CN110839693A - 吉氏副拟杆菌在预防或治疗肥胖或其相关疾病中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种吉氏副拟杆菌在预防或治疗肥胖或其相关疾病中的应用。本发明中的吉氏副拟杆菌能有效缓解饮食引起的肥胖及相关疾病症状，包括高血脂、糖尿病、肝功能异常和肠道微生态异常，还能提高肠道有益微生物菌群的丰度，可应用于预防和治疗肥胖及相关疾病的药物、食品或保健品。

Description

吉氏副拟杆菌在预防或治疗肥胖或其相关疾病中的应用

技术领域

本发明涉及微生物领域，特别是涉及吉氏副拟杆菌在预防或治疗肥胖或其 相关疾病中的应用。

背景技术

肥胖症是一种复杂的慢性疾病，是包括遗传和环境因素在内的多种因素相 互作用而引起的慢性代谢性疾病，其发病机制尚不明确。肥胖症同时也增加了 一系列疾病的风险，如高血压、糖尿病、高血脂、冠心病和癌症等。据世界卫 生组织数据显示，目前全球肥胖症发病率已超过14％，然而这一数字还在不断 攀升，肥胖症已成为威胁人类健康的重要问题。

目前治疗肥胖的主要手段为药物治疗，常见的减肥药物包括奥利司他、利 拉鲁肽、西布曲明和纳曲酮等，涉及的减肥机制可归为抑制食欲、增加能量消 耗和抑制脂肪吸收等。但药物治疗的副作用及安全性问题严重影响患者减肥效 果和健康。因此迫切需要开发一种有效且副作用小的治疗肥胖症及相关疾病的 方法或药物。

人体肠道内的微生物之间存在相互依存、制约的关系，形成微生态稳态， 并与宿主之间形成互作，影响机体的营养与健康。随着对肠道微生物的认识和 研究的加深，越来越多研究者将肠道微生物与疾病联系起来，并将肠道微生物 应用于临床诊断治疗。但目前应用于预防或治疗疾病的肠道微生物大多数集中 在双歧杆菌、乳杆菌等少数种属，因此通过现有发现的微生物种群能解决的疾 病问题也较为局限。

发明内容

基于此，本发明提供了一种吉氏副拟杆菌在预防或治疗肥胖或其相关疾病 中的应用。使用含有该吉氏副拟杆菌的药物、食品或者保健品等能降低体重、 血糖和血脂，改善肝功能，同时还能显著提高肠道内其他有益菌丰度。

具体技术方案如下：

一种吉氏副拟杆菌，其保藏号是GDMCC No.60780。

上述吉氏副拟杆菌在制备预防或治疗肥胖或其相关疾病药物中的用途。

在其中一个实施例中，所述肥胖或其相关疾病包括高血脂、糖尿病、肝功 能异常和肠道微生态异常。

在其中一个实施例中，所述糖尿病包括Ⅰ型糖尿病和Ⅱ型糖尿病。

在其中一个实施例中，所述肠道微生态异常包括肠道菌群异常。

在其中一个实施例中，所述药物含有1×10⁵-1×10¹⁴CFU/mL或1×10⁵-1×10¹⁴CFU/g的吉氏副拟杆菌和/或其代谢产物以及药学上允许的载体。

在其中一个实施例中，所述载体选自乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘 露糖、海藻糖、淀粉、阿拉伯胶、磷酸钙、藻酸盐、明胶、硅酸钙、细结晶纤 维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、糖浆、甲基纤维素、羟基苯甲酸甲酯、 羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁及矿物油中的至少一种。

在其中一个实施例中，所述药物的剂型为：片剂、胶囊、颗粒剂、口服液、 混悬液、乳剂或粉末剂。

上述吉氏副拟杆菌在制备预防或辅助治疗肥胖及相关疾病的食品或保健品 中的应用。

在其中一个实施例中，所述食品为发酵乳、酸乳酪、冻酸乳酪、奶粉、浓 缩奶、软质奶酶、布丁或饮料。

在其中一个实施例中，所述保健品是乳液制品、溶液制品、粉末制品或固 体制品。

在其中一个实施例中，所述保健品包含1×10⁵-1×10¹⁴CFU/mL或1×10⁵-1 ×10¹⁴CFU/g的吉氏副拟杆菌。

本发明的吉氏副拟杆菌在预防或治疗肥胖或其相关疾病中的应用具有以下 优点和有益效果：

本发明的发明人通过大量创造性实验研究发现，本发明的吉氏副拟杆菌， 能有效缓解饮食引起的肥胖及相关疾病症状，还能提高肠道有益微生物菌群的 丰度，可应用于预防和治疗肥胖及相关疾病的药物、食品或保健品中。

