CN110923287A - 鲍鱼肌肉蛋白肽的制备方法 - Google Patents

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杨照青
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Abstract

本发明公开了一种鲍鱼肌肉蛋白肽的制备方法，技术工艺包括以鲍鱼肌肉为原料通过蛋白复合酶一次酶解、高压均质、糖苷酶和蛋白酶组成的复合酶二次酶解、喷雾干燥制备成具有良好抗氧化活性的蛋白寡肽。本发明采用糖苷酶与蛋白酶的复合酶解方式，结合高压均质，不需要分离工序，工艺流程简单，适合工业化生产，而且产品可以成为老人、小孩和病人的优良营养补充剂。

Description

鲍鱼肌肉蛋白肽的制备方法
技术领域
本发明涉及一种鲍鱼肌肉蛋白肽制备技术领域，具体地说涉及一种鲍鱼肌肉蛋白肽的制备方法，是将鲍鱼肌肉通过高压均质处理、蛋白酶酶解和糖苷酶酶解，制备成具有良好抗氧化活性功能鲍鱼肌肉蛋白肽的方法。
背景技术
鲍鱼位居海珍品之首，具有多种有益于身体健康的抗氧化、抗炎症和抗癌等活性物质，被称为“软黄金”。虽然鲍鱼富含基质蛋白、肌肉硬，不易被消化系统较弱的老人、小孩和病人等消化吸收。另一方面，蛋白寡肽不仅具有抗氧化、增强免疫能力、抗高血压、降胆固醇等生理活性，可以抑制细菌、病毒和肿瘤细胞的生长繁殖，同时还具有改善人体微量元素吸收和矿物质运输、促进生长等新功能，在细胞生理及代谢功能的调节上具有重要的作用。随着中国经济高速发展，人民生活水平不断提高，消费者对健康的重视度逐渐提高，市场对具有保健功能蛋白肽的需求量也不断增加。
发明内容
本发明的目的在于提供一种具有良好抗氧化活性的鲍鱼肌肉蛋白肽的制备方法，它是以鲍鱼肌肉为原料，利用复合蛋白酶酶解、高压均质、含有糖苷酶的复合酶酶解，通过喷雾干燥制备成鲍鱼蛋白肽粉末。
为了实现上述目的，本发明的技术方案是：
本发明是一种鲍鱼肌肉蛋白肽的制备方法，包括以下步骤：(1) 一次酶解：将去壳、去内脏的鲍鱼肌肉用绞肉机绞成肉糜，加入3~5倍肉糜质量体积的纯净水，将pH调整至8.0~8.5，加入肉糜重量0.1~1.0‰的复合蛋白酶，于45~55℃下保温酶解60-120 min，制得一次酶解物；(2) 高压均质：将一次酶解物利用高压均质机进行均质制备成高压均质酶解物；(3) 二次酶解：将高压均质酶解物的pH调整至5.0~6.0，加入肉糜重量0.2~2.0‰的复合酶，于45~55℃下保温酶解60-120 min，制得二次酶解物；(4) 灭酶和干燥：将二次酶解物于80~90℃下保温15-30 min，利用喷雾干燥设备制备成粉末。
在步骤(1)中，所述的复合蛋白酶由胶原蛋白酶、碱性蛋白酶和胰蛋白酶组成；它们的的质量百分比分别为：胶原蛋白酶40~60%，碱性蛋白酶10~30%，胰蛋白酶30~50%。
在步骤(2)中，所述的高压均质，压力为50~150 MPa。
在步骤(3)中，所述的复合酶由β-葡萄糖苷酶和蛋白酶组成，所述蛋白酶为木瓜蛋白酶或菠萝蛋白酶中的一种；它们的质量百分比分别为：β-葡萄糖苷酶50~70%，蛋白酶30~50%。
在步骤(4)中，所述的喷雾干燥，其进风温度为170~190℃，出风温度为70~90℃。
所述的鲍鱼肌肉为新鲜的、冷冻或蒸煮的鲍鱼腹足肌肉中的一种。
传统蛋白肽的制备一般通过蛋白酶酶解结合膜分离和柱层析分离手段，工艺流程复杂，需要增加设备和人工成本，而且容易使宝贵的鲍鱼肌肉营养成分流失。本发明采用糖苷酶与蛋白酶的复合酶解方式，结合高压均质，不需要通过膜分离和柱层析分离手段，就可以获得小分子量的蛋白寡肽，尤其糖苷酶水解糖苷键后可以增强糖肽的抗氧化活性，可制备具有良好抗氧化活性功能的鲍鱼肌肉蛋白肽，提升鲍鱼肌肉的营养价值。因此本发明具有以下突出优点：
1、本发明制备工艺流程简单，产品得率高，生产成本低，适合工业化生产。
2、本发明采用高压均质，容易使酶接近酶切位点，提高酶解效率。
3、本发明采用糖苷酶与蛋白酶的复合酶解方式，可以提高蛋白肽的抗氧化活性。
下面结合附图表和具体实施例对本发明作进一步的说明。
附图说明
表1为鲍鱼蛋白肽的分子量分布；
图1为鲍鱼蛋白肽的DPPH自由基清除能力；
图2为鲍鱼蛋白肽的羟自由基清除能力。
具体实施方式
实施例1
