CN111728986A - 益生菌组合物及其应用和益生菌产品 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种益生菌组合物及其应用和益生菌产品，该益生菌组合物按重量份数计包括：20‑40份吉氏副拟杆菌、20‑40份小克里斯滕森氏菌和20‑40份嗜黏蛋白阿克曼菌。通过含有特定比例的吉氏副拟杆菌、小克里斯滕森氏菌和嗜黏蛋白阿克曼菌的益生菌组合物，能够有效降低肠道通透性和降低肠道炎症水平，进而能够有效改善肠道物理物理屏障、化学屏障和免疫屏障，使得由饮食/代谢疾病引起的肠道屏障功能异常得到改善或缓解，可广泛用于制备调节肠道屏障功能的药物、食品或保健品中。此外，该益生菌组合物还能够改善由代谢疾病症引起的体重、血糖水平或血脂水平异常的情况。
Description
技术领域
本发明涉及微生物医药技术领域，具体而言，涉及一种益生菌组合物及其应用和益生菌产品。
背景技术
肠道不仅是机体消化吸收的器官，也是集内分泌、免疫和屏障等功能为一体的器官，在正常生理条件下，肠道能够消化、吸收各种营养物质，同时又能通过控制肠道内微生态平衡、抑制代谢产物进入机体以及分泌激素等途径来起到肠道屏障功能，使机体处于健康状态。
当肠道屏障受到损伤时，肠道通透性增加，此时肠道内的致病微生物和内毒素等则能通过肠道屏障系统进入到血液或组织中，从而导致机体处于疾病状态。因此，维持肠道屏障功能正常对机体的健康状态有至关重要的作用。另外，大量研究表明临床上许多疾病(如肥胖症、糖尿病、脂肪肝、胰腺炎、炎症性肠病、癌症等)的发生、发展和转归与肠道屏障功能异常紧密相关。因此，针对肠道屏障功能异常进行干预治疗对阻断疾病恶化和加快疾病恢复具有非常积极的作用。
肠道屏障功能除了肠道菌群稳态形成的微生物屏障之外，还存在其他屏障作用：物理屏障(上皮细胞紧密连接形成选择透过性)、化学屏障和免疫屏障。目前虽然大量研究表明益生菌能够调节肠道菌群结构，但是缺少能够有效改善或提高肠道物理屏障、化学屏障和免疫屏障功能的益生菌组合物产品。
鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的目的在于提供一种益生菌组合物及其应用和益生菌产品，以改善上述问题。
本发明是这样实现的：
第一方面，本发明的实施例提供了一种益生菌组合物，所述益生菌组合物按重量份数计包括：20-40份吉氏副拟杆菌(Parabacteroides distasonis)、20-40份小克里斯滕森氏菌(Christensenella minuta)和20-40份嗜黏蛋白阿克曼菌(Akkermansiamuciniphila)。
第二方面，本发明的实施例还提供了一种益生菌产品，其包括上述益生菌组合物和食品、保健品或医学上可接受的载体、辅料或添加剂。
第三方面，本发明的实施例还提供了上述益生菌组合物在制备调节肠道屏障功能的药物中的应用。
第四方面，本发明的实施例还提供了上述益生菌组合物在制备降低肠道通透性和/或降低肠道炎症水平的药物中的应用。
第五方面，本发明的实施例还提供了上述益生菌组合物在制备增加紧密连接蛋白基因表达水平和/或增加黏蛋白基因表达水平的药物中的应用。
第六方面，本发明的实施例还提供了上述益生菌组合物在制备降低炎症因子TNF-α基因表达水平和/或增加抗菌肽Reg3g基因表达水平的药物中的应用。
第七方面，本发明的实施例还提供了上述益生菌组合物在制备降低体重、改善血糖水平或改善血脂水平的药物中的应用。