附图说明

图1为吉氏副拟杆菌对高脂饮食大鼠肠道菌群的影响图。

具体实施方式

为了便于理解本发明，下面将参照相关附图对本发明进行更全面的描述。 附图中给出了本发明的较佳实施例。但是，本发明可以以许多不同的形式来实 现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本 发明的公开内容的理解更加透彻全面。

除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术 领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术 语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的 术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。

本发明提供了一种吉氏副拟杆菌，其保藏号是GDMCC No.60780。

本发明还提供了一种吉氏副拟杆菌在制备预防或治疗肥胖或其相关疾病药 物中的用途。

在一个具体示例中，吉氏副拟杆菌为吉氏副拟杆菌OB001。

在一个具体示例中，吉氏副拟杆菌为活菌。

在一个具体示例中，肥胖或其相关疾病包括高血脂、糖尿病、肝功能异常 和肠道微生态异常。

在一个具体示例中，糖尿病包括Ⅰ型糖尿病和Ⅱ型糖尿病。

在一个具体示例中，肠道微生态异常包括肠道菌群异常。

在一个具体示例中，药物含有1×10⁵-1×10¹⁴CFU/mL或1×10⁵-1× 10¹⁴CFU/g的吉氏副拟杆菌和/或其代谢产物以及药学上允许的载体。

在一个具体示例中，载体选自乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖、 海藻糖、淀粉、阿拉伯胶、磷酸钙、藻酸盐、明胶、硅酸钙、细结晶纤维素、 聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、糖浆、甲基纤维素、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯 甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁及矿物油中的至少一种。

在一个具体示例中，药物的剂型为：片剂、胶囊、颗粒剂、口服液、混悬 液、乳剂或粉末剂。

上述吉氏副拟杆菌在制备预防或辅助治疗肥胖及相关疾病的食品中的应 用。

在一个具体示例中，食品的类型为发酵乳、酸乳酪、冻酸乳酪、奶粉、浓 缩奶、软质奶酶、布丁或饮料。

在一个具体示例中，包含有效剂量吉氏副拟杆菌的食品不限定形态，包括 压片糖果、固体饮料、酸奶、乳酸菌饮料、乳酸菌发酵豆制品、奶酪和含发酵 酸奶的加工食品。

上述吉氏副拟杆菌在制备预防或辅助治疗肥胖及相关疾病的保健品中的应 用。

在一个具体示例中，保健品包含1×10⁵-1×10¹⁴CFU/mL或1×10⁵-1× 10¹⁴CFU/g的吉氏副拟杆菌。

进一步地，保健品包含有效剂量的吉氏副拟杆菌后不限定制剂形态。

进一步地，保健品包含有效剂量的吉氏副拟杆菌后可以与其他活性成分配 合使用。

更进一步地，包含有效剂量吉氏副拟杆菌的保健品与其他益生菌组合成复 合益生菌片，为具有多功能的保健品。

在一个具体示例中，保健品为吉氏副拟杆菌片。吉氏副拟杆菌片按重量百 分比包括25％的吉氏副拟杆菌冻干粉、60％的膳食纤维、10％的山梨糖醇和5％ 的硬脂酸镁。

以下结合具体实施例对本发明的吉氏副拟杆菌在预防或治疗肥胖或其相关 疾病中的应用做进一步详细的说明。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

以下实施例中使用的吉氏副拟杆菌为分离纯化得到的吉氏副拟杆菌 OB001。该吉氏副拟杆菌OB001保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏号为 GDMCC No.60780，分类命名为Parabacteroides distasonis，保藏时间为2019年 9月19日。广东省微生物菌种保藏中心的地址为广州市先烈中路100号大院59 号楼5楼。

实施例1吉氏副拟杆菌的分离纯化

分离纯化方法

(1)无菌保存液的配制：称取30g聚乙二醇(分子量3350)溶于1000mL 生理盐水中，于121℃，15min条件下高压灭菌，得到无菌保存液备用。

(2)取健康黄种人新鲜粪便样本适量至于含有无菌保存液的样品保存管 中，用涡旋振荡器震荡10分钟混匀，随后于厌氧工作站中用无菌生理盐水稀释 至10^-6稀释度，吸取0.1mL菌液涂布于厌氧血琼脂平板上，在厌氧工作站中37℃ 培养72小时。采取分区划线法，用无菌牙签挑取不同形态的单菌落在厌氧血琼 脂平板上进行划线分离培养。经72小时培养后，在分区平板上提取分离效果好 的菌落进行传代培养及16S rDNA测序鉴定，由此得到吉氏副拟杆菌。

经过观察，吉氏副拟杆菌在厌氧血琼脂平板上菌落直径为约1.5～2mm，凸 起，呈圆形，表面及边缘光滑，菌落为灰白色，其16S rDNA序列如SEQ ID NO.1 如下所示：

TTACCTAGGCCGATCCTTTCGGTTACGGACTTCAGGTACCCCCGGCTC CCATGGCTTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCG CCATGGCTGATGCGCGATTACTAGCGAATCCAGCTTCACGGAGTCGGGTTG CAGACTCCGATCCGAACTGAGACGTGGTTTGGGGATTCGCTCCCTGTCGCC AGGTGGCTTCCCTTTGTCCACGCCATTGTAACACGTGTGTCGCCCCGGATG TAAGGGCCGTGCTGATTTGACGTCATCCCCGCCTTCCTCGCAGCTTACGCT GGCAGTCCCACCAGAGTCCTCAGCTTTACCTGTTAGTAACTAGTGGCAAGG GTTGCGCTCGTTATGGCACTTAAGCCGACACCTCACGGCACGAGCTGACG ACAACCATGCAGCACCTCGCAAACGGCTATTGCTAGAAAAGGTGTTTCCA CCTCGGTCCGAATGCGTTCAAACCCGGGTAAGGTTCCTCGCGTATCATCGA ATTAAACCACATGTTCCTCCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAG TTTCACCGTTGCCGGCGTACTCCCCAGGTGGATCACTTAACGCTTTCGCTG TGCCGCTTACAGTGTATCGCAAACAGCTAGTGATCATCGTTTACTGCGTGG ACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTTGATCCCCACGCTTTCGTGCATCAGCGT CAGTCATGGCTTGGCAGGCTGCCTTCGCAATCGGGGTTCTGCGTGATATCT AAGCATTTCACCGCTACACCACGCATTCCGCCTGCCTCAAACATACTCAAG CCCCCCAGTTTCAACGGCAATTCTATGGTTGAGCCACAGACTTTCACCGCT GACTTAAAAGGCCGCCTACGCACCCTTTAAACCCAATAAATCCGGATAACG CTCGGATCCTCCGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGGAGTTAGCCGATCCTTA TTCATAAGGTACATACAAAACGGGACACGTCCCGAACTTTATTCCCTTATAA AAGAGGTTTACGATCCATAGAACCTTCATCCCTCACGCGACTTGGCTGGTT CAGGCTTACGCCCATTGACCAATATTCCTCACTGCTGCCTCCCGTAGGAGT TTGGTCCGTGTCTCAGTACCAATGTGGGGGACCTTCCTCTCAGAACCCCTA TCCATCGTCGGTTTGGTGGGCCGTTACCCCGCCAACTGCCTAATGGAACGC ATGCCTATCTATCAGCGATGAATCTTTAGCAAATATCCCCATGCGGGGCCCC TGCTTCATGCGGTATTAGTCCGACTTTCGCCGGGTTATCCCCCTCTGATAGG CAAGTTGCATACGCGTTACTCACCCGTGCGCCGGTCGCCGGCGGGTATTGC TACCCCCGCTGCCCCTCGACTTGCATGTGTAAGC

实施例2吉氏副拟杆菌对高脂饮食诱导肥胖小鼠体重、血糖、血脂及肝功 能的影响

减肥药物：利拉鲁肽，商品名为-Novo Nordisk，使用时按照 150μg/kg/d皮下注射。

实验方法：

(1)将培养好的吉氏副拟杆菌用无菌PBS调整菌液浓度为1×10⁹CFU/mL， 灌胃体积为0.1mL，每日灌胃一次。

(2)选取6-8周龄雄性C57BL/6型小鼠随机分成四组，每组设置9个平行 组，每一组按如下分配设置，

对照组1：正常维持饲料+无菌生理盐水；

对照组2：高脂饲料+无菌生理盐水；

对照组3：高脂饲料+减肥药物；

实验组4：高脂饲料+吉氏副拟杆菌。

其中，正常维持饲料脂肪热量为12％，高脂饲料脂肪热量为45％。

(3)连续给药6周，每周测定小鼠摄食量、体重。另外，在给药第0周、 第3周和第6周测定空腹血糖和餐后血糖。在实验结束后采血，4℃3000r/min 离心收集血清，测定血清胰岛素(INS)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高 密度脂蛋白总胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、谷丙转氨酶 (GPT)和谷草转氨酶(GOT)。

