CN110893250A - 瘢痕/粘连阻挡膜及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及由保持三螺旋结构的单一I型胶原制备获得的瘢痕/粘连阻挡膜，及其制备方法和用途。本发明的阻挡膜具有免疫抗原性低，生物相容性好，高血小板聚集功能，膜内凝血，可控的生物材料降解率，以及具有一定厚度和柔韧贴敷性能，尤其是制备的阻挡膜片具有瘢痕阻挡功效的特点，适用于任何内脏创伤以及术后出血引起的出血性粘连合并症的预防或减轻。

Description

瘢痕/粘连阻挡膜及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及医学、医学生物材料学、医学组织工程学及再生医学技术领域，具体涉及一种由保持三螺旋结构的单一I型胶原制备获得的瘢痕/粘连阻挡膜，及其制备方法和用途。

背景技术

二十世纪末随着整体医学的高速发展，细胞生物学、分子生物学、遗传基因学、组织工程学以及再生医学也随之不断的进步与发展。具有良好性能的生物材料也同时在被迅速的发现与利用。近年来组织工程学和再生医学在医学临床中的快速掘起就证明了这一点。使用天然非溶解性I型胶原做为载体或修复支架的组织工程和再生医学的产品获得了显著的发展与应用。

如何发现和提取具有更好效果和更好生物相容性的物质与材料，以在组织工程学和再生医学中充当细胞外间质物质以及载体甚至隔离性的材料，使受损伤的组织细胞能有很好的修复再生环境越发受到重视。为损伤组织细胞提供尽可能接近正常的内外环境，使细胞移行、分化和再生达到形成和自体局部损伤组织完全相同的组织，同时因为更好的生物相容性和降解性能，能使其更好的携带与释放更多的生物学物质如，干细胞，细胞生长因子以及血小板凝血因子等，同时因其特殊的材料性质、制作方法和材料的特殊结构，使其在体内能发挥某些特定的功效。

I型胶原是人体内绝大多数组织器官细胞赖以生存的细胞外间质所需的物质，是细胞外基质的结构蛋白质，分子中具有共价键连接的2条α1 和1条α2 三股肽链形成，呈螺旋状缠绕，其分子间对的结合力是保证I型胶原三螺旋结构稳定的核心。保持完整蛋白链长度和三螺旋结构的I型胶原称之为天然I 型胶原（Nature Collagen）， 这种胶原的提取和使用能够保持与机体内组织器官细胞外基质共同的属性，可以起到替代支架功能，同时对聚集血小板凝血有充分的作用。I型胶原在提取时，因选用的动物组织不同，提取方法的差异可以产生不同性质的I 型胶原或其他类胶原物质。非溶解性天然I型胶原纤维需要在酸性低温条件下提取，使其保持完整的肽链长度和三螺旋结构，保留其胶原生物活性。 切断I型胶原肽链两端的基团或者在非低温条件下提取，将致使I型胶原的聚合血小板功能下降或导致胶原(Collagen) 转变成明胶（Gelatin），胶原和明胶不仅在结构上有巨大差异而且与细胞的结合方式也存在差异。

涉及脏器、脊柱以及器官移植等外科手术是目前较为常见的创伤、肿瘤以及相关疾病的外科处置方法。对于普通外科的肝胆，胰脏，肠道；泌尿外科的肾脏，膀胱，输尿管；妇产科的子宫，卵巢，输卵管等，往往会因血管切断出血后导致血液外溢，使得血液中的血小板在体内被凝血酶激活，因释放凝血剂使成纤细胞形成纤维性连接，而形成粘连。 这种体内自然机制在器官表面以及周边会导致术后脏器与其周边组织的严重粘连而出现并发症，造成二次手术的困难和病人的痛苦；脊柱外科的椎管内手术的出血瘢痕再压迫造成的疼痛复发以至手术效果失败均是目前医学领域内有待急切解决的问题。

I型胶原在自然界中哺乳类动物体内的组织器官中存在，如尾巴、皮肤以及肌腱中含量较高，但是提取非溶解性I型胶原的最佳来源为牛跟腱，因其三螺旋结构的I型胶原含量高达98%。天然I型胶原的血小板聚合能力优于任何包含氨基葡糖的复合I型胶原或改变胶原肽链结构或改变三螺旋结构的物质；也就是说，具有天然三螺旋结构的 I 型胶材料具有更强的聚合、激活血小板性能，在存在充分空间的天然三维孔隙结构的类海绵状材料内凝血，在将其搁置于出血脏器表面和周围组织之间时，允许胶原材料快速完全浸润吸收脏器表面的出血而在材料内快速形成血痂。 如果在支架内完成凝血的过程，同时使胶原材料的降解时间长于纤维蛋白的形成和分解时间，那么就能够有效地避免脏器等与其周边组织间的因纤维蛋白形成所造成的连接-粘连，成为具有更好瘢痕/粘连阻挡效果的材料。

