母的筛选方法，其特征在于：
步骤①：湖北省枣阳市地区，在玫瑰采花期中选取玫瑰园中不同品种、完全绽放的玫瑰鲜花，以无菌操作的方式在不同位置采摘整朵玫瑰鲜花，然后从每朵玫瑰鲜花的外部、中部、内部分别摘取花瓣，总计100朵玫瑰鲜花；捣碎混匀并添加无菌水，然后取混合均匀的玫瑰鲜花汁液，梯度稀释涂布于分离培养基中，于25℃培养箱中培养3d，随机选取具有典型酵母菌菌落特征的单菌落，划线分离纯化2～3次，斜面保存备用；
步骤②：将分离的酵母菌株进行初筛、复筛、产酒精能力试验和发酵试验，获得低产酒精高产香气的产香酵母。
4.根据权利要求3所述的低产酒精的产香酵母的筛选方法，其特征在于：步骤①中，划线分离纯化所使用的分离培养基为YEPD培养基，所含组分为：酵母浸粉1％，蛋白胨2％，葡萄糖2％，琼脂2％，氯霉素0.1g/L。
5.根据权利要求3所述的低产酒精的产香酵母的筛选方法，其特征在于：步骤①中，斜面保存备用所使用的斜面保存培养基为YPD培养基，所含组分为：酵母浸粉1％，蛋白胨2％，葡萄糖2％，琼脂2％。
6.根据权利要求3所述的低产酒精的产香酵母的筛选方法，其特征在于：步骤②中，初筛是酵母菌的糖类发酵试验，试验过程为：采用杜氏管发酵法，将12.5％的豆芽汁无糖基础液分装于含有杜氏管的试管中，灭菌冷却，测试的糖类分别用无菌水配制成10％的糖液，煮沸15min，待冷后，用无菌移液管吸取一定量的糖液分装于含有杜氏管的无糖基础液中，糖浓度达到2％，然后将菌种接入试管中，25～28℃下培养，每天观察结果，选择产气量等于杜氏管体积的菌株。
7.根据权利要求3所述的低产酒精的产香酵母的筛选方法，其特征在于：步骤②中，复筛是酵母菌的产乙酸乙酯试验，具体过程为：采用液体法，在含有2％的碳源的培养基中，接入菌种，25～28℃下培养，发酵48～72小时，GC检测风味物质，选择香气浓郁且乙酸乙酯含量1000㎎/L以上的菌株。
8.根据权利要求7所述的低产酒精的产香酵母的筛选方法，其特征在于：步骤②中，酵母菌的产酒精能力试验，过程为：采用液体法，在含有2％、4％、6％、8％和10％的数种碳源的培养基中，接入菌种，25～28℃下培养，发酵48～72小时，选择试验组中酒精含量能够≤0.5％vol的菌株。
9.根据权利要求8所述的低产酒精的产香酵母的筛选方法，其特征在于：步骤②中，发酵试验为，
第一步，玫瑰花汁液制备：玫瑰干花2～5％，冰糖15～20％和水75～83％，95℃浸提45分钟，降温至常温，添加一定数量的苹果酸，柠檬酸和乳酸调节pH值降至3.6～3.7，待接种酵母菌进行发酵。
第二步，玫瑰花汁液发酵：将步骤②中产酒精能力试验筛选得到的酵母活化后接到含有500ml玫瑰花汁的三角瓶中，使接种量达到2.5～5.0×106个/mL，在18～22℃下发酵48小时，发酵结束灭菌调配，取发酵液样品以及调配成品进行GC和SPME-GS-MS分析风味和香气物质，并进行感官品评。
10.权利要求1或2所述的低产酒精的产香酵母作为发酵菌株在玫瑰发酵饮料生产中的应用。
CN201911231666.7A 2019-12-05 2019-12-05 低产酒精的产香酵母及其筛选方法及应用 Active CN110951629B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911231666.7A CN110951629B (zh) 2019-12-05 2019-12-05 低产酒精的产香酵母及其筛选方法及应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911231666.7A CN110951629B (zh) 2019-12-05 2019-12-05 低产酒精的产香酵母及其筛选方法及应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN110951629A true CN110951629A (zh) 2020-04-03
CN110951629B CN110951629B (zh) 2022-05-24

