CN110951621B - 一种产磷脂酶的黑曲霉菌株 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种产磷脂酶的黑曲霉菌株，该菌株分类命名为黑曲霉(A spergillus niger)，于2019年10月10日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.18591。该黑曲霉菌株可用于生产磷脂酶。黑曲霉菌株生产的磷脂酶可应用于油脂精炼、酶解磷脂制备、酶解皂脚、再生医学材料制备。本发明提供的黑曲霉菌株生产的磷脂酶活性较高，可实现磷脂酶的工业化生产。

Description

一种产磷脂酶的黑曲霉菌株
技术领域
本发明属于发酵技术领域，特别涉及一种产磷脂酶的黑曲霉菌株。
背景技术
磷脂酶(Phospholipase)，是磷脂分解代谢中起重要作用的酶。它催化甘油磷脂C-1或C-2位酯键的水解反应，生成溶血磷脂和脂肪酸。其广泛存在于动物、植物和微生物中。
磷脂酶不仅具有重要的生理功能，在代谢过程中能够消化磷脂分子，同时在激素信号的传递、生物膜的稳衡过程、脂质介体的产生以及发炎过程等方面起着重要的作用。此外，磷脂酶还具有更广阔的应用前景。
1、磷脂酶用于生物膜构造和机能的研究：
磷脂酶在脂类代谢中起重要作用，它可以水解磷脂产生脂肪酸，进入其他脂肪酸代谢途径，是许多脂肪酸代谢的一个限速步骤，因此，磷脂酶是研究脂类代谢重要的工具酶之一。
2、磷脂酶用于溶血磷脂的制造：
溶血磷脂(lysophospholipid)是由甘油磷脂经磷脂酶的作用，除去了C1或C2位脂肪酸的一酰基甘油磷脂质。天然中仅少量存在。C2位上结合了脂肪酸的溶血磷脂在碱性中很不稳定，脂肪酸容易转移到1位上去。溶血磷脂一般稍溶于水，也溶于乙醇、甲醇、氯仿。
溶血磷脂在食品加工中可作为乳化分散剂、乳化剂使用，且具有一定的抗菌作用，效果优于普通磷脂，已被中国、日本等多国批准为天然食品添加剂。溶血磷脂添加在护肤化妆品中，能起到调节皮肤呼吸，舒展皮肤皱纹，改善粗糙结构的作用。在医学上溶血磷脂具有抗病毒、抗肿瘤的作用。
溶血磷脂是生物体内正常存在的安全物质，溶血磷脂于2008年在中国已经被批准为天然食品添加剂。
3、磷脂酶用于植物油脂精炼：
在植物油脂精炼中，需要将毛油中的磷脂除去(即脱胶)，如果不进行脱胶，油脂在加热到一定温度时就会发黑并产生黑烟；传统的脱胶工艺是采用碱化学的方法，即在毛油中加入NaOH，把磷脂转化成脂肪酸钠，再通过离心除去，此法油脂损耗和能耗较大、且产生的废水和皂角易污染环境。而将磷脂酶应用于植物油脂精炼，利用磷脂酶将油脂中的磷脂转化成易于溶解在水中的溶血磷脂，再经过离心即可除去油脂中的磷脂，达到脱胶的目的，不产生含碱废水和皂角。酶法脱胶技术以其良好的经济效益、卓越的环保优势和简单的生产工艺已成为油脂精炼工艺的发展趋势。
4、磷脂酶在脱细胞基质材料制备中的应用：
此应用属再生医学领域，脱细胞基质是指采用物理、化学或酶学等方法，破坏并清除组织中的细胞成分，从而移除移植过程中引起排斥反应的相关抗原，同时保留细胞外基质的完整性，以用于修复损伤组织的一种新型生物材料。同其他组织工程材料比较，脱细胞基质在细胞相容性、生物相容性、免疫原性、力学性能等方面更有优势。至今脱细胞组织工程技术已被成功应用于多种组织和器官的临床重建。而利用磷脂酶制备脱细胞基质比用其他酶(蛋白酶、核酸酶等)具有效率高、不破坏基质组织结构等优势。
除此之外，磷脂酶在饲料添加剂和疾病治疗方面也具有应用前景。
在早期，磷脂酶主要从动物胰脏、蛇毒、蜂毒中提取，但从动物性原料中提取，成本高，产量低。例如从动物内脏中提取磷脂酶，工艺复杂且产量低，蛇毒或蜂毒则来源稀少，不利于磷脂酶的大量生产和利用，因此价格昂贵。
微生物是磷脂酶资源的重要来源。天然的真核(如米曲霉、担子菌、酵母等)及原核(如链霉菌、大肠杆菌和芽孢杆菌等)微生物都能产生磷脂酶。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明的目的在于提供一种产磷脂酶的黑曲霉菌株，可以生产出活力较高的磷脂酶。
为实现上述技术目的，达到上述技术效果，本发明通过以下技术方案实现：
一种产磷脂酶的黑曲霉菌株，该菌株分类命名为黑曲霉(Aspergillus nig er)，于2019年10月10日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.18591，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