CN101569765B虽然公开了保持胶原特有三螺旋结构的I型医用胶原材料及其产品，但其适用于硬脑膜、硬脊膜损伤后的内置修复与再生，并不适用于普通外科、泌尿外科、妇产科、脊柱外科等外科手术后，放置于术后脏器、器官表面与其周围组织间以起到优良的凝血、隔离作用，并起到阻挡纤维蛋白和周边组织的接触，起到粘连阻挡的功效。

发明内容

为解决如上所述的技术问题，本发明提供了一种由单一天然I型胶原制备获得的瘢痕/粘连阻挡膜，其能够保持I型胶原特有的三螺旋结构，阻挡出血血液的纤维蛋白与周边发生直接连接，起到瘢痕/粘连阻挡作用。本发明的阻挡膜免疫抗原性低、生物相容性好，并且具有高功效的血小板聚合力、良好的柔软贴敷性等特点。

在一个方面中，本发明涉及所述瘢痕/粘连阻挡膜的制备方法，所述阻挡膜由保持胶原特有三螺旋结构的I型胶原制备获得。首先，将I型胶原溶于0.01-1 M的冰醋酸，形成0.3-2wt%的悬浊液，优选0.4-1.5wt%，更优选0.5-1.0wt%，最优选0.5wt%；在-2～25℃的温度下，以250-1500转/分的初始转速搅拌10-30分钟，随后将转速提高至10,000-25,000转/分，继续搅拌3-5小时；将经搅拌的悬浊液置于模具中，进行冷冻干燥，其后，通过物理方法进行胶原肽链间的交联加强；最后，通过低温环氧乙烷或者伽马射线灭菌消毒，制成所述瘢痕/粘连阻挡膜。

在优选的实施方式中，所述冷冻干燥是指低温冷冻-升华/升温干燥，具体包括：（a）低温冷冻：预冷冻温度设置为-20～-4℃，时间30-60分钟，呈动态或持续状态；冷冻温度设置为-60～-40℃，时间120-300分钟，呈动态状态；冷冻过程中冷冻干燥机的冷冻柜温度保持为-80℃；（b）升华/升温干燥：升华阶段温度设置为0℃，时间18-30小时；二次干燥升温的温度设置为20～30℃，时间30-90分钟；冷冻干燥过程中（包括步骤（a）（b）），真空度设置为150-300毫托。

在优选的实施方式中，所述物理方法为在高温辐射真空干燥烤箱中进行高温脱水，即在负1个大气压和90-135℃的温度下持续干燥12-72小时。

在优选的实施方式中，所述低温环氧乙烷灭菌消毒参见CN101569765B，在此将其公开的相关内容全部并入本文。具体是指使用环氧乙烷气体进行灭菌消毒，即使用30％-50%环氧乙烷以及50％-70％的二氧化碳在消毒器内进行灭菌，灭菌温度为54℃±2℃；灭菌湿度为50％-70％RH；预真空度为-20～-40Kpa；换气真空度为-40～-60Kpa；换气次数为8次；灭菌时间为3-4小时。所述伽马射线灭菌消毒，将伽马射线灭菌剂量设置为20-50 kGy。

本发明涉及的I型胶原根据CN101569765B中记载的方法制备（在此将其公开的相关内容全部并入本文），其是以牛跟腱组织为原料，经过酶脱脂和化学反应去蛋白活性，通过化学反应提取得到的纯度高达98wt%以上的固态/絮状的保持胶原特有三螺旋结构的I型医用胶原材料。

在制备过程中，选用不同浓度的悬浊液，以不同的冷冻干燥数据参数设置，可以获得具有不同孔隙的阻挡膜；使用不同的悬浊液用量，可以获得不同厚度的阻挡膜；采用不同的交联加强条件，则可以获得时间长短不同的降解时间。

在另一个方面中，本发明涉及一种根据上述方法制备获得的瘢痕/粘连阻挡膜，所述阻挡膜为具有三维孔隙结构的类海绵状膜片物，孔径为80-350微米，优选150-300微米，更优选200-270微米，最优选250微米；孔隙率为80%-90%；厚度为4-12毫米。

