CN101569765A - 保持胶原特有三螺旋结构的i型医用胶原材料及其产品和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种保持胶原特有三螺旋结构的I型医用胶原材料及其提取方法，采用该I型医用胶原材料制备的脑膜/脊膜生物膜片，以及该生物膜片的制备工艺及其在制备脑膜/脊膜组织修复材料中的应用。本发明提供的保持胶原特有三螺旋结构的I型医用胶原材料免疫抗原性低，无异物反应，生物相容性好，可控制降解速率，由其制备的脑膜/脊膜生物膜片具有一定的抗拉力强度，具有可修复再生硬脑/脊膜组织以及防止/减少组织粘连的特点，适用于硬脑膜，硬脊膜损伤后的内置修复与再生。

Description

保持胶原特有三螺旋结构的I型医用胶原材料及其产品和应用

技术领域

本发明涉及医学、医学生物材料学，医学组织工程学以及再生医学技术领域，具体涉及一种保持胶原特有三螺旋结构的I型医用胶原材料及其提取方法，采用该I型医用胶原材料制备的脑膜/脊膜生物膜片，以及该生物膜片的制备工艺及其在制备脑膜/脊膜组织修复、防止或减少组织粘连的材料中的应用。

背景技术

二十世纪末随着整体医学的高速发展，细胞生物学、分子生物学、遗传基因学、组织工程学以及再生医学也随之不断的进步与发展。具有良好性能的生物材料也同时在被迅速地发现与利用。近年来组织工程学和再生医学在医学临床中的快速崛起就证明了这一点。使用I型胶原作为载体的组织工程和再生医学的产品获得了显著的发展与应用。

如何发现和提取有效的物质在组织工程学和再生医学中充当细胞外间质物质的材料，使受损伤的组织细胞能有很好的修复再生的环境是个极为重要的课题。为损伤组织细胞提供尽可能接近正常的内外环境，使之细胞移行，分化和再生达到形成和自体局部损伤组织完全相同的组织。

I型胶原是人体内绝大多数组织，器官的细胞赖以生存的细胞外间质所需的物质，是损伤组织器官在修复过程当中不可缺少的物质。I型胶原是细胞外基质的结构蛋白质，分子中具有共价键连接的三股α-肽链，三股螺旋间的三种力是保证胶原三股螺旋稳定的核心。胶原在提取分离时，随方法和条件不同，可以产生胶原，明胶和胶原蛋白三种产物。胶原、明胶和胶原蛋白是不同的。能被称为胶原的必须是其三螺旋结构没有改变的蛋白质，保留其生物活性。从结构上讲，胶原是具有共价键连接的三股α-肽链的蛋白质。明胶是共价键被打断，只剩次级键的蛋白质，是胶原的变形产物，三螺旋体完全松开或部分松开，丧失生物活性。胶原蛋白是比较游离的α-肽链或明胶分子的片断，有蛋白质特性但不具有整体胶原特性。从广泛意义上说，明胶也属于胶原蛋白，其分子量比胶原蛋白高。

I型胶原在自然界中许多动物体内的不同组织器官内存在，如鼠类的尾巴，动物的皮肤等，只是含量和质地均有所不同，牛的跟腱里三螺旋结构的I型胶原含量高达98％，故牛跟腱是提取I型胶原材料的丰富来源。但是提取高纯度的具有三螺旋结构的I型胶原是非常困难和复杂的，如何纯化和收集具有高纯度三螺旋结构的I型胶原是个极为重要的课题。

硬脑膜/硬脊膜在外伤以及肿瘤侵及时，可造成不同程度的脑膜/脊膜的损伤与缺损，继而导致脑脊液渗漏，继发感染，甚至因脑膜不正常愈合形成的瘢痕而引发癫痫。严重的损害缺损将造成颅脑中枢神经系统器官实质性不可逆的损伤与变性。目前通常的治疗方法是在损伤或缺损的情况下，选用自体其他部位的颅脑筋膜、体肌筋膜或其他抗原性较高的生物材料产品进行严密的缝合。由于自身组织难以获取，或者因选取材料的不充分往往治疗达不到预期的效果，而其他代用品又往往具有较高的免疫反应，并且会形成瘢痕组织，影响治疗效果。本发明的特点是在颅脑中，对损伤缺损的脑膜/脊膜的缺损部位使用具有一定强度与三维孔隙结构的脑膜/脊膜生物膜片进行覆盖，对脑膜/脊膜的受损部位以及暴露的脑实质表面进行覆盖包裹，这样不仅机械性地保护脑实质部位的组织免受外周其他组织的侵入干扰，同时还可以建立受损脑膜/脊膜部位的纤维组织的再生内环境，防止脑脊液和其内生长因子的过度丢失，保持受损组织的内环境的相对稳定，为修复脑膜/脊膜和其再生提供最佳环境。

