CN110946978A - 一种中药组合物醇提物在制备预防或治疗阿尔兹海默症药物中的应用 - Google Patents

一种中药组合物醇提物在制备预防或治疗阿尔兹海默症药物中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种中药组合物醇提物在制备预防或治疗阿尔兹海默症药物中的应用，所述中药组合物醇提物由下述重量份的药味制成：薄荷脑40份、冰片30份、丁香25份、砂仁25份、八角茴香15份、肉桂40份、白胡椒15份、木香15份、干姜25份、儿茶200份、甘草364.1份。本发明经过秀丽隐杆线虫实验结果证实，该中药组合物醇提物对阿尔兹海默症动物病理模型的麻痹表型具有明显的抑制作用，说明该中药组合物醇提物有预防或治疗阿尔兹海默症的潜力，可在制备预防或治疗阿尔兹海默症药物中应用。

Description

一种中药组合物醇提物在制备预防或治疗阿尔兹海默症药物 中的应用
技术领域
本发明属于中药技术领域，涉及一种中药组合物醇提物在制备预防或治疗阿尔兹海默症药物中的应用。
背景技术
阿尔兹海默症(Alzheimer disease，AD)，是一种缓慢的中枢神经系统衰退性的疾病，是最常见的老年痴呆(Wilson et al.,2012)。阿尔兹海默症临床表现为记忆力衰退，认知功能下降，人格的改变以及语言障碍等精神方面的症状。目前，全世界的阿尔兹海默症患者已经超过四千七百万，我国的阿尔兹海默症患者已经超过一千万(Herrera et al.,2016；何冠楠，2016)。
现代医学对阿尔兹海默病的发病机制进行了多年的研究，但是由于其病因复杂，该病的发病机制至今仍不明确。目前较为主流的学说是β-淀粉样蛋白(Aβ)学说，该学说的核心是患者大脑中异常沉积的Aβ通过自由基反应、线粒体氧化损伤和炎症反应等一系列级联反应，直接或者间接作用于神经元和神经胶质细胞，最终导致神经元功能异常或者死亡，引发认知损伤及记忆衰退，最终引起痴呆(Reiman,2016)。
阿尔兹海默病患者的大脑皮层和海马出现β淀粉样蛋白(Aβ)聚集形成的老年斑(SP)是阿尔兹海默病最为主要病理特征之一(Querfurth et al.,2010)，β-淀粉样蛋白可以有效削弱突触结构和功能，是引起阿尔兹海默病的重要物质。因此β淀粉样蛋白已成为公认的筛选预防或治疗阿尔兹海默病药物的靶标。
关于阿尔兹海默症，针对阿尔兹海默症的Aβ假说，Link等将Aβ1-42基因转入秀丽隐杆线虫成为人源化转基因线虫株系CL2006，这种转基因线虫由于细胞内高表达Aβ并形成Aβ沉积，导致渐进性的体壁肌肉的麻痹表型(Link et al.,1995)。另外一种常用的AD转基因线虫CL4176，是将Aβ1-42基因转入秀丽隐杆线虫体内肌肉细胞内，在温度诱导下可以快速产生麻痹表型(Link et al.,2003)。因此，本发明将转基因秀丽隐杆线虫株系CL4176作为筛选预防或治疗阿尔兹海默症药物的病理模型来评价该中药组合物醇提物预防或治疗阿尔兹海默症的作用。
本发明提供了一种中药组合物醇提物在制备预防或治疗阿尔兹海默症药物中的应用。
参考文献
(1)Herrera AC,Prince M,Knapp M,Karagiannidou M,Guerchet M,WorldAlzheimer Report 2016:Improving healthcare for people with dementia,Coveragequality and costs now and in the future[R],Alzheimer’s Disease International,2016.
(2)Link C D,Expression of human beta-amyloid peptide in transgenicCaenorhabditis elegans[J].Proceedings of the National Academy of Sciences ofthe United States of America,1995,92(20):9368-9372.
(3)Link C D,Taft A,Kapulkin V,Dukeb K,Kimb S,Feic Q,Woodc D E,Sahaganc B G,Gene expression analysis in a transgenic Caenorhabditis elegansAlzheimer's disease model[J],Neurobiology of Aging,2003,24(3):397-413.
(4)Querfurth H W,Laferla F M,Alzheimer's disease[J],New EnglandJournal of Medicine,2010,362(4):329-344.
(5)Reiman E M.Alzheimer's disease:Attack on amyloid-[beta]protein[J].Nature,2016,537(7618):36-37.
(6)Wilson R S,Segawa E,Boyle P A,Anagnos S E,Hizel L P,Bennett D A,The natural history of cognitive decline in Alzheimer's disease[J],Psychology&Aging,2012,27(4):1008-1017.
(7)何冠楠，中国的老龄化趋势下阿尔兹海默症发病情况与预防[J]，临床医药文献电子杂志，2016，3(40)：8083-8084。
发明内容
本发明的目的在于提供一种中药组合物醇提物在制备预防或治疗阿尔兹海默症药物中的应用。
该中药组合物醇提物由下述重量份的药味制成：薄荷脑40份、冰片30份、丁香25份、砂仁25份、八角茴香15份、肉桂40份、白胡椒15份、木香15份、干姜25份、儿茶200份、甘草364.1份。
优选地，本发明所述中药组合物醇提物的制备方法是：将该中药组合物成药粉碎，加10倍量75％乙醇，回流提取1小时，得到中药组合物醇提物75％乙醇提物溶液；将该提物溶液用纱布过滤两次，滤液10000rpm离心10min，取上清液，减压蒸干溶剂，干燥，得到中药组合物醇提物75％醇提物浸膏。
优选地，所述的阿尔兹海默症由Aβ过度表达所引起。
所述的中药组合物醇提物可以与任何一种药学上可以接受的辅料混合制成不同剂型，所述的中药组合物醇提物剂型可以为片剂、胶囊剂、口服液或丸剂。