在优选的实施方式中，所述阻挡膜在3-6个月内降解吸收。

在另一个方面中，本发明涉及所述阻挡膜在制备用于治疗、阻挡或防止因创伤或手术后脏器与周边组织形成瘢痕/粘连的材料中的应用，其例如可以应用于普通外科、泌尿外科、妇产科、骨科等外科手术，减少病人的术后痛苦和二次手术的难度及并发症。

本发明的阻挡膜能够柔软、顺从地贴敷在不同形态的脏器表面，并置于其与周围组织之间；同时，阻挡膜内部具有足够的空间，可以允许和出血的脏器表面血液充分接触吸收，使其胶原纤维和血小板被激活释放凝血剂充分聚集形成胶原膜内血痂，并且单一成分的胶原成分具有更好的粘附性，不因含有氨基葡糖等其他成分而保有更强的凝血作用。

本发明阻挡膜的特点是保持了I 型胶原特有的天然三螺旋结构，并可降解吸收，将其置于经手术操作过的器官表面，可以快速、完全吸收因器官切割而由血管流出的血液，通过胶原的三螺旋结构激活血液中的血小板以释放凝结剂，据此，由外科手术出血产生的纤维蛋白凝块被吸收形成于胶原膜的三维孔隙中，因此被阻断桥接到附着/邻近的组织和器官。因此，来自器官、血管外周细胞以及血管内皮细胞分化衍生的成纤维细胞就会被剥夺/阻断纤维蛋白支架作为器官与其上形成纤维的粘附连接。

本发明的瘢痕/粘连阻挡膜具有很好的血液吸附性能，因外科手术出血产生的纤维蛋白凝块被吸收形成于阻挡膜的三维孔隙中，因此被阻断桥接到附着/邻近的组织和器官。阻挡膜因搁置于器官表面，其材料将器官表面与其周围组织之间隔离，同时因充足的材料厚度和覆盖面积的广泛，对阻断因出血形成的纤维蛋白与周边组织的接触和桥接更为彻底。因特定工艺，阻挡膜在体内具有适当的降解速率，使其降解时间长于纤维蛋白在膜内的形成和分解时间而起到更佳的阻挡效果。

本发明高纯度的保持胶原特有三螺旋结构的单一I型医用胶原阻挡膜具有免疫抗原性低，无异物反应，生物相容性好，可控制降解速率等优点，同时具有良好的三维孔隙结构和充足的厚度和大小，并且单一的I型胶原材料在吸收血液性能、凝血时间、凝血功效以及置放稳定性等方面较伴有其他物质成分的复合I型胶原材料具有更佳的聚合血小板的性能。同时，因采用较长时间的高温脱水的物理性加强交联方法进行胶原间的胶原纤维交联，所以具有较长时间的抗胶原酶降解的功能，在体内能够较长时间的存在，而且不具有任何毒性反应。 由此制成的瘢痕/粘连阻挡膜片具有一定的抗拉力强度，放置于术后脏器、器官表面与其周围组织间可以起到优良的凝血、隔离作用，可以起到阻挡纤维蛋白和周边组织的接触，起到粘连阻挡的功效。

附图说明

图1为瘢痕/粘连阻挡膜的整体外观视图。

图2为120-180 微米孔径的具有三螺旋结构的I型胶原瘢痕/粘连阻挡膜的电子显微镜图像。

图3为200-300 微米孔径的具有三螺旋结构的I型胶原瘢痕/粘连阻挡膜的电子显微镜图像。

图4为应用组织切片和电脑软件分析统计的瘢痕/粘连阻挡膜内部孔隙图像。

图5为瘢痕/粘连阻挡膜的置放示意图。

图6为犬动物实验术后三天照片：显示阻挡膜内大量血液以及移动阻挡膜后，脑表面清晰无粘连。

图7为犬动物实验12周术后照片：显示阻挡膜植入犬内12周后无粘连形成。

具体实施方式

下文结合附图以实施例的方式对本发明的原理和特征进行描述，所描述的实施例仅用于解释本发明，并不意图对本发明的范围构成任何限定，本发明所要求保护的范围仅通过所附的权利要求来限定。同时，应当清楚的是，下文所描述的实施例仅为本发明最佳实施方式，发明内容部分记载的各实施方案均能够解决本发明所要解决的技术问题，达到本发明所能够达到的技术效果。

