CN110917239A - 一种苦参总生物碱的提取纯化方法 - Google Patents

一种苦参总生物碱的提取纯化方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种苦参总生物碱的提取纯化方法。本发明采用稀酸提取、碱沉除杂、阳离子树脂柱吸附、萃取和浓缩的工艺路线。本发明具有工序简单，成本低，苦参总生物碱的含量高于85％，对环境无污染，且所获得的苦参总生物碱作为医药原料大大提高了患者安全性的有益效果。

Description

一种苦参总生物碱的提取纯化方法
技术领域
本发明涉及一种提取纯化方法，特别是一种苦参总生物碱的提取纯化方法。
背景技术
中药苦参属豆科植物，其有效部位为干燥的根，性寒，味苦，具有清热燥湿、泻火解毒、杀虫、利尿等功效。本品局部外用有清热、除湿、杀虫止痒之效，对于皮肤瘙痒、滴虫性阴痒带下、滴虫性肠炎等均有一定疗效。苦参含有苦参碱、氧化苦参碱、槐果碱、槐胺碱、氧化槐果碱、槐定碱等多种化学成分，现代药理研究表明其具有抗炎、抑菌、抗肿瘤、免疫抑制等多种药理活性。临床上主要用于带下阴痒、皮肤瘙痒、黄坦、小便赤涩等症状。
苦参总生物碱是发挥药效的主要物质，药用价值极高，广泛用于医药、生物农业领域，具有较强的市场开发价值。传统的苦参总生物碱的制备方法有五种：水醇法、稀酸法、氨-氯仿法、超临界萃取法和树脂(大孔树脂、离子交换树脂)法等。公布号为CN1620314A，发明名称为“一种苦参总碱的制备方法”中，虽然能制备出含量达80％的苦参总碱(以氧化苦参碱计)，但在制备过程中使用了甲苯、氯仿等毒性较强的有机试剂，这不仅污染环境、危害工人健康，而且提取物中残留的氯仿等有毒的有机试剂对患者的健康产生巨大的隐患。
发明内容
本发明的目的在于，本发明是针对现有的苦参总生物碱的制备需要使用大量有毒的有机试剂(甲苯、乙醚、氯仿)的缺点,提供一种苦参总生物碱的提取纯化方法。本发明具有工序简单，成本低，苦参总生物碱的含量高于85％，对环境无污染，且所获得的苦参总生物碱作为医药原料大大提高了患者安全性的特点。
本发明的技术方案：一种苦参总生物碱的提取纯化方法，包括有以下步骤：
(1)提取：苦参饮片干燥后粉粹成粗粉，装入提取罐内，加入盐酸溶液浸泡，放出提取液，按上述条件提取2-4次，合并提取液，得到A品；
(2)碱沉：将A品用NaOH溶液调节pH至3.5-4.5静置6h，弃去沉淀物取上清液，得到B品；
(3)732型阳离子交换树脂预处理：将732型阳离子交换树脂用饱和食盐水浸泡，并洗至无色；再加入NaOH浸泡，并随时搅拌以纯化水洗至中性；最后加入盐酸浸泡，使树脂转为H型，并用纯化水洗至pH为4-5，即可装柱形成树脂柱应用；
(4)阳离子树脂柱吸附：将B品按一定的流速通过树脂柱，流速大小以碘化铋钾显色结果，考察苦参总生物碱的泄露点来确定流速，提取液通过树脂柱后用纯化水洗至无色；用氨水洗柱洗至无色，再用氨水浸泡两次，每次浸泡之后都洗至无色，合并三次氨水洗脱液，得到C品；
(5)浓缩：将B样在温度70±5℃，压力为-0.05Mpa的条件下浓缩，得到D品；
(6)萃取：将D品装入萃取容器内，加入混合有机试剂，在室温条件下振荡摇匀，静止分层40-60mine,连续萃取2次，将分离后的上层有机试剂合并，得到E品；
(7)浓缩：将E品在温度65±5℃，压力为-0.05Mpa的条件下浓缩得棕色浸膏，即得苦参总生物碱成品。
