CN110904105B - 一种能被马氏珠母贝smad1/5基因抑制的msx启动子及其应用 - Google Patents

一种能被马氏珠母贝smad1/5基因抑制的msx启动子及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种能被马氏珠母贝SMAD1/5基因抑制的MSX启动子及其应用。该启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明通过基因组步移法扩增得到MSX启动子序列，本发明的MSX启动子具有能够与SMAD1/4基因结合的结合位点1、结合位点2结合位点3、结合位点4。通过构建不同突变位点的MSX启动子的野生型和突变型载体，应用双荧光素酶报告基因系统鉴定SMAD1/5基因主要通过结合位点2作用于MSX启动子。本发明的能被马氏珠母贝SMAD1/5基因抑制的MSX启动子从而启动壳基质蛋白的表达，从而促进珍珠或珍珠贝的生长。

Description

一种能被马氏珠母贝SMAD1/5基因抑制的MSX启动子及其应用
技术领域
本发明属于水产科学和基因工程技术领域，具体涉及一种能被马氏珠母贝SMAD1/5基因抑制的MSX启动子及其应用。
背景技术
马氏珠母贝是一种重要的海水养殖贝类和生产珍珠的主要母贝，由于其广泛地用来培育珍珠，具有极大的经济价值，在我国，该物种主要分布于南方广东、广西和海南的沿海，每年的经济产值达10亿元以上。而珍珠是一种典型的经生物矿化过程而形成的纳米材料；同时，由于其迷人的壳结构，使马氏珠母贝成为了最好的研究生物矿化的对象。贝壳的生物矿化已被证实是受基因精确表达与调控的过程，而由外套膜表皮细胞分泌的基质蛋白在调控壳的生长和矿化过程中起着重要的作用(Zhang et al，2006；Mariea et al，2012)。
BMP2-SMADs信号通路高度保守，从真后生动物到哺乳动物均有发现。SMAD1/5转导的BMP2信号通路是诱导成骨细胞分化和骨形成的有效亲骨因子，在胚胎发生、个体形成、非对称器官的形成过程中也具有重要作用。MSX基因在胚胎发育过程中是牙齿和骨骼发育重要的调节因子，通过BMP-SMADs信号转导通路发挥作用，在脊椎动物矿化过程中发挥重要且复杂的调控作用。综合目前的研究进展，无脊椎动物的BMP2-SMADs信号通路的分子具有结构和功能上的原始性和保守性，但软体动物中为数不多的研究还多集中于配体的研究，与模式生物中对SMADs的大量研究相比，软体动物中对此重要信号分子SMAD1/5的研究还非常少，对SMAD1/5转导的信号转导机制及对生物矿化过程的调控还不清楚。对该问题的解析将加深我们对此信号通路的了解及对生物矿化这类生命现象的认识。
发明内容
本发明的第一个目的是提供一种能被马氏珠母贝SMAD1/5基因抑制的MSX启动子。
本发明的能被马氏珠母贝SMAD1/5基因抑制的MSX启动子，其核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示。提取马氏珠母贝基因组DNA，根据已有的MSX基因序列设计特异引物1(5′-TCTATAATATGAAACTTAAA-3′)和引物2(5′-AAGTTCATCCGTGCGGATATTTGG-3′)，用基因组步移法扩增得到MSX启动子序列，全长546bp，扩增产物经测序后，采用TRANSFAC网站预测结合位点和核心序列，本发明的MSX启动子与SMAD1/5基因的结合位点1序列为GTCT，与SMAD1/5基因的结合位点2序列为GTCT，与SMAD1/5基因的结合位点3序列为GTCT，与SMAD1/5基因的结合位点4序列为GCCGTGACG。
进一步，将SMAD1/5基因克隆到pcDNA3.1/myc-His(A)载体中，得到pCDNA3.1-SMAD1/5表达载体；将全长546bp的MSX启动子克隆到含有HindIII-HF和NheI-HF酶切位点的pGL3basic荧光素酶报告基因载体中，得到野生型表达载体PfMSX-WT，再分别突变4个预测结合位点，和1个联合突变位点，得到突变型表达载体PfMSX-MU1，PfMSX-MU2，PfMSX-MU3，PfMSX-MU4，PfMSX-MU5；将pCDNA3.1-SMAD1/5表达载体、空白表达载体pcDNA3.1/myc-His(A)载体、一系列荧光素酶报告基因表达载体(包括表达载体PfMSX-WT、PfMSX-MU1，PfMSX-MU2，PfMSX-MU3，PfMSX-MU4，PfMSX-MU5)和内参载体质粒pRL-TK共同转染C2C12细胞转染48h后，吸出培养基，用1×PBS漂洗一次，用裂解液裂解，检测荧光素酶。根据计算荧火虫荧光素酶的表达值与内参对照海肾素荧光素酶表达值的比值判别SMAD1/5基因对MSX启动子的激活效果，检测结果表明野生型表达载体PfMSX-WT和突变型表达载体PfMSX-MU1，PfMSX-MU2，PfMSX-MU3具有基本启动子活性，而突变型表达载体PfMSX-MU4，PfMSX-MU5基本无启动子活性，所以后续不分析pCDNA3.1-SMAD1/5表达载体对它们的作用。在pDNA3.1-SMAD1/5表达载体的作用下，PfMSX-MU1启动子被抑制了34％的活性，PfMSX-MU2启动子被抑制了13％的活性，PfMSX-MU3启动子活性基本无影响。结果说明SMAD1/5基因主要通过MSX启动子上的第二个结合位点作用于MSX基因。
