CN110882315A - 一种预防结肠癌的地榆提取物及其制备方法与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种预防结肠癌的地榆提取物及其制备方法与应用，属于中药有效成分提取技术领域。为解决现有地榆提取物无法达到精细化加工与应用的问题，本发明提供了一种含有三萜类化合物和酚类化合物的预防结肠癌的地榆提取物，该提取物经醇提、用水、30％乙醇和90％的乙醇依次洗脱，收集90％乙醇洗脱液，得到含有三萜类化合物的地榆提取物；收集30％乙醇洗脱液，得到含有酚类化合物的地榆提取物，将所得两种地榆提取物混合即得含有三萜类化合物和酚类化合物的地榆提取物。由于本发明地榆提取物具有抑制结肠癌细胞生长的作用，因此可用于制备预防结肠癌药物。本发明将化学成分、药效和作用机制相结合，实现了地榆的精细化加工与应用。

Description

一种预防结肠癌的地榆提取物及其制备方法与应用
技术领域
本发明属于中药有效成分提取物技术领域，尤其涉及一种预防结肠癌的地榆提取物及其制备方法与应用。
背景技术
肠的慢性炎症，可诱发癌变，长期炎症浸润作用下，局部组织反复脱落、增生、渗液极易引起肉芽增生，发展成结肠癌。高达20-30％的肠癌是由慢性炎症引起的。
地榆，蔷薇科(Rosaceae)地榆属(Sanguisorba)植物地榆(Sanguisorbaofficinalis L.)及长叶地榆(Sanguisorba officinalis var longifolia)的干燥根，主要功能为凉血止血、解毒敛疮，临床上广泛用于治疗结肠炎、溃疡性结肠炎、肾盂肾炎以及内外科止血、烧烫伤等。
地榆中分离得到的化学成分主要为三萜及其苷类、鞣质类、黄酮类及酚类成分等。地榆的根含有大量三萜及其苷类，含量约2.4％-4.0％。地榆中的三萜类成分及其皂苷能促进小鼠骨髓细胞体外增殖，抑制小鼠骨髓有核细胞和外周血白细胞、红细胞以及血小板的数量。
由于以往对于地榆提取物的研究主要针对地榆总苷，对总苷中具体的化学成分和药理作用研究较少，并未将其化学成分、药效和作用机制有机的结合起来，也就无法从地榆所含的大量不同种类的有效成分中提取到能够有针对性的预防或治疗不同类型疾病的更高效的提取物，严重限制了地榆的精细化加工与应用。
发明内容
为解决现有地榆提取物无法达到精细化加工与应用的问题，本发明提供了一种预防结肠癌的地榆提取物及其制备方法与应用。
本发明的技术方案：
一种预防结肠癌的地榆提取物，三萜类化合物在提取物中的质量百分含量不低于10％，所述三萜类化合物包括2-oxo-3α,19α-二羟基-齐墩-12-烯-28-酸-β-D-葡萄糖酯、野蔷薇苷、地榆皂苷I、3-β-O-α-L-阿拉伯糖基-乌苏-12,18(19)-二烯-28-酸β-D-葡萄糖酯、3-β-O-α-L-阿拉伯糖基-乌苏-12,19(29)-二烯-28-酸β-D-葡萄糖酯、3β，l9α-二羟基乌苏-12-烯-28-酸β-D-葡萄糖酯、坡模酮酸、野鸦椿酸、2α,3α,-二羟基乌苏-12,19(29)-二烯-28-酸β-D-葡萄糖酯、1β-羟基蔷薇酸、3β,19α-二羟基-12-乌苏烯-28-酸、2α-羟基齐墩果酸。
一种预防结肠癌的地榆提取物的制备方法，按地榆与50～90％的乙醇溶液的质量体积比1g:10～20mL将地榆加入乙醇溶液，80℃回流提取1～2h，共提取1～3次，合并提取液并将其减压浓缩至稠膏状，加入适量纯净水混悬均匀，将所得混悬液加入大孔吸附树脂色谱柱进行吸附，用水、90％乙醇依次进行洗脱，收集90％乙醇洗脱液，浓缩，得到含有三萜类化合物的地榆提取物。
一种预防结肠癌的地榆提取物，三萜类化合物在提取物中的质量百分含量不低于10％，所述三萜类化合物包括2-oxo-3α,19α-二羟基-齐墩-12-烯-28-酸-β-D-葡萄糖酯、野蔷薇苷、地榆皂苷I、3-β-O-α-L-阿拉伯糖基-乌苏-12,18(19)-二烯-28-酸β-D-葡萄糖酯、3-β-O-α-L-阿拉伯糖基-乌苏-12,19(29)-二烯-28-酸β-D-葡萄糖酯、3β，l9α-二羟基乌苏-12-烯-28-酸β-D-葡萄糖酯、坡模酮酸、野鸦椿酸、2α,3α,-二羟基乌苏-12,19(29)-二烯-28-酸β-D-葡萄糖酯、1β-羟基蔷薇酸、3β,19α-二羟基-12-乌苏烯-28-酸、2α-羟基齐墩果酸；酚类化合物在提取物中的质量百分含量不低于30％，所述酚类化合物包括没食子酸、地榆素H-4、儿茶素、甲基6-O-没食子酰甲基-β-D-吡喃葡萄糖、咖啡酸、丁香酸、没食子酸乙酯、3,4-二羟基-5-甲氧基苯甲酯、阿魏酸、鞣花酸、3,3-二羟基鞣花酸。
一种预防结肠癌的地榆提取物的制备方法，按地榆与50～90％的乙醇溶液的质量体积比1g:10～20mL将地榆加入乙醇溶液，80℃回流提取1～2h，共提取1～3次，合并提取液并将其减压浓缩至稠膏状，加入适量纯净水混悬均匀，将所得混悬液加入大孔吸附树脂色谱柱进行吸附，用水、30％乙醇和90％乙醇依次进行洗脱，收集90％乙醇洗脱液，浓缩，得到含有三萜类化合物的地榆提取物；收集30％乙醇洗脱液，浓缩，得到含有酚类化合物的地榆提取物，将所得两种地榆提取物混合即得含有三萜类化合物和酚类化合物的地榆提取物。
一种预防结肠癌的含有三萜类化合物的地榆提取物，包含如下质量百分含量的三萜类化合物：地榆皂苷I：8.11％、3-β-O-α-L-阿拉伯糖基-乌苏-12，18(19)-二烯-28-酸β-D-葡萄糖酯：3.60％、3β-O-α-L-阿拉伯糖基-乌苏-12，19(29)-二烯-28-酸β-D-葡萄糖酯：6.01％、野蔷薇苷：2.63％、3α，l9α-二羟基乌苏-12-烯-28-酸β-D-葡萄糖酯：7.55％、坡模酸：4.02％、1β-羟基蔷薇酸：4.96％和2α，3α-二羟基乌苏-12，19(29)-二烯-28-酸β-D-葡萄糖酯：1.56％
一种预防结肠癌的含有酚类化合物的地榆提取物，包含如下质量百分含量的酚类化合物：食子酸：3.23％、咖啡酸：0.91％、丁香酸：0.98％、3，4-二羟基-5-甲氧基苯甲酸酯：0.63％、阿魏酸：1.85％和鞣花酸：2.68％。