前述的苦参总生物碱的提取纯化方法中，所述步骤(1)中，提取：苦参饮片干燥后粉粹成粗粉，装入提取罐内，按料液比为1:5加入0.2％的盐酸溶液浸泡12h，放出提取液，按上述条件提取3次，合并提取液，得到A品。
前述的苦参总生物碱的提取纯化方法中，所述步骤(2)中，将A品用6M的NaOH溶液调节pH至4静置6h。
前述的苦参总生物碱的提取纯化方法中，所述步骤(3)中，将732型阳离子交换树脂用饱和食盐水浸泡24h，并洗至无色；再加入5倍量的5％NaOH浸泡4h，并随时搅拌以纯化水洗至中性；最后加入5倍量的5％盐酸浸泡5h，使树脂转为H型。
前述的苦参总生物碱的提取纯化方法中，所述步骤(4)中，用3％的氨水洗柱洗至无色，再用3％氨水浸泡8h和12h，每次浸泡之后都洗至无色，合并三次氨水洗脱液。
前述的苦参总生物碱的提取纯化方法中，所述步骤(5)中，D品在70±5℃时相对密度为1.15-1.25。
前述的苦参总生物碱的提取纯化方法中，所述步骤(6)中，混合有机试剂由乙酸乙酯：无水乙醇＝7:3的体积比组成。
前述的苦参总生物碱的提取纯化方法中，所述步骤(6)中，是将D品装入萃取容器内，按D品与混合有机试剂料液比为1：5加入混合有机试剂。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
1、本发明采用稀酸提取、碱沉除杂、阳离子树脂柱吸附、萃取和浓缩的工艺路线，如图1所示，使其工序简单便于工业上大量的生产。
2、本发明采用碱沉(替代了传统上的醇沉)可除去部分非碱性杂质，不但提高了苦参总生物碱含量同时节约了成本。
3、本发明采用阳离子树脂吸附可除大部分水溶性的非生物碱杂质，在工业大生产上不但避免了提取液的浓缩，而且可以对阳离子树脂再生处理反复使用，大大减低了能源的消耗。
4、本发明首次使用低毒的混合有机试剂乙酸乙酯和无水乙醇(7:3)萃取D品，不但使苦参总生物碱的含量高于85％(传统苦参总碱的含量在70％左右)同时使用低毒的乙酸乙酯和无水乙醇的混合有机试剂代替传统萃取试剂氯仿、石油醚等，不仅对环境无污染而且所获得的苦参总生物碱作为医药原料大大提高了患者的安全性。
实现证明：
本发明首次使用无水乙醇和乙酸乙酯混合有机试剂萃取，在实验中比较了①氯仿、②二氯甲烷与无水乙醇混合有机试剂、③无水乙醇和乙酸乙酯混合有机试剂萃取。总生物碱的含量和收率由表1可见，取苦参1kg，按上述本发明步骤(1)至步骤(5)过程制备得到的D品60g(总生物碱的含量48％)，再分别用上述3种有机溶剂萃取，萃取至萃取液无色，以得到的苦参总生物碱的含量和产量为指标(详见表1)，选用本发明乙酸乙酯和无水乙醇萃取，萃取量的占比为64％，得到的总生物碱含量为86％。
表1不同有机试剂萃取的比较(苦参含量为48％的总生物碱取5g,共3组)
Figure BDA0002347823610000041
为确定萃取试剂乙酸乙酯与无水乙醇的最佳混合比例，将按上述本发明步骤(1)至步骤(5)过程制备得到的D品(总生物碱的含量48％)作为样品，每组样品6g共3组，将样品加入溶解，分别加入不同比例的乙酸乙酯和无水乙醇，乙酸乙酯和无水乙醇比例分别为8:2、7:3、6:4，以得到的苦参总生物碱的含量和产量为指标(详见表2)，乙酸乙酯和无水乙醇比例为7:3的混合有机试剂萃取最佳，萃取得到的总生物碱为3.2g。
表2不同比例的乙酸乙酯和无水乙醇萃取比较
Figure BDA0002347823610000051
注：萃取至萃取液无色