因此，本发明的第二个目的是提供一种重组表达载体，其含有上述的能被马氏珠母贝SMAD1/5基因抑制的MSX启动子。
优选，所述的重组表达载体中的表达载体为pGL3basic荧光素酶报告基因载体。
根据SMAD1/5基因序列设计引物1(5′-GGATCCTAATACGACTCACTATAGGCCAGTCTCAGAGCCCACATT-3′)和引物2(5′-GGATCCTAATACGACTCACTATAGGTCCAGCCACTGTA AAGGTCC-3′)，按相关试剂盒手册体外合成双链RNA(dsRNA)。将合成的双链RNA活体注射到马氏珠母贝的肌肉，7天后检测SMAD1/5、MSX、pif和nacrein的mRNA表达差异，同时取贝壳进行扫描电镜观察壳的微结构的变化。结果如图2A和图2B所示。图2A显示80μg的SMAD1/5dsRNA没有显著性抑制SMAD1/5基因，而MSX基因被显著抑制，基质蛋白nacrein基因的表达没有显著性变化。160μg的SMAD1/5dsRNA显著抑制SMAD1/5基因，MSX基因的表达上升，基质蛋白pif和nacrein基因的表达显著下降。图2B显示SMAD1/5基因被抑制后，珍珠层晶体结构从对照组的六边型变为棱型或不规则形态，显示其可调控MSX基因的表达从而影响壳基质蛋白的表达，从而影响壳的形成。
本发明的第三个目的是提供一种能被马氏珠母贝SMAD1/5基因抑制的MSX启动子在启动下游目的基因的表达从而促进珍珠或珍珠贝生长中的应用。
本发明的第四个目的是提供一种表达盒，该表达盒含有上述的能被马氏珠母贝SMAD1/5基因抑制的MSX启动子。
本发明通过基因组步移法扩增得到MSX启动子序列，本发明的MSX启动子具有能够与SMAD1/5基因结合的结合位点1和结合位点2。通过构建MSX启动子的野生型和各个突变型载体，应用双荧光素酶报告基因系统鉴定SMAD1/5基因主要通过结合位点2作用于MSX启动子。抑制SMAD1/5基因表达会导致MSX基因表达上升，从而导致基质蛋白pif和nacrein基因的表达显著下降。本发明的能被马氏珠母贝SMAD1/5基因抑制的MSX启动子的获得和功能鉴定对于阐释生物矿化机理和指导珍珠生产具有极大的科学意义和应用价值。
附图说明
图1是野生型表达载体(PfMSX-WT)和突变型表达载体(PfMSX-MU1，PfMSX-MU2，PfMSX-MU3，PfMSX-MU4，PfMSX-MU5)转染C2C12细胞后的荧光素酶检测结果；
图2是SMAD1/5基因被抑制后的SMAD1/5、MSX、pif和nacrein的mRNA表达结果及SMAD1/5基因被抑制后的珍珠层显微结构图，其中，a是SMAD1/5基因被抑制后的SMAD1/5、MSX、pif和nacrein的mRNA表达结果，Control和EGFP为对照，b的Control是对照组的马氏珠母贝壳珍珠层的显微结构，b的smad1/5-dsRNA是SMAD1/5基因被抑制后的珍珠层显微结构，Bar＝30μm。
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
实施例1：SMAD1/5对珍珠贝壳形成重要调节因子MSX启动子的抑制
(1)MSX启动子的克隆与分析
提取马氏珠母贝基因组DNA，以该基因组DNA为模板，根据已有的MSX基因序列设计特异引物1(5′-TCTATAATATGAAACTTAAA-3′)和巢式引物2(5′-AAGTTCATCCGTGCGGATATTTGG-3′)，按照基因组步移试剂盒(Clontech,USA)的操作说明扩增MSX启动子序列。20μL反应体系为：水8μL，2×PrimerSTAR酶预混液10μL(TaKaRa Japan)，上下游引物各0.5μL，模板1μL。具体的PCR反应程序为：94℃变性15s；55℃复性15s；72℃延伸2min；共33个循环。扩增产物经测序后，采用TRANSFAC网站预测结合位点和核心序列，MSX启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，全长546bp，MSX启动子与SMAD1/5基因的结合位点1序列为GTCT，与SMAD1/5基因的结合位点2序列为GTCT，与SMAD1/5基因的结合位点3序列为GTCT，与SMAD1/5基因的结合位点4序列为GCCGTGACG。