本发明的上述实施例具有以下有益效果：通过含有特定比例的吉氏副拟杆菌、小克里斯滕森氏菌和嗜黏蛋白阿克曼菌的益生菌组合物，能够有效降低肠道通透性和降低肠道炎症水平，进而能够有效改善肠道物理物理屏障、化学屏障和免疫屏障，使得由饮食/代谢疾病引起的肠道屏障功能异常得到改善或缓解，可广泛用于制备调节肠道屏障功能的药物、食品或保健品中。此外，该益生菌组合物还能够改善由代谢疾病症引起的体重、血糖水平或血脂水平异常的情况。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为本发明实施例1的益生菌组合物对高脂饮食诱导小鼠体重的影响；
图2为本发明实施例1的益生菌组合物对高脂饮食诱导小鼠回肠occludin基因表达量的影响；
图3为本发明实施例1的益生菌组合物对高脂饮食诱导小鼠回肠ZO-1基因表达量的影响；
图4为本发明实施例1的益生菌组合物对高脂饮食诱导小鼠回肠Muc2基因表达量的影响；
图5为本发明实施例1的益生菌组合物对高脂饮食诱导小鼠回肠炎症因子基因表达量的影响；
图6为本发明实施例1的益生菌组合物对高脂饮食诱导小鼠回肠抗菌肽基因表达量的影响；
图7为本发明实施例1的益生菌组合物对肥胖小鼠体重的影响；
图8为本发明实施例1的益生菌组合物对肥胖小鼠血清总胆固醇含量的影响；
图9为本发明实施例1的益生菌组合物对肥胖小鼠血清甘油三酯含量的影响；
图10为本发明实施例1的益生菌组合物对肥胖小鼠肠系膜脂肪的影响；
图11为本发明实施例1的益生菌组合物对肥胖小鼠附睾脂肪的影响；
图12为本发明实施例1的益生菌组合物对肥胖小鼠肾周脂肪的影响。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
下面对本发明提供的一种益生菌组合物及其应用和益生菌产品进行具体说明。
本发明的一些实施方式提供了一种益生菌组合物，该益生菌组合物按重量份数计包括：20-40份吉氏副拟杆菌、20-40份小克里斯滕森氏菌和20-40份嗜黏蛋白阿克曼菌。
一些实施方式中，该益生菌组合物由以下重量份的益生菌组成：20-40份吉氏副拟杆菌、20-40份小克里斯滕森氏菌和20-40份嗜黏蛋白阿克曼菌。
通常通过益生菌例如乳杆菌、双歧杆菌来直接或间接调整宿主肠道微生物的组成，激活宿主内源性微生物群(即调整肠道菌群结构)来实现调整肠胃功能，因此，目前还缺少能够同时有效改善肠道物理物理屏障、化学屏障和免疫屏障的益生菌组合。本发明的发明人通过大量研究和实践，创造性地发现，吉氏副拟杆菌、小克里斯滕森氏菌和嗜黏蛋白阿克曼菌以上述比例组合在一起的组合物，能够有效降低肠道通透性和降低肠道炎症水平，进而能够有效改善肠道物理物理屏障、化学屏障和免疫屏障，使得由饮食/代谢疾病引起的肠道屏障功能异常得到改善或缓解，可广泛用于制备调节肠道屏障功能的药物、食品或保健品中。
为了获得较佳的实施效果，进一步优化上述各益生菌配比，较佳的实施方式中，该益生菌组合物由以下重量份的益生菌组成：30份吉氏副拟杆菌、35份小克里斯滕森氏菌和35份嗜黏蛋白阿克曼菌。
需要说明的是，本发明的实施方式中的三种益生菌为现有菌种，可通过现有方法培养得到，或者通过现有途径直接购买获得。
本发明的一些实施方式还提供了一种益生菌产品，其包括上述益生菌组合物和食品、保健品或医学上可接受的载体、辅料或添加剂。在实际的应用过程中，可以将该益生菌组合物应用于食品、保健品以及药物中，因此，在获得这些益生菌产品时，根据需要可以在益生菌产品中添加不影响益生菌组合物效果或者能够增加辅助效果的辅料或添加剂，或者常规添加的载体。本发明实施方式，并不对具体的载体、辅料或添加剂作限制。