表1：吉氏副拟杆菌对高脂饮食诱导肥胖小鼠摄食量的影响

表2：吉氏副拟杆菌对高脂饮食诱导肥胖小鼠体重的影响

注：结果以Mean±SEM表示，*p<0.05与对照组2相比

根据表1和表2结果可知，与对照组2相比，实验组4能够有效控制高脂 饮食诱导肥胖小鼠的摄食量和体重，表中第6周时结果差异最明显，其中摄食 量降低50％，体重降低17％，同时相比于对照组3对摄食量和体重的控制效果 更为明显，表明吉氏副拟杆菌对高脂质摄入下的机体具有肥胖预防控制的效果。

表3：吉氏副拟杆菌对高脂饮食诱导肥胖小鼠空腹血糖的影响

注：结果以Mean±SEM表示，*p<0.05与对照组2相比

表4：吉氏副拟杆菌对高脂饮食诱导肥胖小鼠餐后(2h)血糖的影响

注：结果以Mean±SEM表示，*p<0.05与对照组2相比

表5：吉氏副拟杆菌对高脂饮食诱导肥胖小鼠胰岛素和血脂水平的影响

注：结果以Mean±SEM表示，*p<0.05与对照组2相比

根据表3和表4结果可知，实验组4对于持续高脂质摄入下的小鼠的血量 水平具有明显的控制效果，和对照组1的正常水平差距不大，相对于市面上减 肥药对血糖的控制更为明显。由表5结果中不同组别对比可知，吉氏副拟杆菌 所在的实验组4在6周后的小鼠胰岛素水平和正常饮食状态差距较小，总胆固 醇和甘油三酯的水平并没有明显升高，并且显著低于对照组2和3的总水平， 表明吉氏副拟杆菌具有明显的降血糖效果，且不会造成胰岛素的异常分泌紊乱。

表6：吉氏副拟杆菌对高脂饮食诱导肥胖小鼠肝功能的影响

分组	GOT(IU/L)	GPT(IU/L)	GOT/GPT
				对照组1	11.58±1.43	5.94±0.88<sup>*</sup>	2.24±0.42<sup>*</sup>
对照组2	15.52±1.40	9.50±0.68	1.65±0.10
				对照组3	16.23±2.62	9.62±1.48	1.75±0.17
实验组4	12.48±0.96	7.12±0.84	1.87±0.18

注：结果以Mean±SEM表示，*p<0.05与对照组2相比

表6结果表明，在持续高脂质饲料的摄入下，小鼠的谷丙转氨酶和谷草转 氨酶指标持续升高，偏离正常水平，但是在含有吉氏副拟杆菌杆菌的辅助调节 下，实验组4并没有出现肝功能两项异常现象，说明吉氏副拟杆菌对高脂质导 致的肝功能异常具有良好的预防或治疗用途。

实施例3吉氏副拟杆菌对肠道菌群的调节作用

实验方法：

(1)将培养好的吉氏副拟杆菌用无菌PBS调整菌液浓度为1×10⁹CFU/mL， 灌胃体积为0.1mL，每日灌胃一次。

(2)6-8周龄雄性C57BL/6型小鼠连续6周饲喂高脂饲料和灌胃吉氏副拟 杆菌，在第0周(即实验前)和第6周(即实验结束后)分别收集小鼠粪便， 提取粪便中细菌基因组DNA，通过16s DNA测序分析，确定小鼠肠道菌群变化。

表7：吉氏副拟杆菌对肠道菌群在属水平相对丰度的影响

时间	拟杆菌属	副拟杆菌属	乳杆菌属
				第0周	0.035	0.000	5.083
第6周	1.020	0.800	8.260

由图1结果表明，高脂饲料饲喂小鼠灌胃吉氏副拟杆菌后肠道菌群改变， 在门和属水平上菌群相对丰度均有明显变化。

表7结果表明，摄入吉氏副拟杆菌菌群并不会对包括肠道拟杆菌属、副拟 杆菌属和乳杆菌等有益生菌的活性产生影响，有益菌之间并没有明显的竞争淘 汰现象，吉氏副拟杆菌反而对其丰度具有显著的促进作用，有效提高了肠道微 生物菌群的功能性作用。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对 上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技 术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细， 但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的 普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改 进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权 利要求为准。