为确定混合有机试剂与D品(含量为48％)的最佳料液比与萃取次数，取D品4g,共四组，料液比分别为1:5、1:10，以得到的苦参总生物碱的含量、产量及有机试剂的使用量为指标，最终的萃取条件选择液比1:5、萃取两次最佳。
表3不同料液比的比较
Figure BDA0002347823610000052
本发明人还对实例制备得到苦参总生物碱成品进行HPLC分析，如图2所示，本发明获得的苦参总生物碱成品的品质好。
综上所述，本发明具有工序简单，成本低，苦参总生物碱的含量高于85％，对环境无污染，且所获得的苦参总生物碱作为医药原料大大提高了患者安全性的有益效果。
附图说明
图1是本发明的工艺流程图；
图2是本发明制备得到苦参总生物碱的HPLC分析图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明作进一步的说明，但并不作为对本发明限制的依据。
实施例1：
(1)提取：苦参饮片50kg干燥后粉粹成粗粉，装入提取罐内，按料液比为1:5加入0.2％的盐酸溶液浸泡12h，放出提取液，按上述条件提取3次，合并提取液，得到A品；
(2)碱沉：将A品用6M的NaOH溶液调节pH至3.5-4.5静置6h，弃去沉淀物取上清液，得到B品；
(3)732型阳离子交换树脂预处理：将732型阳离子交换树脂用饱和食盐水浸泡24h，并洗至无色；再加入5倍量的5％NaOH浸泡4h，并随时搅拌以纯化水洗至中性；最后加入5倍量的5％盐酸浸泡5h，使树脂转为H型，并用纯化水洗至pH为4-5，即可装柱形成树脂柱应用；
(4)阳离子树脂柱吸附：将B品按一定的流速通过树脂柱，流速大小以碘化铋钾显色结果，考察苦参总生物碱的泄露点来确定流速，提取液通过树脂柱后用纯化水洗至无色；用3％的氨水洗柱洗至无色，再用3％氨水浸泡8h和12h，每次浸泡之后都洗至无色，合并三次氨水洗脱液，得到C品；
(5)浓缩：将B样在温度70±5℃，压力为-0.05Mpa的条件下浓缩，得到D品,D品在70±5℃时相对密度为1.15；
(6)萃取：将D品装入萃取容器内，按D品与混合有机试剂料液比为1：5加入混合有机试剂，在室温条件下振荡摇匀，静止分层40-60mine,连续萃取2次，将分离后的上层有机试剂合并，得到E品；所述混合有机试剂由乙酸乙酯：无水乙醇＝7:3的体积比组成；
(7)浓缩：将E品在温度65±5℃，压力为-0.05Mpa的条件下浓缩得棕色浸膏，即得苦参总生物碱成品。
实施例2：
(1)提取：苦参饮片100kg干燥后粉粹成粗粉，装入提取罐内，按料液比为1:5加入0.2％的盐酸溶液浸泡12h，放出提取液，按上述条件提取3次，合并提取液，得到A品；
(2)碱沉：将A品用6M的NaOH溶液调节pH至3.5-4.5静置6h，弃去沉淀物取上清液，得到B品；
(3)732型阳离子交换树脂预处理：将732型阳离子交换树脂用饱和食盐水浸泡24h，并洗至无色；再加入5倍量的5％NaOH浸泡4h，并随时搅拌以纯化水洗至中性；最后加入5倍量的5％盐酸浸泡5h，使树脂转为H型，并用纯化水洗至pH为4-5，即可装柱形成树脂柱应用；
(4)阳离子树脂柱吸附：将B品按一定的流速通过树脂柱，流速大小以碘化铋钾显色结果，考察苦参总生物碱的泄露点来确定流速，提取液通过树脂柱后用纯化水洗至无色；用3％的氨水洗柱洗至无色，再用3％氨水浸泡8h和12h，每次浸泡之后都洗至无色，合并三次氨水洗脱液，得到C品；