一种预防结肠癌的含有三萜类化合物和酚类化合物的地榆提取物，由含有三萜类化合物的地榆提取物与含有酚类化合物的地榆提取物等质量混合制成，其中含有三萜类化合物的地榆提取物包含如下质量百分含量的三萜类化合物：地榆皂苷I：8.11％、3-β-O-α-L-阿拉伯糖基-乌苏-12，18(19)-二烯-28-酸β-D-葡萄糖酯：3.60％、3β-O-α-L-阿拉伯糖基-乌苏-12，19(29)-二烯-28-酸β-D-葡萄糖酯：6.01％、野蔷薇苷：2.63％、3α，l9α-二羟基乌苏-12-烯-28-酸β-D-葡萄糖酯：7.55％、坡模酸：4.02％、1β-羟基蔷薇酸：4.96％和2α，3α-二羟基乌苏-12，19(29)-二烯-28-酸β-D-葡萄糖酯：1.56％；含有酚类化合物的地榆提取物包含如下质量百分含量的酚类化合物：食子酸：3.23％、咖啡酸：0.91％、丁香酸：0.98％、3，4-二羟基-5-甲氧基苯甲酸酯：0.63％、阿魏酸：1.85％和鞣花酸：2.68％。
一种预防结肠癌的含有三萜类化合物的地榆提取物在制备预防结肠癌药物中的应用。
进一步的，所述预防结肠癌药物包含含有三萜类化合物的地榆提取物及药学上可接受的辅料。
进一步的，所述预防结肠癌药物为口服制剂，所述口服制剂为胶囊剂、片剂或颗粒剂。
一种预防结肠癌的含有三萜类化合物和酚类化合物的地榆提取物在制备预防结肠癌药物中的应用。
进一步的，所述预防结肠癌药物包含含有三萜类化合物和酚类化合物的地榆提取物及药学上可接受的辅料。
进一步的，所述预防结肠癌药物为口服制剂，所述口服制剂为胶囊剂、片剂或颗粒剂。
本发明的有益效果：
本发明提供的预防结肠癌的地榆提取物对结肠癌细胞生长具有抑制作用，初步研究表明含有三萜类化合物的地榆提取物可以调节NF-kB的信号通路，含有酚类化合物的地榆提取物可以调节结肠肿瘤细胞HT29的Nrf2信号通路，从而达到预防结肠癌的目的。
本发明对地榆提取物中所含8种三萜类化合物和6种酚类化合物进行准确的定量分析，并以此为依据对地榆中三萜类化合物和酚类化合物的提取方法进行了优化，进一步提高了地榆中有效成分的提取效率。
本发明对地榆药材所含有效成分做了精细化加工，将其中对结肠癌细胞生长具有抑制作用的含有三萜类化合物和酚类化合物的提取物有针对性的应用于制备预防结肠癌的药物，将化学成分、药效和作用机制有机的结合起来，为地榆的精细化加工与应用提供了新的思路。
附图说明
图1为实施例6提取的含有三萜类化合物的地榆提取物-2中8种三萜类化合物的高效液相色谱图；
图2为实施例6提取的含有酚类化合物的地榆提取物-2中6种酚类化合物的高效液相色谱图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的技术方案做进一步的说明，但并不局限于此，凡是对本发明技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，均应涵盖在本发明的保护范围中。
实施例1
一种预防结肠癌的地榆提取物，三萜类化合物在提取物中的质量百分含量不低于10％，所述三萜类化合物包括2-oxo-3α,19α-二羟基-齐墩-12-烯-28-酸-β-D-葡萄糖酯、野蔷薇苷、地榆皂苷I、3-β-O-α-L-阿拉伯糖基-乌苏-12,18(19)-二烯-28-酸β-D-葡萄糖酯、3-β-O-α-L-阿拉伯糖基-乌苏-12,19(29)-二烯-28-酸β-D-葡萄糖酯、3β，l9α-二羟基乌苏-12-烯-28-酸β-D-葡萄糖酯、坡模酮酸、野鸦椿酸、2α,3α,-二羟基乌苏-12,19(29)-二烯-28-酸β-D-葡萄糖酯、1β-羟基蔷薇酸、3β,19α-二羟基-12-乌苏烯-28-酸和2α-羟基齐墩果酸。
实施例2
一种预防结肠癌的地榆提取物，含有三萜类化合物和酚类化合物；其中三萜类化合物在提取物中的质量百分含量不低于10％，所述三萜类化合物包括2-oxo-3α,19α-二羟基-齐墩-12-烯-28-酸-β-D-葡萄糖酯、野蔷薇苷、地榆皂苷I、3-β-O-α-L-阿拉伯糖基-乌苏-12,18(19)-二烯-28-酸β-D-葡萄糖酯、3-β-O-α-L-阿拉伯糖基-乌苏-12,19(29)-二烯-28-酸β-D-葡萄糖酯、3β，l9α-二羟基乌苏-12-烯-28-酸β-D-葡萄糖酯、坡模酮酸、野鸦椿酸、2α,3α,-二羟基乌苏-12,19(29)-二烯-28-酸β-D-葡萄糖酯、1β-羟基蔷薇酸、3β,19α-二羟基-12-乌苏烯-28-酸和2α-羟基齐墩果酸。酚类化合物在提取物中的质量百分含量不低于30％，所述酚类化合物包括没食子酸、地榆素H-4、儿茶素、甲基6-O-没食子酰甲基-β-D-吡喃葡萄糖、咖啡酸、丁香酸、没食子酸乙酯、3,4-二羟基-5-甲氧基苯甲酯、阿魏酸、鞣花酸和3,3-二羟基鞣花酸。
实施例3
一种预防结肠癌的地榆提取物，含有三萜类化合物，所述三萜类化合物在提取物中的质量百分含量不低于10％，所述三萜类化合物包括地榆皂苷I、3-β-O-α-L-阿拉伯糖基-乌苏-12，18(19)-二烯-28-酸β-D-葡萄糖酯、3β-O-α-L-阿拉伯糖基-乌苏-12，19(29)-二烯-28-酸β-D-葡萄糖酯、野蔷薇苷、3α，l9α-二羟基乌苏-12-烯-28-酸β-D-葡萄糖酯、坡模酸、1β-羟基蔷薇酸和2α，3α-二羟基乌苏-12，19(29)-二烯-28-酸β-D-葡萄糖酯。
实施例4
一种预防结肠癌的地榆提取物，含有三萜类化合物和酚类化合物，其中三萜类化合物在提取物中的质量百分含量不低于10％，所述三萜类化合物包括地榆皂苷I、3-β-O-α-L-阿拉伯糖基-乌苏-12，18(19)-二烯-28-酸β-D-葡萄糖酯、3β-O-α-L-阿拉伯糖基-乌苏-12，19(29)-二烯-28-酸β-D-葡萄糖酯、野蔷薇苷、3α，l9α-二羟基乌苏-12-烯-28-酸β-D-葡萄糖酯、坡模酸、1β-羟基蔷薇酸和2α，3α-二羟基乌苏-12，19(29)-二烯-28-酸β-D-葡萄糖酯；酚类化合物在提取物中的质量百分含量不低于30％，所述酚类化合物包括没食子酸、咖啡酸、丁香酸、3，4-二羟基-5-甲氧基苯甲酸酯、阿魏酸和鞣花酸。
实施例5
本实施例提供了一种地榆提取物的制备方法：