(2)不同类型表达载体的构建
SMAD1/5基因表达载体的构建：直接在工具载体pCDNA3.1(+)(生工生物工程(上海)股份有限公司)上全基因合成SMAD1/5全长序列(SMAD1/5全长序列的核苷酸序列如SEQID NO.2所示)，从而得到pCDNA3.1-SMAD1/5表达载体。
MSX启动子野生型载体构建：直接在工具载体pCDNA3.1(+)(生工生物工程(上海)股份有限公司)上全基因合成MSX启动子全长序列，从而得到pCDNA3.1-PfMSX-WT表达载体。
MSX启动子突变型载体构建：用即用型无缝克隆试剂盒(生工生物工程(上海)股份有限公司)进行载体构建。用HindIII-HF和NheI-HF对pGL3basic荧光素酶报告基因载体进行酶切，将载体线性化，回收4786bp载体片段。扩增目的DNA片段的引物5'末端要附加与载体末端相同的碱基序列(15-25bp)，突变第一个位点的引物1-1：
Figure BDA0002293926860000051
Figure BDA0002293926860000061
Figure BDA0002293926860000062
突变第二个位点的引物2-1：/>
Figure BDA0002293926860000063
Figure BDA0002293926860000064
Figure BDA0002293926860000065
突变第三个位点的引物3-1：/>
Figure BDA0002293926860000066
Figure BDA0002293926860000067
Figure BDA0002293926860000068
突变第四个位点的引物4-1：/>
Figure BDA0002293926860000069
/>
Figure BDA00022939268600000610
Figure BDA00022939268600000611
同时突变4个位点的引物5-1：/>
Figure BDA00022939268600000612
Figure BDA00022939268600000613
Figure BDA00022939268600000614
下划线为载体序列，方框里的为突变位点，每个突变位点的两对引物的交接点涵盖了突变位点，是为了掺入突变并为后续重组提供同源臂。以546bp的MSX启动子全长序列为模板，引物1-1和1-3扩增出长度为560bp的PCR产物，再以560bp的产物为模板，引物1-2和1-3扩增出长度为587bp的PCR产物；以546bp的MSX启动子全长序列为模板，引物2-1和2-2扩增出长度为122bp的PCR产物，引物2-3和2-4扩增出长度为490bp的PCR产物；以546bp的MSX启动子全长序列为模板，引物3-1和3-2扩增出长度为170bp的PCR产物，引物3-3和3-4扩增出长度为439bp的PCR产物；以546bp的MSX启动子全长序列为模板，引物4-1和4-2扩增出长度为371bp的PCR产物，引物4-3和4-4扩增出长度为236bp的PCR产物；以546bp的MSX启动子全长序列为模板，引物5-1和5-2扩增出长度为152bp的PCR产物，引物5-3和5-4扩增出长度为458bp的PCR产物。将目的DNA片段和线性化载体以摩尔比2:1加到试管中进行重组反应，设置阳性对照、自连对照、连接组三个组，20μL体系：胶回收后的目的基因片段4μL，线性化的表达载体1μL，无缝克隆反应液15μL，ddH2O用于补足20μL。混匀后在42℃孵育30分钟，然后转移到冰上。放置2-3分钟后取10μL反应液体转化到E.coli感受态细胞中。用菌落PCR鉴定转化子，阳性克隆送测序。测序无误的克隆进行质粒抽提，从而分别得到突变型载体PfMSX-MU1，PfMSX-MU2，PfMSX-MU3，PfMSX-MU4，PfMSX-MU5。
(3)双荧光素酶报告基因系统检测SMAD1/5基因对珍珠贝壳形成重要调节因子MSX启动子的激活效果