鲜活鲍鱼刷洗干净后，去壳、去内脏，取1 kg的鲍鱼腹足肌肉用绞肉机绞成肉糜，加入5L的纯净水，将溶液pH用0.5 M NaOH溶液调整至8.5，加入0.06 g胶原蛋白酶，0.01 g碱性蛋白酶和0.03 g胰蛋白酶并搅拌均匀，放在55℃水浴下保温酶解120 min，酶解物利用高压均质机在50 MPa下乳化3次，将高压均质酶解物的pH调整6.0，加入0.14 g β-葡萄糖苷酶和0.06 g 木瓜蛋白酶，放在55℃水浴下保温酶解120 min后，再将酶解物转移至90℃水浴下保温15 min，最后利用喷雾干燥机在进风温度为170℃，出风温度为70℃的条件下喷雾制备成鲍鱼蛋白肽粉末。
实施例2
冷冻鲍鱼刷洗干净后，去壳、去内脏，取1 kg的鲍鱼腹足肌肉用绞肉机绞成肉糜，加入4L的纯净水，将溶液pH用0.5 M NaOH溶液调整至8.2，0. 25 g胶原蛋白酶，0.05 g碱性蛋白酶和0.20 g胰蛋白酶并搅拌均匀，放在50℃水浴下保温酶解90 min，酶解物利用高压均质机在100 MPa下乳化3次，将高压均质酶解物的pH调整5.5，加入0.60 g β-葡萄糖苷酶和0.40 g 木瓜蛋白酶，放在50℃水浴下保温酶解90 min后，再将酶解物转移至85℃水浴下保温20 min，最后利用喷雾干燥机在进风温度为180℃，出风温度为80℃的条件下喷雾制备成鲍鱼蛋白肽粉末。
实施例3
蒸煮后的鲍鱼经去壳、去内脏后，取1 kg的鲍鱼腹足肌肉用绞肉机绞成肉糜，加入3 L的纯净水，将溶液pH用0.5 M NaOH溶液调整至8.0，0. 40 g胶原蛋白酶，0.30 g碱性蛋白酶和0.30 g胰蛋白酶并搅拌均匀，放在45℃水浴下保温酶解60 min，酶解物利用高压均质机在150 MPa下乳化3次，将高压均质酶解物的pH调整5.0，加入1.00 g β-葡萄糖苷酶和1.00g 菠萝蛋白酶，放在45℃水浴下保温酶解60 min后，再将酶解物转移至90℃水浴下保温15min，最后利用喷雾干燥机在进风温度为190℃，出风温度为90℃的条件下喷雾制备成鲍鱼蛋白肽粉末。
产品检测
分子量分布测定：利用凝胶渗透色谱测定分子质量分布的情况。色谱柱为TSKgelG2000 SWXLL (300 mm×7.8 mm)，流动相为乙腈/双蒸水/ TFA (45:55:0.1，V/V/V)。在柱温30 ℃、流速 0.5 mL/min、紫外检测波长214 nm的条件下，以细胞色素C、抑肽酶、氧化型谷胱甘肽、Gly-Gly-Gly和Gly作为标准品。
自由基清除能力：在2 mL样品中加入2 mL 0.2 mmol/L DPPH乙醇溶液，于暗处室温下静置反应30 min，测定在517 nm下的吸光值，记为As，以2 mL 乙醇替代DPPH乙醇溶液作为样品对照值，记为A，空白组则以蒸馏水替代样品，记为A0。根据以下公式计算DPPH自由基清除率：
DPPH自由基清除率(%)=[1–(As–A)/A0]×100%
羟自由基清除能力：在1 mL样品中依次加入0.3 mL 8 mmol/L FeSO4、0.25 mL 20mmol/L H2O2 和1 mL 3 mmol/L水杨酸溶液，混匀后在 37 ℃ 水浴保温30 min，经流水冷却后，加入0.45 mL蒸馏水，测定510 nm下的吸光值，记为As，同样，以1mL蒸馏水替代水杨酸作为样品对照值，记为A，空白组则以蒸馏水替代样品，记为A0。根据以下公式计算羟自由基清除率：
羟自由基清除率(%)=[1–(As–A)/A0]×100%
利用高效液相对蛋白肽的分子量分布进行分析 (表1)，结果发现鲍鱼蛋白肽的分子量60%以上集中分布在200-1000 Da。通常，1000 Da以内的寡肽比游离氨基酸更容易消化吸收，而且生物效价和营养价值明显比游离氨基酸高。因此，本发明制备的鲍鱼蛋白肽容易被人体消化吸收，将成为消化系统较弱的老人、小孩和病人等营养补充剂。
通常，IC50值越小表示蛋白肽的自由基清除能力越强。图1的结果表明鲍鱼蛋白肽的DPPH自由基清除能力接近谷胱甘肽（GSH）。图2的结果表明鲍鱼蛋白肽的羟自由基清除能力甚至比GSH强。这些结果表明本发明制备的鲍鱼蛋白肽具有良好的抗氧化能力。
综上所述，鲍鱼肌肉为原料通过蛋白复合酶一次酶解、高压均质、糖苷酶和蛋白酶组成的复合酶二次酶解、喷雾干燥制备的蛋白肽，主要以200-1000 Da的寡肽形式存在，具有良好的抗氧化活性，可以作为老人、小孩和病人的营养补充剂。
上述仅为本发明的具体实施例，但本发明的设计构思并不局限于此，凡利用此构思对本发明进行非实质性的改动，均应属于侵犯本发明保护范围的行为。
表1 鲍鱼蛋白肽的分子量分布比例(%)
Figure 934841DEST_PATH_IMAGE001