发明内容

本发明的一方面是提供一种高纯度的保持胶原特有三螺旋结构的I型医用胶原材料。具体而言，是以牛跟腱组织为原料，经过酶脱脂和化学反应去蛋白活性，通过化学反应程序提取得到的纯度高达98％以上的固态/絮状的保持胶原特有三螺旋结构的I型医用胶原材料。

本发明的另一方面是提供一种高纯度的保持胶原特有三螺旋结构的I型医用胶原材料的提取方法。其包括如下步骤：以牛跟腱组织为原料，经冷冻，切割成厚度为0.1-3毫米的薄片，经筛选，在搅拌条件下将其浸泡在0.1％磷酸二氢钠/氢氧化钠溶液中浸泡1-3小时，使其酸碱度保持中性。将1∶5(w/w)的无花果酶加入上述处理的物质溶液中充分反应。定时搅拌4小时，其后用1％的硝酸铵处理6小时然后清洗。再加入1M的氯化钠再处理并控制温度，调节酸碱度，4℃下静置过夜，其后用2M当量的氢氧化钠溶液反应。最后用50％硫酸中和缓冲，再调节酸碱度使其呈偏酸性，取出沉淀物，水洗浸泡6小时后去除水份，通过冷冻干燥得到保持胶原特有三螺旋结构的I型医用胶原材料。

本发明的另一方面是提供一种采用上述I型医用胶原材料制备的脑膜/脊膜膜片。具体而言，其由浓度为0.5％-2％的纯度高达98％以上的保持胶原特有三螺旋结构的I型医用胶原材料制成。进一步地，该脑膜/脊膜生物膜片由高纯度的保持胶原特有三螺旋结构的I型医用胶原材料和硫酸软骨素-6复合制成。所述脑膜/脊膜生物膜片厚度为0.1-10毫米，具有无特殊走向的三维孔隙结构，其孔隙大小为160-350微米。

上述脑膜/脊膜生物膜片能够覆盖在损伤或缺损的硬膜的外表面，作为脑膜/脊膜组织的修复材料，用于修复受损的硬脑膜/硬脊膜组织以及保护中枢神经系统组织。并优选其在3-12个月内降解吸收。

本发明的另一方面是提供一种上述脑膜/脊膜膜片的制备工艺。其包括如下步骤：将纯度高达98％以上的保持胶原特有三螺旋结构的I型医用胶原溶于0.01-0.5M的冰醋酸内，形成0.5％-2％的溶液，在高速低/常温搅拌条件下(15000-30000转/分；0-15℃)于1-8小时内添加0.05％-60％的氨基葡聚糖(GAG/硫酸软骨素-6)，经冷冻干燥程序后，再经物理或化学方法加强胶原分子间的链连接，然后通过低温环氧乙烷消毒灭菌，制成孔隙在160-350微米之间具有三维孔隙结构的类海绵状脑膜/脊膜膜片。

将浓度为0.5％-2％的，纯度为98％以上的保持胶原特有三螺旋结构的I型医用胶原材料经低温高速搅拌后加以硫酸软骨素-6(GAG)混合后制成复合悬浊液。将定量的复合悬浊液倒入医用不锈钢冷冻盘内，应用低温冷冻-冷凝-升华-升温的冷冻干燥技术制成生物膜片。

其中所述的冷冻干燥程序为低温冷冻-升华(温)干燥，冷冻温度的设置为(1)-10～-4℃/30分钟/呈持续状态；(2)-60～-40℃/180-240分钟/呈曲线状态；(3)-60～-40℃/60-120分钟/呈持续状态；过程中冷冻干燥机冷柜的温度应保持-80℃，其后升华阶段的温度设置为(1)0℃/保持18-24小时；(2)二次升温的温度设置为20℃，时间为30-120分钟，上述所有程序进行过程中真空度设置在200-350毫托。