C2C12细胞(武汉博士德生物技术工程有限公司)在转染前一天铺板48孔板，铺板密度为1×105/mL，每孔加250μL。为了检测MSX启动子的启动子活性部位，在EP管中分别配置MSX启动子野生型系列载体(100ng/孔)，再添加内参载体质粒pRL-TK(100ng/孔)、pCDNA3.1-SMAD1/5表达载体(200ng/孔)，对照组为MSX启动子野生型系列载体(100ng/孔)、内参载体质粒pRL-TK(100ng/孔)、空白表达载体pcDNA3.1/myc-His(A)载体(200ng/孔)。向上述每个EP管中加入40μL不含血清和抗生素的DEME，用加样枪混合均匀。然后将脂质体悬液(1μL/well)加入40μL/well不含血清和抗生素的DEME中，在室温孵育5min，最后将两者混合在一起，充分混匀静置20min，使EP管中的质粒与脂质体充分结合。分别吸去48孔板中的培养液，用不含血清和抗生素的DEME洗一次，每个孔加170μL不含血清和抗生素的DEME，然后在每个孔中加入80μL的质粒/脂质体混合物。在37℃，5％CO2培养箱中培养6h后，吸弃培养板中的转染培养液，向各孔加入250μL有血清的DEME培养液，在37℃，5％CO2培养箱中继续培养42h。转染48h后，吸出培养基，用1×PBS漂洗一次，用裂解液裂解，检测荧光素酶。根据计算荧火虫荧光素酶的表达值与内参对照海肾素荧光素酶表达值的比值判别SMAD1/5基因对MSX启动子的激活效果，检测结果表明野生型表达载体PfMSX-WT具有基本启动子活性。在pDNA3.1-SMAD1/5表达载体的作用下，PfMSX-WT启动子被抑制了26％的活性。
为了检测结合位点在SMAD1/5基因抑制MSX启动子中的作用，将野生型表达载体PfMSX-WT，突变型载体PfMSX-MU1，PfMSX-MU2，PfMSX-MU3，PfMSX-MU4，PfMSX-MU5(各100ng/孔)分别与内参载体质粒pRL-TK(100ng/孔)和pCDNA3.1-SMAD1/5表达载体(200ng/孔)混匀，对照组中为空白表达载体pcDNA3.1/myc-His(A)载体。按上述的方法共转染到C2C12细胞。48h后，检测荧光素酶。
检测结果如图1所示。由图1可知，野生型表达载体PfMSX-WT和突变型表达载体PfMSX-MU1，PfMSX-MU2，PfMSX-MU3具有基本启动子活性，而突变型表达载体PfMSX-MU4，PfMSX-MU5基本无启动子活性，所以后续不分析pCDNA3.1-SMAD1/5表达载体对它们的作用。在pDNA3.1-SMAD1/5表达载体的作用下，PfMSX-MU1启动子被抑制了34％的活性，PfMSX-MU2启动子被抑制了13％的活性，PfMSX-MU3启动子活性基本无影响。结果说明SMAD1/5基因主要通过MSX启动子上的第二个结合位点作用于MSX基因。
实施例2：SMAD1/5被抑制后MSX的表达和珍珠贝壳结构的变化，鉴定其调控壳生物矿化过程
设置SMAD1/5dsRNA注射组(80μg/100μL和160μg/100μL)、阴性对照GFP dsRNA注射组(160μg/100μL)和空白对照PBS注射组4个组。每个组注射5个二龄马氏珠母贝成贝。根据SMAD1/5基因序列设计引物SMAD1/5-F：5′-GGATCCTAATACGACTCACTATAGGCCAGTCTCAGAGCCCACATT-3′和SMAD1/5-R：5′-GGATCCTAATACGACTCACTATAGGTCCAGCCACTGTAAAGGTCC-3′，根据GFP基因序列设计引物GFP-F：5′-GGATCCTAATACGACTCACTATAGGATGGTGAGCAAGGGCGAGGAG-3′和GFP-R：5′-GGATCCTAATACGACTCACTATAGGTTACTTGTACAGCTCGTCCATG-3′。下划线为T7启动子序列。用pCDNA3.1-SMAD1/5表达载体为模板，SMAD1/5-F/SMAD1/5-R为引物，扩增774bp的SMAD1/5片段；用pEGFP-C1(Clontech,USA)为模板，GFP-F/GFP-R为引物，扩增718bp的GFP片段。以纯化的SMAD1/5和GFP片段为模板，用T7 RiboMAXTMExpress RNAi System(购自Promega，USA)试剂盒体外合成SMAD1/5dsRNA和GFP dsRNA，RNase-free DNase I(购自TAKARA，Japan)消化dsRNA，将SMAD1/5dsRNA用PBS稀释到80μg/100μL和160μg/100μL，将GFPdsRNA用PBS稀释到160μg/100μL。SMAD1/5dsRNA注射组，每个成贝注射SMAD1/5dsRNA 100μL；阴性对照GFP dsRNA注射组，每个成贝各注射GFP dsRNA 100μL；空白对照PBS注射组，每个成贝各注射100μL PBS溶液。将4个组放在室内稳定条件下养殖，7天后，取成贝的外套膜组织提取RNA，常规QPCR技术检测SMAD1/5、MSX、pif和nacrein基因的表达(18s和β-actin为内参)；同时，取每个贝相同部位的壳清洗、阴干后用扫描电镜观察壳的微型结构，结果如图2所示。