该黑曲霉菌株可应用于生产磷脂酶。
本发明还提供了一种利用上述黑曲霉菌株生产磷脂酶的方法，具体为，将上述黑曲霉菌株种子液接种于发酵培养基中，于30℃发酵培养96小时。
上述方法中，发酵培养基包括麦芽糖1.5％，卵磷脂0.5％，酵母粉1％，NaH2PO40.05％，MgSO4 0.006％，CaCl2 0.05％，余量为水。
进一步的，上述发酵培养基的初始pH为6.5。
利用该黑曲霉菌株和上述方法生产的磷脂酶，活力较高。
进一步的，本发明还提供了利用该黑曲霉菌株生产的磷脂酶在油脂精炼中的应用。
进一步的，本发明还提供了利用该黑曲霉菌株生产的磷脂酶在酶解磷脂制备中的应用。
进一步的，本发明还提供了利用该黑曲霉菌株生产的磷脂酶在酶解皂脚中的应用。
进一步的，本发明还提供了利用该黑曲霉菌株生产的磷脂酶在再生医学材料制备中的应用。
本发明的有益效果是：本发明提供的黑曲霉菌株生产的磷脂酶活性较高，酶活力可达1,250U/mL，可实现磷脂酶的工业化生产。而且，利用该黑曲霉菌株生产磷脂酶的发酵原料可采用豆粕、麸皮、玉米芯、甘蔗渣、马铃薯等原料提供的碳源和氮源，原料易得，无需经过复杂的前处理，生产成本低，生产产率高。利用本发明的方法和发酵培养基进行生产磷脂酶，所得的磷脂酶的酶活率大大提高；利用该黑曲霉菌株生产的磷脂酶可应用于植物油脂脱胶、溶血磷脂制备，再生医学材料制备等领域，应用范围广。
具体实施方式
下面对本发明的具体实施方式进行详细阐述，以使本发明的优点和特征能更易于被本领域技术人员理解，从而对本发明的保护范围做出更为清楚明确的界定。
1.菌种初筛
针对磷脂酶的特点，从油脂厂的含油污泥的样品中采集土样，铲去表土层2-3cm，取根系土壤约40g，装入己灭过菌的牛皮纸袋内，封好袋口。将取回的土样过40目筛以去除杂质和大的颗粒。
称取土样1.0g于盛有9.0mL无菌水和玻璃珠的三角瓶中，震荡摇匀后静置，上清液即为10-1土壤稀释液。取10-1土壤稀释液1.0mL加入到盛有9.0m L无菌水的试管中，震荡摇匀，得到10-2土壤稀释液，按照以上方法依次将土样稀释至浓度为10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8。以真菌分离培养基倒平板，取上述梯度浓度的土壤稀释液，依次滴加于对应梯度的分离平板(采用下述真菌分离培养基)上，将稀释液用无菌涂布棒均匀分散至平板表面，置于37℃培养箱培养，挑取长出的菌落，纯化后保藏备用。
其中，真菌分离培养基包括大豆卵磷脂3.0％，(NH4)2SO4 0.2％，NaH2PO4 0.05％，K2HPO4 0.1％，MgSO4 0.05％，CaCl2 0.01％，琼脂2.0％，溴甲酚紫0.003％，余量为水，该真菌分离培养基的pH为7.2±0.2；在121℃，0.1MPa的条件下灭菌20min。
2.菌种复筛和分类鉴定
将上述初筛得到的24株菌株分别接种于马铃薯液体培养基中发酵培养，将得到的发酵液以8000rpm离心10min，取上清液即为粗酶液。将上述粗酶液与底物大豆磷脂进行反应，利用国标(GB/T 22506-2008粮油检验酶改性磷脂中1-和2-溶血磷脂酰胆碱的测定高效液相色谱法)检测溶血磷脂的生成量，以筛选出酶活力最高的菌株。
上述马铃薯液体培养基的制备过程为：将新鲜马铃薯先洗净去皮切成小块，然后称取200g马铃薯，加水煮烂(煮沸20～30分钟，能被玻璃棒戳破即可)，用八层纱布过滤，加入葡萄糖20g，搅拌均匀，再补水至1000mL，pH自然，分装于三角瓶中，加塞、包扎，115℃灭菌20分钟。
将筛选出的酶活力最高的菌株，经平板划线接种至马铃薯液体培养基，置于30℃培养，跟踪观察并记录菌落形态及颜色等特征。
观察结果显示以下特征：
(1)形态学特征为：
菌丛呈黑褐色，顶囊大球形，小梗双层，分生孢子为球形，呈黑、黑褐色，平滑或粗糙；菌丝发达，多分枝，有多核的多细胞真菌。
(2)菌落培养特征为：
在马铃薯培养基上菌落生长快，肉眼可见清晰菌丝体，菌丝粗长，分生孢子面为黑色，菌落表面呈绒毛状，菌落与培养基连接紧密。
根据以上特征初步确定为黑曲霉。
进一步坚定：
利用真菌基因组DNA提取试剂盒提取上述复筛出的菌株的基因组DNA，并以此为模板采用18SrDNA基因的通用引物进行PCR扩增。PCR扩增所使用的反应体系为本领域的技术人员所公知的技术，在此不再赘述。