本实施例样品地榆购自于安国市同義中药饮片有限公司。取地榆药材粉碎，称取3g，置于具塞锥形瓶中，精密加入30mL体积浓度为50％的乙醇连续80℃加热回流提取1h，共提取3次，合并提取液并将其减压浓缩至稠膏状，加入适量纯净水混悬均匀，将所得混悬液加入D101大孔吸附树脂色谱柱进行吸附，用水、30％乙醇和90％的乙醇依次进行洗脱，收集90％乙醇洗脱液，浓缩，得到含有三萜类化合物的地榆提取物-1，收集30％乙醇洗脱液，浓缩，得到含有酚类化合物的地榆提取物-1’。
含有三萜类化合物的地榆提取物-1包含如下质量百分含量的三萜类化合物：地榆皂苷I：6.03％、3-β-O-α-L-阿拉伯糖基-乌苏-12，18(19)-二烯-28-酸β-D-葡萄糖酯：2.80％、3β-O-α-L-阿拉伯糖基-乌苏-12，19(29)-二烯-28-酸β-D-葡萄糖酯：4.02％、野蔷薇苷：1.86％、3α，l9α-二羟基乌苏-12-烯-28-酸β-D-葡萄糖酯：5.19％、坡模酸：2.56％、1β-羟基蔷薇酸：2.39％、2α，3α-二羟基乌苏-12，19(29)-二烯-28-酸β-D-葡萄糖酯：0.86％。
含有酚类化合物的地榆提取物-1’包含如下质量百分含量的酚类化合物：食子酸：0.82％、咖啡酸：0.69％、丁香酸：0.53％、3，4-二羟基-5-甲氧基苯甲酸酯：0.24％、阿魏酸：1.02％和鞣花酸：1.53％。
将提取所得含有三萜类化合物的地榆提取物-1与含有酚类化合物的地榆提取物-1’混合即得到含有三萜类化合物和酚类化合物的地榆提取物。
实施例6
本实施例提供了一种地榆提取物的制备方法：
本实施例样品地榆购自于安国市同義中药饮片有限公司。
取地榆药材粉碎，称取3g，置于具塞锥形瓶中，精密加入30mL体积浓度为70％的乙醇连续80℃加热回流提取1h，共提取3次，合并提取液并将其减压浓缩至稠膏状，加入适量纯净水混悬均匀，将所得混悬液加入D101大孔吸附树脂色谱柱进行吸附，用水、30％乙醇和90％的乙醇依次进行洗脱，收集90％乙醇洗脱液，浓缩，得到含有三萜类化合物的地榆提取物-2，收集30％乙醇洗脱液，浓缩，得到含有酚类化合物的地榆提取物-2’。
含有三萜类化合物的地榆提取物-2，包含如下质量百分含量的三萜类化合物：地榆皂苷I：8.11％、3-β-O-α-L-阿拉伯糖基-乌苏-12，18(19)-二烯-28-酸β-D-葡萄糖酯：3.60％、3β-O-α-L-阿拉伯糖基-乌苏-12，19(29)-二烯-28-酸β-D-葡萄糖酯：6.01％、野蔷薇苷：2.63％、3α，l9α-二羟基乌苏-12-烯-28-酸β-D-葡萄糖酯：7.55％、坡模酸：4.02％、1β-羟基蔷薇酸：4.96％和2α，3α-二羟基乌苏-12，19(29)-二烯-28-酸β-D-葡萄糖酯：1.56％。
含有酚类化合物的地榆提取物-2’，包含如下质量百分含量的酚类化合物：食子酸：3.23％、咖啡酸：0.91％、丁香酸：0.98％、3，4-二羟基-5-甲氧基苯甲酸酯：0.63％、阿魏酸：1.85％和鞣花酸：2.68％。
将提取所得含有三萜类化合物的地榆提取物-2与含有酚类化合物的地榆提取物-2’混合即得到含有三萜类化合物和酚类化合物的地榆提取物。
实施例7
本实施例提供了一种地榆提取物的制备方法：
本实施例样品地榆购自于安国市同義中药饮片有限公司。取地榆药材粉碎，称取3g，置于具塞锥形瓶中，精密加入30mL体积浓度为90％的乙醇连续80℃加热回流提取1h，共提取3次，合并提取液并将其减压浓缩至稠膏状，加入适量纯净水混悬均匀，将所得混悬液加入D101大孔吸附树脂色谱柱进行吸附，用水、30％乙醇和90％的乙醇依次进行洗脱，收集90％乙醇洗脱液，浓缩，得到含有三萜类化合物的地榆提取物-3，收集30％乙醇洗脱液，浓缩，得到含有酚类化合物的地榆提取物-3’。
含有三萜类化合物的地榆提取物-3，包含如下质量百分含量的三萜类化合物：地榆皂苷I：6.96％、3-β-O-α-L-阿拉伯糖基-乌苏-12，18(19)-二烯-28-酸β-D-葡萄糖酯：3.05％、3β-O-α-L-阿拉伯糖基-乌苏-12，19(29)-二烯-28-酸β-D-葡萄糖酯：5.11％、野蔷薇苷：2.12％、3α，l9α-二羟基乌苏-12-烯-28-酸β-D-葡萄糖酯：5.78％、坡模酸：3.24％、1β-羟基蔷薇酸：2.99％和2α，3α-二羟基乌苏-12，19(29)-二烯-28-酸β-D-葡萄糖酯：1.32％。
含有酚类化合物的地榆提取物-3’，包含如下质量百分含量的酚类化合物：食子酸：2.17％、咖啡酸：0.56％、丁香酸：0.56％、3，4-二羟基-5-甲氧基苯甲酸酯：0.33％、阿魏酸：1.11％和鞣花酸：1.65％。
将提取所得含有三萜类化合物的地榆提取物-3与含有酚类化合物的地榆提取物-3’混合即得到含有三萜类化合物和酚类化合物的地榆提取物。
实施例8
本实施例提供了一种地榆提取物的制备方法：
取地榆药材粉碎，称取3g，置于具塞锥形瓶中，精密加入45mL体积浓度为50％的乙醇连续80℃加热回流提取1.5h，共提取2次，合并提取液并将其减压浓缩至稠膏状，加入适量纯净水混悬均匀，将所得混悬液加入D101大孔吸附树脂色谱柱进行吸附，用水、30％乙醇和90％的乙醇依次进行洗脱，收集90％乙醇洗脱液，浓缩，得到含有三萜类化合物的地榆提取物-4，收集30％乙醇洗脱液，浓缩，得到含有酚类化合物的地榆提取物-4’。
本实施例样品地榆购自于安国市同義中药饮片有限公司。
实施例9
本实施例提供了一种地榆提取物的制备方法：
取地榆药材粉碎，称取3g，置于具塞锥形瓶中，精密加入45mL体积浓度为70％的乙醇连续80℃加热回流提取1.5h，共提取2次，合并提取液并将其减压浓缩至稠膏状，加入适量纯净水混悬均匀，将所得混悬液加入D101大孔吸附树脂色谱柱进行吸附，用水、30％乙醇和90％的乙醇依次进行洗脱，收集90％乙醇洗脱液，浓缩，得到含有三萜类化合物的地榆提取物-5，收集30％乙醇洗脱液，浓缩，得到含有酚类化合物的地榆提取物-5’。
本实施例样品地榆购自于安国市同義中药饮片有限公司。
实施例10
本实施例提供了一种地榆提取物的制备方法：
