CN110891431A - 生物学活性经专门研究以区分于男性和女性而改善健康状况的细菌组合物和/或其衍生物 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种细菌组合物和/或其衍生物,已经对其生物学活性进行了专门研究以区分于男性和女性人类受试者来改善健康状况。
Description
本发明涉及一种细菌组合物和/或其衍生物,已经对其生物学活性进行了专门研究以区分男性和女性人类受试者而改善健康状况。具体而言,本发明涉及包含至少一种细菌菌株和/或其衍生物的组合物,已经对其生物学活性进行了专门研究以区分男性和女性人类受试者而改善健康状况,非限制举例而言,所述受试者患有:由于肠道微生物群失衡引起的病理,或者神经退行性或心血管病理,或者与免疫系统缺陷相关的病理,或者与身体衰老和皮肤或真皮(cutis)老化的生物过程相关的病理,或者与导致记忆力和/或专注能力逐渐丧失的生物衰老过程相关的病理,或者由氧化应激引起的病理,或者自身免疫病理,或者炎性病理,或者由于肠通透性改变引起的病理等等。
众所周知,在过去的二十年中,微生物在人类健康领域的开发和使用日益增长。实际上,迄今为止,已经产生了大量科学文献,其中首先分离许多细菌菌株(包括益生菌株)并进行了形态学表征,然后进行研究以了解其特性和生物学系统以及它们与人体在不同区域的相互作用的能力。
迄今为止进行的研究的目的一直是针对开发基于细菌菌株的特定成品,例如膳食补充剂或医疗器械或药物组合物以及化妆品组合物,所有这些都不加区分地供具有相同的确切需求的人类受试者通用,无论他们是男性还是女性。
然而,还已知细菌菌株的使用并不总是能够使有需要的人类受试者的健康状况改善,因为人体是独特的并且受试者两两之间存在差异。
在相同的特定病理或疾病的情况下,申请人已经解决了改善有需要的人类受试者的健康状况的技术问题。特别地,申请人已经解决了在相同的特定病理或疾病的情况下最大化一种或多种细菌菌株的有效性的技术问题。
经过广泛而深入的研究和开发活动,申请人已经成功地对上述技术问题做出了适当的回应。
申请人投入了大量的研究,既研究了许多细菌菌株和/或其衍生物的生物学活性,还理解了它们与人类生物系统相互作用的方式。
令人惊奇的是,申请人发现属于给定属和物种的细菌菌株(生物型(biotype))和/或其衍生物的生物活性,以靶向和差异化的方式与病理状况相同的男性或女性人类受试者(男性或女性)的生物系统相互作用。
申请人发现,在相同属和/或物种和/或生物型内,细菌菌株具有能够以区分人类性别(男性和女性)的方式改善健康状况的生物活性。
因此,在相同属内、相同属和种内、相同属和种以及生物型内,申请人惊奇地发现,存在一些细菌菌株和/或其衍生物在人类中在健康方面对男性而言表现更好,而另一些在健康方面对女性而言表现更好。
本发明的主题涉及具有如所附权利要求书限定的特征的组合物。
本发明的优选实施方式将从下面的详细描述中清楚地显现出来,并在所附的权利要求书中进行了详细说明。
在附图中,参照表1,用代码表示细菌菌株。
图1显示表1中细菌菌株对超氧化物阴离子产生的影响,以评估患有帕金森病的受试者的氧化应激。
图2显示图1中女性人类受试者的数据。
图3显示图1中男性人类受试者的数据。
图4涉及患有帕金森病的受试者中细菌菌株对Th1(促炎响应)/Th2(抗炎响应)比率的调节的活性。Th1/Th2比率的降低表明向抗炎方向调节。
图5显示图4中女性人类受试者的数据。
图6显示图4中男性人类受试者的数据。
图7显示分析所述结果和区分男性和女性选择对用于评估氧化应激的超氧化物阴离子的产生和对抗炎效应具有更大影响的菌株。
在本发明的上下文中,要求保护“细菌菌株”和/或其“衍生物”。
“细菌菌株(bacterial strain)”旨在包括:a)活细菌菌株和b)死细菌菌株。作为非限制性实例,死细菌菌株(b)组旨在包括:b1)细菌细胞壁提取物,b2)丁二醛化细菌,b3)超声处理的细菌(用超声方法处理的细菌),以及b4)裂解细菌。
作为非限制性实例,“衍生物(derivative)”旨在包括衍生自细菌菌株的生物活性肽(细菌代谢产物)。
在本发明的上下文中,术语“组合物”是指包括膳食补充剂或用于医疗装置的组合物或药物组合物或化妆品组合物。
本发明的主题涉及一种包含混合物的组合物,所述混合物包含有效量的至少一种细菌菌株和/或其衍生物或由组成,以区分于人类性别(男性和女性)来改善健康状况。
本发明的主题涉及一种包含混合物的组合物,所述混合物包含有效量的至少一种细菌菌株和/或其衍生物或由组成,所述组合物应用于根据人类性别(男性和女性)差异化地改善健康状况,作为非限制性实例,所述受试者患有:由于肠道微生物群失衡引起的病理,或者神经退行性或心血管病理,或者与免疫系统缺陷相关的病理,或者与身体衰老和皮肤或真皮老化的生物过程相关的病理,或者与导致记忆力和/或专注能力逐渐丧失的生物衰老过程相关的病理,或者由氧化应激引起的病理,或者自身免疫病理,或者炎性病理,或者由于肠通透性改变引起的病理,等等;其中所述至少一种细菌菌株和/或其衍生物可以属于下述属:乳杆菌属(Lactobacillus)、双歧杆菌属(Bifidobacterium)、乳球菌属(Lactococcus)和链球菌属(Streptococcus),并且其中所述细菌菌株在治疗男性人类受试者和/或女性人类受试者中发挥靶向的差异化活性。