为使保持胶原特有三螺旋结构的I型医用胶原膜片具有不同性质的生物/物理功能，必须加强胶原分子链间的连接使其胶原蛋白理化特性加以改变，可以采用的方法分别为(1)物理方法：真空高温脱水(DHT)，将脑膜/脊膜膜片放入真空烤箱内，负压设置为负1个大气压，温度为100-120℃处理24-72小时；(2)化学方法：1-乙酯-3-3-二甲基丙基胺-碳化二甲胺(EDAC)法，将EDAC，NHS和COOH液体(1-乙酯-3-3-二甲基丙基胺-碳化二甲胺、羟基琥珀酰亚胺和羧基)按比例4∶1∶1(摩尔比)配置后浸泡脑膜/脊膜膜片1-5小时以加强胶原分子链。

所述的低温环氧乙烷消毒灭菌具体为：使用环氧乙烷气体灭菌消毒，30％纯环氧乙烷加以50％-70％的二氧化碳在消毒器内进行灭菌，灭菌温度为54℃±2℃；灭菌湿度为50％-70％RH；预真空为-20～-40Kpa；换气真空度为-40～-60Kpa；换气次数为8次；灭菌时间为3-4小时。

在制备过程中，不同浓度的混合悬浊液，不同的悬浊液摄取量，不同的冷冻温度以及不同的加强方法相匹配，就可以达到160-350微米大小无顺序排列的孔隙，不同应力，以及不同的降解吸收率从3个月到12个月之间。优选孔隙大小为160-210微米，更优选220-300微米，最佳优选值为275微米。上述I型胶原材料的浓度优选为0.5％，1％，1.5％和2％。优选浓度为0.5-1％，更优选浓度为0.5-0.75％，最佳优选值为0.5％。上述硫酸软骨素-6的浓度优选0.04-2％。

非特定说明外，本发明所述所有百分值单位均为质量/体积。

本发明的另一方面是提供上述脑膜/脊膜膜片在制备修复受损的硬脑膜/硬脊膜神经组织的材料、治疗或预防因外伤和肿瘤造成的硬脑膜/脊膜损伤或缺损的材料、治疗或预防因硬脑膜/硬脊膜缺损引起的脑脊液漏、感染中的材料的应用。

本发明的另一个方面是提供上述脑膜/脊膜膜片在制备防止或减少组织粘连的材料中的应用。

本发明提供的高纯度的保持胶原特有三螺旋结构的I型医用胶原材料具有免疫抗原性低，无异物反应，生物相容性好，可控制降解速率的材料，由此制成的生物膜片具有一定的抗拉力强度，可修复再生硬脑/脊膜组织以及防止/减少组织粘连的特点，适用于硬脑膜，硬脊膜损伤后的内置修复与再生。

附图说明

图1是脑膜/脊膜生物膜片的整体观。网状表示疏松三维孔隙。孔隙大小为160-350微米的无相性走向的三维结构孔隙的类海绵状片状膜，即：160-350微米孔隙、0.1-10毫米厚98％纯度的具有三螺旋结构的I型医用胶原材料脑膜/脊膜生物膜。

图2是脑膜/脊膜生物膜片的置放示意图，即：具有三螺旋结构的I型医用胶原材料脑膜/脊膜生物膜片安放位置以及和颅脑组织的关系。

具体实施方式

以下结合具体实例对本发明作进一步说明。

实施例1：提取保持胶原特有三螺旋结构的I型医用胶原材料

选用1kg的牛跟腱组织，冷冻，切割成厚度为0.1-3毫米的薄片，经筛选，在搅拌条件下将其浸泡在0.1％磷酸二氢钠/氢氧化钠溶液中浸泡1-3小时，使其酸碱度保持中性。将1∶5(w/w)的无花果酶加入上述处理的物质溶液中充分反应。伴有定时搅拌，其后用1％的硝酸铵处理6小时。然后清洗。再加入1M的氯化钠再处理并控制温度，调节酸碱度，4℃下静置过夜，其后用2M当量的氢氧化钠溶液反应。其后用50％硫酸中和缓冲并调节酸碱度使其呈偏酸性，取出沉淀物，水洗浸泡6小时，然后去除水份，通过冷冻干燥得到保持胶原特有三螺旋结构的I型医用胶原材料。