取地榆药材粉碎，称取3g，置于具塞锥形瓶中，精密加入45mL体积浓度为90％的乙醇连续80℃加热回流提取1.5h，共提取2次，合并提取液并将其减压浓缩至稠膏状，加入适量纯净水混悬均匀，将所得混悬液加入D101大孔吸附树脂色谱柱进行吸附，用水、30％乙醇和90％的乙醇依次进行洗脱，收集90％乙醇洗脱液，浓缩，得到含有三萜类化合物的地榆提取物-6，收集30％乙醇洗脱液，浓缩，得到含有酚类化合物的地榆提取物-6’。
本实施例样品地榆购自于安国市同義中药饮片有限公司。
实施例11
本实施例提供了8种三萜类化合物的高效液相检测方法，具体化合物如表1所示：
表1
Figure BDA0002323963900000081
Figure BDA0002323963900000091
(1)对照品：地榆皂苷I(A)、3-β-O-α-L-阿拉伯糖基-乌苏-12，18(19)-二烯-28-酸β-D-葡萄糖酯(B)、3β-O-α-L-阿拉伯糖基-乌苏-12，19(29)-二烯-28-酸β-D-葡萄糖酯(C)、野蔷薇苷(D)、3α，l9α-二羟基乌苏-12-烯-28-酸β-D-葡萄糖酯(E)、坡模酸(F)、1β-羟基蔷薇酸(G)、2α，3α-二羟基乌苏-12，19(29)-二烯-28-酸β-D-葡萄糖酯(H))均由实验室自制，纯度均大于98％，满足HPLC检测需求。
样品：地榆购自于河北安国市同義中药饮片有限公司。
对照品提取分离方法：
干燥地榆根粉碎过60目筛，称取20.0kg，加入10倍量70％乙醇溶液，80℃加热回流提取3次，每次1h，过滤浓缩，获到乙醇提取物(2170.3g)。加适量蒸馏水充分混悬，依次使用等量的乙酸乙酯溶液和正丁醇溶液进行萃取，取上清液，减压浓缩，得到乙酸乙酯萃取物(730.1g)和正丁醇萃取物(989.7g)。取乙酸乙酯萃取物通过硅胶柱色谱进行分离，流动相为CH2Cl2-MeOH(从100:1～1:1，v/v)，得到40个流分(Fr.1→40)基于薄层色谱分析收集。其中，CH2Cl2-MeOH(10:1，v/v)洗脱收集的流分(Fr.21→25)用ODS柱进行分离，使用MeOH-H2O(10:90～100:0，v/v)梯度洗脱，通过制备型HPLC-RID进行纯化，得到化合物A(571.2mg)、B(285.1mg)、C(62.3mg)、D(41.5mg)和化合物E(151.0mg)；CH2Cl2-MeOH(50:1，v/v)洗脱收集的流分(Fr.5→13)通过硅胶柱色谱进行分离，使用CH2Cl2-MeOH(从100:1～1:1，v/v)梯度洗脱，通过制备型HPLC-RID进行纯化，得到化合物F(21.6mg)；CH2Cl2-MeOH(30:1，v/v)洗脱收集的流分(Fr.14→18)用ODS柱进行分离，使用MeOH-H2O(10:90～100:0，v/v)梯度洗脱，通过制备型HPLC-RID进行纯化，得到化合物G(105.2mg)、H(22.3mg)。
(2)配制上述8种三萜类化合物的混合对照品溶液：
分别精密称取地榆皂苷I、3-β-O-α-L-阿拉伯糖基-乌苏-12，18(19)-二烯-28-酸β-D-葡萄糖酯、3β-O-α-L-阿拉伯糖基-乌苏-12，19(29)-二烯-28-酸β-D-葡萄糖酯、野蔷薇苷、3α，l9α-二羟基乌苏-12-烯-28-酸β-D-葡萄糖酯、坡模酸、1β-羟基蔷薇酸，2α，3α-二羟基乌苏-12，19(29)-二烯-28-酸β-D-葡萄糖酯对照品适量，用甲醇溶解并配制成浓度分别为4091μg/mL、4136μg/mL、4067μg/mL、4290μg/mL、4038μg/mL、1661μg/mL、2069μg/mL、3929μg/mL的8种三萜类化合物的对照品贮备液，精密吸取8种三萜类化合物的对照品贮备液配制成混合对照品贮备液，混合对照品贮备液中8种三萜类化合物浓度依次为409.1μg/mL、413.6μg/mL、406.7μg/mL、429.0μg/mL、403.8μg/mL、166.1μg/mL、206.9μg/mL、392.9μg/mL。
将所得混合对照品贮备液用甲醇逐级稀释，得到不同稀释度的混合对照品溶液(Ⅰ-Ⅴ)，用0.45μm滤膜过滤待用，其中化合物(A)-(H)的浓度如表2所示：
表2
Figure BDA0002323963900000101
(3)确定色谱条件：
色谱柱：DikmaTechnologies C18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：溶剂A：水，溶剂B：乙腈，0min：10％B，0-20min：40％B，20-30min：50％B，30-45min：90％B，45-50min：90％B，50-60min：10％B，柱温：30℃；流速：1ml/min；雾化管温度：45℃；漂移管温度：60℃；氮气体积流量：1.6L/min，理论板数按地榆皂苷I峰计算不低于3000。
(4)绘制标准曲线：
依次取10μL混合对照品溶液(Ⅰ)-(Ⅴ)，注入HPLC系统，记录各对照品峰面积，以样品浓度的对数为横坐标，峰面积的对数为纵坐标进行回归分析。8种三萜类化合物的线性回归方程、线性范围、回归系数(R2)如表3所示：
表3
Figure BDA0002323963900000111
表3结果表明8种三萜的浓度在线性范围内与峰面积线性关系良好(R2＞0.9990)。
(5)精密度试验
取同一混合对照品溶液，按照上述色谱条件，重复进样6次，记录并计算8个三萜类化合物峰面积和RSD值。测得化合物(A)-(H)峰面积的RSD分别为1.1％，1.5％，1.1％，1.8％，1.1％，1.4％，1.8％，1.9％，表明本实施例建立的8种三萜类化合物的高效液相色谱分析方法精密度较好，可用于精确的定量分析。
(6)稳定性试验
取同一产地，同一批次的地榆药材按实施例1提供的方法制成供试品溶液，分别于0，2，4，8，12h进样10μL，记录8个三萜类化合物峰面积，计算RSD值。测得化合物(A)-(H)峰面积的RSD值分别为1.99％，1.29％，1.75％，1.84％，1.16％，1.33％，1.72％，2.08％，表明8种三萜类化合物在12h内稳定。
(7)重复性试验