本发明的主题涉及一种包含混合物的组合物,所述混合物包含有效量的至少一种细菌菌株和/或其衍生物或由组成,所述组合物应用于治愈性和/或预防性治疗受试者中与至少一种病理相关的症状和/或疾病的方法中,所述病理选自包含以下病理或由其组成的组:(i)由于肠道微生物群失衡引起的病理;(ii)神经退行性病理;(iii)心血管病理,(iv)与免疫系统缺陷相关的病理,(v)与身体衰老和皮肤或真皮老化的生物过程相关的病理,(vi)与导致记忆力和/或专注能力逐渐丧失的生物衰老过程相关的病理,(vii)由氧化应激引起的病理,(viii)自身免疫病理,(ix)炎性病理,和(x)由于肠通透性改变引起的病理,其中所述至少一种细菌菌株属于选自包含乳杆菌属、双歧杆菌属、乳球菌属和链球菌属或由它们组成的组中的属,其中所述细菌菌株在治疗男性人类受试者和/或女性人类受试者的方法中发挥靶向的差异化活性,其中所述组合物用在治疗男性人类受试者或女性人类受试者的方法中,并且其中所述受试者受选自包含(i)至(x)或由其组成的组中的病理所影响。
本发明的主题涉及一种治愈性和/或预防性治疗受试者中与至少一种病理相关的症状和/或疾病的方法,所述病理选自包含以下病理或由其组成的组:(i)由于肠道微生物群失衡引起的病理;(ii)神经退行性病理;(iii)心血管病理,(iv)与免疫系统缺陷相关的病理,(v)与身体衰老和皮肤或真皮老化的生物过程相关的病理,(vi)与导致记忆力和/或专注能力逐渐丧失的生物衰老过程相关的病理,(vii)由氧化应激引起的病理,(viii)自身免疫病理,(ix)炎性病理,和(x)由于肠通透性改变引起的病理,其中所述治疗方法包括施用本发明的组合物,其中本发明的组合物中的至少一种细菌菌株在治疗男性人类受试者和/或女性人类受试者的方法中发挥靶向的差异化活性,其中所述治疗方法包括对男性人类受试者和/或女性人类受试者施用所述组合物,并且其中所述受试者患有选自包含(i)至(x)或由其组成的组中的病理。
具体而言,提供了一种治疗方法,对于相同的病理,该方法包括区分于男性人类受试者和女性人类受试者而施用属于相同属和/或物种的细菌菌株和/或其衍生物以改善健康状况。
在实验部分中,作为令人惊讶地发现的结果的支持和确证,申请人报道了一项作为非限制性实例的在人中进行的体内研究,该研究在一组男性患者和一组女性患者上进行且与以帕金森病为代表的相同神经退行性病变相关。
仅通过所研究的病理的非限制性实例就令人惊讶地发现,就治愈性治疗或预防性治疗帕金森病而言,施用一些细菌菌株和/或其衍生物对男性患者产生了更好的效果,而施用也属于相同属和/或种但具有不同生物型的其他细菌菌株则对女性患者产生了更好的效果。
换言之,申请人已经发现,相同的生物型(相同细菌菌株,属于相同物种并因此属于相同属)在病理或疾病相同的男性患者和女性患者中以差异化的方式表现。并且彼此不同的生物型(不同细菌菌株,但是属于相同物种并因此属于相同属)改善病理或疾病相同的男性患者和女性患者的健康状况。以这种方式,利用本发明可以以有利的方式选择和选定最佳的生物型(细菌属和物种相同),从而以差异化的方式针对相同病理或疾病用于男性患者和女性患者。
这些结果出人意料,因为没有已知的研究或假设使细菌菌株和/或其衍生物以及属于相同属和/或物种但具有不同生物型的那些的作用与在区分于男性人类受试者和女性人类受试者而改善健康状态时的所治疗受试者的性别相关联。
更具体而言,在治疗病理时,没有已知的研究或假设使细菌菌株和/或其衍生物以及属于相同属和/或物种但具有不同生物型的那些)的作用与所治疗人类受试者的性别相关联,作为非限制性实例,所述病理由以下定义:神经退行性或心血管病理,或者与免疫系统缺陷相关的病理,或者与身体衰老和皮肤或真皮老化的生物过程相关的病理,或者与导致记忆力和/或专注能力逐渐丧失的生物衰老过程相关的病理,或者由氧化应激引起的病理,或者自身免疫病理,或者炎性病理,或者由于肠通透性改变引起的病理,等等。
本发明的细菌菌株和/或其衍生物是可以属于乳杆菌属、双歧杆菌属、乳球菌属和链球菌属的细菌菌株,由于其生物活性,其在治疗男性人类受试者和女性人类受试者时决定着靶向的差异化的相互作用。
申请人意外地发现,在男性人类受试者中用选择的细菌菌株和在女性人类受试者中用其他细菌菌株在几种病理的治疗中获得了有利的结果,但这当然并不意味着某些细菌菌株(或细菌属)仅仅在给定性别的受试者中有效。
在优选实施方式中,在根据本发明应用的组合物中,所述细菌菌株和/或其衍生物选自:嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、短乳杆菌(Lactobacillus brevis)、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)、德氏乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii)、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)、卷曲乳杆菌(Lactobacillus crispatus)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)、格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)、罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)、唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)、嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)、青春双歧杆菌(Bifidobacterium adolescentis)、两歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum)、乳双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)、短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)、长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)、婴儿双歧杆菌(Bifidobacterium infantis)、链状双歧杆菌(Bifidobacterium catenulatum)、假链状双歧杆菌(Bifidobacteriumpseudocatenulatum),以及它们的混合物。