胶原，明胶和胶原蛋白的区别在于在提取制作过程中所采用的方法和控制条件，能保持胶原纤维螺旋结构稳定的环境为酸性，同时温度必须偏低，所以在制作的时候必须在低温下进行。如何鉴定支架前的胶原短纤维材料能保持三螺旋结构的特性，定量学是比较困难的，电子显微镜和偏光光学显微镜的观查其结构形态是有助于确定的。原胶原材料在高速搅拌后的悬浊液经处理后再得到纤维状的固态胶原，再经酸性溶液溶解后成乳状液，取其1-2滴液体经偏光镜的检查，可见其内的胶原短纤维和颗粒，在黑暗的偏光背景下显示光亮的条所状或粒状物，其为胶原纤维在偏光下的折射现象。在更高倍镜下可见其纤维的形态上呈现“横纹带或横纹褶皱”，而这横纹带或横纹褶皱正是I型胶原三螺旋纤维的典型表现。这说明了实施例1所得的胶原材料确实保持了I型胶原纤维固有的胶原三螺旋结构。而明胶和胶原蛋白却得不到如此的影像。

实施例2：制备脑膜/脊膜生物膜片

取适量的实施例1的具有三螺旋结构的I型医用胶原材料，将3.6克胶原溶于720毫升0.1M的冰醋酸中，制成0.5％浓度的胶原悬浊液，在高速低温搅拌条件下(20,000转/分；4℃)在2小时内加入6-硫酸软骨素，得到0.5％的复合悬浊液，将720毫升倒入30×150厘米的冷冻托盘中，放入冷冻干燥机冷柜进行冷冻干燥。

冷冻温度的设置为(1)-7℃/30分钟/呈持续状态；(2)-40℃/200分钟/呈曲线状态；(3)-40℃/70分钟/呈持续状态；过程中冷冻干燥机冷柜的温度保持-80℃。升华阶段的温度设置为(1)0℃/保持18小时；(2)二次升温的温度设置为20℃，时间为40分钟，上述所有程序进行过程中真空度设置在200毫托。

将冷冻干燥得到的产品放入真空烤箱内，其设置负1个大气压，在温度105℃下处理24小时。

将得到产品进一步在消毒器内使用30％纯环氧乙烷加70％的二氧化碳进行灭菌，灭菌温度为54℃±2℃；灭菌湿度为60％RH；预真空为-20Kpa；换气真空度为-40Kpa；换气次数为8次；灭菌3.5小时，制备得到孔隙275微米、5毫米厚的脑膜/脊膜生物膜片。

实施例3：制备脑膜/脊膜生物膜片

取适量的实施例1的具有三螺旋结构的I型医用胶原材料，7.2克溶于720毫升的0.1M的冰醋酸中，制成2％浓度的胶原悬浊液，在高速低温搅拌条件下(30,000转/分；0℃)在1.5小时内加入6-硫酸软骨素，得到1％的复合悬浊液，取125毫升倒入12.5×12.5厘米的冷冻托盘中，放入冷冻干燥机冷柜进行冷冻干燥。

冷冻温度的设置为(1)-9℃/30分钟/呈持续状态；(2)-50℃/220分钟/呈曲线状态；(3)-45℃/80分钟/呈持续状态；过程中冷冻干燥机冷柜的温度保持-80℃。升华阶段的温度设置为(1)0℃/保持20小时；(2)二次升温的温度设置为20℃，时间为60分钟，上述所有程序进行过程中真空度设置在200毫托。

将冷冻干燥得到的产品放入真空烤箱内，其设置负1个大气压，在温度110℃下处理40小时。

将得到产品进一步在消毒器内使用30％纯环氧乙烷加70％的二氧化碳进行灭菌，灭菌温度为54℃±2℃；灭菌湿度为70％RH；预真空为-20Kpa；换气真空度为-20Kpa；换气次数为8次；灭菌3小时，制备得到孔隙250微米、4毫米厚的脑膜/脊膜生物膜片。

实施例4：制备脑膜/脊膜生物膜片

取适量的实施例1的具有三螺旋结构的I型医用胶原材料，14.4克将其溶于720毫升的0.1M的冰醋酸中，制成2％浓度的胶原复合悬浊液，在高速常温搅拌条件下(15,000转/分；2℃)在5小时内加入6-硫酸软骨素，得到2％的复合悬浊液，取720毫升倒入30×150厘米的冷冻托盘中，放入冷冻干燥机冷柜进行冷冻干燥。

冷冻温度的设置为(1)-10℃/30分钟/呈持续状态；(2)-55℃/180分钟/呈曲线状态；(3)-60℃/120分钟/呈持续状态；过程中冷冻干燥机冷柜的温度保持-80℃。升华阶段的温度设置为(1)0℃/保持24小时；(2)二次升温的温度设置为20℃，时间为100分钟，上述所有程序进行过程中真空度设置在200毫托。

将冷冻干燥得到的产品于按照4∶1∶1比例配置的1-乙酯-3-3-二甲基丙基胺-碳化二甲胺，羟基琥珀酰亚胺和羧基的混合液体中浸泡3小时。

将得到产品进一步在消毒器内使用30％纯环氧乙烷加70％的二氧化碳进行灭菌，灭菌温度为54℃±2℃；灭菌湿度为65％RH；预真空为-35Kpa；换气真空度为-55Kpa；换气次数为8次；灭菌4小时，制备孔隙300微米，4.5毫米厚的脑膜/脊膜生物膜片。

试验方法和结果：

脑膜/脊膜生物膜片覆盖在受损伤或缺损的硬脑膜/硬脊膜部位，其组织周围的血液中的血小板被大量吸附，同时凝血酶原将渗透于胶原膜的三维孔隙中被激活凝血活性，凝血纤维使胶原膜和正常脑膜紧密接触。同时三维结构的孔隙内充满了组织液和血液，起到了弹性的保护作用。防止脑脊液的渗出，使颅内的内环境相应稳定。硬膜本身的成纤维细胞借助胶原膜的三维结构移行，分化，转化，再生从而促进损伤组织内新生的硬膜的再生。网状结构的支架同时可以干扰无序的纤维组织的分化与增生。减少了内部的瘢。

实施例5：有关脑膜/脊膜生物膜的动物实验

脑膜/脊膜生物膜片的动物实验：6只雄性猎狗进行右侧前外侧颅骨切除术。用直径3厘米的环钻行行右前外侧顶骨切开术。不损伤任何颅骨下组织。小心止血后将其下的硬脑膜提起，小心的剪切直径3厘米的硬脑膜。保护其下的蛛网膜和软脑膜不受任何损伤。将直径4厘米的胶原膜片小心的植入硬脑膜缺损的部位，覆盖整个的硬脑膜的缺损部位和脑实质的表面。不缝合。其后小心止血后将切除的颅骨瓣放回颅骨缺损的部位。

术后动物全部健康成活，无任何神经，精神异常症状，无脑脊液渗漏，无感染。12周后处死动物，用直径6厘米的环钻以第一次手术骨瓣复位后的原颅骨的中心为新中心，扩大范围切除颅骨，暴露其下的硬脑膜和脑实质组织。

肉眼观察：

6只实验动物的右前外侧顶骨愈合亮好，无任何感染。掀开骨瓣后，颅骨和硬脑膜间无明显粘连，新生的硬脑膜组织光滑，硬脑膜，蛛网膜和脑实质间无明显粘连和瘢痕。脑实质表面正常，无任何退化性改变。

组织学检查：

将颅骨/硬脑膜/脑实质整体切除。经脱钙，蜡块包埋后，制成5-6微米厚的切片经HE染色后观察组织学形态。

显微镜下常规切片检查均未发现异常组织细胞出现。整体显示为序的成纤维细胞和纤维结碲组织。和正常硬脑膜相比除在新生硬脑膜基底有活动性新生细胞分化外，在结构，形态和正常硬脑膜无异。无粘连，无瘢痕形成。偏光显微镜下显示新生的纤维组织呈现出I型胶原特有的结构-阶段性光谱结构，而且植入的胶原膜均已降解吸收，无任何残留的胶原材料。

本发明提供的保持胶原特有三螺旋结构的I型医用胶原材料免疫抗原性低，无异物反应，生物相容性好，可控制降解速率，由其制备的脑膜/脊膜生物膜片具有一定的抗拉力强度，具有可修复再生硬脑/脊膜组织以及防止/减少组织粘连的特点，适用于硬脑膜，硬脊膜损伤后的内置修复与再生，可以促进损伤缺损的硬脑膜/硬脊膜的细胞在提供的胶原支架上移行，分化，再生，形成自身相同的组织，同时干扰非序的成纤维细胞的增生形成瘢痕。有效地修复损伤缺损的组织，减少病人的痛苦，为患者谋取更大的福利。