实施例1：提取保持胶原特有三螺旋结构的I型胶原材料

根据CN101569765B中记载的方法，选用经检疫检验合格的中国和澳大利亚进口牛跟腱制备I型胶原材料。经清除腱鞘，周围脂肪组织等去杂质工序再经切割-脱脂-碱化-中和-清洗工序获取高纯度保持三螺旋结构的天然I 型胶原材料。

以牛跟腱组织为原料，经冷冻，切割成厚度为0.1-3毫米的薄片，在搅拌条件下将其在0.1％磷酸二氢钠/氢氧化钠溶液中浸泡1-3小时，使其酸碱度保持中性；将1:5(w/w)的无花果酶加入上述处理的物质溶液中充分反应；定时搅拌4小时，其后用1％的硝酸铵处理6小时，然后清洗，再加入1M的氯化钠再处理并控制温度，调节酸碱度，4℃下静置过夜，其后用2M当量的氢氧化钠溶液反应；最后用50％硫酸中和缓冲，再调节酸碱度使其呈偏酸性，取出沉淀物，水洗浸泡6小时后去除水分，通过冷冻干燥得到保持胶原特有三螺旋结构的I型医用胶原材料。

胶原，明胶和胶原蛋白的区别在于在提取制作过程中所采用的方法和控制条件，能保持胶原纤维螺旋结构稳定的环境为酸性，同时温度必须偏低，所以在制作的时候必须在低温下进行。如何鉴定支架前的胶原短纤维材料能保持三螺旋结构的特性，定量学是比较困难的，电子显微镜和偏光光学显微镜的观查其结构形态是有助于确定的。原胶原材料在高速搅拌后的悬浊液经处理后再得到纤维状的固态胶原，再经酸性溶液溶解后成乳状液，取其1-2滴液体经偏光镜的检查，可见其内的胶原短纤维和颗粒，在黑暗的偏光背景下显示光亮的条所状或粒状物，其为胶原纤维在偏光下的折射现象。在更高倍镜下可见其纤维的形态上呈现“横纹带或横纹褶皱”，而这横纹带或横纹褶皱正是I型胶原三螺旋纤维的典型表现。这说明了实施例1所得的胶原材料确实保持了I型胶原纤维固 有的胶原三螺旋结构。而明胶和胶原蛋白却得不到如此的影像。

实施例2：制备瘢痕/粘连阻挡膜片

将实施例1获得的I型胶原材料溶于720ml 0.1M冰醋酸中，配置成0.5wt%的悬浊液，在5℃的温度下，以1000转/分的初始转速搅拌20分钟，随后将转速提高至20,000转/分，继续搅拌4小时。将经搅拌的悬浊液置于30 x150 厘米模具中，进行冷冻干燥。

冷冻干燥过程中，预冷冻温度设置为-10℃，时间45分钟，呈持续状态；冷冻温度设置为-50℃，时间150分钟，呈动态状态；冷冻干燥机的冷冻柜温度保持为-80℃。此后，升华阶段温度设置为0℃，时间24小时；二次干燥升温的温度设置为20℃，时间45分钟。冷冻干燥过程中真空度设置为200毫托。

冷冻干燥后，在高温辐射真空干燥烤箱中进行高温脱水，即在负1个大气压和100℃的温度下持续干燥48小时。

使用30％环氧乙烷以及70％二氧化碳在消毒器内对上述获得的产品进行灭菌，灭菌温度为54℃±2℃；灭菌湿度为60％RH；预真空度为-30Kpa；换气真空度为-50Kpa；换气次数为8次；灭菌时间为3小时。

灭菌后，制得孔径为130 微米、孔隙率为85%、厚度为6毫米的瘢痕/粘连阻挡膜。

实施例3：制备瘢痕/粘连阻挡膜片

将实施例1获得的I型胶原材料溶于720ml 0.8M冰醋酸中，配置成2wt%的悬浊液，在15℃的温度下，以1500转/分的初始转速搅拌10分钟，随后将转速提高至25,000转/分，继续搅拌3小时。将经搅拌的悬浊液置于30 x150 厘米模具中，进行冷冻干燥。

冷冻干燥过程中，预冷冻温度设置为-5℃，时间30分钟，呈持续状态；冷冻温度设置为-40℃，时间120分钟，呈动态状态；冷冻干燥机的冷冻柜温度保持为-80℃。此后，升华阶段温度设置为0℃，时间18小时；二次干燥升温的温度设置为30℃，时间30分钟。冷冻干燥过程中真空度设置为300毫托。

冷冻干燥后，在高温辐射真空干燥烤箱中进行高温脱水，即在负1个大气压和120℃的温度下持续干燥24小时。

使用50％环氧乙烷以及50％二氧化碳在消毒器内对上述获得的产品进行灭菌，灭菌温度为54℃±2℃；灭菌湿度为50％RH；预真空度为-40Kpa；换气真空度为-40Kpa；换气次数为8次；灭菌时间为4小时。

灭菌后，制得孔径为330 微米、孔隙率为90%、厚度为8毫米的瘢痕/粘连阻挡膜。

实施例4：制备瘢痕/粘连阻挡膜片

将实施例1获得的I型胶原材料溶于720ml 0.5M冰醋酸中，配置成1wt%的悬浊液，在10℃的温度下，以500转/分的初始转速搅拌30分钟，随后将转速提高至15,000转/分，继续搅拌5小时。将经搅拌的悬浊液置于30 x150 厘米模具中，进行冷冻干燥。

冷冻干燥过程中，预冷冻温度设置为-5℃，时间60分钟，呈持续状态；冷冻温度设置为-40℃，时间180分钟，呈动态状态；冷冻干燥机的冷冻柜温度保持为-80℃。此后，升华阶段温度设置为0℃，时间24小时；二次干燥升温的温度设置为25℃，时间60分钟。冷冻干燥过程中真空度设置为200毫托。

冷冻干燥后，在高温辐射真空干燥烤箱中进行高温脱水，即在负1个大气压和90℃的温度下持续干燥72小时。

使用伽马射线对所获得的产品进行灭菌消毒，将伽马射线灭菌剂量设置为40kGy。

灭菌后，制得孔径为250 微米、孔隙率为80%、厚度为4毫米的瘢痕/粘连阻挡膜。

实施例5：生物学实验

1. 选取60只Sprague-Dawley (SD) 大白鼠进行实验。 全麻动物后暴露肝脏并在其表面刮磨造成肝脏出血状态，然后将阻挡膜放置于肝脏和横膈膜以及肝脏与胰腺之间。分别在术后1周，4周和8周处死动物，进行肉眼和组织切片观察。

肉眼观察：肝脏与横膈膜以及肝脏和胰腺之间无显著瘢痕粘连。 阻挡膜片降解，少量线性疏松组织显现于肝脏和其周边的组织中间，易分离，无出血。

组织学检查：将肝脏和其周边组织整体切除。经固定包埋，制成5-6微米的腊片切片，使用美蓝-嗜伊红（HE）染色进行组织学检查。

显微镜下常规切片检查未发现异常组织细胞，显示出有序的成纤维细胞和纤维结缔组织。无粘连和瘢痕形成。偏光显微镜下可见有些纤维组织呈现出I 型胶原特有的“横断性”结构。无残留的内置胶原材料。

2. 选取30只杂种犬 (Mongrel)进行实验。于双侧颞部脑膜切除术后内置直径1.5厘米的阻挡膜片，覆盖脑实质之上，不缝合。所有动物处死时间为术后3天和术后12周。3天群组为早期观察动物对材料的机体反应，以及材料生物相容性的相关体征的检测；12星期群组为观察材料在体内长时间的变化，降解，组织新生以及术后瘢痕以及粘连的情况。

处死的动物进行肉眼和组织切片观察。

早期观察组：

肉眼观察：内置阻挡膜片在原位没有任何移动，充满血液呈紫红色，易分离，可用镊子提起，无粘连、无出血。阻挡膜片未见任何降解。

组织学检查： 将颅骨、新生脑膜、脑实质放入10% 福尔马林固定一周。 对颅骨进行脱钙处理，经固定包埋，制成5-6微米的腊片切片，使用美蓝-嗜伊红（HE）染色进行组织学检查。

显微镜下常规切片检查未发现异常组织细胞出现，显示有较多的淋巴细胞及前质细胞聚集在阻挡膜片周围。阻挡膜片的三维孔隙明显收缩，内部充满大量血红细胞，无粘连和瘢痕形成。

长期观察组：

肉眼观察： 伤口愈合良好，无感染。颅骨和脑实质之间未见明显粘连，无瘢痕，脑实质和新生组织之间光滑，个别动物发现有少许纤维存在于脑实质与新脑膜之间，易分离，无大面积团块粘连。

组织学检查： 将颅骨、新生脑膜、脑实质放入10% 福尔马林固定一周，对颅骨进行脱钙处理，经固定包埋，制成5-6微米的腊片切片，使用美蓝-嗜伊红（HE）染色进行组织学检查。

显微镜下常规切片检查未发现异常组织细胞出现，显示仍有少量的淋巴细胞，成纤维细胞和前质细胞有序排列于新脑膜基底部位，胶原阻片基本降解吸收，无明显残留。新生组织呈结缔组织结构，无粘连和瘢痕形成。

偏光显微镜下可见有些纤维组织呈现出I 型胶原特有的“横断性”结构，无残留的内置胶原材料。

本发明提供的保持天然I 型胶原特有的三螺旋结构的具有高孔隙率的三维孔隙结构的单一医用I 型胶原材料具有免疫抗原性低，生物相容性好，高血小板聚集功能，可控的生物降解率，以及具有一定厚度和柔韧贴敷性能，尤其是制备的阻挡膜片具有瘢痕阻挡功效的特点，适用于任何内脏创伤以及术后出血引起的出血性粘连合并症的预防或减轻，并对脊柱硬膜外术后粘连的问题起到瘢痕阻挡的作用，有效的减少二次手术的困难性，减少再次术中创伤和出血，减少病人痛苦，为患者谋取更大的福利。

Claims (9)

1.一种瘢痕/粘连阻挡膜的制备方法，所述阻挡膜由单一保持胶原特有三螺旋结构的I 型胶原制备获得，其特征在于：所述方法包括如下步骤：

（1）将I型胶原溶于0.01-1 M的冰醋酸，形成0.3-2wt%的悬浊液，优选0.4-1.5wt%，更优选0.5-1.0wt%，最优选 0.5wt%；

（2）在-2～25℃的温度下，以250-1500转/分的初始转速搅拌10-30分钟，随后将转速提高至10,000-25,000转/分，继续搅拌3-5小时；

（3）将经搅拌的悬浊液置于模具中，进行冷冻干燥；

（4）通过物理方法进行胶原肽链间的交联加强；

（5）通过低温环氧乙烷或者伽马射线灭菌消毒，制成所述瘢痕/粘连阻挡膜。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述冷冻干燥是指低温冷冻-升华/升温干燥，具体包括：

（a）低温冷冻：预冷冻温度设置为-20～-4℃，时间30-60分钟，呈动态或持续状态；冷冻温度设置为-60～-40℃，时间120-300分钟，呈动态状态；冷冻过程中冷冻干燥机的冷冻柜温度保持为-80℃；

（b）升华/升温干燥：升华阶段温度设置为 0℃，时间18-30小时；二次干燥升温的温度设置为20～30℃，时间30-90分钟；

冷冻干燥过程中真空度设置为150-300毫托。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述物理方法为在高温辐射真空干燥烤箱中进行高温脱水，即在负1个大气压和 90-135℃的温度下持续干燥12-72小时。

4.根据权利要求1至3任一项所述的方法，其特征在于：

所述低温环氧乙烷灭菌消毒是指使用30％-50%环氧乙烷以及50％-70％的二氧化碳在消毒器内进行灭菌，灭菌温度为54℃±2℃；灭菌湿度为50％-70％RH；预真空度为-20～-40Kpa；换气真空度为-40～-60Kpa；换气次数为8次；灭菌时间为 3-4小时；

使用伽马射线进行灭菌消毒时，将伽马射线灭菌剂量设置为 20-50 kGy。

5.根据权利要求1至4任一项所述的方法，其特征在于：所述 I型胶原为以牛跟腱组织为原料，经过酶脱脂和化学反应去蛋白活性，提取得到蛋白纯度达98wt%以上的固态/絮状的保持胶原特有三螺旋结构的 I型医用胶原材料。

6.一种根据权利要求1至5任一项所述的方法制备获得的瘢痕/粘连阻挡膜，其特征在于：所述阻挡膜为具有三维孔隙结构的类海绵状膜片物，孔径为80-350微米，优选150-300微米，更优选200-270微米，最优选250微米；孔隙率为80%-90%；厚度为4-12毫米。

7.根据权利要求6所述的阻挡膜，其特征在于：所述阻挡膜可被降解吸收，其在人体内的降解时间长于纤维蛋白在膜内形成和分解的时间。

8.根据权利要求7所述的阻挡膜，其特征在于：所述阻挡膜的降解吸收时间为3-6个月。

9.根据权利要求1至5任一项所述方法制备获得的瘢痕/粘连阻挡膜或者权利要求6至8任一项所述的瘢痕/粘连阻挡膜在制备用于治疗、阻挡或防止因创伤或手术后脏器与周边组织形成瘢痕/粘连的材料中的应用。

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