在本发明的优选实施方式中,本发明的组合物用于治疗病理的方法,作为非限制性实例,所述病理选自:(i)由于肠道微生物群失衡引起的病理;(ii)神经退行性病理;(iii)心血管病理,(iv)与免疫系统缺陷相关的病理,(v)与身体衰老和皮肤或真皮老化的生物过程相关的病理,(vi)与导致记忆力和/或专注能力逐渐丧失的生物衰老过程相关的病理,(vii)由氧化应激引起的病理,(viii)自身免疫病理,(ix)炎性病理,和(x)由于肠通透性改变引起的病理,等等。
在优选实施方式中,但绝不是限制,本发明的主题涉及一种包含混合物的组合物,所述混合物包含至少一种细菌菌株和/或其衍生物或由组成,所述组合物应用于治愈性和/或预防性治疗男性人类受试者和女性人类受试者中选自(i)至(x)的病理或疾病的方法中,其中所述治疗包括向所述受试者施用所述组合物,并且如果所述受试者是男性人类,则所述至少一种菌株和/或其衍生物选自:唾液乳杆菌LS01 DSM 22775(2009年7月23日由波比奥泰克股份公司(Probiotical S.p.A.)保藏于DSMZ),植物乳杆菌LP01 LMG P-21021(2001年10月16日由Mofin Srl保藏于BCCM-LMG),罗伊氏乳杆菌DLLRE 09 DSM 25685(2012年2月16日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ),嗜酸乳杆菌LA 02 DSM 21717(2008年8月6日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ)和鼠李糖乳杆菌LR 06 DSM 21981(2008年11月14日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ),以及两种或三种或四种所述细菌菌株和/或其衍生物的混合物;
或者,如果所述受试者是女性人类,则所述至少一种细菌菌株和/或其衍生物选自:唾液乳杆菌LS01 DSM 22775(2009年7月23日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ),唾液乳杆菌LS 07 DSM 29476(2014年10月9日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ),唾液乳杆菌LS 06 DSM 26037(2012年6月6日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ),乳双歧杆菌BS01LMG P-21384(2002年1月31日由Anidral S.r.l.保藏于BCCM LMG),由长双歧杆菌DLBL 07DSM 25669(2012年2月16日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ)、长双歧杆菌DLBL 08 DSM25670(2012年2月16日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ)、长双歧杆菌DLBL 09 DSM25671(2012年2月16日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ)、长双歧杆菌DLBL 10 DSM25672(2012年2月16日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ)、长双歧杆菌DLBL 11 DSM25673(2012年2月16日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ)菌株组成的混合物DLBL5S(比例优选为1:1:1:1:1),以及两种或三种或四种所述细菌菌株和/或其衍生物的混合物。
在优选实施方式中,本发明的主题涉及一种组合物,其用于治愈性和/或预防性治疗男性人类受试者中选自包含(i)至(x)或由其组成的组中的病理或疾病的方法中,其中所述治疗方法包括向所述受试者施用所述组合物,并且其中至少一种菌株和/或其衍生物选自包含以下菌株或由其组成的组:唾液乳杆菌LS01 DSM 22775(2009年7月23日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ),植物乳杆菌LP01 LMG P-21021(2001年10月16日由Mofin Srl保藏于BCCM-LMG),罗伊氏乳杆菌DLLRE 09 DSM 25685(2012年2月16日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ),嗜酸乳杆菌LA 02 DSM 21717(2008年8月6日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ)和鼠李糖乳杆菌LR 06 DSM 21981(2008年11月14日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ),以及两种或三种或四种所述细菌菌株和/或其衍生物的混合物。
在优选实施方式中,本发明的主题涉及一种组合物,其用于治愈性和/或预防性治疗女性人类受试者中选自包含(i)至(x)或由其组成的组中的病理或疾病的方法中,其中至少一种菌株和/或其衍生物选自包含以下菌株或由其组成的组:唾液乳杆菌LS01 DSM22775(2009年7月23日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ),唾液乳杆菌LS 07 DSM 29476(2014年10月9日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ),唾液乳杆菌LS 06 DSM 26037(2012年6月6日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ),乳双歧杆菌BS01 LMG P-21384(2002年1月31日由Anidral S.r.l.保藏于BCCM LMG),由长双歧杆菌DLBL 07 DSM 25669(2012年2月16日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ)、长双歧杆菌DLBL 08 DSM 25670(2012年2月16日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ)、长双歧杆菌DLBL 09 DSM 25671(2012年2月16日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ)、长双歧杆菌DLBL 10 DSM 25672(2012年2月16日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ)、长双歧杆菌DLBL 11 DSM 25673(2012年2月16日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ)菌株组成的DLBL5S混合物(比例优选为1:1:1:1:1),以及两种或三种或四种所述细菌菌株和/或其衍生物的混合物。
优选地,在根据本发明应用的组合物中,受试者是男性人类受试者,并且所述细菌菌株和/或其衍生物选自包含植物乳杆菌LP01 LMG P–21021(2001年10月16日由Mofin Srl保藏于BCCM-LMG)、罗伊氏乳杆菌DLLRE 09 DSM 25685(2012年2月16日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ)及其混合物或由它们组成的组;所述组合物应用于治愈性和/或预防性治疗男性人类受试者中选自(i)至(x)的病理和/或疾病的方法中。
优选地,在根据本发明应用的组合物中,受试者是女性人类受试者,并且所述细菌菌株和/或其衍生物选自包含下述菌株或由其组成的组:唾液乳杆菌LS 07 DSM 29476(2014年10月9日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ),和/或由长双歧杆菌DLBL 07 DSM25669(2012年2月16日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ)、长双歧杆菌DLBL 08 DSM25670(2012年2月16日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ)、长双歧杆菌DLBL 09 DSM25671(2012年2月16日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ)、长双歧杆菌DLBL 10 DSM25672(2012年2月16日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ)、长双歧杆菌DLBL 11 DSM25673(2012年2月16日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ)组成的混合物,以及两种或三种或四种所述细菌菌株和/或其衍生物的混合物;所述组合物应用于治愈性和/或预防性治疗女性人类受试者中选自(i)至(x)的病理和/或疾病的方法中。
优选地,根据本发明的组合物口服施用。
在本发明的范围内,病理的“预防”是指旨在避免这种疾病(而且包括作为既存病理病症或疾病的并发症或效应)在男性或女性人类受试者中发作的疗法。
在一个实施方式中,对男性或女性人类受试者施用组合物口服进行,例如以丸剂、片剂(其也可以被包衣)、胶囊、溶液、悬浮液、糖浆,含有益生菌的食物的形式,或以本领域技术人员已知的任何其他形式。
仍应理解,如果根据本发明的治疗包括施用多于一种的细菌菌株和/或其衍生物,则根据本发明的所述施用可以同时进行,例如以单一制剂或以快速顺序进行,例如在两个不同的组合物中以在时间上紧密间隔的顺序(例如在1至30分钟内)由受试者以任何顺序服用两种以上制剂。
除了细菌菌株和/或其衍生物之外,根据本发明使用的组合物可以包含至少一种惰性成分,例如本领域技术人员通常使用和已知的赋形剂中的至少一种赋形剂。
“惰性成分”是指辅助生产药物、膳食或营养保健形式的任何物质或物质组合,惰性成分见于成品中并且不是活性成分,但其可以改变成品的稳定性、释放或其他特征。
如药物、营养保健品或食品工业中制剂领域的技术人员已知的,这类成分的非限制性实例是例如稀释剂、吸收剂、润滑剂、着色剂、表面活性剂、抗氧化剂、甜味剂、粘合剂和崩解剂等赋形剂。
在一个实施方式中,根据本发明使用的组合物除了一种或多种细菌菌株和/或其衍生物之外,还包含至少一种天然或合成来源的其他活性成分。所述化合物的非限制性实例是维生素、抗氧化剂或植物性物质和制剂(植物药)。
在本发明的上下文中,术语组合物意指包括例如医疗器械形式的组合物,或适合于食品或营养保健用途的组合物,例如作为膳食补充剂,或为药物组合物或化妆品组合物的形式。
本发明的组合物可以是固体、液体或半固体,例如作为悬浮液或凝胶,并且可以是食品、药物或营养保健制剂领域技术人员已知的任何形式,例如作为非限制性实例,为至少部分可溶于口腔的胶囊、片剂或粉剂的形式,或可选地包含在小袋或胶囊或微型片剂中的水溶性颗粒、丸剂或微粒,液体或半固体制剂,凝胶剂,悬浮液,溶液,两相液体系统和等效形式。
以下实验部分提供本发明的实际实施方式的实例,而不限制其范围。特别地,以下提供的数据作为非限制性实例证明了以下事实:对于特定的病理,一些细菌菌株和/或其衍生物已证明对男性人类受试者具有特别有利的效果,而其他细菌菌株和/或其衍生物已证明对女性人类受试者具有特别有利的效果。然而,在以下给出的实例中已在男性人类受试者中显示出特定活性的菌株在女性人类受试者中对于不同的病理可能更具活性,反之亦然。
进一步的实施方式是以下RP:
RP1.一种包含混合物的组合物,所述混合物包含有效量的至少一种细菌菌株和/或其至少一种衍生物或者由其组成,所述组合物应用于治愈性和/或预防性治疗受试者中与至少一种病理相关的症状和/或疾病,所述病理选自包含以下病理或由其组成的组:(i)由于肠道微生物群失衡引起的病理;(ii)神经退行性病理;(iii)心血管病理,(iv)与免疫系统缺陷相关的病理,(v)与身体衰老和皮肤或真皮老化的生物过程相关的病理,(vi)与导致记忆力和/或专注能力逐渐丧失的生物衰老过程相关的病理,(vii)由氧化应激引起的病理,(viii)自身免疫病理,(ix)炎性病理,和(x)由于肠通透性改变引起的病理,等等,其中所述至少一种细菌菌株属于选自包含乳杆菌属、双歧杆菌属、乳球菌属和链球菌属或由其组成的组中的属,其中所述细菌菌株在治疗男性受试者和/或女性受试者的方法中发挥靶向的差异化的活性。
RP2.如RP1所述应用的组合物,其中所述至少一种细菌菌株和/或其衍生物选自:嗜酸乳杆菌、短乳杆菌、干酪乳杆菌、德氏乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、卷曲乳杆菌、植物乳杆菌、发酵乳杆菌、格氏乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、唾液乳杆菌、嗜热链球菌、青春双歧杆菌、两歧双歧杆菌、乳双歧杆菌、短双歧杆菌、长双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、链状双歧杆菌、假链状双歧杆菌,以及它们的混合物。
RP3.如RP1所述应用的组合物,其中所述组合物应用于治愈性和/或预防性治疗男性人类受试者和女性人类受试者中选自(i)至(x)的病理和/或疾病,其中所述治疗包括向所述受试者施用所述组合物,并且如果所述受试者是男性人类,则所述至少一种菌株和/或其衍生物选自:唾液乳杆菌LS01 DSM 22775(2009年7月23日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ),植物乳杆菌LP01 LMG P-21021(2001年10月16日由Mofin Srl保藏于BCCM-LMG),罗伊氏乳杆菌DLLRE 09 DSM 25685(2012年2月16日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ),嗜酸乳杆菌LA 02 DSM 21717(2008年8月6日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ)和鼠李糖乳杆菌LR 06 DSM 21981(2008年11月14日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ),以及两种或三种或四种所述细菌菌株和/或其衍生物的混合物;
或者,如果所述受试者是女性人类,则所述至少一种细菌菌株和/或其衍生物选自:唾液乳杆菌LS01 DSM 22775(2009年7月23日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ),唾液乳杆菌LS 07 DSM 29476(2014年10月9日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ),唾液乳杆菌LS 06 DSM 26037(2012年6月6日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ),乳双歧杆菌BS01LMG P-21384(2002年1月31日由Anidral S.r.l.保藏于BCCM LMG),由长双歧杆菌DLBL 07DSM 25669(2012年2月16日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ)、长双歧杆菌DLBL 08 DSM25670(2012年2月16日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ)、长双歧杆菌DLBL 09 DSM25671(2012年2月16日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ)、长双歧杆菌DLBL 10 DSM25672(2012年2月16日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ)、长双歧杆菌DLBL 11 DSM25673(2012年2月16日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ)菌株组成的混合物(DLBL5S)(比例优选为1:1:1:1:1),以及两种或三种或四种所述细菌菌株和/或其衍生物的混合物。
RP4.如RP3所述应用的组合物,其中所述受试者是男性人类受试者,并且所述细菌菌株和/或其衍生物选自包含植物乳杆菌LP01 LMG P–21021(2001年10月16日由Mofin Srl保藏于BCCM-LMG)、罗伊氏乳杆菌DLLRE 09 DSM 25685(2012年2月16日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ)及其混合物或由它们组成的组;所述组合物应用于治愈性和/或预防性治疗男性人类受试者中选自(i)至(x)的病理和/或疾病。
RP5.如RP3所述应用的组合物,其中所述受试者是女性人类受试者,并且所述细菌菌株和/或其衍生物选自包含下述菌株或由其组成的组:唾液乳杆菌LS 07 DSM 29476(2014年10月9日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ),和/或由长双歧杆菌DLBL 07 DSM25669(2012年2月16日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ)、长双歧杆菌DLBL 08 DSM25670(2012年2月16日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ)、长双歧杆菌DLBL 09 DSM25671(2012年2月16日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ)、长双歧杆菌DLBL 10 DSM25672(2012年2月16日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ)、长双歧杆菌DLBL 11 DSM25673(2012年2月16日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ)组成的混合物(DLBL5S)(优选1:1:1:1:1),以及两种或三种或四种所述细菌菌株和/或其衍生物的混合物;所述组合物应用于治愈性和/或预防性治疗女性人类受试者中选自(i)至(x)的病理和/或疾病。
RP6.如前述RP中任一项所述应用的组合物,其中所述组合物口服施用。
实验部分
本发明人在人类(体内)进行的该体外研究旨在分析不同细菌菌株和/或其衍生物对从患有帕金森病的患者的血液中分离的PBMC(外周血单个核细胞)的活性,以评估微生物对氧化应激和对病理最相关的细胞因子释放的直接作用。发明人进行该体外研究还为了分析唾液乳杆菌LS03(DSM 22776)相对于其他所选细菌菌株的效果。比较在涉及先天和后天免疫应答的主要细胞亚群上进行。从患有帕金森病的受试者的外周血中分离出所述亚群,并将其与健康受试者的亚群进行比较。
表1
在从帕金森病患者中分离的PBMC体外模型中评估微生物对氧化应激以及对细胞
因子谱的调控的作用的含义
材料和方法
细菌菌株和/或其衍生物:参见表1
患有帕金森病(PD)的受试者:
·15例女性和25例男性;
·平均年龄:69.9±8岁
·27例接受左旋多巴的药理治疗的患者(17例男性/10例女性)
·13例未经药理治疗的患者(8例男性/5例女性)
·平均病程:5±4年;从所有受试者中抽取20cc静脉血样品。
·将血液与作为抗凝剂的肝素混合,并在采集当天进行处理。
使用葡聚糖沉淀和Histopaque梯度离心的标准方案,从患有帕金森病的受试者的外周血中分离出外周血单个核细胞(PBMC)。
在该研究中,使用了表1中的波比奥泰克公司保藏的所有细菌菌株,它们在T=37℃在选择性培养基(De Man,Rogosa and Sharpe medium)(对于乳杆菌)和MRS+0.05%半胱氨酸(按重量/总重计)(对于双歧杆菌)中培养。
在PBMC的细胞模型中,通过间接分光光度技术,即超氧化物阴离子测定法(ROS测试),评估了微生物对氧自由基产生的体外影响。
还研究了在与不同的所检查细菌菌株和/或其衍生物温育后,PBMC对最重要的促炎和抗炎细胞因子的体外释放的调节作用,并随后评估了两种细胞因子家族之比(Th1/Th2)。
数据分析和统计评估均采用ANOVA检验进行;对于p<0.05的值,认为数据有显著性。
结果
氧化应激评估
用表1中的细菌菌株对帕金森病患者的单核细胞(1×106个细胞/孔)进行处理24小时。然后使用间接分光光度测试评估细胞色素C的还原,其与作为氧化应激的指示的超氧化物阴离子(O2 -)的产生成正比(图1);图2和3(§=指示极高活性)显示了在源自男性患者(男性)和女性患者(女性)的PBMC上测试的不同细菌菌株和/或其衍生物的活性差异。
评估细胞因子Th1(促炎)和Th2(抗炎)的释放
将从帕金森病患者血液中分离的PBMC用菌株刺激24小时(在37℃和5%CO2温育)。评估促炎细胞因子TNF-α(pro-Th1)和抗炎细胞因子IL-10(pro-Th2)的释放。使用获得的释放值来计算Th1/Th2比率,其指示菌株对促炎或抗炎调节的活性(图4,ANOVA测试,p<0.0001****,NS=不显著)。
图5和6(§=指示极高活性)显示不同微生物对源自男性患者和女性患者的PBMC的活性差异。
结论:17个细菌菌株中有12个以显著方式调节促炎和抗炎细胞因子的释放。
结果的统计分析
在图7的表中,按从“最强”到“最弱”(箭头方向)的顺序列出了菌株;统计分析(回归)针对年龄参数、疾病持续时间、UPDRS(统一帕金森病评分量表)和用左旋多巴治疗进行了校正。
针对以下选择针对男性(M)和女性(F)(一起和分开)测试的细菌菌株:
其对ROS产生的活性(图7中表的第1部分);
其对细胞因子(TH)的活性(图7中表的第2部分)。
结合ROS和TH到中性的总距离(ROS=1且TH=1),然后选择对两种活性都具有较大影响的测试细菌菌株(表的第3部分)。
Claims (7)
1.一种包含混合物的组合物,所述混合物包含有效量的至少一种细菌菌株和/或其至少一种衍生物或者由有效量的至少一种细菌菌株和/或其至少一种衍生物组成,所述组合物应用于治愈性和/或预防性治疗受试者中与至少一种病理相关的症状和/或疾病的方法中,所述病理选自包含以下病理或由其组成的组:(i)由于肠道微生物群失衡引起的病理;(ii)神经退行性病理;(iii)心血管病理,(iv)与免疫系统缺陷相关的病理,(v)与身体衰老和皮肤或真皮老化的生物过程相关的病理,(vi)与导致记忆力和/或专注能力逐渐丧失的生物衰老过程相关的病理,(vii)由氧化应激引起的病理,(viii)自身免疫病理,(ix)炎性病理,和(x)由于肠通透性改变引起的病理,其中所述至少一种细菌菌株属于选自包含乳杆菌属(Lactobacillus)、双歧杆菌属(Bifidobacterium)、乳球菌属(Lactococcus)和链球菌属(Streptococcus)或由它们组成的组中的属,其中所述细菌菌株在治疗男性人类受试者和/或女性人类受试者的方法中发挥靶向的差异化活性,其中,所述组合物用在治疗男性人类受试者或女性人类受试者的方法中,并且其中所述受试者受选自包含(i)至(x)或由其组成的组中的病理所影响。
2.如权利要求1所述应用的组合物,其中,所述至少一种细菌菌株和/或其衍生物属于选自包含以下物种或由其组成的组中的物种:嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、短乳杆菌(Lactobacillus brevis)、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)、德氏乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii)、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)、卷曲乳杆菌(Lactobacillus crispatus)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)、格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)、罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)、唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)、嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)、青春双歧杆菌(Bifidobacterium adolescentis)、两歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum)、乳双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)、短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)、长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)、婴儿双歧杆菌(Bifidobacteriuminfantis)、链状双歧杆菌(Bifidobacterium catenulatum)、假链状双歧杆菌(Bifidobacterium pseudocatenulatum),以及它们的混合物。
3.如权利要求2所述应用的组合物,其中,所述组合物应用于治愈性和/或预防性治疗男性人类受试者中选自包含(i)至(x)或由其组成的组中的病理和/或疾病的方法中,其中所述治疗方法包括向所述受试者施用所述组合物,并且所述至少一种菌株和/或其衍生物选自包含以下菌株或由其组成的组:2009年7月23日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ的唾液乳杆菌LS01 DSM 22775,2001年10月16日由Mofin Srl保藏于BCCM-LMG的植物乳杆菌LP01 LMG P-21021,2012年2月16日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ的罗伊氏乳杆菌DLLRE 09 DSM 25685,2008年8月6日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ的嗜酸乳杆菌LA02 DSM 21717,2008年11月14日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ的鼠李糖乳杆菌LR 06DSM 21981,以及两种或三种或四种所述细菌菌株和/或其衍生物的混合物。