Family

ID=69979842

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201911231666.7A Active CN110951629B (zh) 2019-12-05 2019-12-05 低产酒精的产香酵母及其筛选方法及应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110951629B (zh)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111607621A (zh) * 2020-05-08 2020-09-01 晶叶(银川)生物科技有限公司 一种产玫瑰花香的酵母及其在灵武长枣酵素中的应用
CN112126595A (zh) * 2020-05-26 2020-12-25 中国食品发酵工业研究院有限公司 一株低产酒精的产香酵母及其在低醇葡萄酒中的应用
CN114231427A (zh) * 2021-11-19 2022-03-25 上海应用技术大学 一种能有效提高玫瑰细胞液品质的发酵方法
CN115669827A (zh) * 2022-09-23 2023-02-03 倪氏国际玫瑰产业股份有限公司 一种重瓣红玫瑰的发酵方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CAURÉ PORTUGAL，等: "Potential spoilage yeasts in winery environments: Characterization and proteomic analysis of Trigonopsis cantarellii", 《INTERNATIONAL JOURNAL OF FOOD MICROBIOLOGY》 *
CLETUS P. KURTZMAN，等: "Description of Kuraishia piskuri f.a., sp. nov., a new methanol assimilating yeast and transfer of phylogenetically related Candida species to the genera Kuraishia and Nakazawaea as new combinations", 《FEMS YEAST RESEARCH》 *
JAVIER RUIZ，等: "Occurrence and enological properties of two new non-conventional yeasts (Nakazawaea ishiwadae and Lodderomyces elongisporus) in wine fermentations", 《OCCURRENCE AND ENOLOGICAL PROPERTIES OF TWO NEW NON-CONVENTIONAL YEASTS (NAKAZAWAEA ISHIWADAE AND LODDEROMYCES ELONGISPORUS) IN WINE FERMENTATIONS》 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111607621A (zh) * 2020-05-08 2020-09-01 晶叶(银川)生物科技有限公司 一种产玫瑰花香的酵母及其在灵武长枣酵素中的应用
CN112126595A (zh) * 2020-05-26 2020-12-25 中国食品发酵工业研究院有限公司 一株低产酒精的产香酵母及其在低醇葡萄酒中的应用
CN112126595B (zh) * 2020-05-26 2022-04-08 中国食品发酵工业研究院有限公司 一株低产酒精的产香酵母及其在低醇葡萄酒中的应用
CN114231427A (zh) * 2021-11-19 2022-03-25 上海应用技术大学 一种能有效提高玫瑰细胞液品质的发酵方法
CN115669827A (zh) * 2022-09-23 2023-02-03 倪氏国际玫瑰产业股份有限公司 一种重瓣红玫瑰的发酵方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN110951629B (zh) 2022-05-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110951629A (zh) 低产酒精的产香酵母及其筛选方法及应用
CN109266562B (zh) 一株高产乙酸乙酯异常威克汉姆酵母及其培养方法与应用
CN109810910B (zh) 一株高产乙醇酵母及其与产酯酵母共生发酵提高传统发酵食品品质的方法
CN111961603B (zh) 酿酒酵母和菌剂以及它们在制备发酵产品特别是怀涿盆地葡萄酒酿造中的应用
CN105802865B (zh) 一株高发酵活性和产香特性突出的冰酒酵母及其应用
CN109294933B (zh) 一株酿酒酵母及其与产酯酵母共培养提高传统发酵食品品质的方法
CN110093285B (zh) 一株耐酸发酵乳杆菌及其应用
CN109439556B (zh) 桑葚果酒酿酒酵母及其用途
CN109456904B (zh) 一种产乙酸乙酯的酵母及其应用
CN109486691A (zh) 强抗逆性酿酒酵母及其用途
CN106434397B (zh) 一株酿酒酵母及其应用
AU2018265499B2 (en) A strain of yeast
CN107254415B (zh) 一株产乙酸乙酯的异常毕赤酵母及其应用
CN111909861B (zh) 产己酸乙酯的葡萄牙棒孢酵母菌株及其培养方法与应用
CN112126595B (zh) 一株低产酒精的产香酵母及其在低醇葡萄酒中的应用
CN105820964B (zh) 一株耐低温、产香特性突出的冰酒酵母及其应用
CN116875472A (zh) 一种产生物膜的扣囊复膜酵母菌株及其耐受性与产酯能力
CN107937293B (zh) 一株果香型酿酒酵母及其在北京地区葡萄酒酿造中的应用
CN112175847B (zh) 丛梗孢属酵母新菌株及其用途
CN111690569B (zh) 一株产香红曲霉菌株及其应用
CN113528361A (zh) 一株适于液化法酿造米酒的酿酒酵母及其应用
Udomsaksakul et al. Indigenous Saccharomyces cerevisiae strains from coconut inflorescence sap: characterization and use in coconut wine fermentation
CN114181848A (zh) 一种能产生奶油果香风味的酸居芽孢杆菌及其应用
CN107916233B (zh) 一株酿酒酵母及其在北京地区葡萄酒酿造中的应用
CN117757650B (zh) 一种酿酒酵母及其在生产低高级醇和/或高乙酸乙酯酒产品中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant