CN110891423B - 包含生物碱的组合物及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供了包含黑麦草碱生物碱的组合物、包括杀虫组合物，制备组合物的方法，以及组合物的用途、包括作为控制剂的用途。还提供了用于控制害虫、包括植物或动物害虫的方法，以增强植物生长或繁殖，以及治疗和预防例如植物或动物中的昆虫感染和侵染。

Description

包含生物碱的组合物及其用途

技术领域

本发明总体上涉及生物学领域，更具体地涉及包含黑麦草碱(loline)生物碱的组合物、包括农药组合物，制备组合物的方法，以及组合物的用途、包括作为控制剂的用途。还提供了用于控制包括植物或动物害虫的害虫，和用于增强植物生长或繁殖以及治疗和预防例如植物或动物中的昆虫感染和侵染的方法。

背景技术

黑麦草碱生物碱在禾本科植物感染期间或在真菌、特别是绢丝草包鞘病菌

属(按照命名重新排列，现在包括先前分离的无性型内生真菌属种)的无性培养中共生产生。

根据申请人的知识，没有关于在农业、园艺、医学或兽医领域中成功使用包含黑麦草碱生物碱作为杀虫剂的组合物的报道。

本发明的目的是提供包含黑麦草碱生物碱、特别是N-甲酰基黑麦草碱的组合物，其具有良好的稳定性，满足这种需要或者至少为公众提供有用的选择。

本发明的其它目的可以从以下仅作为示例给出的描述中变得显而易见。

发明内容

一方面，本发明提供一种组合物，其包含至少约10g/L的一种或多种具有式[I]结构的黑麦草碱生物碱：

其中R＝H或CH₃且R'＝H、CH₃、CHO或COCH₃，所述一种或多种黑麦草碱生物碱包含具有式[II]结构的N-甲酰基黑麦草碱：

和一种或多种溶剂；其中

a)所述组合物的总羟基和含氮基团与N-甲酰基黑麦草碱的摩尔比小于约20，或

b)所述组合物的总羟基和含氮基团与N-甲酰基黑麦草碱的摩尔比大于约20，并且其中所述组合物的羟基或含氮基团的亲核性系数小于约0.6eV；

其中所述含氮基团选自氨、伯胺基、仲胺基或其混合物。

另一方面，本发明提供了包含具有式[II]结构的N-甲酰基黑麦草碱(NFL)的组合物：

和一种或多种溶剂；其中

a)所述组合物中总羟基和含氮基团与N-甲酰基黑麦草碱的摩尔比等于或小于约20；或者

b)组合物中总羟基和含氮基团与N-甲酰基黑麦草碱的摩尔比大于约10或约20，优选小于约40、约35或约30，并且组合物中羟基和含氮基团的亲核性系数小于约0.6eV、优选0.55eV、更优选小于约0.5eV，其中所述含氮基团选自氨、伯胺基、仲胺基或其任何两种或更多种的组合。

在一个实施方案中，组合物中总羟基和含氮基团与N-甲酰基黑麦草碱的摩尔比等于或小于约20、19、18、17、16、15、14、13、12、11或10，并且有用的范围可以在这些值中的任一个之间选择。

在一个实施方案中，组合物中总羟基和含氮基团与N-甲酰基黑麦草碱的摩尔比大于约20，优选小于约40、约35或约30，并且组合物中羟基和含氮基团的亲核性系数小于约0.55eV，优选小于约0.5eV。

在一个实施方案中，组合物中总羟基和含氮基团与N-甲酰基黑麦草碱的摩尔比大于约20，优选小于约40、约35或约30，并且一种或多种溶剂的羟基和含氮基团的亲核性系数小于约0.3eV。

在一个实施方案中，组合物中总羟基和含氮基团与N-甲酰基黑麦草碱的摩尔比大于约10，优选小于约40、35、30、25或20，并且一种或多种溶剂的羟基或含氮基团的亲核性系数小于约0.3eV。

在一个实施方案中，组合物是水性的。在另一个实施方案中，组合物是水性的，并且一种或多种溶剂的羟基或含氮基团的亲核性系数小于约0.6eV、优选小于约0.55eV、优选小于约0.5eV。

在一个实施方案中，当在20℃(1atm)下储存至少两年时，存在于组合物中的N-甲酰基黑麦草碱的浓度降低小于约10％。在另一个实施方案中，当在54℃(1atm)下储存至少两周时，存在于组合物中的N-甲酰基黑麦草碱的浓度降低小于约10％。

另一方面，本发明提供了包含具有式[II]结构的N-甲酰基黑麦草碱的组合物。

和一种或多种溶剂，其中当在20℃(在1atm)下储存至少两年时，存在于组合物中的N-甲酰基黑麦草碱的浓度降低小于约10％。

另一方面，本发明提供一种组合物，其包含至少约10g/L的一种或多种具有式[I]结构的黑麦草碱生物碱：

其中R＝H或CH₃且R'＝H、CH₃、CHO或COCH₃，所述一种或多种黑麦草碱生物碱包含至少部分纯化或分离的具有式[II]结构的N-甲酰基黑麦草碱：

和一种或多种溶剂，

其中当在54℃(在1atm)下储存至少两周时，存在于组合物中的N-甲酰基黑麦草碱的浓度降低小于约10％。

在各种实施方案中，存在于组合物中的N-甲酰基黑麦草碱的浓度降低小于约10％，例如当在20℃(在1atm)下储存至少两年，在35℃下储存至少12周，在40℃下储存至少8周，或在54℃下储存至少两周时。

在一个实施例中，

a)所述组合物的总羟基和含氮基团与N-甲酰基黑麦草碱的摩尔比小于约20，或

b)所述组合物的总羟基和含氮基团与N-甲酰基黑麦草碱的摩尔比大于20，并且其中所述组合物的羟基或含氮基团的亲核性系数小于0.55eV；

其中所述含氮基团选自氨、伯胺基、仲胺基或其混合物。

以下实施方案中的任何一个或多个可以任何组合涉及本文、以上或以下的任何方面。

在一个实施方案中，所述组合物还包含一种或多种式[I]的黑麦草碱生物碱：

其中R＝H或CH₃且R'＝H、CH₃、CHO或COCH₃。

更具体地，式[I]包括：

1)黑麦草碱，其中R＝CH₃且R'＝H的；

2)去甲黑麦草碱，其中R＝H且R'＝H；

3)N-甲基黑麦草碱，其中R＝CH₃且R'＝CH₃；

4)N-甲酰基黑麦草碱，其中R＝CH₃且R'＝CHO；

5)N-甲酰基去甲黑麦草碱，其中R＝H且R'＝CHO；

6)N-乙酰基黑麦草碱，其中R＝CH₃且R'＝COCH₃；以及

7)N-乙酰基去甲黑麦草碱，其中R＝H且R'＝COCH₃。

在各种实施方案中，所述组合物包含一种或多种选自由以下组成的组：黑麦草碱，去甲黑麦草碱，N-乙酰基黑麦草碱(NAL)、N-甲酰基黑麦草碱(NFL)、N-乙酰基去甲黑麦草碱(NANL)和N-甲基黑麦草碱(NML)、N-甲酰基去甲黑麦草碱，或其任何两种或更多种的组合。在一个实施方案中，所述组合物包含N-乙酰基黑麦草碱(NAL)，N-甲酰基黑麦草碱(NFL)和N-乙酰基去甲黑麦草碱(NANL)。在特别优选的实施方案中，所述组合物包含N-乙酰基黑麦草碱(NAL)、N-甲酰基黑麦草碱(NFL)、N-乙酰基去甲黑麦草碱(NANL)和黑麦草碱。

在一个实施方案中，一种或多种黑麦草碱生物碱中的一种或多种是至少部分纯化或分离的。

在一个实施方案中，N-甲酰基黑麦草碱是至少部分纯化或分离的。

在一个实施方案中，组合物包含至少约5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、2000、3000、4000、5000、6000或7000g/L的具有式[II]的结构的N-N-甲酰基黑麦草碱，并且有用的范围可以在任何这些值之间选择(例如，约5至约7000、约5至约700、约10至约700、约10至约7000、约50至约500、约50至约7000、约100至约300、约100至约7000、约500至约700或约500至约7000g/L)。

在一个实施方案中，组合物包含至少约0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、60或70％w/w具有式[II]结构的N-甲酰基黑麦草碱：并且有用的范围可以在任何这些值之间选择(例如，约0.05至约70、约1至约70、约1至约50、约5至约50、约10至约30、或约50至约70％)。

在一个实施方案中，所述组合物包含至少约10、20、40、50、60、70、80、90、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、2000、3000、4000、5000、6000或7000g/L的一种或多种具有式[I]结构的黑麦草碱生物碱，并且有用的范围可以在任何这些值之间选择(例如，约10至约7000、约10至约700、约50至约7000、约50至约500、约100至约7000、约100至约300、约500至约7000、或约500至约700g/L)。

在一个实施方案中，组合物包含至少约0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、60、或70％w/w的具有式[I]结构的黑麦草碱生物碱，并且有用的范围可以在任何这些值之间选择(例如，约0.1至约70、约1至约70、约1至约50、约5至约50、约10至约30、约50至约70％)。

在各种实施方案中，所述组合物可以包含至少约5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、60或70％w/w的式[I]的黑麦草碱生物碱的黑麦草碱生物碱组合物，并且有用的范围可以在任何这些值之间选择(例如，约5至约70、约5至约50、约10至约30、约50至约70％w/w)。在该实施方案中，黑麦草碱生物碱组合物可以包含至少约20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、99或100％w/w的式[I]的黑麦草碱生物碱，并且有用的范围可以在任何这些值之间选择(例如，约20至约100、约30至约100％、约40至约100％、约50至约100％、或约60至约100％w/w)。式[I]的单独的黑麦草碱生物碱的相对量可以包括以上和以下讨论的量。优选地，式[I]的黑麦草碱生物碱是N-乙酰基去甲黑麦草碱(NANL)、N-甲酰基黑麦草碱(NFL)和N-乙酰基黑麦草碱(NAL)。更优选地，式[I]的黑麦草碱生物碱是N-甲酰基黑麦草碱。

在一个实施方案中，具有式[II]结构的N-甲酰基黑麦草碱和/或具有式[I]结构的一种或多种黑麦草碱生物碱基本上是纯的。例如，一种或多种黑麦草碱生物碱基本上是纯的。在一个实例中，一种或多种黑麦草碱生物碱来自非合成来源，例如，一种或多种来自非合成来源的基本上纯的黑麦草碱生物碱。

在一个实施方案中，组合物基本上不含非黑麦草植物或真菌衍生的化合物或材料。

在一个实施方案中，所述组合物基本上由N-甲酰基黑麦草碱，任选地与一种或多种式[I]的黑麦草生物碱和一种或多种溶剂一起组成。在另一个实施方案中，所述组合物由N-甲酰基黑麦草碱，任选地连同一种或多种式[I]的黑麦草碱生物碱和一种或多种溶剂组成。在另一个实施方案中，所述组合物包含N-甲酰基黑麦草碱作为活性成分，任选地与一种或多种式[I]的黑麦草碱生物碱和一种或多种溶剂一起。

在各种实施方案中，所述组合物包含具有式[III]结构的N-乙酰基黑麦草碱(NAL)：

在各种实施方案中，所述组合物包含具有式[IV]结构的N-乙酰基去甲黑麦草碱(NANL)：

在各种实施方案中，所述组合物包含具有式[V]结构的黑麦草碱：

在一个实施方案中，所述一种或多种黑麦草碱生物碱占所述组合物的至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、60或70％w/w，并且所述组合物包含两种或更多种黑麦草碱生物碱，例如两种或更多种、或三种或更多种黑麦草碱生物碱，其选自N-乙酰基黑麦草碱(NAL)、N-甲酰基黑麦草碱(NFL)、N-乙酰基去甲黑麦草碱(NANL)和黑麦草碱。

在另一个实施方案中，本发明提供了包含一种或多种黑麦草碱生物碱的组合物，其中所述一种或多种黑麦草碱生物碱具有大于约95％纯度的纯度。在一个实施方案中，一种或多种黑麦草碱生物碱具有大于约96％纯度、大于约97％纯度、大于约98％纯度、大于约99％纯度或大于约99.5％纯度的纯度。

在一个实施方案中，组合物中的一种或多种黑麦草碱生物碱具有大于约95％纯度的纯度，并且组合物包含两种或多种黑麦草碱生物碱，例如两种或更多种或三种或更多种选自包含以下的组的黑麦草碱生物碱：N-乙酰基黑麦草碱(NAL)、N-甲酰基黑麦草碱(NFL)、N-乙酰基去甲黑麦草碱(NANL)和黑麦草碱。

在各种实施方案中，组合物或提取物中的[NFL]:[NAL]的重量比小于约20:1、约18:1、约17:1、约16:1、15:1、约14:1、约13:1、约12:1、约11:1、约10:1、约9:1、约8:1、约7:1、约6:1、约5:1、约4:1、约3:1、约2:1、或约1:1，并且有用的范围可以在任何这些值之间选择(例如，约20:1至约1:1、约15:1至约1:1、约12:1至约2:1、约10:1至约2:1、约8:1至约2:1、或约6:1至约2:1)。在一个实施方案中，[NFL]:[NAL]的重量比为约4:1或约5:1。

在各种实施方案中，组合物或提取物中的[NANL]:[NFL]的重量比大于约1:20、约1:19、约1:18、约1:15、约1:12、约1:10、约1:8、约1:6、约1:5、约1:4、约1:2或约1:1，并且有用的范围可以在任何这些值之间选择(例如，约1:20至约1:1、约1:15至约1:1、约1:12至约1:1、约1:10至约1:1、约1:8至约1:1、或约1:8至约1:2)。在一个实施方案中，[NANL]:[NFL]的重量比为约1:8。在一个实施方案中，[NANL]:[NFL]的重量比为约1:2。

在各种实施方案中，组合物或提取物中的[NANL]:[NAL]的重量比大于约1:10、约1:8、约1:6、约1:4、约1:3、约1:2、约2:3、约1:1、约3:2、约2:1、约4:1、约6:1、约8:1、或约10:1，并且有用的范围可以在任何这些值之间选择(例如，约1:10至约10:1、约1:8至约8:1、约1:6至约6:1、约1:4至约4:1、约2:3至约3:2、约1:2至约2:1、约1:3至约1:1、或约1:2至约2:3)。在一个实施方案中，[NANL]:[NAL]的重量比为约2:3。在一个实施方案中，[NANL]:[NAL]的重量比为约1:2。在一个实施方案中，[NANL]:[NAL]的重量比为约2:1。

在各种实施方案中，组合物或提取物中[NANL]:[NFL]:[NAL]的重量比为约1:12:1至约2:5:3，例如约1:12:1至约1:4:1，或约4:12:1至约4:5:1，或约1:12:4至约1:5:4。在一个实施方案中，[NANL]:[NFL]:[NAL]的重量比为约2:12:3。

在一个实施方案中，组合物或提取物中[NANL]:[NFL]:[NAL]的重量比为约1:8:2。在另一个实施方案中，组合物或提取物中[NANL]:[NFL]:[NAL]为2:4:1或1:5:1。

在各种实施方案中，NANL占组合物中总黑麦草碱生物碱重量的约1％、3％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、12％、14％或约15％，并且有用的范围可以在任何这些值之间选择(例如按重量计约1％至约15％、约2％至约12％、约5％至约12％、或约5％至约10％)。

在一个实施方案中，组合物中主要的黑麦草碱生物碱是NFL。在各种实施方案中，按重量计，NFL占组合物中总黑麦草碱生物碱的约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％或约90％，并且有用的范围可以在任何这些值之间选择(例如，按重量计约50％至约90％、约60％至约85％、约65％至约80％、或约70％至约80％)。

在多个实施方案中，按重量计，NAL占组合物中总的黑麦草碱生物碱的约4％、5％、7.5％、10％、12％、13％、14％、15％、17.5％、20％、25％或约30％，并且有用的范围可以在任何这些值之间选择(例如，按重量计约4％至约30％、约5％至约25％、约10％至约25％、或约10％至约20％)。

在各种实施方案中，按重量计，黑麦草碱占黑麦草碱生物碱总重量的约0.5％、1％、1.5％、2％、2.5％、3％、3.5％、4％、4.5％、5％、6％、7％、8％、9％或约10％，并且有用的范围可以在任何这些值之间选择(例如，按重量计约0.5％至约10％、约0.5％至约5％、约1％至约5％、或约1％至约4％)。

在各种实施方案中，所述组合物包含约10、15、20、22.5、25、27.5、30、35或约40mg/g的NANL，并且有用的范围可以在任何这些值之间选择(例如，约10至约40mg/g，约15至约30mg/g，约20至约30mg/g，或约20至约25mg/g)。

在各种实施方案中，组合物包含约100、110、120、130、140、150、160、170、180、185、190、195、200、205、210、220、230、240或约250mg/g的NFL，并且有用的范围可以在任何这些值之间选择(例如，约100至约250mg/g、约150至约220mg/g、约180至约210mg/g、或约185至约200mg/g)。

在各种实施例中，组合物包含约10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70或约75mg/g NAL，并且有用的范围可以在任何这些值之间选择(例如，约10至约75mg/g、约25至约60mg/g、约30至约50mg/g、或约30至约45mg/g)。

在各种实施方案中，所述组合物包含约1、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、7.5、8、8.5、9、9.5或约10mg/g的黑麦草碱，并且有用的范围可以在任何这些值之间选择(例如，约1至约10mg/g、约2.5至约10mg/g、约4至约10mg/g、或约5至约8mg/g)。

在一个实施方案中，所述组合物包含一种或多种黑麦草碱生物碱作为唯一的农药成分。在另一个实施方案中，所述组合物包含一种或多种黑麦草碱生物碱作为唯一的杀虫成分。在另一个实施方案中，所述组合物包含一种或多种黑麦草碱生物碱作为唯一的活性成分。

在一个实施方案中，所述组合物包含N-甲酰基黑麦草碱作为唯一的农药成分。在另一个实施方案中，所述组合物包含N-甲酰基黑麦草碱作为唯一的杀虫成分。在另一个实施方案中，所述组合物包含N-甲酰基黑麦草碱作为唯一的活性成分。

在一个实施方案中，所述组合物不包含氟啶虫酰胺或噻虫嗪。

在另一个实施方案中，组合物的总羟基与N-甲酰基黑麦草碱的摩尔比小于约20、小于约18、小于约16、小于约14、小于约12或小于约10。

在另一个实施方案中，组合物的总含氮基团与N-甲酰基黑麦草碱的摩尔比小于约20、小于约18、小于约16、小于约14、小于约12或小于约10。

在各种实施方案中，羟基选自水、醇羟基、羧酸羟基或其混合物。在某些实施方案中，羟基选自水、醇羟基或其混合物。在某些示例性实施方案中，羟基选自醇羟基。

在另一个实施方案中，一种或多种溶剂占组合物的至少约10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90或99％w/w，并且有用的范围可以在任何这些值之间选择(例如，约10至约99、约30至约99、约40至约99、约60至约99、或约80至约99％w/w)。

在各种实施方案中，一种或多种溶剂可以是一种或多种有机溶剂。

在一个实施方案中，一种或多种溶剂是无味的或基本上无味的，具有低闪点，具有低可燃性，和/或基本上可溶于水。

在一个实施方案中，一种或多种溶剂是非植物毒性的，对人和非人动物是无毒的，和/或可生物降解的。

在一个实施方案中，一种或多种溶剂可以各自具有大于约80℃的沸点，例如大于约85、90、95、100、110、120、130、140、150或160℃。在另一个实施方案中，一种或多种溶剂可以各自具有大于约160℃的沸点。

在一个实施方案中，一种或多种溶剂选自包含以下的组：醇、酮、酯、醚、碳酸酯、胺、酰胺、腈、亚砜和砜。在一个实施方案中，一种或多种溶剂选自包含以下的组：醇、酮、酯、醚、碳酸酯、酰胺、腈和亚砜。

在一个实施方案中，一种或多种溶剂可以选自包含以下的组：二醇或其醚或酯。在一个实施方案中，一种或多种溶剂可以选自包含以下的组：二醇或醚。在一个实施方案中，一种或多种溶剂可以选自包含以下的组：二醇。

在一个实施方案中，二醇或其醚或酯可以是聚亚烷基二醇或其醚或酯。在一个实施方案中，聚亚烷基二醇或其醚或酯可以具有式R¹⁰O-[(C_1-6亚烷基)O]_x-R¹，其中R¹和R¹⁰各自独立地选自氢、脂族基团、脂环族基团、酰基、芳基或芳脂族基团，并且x是2至140的整数。在一些实施方案中，R¹⁰和R¹各自独立地选自氢，C_1-6烷基、酰基、芳基或芳烷基，并且x是2至140的整数。在一些实施方案中，x为2至10、2至20、2至30、2至40、2至50、2至60、2至70、2至80、2至90或2至100的整数。在优选的实施方案中，聚亚烷基二醇或其醚或酯具有式HO-[(C_1-6亚烷基)O]_x-R¹。在优选的实施方案中，聚亚烷基二醇或其醚或酯具有式HO-[(C_2-4亚烷基)O]_x-R¹。在一些实施方案中，聚亚烷基二醇或其醚或酯可以是聚乙二醇或聚丙二醇或其醚或酯。在优选的实施方案中，聚亚烷基二醇或其醚或酯是聚乙二醇或其醚或酯。预期各种分子量的聚乙二醇及其醚或酯用作本文所述的溶剂。例如，考虑分子量为100-6000的聚乙二醇或醚或其酯，例如PEG100、PEG200、PEG300、PEG400、PEG500、PEG1000、PEG5000和PEG6000。在一个实施方案中，聚乙二醇或其醚或酯的分子量可以为100-5000、100-1000、100-500、200-1000或200-500。在一个实施方案中，聚亚烷基二醇或其醚或酯可以是聚乙二醇单甲醚，例如MPEG350或MPEG550。在一个实施方案中，聚乙二醇单甲醚的分子量为100-5000、100-1000、100-700、200-1000、200-700或200-600。在一个实施方案中，聚亚烷基二醇或其醚或酯可以是二丙二醇甲基醚(例如DOWANOL^TM DPM)。在一个实施方案中，二醇或其醚可以是聚亚烷基二醇或其醚。在一个实施方案中，二醇可以是聚亚烷基二醇。

在一个实施方案中，二醇或其醚或酯可以是式R¹⁰O-[(C_1-6亚烷基)O]_x-R¹的聚亚烷基二醇或其醚或酯，其中R¹⁰选自氢、C_1-6烷基、酰基、芳基和芳烷基，并且R¹选自C_1-6烷基和酰基，并且x是4至140的整数。在一些实施方案中，x为4至10、4至20、4至30、4至40、4至50、4至60、4至70、4至80、4至90或4至100的整数。在优选的实施方案中，聚亚烷基二醇或其醚或酯具有式HO-[(C_1-6亚烷基)O]_x-R¹。在优选的实施方案中，聚亚烷基二醇或其醚或酯具有式HO-[(C_2-4亚烷基)O]_x-R¹。在一个实施方案中，聚亚烷基二醇或其醚或酯可以是聚乙二醇单甲醚，例如MPEG350或MPEG550。在一个实施方案中，聚亚烷基二醇或醚或酯是MPEG550。

在一个实施方案中，二醇或其醚或酯可以是单亚烷基二醇或其醚或酯。在一个实施方案中，单亚烷基二醇或其醚或酯可以具有式R²⁰O-(C_1-6亚烷基)O-R²，其中R²⁰和R²各自独立地选自氢、脂族基团、脂环族基团、酰基、芳基或芳脂族基团。在一些实施方案中，R²⁰和R²各自独立地选自氢、C_1-6烷基、酰基、芳基或芳烷基。在优选的实施方案中，单亚烷基二醇或其醚或酯具有式HO-(C_1-6亚烷基)O-R²。在优选的实施方案中，单亚烷基二醇或其醚或酯具有式HO-(C_2-4亚烷基)O-R²。在进一步优选的实施方案中，单亚烷基二醇或其醚或酯可以是乙二醇或丙二醇或其醚或酯，优选乙二醇或其醚或酯。在优选的实施方案中，R²可以是苯基或苄基。在优选的实施方案中，单亚烷基二醇或其醚或酯可以是乙二醇苯基醚(例如DOWANOL^TM EPH)。在一个实施方案中，二醇或其醚可以是单亚烷基二醇或其醚。在一个实施方案中，二醇可以是单亚烷基二醇。

在一个实施方案中，胺具有式R²⁵R²⁶R²⁷N，其中R²⁵、R²⁶和R²⁷各自独立地选自氢或脂族基团，或者R²⁶和R²⁷与它们所连接的氮原子一起形成5-8元杂环基环，其可以包含另外的杂原子。在一个实施方案中，胺具有式R²⁵R²⁶R²⁷N，其中R²⁵、R²⁶和R²⁷各自独立地选自氢或C_1-6烷基，或R²⁶和R²⁷与它们所连接的氮原子一起形成5至8元杂环基环，其可以包含另外的杂原子。在一些实施方案中，R²⁵、R²⁶和R²⁷各自独立地选自氢或C_1-6烷基。在一些实施方案中，R²⁵为氢或C_1-6烷基，R²⁶和R²⁷与它们所连接的氮原子一起形成5至8元杂环基环，其可包含另外的杂原子。

在一个实施方案中，胺可以是多胺，例如二胺。在一个实施方案中，胺可以是单亚烷基二胺。在一个实施方案中，所述单亚烷基二胺可以具有式R³¹NH-(C_1-6亚烷基)NR³⁰-R³²，其中R³¹和R³²各自独立地选自氢、脂族基团、脂环族基团、酰基、芳基或芳脂族基团，并且R³⁰选自氢或脂族基团。在一些实施方案中，R³¹和R³²各自独立地选自氢、C_1-6烷基、芳基或芳烷基，并且R³⁰选自氢或C_1-6烷基。在优选的实施方案中，单亚烷基二胺具有式NH₂-(C_1-6亚烷基)NH-R³²。在优选的实施方案中，单亚烷基二胺具有式NH₂-(C_2-4亚烷基)NH-R³²。

合适的酰胺描述于WO2007/107745中，其全部内容通过引用并入本文。在一个实施方案中，酰胺可以具有式CH₃CH(OH)C(＝O)NR³R⁴，其中R³和R⁴各自独立地选自氢、C_1-6烷基、C_2-6烯基或C_3-6环烷基，其各自任选地被至多三个取代基取代，所述取代基独立地选自苯基、羟基、C_1-5烷氧基、吗啉基和NR⁵R⁶，其中R⁵和R⁶各自独立地选自C_1-3烷基，或任选被至多三个独立地选自C_1-3烷基的取代基取代的苯基；或者R³和R⁴与它们所连接的氮原子一起形成吗啉基、吡咯烷基、哌啶基或氮杂环庚烷基环，其各自任选被至多三个各自独立地选自C_1-3烷基的取代基取代。在一些实施方案中，R³和R⁴各自独立地选自氢、C_1-6烷基或C_2-6烯基。在进一步的实施方案中，R³和R⁴各自独立地选自氢或C_1-6烷基。在优选的实施方案中，R³和R⁴各自独立地选自C_1-6烷基。在优选的实施方案中，酰胺可以是二甲基乳酰胺(DMLA)。

在一个实施方案中，酮可以具有式R⁷C(＝O)R⁸，其中R⁷和R⁸可以各自独立地选自脂族、脂环族、芳基或芳脂族。在一些实施方案中，R⁷和R⁸各自独立地选自C_1-6烷基、芳基或芳烷基。在一些实施方案中，R⁷和R⁸可以各自独立地选自C_1-6烷基或芳基。在优选的实施方案中，R⁷可以是C_1-6烷基，且R⁸可以是芳基。在优选的实施方案中，酮可以是苯乙酮。

在一个实施方案中，一种或多种溶剂可以是脂族醇、或其醚或酯。在一个实施方案中，脂族醇或其醚或酯可以具有式R⁴⁰OR⁴¹，其中R⁴⁰可以是脂族的、优选C_1-6烷基，并且R⁴¹可以是氢，脂族的、优选C_1-6烷基，或酰基。

在一个实施方案中，醇可以是脂环族醇。在一个实施方案中，脂环族醇可以是C_5-8环烷基醇。在一些实施方案中，脂环族环被1至3个羟基取代。在一些实施方案中，脂环族醇可以是被1至3个羟基取代的C_5-7环烷基，优选C_5-6环烷基。在优选的实施方案中，脂环族醇可以是环己醇。

在一个实施方案中，醇可以是芳族醇。在一个实施方案中，芳族醇可以具有式芳基脂族-OH。在一些实施方案中，芳族醇具有式芳基烷基-OH。在优选的实施方案中，芳族醇可以是苯甲醇。

在一个实施方案中，一种或多种溶剂可以是三醇或其醚、酯或碳酸酯。在一个实施方案中，一种或多种溶剂可以是亚烷基三醇或其醚、酯或碳酸酯，例如C_3-5亚烷基三醇或其醚、酯或碳酸酯，例如单酯、二酯或三酯。在一些实施方案中，三醇或其醚、酯或碳酸酯是甘油或其醚、酯或碳酸酯。在一些实施方案中，三醇或其醚、酯或碳酸酯具有式R⁷⁰OCH₂CH(OR⁷¹)CH₂OR⁷²，其中R⁷⁰、R⁷¹和R⁷²各自独立地选自氢、脂族基团、脂环族基团、芳基、芳基脂族基团、酰基，或R⁷¹和R⁷²与它们所连接的氧一起形成5元环。在一些实施方案中，R⁷⁰、R⁷¹和R⁷²各自独立地选自氢、C_1-6烷基或酰基。在一些实施方案中，酰基具有式C_1-20C(O)，例如乙酰基。在一些实施方案中，三醇的碳酸酯是环状碳酸酯。在一个实施方案中，三醇的醚是缩醛。在一些实施方案中，R⁷¹和R⁷²与它们所连接的氧一起形成5元环。在一些实施方案中，三醇的醚、酯或碳酸酯是三醇的醚、酯或碳酸酯，其中三醇的羟基中的至少一个不是醚、酯或碳酸酯的形式(即，羟基中的至少一个是游离羟基)。优选地，R⁷⁰、R⁷¹和R⁷²中的至少一个是氢。在一些实施方案中，R⁷⁰为氢。在优选的实施方案中，一种或多种溶剂是碳酸甘油酯。

在一个实施方案中，酯可以是单酯、二酯或三酯。在一个实施方案中，二酯可以是二羧酸酯的二酯。在一个实施方案中，三酯可以是三羧酸酯的三酯。在一个实施方案中，酯可以是α-羟基酯。在一个实施方案中，单酯或二酯可以是α-羟基酯。

在一个实施方案中，单酯可以具有式R⁷⁷C(O)OR¹⁷，其中R⁷⁷和R¹⁷各自独立地选自脂族、脂环族、芳基或芳脂族基团，其各自可以任选地被一个或多个羟基取代。在一个实施方案中，R⁷⁷和R¹⁷各自独立地选自C_1-12烷基、芳基或芳烷基，其各自可任选被一个或多个羟基取代。在优选的实施方案中，R¹⁷是C_1-12烷基。在一些实施方案中，R⁷⁷是脂环族基团、芳基或芳脂族基团，优选芳基。在优选的实施方案中，单酯可以是苯甲酸丁酯。在一些实施方案中，R⁷⁷为任选被一个或多个羟基取代的C_1-6烷基。在一个实施方案中，单酯是CH₃CH(OH)C(＝O)OR¹⁷。在优选的实施方案中，单酯可以是乳酸酯的酯，例如乳酸甲酯、乳酸乙酯、乳酸正丙酯、乳酸正丁酯或乳酸2-乙基己酯(以商品名

销售)。

在一个实施方案中，二酯可以具有式R¹⁹OC(O)C_1-6烷基C(O)OR¹⁸，其中R¹⁹和R¹⁸各自独立地选自脂族、脂环族、芳基或芳脂族基团。在一个实施方案中，R¹⁹和R¹⁸各自独立地选自C_1-6烷基、芳基或芳烷基。在优选的实施方案中，R¹⁹和R¹⁸各自独立地选自C_1-6烷基。在优选的实施方案中，酯可以是己二酸、戊二酸和琥珀酸的二酯，例如琥珀酸二甲酯、己二酸二甲酯和戊二酸二甲酯(例如Estasol^TM)，

在一个实施方案中，三酯可以具有下式：

其中R¹⁰、R¹¹和R²²可各自独立地为脂族环脂族基、芳基或芳脂族基团，且R²¹可为氢或羟基。在一个实施方案中，R¹⁰、R¹¹和R²²可以各自独立地选自C_1-6烷基、芳基或芳烷基。在优选的实施方案中，R¹⁰、R¹¹和R²²可以各自独立地为C_1-6烷基。在优选的实施方案中，三酯可以是柠檬酸三乙酯。

在一个实施方案中，腈可以具有式R¹²-CN，其中R¹²可以是脂族、脂环族、芳基或芳脂族基团。在一个实施方案中，R¹²可以是C_1-6烷基、芳基或芳烷基。在一个实施方案中，R¹²可以是C_1-6烷基。在优选的实施方案中，腈是乙腈。

在一个实施方案中，亚砜可以具有式R¹³S(O)R¹⁴，其中R¹³和R¹⁴可以各自独立地为脂族、脂环族、芳基、芳基脂族。在一些实施方案中，R¹³和R¹⁴各自独立地选自C_1-6烷基、芳基或芳烷基。在优选的实施方案中，R¹³和R¹⁴可以各自独立地为C_1-6烷基。在优选的实施方案中，亚砜可以是二甲亚砜。

在一个实施方案中，砜可以具有式R¹⁵SO₂R¹⁶，其中R¹⁵和R¹⁶可以各自独立地为脂族、脂环族、芳基或芳脂族基团。在一些实施方案中，R¹⁵和R¹⁶各自独立地选自C_1-6烷基、芳基或芳烷基。在优选的实施方案中，R¹⁵和R¹⁶可以各自独立地为C_1-6烷基。

在一个实施方案中，所述一种或多种溶剂选自包含以下的组：

a)式R¹⁰O-[(C_1-6亚烷基)O]_x-R¹的聚亚烷基二醇、或其醚或酯，例如聚亚烷基二醇、或其醚或酯，

b)单亚烷基二醇、或其醚或酯，例如式R²⁰O-(C_1-6烷基)O-R²的单亚烷基二醇、或其醚或酯，

c)式R²⁵R²⁶R²⁷N的胺，

d)单亚烷基二胺，例如式R³¹NH-(C_1-6亚烷基)NR³⁰-R³²的单亚烷基二胺，

e)式CH₃CH(OH)C(＝O)NR³R⁴的酰胺，

f)酮，例如式R⁷C(＝O)R⁸的酮，

g)脂族醇，例如式R⁴⁰OR⁴¹的脂族醇，

h)脂环族醇，

i)芳族醇，

j)三醇或其醚、酯或碳酸酯，例如式R⁷⁰OCH₂CH(OR⁷¹)CH₂OR⁷²的三醇或其醚、酯或碳酸酯，

k)单酯，例如式R⁷⁷C(O)OR¹⁷的单酯，

l)二酯，例如式R¹⁹OC(O)C_1-6烷基C(O)OR¹⁸的二酯，

m)三酯，例如式

的三酯：

n)腈，例如式R¹²-CN的腈，

o)亚砜，例如式R¹³S(O)R¹⁴的亚砜，

p)砜类，例如式R¹⁵SO₂R¹⁶的砜类，或

q)以上a)至p)中的任何两个或更多个，

其中上述式中的每个变量如本文所定义的任何实施方案中所定义使用。

在各种实施方案中，所述一种或多种溶剂可以选自包含以下的组：二甲基乳酰胺、二丙二醇甲醚、乙二醇苯基醚、苯乙酮、环己醇、聚乙二醇、聚乙二醇甲醚、琥珀酸二甲酯、戊二酸二甲酯、己二酸二甲酯、苯甲酸丁酯、柠檬酸三乙酯、甘油、碳酸甘油酯、乙二醇、丙二醇、二甲亚砜、苯甲醇和乙腈，或其任意两种或更多种的任意组合。

在各种实施方案中，所述一种或多种溶剂可以选自包含以下的组：二甲基乳酰胺、二丙二醇甲醚、乙二醇苯基醚、苯乙酮、环己醇、聚乙二醇、聚乙二醇甲醚、琥珀酸二甲酯、戊二酸二甲酯、己二酸二甲酯、苯甲酸丁酯、柠檬酸三乙酯、甘油、碳酸甘油酯、乙二醇、丙二醇、二甲基亚砜、苯甲醇、乳酸2-乙基己酯和乙腈、或其任意两种或更多种的任意组合。

在各种实施方案中，所述一种或多种溶剂可以选自包含以下的组：二甲基乳酰胺、二丙二醇甲醚、乙二醇苯基醚、苯乙酮、环己醇、聚乙二醇、聚乙二醇甲醚、琥珀酸二甲酯、戊二酸二甲酯、己二酸二甲酯、苯甲酸丁酯、柠檬酸三乙酯、碳酸甘油酯、乙二醇、丙二醇、乳酸2-乙基己酯和苯甲醇、或其任何两种或多种的任何组合。

在各种实施方案中，所述一种或多种溶剂可选自包含以下的组：二甲基乳酰胺、乙二醇苯基醚、分子量为100-6000的聚乙二醇、分子量为100-1000的聚乙二醇甲基醚、琥珀酸二甲酯、戊二酸二甲酯、己二酸二甲酯、苯甲酸丁酯、柠檬酸三乙酯、碳酸甘油酯、乳酸2-乙基己酯和苯甲醇、或其任意两种或更多种的任意组合。

除非另有说明，本文提及的化学基团可以任选地被取代。如本文所用，术语“取代的”意指所示基团中的一个或多个氢原子被一个或多个独立选择的合适取代基替代，条件是不超过取代基连接的每个原子的正常化合价，并且该取代产生稳定的化合物。本文所用术语“稳定的”在本文中是指具有足以允许制造的稳定性并且在足以用于本文所述目的的一段时间内保持其完整性的化合物。针对本文所述的化合物，例如，脂族、脂环族、烷基、烯基、环烷基、芳基、亚烷基、芳基脂族、芳基烷基、烷氧基，合适的任选取代基的实例包括但不限于，卤素、CN、NO₂、NR^aR^b、C_1-6卤代烷基、C_1-6卤代烷氧基、C(O)OR^a、C(O)NH₂、C(O)NHR^a、C(O)NR^aR^b、SO₂R^a、OR^a、SR^a、S(O)R^a、C(O)R^a和C_1-6烷基；其中R^a和R^b各自独立地为C_1-6烷基。在某些实施方案中，合适的任选取代基包括但不限于卤素、CN、NO₂、C_1-6卤代烷基、C_1-6卤代烷氧基、OR^a、SR^a和C_1-6烷基。在某些实施方案中，合适的任选取代基包括但不限于C_1-6烷基。

在另一个实施方案中，一种或多种溶剂包含亲核性系数小于约0.5eV、小于约0.4eV、小于约0.35eV、小于约0.3eV或小于约0.28eV的含羟基和含氮基团，基本上由其组成或由其组成。

在各种实施方案中，一种或多种溶剂是非质子溶剂或包含一种或多种亲核基团，每个亲核基团的亲核性系数小于约0.4eV、小于约0.35eV、小于约0.3eV或小于约0.28eV。例如，在每个亲核基团的亲核性系数小于约0.4eV的实施方案中，一种或多种溶剂将不含有任何具有较高亲核性系数的亲核基团。

在一个实施方案中，一种或多种溶剂包括基本上非水性的溶剂体系。在另一个实施方案中，一种或多种溶剂包括含有小于5％w/w水的溶剂体系。在各种实施例中，一种或多种溶剂包含含有小于4％、小于3％、小于2％或小于1％w/w水的溶剂体系。在另一个实施方案中，一种或多种溶剂包含非水性的溶剂体系。

应当理解，通过平衡组合物的一种或多种溶剂的OH当量和水含量以获得具有总OH与NFL的低总摩尔比的稳定制剂来获得如本文所述的稳定制剂。例如，如果溶剂体系的OH当量(和/或eV)低，则可以容许较高的水含量。相反地，在其中存在较少的水的实施方案中-例如，在配制前的提供黑麦草碱生物碱的成分中-可以容许具有较高OH当量和/或eV的溶剂并且仍然提供稳定的制剂。

还应当理解，在存在较少的水的实施方案中，能够使用溶剂或溶剂混合物(潜在地包括当(单独)大量使用时具有高OH当量的溶剂)，同时仍然具有足够低的总OH与NFL的总摩尔比，由此这样的制剂可以受益于否则将导致不可接受的NFL降解的溶剂的有用性质。

此外，在某些实施方案中，当亲核性系数较低时，可以容许总OH和/或含氮基团与NFL的较高总摩尔比。

在一个实施方案中，组合物基本上是非水性的。在另一个实施方案中，组合物包含小于5％w/w的水。在各种实施方案中，组合物包含小于4％、小于3％、小于2％或小于1％w/w的水。在另一个实施方案中，组合物是非水性的。

在另一个实施方案中，组合物在配制或稀释用于施用之前基本上是非水性的。

在一个实施方案中，所述组合物还包含一种或多种以下物质：水清除剂、表面活性剂、防腐剂、干燥剂或缓冲剂。

在一个实施方案中，所述组合物还包含表面活性剂。在各种实施方案中，表面活性剂选自包含以下的组：非离子表面活性剂、离子表面活性剂、阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂和/或两性表面活性剂。在各种实施方案中，表面活性剂包括硫酸盐，例如烷基硫酸盐或烷基醚硫酸盐；磺酸盐，例如烷基苯磺酸盐，或直链烷基苯磺酸盐(LAB)，例如十二烷基苯磺酸钙；磷酸酯，例如磷酸单酯或混合的磷酸二酯；烷基醚羧酸酯，例如月桂基醚羧酸酯；烷基季表面活性剂，例如单烷基季铵表面活性剂，酯季铵盐或烷基甜菜碱。在各种实施方案中，表面活性剂包括月桂基硫酸铵、月桂基硫酸钠、月桂醇聚醚硫酸钠或肉豆蔻醇聚醚硫酸钠、二辛基磺基琥珀酸钠、双十三烷基磺基琥珀酸钠、二己基磺基琥珀酸钠、二环己基磺基琥珀酸钠、二戊基磺基琥珀酸钠、二环己基磺基琥珀酸钠、二异丁基磺基琥珀酸钠、全氟辛烷磺酸盐(PFOS)、全氟丁烷磺酸盐或硬脂酸钠、或其任何两种或多种的组合。

也考虑任何两种或多种溶剂的组合，和任何两种或多种表面活性剂的组合，包括上述那些。

在一个实施方案中，溶剂和/或表面活性剂基本上不含羟基和含氮基团。在一个实施方案中，溶剂和/或表面活性剂不包含羟基或含氮基团。

在一个实施方案中，组合物基本上不含：包含羟基和含氮基团的溶剂，包含羟基和含氮基团的表面活性剂，和/或包含羟基和含氮基团的其它化合物。在一个实施方案中，组合物不包含：包含羟基或含氮基团的溶剂，包含羟基或含氮基团的表面活性剂，和/或包含羟基或含氮基团的其它化合物。

在一个实施方案中，组合物基本上不含羟基和含氮基团。在另一个实施方案中，组合物不包含羟基或含氮基团。

在各种实施方案中，溶剂中包含一个或多个羟基和/或含氮基团的羟基和/或含氮基团和/或包含一个或多个羟基和/或含氮基团的表面活性剂的摩尔量小于组合物中N-甲酰基黑麦草碱(NFL)的摩尔量的约50％、40％、30％、20％、10％、7.5％、5％、4％、3％、2％、1％或约0.5％。应当理解，上述组合物通常是组合物，例如还没有被载体或佐剂稀释的待用的浓缩物组合物。

在一个实施方案中，所述组合物还包含防腐剂。用于组合物的合适防腐剂是本领域已知的。

在一个实施方案中，表面活性剂具有杀虫活性。在一个实施方案中，表面活性剂是非植物毒性的，对人和非人动物是无毒的和/或可生物降解的。在一个实施方案中，表面活性剂基本上可溶于极性和非极性溶剂中。

在各种实施方案中，组合物包含约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、15、20、25、30、35、40、45或约50％重量的表面活性剂。有用的范围可以选自任何这些值(例如，约1至约50，约1至约20，约1至约10，或约2％至约8％)。

在各种实施方案中，按重量计，组合物包含约0.01、0.05、0.075、0.1、0.125、0.15、0.175、0.2、0.225、0.25、0.275、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9％或约1％的防腐剂，并且有用的范围可以在任何这些值之间选择(例如，约0.01％至约1％、约0.05％至约0.5％、约0.05％至约0.4％、或约0.1％至约0.3％)。

在一个实施方案中，所述组合物还包含抗氧化剂。在一个实施方案中，抗氧化剂是脂溶性抗氧化剂。在各种实施方案中，抗氧化剂包括：一种或多种生育酚或生育三烯酚，例如维生素E、没食子酸丙酯；氢醌，例如叔丁基氢醌；酚，例如丁基化羟基苯甲醚或丁基化羟基甲苯；类胡萝卜素，例如β-胡萝卜素、α-胡萝卜素、β-隐黄质、叶黄素、番茄红素和玉米黄质，或其任何两种或更多种的组合。

在各种实施方案中，组合物在约-20、4、10、15、20、25、30、35、40、45、50、54、55或约60℃的温度下或在环境温度下储存约1、2、3或4周，或约1、2、3、4、6、9、12、18、24、36或48个月后，包含至少约100、110、120、130、140、150、160、170、180、185、190、195、200、205、210、220、230、240或约250mg/g NFL。例如，优选地，该组合物在约-20℃、4℃或约54℃的温度下储存2周后包含至少约180mg/g的NFL。

在各种实施方案中，组合物在约-20、4、10、15、20、25、30、35、40、45、50、54、55或约60℃的温度下或在环境温度下储存约1、2、3或4周，或约1、2、3、4、6、9、12、18、24、36或48个月后，保留至少约50、60、70、75、80、85、90、95、98、99或约100％的NFL。例如，优选地，该组合物在约-20℃、4℃或约54℃的温度下储存2周后包含至少约80％的NFL。

在各种实施方案中，组合物在约-20、4、10、15、20、25、30、35、40、45、50、54、55或约60℃的温度下或在环境温度下储存约1、2、3或4周，约1、2、3、4、6、9、12、18、24、36或48个月后，小于约50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或约100％的NFL降解或水解。例如，优选组合物中小于约20％的NFL在约-20℃、4℃或约54℃的温度下储存2周后降解或水解。

另一方面，本发明提供了一种制备可用于本发明的组合物的方法，所述方法包括将一种或多种黑麦草碱生物碱与一种或多种溶剂混合以形成所述组合物的步骤，其中所述组合物基本上不含包含羟基和/或含氮基团的溶剂。

在一个实施方案中，制备本发明的组合物的方法包括以下步骤：

a)提供N-甲酰基黑麦草碱(NFL)和任选的一种或多种另外的式(I)的黑麦草碱生物碱，

b)将所述黑麦草碱生物碱与一种或多种溶剂组合以形成组合物；

其中所述组合物的总羟基和含氮基团与N-甲酰基黑麦草碱的摩尔比等于或小于约20。

在一个实施方案中，组合物为在施用前稀释的浓缩物形式。在一个实施方案中，组合物在施用前与水混合。

在一个实施方案中，在施用前，将组合物与水混合至黑麦草碱生物碱的终浓度为约2、2.5、5、7.5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、75、100、125、150、175或约200g/100L。

在各种实施方案中，将组合物与水混合并以至少约100、150、200、250、300、350、400、450或500L/Ha的速率施用。

在一个实施方案中，在施用前将组合物与包含一种或多种上述抗氧化剂的组合物混合。在各种实施方案中，用于施用的组合物包含约0.25、0.5、0.75、1、1.25、1.5、1.75、2、2.25、2.5、2.75、3、3.5、4、4.5、5、6、7、8、9、10、12、15、18、20、25、30、35、40或约50mL/升的抗氧化剂，例如维生素E，并且有用的范围可以在任何这些值之间选择(例如，约0.25至约50mL/L、约0.5至约10mL/L、约0.5至约5mL/L、或约1至约5mL/L)。

在一个实施方案中，在施用之前将干燥保护剂(例如Deep Fried^TM、Fortune^TM或Fortune Plus^TM)混合至约1ml/L的最终浓度。

另一方面，本发明提供了一种赋予植物系统害虫抗性的方法，包括以下步骤：

a)提供根据本发明的组合物，

b)将所述组合物局部施用于所述植物，

由此提供植物对一种或多种黑麦草碱生物碱的吸收，以赋予系统害虫抗性。

在另一方面，本发明提供了一种用于防治一种或多种昆虫害虫的方法，该方法包括向植物或其周围环境或存在昆虫害虫的场所施用如本文所述的组合物的步骤。

在另一方面，本发明提供了生产用于施用至植物或其周围环境的组合物的方法，所述方法包括以下步骤：提供如本文所述的包含一种或多种黑麦草碱生物碱的组合物，和任选地在施用之前稀释所述组合物。

在另一方面，本发明涉及向植物的体循环提供一种或多种黑麦草碱生物碱的方法，所述方法包括：

提供如本文所述的包含一种或多种黑麦草碱生物碱的组合物，

将该组合物局部施用于植物以向植物的体循环提供一种或多种黑麦草碱生物碱的吸收。

另一方面，本发明涉及赋予植物系统害虫抗性的方法，所述方法包括：

提供如本文所述的组合物，其包含一种或多种黑麦草碱生物碱，例如一种或多种衍生自非合成来源的基本上纯的黑麦草碱生物碱，

将所述组合物局部施用于所述植物，

由此提供植物对一种或多种黑麦草碱生物碱的吸收，以赋予系统昆虫害虫抗性。

在一个实施例中，组合物的局部施用提供了至少约1.0μg的黑麦草碱生物碱/g植物的黑麦草碱生物碱的体系浓度。在各种实施方案中，组合物的局部施用提供了至少约5、10、15、20、25、30、40、50或60μg的黑麦草碱生物碱/g植物或大于约60μg的黑麦草碱生物碱/g植物的黑麦草碱生物碱的体系浓度。

在一个实施方案中，组合物的局部施用在植物的茎和/或叶中提供了至少约1.0μg的黑麦草碱生物碱/g植物的黑麦草碱生物碱浓度。在多个实施方案中，组合物的局部施用在植物的茎和/或叶中提供至少约5、10、15、20、25、30、40、50或60μg的黑麦草碱生物碱/g植物，或大于约60μg的黑麦草碱生物碱/g植物的黑麦草碱生物碱浓度。

在一个实施方案中，组合物的局部施用提供至少约20ppm的黑麦草碱生物碱的体系浓度。例如，组合物的局部施用提供至少约25、30、35或至少约40ppm的黑麦草碱生物碱的体系浓度。

在一个实施方案中，组合物的局部施用在植物的茎和/或叶中提供至少约20ppm的黑麦草碱生物碱。在一个实施方案中，组合物的局部施用在植物的茎和/或叶中提供至少约25、30、35或至少约40ppm的黑麦草碱生物碱。

本发明还涉及使用所述组合物防治害虫的方法，特别是植物和人或非人动物害虫，如昆虫、线虫和食草动物。

例如，本发明还提供了控制害虫种群的方法。该方法通常包括使种群与杀虫有效量的本文所述的组合物接触。这些方法可以用于杀死或减少给定区域中的目标害虫的数量，或者可以预防性地应用于场所，例如环境区域，以防止易感害虫的侵染。

本发明还涉及本发明的组合物用于防治一种或多种害虫的用途，所述害虫包括一种或多种昆虫或线虫害虫，例如一种或多种昆虫害虫，例如一种或多种昆虫或线虫或一种或多种动物物种的一种或多种昆虫或线虫害虫。

在一个实施方案中，本发明提供控制一种或多种昆虫的方法，所述昆虫包括一种或多种昆虫害虫，例如一种或多种动物物种的一种或多种昆虫害虫，所述方法包括使所述一种或多种昆虫与本发明的组合物接触。

同样考虑了通过本发明方法制备的组合物在制备用于防治一种或多种害虫的制剂中的用途。

同样考虑了通过本发明的方法生产的组合物或本发明的组合物在制备用于治疗或预防受试者中的害虫或寄生虫感染的药物中的用途。

本发明还涉及一种用于防治一种或多种害虫的方法，所述害虫是例如一种或多种昆虫，包括一种或多种寄生性昆虫，所述方法包括向例如植物或其周围环境的场所施用本发明的组合物。该方法还可以包括将本发明的组合物施用于有需要的受试者，例如被寄生性或致病性昆虫害虫感染的受试者。

另一方面，本发明提供了完全或部分逆转害虫对一种或多种杀虫剂或一种或多种病原体的抗性的方法，该方法包括使昆虫与本发明的组合物接触。

任选地，所述方法包括使害虫与本发明的组合物以及一种或多种杀虫剂或一种或多种病原体或其任意组合接触。

在各种实施方案中，所施用的一种或多种杀虫剂或一种或多种病原体与害虫被或被预测为抗性的或已经变得抗性的那些相同。

在另一方面，本发明提供了用有效防治一种或多种害虫的量的杀虫剂或病原体防治已经与本发明的组合物接触的一种或多种害虫的方法。

一种或多种杀虫剂或一种或多种病原体可以在施用本发明的组合物之前、同时或之后施用。因此，本发明的一种或多种组合物和一种或多种杀虫剂或一种或多种病原体的给药可以是同时、依次或分开的。

另一方面，本发明涉及增强植物生长或繁殖的方法，该方法包括使植物与本发明的组合物接触。

在一个实施方案中，该方法增强植物的生长或繁殖而没有显著的植物毒性或植物毒性症状。

在一个实施方案中，所述植物存在生物或非生物胁迫。

在一个实施方案中，非生物胁迫选自由以下组成的组：水缺乏、营养缺乏、热胁迫、盐毒性、矿物或金属毒性和冷冻温度。

在一个实施方案中，生物胁迫选自由以下组成的组：昆虫侵染、线虫侵染和食草动物放牧。在一个实施方案中，生物胁迫是由至少一种选自由以下组成的组的生物体引起的胁迫：昆虫、线虫和食草动物。

在各种实施方案中，本发明的组合物预防性地施用，例如在诸如植物场所被害虫种群感染或暴露于害虫种群之前施用，害虫种群例如为昆虫或昆虫种群。在其它实施方案中，当建立感染或存在病原体时，例如当场所如植物被昆虫感染或暴露于昆虫时，或当昆虫存在于场所上或场所中时，施用组合物。

在一个实施方案中，本发明的组合物直接施用于场所，例如直接施用于植物或其周围环境。例如，本发明的组合物与溶剂混合或乳化并如本文所述施用。在其它实施方案中，本发明的组合物间接施用于场所，诸如举例而言通过施用于随后施用于场所的底物。在一个实施方案中，使用灌溉系统或化学系统，例如在水培生长系统中，将组合物施用于场所。

在一个实施方案中，在种植之前将本发明的组合物施用于场所，例如温室或大棚。

在各种实施方案中，以至少约25、50、100、150、200、250、300、350、400、500、550、600、650、700、750或至少约1000g黑麦草碱/公顷的比率施用组合物。通常，目标施用率为约100g至约500g/公顷。

在各种实施方案中，使用本发明的方法处理的植物的叶子中的黑麦草碱生物碱的浓度比未处理植物的叶子中的黑麦草碱生物碱的浓度大至少1、2、3、4、5、10、15、20、25、30、40、50、75或100倍。

在各种实施方案中，使用本发明的方法处理的植物茎中的黑麦草碱生物碱的浓度比未处理植物茎中的黑麦草碱生物碱的浓度大至少1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、10、15、20或25倍。

在一个实施方案中，将组合物配制在种子包衣中以提供包衣种子，或配制在植物繁殖材料中。

在各种实施方案中，包衣种子包含每克约1、2.5、5、7.5、10、12.5、15、20、25、30、40、50、60、70、75、80、90、100、120、140、150、160、180或约200mg的一种或多种黑麦草碱生物碱种子，并且有用的范围可以在任何这些值之间选择(例如，每克种子约1至约200mg、约10至约150mg、约10至约120mg、或约20至约120mg)。

在各种实施方案中，种子包衣包含本发明的组合物和一种或多种包封剂，所述包封剂选自包含以下的组：多糖，诸如胶，例如黄原胶、金合欢胶、结冷胶、阿拉伯胶、刺槐豆胶或瓜尔胶、角叉菜胶(例如角叉菜胶I，角叉菜胶K或角叉菜胶λ)或果胶，水溶性聚合物，例如羟丙基甲基纤维素或羧甲基纤维素盐(例如羧甲基纤维素钠盐)或聚环氧乙烷。

在一个实施方案中，种子包衣包含本发明的组合物和一种或多种吸收性粉末，例如硅藻土，或粘合剂，例如聚乙烯吡咯烷酮或聚乙二醇。

在农业和园艺应用中，本发明适用于任何植物或其环境。示例性植物是单子叶或双子叶植物，例如苜蓿，大麦，芸苔，玉米(玉米)，棉花，亚麻，木棉，花生，马铃薯，燕麦，稻，黑麦，高粱，大豆，甜菜，甘蔗，向日葵，烟草，番茄，小麦，草坪草，牧草，浆果，果实，豆类，蔬菜，例如辣椒，葫芦，例如黄瓜，洋葱，观赏植物，灌木，仙人掌，肉质和树木。

在另外的说明性实施例中，植物可以是任何植物，包括选自茄属的植物，包括来自以下科的植物：旋花科(Convolvulaceae)、水草科(Hydroleaceae)、山醋李科(Montiniaceae)、茄科(Solanaceae)和黄眼草科(Sphenocleaceae)，以及天门冬目中的植物，包括来自以下家族的植物：石蒜科、天门冬科、芳香草科(Asteliaceae)、香水花科(Blandfordiaceae)、澳韭兰科(Boryaceae)、矛花科(Doryanthaceae)、仙茅科(Hypoxicaceae)、鸢尾科(Iridaceae)、鸢尾蒜科(Ixioliriaceae)、毛石蒜科(Lanariaceae)、兰科(Orchidaceae)、蓝星科(Tecophilaceae)、黄脂木科(Xanthorhuraceae)和血剑草科(Xeronemataceae)。

在另一方面，本发明涉及用本发明的组合物处理或已施用本发明的组合物的植物或其部分。

在一个实施方案中，植物或其部分是可繁殖存活的，例如种子、球茎或插条或能够繁殖的其它植物部分。

在另一方面，本发明涉及在有需要的受试者中治疗或预防害虫、寄生虫或昆虫感染或侵染的方法，其中所述受试者是人或非人动物受试者，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的本发明的组合物。

另一方面，本发明涉及本发明的组合物在制备用于本文所述任何方法的组合物或药物中的用途，例如用于治疗或预防害虫、寄生虫或昆虫感染或侵染。

另一方面，组合物局部、口服或非肠道给药。

另一方面，本发明提供包含本发明组合物和一种或多种药学上或兽医学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂的药物或兽医学制剂。

在一个实施方案中，所述方法用于治疗或预防外寄生虫感染或侵染，例如被臭虫，跳蚤，苍蝇，蚊子，蜱，虱子如头虱或螨感染或侵染。

在一个实施方案中，本发明提供了治疗或预防体内寄生虫感染或侵染、例如诸如肠虫蠕虫的原生动物寄生蠕虫或寄生虫感染或侵染的方法。

在一个实施方案中，所述组合物以洗发剂、颈环、霜剂、凝胶剂、浸剂、浇淋或滴剂、混悬剂、洗剂、软膏剂、敷料、皮肤贴剂、片剂、胶囊剂、丸剂、酏剂或注射剂的形式施用。

在各种实施方案中，所述组合物以足以递送至少约5、10、20、25、30、40、45、50、55、60、70、75、80、90或至少约100μg黑麦草碱生物碱/cm²皮肤的量施用，并且有用的范围可以在任何这些值之间选择(例如，约5μg至约100μg的黑麦草碱生物碱，约25μg至约100μg，约50μg至约100μg，约25μg至约75μg，或约50μg至约100μg黑麦草碱生物碱/cm²皮肤。

在各种实施方案中，例如用于局部施用的药物或兽药制剂中的黑麦草碱生物碱的浓度为至少约5μg/mL、10μg、20μg、25μg、30μg、40μg、45μg、50μg、55μg、60μg、70μg、75μg、80μg、90μg、100μg、125μg、150μg、175μg或至少约200μg/mL，并且有用的范围可以在任何这些值之间选择(例如，约50μg至约200μg/mL、约50μg至约100μg、约75μg至约200μg、约75μg至约100μg、或约100μg至约200μg/mL。

在药物或兽医应用中，本发明适用于人类受试者或任何非人类动物受试者，例如农业动物，如牛、绵羊、猪、鹿和山羊；陪伴动物，例如狗、猫、小鼠、大鼠、兔和豚鼠，以及马和鸟，例如鸵鸟、鸸鹋、母鸡、鹅、火鸡和鸭；和淡水或盐水鱼。

本发明的其它方面可从以下描述中变得显而易见，所述描述仅作为示例并参考附图给出。

意图是，对本文公开的数字范围的引用(例如1至10)也包含对该范围内所有合理数字的引用(例如1、1.1、2、3、3.9、4、5、6，6.5、7、8、9和10)以及该范围内的任何有理数范围(例如2至8、1.5至5.5和3.1至4.7)，并且因此，此处明确公开了所有范围的所有子范围。这些仅仅是具体意图的示例，并且所列举的最低值和最高值之间的数值的所有可能组合被认为在本申请中以类似的方式清楚地陈述。

当使用术语“约”时，例如参考数字、浓度、量、整数或值时，也特别考虑确切的数字、浓度、量、整数或值。

在已经参考专利说明书，其他外部文件或其他信息源的本说明书中，这通常是出于提供讨论本发明的特征的上下文的目的。除非另外具体说明，否则对这些外部文件的引用不应被解释为承认这些文件或这些信息源在任何权限中是现有技术或形成本领域公知常识的一部分。

本发明还可以广义地描述为包括在本申请的说明书中单独地或共同地提及或指示的部分、元件和特征，以及所述部分、元件或特征中的任何两个或更多个的任何或所有组合，并且其中在本文中提及的特定整数在本发明涉及的领域中具有已知的等同物，这些已知的等同物被认为并入本文，如同单独阐述一样。

附图说明

现在将仅通过示例并参考以下附图来描述本发明。

图1和2分别显示了在70℃和50℃的温度下，NFL降解为黑麦草碱的百分比随时间、pH和缓冲液类型的变化。描述了以下缓冲液的结果：柠檬酸一水合物/磷酸氢二钠pH2.6(三角形)，柠檬酸一水合物/柠檬酸三钠脱水pH4(菱形)，乙酸钠三水合物/乙酸pH4(正方形)，磷酸氢二钠脱水/磷酸二氢钠一水合物pH6(黑色圆圈)和碳酸氢钠/碳酸钠十水合物pH10(灰色圆圈)。

图3显示相对于水和溶剂(用纯化提取物制备的20％w/w的黑麦草碱溶液)的总羟基当量的溶剂分解。

图4显示了描绘用如本文实施例中所述的粗提取物制备的20％w/w的黑麦草碱溶液的溶剂分解对总羟基当量的图。

具体实施方式

本发明部分涉及包含黑麦草碱生物碱的组合物。本发明还涉及本发明的组合物用于防治害虫和害虫种群，增强植物生长或繁殖，以及治疗或预防人或非人动物中的害虫、昆虫和/或寄生虫感染或侵染的用途。

1.定义

术语“和/或”可以表示“和”或“或”。

本文所用的术语“约”当涉及可测量的值，如浓度、摩尔量或比例、剂量、量或时间段等时，意指包括±20％、±10％、±5％、±1％、±0.5％、或甚至±0.1％的特定值(例如，一种或多种黑麦草碱生物碱的量，组合物中一种组分与另一种组分的比率等)的变化。

本说明书中使用的术语“包含”是指“至少部分由.组成”。当解释本说明书中包括术语“包括”的每一陈述时，也可存在不同于该术语或以该术语开头的那些特征的特征。诸如“包括(comprise)”和“包含(comprises)”的相关术语将以相同的方式解释。

本文所用的术语“防治(control)”或“防治(controlling)”通常包括预防群体[的一个或多个成员]的增加，减少或根除，或预防、减少或根除一种或多种害虫或病原体的感染或侵染，例如感染人或非人动物的一种或多种植物病原体或害虫或昆虫的感染，或抑制这种感染的速率和程度，例如减少场所、例如植物或其周围环境中或上的害虫种群，或治疗或预防人或非人动物中的害虫或昆虫感染或侵染，其中这种感染或种群的预防或减少相对于未处理的感染或种群是统计学显著的。还考虑了治愈性治疗。优选地，通过增加害虫或病原体群体中的死亡率来实现这种防治。

应当理解，控制可以是通过拮抗作用，其可以采取多种形式。在一种形式中，本发明的组合物可简单地用作驱虫剂。在另一种形式中，本发明的组合物可以使环境对害虫或病原体不利。在进一步优选的形式中，本发明的组合物可以使害虫或病原体失去能力，使其不育，阻止其生长，阻止其扩散或分布，和/或杀死害虫或病原体。因此，拮抗机制包括但不限于抗菌、固定、不育和毒性。因此，可认为起一种或多种害虫拮抗剂作用的组合物具有杀虫活性。例如，可认为起一种或多种昆虫拮抗剂作用的组合物具有杀虫功效。此外，作为或包含害虫拮抗剂的试剂或组合物可以说是杀虫剂或杀虫剂组合物，例如，作为昆虫拮抗剂的试剂，包括动物或植物的害虫，可以说是杀虫剂。同样，作为或包含昆虫拮抗剂的组合物，可以说是杀虫组合物，昆虫包括动物或植物的昆虫害虫。

因此，如本文所用，“杀虫组合物”是包含或包括至少一种具有杀虫功效的试剂的组合物。

在各种实施方案中，所述杀虫功效是对包括昆虫、线虫和食草动物的一种或多种害虫进行驱避，使其丧失能力，使其不育，阻止其生长或杀死其的能力，优选在与昆虫接触的14天内、更优选在7天内、还更优选在7天内杀死植物的一种或多种昆虫害虫的能力。

因此，如本文所用，“杀昆虫组合物”是包含或包括至少一种具有杀昆虫功效的试剂的组合物。

本文所用的术语“官能化变体”是指一种或多种黑麦草碱生物碱，例如关于一种或多种黑麦草碱生物碱而言，是指不同于具体鉴定的实体的黑麦草碱生物碱，例如其中一种或多种多个基团被删除、取代或添加，但其至少部分地具有特异性鉴定的实体的一种或多种生物活性，例如引起由特异性鉴定的黑麦草碱生物碱引起的一种或多种生物效应的能力。

在本发明的情况下，官能化变体优选保留本发明的特异性鉴定的黑麦草碱生物碱或组合物的杀虫活性的至少一部分。

测定由本发明的黑麦草碱生物碱引起的一种或多种生物效应(如杀虫功效)的方法和测定是本领域熟知的，并且这些方法和测定可用于鉴定或验证一种或多种本发明的黑麦草碱生物碱的一种或多种官能化变体。例如，本发明的黑麦草碱生物碱或组合物杀死或拮抗如本文实施例中所述的那些目标害虫生长的能力的测定适于鉴定本发明的黑麦草碱生物碱或组合物的一种或多种官能化变体。

本文所用的术语“植物”不仅包括整株植物，还包括植物部分，插条以及植物产品，包括根、叶、花、种子、茎、愈伤组织、坚果和果实、球茎、块茎、球茎、谷粒、插条、根原种或接穗，并且包括任何植物材料，无论种植前、生长期间和收获时或收获后。可受益于本发明应用的植物覆盖广泛的农业和园艺作物。本发明的组合物还特别适用于有机生产系统。

当用于如本发明的杀虫组合物的杀虫剂时，短语“保持杀虫功效”及其语法等同物和衍生物旨在表示该试剂仍然具有有用的杀虫活性。优选地，保留的活性是原始活性的至少约35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、99或100％，并且有用的范围可以在任何这些值之间选择(例如，约35至约100％、约50至约100％、约60至约100％、约70至约100％、约80至约100％和约90至约100％)。例如，本文所述的黑麦草碱生物碱的优选官能化变体应保留杀虫活性，即保留至少约35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、99或100％的特定母体黑麦草碱生物碱的杀虫活性。类似地，本发明的优选组合物能够支持维持它们包含的杀虫剂的有用杀虫活性，并且可以说保持杀虫活性，理想地直到使用本文考虑的方法施用时为止。

类似地，当用于诸如杀昆虫组合物的杀昆虫剂时，短语“保持杀昆虫功效”及其语法等同物和衍生物旨在表示该试剂仍然具有有用的杀昆虫活性。优选地，保留的活性是原始活性的至少约35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、99或100％，并且有用的范围可以在任何这些值之间选择(例如，约35至约100％、约50至约100％、约60至约100％、约70至约100％、约80至约100％和约90至约100％)。例如，本发明优选的官能化变体应保留杀昆虫活性，即保留至少约35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％的特定母体黑麦草碱生物碱或包含其的级分的杀昆虫活性。类似地，本发明的优选组合物能够支持维持它们包含的杀昆虫剂的有用杀昆虫活性，并且可以说保持杀昆虫活性，理想地直到使用本文考虑的方法施用时为止。

本文所用的术语“溶剂”是指用于溶解或分散另一种化合物的一种或多种化合物。本文所用的术语“溶剂体系”是指一种或多种溶剂的混合物，特别是当用于指存在于制剂中的溶剂体系时，包括存在于制剂中的全部溶剂。

本文所用的一般化学术语具有其通常含义。

本文所用的术语“总羟基”或“总OH基”或语法上等同的变化是指存在于主题组合物中的羟基的摩尔数，因此包括由溶剂贡献的羟基和由存在的任何水或其它组分贡献的羟基。

如本文所用，术语“总含氮基团”或语法上等效的变化形式是指存在于主题组合物中的含氮基团的摩尔数，例如氨、伯胺基、仲胺基及其组合，并且因此包括由存在的溶剂或其他组分贡献的胺基。

除非另有说明，本文单独或与其它术语组合使用的术语“脂族”是指饱和和不饱和的直链和支链无环烃。本领域技术人员将理解脂族基团包括例如烷基和烯基。在一些实施方案中，脂族基团具有1至12、1至10、1至8、1至6或1至4个碳原子。

除非另有说明，本文单独或与其它术语组合使用的术语“脂环族”是指饱和和不饱和的非芳族环状烃。本领域技术人员将理解脂族基团包括例如环烷基。在一些实施方案中，脂环族基团在环中具有3至12、3至10、3至8、3至6、3至5个碳原子。

除非另有说明，本文单独或与其它术语组合使用的术语“烷基”是指直链和支链饱和无环烃基。在一些实施方案中，烷基具有1至12、1至10、1至8、1至6或1至4个碳原子。直链烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、正丁基、正戊基、正己基、正庚基和正辛基。支链烷基的实例包括但不限于异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、新戊基、异戊基和2,2-二甲基丙基。

除非另有说明，本文单独或与其它术语组合使用的术语“烯基”是指在两个碳原子之间具有至少一个双键的直链和支链无环烃基。在一些实施方案中，烯基具有2至12、2至10、2至8、2至6或2至4个碳原子。在一些实施方案中，烯基具有一个、两个或三个碳-碳双键。烯基的实例包括但不限于乙烯基、烯丙基、-CH＝CH(CH₃)、-CH＝C(CH₃)₂、-C(CH₃)＝CH₂、和-C(CH₃)＝CH(CH₃)。

除非另有说明，本文单独或与其它术语组合使用的术语“环烷基”是指饱和环烃基。环烷基包括单-、双-或三环基团。在一些实施方案中，环烷基在环中具有3至12、3至10、3至8、3至6、3至5个碳原子。在一些实施方案中，环烷基具有5或6个环碳原子。单环环烷基的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。在一些实施方案中，环烷基具有3至8、3至7、3至6、4至6、3至5或4至5个环碳原子。双环和三环体系包括桥连、螺和稠合环烷基环体系。双环和三环环烷基体系的实例包括但不限于双环[2.1.1]己烷基、双环[2.2.1]庚烷基、金刚烷基和十氢萘基。

除非另有说明，本文单独或与其它术语组合使用的术语“酰基”是指R⁵⁰C(O)-基团，其中R⁵⁰选自氢、烷基、环烷基和芳基。在一些实施方案中，R⁵⁰选自烷基、环烷基和芳基。在一些实施方案中，酰基为C_1-20烷基C(O)-。

除非另有说明，本文单独或与其它术语组合使用的术语“芳基”是指不含任何环杂原子的环状芳族烃基团。芳基包括单环、双环和三环体系。芳基的实例包括但不限于苯基、甘菊环基、庚烯基、联苯基、芴基、菲基、蒽基、茚基、茚满基、并环戊二烯基和萘基。在一些实施方案中，芳基在环中具有6-14、6-12或6-10个碳原子。在一些实施方案中，芳基为苯基或萘基。芳基包括芳族-脂族稠环体系。实例包括但不限于茚满基和四氢萘基。

除非另有说明，本文单独或与其它术语组合使用的术语“亚烷基”是指多价烷基。在一些实施方案中，亚烷基是烷基的双基。在一些实施方案中，亚烷基具有1至6、1至4、2至6、2至4、1至3或2或3个碳原子。亚烷基的基团可以在该基团的相同碳原子或不同碳原子上。

除非另有说明，本文单独或与其它术语组合使用的术语“芳基脂族”是指被芳基取代的脂族基团。芳基脂族基团的实例包括但不限于芳基烷基。

除非另有说明，本文单独或与其它术语组合使用的术语“芳基烷基”是指被芳基取代的烷基。在一些实施方案中，芳基烷基是芳基C_1-6烷基。芳基烷基的实例包括但不限于苄基。

除非另有说明，本文单独或与其它术语组合使用的术语“烷氧基”是指烷基-O-基团。在各种实施方案中，烷氧基是C_1-6烷基-O-基团。

除非另有说明，本文单独或与其它术语组合使用的术语“杂环基”旨在包括含有3个或更多个环原子的非芳族环系，其中一个或多个是杂原子。在一些实施方案中，杂原子是氮、氧或硫。在一些实施方案中，杂环基含有一个、两个、三个或四个杂原子。在一些实施方案中，杂环基包括具有3至16个、3至14个、3至12个、3至10个、3至8个或3至6个环原子的单环、二环和三环。杂环基包括部分不饱和和饱和的环系，例如咪唑啉基和咪唑烷基。杂环基包括含有杂原子的稠合和桥接环系，例如奎宁环基。杂环基包括但不限于氮丙啶基、氮杂环丁烷基、氮杂环庚烷基、二氮杂环庚烷基、1,3-二噁烷基、1,3-二氧戊环基、异噁唑烷基、吗啉基、哌嗪基、哌啶基、吡喃基、吡唑烷基、吡咯啉基、吡咯烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、噻二唑烷基和三噻烷基。

本文单独或与其它术语组合使用的术语“杂原子”旨在包括氧，氮，硫或磷。在一些实施方案中，杂原子选自由以下组成的组：氧、氮和硫。

除非另有说明，本文单独或与其它术语结合使用的术语“卤代”或“卤素”旨在包括F、Cl、Br和I。

除非另有说明，本文单独或与其它术语组合使用的术语“卤代烷基”是指被一个或多个卤素取代的烷基。

除非另有说明，本文单独或与其它术语组合使用的术语“卤代烷氧基”是指烷基-O-基团，其中烷基被一个或多个卤素取代。

在本文提及的化学基团的背景文中，式C_n-m的前缀，其中n和m各自是整数(例如，前缀C_1-12、C_1-6、C_2-6、C_1-5、C_1-4、C_2-4、C_1-3、C_2-4等)，在每种情况下均表示基团中可能的碳原子数。例如，C_1-6烷基是指具有1至6个碳原子的烷基。

如本文所用，术语“稳定的”当用于本发明的组合物时是指能够支持数周、优选约1、约2、约3、约4、优选约5、更优选约6个月或更长的杀虫功效的组合物。当与包含NFL的本发明组合物相关使用时，术语“稳定的”还包括配制成减少或防止NFL水解的组合物。例如，配制本发明稳定组合物的某些实施方案，使得，组合物在约-20、4、10、15、20、25、30、35、40、45、50、54、55或约60℃的温度下或在环境温度在1atm压力下储存约1、2、3或4周，或约1、2、3、4、6、9、12、18、24、36或48个月后，小于约5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或约100％的NFL降解或水解。有用范围可以在任何这些值之间选择。优选地，本发明的组合物在环境温度(20℃)和1atm压力下稳定两年。

用于测试本文所述组合物的储存稳定性的方法和测定是本领域已知的。实例包括描述于如下文献中的方法：Pesticide Specifications(农药规范)，Manual on theDevelopment and Use of FAO and WHO Specifications for Pesticides(Manual onthe Development and Use of FAO and WHO Specifications for Pesticides)，第一版的第三次修订，世界卫生组织和联合国粮食及农业组织，2010年，罗马。如实施例中所述的测定储存稳定性的标准方法是将组合物在54℃的温度(在1atm下)温育两周。测量贮存前和贮存后组合物中N-甲酰基黑麦草碱的浓度以确定贮存期间N-甲酰基黑麦草碱浓度的降低。确定高温下相对短时间的储存稳定性可以是较低温度下较长时间的储存稳定性的有用指标。例如，当在54℃(在1atm)下储存两周时，小于约10％N-甲酰基黑麦草碱的减少可以表明该组合物在环境温度(约20℃)下在1atm压力下储存两年以上是储存稳定的。

术语“环境”当用于指经受本发明的方法和组合物的植物时，包括与植物或其根、块茎等相邻或周围的水，叶凋落物和/或生长培养基，相邻植物，所述植物的插条，载体，施用于植物的水，和包括种子包衣的包衣。它还包括储存、包装或加工材料，如保护涂层、盒子和包装纸，以及种植、维护或收获设备。

术语“口服给药”包括口服、口腔、肠内和胃内给药。

术语“肠胃外给药”包括但不限于局部(包括对任何皮肤、表皮或粘膜表面给药)、皮下、静脉内、腹膜内、肌内和瘤内(包括对肿瘤的任何直接给药)给药。

名词之后的术语“(s)”涵盖单数或复数形式，或两者。

术语“受试者”是指动物，优选哺乳动物，更优选哺乳动物陪伴动物或人。优选的陪伴动物包括猫、狗和马。其它哺乳动物受试者包括农业动物，包括马、猪、绵羊、山羊、牛、鹿或家禽，或实验室动物，包括猴、大鼠、小鼠、兔或豚鼠。其他受试者包括鸟类，例如鸵鸟、鸸鹋、母鸡、鹅、火鸡和鸭；和淡水或盐水鱼。

术语“治疗”及其派生词应当在其最广泛的可能上下文中解释。该术语不应理解为暗示治疗受试者直到完全恢复。因此，“治疗”广泛地包括将受试者的疾病进展或症状维持在基本上静止的水平，增加受试者的恢复速率，改善和/或预防症状的发作或特定病症的严重程度，或延长患者的生活质量。术语“治疗”还广泛地包括维持敏感个体的良好健康和建立疾病、感染或侵染预防的耐力。

本文所用的术语“寄生虫感染”是指受试者体内或体表的外部寄生虫(体外寄生虫)或内部寄生虫(体内寄生虫)的感染或侵染。

除非另有说明，本文所用的术语“含氮基团”是指氨、伯胺基、仲胺基或其组合。

2.黑麦草碱生物碱

黑麦草碱生物碱是在禾本科植物被内生真菌、特别是绢丝草包鞘病菌

内生真菌(按照命名重新排列，现在包括先前分离的变形性新伤寒属)感染的过程中共生产生的。这些内生菌被认为是生物保护性的，赋予害虫以及可能的干旱和病害保护，它们形成其部分的共生菌。

用于本发明组合物的黑麦草碱生物碱可以通过本领域熟知的方法从内生菌中纯化，例如通过分级分离、过滤或沉降方法(例如，离心)，无论是否与一个或多个细胞裂解步骤(例如，对于胞内黑麦草碱生物碱)组合(例如，对于分泌到生长培养基中的黑麦草碱生物碱)。或者，可使用本领域已知的方法，包括上述方法，从已被内生真菌感染的植物材料中纯化、分离或提取黑麦草碱生物碱，植物材料例如植物种子、叶或茎。

用于本发明组合物的黑麦草碱生物碱可以使用本领域熟知的方法通过发酵合成或生产。

在各种实施方案中，特别考虑包含基本上纯化的黑麦草碱生物碱的组合物。

本发明人已经确定，黑麦草碱生物碱，特别是N-甲酰黑麦草碱(NFL)，尤其在被至少部分纯化时，可以在延长的储存时间内降解。不希望受任何理论的束缚，据信NFL通过水解降解形成黑麦草碱。

3.本发明的组合物

在一个方面，本发明提供了包含具有如上所述的式[II]的结构的N-甲酰基黑麦草碱的组合物：

如本文所用，“至少部分纯化的”当用于提及如N-甲酰基黑麦草碱的化合物时是指N-甲酰基黑麦草碱已经经历了旨在从化合物中除去一种或多种污染物或不希望的试剂的至少一个纯化或分离步骤，使得处于至少部分纯化状态的化合物的浓度相对于其在至少部分纯化之前的浓度更大。在一个实施方案中，至少部分纯化预期在部分纯化状态下主题化合物的相对浓度增加至少5％w/w。

例如，至少部分纯化包括除去包含一种或多种黑麦草碱生物碱化合物、特别是N-甲酰黑麦草碱的粗提取物的一种或多种污染物，使得至少部分纯化状态的一种或多种黑麦草碱生物碱化合物的相对浓度与其在至少部分纯化之前的浓度相比增加。

另一方面，本发明提供了包含具有式[II]结构的N-甲酰基黑麦草碱的组合物

和一种或多种溶剂，其中当在54℃(在1atm)下储存至少两周时，存在于组合物中的N-甲酰基黑麦草碱的浓度降低小于约10％。

在各种实施方案中，一种或多种黑麦草碱生物碱是至少部分纯化的黑麦草碱生物碱。例如，一种或多种黑麦草碱生物碱基本上是纯的，即基本上不含任何其它化合物。在一个实施方案中，基本上纯的黑麦草碱生物碱含有少于10％的杂质、例如少于约5％的杂质、或少于约1％的杂质。因此，术语“基本上纯的”是指相关的黑麦草碱生物碱样品含有超过90％的黑麦草碱生物碱、例如超过95％的黑麦草碱生物碱、或超过99％的黑麦草碱生物碱。

不希望受任何理论的束缚，本发明人已经确定NFL的降解随着羟基摩尔比的增加和/或体系的亲核性系数的增加而增加。本发明人已经确定，当将NFL配制在总的含羟基和氮的基团与NFL的摩尔比小于约20和/或亲核性系数小于约0.6eV、优选0.5eV的组合物中时，NFL的降解速率降低。

本发明的组合物可以包含一种或多种溶剂，例如二醇或其醚、酰胺、包含3-8个碳原子的酮、脂环族醇或酯。例如，本发明的组合物可以包含二甲基乳酰胺(DMLA)，二丙二醇甲醚(例如DOWANOL^TM DPM)，乙二醇苯基醚(例如DOWANOL^TM EPH)，苯乙酮，环己醇，或己二酸、戊二酸和琥珀酸的二酯中的一种或多种。本发明人已经发现，当将NFL配制在基本上不含包含羟基的溶剂、包含羟基的表面活性剂和/或包含羟基的其它化合物的组合物中时，NFL的降解速率显著降低。

本文中，关于本文所述的组合物基本上不含包含含羟基和/或氮的基团的溶剂、包含含羟基和/或氮的基团的表面活性剂和/或包含含羟基和/或氮的基团的其它化合物，所用的术语“基本上不含”，是指所述组合物包含小于按重量计约50％、40％、30％、25％、20％、15％、10％、5％、2％或小于约1％的包含羟基和/或含氮基团的溶剂、包含羟基和/或含氮基团的表面活性剂和/或包含羟基和/或含氮基团的其它化合物。

本文所用的关于基本上不含羟基和/或氮的基团的溶剂和/或表面活性剂的术语“基本上不含”是指溶剂和/或表面活性剂化合物包含小于约1、2、3、4或约5个含羟基和/或氮的基团/化合物。

例如，本领域技术人员可以通过使用上述方法和本领域已知的其它方法测量羟基和含氮基团的摩尔量，测定亲核性系数和/或测试溶剂或溶剂组合中NFL的降解速率来鉴定用于本发明组合物的合适溶剂或溶剂组合。

希望用于本发明组合物的溶剂和/或表面活性剂是可生物降解的、农业上和/或园艺上可接受的，对人和/或非人动物无毒和/或非植物毒性的。

希望本发明的组合物具有一种或多种以下性质。

优选地，本发明的组合物或本发明的稀释组合物当施用到例如植物叶的目标场所时具有足够的润湿能力。例如，该组合物快速渗透并铺展在叶子上，在叶子表面上不发生组合物的成珠，并且一旦该组合物干燥，在叶子表面上不残留残余物。

优选地，在施用组合物后，一种或多种黑麦草碱生物碱穿透目标场所。用本发明的组合物处理的植物对黑麦草碱生物碱的吸收可以使用上述方法测定。

在本发明的另一个实施方案中，当将组合物配制在种子包衣中时，与从未包衣的种子生长的幼苗相比，自包衣的种子生长的幼苗包含更大量的一种或多种黑麦草碱生物碱。

优选地，一种或多种黑麦草碱生物碱在延长的储存期内保持基本上可溶于本发明的组合物中。例如，一种或多种黑麦草碱生物碱在-20、4、10、15、20、25、30、35、40、45、50、54、55或约60℃的温度下或在环境温度下储存约1、2、3或4周，约1、2、3、4、6、9、12、18、24、36或48个月的时间内，保持基本上可溶于组合物中。

优选地，本发明的组合物基本上可溶于水或用于在施用前稀释组合物的其它载体或助剂中。

4.害虫防治

本发明的组合物，其有效对抗害虫，例如昆虫，并且适用于根据本发明的用途，被鉴定为相对于与本发明的组合物进行比较的对照处理，以统计上显著的量有效减少目标害虫物种的种群的组合物。这样的组合物可被认为具有杀虫功效。如本文所述，目标害虫种群的减少可以通过各种拮抗机制进行。例如，组合物可以使害虫丧失能力，使害虫不育，抑制害虫的生长或发育，和/或优选杀死害虫，或者可以支持或促进也存在的一种或多种其它杀虫剂的生长和杀虫功效，例如与本发明的黑麦草碱生物碱一起存在于组合物中的杀虫真菌(无论单独、同时或顺序)。因此，本发明的组合物可使得或支持杀虫剂使害虫失去能力，使害虫不育和/或优选杀死害虫的能力。本发明的组合物还可以通过使环境(例如施用该组合物的植物或其周围环境)对害虫不利来减少目标害虫的种群。在该实施方案中，可以认为所述组合物充当驱避剂，并且减少所述场所(例如植物或其周围环境)附近的目标害虫的有效种群。

在各种实施方案中，本发明的组合物表现出约5、10、15、20、25、30、35、40、45或更优选至少约50％的杀虫功效，表示为与对照处理相比相关昆虫物种的种群减少的百分比。

本发明的组合物需要杀虫功效。本发明的组合物可具有适于用作控制剂的其它特性。例如，本发明的组合物应该能够以有效的形式储存合理的时间，最终使其能够以有效作为控制剂的形式和浓度施用到目标场所，例如植物或其周围。

本领域技术人员将认识到，本发明的组合物可包含，或者本发明的方法可使用，一种或多种黑麦草碱生物碱的一种或多种官能化变体。黑麦草碱生物碱及其官能化变体的组合也可用于本发明。

本发明人预期本文公开的组合物将发现作为对照组合物的特定用途，所述对照组合物用于针对多种农业、园艺、医学或兽医害虫、昆虫和/或病原体以及在多种环境中的局部和/或系统施用。

对本领域技术人员显而易见的是，本发明的组合物可以配制成合适的形式，如本文所述的那些，用于施用至特定的目标场所。

农业和园艺用途

本发明认识到，许多国家的农业和园艺部门，包括例如美国、新西兰和欧洲许多国家的农业和园艺部门面临增加植物害虫之间的杀虫剂抗性的问题。这在一些调节方案下通过由于调节障碍而降低新化学杀虫剂的可用性以及从市场上除去现有化学杀虫剂而复合。

通过本发明可获得的农药黑麦草碱生物碱的用途提供了解决该问题的方案。

本发明人预期，本文公开的组合物将特别用作在园艺和农业产业中局部和/或系统施用的控制组合物，例如通过施用到大田作物、草、水果和蔬菜、草坪、树木和/或观赏植物。其它主要作物包括但不限于玉米、小麦、大豆、棉花、水稻、油菜(卡诺拉)、葡萄、苹果、梨、樱桃、桃、马铃薯、西红柿、芸苔、壁球、树番茄、草莓、黄瓜、洋葱、辣椒、莴苣、甘蔗、向日葵、黑麦、可可、咖啡、柑橘类水果和南瓜。本文公开的组合物可以配制成用于杀死害虫或控制害虫种群的粉尘、粉末或气溶胶，或其它水性或雾化形式。本文公开的组合物可以预防性地使用，或可选地，一旦在待处理的特定环境中鉴定出目标害虫，可以向环境施用。所述组合物可包含单独的黑麦草碱生物碱或可包含本文公开的黑麦草碱生物碱的各种组合。

不管施用方法如何，活性组分的量以杀虫有效量施用，所述杀虫有效量将根据以下因素而变化：例如待控制的特定目标害虫，特定环境或位置(例如待处理的植物、作物或农业场所)，环境条件，和方法，杀虫活性组合物的比率、浓度、稳定性以及施用量。制剂还可以根据气候条件、环境考虑，和/或施用频率和/或害虫侵染的严重程度而变化。

所描述的组合物可以通过将本发明的组合物任选地与一种或多种其他试剂以及所希望的农业上可接受的载体一起配制来制备。组合物可以在给药前以合适的方式配制，例如冻干、冷冻干燥、干燥，或在水性载体、介质或诸如盐水或其它缓冲液的合适稀释剂中配制。配制的组合物可以是粉剂或颗粒材料的形式，或油(植物或矿物)中的悬浮液，或水或油/水乳液，或作为可湿性粉剂，或与适合农业应用的任何其它载体材料组合。合适的农业载体可以是固体或液体并且是本领域公知的。术语“农业上可接受的载体”涵盖通常用于杀虫剂配制技术中的所有佐剂、惰性组分、分散剂、表面活性剂、增粘剂、粘合剂等；这些是杀虫剂制剂领域技术人员熟知的。制剂可以与一种或多种固体或液体佐剂混合并通过各种方式制备，例如使用常规制剂技术将杀昆虫组合物与合适的佐剂均匀混合、共混和/或研磨。

水-分散性粒剂

在另一个实施方案中，本发明的组合物包含水分散性粒剂。该颗粒包含一种或多种本发明的组合物，任选地与一种或多种其它试剂一起。

粉剂，粉尘和干制剂

在另一个实施方案中，本发明的组合物包含可湿性粉剂、粉尘、干制剂、丸剂或胶体浓缩物。该粉剂包含一种或多种本发明的组合物，任选地与一种或多种其它试剂一起。本发明组合物的这种干燥形式可以配制成在润湿时立即溶解，或者以控释、缓释或其它时间依赖性方式溶解。这样的组合物可以施用于目标害虫或被目标害虫摄取，并且因此可以用于控制害虫的数量或这样的害虫在给定环境中的传播。

水性悬浮液

在另一个实施方案中，本发明的组合物包含一种或多种黑麦草碱生物碱的水性悬浮液，任选地连同一种或多种裂解的或以其他方式杀死的或无活力的内生植物细胞，包括用于产生黑麦草碱生物碱的一种或多种内生植物细胞，包括例如培养滤液、培养物上清液、培养基或其提取物或级分。这样的水性悬浮液可以作为浓缩的储备溶液提供，其在施用之前被稀释，或可选地，作为准备施用的稀释溶液提供。

当本发明的组合物包含完整但死亡的细胞时，这样的组合物可以以多种方式配制。它们可通过与诸如无机矿物(页硅酸盐、碳酸盐、硫酸盐、磷酸盐等)的各种惰性材料或植物材料(粉状玉米芯、稻壳、胡桃壳等)混合，而用作可湿性粉剂、颗粒剂或粉剂。制剂可包括铺展剂-粘附剂佐剂、稳定剂、其它农药添加剂或表面活性剂。液体制剂可以是水基或非水基的，并且用作泡沫、悬浮液、乳油等。所述成分可包括流变剂、表面活性剂、乳化剂、分散剂或聚合物。

多功能制剂

在某些实施方案中，例如当需要防治多种有害生物物种时，本文所述的制剂还可以包含一种或多种其他试剂，诸如一种或多种化学杀虫剂，(诸如化学杀虫剂、杀线虫剂、杀真菌剂、杀病毒剂、杀微生物剂、杀变形虫剂，杀昆虫剂等)，和/或一种或多种具有与本文鉴定的作为杀昆虫剂的黑麦草碱生物碱相同或不同杀昆虫活性或杀昆虫特异性的黑麦草碱生物碱。本发明的组合物还可以与其它处理联合使用，例如肥料、除草剂、防冻剂、表面活性剂、洗涤剂、杀虫皂、休眠油、聚合物和/或缓释或可生物降解的载体制剂，其允许在单次施用制剂后长期给药靶区域。同样地，制剂可以制备成可食用的“诱饵”或制成害虫“诱捕器”以允许组合物的目标害虫摄食或摄取。

本发明的组合物还可以单独或与一种或多种其它试剂组合连续或同时施用于环境位点，所述其它试剂包括一种或多种杀昆虫剂、杀虫剂、化学品、肥料或其它化合物。

本发明的组合物还可以包括一种或多种载体，包括一种或多种农业上可接受的载体。在一个实施方案中，载体，例如农业上可接受的载体，可以是固体或液体。可用于本发明的载体包括通常用于配制农业组合物的任何物质。

在一个实施方案中，农业上可接受的载体可以选自填料、溶剂、赋形剂、表面活性剂、悬浮剂、铺展剂/粘着剂(粘合剂)、消泡剂、分散剂、润湿剂、漂移降低剂、助剂、佐剂或其混合物。

本发明的组合物可通过公认的方法配制成例如浓缩物、溶液、气溶胶、浸渍浴、浸液、乳液、可湿性粉末、可溶性粉末、悬浮液浓缩物、粉剂、颗粒、水可分散颗粒、微胶囊、糊剂、凝胶和其它制剂类型。

这些方法包括将活性成分，与诸如填料、溶剂、赋形剂、表面活性剂、悬浮剂、铺展剂/粘着剂(粘合剂)、消泡剂、分散剂、润湿剂、漂移降低剂、助剂和剂的农业上可接受的载体物质混合和/或研磨。

在一个实施方案中，固体载体包括但不限于，矿土，如硅酸、硅胶、硅酸盐、滑石、高岭土、凹凸棒石粘土、石灰石、石灰、白垩、红玄武土、黄土、粘土、白云石、硅藻土、氧化铝、硫酸钙、硫酸镁、氧化镁，磨碎的塑料，肥料，如硫酸铵、磷酸铵、硝酸铵和尿素，植物产品，如谷物粉、树皮粉、木粉、坚果壳粉，纤维素粉等。作为颗粒的固体载体，以下是合适的：粉碎或分级的天然岩石，例如方解石、大理石、浮石、海泡石和白云石；无机或有机膳食的合成颗粒；有机材料颗粒，例如锯屑、椰子壳、玉米芯、玉米皮或烟草杆；硅藻土，磷酸三钙，粉末状软木或吸收性炭黑；水溶性聚合物，树脂，蜡；或固体肥料。如果需要，这样的固体组合物可以含有一种或多种相容的润湿剂、分散剂、乳化剂或着色剂，当它们是固体时，也可以用作稀释剂。

在一个实施方案中，载体也可以是液体，例如水；醇，特别是丁醇或二醇、以及它们的醚或酯，特别是乙酸丙二酯；酮，特别是丙酮、环己酮、甲基乙基酮、甲基异丁基酮或异佛尔酮；石油馏分，如链烷烃或芳族烃，特别是二甲苯或烷基萘；矿物油或植物油；脂族氯代烃，特别是三氯乙烷或二氯甲烷；芳族氯化烃，特别是氯苯；水溶性或强极性溶剂，例如二甲基甲酰胺、二甲基亚砜或N-甲基吡咯烷酮；液化气；或类似物或其混合物。

在一个实施方案中，表面活性剂包括非离子表面活性剂、阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂和/或两性表面活性剂，并且促进聚集体保留的能力。

铺展剂/粘附剂促进本发明组合物粘附到植物表面的能力。表面活性剂，铺展剂/粘着剂的实例包括但不限于吐温(Tween)和特里同(Triton)(Rhom and Hass公司)，DeepFried^TM，

Pulse，C.Daxoil ^TM，Codac ide

D-C.Tate ^TM，Supamet Oil，

Penetrant，

和Freeway，Citowett ^TM，FortunePlus^TM，Fortune Plus Lite，Fruimec，Fruimec lite，芳香族磺酸的碱金属、碱土金属和铵盐，芳香族磺酸例如木质素磺酸、苯酚磺酸、萘磺酸和二丁基萘磺酸，以及脂肪酸，烷基和烷基芳基磺酸盐，以及烷基、月桂基醚和脂肪醇硫酸盐，以及硫酸化十六烷醇、十七烷醇和十八烷醇的盐，脂肪醇二醇醚的盐，磺化萘和萘衍生物与甲醛的缩合产物，萘或萘磺酸与苯酚和甲醛的缩合产物，聚氧乙烯辛基酚醚，乙氧基化异辛基苯酚，乙氧基化辛基苯酚和乙氧基化壬基苯酚，烷基酚聚乙二醇醚，三丁基苯基聚乙二醇醚，烷基芳基聚醚醇，异十三烷醇，脂肪醇环氧乙烷缩合物，乙氧基化蓖麻油，聚氧乙烯烷基醚，乙氧基化聚氧丙烯，月桂醇聚乙二醇醚缩醛，山梨醇酯，木质素-亚硫酸盐废液与甲基纤维素。当选择包含时，一种或多种农业表面活性剂，如Tween理想地根据已知方案包含在组合物中。

润湿剂降低了组合物中水的表面张力，因此增加了可施加给定量组合物的表面积。润湿剂的实例包括但不限于聚丙烯酸盐，木素磺酸盐，苯酚磺酸盐或萘磺酸盐，环氧乙烷与脂肪醇或脂肪酸或脂肪酯或脂肪胺的缩聚物，取代的酚(特别是烷基酚或芳基酚)，磺基琥珀酸酯的盐，牛磺酸衍生物(特别是烷基牛磺酸盐)，醇的磷酸酯或环氧乙烷与酚的缩聚物的磷酸酯，脂肪酸与多元醇的酯，或上述化合物的硫酸酯、磺酸酯或磷酸酯官能衍生物。

如上所述，本发明的组合物可以单独使用或与一种或多种其它农业试剂组合使用，所述农业试剂包括杀虫剂、杀昆虫剂、杀螨剂、杀真菌剂或杀菌剂(条件是这样的杀真菌剂或杀菌剂对于组合物中存在的任何真菌或细菌无害或无毒)、除草剂、抗生素、抗微生物剂、杀线虫剂、灭鼠剂、昆虫病原体、信息素、引诱剂、植物生长调节剂、植物激素、昆虫生长调节剂、化学不育剂、微生物害虫控制剂、驱避剂、病毒、诱食剂、植物营养物、植物肥料和生物控制剂。当与其它农用药剂组合使用时，两种药剂的施用可以是分开的、同时的或顺序的。这些农用药剂的具体实例是本领域技术人员已知的，并且许多易于商购。

植物营养物的实例包括但不限于氮、镁、钙、硼、钾、铜、铁、磷、锰、钼、钴、硼、铜、硅、硒、镍、铝、铬和锌。

抗生素的实例包括但不限于土霉素和链霉素。

杀真菌剂的实例包括但不限于以下类别的杀真菌剂：甲酰胺、苯并咪唑、三唑、羟基吡啶、二甲酰胺、苯基酰胺、噻二唑、氨基甲酸酯、氰基肟、肉桂酸衍生物、吗啉、咪唑、β-甲氧基丙烯酸酯和吡啶/嘧啶。

杀真菌剂的其它实例包括但不限于天然杀真菌剂、有机杀真菌剂、硫基杀真菌剂、铜/钙杀真菌剂和植物宿主防御的激发子。

天然杀真菌剂的实例包括但不限于全乳、乳清、脂肪酸或酯化脂肪酸。

有机杀真菌剂的实例包括但不限于任何通过有机认证标准的杀真菌剂，例如生物控制剂、天然产物、激发子(一些也可分类为天然产物)和硫和铜杀真菌剂(限于限制使用)。

硫基杀真菌剂的实例是Kumulus^TM DF(巴斯夫，德国)。

铜杀真菌剂的实例是Kocide^TM 2000DF(美国格里芬公司(GriffinCorporation))。

激发子的实例包括但不限于壳聚糖、Bion^TM、BABA(DL-3-氨基-正丁酸、β-氨基丁酸)和Milsana^TM(美国西方农业服务公司(Western Farm Service))。

在一些实施方案中，可以使用非有机杀真菌剂。非有机杀真菌剂的实例包括但不限于Bravo^TM(用于控制瓜类上的PM)；Supershield^TM(Yates，NZ)(用于控制玫瑰上的葡萄孢属和PM)；Topas ^TM 200EW(用于控制葡萄和葫芦上的PM)；Flint^TM(用于控制苹果和瓜类上的PM)；Amistar ^TM WG(用于防治谷物上的锈病和PM)；以及Captan^TM、Dithane^TM、Euparen^TM、Rovral^TM、Scala^TM Shirlan^TM,Switch^TM and Teldor^TM(用于控制葡萄上的葡萄孢霉)。

农药的实例包括但不限于嘧菌酯，联苯三唑醇(bitertanol)，萎锈灵，Cu₂O，霜脲氰(cymoxanil)，环丙唑，嘧菌环胺，二氯氟苯甲酰胺(dichlofluamid)，苯醚甲环唑，烯唑醇，氟环唑，芬必克罗尼(fenpiclonil)，咯菌腈，喹唑醇(fluquiconazole)，氟硅唑，粉唑醇，呋喃西林(furalaxyl)，瓜扎丁(guazatin)，己唑醇，恶霉唑，抑霉唑，亚胺唑(imibenconazole)，环戊唑醇，醚菌酯，代森锰锌，甲霜灵，R-甲霜灵，叶菌唑(metconazole)，恶霜灵(oxadixyl)，净种灵(penconazole)，戊菌隆(pencycuron)，咪鲜胺(prochloraz)，丙环唑(propiconazole)，吡喹酮，SSF-109，螺环菌胺(spiroxam)，戊唑醇，噻菌灵，甲苯磺草胺，咪唑嗪(triazoxide)，三唑酮，三唑醇，氟菌唑，灭菌唑(triticonazole)和烯效唑。

除本文所述真菌菌株以外的生物控制剂的实例是包含奥德曼球藻(Ulocladiumoudemansii)的BotryZen^TM生物控制剂。

本发明的组合物还可以包含宽范围的添加剂，例如用于增强活性成分的稳定剂和渗透剂。添加剂还可以包括有助于在长期储存中保持稳定性的组合物，例如未精制的玉米油，和所谓的逆乳状液，其在外部含有油和蜡的混合物，在内部含有水、藻酸钠和活性物质。

如本领域技术人员所理解的，重要的是所使用的任何添加剂以不干扰活性剂效力的量存在。

组合物可以以多种形式制备。一种制剂包含本发明组合物的粉末形式，其可以撒在植物或其周围。在另一种形式中，将组合物与诸如水的稀释剂混合以形成泡沫、凝胶或浸液，并使用已知方案适当地施用。

也可以使用配制用于诸如注射、摩擦或刷涂的其它施用方法的组合物，实际上可以使用任何已知的技术方法。组合物的间接施用，例如施用于诸如生长培养基、水的植物周围或环境，或作为种子包衣。

如上所述，施用本发明组合物的浓度可以根据以下而变化：最终用途，植物的生理条件；害虫感染的类型(包括昆虫种类)、浓度和程度；温度，季节，湿度，生长季节阶段和植株年龄；施用的常规杀虫剂或其他处理剂(包括杀真菌剂)的数量和类型；以及植物处理(例如采叶和修剪)。

类似地，应当理解，本发明组合物的制剂，例如组合物中一种或多种黑麦草碱生物碱的浓度，组合物中不同黑麦草碱生物碱的组合，组合物中的溶剂、表面活性剂、防腐剂和/或抗氧化剂，组合物中的溶剂、表面活性剂、防腐剂和/或抗氧化剂的浓度，以及在施用之前向浓缩组合物中添加任何稀释剂和/或佐剂可取决于上述因素而变化。特别地，本发明组合物的制剂可以根据施用该组合物的植物或作物的物种、生理条件和生长阶段、以及目标昆虫或害虫的物种而变化。

其它施用技术，包括撒粉、喷洒、浸泡、注射、种子包衣、幼苗包衣、透气、喷雾、雾化、熏蒸、气雾化等也是可行的，并且在某些情况下可能是需要的，例如引起根或茎侵染的害虫，或者用于施用到娇弱的植物或观赏植物。这些施用方法也是本领域技术人员公知的。

本发明的组合物还可以配制成用于预防性或预防性地施用至区域，并且在某些情况下可以施用至宠物、家畜、动物被褥，或在农场设备、粮仓、住宅、或农业或工业设施等之中或周围。

用于环境、系统、局部或叶面施用的组合物的浓度将根据特定制剂的性质、施用方式、环境条件和活性程度而广泛变化。

上述杀虫制剂可以根据需要在一次或多次施用中施用至特定植物或目标区域，每公顷的典型田间施用率为近似约100至约500g/公顷的活性成分，或可替代地，可以使用约500至约1000g/公顷。预期约100g至约1,000g/公顷范围内的所有施用率可用于使用此类杀虫制剂管理、控制和杀死目标昆虫害虫。因此，约100、125、150、200、250、300、350、400、450、500、600、700、800、900g/公顷或约1kg/公顷或更高的活性剂比率可用于上文所述农药制剂的某些农业、工业和家庭应用中。

液体组合物的代表性施用速率包括约50mL至约20L活性剂/公顷的施用速率。因此，可以使用速率为约100、200、300、400、500、600、700、800、900L/公顷，或约1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.5、3.0、3.5或约4.5L/公顷或更多的活性剂。

在另一方面，本发明提供了一种用于防治一种或多种害虫的方法，所述方法包括向植物或其周围施用如本文所述的本发明的组合物。

幼苗通常最容易受到害虫的损害。因此，考虑在出苗前将本发明的组合物施用于新鲜种植的作物，如在出苗时施用。

也考虑在作物循环中在相同或不同时间重复施用。本发明的组合物可以在季节中更早或更晚施用。这可以是开花结束或结果期间。本发明的组合物还可以在收获前立即施用，或在收获后施用，以快速对坏死或衰老的叶、果实、茎、机器收获的茎等建群，例如以防止害虫建群。本发明的组合物还可以在冬季施用于休眠植物以减缓休眠组织上的害虫生长，并提供生长增强。

施用可以在萌芽之前或之后以及收获之前和之后。然而，处理优选在开花和收获之间进行。为了提高功效，优选多次施用(例如，在开花至结果阶段施用2至6次)本发明的组合物。

本发明组合物的再施用也应在下雨后考虑。使用害虫感染性预测模型或感染分析数据，BCA的应用也可以被定时以说明害虫感染风险期。

在各种实施方案中，包含黑麦草碱生物碱的本发明的组合物对于以能够实现例如杀虫功效的功效的剂量率施用它们的植物或植物环境而言是无害的。

在某些方面，本发明的组合物用于防治昆虫害虫，所述昆虫害虫引起许多收获前和收获后疾病，所述疾病侵袭植物部分并降低生长速率、开花、结果和产量，并且可引起患病植物死亡。如本文所用，昆虫害虫包括直接喂饲植物的昆虫，和充当诸如真菌和细菌的植物病原体的载体的昆虫。应当理解，通过控制充当植物病原体载体的昆虫宿主，可以使植物病害的发病率和/或严重性最小化。

困扰园艺作物的主要昆虫害虫的实例包括但不限于蚜虫，粉蚧，粉虱，蛾，蝶类，粉虱，(psillids)，蓟马，臭虫，根虫，象鼻虫，叶蝉和果蝇，例如桃蚜(Myzus persicae)(绿桃蚜虫)，棉蚜(Aphis gossypii Glover)(瓜/棉蚜)，玉米蚜(Rhopalosiphum maidis)(玉米叶蚜虫)，大豆蚜(Aphis glycines Matsumura)(大豆蚜虫)，甘蓝蚜(Brevicorynebrassicae)(甘蓝蚜虫)，南瓜蚜(Anasa tristis)(南瓜蚜虫)；长尾粉蚧Pseudococcuslongispinus(长尾粉蚧)，猩红粉蚧(Pseudococcus calceolariae)(猩红粉蚧)，柑橘粉蚧(Planococcus citri)(柑橘粉蚧)，暗色粉蚧(Pseudococcus viburni)(暗粉介)，温室粉虱(Trialeurodes vaporariorum)(温室粉虱)，烟粉虱(Bemisia tabaci)(银叶白粉虱)；小菜蛾(Plutella xylostella)(小菜蛾)，桔小实蝇(Citripestis sagittiferella)(柑桔果蛾)，棉铃虫(Helicoverpa armigera)(番茄果虫或玉米穗虫)，棉红铃虫(Pectinophoragossypiella)(红铃虫)，马铃薯块茎蛾(Phthorimaea operculella)(马铃薯块茎蛾)，脐橙螟(Amyelois transitella)(脐橙螟)，Cydia pomonella(codling mot)，Cncephasiajactatana(Black-Lyre leafroller)，苹果褐卷蛾(Epiphyas postvittana)(浅棕色苹果蛾)，东方果蛾(Grapholita molesta)(东方果蛾)，亚洲玉米螟(Ostrinia furnacalis)(亚洲玉米螟)，欧洲玉米螟(Ostrinia nubilalis)(European corn borer)，白螟(Scirpophaga excerptalis)(甘蔗顶螟)，蔗螟(Diatraea saccharalis)(蔗螟)，稻秆螟(Chilo plejadellus)(稻秆螟)，斑点棉铃虫(Earias vitella)(斑点棉铃虫)，棉斑实蛾(Earias insulana)(多刺棉铃虫)，草地夜蛾(Spodoptera frugiperda)(草地夜蛾)，斜纹夜蛾(Spodoptera litura)(斜纹夜蛾)；南瓜蔓吉丁虫(Melittia cucurbitae)(南瓜蔓吉丁虫)，(Teia anartoides)(漆色苹果娥(painted apple moth))，粉纹夜蛾(Trichoplusiani)(粉纹夜蛾)，菜青虫(Pieris rapae)(粉蝶)，苍白杆菌(Bactericera cockerelli)(番茄/马铃薯木虱)，柑橘木虱菌(Diaphorina citri)(亚洲柑橘木虱)，柑橘木虱(Triozaerytreae)(非洲柑橘木虱)；暗纹蓟马(Trioza erytreae)(花蓟马)，温室蓟马(Heliothrips haemorrhoidalis)(温室蓟马)，洋葱蓟马(Thrips tabaci)(洋葱蓟马)，玉米蓟马(Heliothrips haemorrhoidalis)(玉米蓟马)；茶翅蝽(Halyomorpha halys)(棕纹蝽)，美洲稻蝽(Oebalus pugnax)(麦蝽)，西部玉米根虫Diabrotica barberi(西部玉米根虫)，北部玉米根虫(Diabrotica barberi)(北部玉米根虫)，南部玉米根虫(Diabroticaundecimpunctata howardi)(南部玉米根虫)，墨西哥玉米根虫(Diabrotica virgiferazeae)(墨西哥玉米根虫)；棉茎黑象甲(Pempheres affinis)(棉茎黑象甲)；绿叶蝉(Nephthattix virescens)(绿叶蝉)，褐飞虱(Nilaparvata lugens)(褐飞虱)；昆士兰实蝇(Bactrocera tryoni)(昆士兰实蝇)。

本发明的方法特别适用于收获前或收获后的植物和植物产品。例如，组合物可应用于上述类型的储存产品，包括水果、蔬菜、切花和种子。合适的应用技术包括上述那些。

与直接施用于植物相反，本发明的组合物可潜在地用于处理或预处理种子或生长培养基。本发明的组合物还可用于植物加工材料，如保护性涂料、盒子和包装纸。

本发明还包括直接用本发明的组合物处理的植物、植物产品、生长培养基和种子。

药物和兽医用途

本发明提供了在人或动物受试者中治疗或预防害虫、寄生虫或昆虫感染的方法，包括施用治疗有效量的本发明的组合物。

害虫、寄生虫或昆虫感染可包括感染或侵染任何人或非人动物内寄生物或外寄生物。

外部寄生虫或外寄生虫包括但不限于臭虫，跳蚤，苍蝇，蚊子，蜱，虱和螨，例如绵羊虱(Bovicola ovis)(绵羊虱)；牛羽虱(Bovicola bovis)；短鼻牛虱(Haematopinuseurysternus)(短鼻牛虱)；蝇属(Hypoderma spp.)；西方角蝇(Haematobia irritansexigua)；栉头蚤属(Ctenocephalides spp.)，例如猫栉头蚤(Ctenocephalides felis)和犬栉头蚤(Ctenocephalides canis)(犬蚤)，尾蚤属(Cochlomiyia spp.)；金蝇属(Chrysomya spp.)；长鼻牛虱(Linognathus vituli)(长鼻牛虱)；人头虱(Pediculushumanus capitis)(人头虱)，人体虱(Pediculus humanus humanus)(人体虱)，阴虱(Pthirus pubis)(毛虱)，人蚤(Pulex irritans)(人蚤)，牛管虱(Solenopotescapillatus)(牛管虱)；畜疥螨(Sarcoptes spp.)(畜疥螨)，包括(骆驼疥螨)Sarcoptesscabiei cams，(猪疥螨)Sarcoptes scabiei suis，(牛疥螨)Sarcoptes scabiei bovis，(人疥螨)Sarcoptes scabiei var.humani；螨属(Psoroptes spp.)，包括羊螨(Psoroptesovis)和欧洲室尘螨Dermatophgoides spp.；微小牛蜱(Boophilus microplus)；和牛毛虱(Damaliniabovis)。

内部寄生虫或体内寄生虫包括但不限于原生动物寄生虫，例如疟原虫(Plasmodium spp.)；锥虫属(Trypanosoma spp.)和艾美球虫属(Eimeria spp.)和寄生蠕虫(蠕虫)。蠕虫包括但不限于绦虫(扁形虫)，线虫(蛔虫)和吸虫(吸虫)，例如毛圆线虫(Trichostrongyloidea)，包括捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)；毛圆线虫属(Trichostrongylus spp.)；网尾线虫属(Dictyocaulus spp.)；蛔虫纲(Ascaridoidea)，包括弓蛔虫属(Toxocara spp.)；圆线虫属(Strongylus spp.)；丝虫纲(Filarioidea)，包括犬恶丝虫病(Dirofilariaimmitis)和盘尾丝虫属(Onchocerca spp)：吸虫(Trematoda)，包括肝片吸虫(Fasciolahepatica)和血吸虫属(Schistosoma spp.)；绦虫属(Taenia spp.)；和莫尼茨绦虫属(Moniezia spp.)；奥斯特线虫属(ostertagia spp.)；细颈线虫属种(Nematodirus spp.)；库柏线虫属(Cooperia spp.)；仰口线虫属(Bunostomum spp.)；结节线虫属(Oesophagostomum spp.)；夏柏特线虫属(Chabertia spp.)，毛首鞭形线虫属(Trichuris spp.)；毛样线虫属(Trichonema spp.)；毛细线虫属(Capillaria spp.)；异刺线虫属(Heterakis spp.)；弓形虫属(Toxocara spp.)；，尖尾线虫属(Oxyuris spp.)；钩口线虫属(Ancylostoma spp)；钩虫属(Uncinaria spp.)；狮弓蛔虫(Toxascaris spp.)；和副蛔虫属(Parascaris spp.)。

本发明的组合物可以单独给药或与一种或多种药学或兽医学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂混合给药，所述赋形剂、载体或稀释剂根据预期的给药途径和标准的药学或兽医学实践选择。

术语“药学上或兽医学上可接受的载体”意指包括但不限于赋形剂、稀释剂或助剂的载体，其可以作为本发明组合物的组分施用于受试者。当以足以递送有效量的通过本发明的方法生产的组合物的剂量施用时，或者当施用另一种杀虫剂时，优选的载体不会降低组合物的活性并且是无毒的。

本发明的组合物可以局部、口服或非肠道给药。

例如，组合物可以口服给药，包括舌下给药，以胶囊、片剂、酏剂、溶液、悬浮液或丸剂的形式配制，以溶解在例如结肠或十二指肠中。制剂可以包含赋形剂，诸如淀粉或乳糖或调味剂或着色剂。

组合物可以肠胃外注射，例如静脉内、肌内或皮下注射。对于肠胃外给药，组合物可以配制在无菌水溶液或悬浮液中，其任选地包含其它物质，例如盐或葡萄糖。

组合物可以以无菌乳膏剂、凝胶剂、浇淋或点涂制剂、混悬剂、洗剂、软膏剂、扑粉、掺入药物的敷料、洗发剂、颈环或皮肤贴剂的形式局部给药。例如，可以将本发明的组合物掺入包含聚乙二醇或液体石蜡的水或油乳液的乳膏中；软膏，其包含白蜡软石蜡基质；具有纤维素或聚丙烯酸酯衍生物或其他合适的粘度改性剂的水凝胶；干粉；具有丁烷、丙烷、HFA或CFC推进剂的气溶胶；敷料，例如纱罗敷料，具有白色软石蜡或聚乙二醇浸渍的纱布敷料，或具有水凝胶、水胶体或藻酸盐膜敷料。组合物还可以作为滴眼剂与合适的缓冲剂、粘度调节剂(例如纤维素衍生物)和防腐剂(例如苯扎氯铵)一起眼内给药。

可通过将活性成分溶解在可接受的液体载体运载体，如丁基二甘醇、液体石蜡或非挥发性酯中，加入或不加入诸如异丙醇的挥发性组分来制备浇淋或点涂制剂。制剂可包含渗透增强剂，包括萜烯，诸如脂肪酸酯、甘油三酯、甘油酯的溶剂，或表面活性剂。该制剂可以是适于直接施用的形式或在施用前需要用适量的水或其它稀释剂稀释的浓缩物形式。浇淋(pour-on)或点涂(spot-on)制剂可通过胶囊化(encapsulation)以在动物表面上留下活性剂残余物来制备。

对于口服给药，胶囊、大丸剂或片剂可以通过将本发明的组合物与合适的细分稀释剂或载体混合来制备，所述稀释剂或载体还含有崩解剂和/或粘合剂，例如淀粉、乳糖、滑石或硬脂酸镁。浸液制剂可以通过将活性成分与分散剂或润湿剂一起分散在水溶液中来制备。

本发明的组合物可以与动物饲料或动物饮用水一起给药，例如通过将组合物或制剂溶解、悬浮或分散在饲料或水中。

对于肠胃外给药，可注射制剂可以制备成无菌溶液或乳剂的形式。

该组合物可与其它抗寄生虫剂联合使用以扩大活性谱或防止抗性的累积。其它合适的抗寄生虫剂的实例包括大环内酯，包括阿维菌素和米尔倍霉素，诸如阿巴美丁，赛克丁，多拉菌素，依立诺克丁，莫昔克丁，伊维菌素和米尔倍霉素；苯并咪唑类，诸如阿苯达唑，坎苯达唑，芬苯达唑，氟苯达唑，甲苯达唑，奥芬达唑，帕苯达唑和奥苯达唑；苯并咪唑前体，诸如非班太尔，硫菌灵和尼托吡明；水杨酰苯胺类，诸如氯氰碘柳胺和氯硝柳胺；咪唑并噻唑类，诸如丁咪唑，甲硝唑，替硝唑，左旋咪唑，双羟萘酸噻嘧啶或四咪唑；四氢嘧啶，诸如莫兰太尔；和六氢吡嗪并异喹啉，诸如吡喹酮。组合物可以与其它抗寄生虫剂分开、同时或依次施用。

本领域技术人员将能够容易地确定用于治疗患有寄生虫感染的动物的合适的给药剂量和频率。

确切的剂量将取决于给药频率和方式，所治疗动物的性别、年龄、体重和一般状况，所治疗病症的性质和严重程度以及所治疗的任何伴发病以及本领域技术人员显而易见的其它因素。

本发明由前述内容组成，并且还设想以下给出实施例的构造，并且决不限制本发明的范围。

实施例

分析方法

用于鉴定和测定本文所述组合物中的含水量和黑麦草碱生物碱浓度的方法是本领域公知的。

通过阅读本说明书，其它合适的方法对于本领域技术人员是显而易见的。例如，可以使用其它色谱方法，例如液相色谱。可以使用其它水分分析方法，例如干燥损失。

烘箱法进行库仑水测定

通过卡尔费歇尔(Karl Fischer(KF))库仑滴定用烘箱取样器测量水含量。

利用烘箱的库仑卡尔费歇尔方法适用于低含水量的样品。碘由含碘试剂通过在发电机电极直接在滴定容器中阳极氧化而电化学产生。所消耗的碘的量以及因此来自样品的水的量与总电流消耗(电流随时间的积分)成比例。

库仑烘箱技术可以用两种不同类型的发电机电极进行：带有或不带有隔膜。隔膜将质子被还原成氢的较小阴极室与碘化物被氧化成碘的较大阳极室隔开。没有隔膜的发电机电极也具有阳极和阴极，但是隔室不是分开的，在这种情况下，必须使用专门设计用于无隔膜电池的试剂。在具有隔膜的电池中的库仑卡尔费歇尔滴定需要两种试剂溶液，阳极电解液和阴极电解液。

许多物质仅在高温下释放它们的水，使得它们不适于直接KF滴定。在这种情况下，取决于样品，水会在100℃-250℃下操作的卡尔费歇尔烘箱中蒸发。然后通过用干燥空气或惰性气体吹扫将其转移到KF滴定池。库仑滴定池填充有相应的试剂溶液。载气必须干燥，例如用0.3nm分子筛干燥。

设备

在该方法中使用的合适设备是：801搅拌器(万通(Metrohm))，874烘箱取样器处理器(Metrohm)，852无隔膜滴定池的滴定仪(Metrohm)，软件堤亚摩(Tiamo)(Metrohm)，6ml具有隔膜的小瓶(Metrohm)，和分析天平AT261δ范围(梅特勒(Mettler))。

试剂

以下细节是合适试剂的实例，可使用替代等效试剂。没有隔膜与烘箱取样器组合的库仑池需要HYDRAL Coulomat AG烘箱并且不需要阴极电解液溶液。对于KF烘箱系统的SST，可以使用34693HYDRANAL Water标准KF烘箱(140℃-160℃)和载气(干燥空气或惰性气体)。

过程

使用卡尔费歇尔烘箱的推荐参数示于表1中。

表1：卡尔费歇尔烘箱推荐参数

对于所分析的每种产品优化工作条件。所选择的温度取决于所研究物质的性质。确定除去水的最佳烘箱温度。温度必须足够高以在5分钟内驱除样品中的水。同时，温度必须足够低以防止可能干扰卡尔费歇尔滴定的样品基质的蒸发，但是温度必须足够高以防止转移管中的冷凝。

升华样品可阻断转移线，因此具有升华倾向的样品不应通过库仑炉技术分析。当样品中存在结晶水时，通常需要升高的温度。

测定

在调节滴定池之后，测定样品容器的盲耗。一式三份测定空样品容器的水含量。对于盲耗必须应用与样品相同的方法条件。

为了测定水含量，通常使用约100mg的样品量。通常进行两次测定。

顺性和SST

提出了以下注入顺序：

C B₁ B₂ B₃ S₁ S₁ S₂ S₂ SST

C＝滴定池的调节

B＝盲耗(1，2，3)

S＝样本(1，2，…n)

SST＝系统适用性测试

作为SST(系统适用性测试)，分析HYDRNAL水标准KF烘箱140℃-160℃(或等同物)。对于SST，烘箱温度设定在140℃，并且SST验收标准：95％至105％的回收率。

评估

仪器测量达到滴定终点所需的时间和电流。乘积(电荷是电流随时间的积分)与产生的碘的量成正比，因此与样品中存在的水量成正比。

黑麦草碱的气相色谱分析

通过气相色谱-火焰离子化检测器(GC-FID)测量NANL、NFL、NAL和黑麦草碱含量。

设备

用于通过气相色谱分析黑麦草碱的合适设备和条件示于表2中。

表2：合适设备和条件

参比和测试溶液的制备

参照物质是黑麦草碱或各黑麦草碱的参照物质的技术混合物。所用内标(IS)是琥珀酸二丁酯，溶剂事乙腈中的2％v/vNH₃(水中浓度)。参比溶液含有约70μg/ml黑麦草碱(NANL、NFL、NAL和黑麦草碱的总和)和300μg/ml IS。

亲核性分析

简单化学体系内的局部亲核特性可以基于公认的亲核指数方法来模拟[Journalof Molecular Structure(分子结构杂志)：Theochem，2009，895，86-91；计算和理论化学，2012，980，49-55]。所得系数构成全局亲核性描述的扩展，N被引入用于环加成反应中的试剂和其它有机分子[Journal of Organic Chemistry()有机化学杂志)2008，73，4615-4624；Journal of Molecular Structure(THEOCHEM)，2008，865，68-72]。

表3中的局部亲核系数反映了相应环状原子的亲核强度。它们基于Fukui函数(使用亲核指数N在理论的DFT/B3LYP/6-31G(d，p)水平下计算)计算，所述Fukui函数是描述施加特定电子变化时分子的前沿分子轨道中的电子密度的函数。所列出的值对应于各候选溶剂中最相关原子的亲核性系数。值越高，亲核性越大。观察到的趋势与观察到的NFL稳定性相关，特别是当与OH计数分析(即甘油，条目3，具有显著高于DMLA条目5的系数)结合时。这些计算在单个分子上进行(在气相中模拟)，并且可能受到进一步的溶剂相互作用的影响。

表3：溶剂中最相关原子的亲核性系数。

具体方法

在DFT-B3LYP/6-31G(d，p)[Journal of Chemical Physics(化学物理杂志)，1993，98，5648-5652；Physical Review(物理综述)B，1988，37，785-789]使用Gaussian09程序的理论水平[高斯公司，2013，瓦灵福德(Wallingford)，康涅狄格州]。在与先前获得的N电子优化几何结构相同的理论水平上，使用非限制开壳方法对N-1电子物质进行能量计算。如在Gaussian09程序中实施的，使用自然布局分析(NPA)[Chemical Review(化学综述)，1988，88，899-926]计算凝聚的Fukui函数。

高斯分析产生HOMO和LUMO能量：HOMO(最高占据分子轨道)和LUMO(最低占据分子轨道)是描述电子在分子的最相关反应状态中的行为的数学函数。HOMO和LUMO能量用于使用本领域已知的方法计算亲核性系数(以电子伏特，eV测量)。

含有多于一种溶剂的溶剂体系的亲核性可以使用相同的方法计算。

实施例1-黑麦草碱稳定性分析

该实施例证明了黑麦草碱生物碱在不同溶剂体系中的化学稳定性。

可以根据公开的国际专利申请WO2016/091987中描述的方法纯化黑麦草碱植物性提取物，其全部内容通过引用并入本文。纯化的黑麦草碱植物性提取物(A1)，和工业级黑麦草碱(粗制植物性提取物)，(TGA1)，(A2)，在不同的溶剂体系中测试，并经受高温储存用于化学稳定性测试。表4和5分别显示A1和A2样品中的黑麦草碱含量。

两种样品都含有三种黑麦草碱生物碱的混合物，N-乙酰基去甲黑麦草碱(NANL)、N-乙酰基黑麦草碱(NAL)和N-甲酰基黑麦草碱(NFL)，它们是植物衍生的天然化合物。使用GC-FID进行分析以确定NANL、NAL、NFL和黑麦草碱的量。A2还含有其它天然组分，如这里未分析的碳水化合物。

表4：A1中黑麦草碱含量。

表5：A2中黑麦草碱含量。

在各种不同的溶剂中制备20％(w/w)浓缩的黑麦草碱溶液(单独体系，没有评估溶剂混合物)。仅使其中黑麦草碱以20％(w/w)的浓度溶解(通过目测)的体系经受高温储存测试。

测量在54℃下储存2周后A1和A2中NFL的降解。结果分别如表6和表7所示。图3和4分别显示纯化和粗提取物的NFL相对于来自溶剂和水的总羟基当量的降解。通过将溶剂中OH基团的摩尔数除以NFL的摩尔数来计算溶剂中相对于NFL的当量OH基团。通过将水的摩尔数除以NFL的摩尔数来计算相对于NFL的水当量。相对于NFL的总当量OH基团是溶剂中相对于NFL的当量OH基团和相对于NFL的当量水的总和。

表6：20％(w/w)由纯化提取物(A1)制备的黑麦草碱溶液在54℃2周后的化学稳定性(NFL损失)。

表7：在54℃20％(w/w)用含有约20％水的粗提取物(A2)制备的黑麦草碱溶液2周后的化学稳定性(NFL损失)。

并非所有鉴定为A1的良好溶剂(纯化的黑麦草碱植物性提取物)都能够在测试浓度下溶解A2(粗提取物/TGA1)。通过卡尔费歇尔滴定测量所有体系的水含量。

从A1的数据可以看出，相对于NFL的总羟基当量越高，亲核越多，NFL降解越高。由A1制备的所有20％黑麦草碱非水浓缩溶液显示类似量的痕量水(约1％)。

由粗提取物(A2)制备的所有20％的黑麦草碱浓缩溶液显示出在11.7％和18.8％之间变化的水含量。观察到与A1类似的趋势，相对于NFL的总OH当量越高，越亲核，NFL降解越高。

NFL降解为黑麦草碱的水平取决于总OH基团相对于NFL的摩尔当量和体系的亲核性系数(OH当量越高，体系越亲核，在相同测试条件下的降解越高)。在DMLA中观察到非常少的NFL降解。一些溶剂，如DMLA或MPEGS，显示出对TGAI的某种稳定作用。

NANL和NAL组分在测试条件下是化学稳定的。

当存在于工业级(粗提取物)A2中时，在相同的测试条件下，NFL与存在于纯化样品A1中的NFL相比经历更多的分解。不希望受任何理论的束缚，本发明人相信粗提取物中的其它组分(即碳水化合物等)可能影响稳定性。

实施例2-水清除剂的作用

该实施例研究了NFL在二甲基乳酰胺(DMLA)中的稳定性。

使用DMLA中70℃的1％w/w溶液A1。在将温度升高至70℃之前，将溶液用

分子筛(水清除剂)处理以确保体系无水。表8显示了在70℃下13天后在DMLA(1％w/w)中的A1稳定性。

表8：A1在70℃下13天后在DMLA(1％w/w)中的稳定性。

当用分子筛除去残余水时，在70℃下测试13天后，在A1中没有观察到降解。

实施例3-固体制剂中的黑麦草碱

本实施例研究A2在固体制剂中的稳定性。

A2在80℃下在来自梅特勒托利多(Mettler Toledo)的卤素水分分析仪HR73上干燥。一旦重量稳定，相当于约19.4％(w/w)的重量损失，就假定除去所有的水。收集样品并在54/-18℃下储存测试2周。

没有观察到NFL降解，表明化学稳定性。

实施例4-水中的黑麦草碱

本实施例研究了在水存在下NFL降解为黑麦草碱，以及pH和温度对降解动力学的影响。

在本研究中使用不同pH和0.2M缓冲液的纯化的黑麦草碱提取物的1％w/w溶液。在各种pH下使用的缓冲液如表9所示。溶液保持在54℃(±1℃)和70℃(±1℃)并且pH保持在目标pH(±0.2pH单位)。在2-3周期间内定期取样并通过GC-FID分析以测定NFL强度。

表9：制备用于NFL水解稳定性研究的缓冲液配方。

NFL在70℃和50℃降解成黑麦草碱分别如图1和2所示。因为在研究期间NANL和NAL成分在化学上是稳定的，但pH 2和10除外，所以只报道了NFL数据，从24h开始观察到很小的降解。

在70℃时，pH4和乙酸衍生的缓冲液的组合产生最大的稳定性，在170小时内NFL降解为黑麦草碱最低。增加或降低pH导致稳定性显著降低。pH4的柠檬酸缓冲液导致较低的稳定性。在pH2.6时，NFL的稳定性在约100小时后达到稳定。

在50℃时，总体降解速率降低并且作为pH的函数的总体趋势保持一致。

在50℃和70℃处，体系中使用的缓冲液影响NFL到黑麦草碱的转换。柠檬酸基体系显示出比乙酸衍生的缓冲液更高的降解。

实施例5-黑麦草碱功效分析

该实施例研究了包含NFL的制剂在储存后在不同溶剂体系中的功效。

制备在各种溶剂体系中包含20％黑麦草碱的制剂，并如实施例1所述在54℃下加速储存两周。测试的溶剂列于表11中。

储存后，将制剂在水中稀释至浓度为250ppm的总黑麦草碱生物碱，并迅速测试其与桃蚜接触生物测定的功效。制备包含当量的稀释在水中的溶剂的制剂作为对照。

包括未经受加速储存条件且稀释至250ppm的包含新鲜A2的组合物作为阳性对照。用每种稀释的制剂处理三块板，每块板包含30只蚜虫。

表11：测试的溶剂

溶剂编号	溶剂
		1	水
2	甘油
		3	DL-乳酸
4	DMSO
		5	乙腈
6	苯甲酸丁酯
		7	苯乙酮
8	环己醇
		9	苯甲醇
10	Dowanol DPM
		11	丙二醇
12	PEG300
		13	PEG400
14	MPEG350
		15	MPEG550
16	Dowanol EPH
		17	DMLA
18	Purasolv EL
		18	柠檬酸三乙酯
20	苯甲酸丁酯
		21	碳酸甘油酯

切下白菜叶并浸入含有稀过氧化氢的水中1小时。然后将叶片干燥并颠倒放置在冷却的小琼脂板上。将来自保持在小麦植物上的菌落的蚜虫置于具有白菜插条的小琼脂平板上，然后使用波特(Potter)喷雾塔喷雾。使用校准的和水平的波特塔用处理物喷雾蚜虫，以在板上得到相等的样品分布。喷淋塔在每次处理之间用两股乙醇和一股水洗涤。喷雾后，将平板用网状盖加顶并用石蜡膜密封。然后将板在具有84％湿度、16小时光照/8小时黑暗的23℃下培养72小时。每24小时对蚜虫的发病率和死亡率进行评分。

结果表明，含有溶剂1-3的制剂蚜虫死亡率较低。

工业应用

本发明的组合物和方法在广泛的农业、园艺、医学和兽医应用中具有效用，例如向园艺专家提供控制植物害虫的有用手段，并且提供用于治疗或预防人或非人动物中的昆虫感染或侵染的疗法。

Claims (28)

1.一种组合物，其包含至少10g/L的一种或多种具有式[I]结构的黑麦草碱(loline)生物碱：

其中R＝H或CH₃且R'＝H、CH₃、CHO或COCH₃，所述一种或多种黑麦草碱生物碱包含具有式[II]结构的N-甲酰基黑麦草碱：

和一种或多种溶剂；其中

a)所述组合物的总羟基和含氮基团与N-甲酰基黑麦草碱的摩尔比小于20，或

b)所述组合物的总羟基和含氮基团与N-甲酰基黑麦草碱的摩尔比大于20，并且其中所述组合物的羟基或含氮基团的亲核性系数小于0.6eV；

其中所述含氮基团选自氨、伯胺基、仲胺基或其混合物；

其中所述一种或多种溶剂选自由以下组成的组：

a)聚亚烷基二醇、或其醚或酯；

b)单亚烷基二醇；

c)式R²⁵R²⁶R²⁷N的胺，其中R²⁵、R²⁶和R²⁷各自独立地选自氢或脂族基团，或R²⁶和R²⁷与它们所连接的氮原子一起形成5至8元杂环基环，其任选包含另外的杂原子；

d)单亚烷基二胺；

e)式CH₃CH(OH)C(＝O)NR³R⁴的酰胺，其中R³和R⁴各自独立地选自氢、C_1-6烷基、C_2-6烯基或C_3-6环烷基，其各自任选地被至多三个独立地选自苯基、羟基、C_1-5烷氧基、吗啉基和NR⁵R⁶的取代基取代，其中R⁵和R⁶各自独立地选自C_1-3烷基，或任选地被至多三个独立地选自C_1-3烷基的取代基取代的苯基；或R³和R⁴与它们所连接的氮原子一起形成吗啉基、吡咯烷基、哌啶基或氮杂环庚烷基环，其各自任选被至多三个各自独立地选自C_1-3烷基的取代基取代；

f)脂族醇；

g)脂环族醇；

h)芳族醇；

i)三醇或其醚、酯或碳酸酯；

j)单酯；

k)二酯；

l)三酯；

m)腈；以及

n)砜。

2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述具有式[II]结构的N-甲酰基黑麦草碱是至少部分纯化或分离的。

3.根据权利要求1所述的组合物，其中当在54℃(1个大气压(atm))下储存至少两周时，存在于所述组合物中的N-甲酰基黑麦草碱的浓度降低小于10％。

4.根据权利要求1所述的组合物，其中所述一种或多种溶剂的羟基或含氮基团的亲核性系数小于0.5eV。

5.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述一种或多种黑麦草碱生物碱选自包含以下的组：黑麦草碱、去甲黑麦草碱、N-乙酰基黑麦草碱(NAL)、N-乙酰基去甲黑麦草碱(NANL)和N-甲基黑麦草碱(NML)、N-甲酰基去甲黑麦草碱、或它们中任意两种或更多种的组合。

6.根据权利要求5所述的组合物，其中所述组合物包含N-甲酰基黑麦草碱(NFL)、N-乙酰基黑麦草碱(NAL)和N-乙酰基去甲黑麦草碱(NANL)。

7.根据权利要求6所述的组合物，其中[NANL]:[NFL]:[NAL]的重量比为1:12:1至2:5:3。

8.根据权利要求1所述的组合物，其包含至少5g/L的具有式[II]结构的N-甲酰基黑麦草碱。

9.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物包含至少50g/L的具有式[I]结构的黑麦草碱生物碱。

10.根据权利要求1所述的组合物，其中所述具有式[II]结构的N-甲酰基黑麦草碱和/或所述一种或多种具有式[I]结构的黑麦草碱生物碱是纯的。

11.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物不含非黑麦草碱植物来源的生物碱或物质。

12.根据权利要求1所述的组合物，所述组合物由N-甲酰基黑麦草碱、任选地与一种或多种式[I]的黑麦草碱生物碱和一种或多种溶剂一起组成。

13.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物的总羟基和含氮基团与N-甲酰基黑麦草碱的摩尔比小于10；其中所述含氮基团选自氨、伯胺基、仲胺基或其混合物。

14.根据权利要求1所述的组合物，其中所述一种或多种溶剂包含至少10％w/w的所述组合物。

15.根据权利要求1所述的组合物，其中所述一种或多种溶剂选自包含以下的组：醇、酯、醚、碳酸酯、胺、酰胺、腈和砜。

16.根据权利要求1至15中任一项所述的组合物，其中所述一种或多种溶剂选自包含以下的组：

a)式R¹⁰O-[(C_1-6亚烷基)O]_x-R¹的聚亚烷基二醇、或其醚或酯，其中R¹和R¹⁰各自独立地选自氢、脂族、脂环族、酰基、芳基或芳基脂族，并且x是2至140的整数；

b)式R²⁰O-(C_1-6亚烷基)O-R²的单亚烷基二醇，其中R²⁰和R²各自独立地选自氢、脂族、脂环族、酰基、芳基或芳基脂族；

c)式R³¹NH-(C_1-6亚烷基)NR³⁰-R³²的单亚烷基二胺，其中R³¹和R³²各自独立地选自氢、脂族、脂环族、酰基、芳基或芳脂族，并且R³⁰选自氢或脂族；

d)式R⁴⁰OR⁴¹的脂族醇，其中R⁴⁰是脂族的，并且R⁴¹是氢、脂族的或酰基；

e)C_5-8环烷基醇；

f)芳基脂族醇；

g)式R⁷⁰OCH₂CH(OR⁷¹)CH₂OR⁷²的三醇或其醚、酯或碳酸酯，其中R⁷⁰、R⁷¹和R⁷²各自独立地选自氢、脂族、脂环族、芳基、芳基脂族、酰基，或R⁷¹和R⁷²与它们所连接的氧一起形成5元环；

h)式R⁷⁷C(O)OR¹⁷的单酯，其中R⁷⁷和R¹⁷各自独立地选自脂族、脂环族、芳基或芳脂族基团，其各自任选被一个或多个羟基取代；

i)式R¹⁹OC(O)C_1-6烷基C(O)OR¹⁸的二酯，其中R¹⁹和R¹⁸各自独立地选自脂族、脂环族、芳基或芳脂族基团；

j)式

的三酯：

其中R¹⁰、R¹¹和R²²各自独立地为脂族环脂族、芳基或芳基脂族基团，且R²¹为氢或羟基；

k)式R¹²-CN的腈，其中R¹²是脂族、脂环族、芳基或芳基脂族基团；

以及

l)式R¹⁵SO₂R¹⁶的砜，其中R¹⁵和R¹⁶各自独立地选自脂族、脂环族、芳基、芳基脂族。

17.根据权利要求1所述的组合物，其中所述一种或多种溶剂选自包含以下的组：二甲基乳酰胺、二丙二醇甲醚、乙二醇苯基醚、苯乙酮、环己醇、聚乙二醇、聚乙二醇甲醚、琥珀酸二甲酯、戊二酸二甲酯、己二酸二甲酯、苯甲酸丁酯、柠檬酸三乙酯、碳酸甘油酯、乙二醇、丙二醇、乳酸2-乙基己酯和苯甲醇。

18.根据权利要求1所述的组合物，其中所述一种或多种溶剂选自包含以下的组：二甲基乳酰胺、乙二醇苯基醚、分子量为100-6000的聚乙二醇、分子量为100-1000的聚乙二醇甲基醚、琥珀酸二甲酯、戊二酸二甲酯、己二酸二甲酯、苯甲酸丁酯、柠檬酸三乙酯、碳酸甘油酯、乳酸2-乙基己酯和苯甲醇。

19.根据权利要求17所述的组合物，其中所述一种或多种溶剂之一是二甲基乳酰胺。

20.根据权利要求1所述的组合物，其中所述一种或多种溶剂的羟基或含氮基团的亲核性系数小于0.3eV；其中所述含氮基团选自氨、伯胺基、仲胺基或其混合物。

21.根据权利要求1所述的组合物，其中所述一种或多种溶剂包括非水性的溶剂体系。

22.根据权利要求1所述的组合物，其中所述一种或多种溶剂包括含有小于5％w/w水的溶剂体系。

23.根据权利要求1所述的组合物，其中当所述组合物的总羟基和含氮基团与N-甲酰基黑麦草碱的摩尔比小于10时，且所述组合物的羟基或含氮基团的亲核性系数小于0.6eV；其中所述含氮基团选自氨、伯胺基、仲胺基或其混合物。

24.一种制备根据权利要求1至23中任一项所述的组合物的方法，所述方法包括将一种或多种黑麦草碱生物碱与一种或多种溶剂混合以形成组合物的步骤，其中所述组合物不含包含羟基的溶剂。

25.一种赋予植物系统害虫抗性的方法，所述方法包括提供根据权利要求1至23中任一项所述的组合物并将所述组合物局部施用于所述植物，由此提供所述植物对所述一种或多种黑麦草碱生物碱的吸收以赋予系统害虫抗性。

26.一种用于防治一种或多种昆虫害虫的方法，所述方法包括向植物或其周围施用根据权利要求1至23中任一项所述的组合物。

27.一种防治一种或多种昆虫的方法，所述方法包括使所述一种或多种昆虫与有效量的根据权利要求1至23中任一项所述的组合物接触。

28.根据权利要求1至23中任一项所述的组合物在制造用于防治一种或多种昆虫害虫的制剂中的用途。

Images