结果如图2A和图2B所示。图2A显示80μg的SMAD1/5dsRNA没有显著性抑制SMAD1/5基因，而MSX基因被显著抑制，基质蛋白nacrein基因的表达没有显著性变化。160μg的SMAD1/5dsRNA显著抑制SMAD1/5基因，MSX基因的表达上升，基质蛋白pif和nacrein基因的表达显著下降。图2B显示SMAD1/5基因被抑制后，珍珠层晶体结构从对照组的六边型变为棱型或不规则形态，显示其可调控MSX基因的表达从而影响壳基质蛋白的表达，从而影响壳的形成。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为对本发明的限制，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的精神和范围内，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
序列表
<110> 中国科学院南海海洋研究所
<120> 一种能被马氏珠母贝SMAD15基因抑制的MSX启动子及其应用
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 546
<212> DNA
<213> 马氏珠母贝(Pinctada fucata)
<400> 1
ttgatcatcc ttaataagat aaacatggct ggacccacac tacgtcttct gaataaatcg 60
tattttaaat aactgagccg agtctatatt ctaatgatac actcatcatt tataaaaagg 120
gggttgtgaa aagacgtcta ttgtatagga gattgacagc atctttgatg ttgtattcac 180
tgcttctcac ctttctgaat atttcaaatt agcctctgtt tgcttacaca cacaatctct 240
cctcacttga ctggatatga agtattctaa ttgtaatatg gtaatttata ccccattaca 300
catcaatttg tagactcgcc aatgatgact ttctgatgcc gtgacgtcac ttccgagcga 360
gcgtactaca gaaagtaaca cccccttttt ccaaactccc aaacacatta taggtgatgg 420
tgttagctta cttgggtcaa tcgaaaagtt attgtatctt ctgtcaagtt catccgtgcg 480
gatatttggt gtttaatatt tgatctatct ataatatgaa acttaaataa gaaggaaaaa 540
ttgaaa 546
<210> 2
<211> 1746
<212> DNA
<213> 马氏珠母贝(Pinctada fucata)
<400> 2
tacgcgggga atacgatctg aatactgatg tggtgtagaa gtactcttgt cattaagtat 60
tattttggtt tacatctgtt acactaatgg tacaaccatg agttcaccca tctccagtct 120
caatagcctc ttttccttca ccagccctgc tgtgaaacga cttcttggct ggaaacaggg 180
ggatgaggaa gagaaatggg cggagaaagc cgtagactcg ttagtcaaga agctcaaaaa 240
gaagaaaggt gctctggagg atctagaaaa ggccctaagt tgccccggcc agcccagtaa 300
atgtgtgacc attcccagat ctctagatgg tagactacaa gtgtcccatc gtaagggctt 360
accccatgtt atatactgta gagtgtggag atggcccgat ctacagagtc accacgagct 420
caaaccatta gatatttgtg aatatccatt tagtgctaag cagaaagaag tgtgtataaa 480
cccctaccat tacaaaagag tagaaagtcc agttcttcct ccagtgttgg tacctagata 540
cagcgagttt ccctcctccc atgggcctgg cccctctatg cccccctttc aacaagcccc 600
cgagcctgct atgccccaga atgtcagctt tgatcctaat ggattccacc agtctcagag 660
cccacattct ccagctagct ctggacccgg cagtccttat gggttacctg ctggaacacc 720
tcctccggcc tatcagcctc atgatgaaaa tccaaacatg ggaccgccca acaatccaaa 780