为了使得益生菌能够更好地作用于肠道，本发明的一些实施方式中，益生菌产品还包括益生元成分。可选地，一些实施方式中，益生元成分包括低聚果糖、低聚半乳糖、低聚木糖、低聚异麦芽糖、菊粉和大豆低聚糖中的至少一种。通过益生元成分可以刺激本发明实施方式中的益生菌组合物中的益生菌的生长与活性。
一些实施方式中，根据需要，益生菌产品的剂型包括但不限于片剂、胶囊、颗粒剂、口服液、混悬液、乳剂或粉末剂。益生菌产品的类型包括但不限于食品、保健品或药物。
一些实施方式中，益生菌产品为复合益生菌片。复合益生菌片按重量百分比计包括24％的吉氏副拟杆菌冻干粉、28％的小克里斯滕森氏菌冻干粉、28％的嗜黏蛋白阿克曼菌冻干粉、5％的菊粉、10％的淀粉和5％的乳糖。
本发明的一些实施方式还提供了上述益生菌组合物在制备调节肠道屏障功能的药物中的应用。
具体地，一些实施方式中，肠道屏障功能的异常是由不当饮食或代谢疾病引起的，可选地，肠道屏障功能的异常由高脂饮食或肥胖症引起。其中，调节肠道屏障功能包括缓解肠道炎症和改善肠道通透性。
本发明的一些实施方式还提供了上述益生菌组合物在制备降低肠道通透性和/或降低肠道炎症水平的药物中的应用。
进一步地，本发明的一些实施方式还提供了上述益生菌组合物在制备增加紧密连接蛋白基因表达水平和/或增加黏蛋白基因表达水平的药物中的应用。
进一步地，本发明的一些实施方式还提供了上述益生菌组合物在制备降低炎症因子TNF-α基因表达水平和/或增加抗菌肽Reg3g基因表达水平的药物中的应用。
进一步地，本发明的一些实施方式还提供了上述益生菌组合物在制备降低体重、改善血糖水平或改善血脂水平的药物中的应用。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1
本实施例提供了一种益生菌组合物，其由以下重量份的益生菌组成：30份吉氏副拟杆菌、35份小克里斯滕森氏菌和35份嗜黏蛋白阿克曼菌。
实施例2
本实施例提供了一种益生菌组合物，其由以下重量份的益生菌组成：20份吉氏副拟杆菌、30份小克里斯滕森氏菌和40份嗜黏蛋白阿克曼菌。
实施例3
本实施例提供了一种益生菌组合物，其由以下重量份的益生菌组成：40份吉氏副拟杆菌、30份小克里斯滕森氏菌和20份嗜黏蛋白阿克曼菌。
实施例4
本实施例提供了一种复合益生菌片，其按重量百分比计包括24％的吉氏副拟杆菌冻干粉、28％的小克里斯滕森氏菌冻干粉、28％的嗜黏蛋白阿克曼菌冻干粉、5％的菊粉、10％的淀粉和5％的乳糖。
需要说明的是，以上实施例中的三种益生菌可由以下方法制备得到：
分离纯化方法：取健康黄种人新鲜粪便样本适量至于含有无菌保存液(3％PEG溶液，即称取30g聚乙二醇3350溶于1000mL生理盐水中，于121℃，15min条件下高压灭菌。)的样品保存管中，用涡旋振荡器震荡10分钟混匀，随后于厌氧工作站中用无菌生理盐水稀释至10-6稀释度，吸取0.1mL菌液涂布于厌氧血琼脂平板上，在厌氧工作站中37℃培养72小时。采取分区划线法，用无菌牙签挑取不同形态的单菌落在厌氧血琼脂平板上进行划线分离培养。经72小时培养后，在分区平板上提取分离效果好的菌落进行传代培养及鉴定，由此得到吉氏副拟杆菌、小克里斯滕森氏菌和嗜黏蛋白阿克曼菌。
实施例5
本实施例提供了实施例1中的益生菌组合物对肥胖小鼠屏障功能的影响。
减肥药物：利拉鲁肽，商品名为
Nordisk，使用时按照15μg/kg/d皮下注射。
实验方法：
(1)将培养好的吉氏副拟杆菌、小克里斯滕森氏菌和嗜黏蛋白阿克曼菌分别用无菌PBS调整菌液浓度为1×109CFU/mL，按照30:35:35比例混合后对小鼠进行灌胃，灌胃体积为0.2mL，每日灌胃一次。