序列表

<110> 慕恩(广州)生物科技有限公司

<120> 吉氏副拟杆菌在预防或治疗肥胖或其相关疾病中的应用

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1410

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

ttacctaggc cgatcctttc ggttacggac ttcaggtacc cccggctccc atggcttgac 60

gggcggtgtg tacaaggccc gggaacgtat tcaccgcgcc atggctgatg cgcgattact 120

agcgaatcca gcttcacgga gtcgggttgc agactccgat ccgaactgag acgtggtttg 180

gggattcgct ccctgtcgcc aggtggcttc cctttgtcca cgccattgta acacgtgtgt 240

cgccccggat gtaagggccg tgctgatttg acgtcatccc cgccttcctc gcagcttacg 300

ctggcagtcc caccagagtc ctcagcttta cctgttagta actagtggca agggttgcgc 360

tcgttatggc acttaagccg acacctcacg gcacgagctg acgacaacca tgcagcacct 420

cgcaaacggc tattgctaga aaaggtgttt ccacctcggt ccgaatgcgt tcaaacccgg 480

gtaaggttcc tcgcgtatca tcgaattaaa ccacatgttc ctccgcttgt gcgggccccc 540

gtcaattcct ttgagtttca ccgttgccgg cgtactcccc aggtggatca cttaacgctt 600

tcgctgtgcc gcttacagtg tatcgcaaac agctagtgat catcgtttac tgcgtggact 660

accagggtat ctaatcctgt ttgatcccca cgctttcgtg catcagcgtc agtcatggct 720

tggcaggctg ccttcgcaat cggggttctg cgtgatatct aagcatttca ccgctacacc 780

acgcattccg cctgcctcaa acatactcaa gccccccagt ttcaacggca attctatggt 840

tgagccacag actttcaccg ctgacttaaa aggccgccta cgcacccttt aaacccaata 900

aatccggata acgctcggat cctccgtatt accgcggctg ctggcacgga gttagccgat 960

ccttattcat aaggtacata caaaacggga cacgtcccga actttattcc cttataaaag 1020

aggtttacga tccatagaac cttcatccct cacgcgactt ggctggttca ggcttacgcc 1080

cattgaccaa tattcctcac tgctgcctcc cgtaggagtt tggtccgtgt ctcagtacca 1140

atgtggggga ccttcctctc agaaccccta tccatcgtcg gtttggtggg ccgttacccc 1200

gccaactgcc taatggaacg catgcctatc tatcagcgat gaatctttag caaatatccc 1260

catgcggggc ccctgcttca tgcggtatta gtccgacttt cgccgggtta tccccctctg 1320

ataggcaagt tgcatacgcg ttactcaccc gtgcgccggt cgccggcggg tattgctacc 1380

cccgctgccc ctcgacttgc atgtgtaagc 1410

Claims (12)

1.一种吉氏副拟杆菌，其保藏号是GDMCC No.60780。

2.权利要求1所述的吉氏副拟杆菌在制备预防或治疗肥胖或其相关疾病药物中的用途。

3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述肥胖或其相关疾病包括高血脂、糖尿病、肝功能异常和肠道微生态异常。

4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述糖尿病包括Ⅰ型糖尿病和Ⅱ型糖尿病。

5.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述肠道微生态异常包括肠道菌群异常。

6.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述药物含有1×10⁵-1×10¹⁴CFU/mL或1×10⁵-1×10¹⁴CFU/g的吉氏副拟杆菌和/或其代谢产物以及药学上允许的载体。

7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于，所述载体选自乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖、海藻糖、淀粉、阿拉伯胶、磷酸钙、藻酸盐、明胶、硅酸钙、细结晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、糖浆、甲基纤维素、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁及矿物油中的至少一种。

8.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述药物的剂型为：片剂、胶囊、颗粒剂、口服液、混悬液、乳剂或粉末剂。

9.权利要求1所述的吉氏副拟杆菌在制备预防或辅助治疗肥胖及相关疾病的食品或保健品中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述食品为发酵乳、酸乳酪、冻酸乳酪、奶粉、浓缩奶、软质奶酶、布丁或饮料。

11.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述保健品是乳液制品、溶液制品、粉末制品或固体制品。

12.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述保健品包含1×10⁵-1×10¹⁴CFU/mL或1×10⁵-1×10¹⁴CFU/g的吉氏副拟杆菌。

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