ccgtaacaca cggaaccatc aacccatgga caccatgccc tcccaaaccg caggaccagg 840
ggggcgtatt actgatctcc agccagtcac gtaccaggaa ccacagtact ggtgttctat 900
tgtctattat gaactaaata atcgtgtggg tgaagccttc catgcatctc agaccagcat 960
tgtggtagat ggattcaccg acccctctaa taacgcagac aggttctgtc taggattgtt 1020
gtccaatgta aacaggaatt caaccatcga aaatacacga agacacatca gcaaaggtgt 1080
ccatctgtac tacgtaggtg gtgaggtgtt tgccgagtgt ctgagtgatt ccagtatctt 1140
tgtacagagc agaaactgta actatcacca tggattccat cctaccactg tgtgtaaaat 1200
accaccggga tgcagtctca aaatattcaa caatcaagaa tttgcggcac tacttagtca 1260
gtcagtgaat cacggcttcg aggcagtcta tgaactcact aagatgtgta caatacgaat 1320
gagctttgtc aaagggtggg gtgctgagta tcatcgacag gatgtgacca gtacgccatg 1380
ttggatcgaa atccatctga acggaccttt acagtggctg gacaaagtac tgacccagat 1440
gggctcacca cataacccaa tttcatctgt atcatgatgg tgttttgtta tgttagtgtg 1500
gaatagggtt tattattatc atgtcatgtg aatcgcatga aagatcagaa atctcattct 1560
ctaacaaatt tatataaaat gttggtcatg ttatgattct ctccctttgt ttatgtacat 1620
gttttatgta aatctacttt atagtttatc agaagatata tagaggtatg tagatttaag 1680
attagatata ttcatgtatg ttatacaata tagtgctgta aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1740
aaaaaa 1746

Claims (5)

1.一种能被马氏珠母贝SMAD1/5基因抑制的MSX启动子，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.一种重组表达载体，其特征在于，含有权利要求1所述的能被马氏珠母贝SMAD1/5基因抑制的MSX启动子。
3.根据权利要求2所述的重组表达载体，其特征在于，所述的重组表达载体中的表达载体为pGL3basic荧光素酶报告基因载体。
4.权利要求1所述的能被马氏珠母贝SMAD1/5基因抑制的MSX启动子在启动下游目的基因的表达从而促进珍珠或珍珠贝生长中的应用。
5.一种表达盒，其特征在于，含有权利要求1所述的能被马氏珠母贝SMAD1/5基因抑制的MSX启动子。
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Recent Advances of Shell Matrix Proteins and Cellular Orchestration in Marine Molluscan Shell Biomineralization;Xiaorui Song等;《Frontiers in Marine Science》;20190219;第1-16页 *
The receptor genes PfBMPR1B and PfBAMBI are involved in regulating shell biomineralization in the pearl oyster Pinctada fucata;Shiguo Li等;《Scientific RePorTS》;20170823;第1-15页 *
马氏珠母贝硫酸软骨素合成酶1基因的生物矿化功能;衣雪洁等;《热带生物学报》;20171225(第04期);第377-382页 *

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