称取同一批次地榆粉末6份，每份约1.0g，精密称定。按照上述方法制备样品溶液，在上述色谱条件下，10μL进样分析，计算被测组分含量的RSD值。化合物(A)-(H)浓度的RSD(n＝6)分别为0.41％、0.36％、0.42％、0.38％、0.29％、0.31％、0.46％、0.53％，结果表明重复性良好。
(8)加样回收率试验
称取同一批次已知含量地榆粉末6份，每份0.5g，分别加入适量的地榆皂苷I(A)、3-β-O-α-L-阿拉伯糖基-乌苏-12，18(19)-二烯-28-酸β-D-葡萄糖酯(B)、3β-O-α-L-阿拉伯糖基-乌苏-12，19(29)-二烯-28-酸β-D-葡萄糖酯(C)、野蔷薇苷(D)、3α，l9α-二羟基乌苏-12-烯-28-酸β-D-葡萄糖酯(E)、坡模酸(F)、1β-羟基蔷薇酸(G)，2α，3α-二羟基乌苏-12，19(29)-二烯-28-酸β-D-葡萄糖酯(H)对照品，按照上述方法制备样品溶液，记录峰面积，计算加样回收率及RSD值。加样回收率试验结果表明，化合物(A)-(H)的平均回收率分别为98.0％、98.6％、98.9％、98.0％、99.4％、98.5％、99.0％、98.5％，RSD(％)分别为1.0％、1.9％、1.1％、1.6％、1.0％、2.0％、1.3％、1.6％，平均回收率在98.0％-99.4％之间，RSD≤2.0％，结果表明本实施例建立的8种三萜类化合物的高效液相色谱分析方法具有良好的准确度。
实施例12
本实施例提供了6种酚类化合物的高效液相检测方法，具体化合物如表4所示：
表4
Figure BDA0002323963900000121
Figure BDA0002323963900000131
(1)对照品：咖啡酸(B)，CAS编号为331-39-5，购自成都曼斯特生物科技有限公司；阿魏酸(E)，CAS编号为1135-24-6，购自成都曼斯特生物科技有限公司。
没食子酸(A)、丁香酸(C)、3，4-二羟基-5-甲氧基苯甲酸酯(D)、鞣花酸(F)均由实验室自制，纯度均大于98％，满足HPLC检测需求。
样品：地榆购自于安国市同義中药饮片有限公司。
对照品的提取分离方法：
干燥地榆根粉碎过60目筛，称取20.0kg，加入10倍量70％乙醇溶液，80℃加热回流提取3次，每次1h，过滤浓缩，获到乙醇提取物(2170.3g)。加适量蒸馏水充分混悬，依次使用等量的乙酸乙酯溶液和正丁醇溶液进行萃取，取上清液，减压浓缩，得到乙酸乙酯萃取物(730.1g)和正丁醇萃取物(989.7g)。取正丁醇萃取物过D101大孔吸附树脂，用H2O，30％EtOH，60％EtOH，90％EtOH进行系统洗脱，后对其30％EtOH提取物通过硅胶柱色谱进行分离,流动相为CH2Cl2-MeOH(从100:1～1:1，v/v)，共得到30个流分(Fr.1→30)基于薄层色谱分析进行收集。对其60％EtOH提取物通过硅胶柱色谱进行分离,流动相为CH2Cl2-MeOH(从100:1～1:1，v/v)，共得到30个流分(Fr.31→60)基于薄层色谱分析进行收集。其中，Fr.10-18用ODS柱进行分离，使用MeOH-H2O(10:90～100:0，v/v)梯度洗脱，通过制备型HPLC-RID进行纯化，得到化合物A(42.3mg)和化合物C(21.6mg)；Fr.6-9用ODS柱进行分离，使用MeOH-H2O(10:90～100:0，v/v)梯度洗脱，通过制备型HPLC-RID进行纯化，得到化合物D(117.3mg)；Fr.37-41用ODS柱进行分离，使用MeOH-H2O(10:90～100:0，v/v)梯度洗脱，通过制备型HPLC-RID进行纯化，得到化合物F(96.5mg)。
(2)配制上述6种酚类化合物的混合对照品溶液：
精密称取没食子酸、咖啡酸、丁香酸、3，4-二羟基-5-甲氧基苯甲酸酯、阿魏酸、鞣花酸对照品适量，用甲醇溶解并配制成浓度分别为205μg/mL、500μg/mL、221μg/mL、501μg/mL、520μg/mL、203μg/mL的6种酚类化合物的对照品贮备液，精密吸取6个酚类化合物的对照品贮备液配制成混合对照品贮备液，混合对照品贮备液中6种酚类化合物的浓度依次为20.5μg/mL、25.0μg/mL、22.1μg/mL、25.0μg/mL、26.0μg/mL、20.3μg/mL。
将所得混合对照品贮备液用甲醇逐级稀释，得到不同稀释度的混合对照品溶液(Ⅰ-Ⅴ)，用0.45μm滤膜过滤待用，其中化合物(A)-(F)的浓度如表5所示：
表5
Figure BDA0002323963900000141
(3)确定色谱条件：
色谱柱：DikmaTechnologies C18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：溶剂A：0.1％磷酸水，溶剂B：甲醇，0min：10％B，0-70min：55％B，70-90min：95％B，90-100min：95％-10％B，柱温：30℃；流速：1ml/min；进样量：10μL，理论板数按没食子酸I峰计算不低于2000。
(4)绘制标准曲线：
依次取20μL混合对照品溶液(Ⅰ)-(Ⅴ)，注入HPLC系统，记录混合对照品峰面积，采用最小二乘法以峰面积对浓度进行线性回归。6种酚类化合物的线性回归方程、线性范围、回归系数(R2)如表6所示:
表6
Figure BDA0002323963900000142
表6结果表明6种酚类化合物的浓度在线性范围内与峰面积线性关系良好(R2>0.9990)。
(5)精密度试验
取混合对照品溶液，按照上述色谱条件，连续进样5次，记录6种酚类化合物的色谱峰面积。化合物(A)-(F)的峰面积RSD分别为1.0％、1.7％、2.0％、1.9％、1.3％、1.1％。表明本实施例建立的6种酚类化合物的高效液相色谱分析方法精密度较好，可用于精确的定量分析。
(6)稳定性试验
取同批地榆药材按实施例5提供的方法制成供试品溶液，分别于0，2，4，8，12h进样10μL，用外标法计算6种化合物各时间点的浓度，计算RSD值。测得化合物(A)-(F)峰面积的RSD值分别为1.39％，1.12％，1.35％，1.34％，1.26％，1.24％，表明6种酚类化合物在12h内稳定。
(7)重复性试验