(5)浓缩：将B样在温度70±5℃，压力为-0.05Mpa的条件下浓缩，得到D品,D品在70±5℃时相对密度为1.25；
(6)萃取：将D品装入萃取容器内，按D品与混合有机试剂料液比为1：5加入混合有机试剂，在室温条件下振荡摇匀，静止分层40-60mine,连续萃取2次，将分离后的上层有机试剂合并，得到E品；所述混合有机试剂由乙酸乙酯：无水乙醇＝7:3的体积比组成；
(7)浓缩：将E品在温度65±5℃，压力为-0.05Mpa的条件下浓缩得棕色浸膏，即得苦参总生物碱成品。

Claims (8)

1.一种苦参总生物碱的提取纯化方法，其特征在于：包括有以下步骤：
(1)提取：苦参饮片干燥后粉粹成粗粉，装入提取罐内，加入盐酸溶液浸泡，放出提取液，按上述条件提取2-4次，合并提取液，得到A品；
(2)碱沉：将A品用NaOH溶液调节pH至3.5-4.5静置6h，弃去沉淀物取上清液，得到B品；
(3)732型阳离子交换树脂预处理：将732型阳离子交换树脂用饱和食盐水浸泡，并洗至无色；再加入NaOH浸泡，并随时搅拌以纯化水洗至中性；最后加入盐酸浸泡，使树脂转为H型，并用纯化水洗至pH为4-5，即可装柱形成树脂柱应用；
(4)阳离子树脂柱吸附：将B品按一定的流速通过树脂柱，流速大小以碘化铋钾显色结果，考察苦参总生物碱的泄露点来确定流速，提取液通过树脂柱后用纯化水洗至无色；用氨水洗柱洗至无色，再用氨水浸泡两次，每次浸泡之后都洗至无色，合并三次氨水洗脱液，得到C品；
(5)浓缩：将B样在温度70±5℃，压力为-0.05Mpa的条件下浓缩，得到D品；
(6)萃取：将D品装入萃取容器内，加入混合有机试剂，在室温条件下振荡摇匀，静止分层40-60mine,连续萃取2次，将分离后的上层有机试剂合并，得到E品；
(7)浓缩：将E品在温度65±5℃，压力为-0.05Mpa的条件下浓缩得棕色浸膏，即得苦参总生物碱成品。
2.根据权利要求1所述的苦参总生物碱的提取纯化方法，其特征在于：所述步骤(1)中，提取：苦参饮片干燥后粉粹成粗粉，装入提取罐内，按料液比为1:5加入0.2％的盐酸溶液浸泡12h，放出提取液，按上述条件提取3次，合并提取液，得到A品。
3.根据权利要求1所述的苦参总生物碱的提取纯化方法，其特征在于：所述步骤(2)中，将A品用6M的NaOH溶液调节pH至4静置6h。
4.根据权利要求1所述的苦参总生物碱的提取纯化方法，其特征在于：所述步骤(3)中，将732型阳离子交换树脂用饱和食盐水浸泡24h，并洗至无色；再加入5倍量的5％NaOH浸泡4h，并随时搅拌以纯化水洗至中性；最后加入5倍量的5％盐酸浸泡5h，使树脂转为H型。
5.根据权利要求1所述的苦参总生物碱的提取纯化方法，其特征在于：所述步骤(4)中，用3％的氨水洗柱洗至无色，再用3％氨水浸泡8h和12h，每次浸泡之后都洗至无色，合并三次氨水洗脱液。
6.根据权利要求1所述的苦参总生物碱的提取纯化方法，其特征在于：所述步骤(5)中，D品在70±5℃时相对密度为1.15-1.25。
7.根据权利要求1所述的苦参总生物碱的提取纯化方法，其特征在于：所述步骤(6)中，混合有机试剂由乙酸乙酯：无水乙醇＝7:3的体积比组成。
8.根据权利要求1所述的苦参总生物碱的提取纯化方法，其特征在于：所述步骤(6)中，是将D品装入萃取容器内，按D品与混合有机试剂料液比为1：5加入混合有机试剂。
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