本发明的有益效果是：本发明提供了一种中药组合物醇提物在制备预防或治疗阿尔兹海默症药物中的应用，在秀丽隐杆线虫疾病模型中，所述中药组合物醇提物可以预防或治疗由Aβ过度表达引起的阿尔兹海默症。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明的技术方案进行说明，但是本发明的技术方案并不限于以下实施例。
实施例一中药组合物醇提物的制备
该中药组合物醇提物由下述重量份的药味制成：薄荷脑40份、冰片30份、丁香25份、砂仁25份、八角茴香15份、肉桂40份、白胡椒15份、木香15份、干姜25份、儿茶200份、甘草364.1份。
所述中药组合物醇提物的制备方法为：将该中药组合物粉碎，加10倍量75％乙醇，回流提取1小时，得到75％乙醇提物溶液；将该醇提物溶液用纱布过滤两次，滤液10000rpm离心10min，取上清液，减压蒸干溶剂，干燥，得到该中药组合物醇提物浸膏。
实施例二中药组合物醇提物指标性成分采用HPLC测定
1.样品处理：称取该中药组合物醇提物100mg，加入50％甲醇10ml，称定重量，超声处理10min，室温放置冷却后，再称定重量，用50％甲醇补足损失的重量，滤过，取滤液，即得。
2.标准曲线制作：称取儿茶素以及表儿茶素，配制母液，用50％甲醇溶液逐级稀释并配制标准工作系列溶液，其浓度分别为50μg/mL、100μg/mL、250μg/mL、500μg/mL、1.0mg/mL，色谱进样10μL，以分别测得的儿茶素、表儿茶素的峰面积对其浓度绘制标准曲线。
3.色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，色谱柱：250mm*4.6mm*5μm，流动相为2％冰醋酸(A)-乙腈(B)进行梯度洗脱。
流动相(A+B)梯度洗脱体系：0-5min：92％A：5-20min：92％A-82％A：20-25min：82％A-50％A：25-26min：50％A-92％A；26-30min：92％A。
流速：1.0ml/min。
柱温：30℃
紫外检测器波长：280n m。
4.样品测定：根据色谱峰保留时间定性，用外标峰面积法进行定量。
采用上述方法，得到儿茶素与表儿茶素峰面积与浓度关系分为为y＝5268.7x+33577，R2＝0.9994；y＝5994.6x-2599.4，R2＝0.9991。计算可得所述每1mg中药组合物提取物的标志性化学组分含有儿茶素63.25±2.62μg，含表儿茶素13.54±0.64μg。
实施例三中药组合物醇提物醇提物对阿尔兹海默症的治疗作用
1.生物材料
(1)秀丽隐杆线虫 秀丽隐杆线虫CL4176购自CaenorhabditisGeneticsCenter；为转基因品系，在25℃温度诱导下肌肉特异性表达人类Aβ，Aβ在肌肉组织聚集，最终导致线虫麻痹，本实施例采用秀丽线虫品系CL4176作为筛选预防或治疗阿尔兹海默病药物的病理模型。
(2)大肠杆菌OP50(尿嘧啶渗漏突变株)购自Caenorhabditis Genetics Center(CGC)，作为秀丽隐杆线虫的食物。
2.试剂
(1)固体NGM(Nematode Growth Medium)培养基成分与制作(以1升为例)：
成分 含量
NaCl 3.00g
K<sub>2</sub>HPO<sub>4</sub> 2.34g
KH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub> 17.23g
蛋白胨 2.50g
琼脂 17.00g
补充H<sub>2</sub>O至 1000mL
固体NGM培养基配制好后，121℃下高压恒温灭菌20min，在无菌操作台下加入5mg/mL胆固醇1mL，1M MgSO4 1mL，1M CaCl2 1mL摇匀，趁热倒入已灭菌的9cm培养板，约20mL/板。静置等待培养基凝固，备用。
(2)M9液配方
成分 含量
Na<sub>2</sub>HPO<sub>4</sub> 6.00g
KH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub> 3.00g
NaCl 5.00g
1M MgSO<sub>4</sub> 1.00mL
补充H<sub>2</sub>O至 1000mL
(3)裂解液的配制：6.4％NaClO溶液和1M NaOH溶液按体积比1:1混合。
3.配制含有中药组合物醇提物的NGM平板
药液配制：将实施例一得到的中药组合物75％乙醇提取物稀释成下列浓度：
L：0.375mg/mL；M：0.75mg/mL；H：1.5mg/mL
4.实施步骤
(1)线虫的培养：
将线虫接在涂有大肠杆菌OP50的固体NGM板上，然后置于16℃的培养箱中培养，当线虫长到成虫时进行同步化处理。
(2)线虫同步化：
挑选含有大量成虫并且有部分线虫卵已经孵出的NGM培养基，用M9液将线虫从培养基上冲下，转移到离心管中，静置使线虫自由沉降至管底，弃上清。视线虫量多少向离心管中加入线虫碱裂解液，在漩祸搅拌器上振荡5-7分钟待线虫全部断裂时停止涡旋,并分装于1.5mL离心管中，用M9溶液洗线虫卵三次。
(3)中药组合物75％乙醇提取物对秀丽隐杆线虫CL4176的作用
线虫同步化后将线虫卵转移到涂布有OP50并混合不同浓度中药组合物75％乙醇提取物的NGM培养基上，空白对照为涂布有OP50并加有与中药组合物75％乙醇提取物等体积无菌水的NGM培养基。每个培养基60条线虫，每个药物浓度以三个培养基作为平行，16℃培养3天至L3期。
为了使线虫表达Aβ，将L3期线虫转至25℃下进行诱导，34h后开始计数线虫麻痹条数。每两小时计数一次，直至所有线虫都麻痹(麻痹是指机械刺激线虫身体时，线虫不能运动或者只有头部运动)，结果见表1。
表1中药组合物75％乙醇提取物对秀丽隐杆线虫CL4176麻痹进程的影响
Figure BDA0001947684700000051
从表1可以看出，1.5mg/mL中药组合物75％乙醇提取物对线虫产生毒性，而0.375mg/mL和0.75mg/mL中药组合物75％乙醇提取物在一定时期内延缓了秀丽隐杆线虫CL4176的麻痹进程，说明该中药组合物5％乙醇提取物减缓了Aβ的表达。
综上所述，该中药组合物醇提物延缓了AD线虫麻痹进程，故该中药组合物醇提物对阿尔兹海默症动物病理模型秀丽隐杆线虫Aβ过度表达引起的麻痹表型具有明显的抑制作用，说明该中药组合物醇提物对阿尔兹海默症动物病理模型的麻痹表型具有明显的抑制作用，说明该中药组合物醇提物有预防或治疗阿尔兹海默症的潜力，可在制备预防或治疗阿尔兹海默症药物中应用。