4.如权利要求2所述应用的组合物,其中,所述组合物应用于治愈性和/或预防性治疗女性人类受试者中选自包含(i)至(x)或由其组成的组中的病理和/或疾病的方法中,所述至少一种菌株和/或其衍生物选自包含以下菌株或由其组成的组:2009年7月23日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ的唾液乳杆菌LS01 DSM 22775,2014年10月9日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ的唾液乳杆菌LS 07DSM 29476,2012年6月6日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ的唾液乳杆菌LS 06 DSM 26037,2002年1月31日由Anidral S.r.l.保藏于BCCMLMG的乳双歧杆菌BS01 LMG P-21384,由2012年2月16日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ的长双歧杆菌DLBL 07 DSM 25669、2012年2月16日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ的长双歧杆菌DLBL 08 DSM 25670、2012年2月16日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ的长双歧杆菌DLBL 09 DSM 25671、2012年2月16日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ的长双歧杆菌DLBL 10 DSM 25672、2012年2月16日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ的长双歧杆菌DLBL11 DSM 25673菌株组成的、比例优选为1:1:1:1:1的混合物DLBL5S,以及两种或三种或四种所述细菌菌株和/或其衍生物的混合物。
5.如权利要求3所述应用的组合物,其中,所述受试者是男性人类受试者,并且所述细菌菌株和/或其衍生物选自包含2001年10月16日由Mofin Srl保藏于BCCM-LMG的植物乳杆菌LP01 LMG P-21021、2012年2月16日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ的罗伊氏乳杆菌DLLRE 09 DSM 25685及其混合物或由它们组成的组;所述组合物应用于治愈性和/或预防性治疗男性人类受试者中选自包含(i)至(x)或由其组成的组中的病理和/或疾病的方法中。
6.如权利要求4所述应用的组合物,其中,所述受试者是女性人类受试者,并且所述细菌菌株和/或其衍生物选自包含下述菌株或由其组成的组:2014年10月9日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ的唾液乳杆菌LS 07 DSM 29476,由2012年2月16日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ的长双歧杆菌DLBL 07 DSM 25669、2012年2月16日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ的长双歧杆菌DLBL 08 DSM 25670、2012年2月16日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ的长双歧杆菌DLBL 09 DSM 25671、2012年2月16日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ的长双歧杆菌DLBL 10 DSM 25672、2012年2月16日由波比奥泰克股份公司保藏于DSMZ的长双歧杆菌DLBL 11 DSM 25673菌株组成的、比例优选为1:1:1:1:1的混合物(DLBL5S),以及它们的混合物;所述组合物应用于治愈性和/或预防性治疗女性人类受试者中选自包含(i)至(x)或由其组成的组中的病理和/或疾病的方法中。
7.如前述权利要求中任一项所述应用的组合物,其中,所述组合物口服施用。
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Legal Events
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PB01 | Publication | ||
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication | ||
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Application publication date: 20200317 |