取同批地榆粉末6份，每份1.0g。按照上述方法制成供试品溶液，进样20μL，记录色谱峰面积，用外标法计算出相应的浓度，分析被测组分含量的RSD值。得到化合物(A)-(F)浓度的RSD(n＝6)分别为0.28％、0.47％、0.35％、0.31％、0.29％、0.46％，结果表明重复性良好。
(8)提取回收率试验
取地榆粉末共6份，其中每份质量约0.50g，精密称定，分别加入适量的没食子酸(A)、咖啡酸(B)、丁香酸(C)、3，4-二羟基-5-甲氧基苯甲酸酯(D)、阿魏酸(E)、鞣花酸(F)对照品，按照上述方法，制备供试品溶液，进样，计算各化合物的回收率。化合物(A)-(F)的平均回收率分别为98.1％、100.6％、98.8％、98.4％、99.1％、98.0％，RSD(％)分别为1.2％、1.1％、1.4％、1.9％、2.0％、1.7％，平均回收率在98.0％-100.6％之间，RSD≤2.0％，结果表明本实施例建立的6种酚类化合物的高效液相色谱分析方法具有良好的准确度。
实施例13
本实施例利用实施例11提供的高效液相色谱检测方法对实施例5-7提取的含有三萜类化合物的地榆提取物中8种三萜类化合物进行定量分析：
取实施例5-7所得90％乙醇洗脱液浓缩后所得地榆提取物，分别用甲醇定容至10mL容量瓶中，用0.45μm滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液，利用实施例11提供的高效液相色谱检测方法，进样10μL注入HPLC系统进行检测分析。
图1为实施例6提取的含有三萜类化合物的地榆提取物-2中8种三萜类化合物的高效液相色谱图；如图1所示，地榆药材中其他化学成分对8种三萜类化合物组分均不干扰，供试品中各组分均峰形完整，与相邻峰分离度均大于1.5。
经计算，实施例5-7含有三萜类化合物的地榆提取物中所含8种三萜类化合物的百分含量如表7所示：
表7
Figure BDA0002323963900000161
不同产地、不同批次地榆提取所得提取物中三萜类化合物的含量会略有不同，但实施例5-7使用的是同一产地统一批次的地榆样品，由表7数据对比可知，相同的地榆样品经不同提取方法所得提取物中三萜类化合物含量并不相同，其中实施例6提供的提取方法所获得的三萜类化合物总量最高，提取效果最优。
实施例14
本实施例利用实施例12提供的高效液相色谱检测方法对实施例5-7提取的含有酚类化合物的地榆提取物中6种酚类化合物进行定量分析：
取实施例5-7所得30％乙醇洗脱液浓缩后所得地榆提取物，分别用甲醇定容至10mL容量瓶中，用0.45μm滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。利用实施例12提供的高效液相色谱检测方法，进样20μL注入HPLC系统进行检测分析。
图2为实施例6提取的含有酚类化合物的地榆提取物-2中6种酚类化合物的高效液相色谱图。图2表明在上述色谱条件下，供试品各成分的保留时间相近，在相近的保留时间上有相应的色谱峰，样品中各待测组分与相邻峰分离度均大于1.5。
经计算，实施例5-7含有酚类化合物的地榆提取物中所含6种酚类化合物的百分含量如表8所示：
表8
检测项目 A B C D E F
地榆提取物-1’(％) 0.82±0.12 0.69±0.01 0.53±0.13 0.24±0.02 1.02±0.29 1.53±0.21
地榆提取物-2’(％) 3.23±1.21 0.91±0.36 0.98±0.25 0.63±0.11 1.85±0.69 2.68±0.56
地榆提取物-3’(％) 2.17±0.12 0.56±0.11 0.56±0.23 0.33±0.10 1.11±0.28 1.65±0.22
不同产地、不同批次地榆提取所得提取物中酚类化合物的含量会略有不同，但实施例5-7使用的是同一产地统一批次的地榆样品，由表8数据对比可知，相同的地榆样品经不同提取方法所得提取物中酚类化合物含量并不相同，其中实施例6提供的提取方法所获得的酚类化合物总量最高，提取效果最优。
实施例16-地榆提取物预防结肠癌活性研究
(1)整体动物模型：
采用实施例6提供的制备方法得到含有三萜类化合物的地榆提取物-2和含有酚类化合物的地榆提取物-2’，在地榆提取物-2和地榆提取物-2’的基础上，采用MCI离子交换树脂色谱，ODS硅胶色谱及Sephadex LH-20凝胶色谱等分离策略进行有效组分的分离，制备出三萜类化合物及酚类化合物，具体制备方法为：
对照品：咖啡酸(2)CAS编号为331-39-5，购自成都曼斯特生物科技有限公司；阿魏酸(5)，CAS编号为1135-24-6，购自成都曼斯特生物科技有限公司。
地榆皂苷I(A)、3-β-O-α-L-阿拉伯糖基-乌苏-12，18(19)-二烯-28-酸β-D-葡萄糖酯(B)、3β-O-α-L-阿拉伯糖基-乌苏-12，19(29)-二烯-28-酸β-D-葡萄糖酯(C)、野蔷薇苷(D)、3α，l9α-二羟基乌苏-12-烯-28-酸β-D-葡萄糖酯(E)、坡模酸(F)、1β-羟基蔷薇酸(G)、2α，3α-二羟基乌苏-12，19(29)-二烯-28-酸β-D-葡萄糖酯(H))没食子酸(1)、丁香酸(3)、3，4-二羟基-5-甲氧基苯甲酸酯(4)、鞣花酸(6)均由实验室自制，纯度均大于98％，满足HPLC检测需求。
样品：地榆购自于河北安国市同義中药饮片有限公司。
干燥地榆根粉碎过60目筛，称取20.0kg，加入10倍量70％乙醇溶液，80℃加热回流提取3次，每次1h，过滤浓缩，获到乙醇提取物(2170.3g)。加适量蒸馏水充分混悬，依次使用等量的乙酸乙酯溶液和正丁醇溶液进行萃取，取上清液，减压浓缩，得到乙酸乙酯萃取物(730.1g)和正丁醇萃取物(989.7g)。取乙酸乙酯萃取物通过硅胶柱色谱进行分离，流动相为CH2Cl2-MeOH(从100:1～1:1，v/v)，得到40个流分(Fr.1→40)基于薄层色谱分析收集。其中，CH2Cl2-MeOH(10:1，v/v)洗脱收集的流分(Fr.21→25)用ODS柱进行分离，使用MeOH-H2O(10:90～100:0，v/v)梯度洗脱，通过制备型HPLC-RID进行纯化，得到化合物A(571.2mg)、B(285.1mg)、C(62.3mg)、D(41.5mg)和化合物E(151.0mg)；CH2Cl2-MeOH(50:1，v/v)洗脱收集的流分(Fr.5→13)通过硅胶柱色谱进行分离，使用CH2Cl2-MeOH(从100:1～1:1，v/v)梯度洗脱，通过制备型HPLC-RID进行纯化，得到化合物F(21.6mg)；CH2Cl2-MeOH(30:1，v/v)洗脱收集的流分(Fr.14→18)用ODS柱进行分离，使用MeOH-H2O(10:90～100:0，v/v)梯度洗脱，通过制备型HPLC-RID进行纯化，得到化合物G(105.2mg)、H(22.3mg)。所得八种三萜类化合物混合得到三萜类组分。
取正丁醇萃取物过D101大孔吸附树脂，用H2O，30％EtOH，60％EtOH，90％EtOH进行系统洗脱，后对其30％EtOH提取物通过硅胶柱色谱进行分离,流动相为CH2Cl2-MeOH(从100:1～1:1，v/v)，共得到30个流分(Fr.1→30)基于薄层色谱分析进行收集。对其60％EtOH提取物通过硅胶柱色谱进行分离,流动相为CH2Cl2-MeOH(从100:1～1:1，v/v)，共得到30个流分(Fr.31→60)基于薄层色谱分析进行收集。其中，Fr.10-18用ODS柱进行分离，使用MeOH-H2O(10:90～100:0，v/v)梯度洗脱，通过制备型HPLC-RID进行纯化，得到化合物1(42.3mg)和化合物3(21.6mg)；Fr.6-9用ODS柱进行分离，使用MeOH-H2O(10:90～100:0，v/v)梯度洗脱，通过制备型HPLC-RID进行纯化，得到化合物4(117.3mg)；Fr.37-41用ODS柱进行分离，使用MeOH-H2O(10:90～100:0，v/v)梯度洗脱，通过制备型HPLC-RID进行纯化，得到化合物6(96.5mg)。所得六种酚类化合物混合得到酚类组分。
以Balb/c小鼠为研究目标，通过氧化偶氮甲烷(AOM)和右旋葡聚糖硫酸钠(DSS)刺激建立预防结肠癌动物模型。5周龄体重为15-16g的雄性Balb/c小鼠随机分组，每组15只，分别为空白组，模型组，模型+给药组A(三萜类组分，剂量为1.0g/Kg)，模型+给药组B(酚类组分，剂量为1.0g/Kg)，模型+阳性对照组(阿司匹林)。
建模与治疗方案：
①实验前一天，腹腔注射10mg/KgAOM盐溶液并记录体重；
②实验第7天起，为小鼠补给1.5％DSS溶液为饮用水，大约每2-3天250mL/笼；
③实验第14天起，改为标准饮用水两周。
④从实验第28天到第49天重复2-3步进行DSS的第2～3次循环。第一次DSS治疗结束后的第三天，小鼠会通过一星期三次口服给药的方式进行治疗，直至实验结束。
实验过程中记录小鼠的便血情况。
用CO2处死后取出结肠，记录肿瘤的大小尺寸，体积以及数量。进行统计学分析。在第三组的每一只实验用鼠都对肿瘤细胞耐受，对不同组别的小鼠也被进一步解剖分析(10个星期)。小鼠AOM和DSS造模给药后各项检测指标如表9所示：
表9
Figure BDA0002323963900000191
*P<0.01
动物实验可以看出给药组的肿瘤数量与模型组相比明显降低，血便案例明显减少，结肠长度与对照组无显著差异。这说明地榆提取物三萜类组分及酚类组分对结肠肿瘤的发生均具有抑制作用。
肠的慢性炎症，可诱发癌变，长期炎症浸润作用下，局部组织反复脱落、增生、渗液、板易引起肉芽增生，发展成结肠癌。高达20-30％的肠癌是由慢性炎症引起的，Nrf2介导的抗炎和抗氧化反应能够有效预防癌症。在含有酚类化合物的地榆提取物的刺激下，使Nrf2被激活转移入细胞核中,影响了相关基因甲基化和组蛋白乙酰的动态平衡，参与下游细胞保护酶基因的调控。醌氧化还原酶(NQO1)，血红素加氧酶-1(HO-1)和UDP-葡萄糖醛酸转移酶(UGT)等多种细胞保护酶(Ⅱ相代谢酶)的表达在肿瘤预防的过程中起到了至关重要的作用。
(2)体外细胞模型：
采用MTS法确定有效部位、有效组分、有效成分对HT29结肠癌细胞毒活性进行研究。以HepG2-C8(ARE)细胞为研究对象，通过荧光素酶报告基因检测试法(LuciferaseReporter Gene Assay)进行体外癌症预防活性研究。
取干燥地榆，粉碎，装入圆底烧瓶中，按质量体积比1g:10ml加入70％乙醇，在80℃下连续回流提取3次，过滤，蒸干合并滤液，得到地榆总提取物。将总提取物加适量温水制成混悬液。经D101大孔吸附树脂，分别用水、30％乙醇和90％乙醇洗脱，得到含有酚类化合物提取物和含有三萜类化合物提取物。
配制含三萜类化合物提取物的浓度为2.5mg/mL，5mg/mL和10mg/mL的溶液，配制含酚类化合物提取物浓度为2.5mg/mL，5mg/mL和10mg/mL的溶液。HepG2-C8-ARE的细胞接种到96孔板中，将细胞与上述不同浓度提取物处理24小时进行检测。
结果表示为mean±SD；*P<0.01；SFN(莱菔硫烷)为阳性对照组，n＝6。应用HepG2-C8测定不同浓度含酚类化合物提取物和含三萜类化合物提取物的Luciferase活性，荧光素酶报告基因检测结果见表10：
表10
Figure BDA0002323963900000201
从表10所示结果可以确定，地榆提取物中所含酚类化合物和三萜类化合物为预防结肠癌的有效成分，而且呈剂量依赖。

Claims (10)

1.一种预防结肠癌的地榆提取物，其特征在于，三萜类化合物在提取物中的质量百分含量不低于10％，所述三萜类化合物包括2-oxo-3α,19α-二羟基-齐墩-12-烯-28-酸-β-D-葡萄糖酯、野蔷薇苷、地榆皂苷I、3-β-O-α-L-阿拉伯糖基-乌苏-12,18(19)-二烯-28-酸β-D-葡萄糖酯、3-β-O-α-L-阿拉伯糖基-乌苏-12,19(29)-二烯-28-酸β-D-葡萄糖酯、3β，l9α-二羟基乌苏-12-烯-28-酸β-D-葡萄糖酯、坡模酮酸、野鸦椿酸、2α,3α,-二羟基乌苏-12,19(29)-二烯-28-酸β-D-葡萄糖酯、1β-羟基蔷薇酸、3β,19α-二羟基-12-乌苏烯-28-酸、2α-羟基齐墩果酸。