Claims (4)

1.一种中药组合物醇提物在制备预防或治疗阿尔兹海默症药物中的应用，所述中药组合物醇提物由下述重量份的药味制成：薄荷脑40份、冰片30份、丁香25份、砂仁25份、八角茴香15份、肉桂40份、白胡椒15份、木香15份、干姜25份、儿茶200份、甘草364.1份。
2.如权利要求1所述的一种中药组合物醇提物在制备预防或治疗阿尔兹海默症药物中的应用，其特征在于，所述中药组合物醇提物的制备方法为：将该中药组合物粉碎，加10倍量75％乙醇，回流提取1小时，得到中药组合物醇提物75％乙醇提物溶液；将该提物溶液用纱布过滤两次，滤液10000rpm离心10min，取上清液，减压蒸干溶剂，干燥，得到该中药组合物醇提物75％醇提物浸膏。
3.如权利要求1所述的一种中药组合物醇提物在制备预防或治疗阿尔兹海默症药物中的应用，其特征在于，所述的阿尔兹海默症由Aβ过度表达所引起。
4.如权利要求1所述的一种中药组合物醇提物在制备预防或治疗阿尔兹海默症药物中的应用，其特征在于，所述的中药组合物醇提物剂型可以为片剂、胶囊剂、口服液或丸剂。
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CN108324711A (zh) * 2018-05-03 2018-07-27 东北师范大学 一种化合物在拮抗蛋白聚积治疗老年痴呆方面的应用
CN108421017A (zh) * 2018-05-09 2018-08-21 上海中华药业有限公司 龙虎人丹在制备降血脂和动脉斑块药物中的应用

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