Claims (6)

1.一种鲍鱼肌肉蛋白肽的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：(1) 一次酶解：将去壳、去内脏的鲍鱼肌肉用绞肉机绞成肉糜，加入3~5倍肉糜质量体积的纯净水，将pH调整至8.0~8.5，加入肉糜重量0.1~1.0‰的复合蛋白酶，于45~55℃下保温酶解60-120 min，制得一次酶解物；(2) 高压均质：将一次酶解物利用高压均质机进行均质制备成高压均质酶解物；(3) 二次酶解：将高压均质酶解物的pH调整至5.0~6.0，加入肉糜重量0.2~2.0‰的复合酶，于45~55℃下保温酶解60-120 min，制得二次酶解物；(4) 灭酶和干燥：将二次酶解物于80~90℃下保温15-30 min，利用喷雾干燥设备制备成粉末。
2.如权利要求1所述的鲍鱼肌肉蛋白肽的制备方法，其特征在于：在步骤(1)中，所述的复合蛋白酶由胶原蛋白酶、碱性蛋白酶和胰蛋白酶组成；它们的的质量百分比分别为：胶原蛋白酶40~60%，碱性蛋白酶10~30%，胰蛋白酶30~50%。
3.如权利要求1所述的鲍鱼肌肉蛋白肽的制备方法，其特征在于：在步骤(2)中，所述的高压均质，压力为50~150 MPa。
4.如权利要求1所述的鲍鱼肌肉蛋白肽的制备方法，其特征在于：在步骤(3)中，所述的复合酶由β-葡萄糖苷酶和蛋白酶组成，所述蛋白酶为木瓜蛋白酶或菠萝蛋白酶中的一种；它们的质量百分比分别为：β-葡萄糖苷酶50~70%，蛋白酶30~50%。
5.如权利要求1所述的鲍鱼肌肉蛋白肽的制备方法，其特征在于：在步骤(4)中，所述的喷雾干燥，其进风温度为170~190℃，出风温度为70~90℃。
6.如权利要求1所述的鲍鱼肌肉蛋白肽的制备方法，其特征在于：所述的鲍鱼肌肉为新鲜的、冷冻或蒸煮的鲍鱼腹足肌肉中的一种。
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