PCR扩增的反应条件为：94℃预变形4min；94℃变形45s，55℃退火45s，72℃延伸1min，30个循环；72℃延伸10min。PCR产物经琼脂糖凝胶电泳检测鉴定后，交由生物工程公司测序。将测得的该黑曲霉的18SrDNA基因序列(序列如SEQ ID NO.1所示)在GenBank上利用BLAST程序进行相似性搜索，进一步确定为黑曲霉。
将该黑曲霉菌株命名为黑曲霉UPG 2019001(Aspergillus niger UPG 2019001)，将该黑曲霉菌株于2019年10月10日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.18591，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
3.黑曲霉UPG 2019001在磷脂酶制备中的应用
将黑曲霉UPG 2019001利用发酵培养基在30℃下培养96小时，离心除去菌体，即得到磷脂酶的粗酶液，可直接使用或进一步浓缩或纯化。
上述发酵培养基包括麦芽糖1.5％，卵磷脂0.5％，酵母粉1％，NaH2PO40.05％，MgSO40.006％，CaCl20.05％，余量为水；该发酵培养基的初始pH为6.5。该发酵培养基中的碳源和氮源物质来源于豆粕、麸皮、玉米芯、甘蔗渣、马铃薯等原料。利用该发酵培养基进行生产磷脂酶，所得磷脂酶的酶活率大大提高。
4.磷脂酶活力和性质的测定
具体步骤如下：配制浓度为0.35％(W/W)的卵磷脂悬液，用1mol/L的NaOH调节卵磷脂悬液的pH至8左右。取3ml粗酶液(发酵液离心除去菌体后即为粗酶液)，加入27ml上述卵磷脂悬液，于冰浴中混合均匀后分装到6支50ml的离心管中，每支离心管含有5ml反应液。其中3支作为对照管，该3支对照管放在冰水浴中，另外3支作为保温管，将该3支保温管在50℃条件下反应15分钟后，放入冰水中冷却。
在对照管和保温管中分别加1％(W/W)酚酞50μl作指示剂，在冰水浴中，用标定的2.5mmol/L NaOH滴定，记录所消耗NaOH，将消耗2.5mmol/L NaOH 1μL定义为1个磷脂酶活力单位(U)。经5次测定，粗酶液的平均活力为1,250U/mL。
5.磷脂酶在除去植物油脂(大豆油、菜籽油、米糠油)中磷脂中的应用
其步骤是：取植物油毛油100g(磷含量150-300ppm，相当于磷脂含量4～8‰)，预热至80℃，加入2.5mol/L柠檬酸0.125ml，均质1min，于该温度维持30min。冷却至40～45℃，加入4mol/L NaOH溶液和2～3％的蒸馏水混合均匀，再加入50～150μL的利用该黑曲霉菌株制得的磷脂酶液，40～45℃反应2～3小时。取样，测定含磷含量为0.24‰。采用这种方法可将植物油中的磷含量降到10ppm(相当于磷脂含量低于0.26‰)以下，满足物理精炼的要求。
6.磷脂酶在酶解磷脂(溶血磷脂)制备中的应用
其步骤是：在浓度为1～10％(w/v)的磷脂溶液中，加入2～10mmol/L Ca Cl2，加入适量的利用该黑曲霉菌株制得的磷脂酶液，置恒温摇床中，在30～45℃，200r/min条件下反应，当酶解反应趋于平缓时，结束反应，生成溶血磷脂。
7.磷脂酶在再生医学材料制备中的应用
用含磷脂酶的溶液在37℃下处理兔眼角膜样本6小时后进行检测，结果显示：用该磷脂酶制备的兔眼角膜脱细胞基质材料，有效地去除了几乎所有的异种抗原成分，细胞外基质超微结构保存良好，没有造成胶原成分和结构的明显破坏，保留了超过80％的蛋白多糖成分。制备得到的脱细胞兔眼角膜基质材料具有良好的生物相容性，高度透明性和足够的生物力学强度，可以满足组织工程角膜支架材料必需的整体功能要求。
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。
序列表
<110> 无锡优普克生物科技有限公司
<120> 一种产磷脂酶的黑曲霉菌株
<141> 2019-11-15
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1281
<212> DNA
<213> 18SrDNA(Aspergillus niger)
<400> 1
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ttcagcatgt attagctcta gaattaccac aggtatccat gtagtaaggt actatcaaat 1260
aaacgataac tgatttaatg a 1281