2.一种权利要求1所述预防结肠癌的地榆提取物的制备方法，其特征在于，按地榆与50～90％的乙醇溶液的质量体积比1g:10～20mL将地榆加入乙醇溶液，80℃回流提取1～2h，共提取1～3次，合并提取液并将其减压浓缩至稠膏状，加入适量纯净水混悬均匀，将所得混悬液加入大孔吸附树脂色谱柱进行吸附，用水、90％乙醇依次进行洗脱，收集90％乙醇洗脱液，浓缩，得到含有三萜类化合物的地榆提取物。
3.一种预防结肠癌的地榆提取物，其特征在于，三萜类化合物在提取物中的质量百分含量不低于10％，所述三萜类化合物包括2-oxo-3α,19α-二羟基-齐墩-12-烯-28-酸-β-D-葡萄糖酯、野蔷薇苷、地榆皂苷I、3-β-O-α-L-阿拉伯糖基-乌苏-12,18(19)-二烯-28-酸β-D-葡萄糖酯、3-β-O-α-L-阿拉伯糖基-乌苏-12,19(29)-二烯-28-酸β-D-葡萄糖酯、3β，l9α-二羟基乌苏-12-烯-28-酸β-D-葡萄糖酯、坡模酮酸、野鸦椿酸、2α,3α,-二羟基乌苏-12,19(29)-二烯-28-酸β-D-葡萄糖酯、1β-羟基蔷薇酸、3β,19α-二羟基-12-乌苏烯-28-酸、2α-羟基齐墩果酸；酚类化合物在提取物中的质量百分含量不低于30％，所述酚类化合物包括没食子酸、地榆素H-4、儿茶素、甲基6-O-没食子酰甲基-β-D-吡喃葡萄糖、咖啡酸、丁香酸、没食子酸乙酯、3,4-二羟基-5-甲氧基苯甲酯、阿魏酸、鞣花酸、3,3-二羟基鞣花酸。
4.一种权利要求2所述预防结肠癌的地榆提取物的制备方法，其特征在于，按地榆与50～90％的乙醇溶液的质量体积比1g:10～20mL将地榆加入乙醇溶液，80℃回流提取1～2h，共提取1～3次，合并提取液并将其减压浓缩至稠膏状，加入适量纯净水混悬均匀，将所得混悬液加入大孔吸附树脂色谱柱进行吸附，用水、30％乙醇和90％乙醇依次进行洗脱，收集90％乙醇洗脱液，浓缩，得到含有三萜类化合物的地榆提取物；收集30％乙醇洗脱液，浓缩，得到含有酚类化合物的地榆提取物，将所得两种地榆提取物混合即得含有三萜类化合物和酚类化合物的地榆提取物。
5.如权利要求1所述一种预防结肠癌的地榆提取物在制备预防结肠癌药物中的应用。
6.根据权利要求5所述一种预防结肠癌的地榆提取物在制备预防结肠癌药物中的应用，所述预防结肠癌药物包含含有三萜类化合物的地榆提取物及药学上可接受的辅料。
7.根据权利要求6所述一种预防结肠癌的地榆提取物在制备预防结肠癌药物中的应用，所述预防结肠癌药物为口服制剂，所述口服制剂为胶囊剂、片剂或颗粒剂。
8.如权利要求3所述一种预防结肠癌的地榆提取物在制备预防结肠癌药物中的应用。
9.根据权利要求8所述一种预防结肠癌的地榆提取物在制备预防结肠癌药物中的应用，所述预防结肠癌药物包含含有三萜类化合物和酚类化合物的地榆提取物及药学上可接受的辅料。
10.根据权利要求9所述一种预防结肠癌的地榆提取物在制备预防结肠癌药物中的应用，所述预防结肠癌药物为口服制剂，所述口服制剂为胶囊剂、片剂或颗粒剂。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112274522A (zh) * 2020-11-12 2021-01-29 成都中医药大学 地榆中酚苷类化合物的抗炎新用途及其提取分离方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101590134A (zh) * 2009-06-30 2009-12-02 沈阳药科大学 具有抗炎镇痛作用的地榆总三萜及其制备方法
CN102028698A (zh) * 2009-12-02 2011-04-27 山东省中医药研究院 一种治疗结肠癌的药物及其制备方法
CN107496547A (zh) * 2017-09-15 2017-12-22 中山大学 一种抑制经典Wnt/β‑catenin通路的地榆粗提物及制备方法
CN108714149A (zh) * 2018-05-14 2018-10-30 西南医科大学 地榆活性成分在制备抗肿瘤的药物中的用途

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101590134A (zh) * 2009-06-30 2009-12-02 沈阳药科大学 具有抗炎镇痛作用的地榆总三萜及其制备方法
CN102028698A (zh) * 2009-12-02 2011-04-27 山东省中医药研究院 一种治疗结肠癌的药物及其制备方法
CN107496547A (zh) * 2017-09-15 2017-12-22 中山大学 一种抑制经典Wnt/β‑catenin通路的地榆粗提物及制备方法
CN108714149A (zh) * 2018-05-14 2018-10-30 西南医科大学 地榆活性成分在制备抗肿瘤的药物中的用途

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MENG-PING LIU等: "queous extract of Sanguisorba officinalis blocks the Wnt/β-catenin signaling pathway in colorectal cancer cells", 《ROYAL SOCIETY OF CHEMISTRY》 *
田景振等: "《抗病毒中草药的研究与应用》", 30 April 2019, 山东科学技术出版社 *
董小萍 等: "《天然药物化学》", 28 February 2015, 中国医药科技出版社 *
黄红兵: "《抗肿瘤中药临床应用与图谱》", 31 January 2008, 广东科技出版社 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112274522A (zh) * 2020-11-12 2021-01-29 成都中医药大学 地榆中酚苷类化合物的抗炎新用途及其提取分离方法
CN112274522B (zh) * 2020-11-12 2022-10-28 成都中医药大学 地榆中酚苷类化合物的抗炎新用途及其提取分离方法

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