Claims (9)

1.一种保持胶原特有三螺旋结构的I型医用胶原材料，其特征在于它是以牛跟腱组织为原料，经过酶脱脂化学反应去蛋白活性，通过酸、碱化学反应纯化提取得到的纯度高达98％以上的固态/絮状的保持胶原特有三螺旋结构的I型医用胶原材料。

2.权利要求1所述的I型医用胶原材料的提取方法，其特征在于：以牛跟腱组织为原料，经冷冻，切割成厚度为0.1-3毫米的薄片，在搅拌条件下将其在0.1％磷酸二氢钠/氢氧化钠溶液中浸泡1-3小时，使其酸碱度保持中性。将1∶5(w/w)的无花果酶加入上述处理的物质溶液中充分反应。定时搅拌4小时，其后用1％的硝酸铵处理6小时然后清洗。再加入1M的氯化钠再处理并控制温度，调节酸碱度，4℃下静置过夜，其后用2M当量的氢氧化钠溶液反应。最后用50％硫酸中和缓冲，再调节酸碱度使其呈偏酸性，取出沉淀物，水洗浸泡6小时后去除水分，通过冷冻干燥得到保持胶原特有三螺旋结构的I型医用胶原材料。

3.一种脑膜/脊膜膜片，其特征在于其由纯度高达98％以上的保持胶原特有三螺旋结构的I型医用胶原材料制成的具有三维孔隙结构的类海绵状膜片物。

4.权利要求3的脑膜/脊膜膜片的制备工艺，其特征在于：将纯度高达98％以上的保持胶原特有三螺旋结构的I型医用胶原溶于0.01-0.5M的冰醋酸内，形成0.5％-2％的悬浊液，在0-15℃/15000-30000转/分搅拌条件下于1-8小时内添加0.05％-60％的氨基葡聚糖(GAG/硫酸软骨素-6)，经冷冻干燥程序后，再经物理或化学方法加强胶原分子间的链连接，然后通过低温环氧乙烷消毒灭菌，制成孔隙在160-350微米之间具有三维孔隙结构的类海绵状脑膜/脊膜膜片。

5.权利要求4所述的制造工艺，其特征在于所述的冷冻干燥程序为低温冷冻-升华(温)干燥，冷冻温度的设置为(1)-10～-4℃/30分钟/呈持续状态；(2)-60～-40℃/180-240分钟/呈曲线状态；(3)-60～-40℃/60-120分钟/呈持续状态；过程中冷冻干燥机冷柜的温度应保持-80℃，其后升华阶段的温度设置为(1)0℃/保持18-24小时；(2)二次升温的温度设置为20℃，时间为30-120分钟，上述所有程序进行过程中真空度设置在200-350毫托。

6.权利要求4所述的制造工艺，其特征在于所述的物理方法为真空高温脱水(DHT)，将脑膜/脊膜膜片放入真空烤箱内，负压设置为负1个大气压，温度为100-120℃，处理24-72小时；所述的化学方法为1-乙酯-3-3-二甲基丙基胺-碳化二甲胺(EDAC)法，将EDAC、NHS和COOH液体(1-乙酯-3-3-二甲基丙基胺-碳化二甲胺、羟基琥珀酰亚胺和羧基)按摩尔比4∶1∶1配置后浸泡脑膜/脊膜膜片1-5小时以加强胶原分子链。

7.权利要求4所述的制造工艺，其特征在于所述的低温环氧乙烷消毒灭菌是使用环氧乙烷气体灭菌消毒，30％纯环氧乙烷加以50％-70％的二氧化碳在消毒器内进行灭菌，灭菌温度为54℃±2℃；灭菌湿度为50％-70％RH；预真空为-20～-40Kpa；换气真空度为-40～-60Kpa；换气次数为8次；灭菌时间为3-4小时。

8.权利要求3的脑膜/脊膜膜片在制备修复受损的硬脑膜/硬脊膜神经组织的材料、治疗或预防因外伤和肿瘤造成的硬脑膜/脊膜损伤或缺损的材料、治疗或预防因硬脑膜/硬脊膜缺损引起的脑脊液漏、感染的材料中的应用。

9.权利要求3的脑膜/脊膜膜片在制备防止或减少组织粘连的材料中的应用。

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