Claims (5)

1.一种产磷脂酶的黑曲霉菌株，该菌株分类命名为黑曲霉(Aspergillus ni ger)，于2019年10月10日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.18591。
2.权利要求1所述的黑曲霉菌株在生产磷脂酶中的应用。
3.一种利用权利要求1所述的黑曲霉菌株生产磷脂酶的方法，其特征在于，将权利要求1所述的黑曲霉菌株种子液接种于发酵培养基中，于30℃发酵培养96小时。
4.根据权利要求3的方法，其特征在于，所述发酵培养基包括麦芽糖1.5％，卵磷脂0.5％，酵母粉1％，NaH2PO4 0.05％，MgSO4 0.006％，CaCl2 0.05％，余量为水。
5.根据权利要求4的方法，其特征在于，所述发酵培养基的初始pH为6.5。
CN201911128156.7A 2019-11-18 2019-11-18 一种产磷脂酶的黑曲霉菌株 Active CN110951621B (zh)

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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5378623A (en) * 1992-06-16 1995-01-03 Sankyo Company, Limited Phospholipase A1, process for its preparation and the use thereof
US6001640A (en) * 1995-07-26 1999-12-14 Roehm Gmbh Vegetable oil enzymatic degumming process by means of aspergillus phospholipase
CN102226165A (zh) * 2011-04-22 2011-10-26 华中农业大学 一种产磷脂酶a2的工程菌及其应用
CN104694394A (zh) * 2013-12-05 2015-06-10 丰益(上海)生物技术研发中心有限公司 一种枝孢霉表达的磷脂酶c及其产生菌株

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2368978B1 (en) * 2006-03-10 2014-04-30 Mitsubishi-Kagaku Foods Corporation Novel phospholipase C enzyme(s)

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5378623A (en) * 1992-06-16 1995-01-03 Sankyo Company, Limited Phospholipase A1, process for its preparation and the use thereof
US6001640A (en) * 1995-07-26 1999-12-14 Roehm Gmbh Vegetable oil enzymatic degumming process by means of aspergillus phospholipase
CN102226165A (zh) * 2011-04-22 2011-10-26 华中农业大学 一种产磷脂酶a2的工程菌及其应用
CN104694394A (zh) * 2013-12-05 2015-06-10 丰益(上海)生物技术研发中心有限公司 一种枝孢霉表达的磷脂酶c及其产生菌株

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