(2)选取6-8周龄雄性C57BL/6型小鼠随机分成四组，每组设置9个平行组，每一组按如下分配设置：
对照组1：正常维持饲料+无菌生理盐水；
对照组2：高脂饲料+无菌生理盐水；
对照组3：高脂饲料+减肥药物；
实验组4：高脂饲料+实施例1的益生菌组合物。
其中，正常维持饲料脂肪热量为12％，高脂饲料脂肪热量为45％，需要说明的是上述实验中，正常维持饲料购买自广州市瀚程实验器材有限公司，高脂饲料购买自北京博奥派克生物科技有限公司，厂家是美国RDI公司。
(3)连续给药6周，每周测定小鼠体重；给药结束后解剖取小鼠回肠组织，测定小鼠回肠黏蛋白MUC2、紧密连接蛋白ZO-1和occludin、炎症因子TNFα以及抗菌肽Reg3g基因表达量。
其实验结果如图1-图6所示。根据图1结果可知，与对照组2相比，实验组4能够有效控制高脂饮食诱导小鼠体重的增加，且与对照组3无显著性差异。这一结果表明，益生菌组合物能够有效缓解高脂饮食诱导的肥胖症状。
根据图2、图3、图4、图5和图6结果可知，与对照组1相比，对照组2中紧密连接蛋白occludin、黏蛋白Muc2和抗菌肽Reg3g基因表达量明显下降，同时发现对照组2中炎症因子TNF-α基因表达量显著高于对照组1，这说明高脂饮食诱导能够破坏小鼠肠道物理屏障、化学屏障和免疫屏障。但益生菌组合物干预后，与对照组2相比，实验组4中紧密连接蛋白occludin和ZO-1、黏蛋白Muc2以及抗菌肽Reg3g基因表达量显著升高，同时炎症因子TNF-α基因表达量显著降低，并且几乎与对照组1中的基因表达量处同一水平，这一结果表明益生菌组合物能够有效改善/修复高脂饮食诱导对肠道屏障功能的破坏，甚至使其肠道屏障功能恢复至健康水平。
实施例6
本实施例提供了实施例1中的益生菌组合物对肥胖小鼠肥胖症状的影响。
实验方法：
(1)将培养好的吉氏副拟杆菌、小克里斯滕森氏菌和嗜黏蛋白阿克曼菌分别用无菌PBS调整菌液浓度为1×109CFU/mL，按照30:35:35比例混合后对小鼠进行灌胃，灌胃体积为0.2mL，每日灌胃一次。
(2)选取6-8周龄雄性C57BL/6型小鼠随机分成四组，每组设置9个平行组，每一组按如下分配设置：
对照组1：正常维持饲料+无菌生理盐水；
对照组2：高脂饲料+无菌生理盐水；
对照组3：高脂饲料+减肥药物；
实验组4：高脂饲料+益生菌组合物。
其中，正常维持饲料脂肪热量为12％，高脂饲料脂肪热量为45％。
(3)连续给药6周后，对小鼠进行称重和采血操作，随后处死解剖收集小鼠各脂肪组织并称重。
其实验结果如图7-图12所示。根据图7可知，与对照组2相比，实验组4体重显著下降，且与对照组3体重无显著性差异，表明益生菌组合物能够有效降低肥胖机体的体重。根据图8和9结果可知，虽然各组小鼠血清甘油三酯含量无明显差异，但实验组4的血清总胆固醇含量显著低于对照组2，这一结果说明益生菌组合物能够有效控制肥胖机体的血脂水平。另外，由图10、11和12结果可知，与对照组2相比，实验组4的肠系膜脂肪、附睾脂肪和肾周脂肪含量显著下降，这一结果说明益生菌组合物能够有效缓解肥胖机体脂肪堆积。因此，该益生菌组合物能够有效改善肥胖机体的肥胖症状，如超重、血脂升高和脂肪过度积累等。需要说明的是，以上实验中的图的结果以Mean±SEM表示，*p<0.05与对照组2相比。
综上所述，本发明的实施方式提供的益生菌组合物，能有效通过降低肠道通透性和降低肠道炎症水平来改善或缓解由饮食/代谢疾病引起的肠道屏障功能异常，除此之外还能缓解代谢疾病症状，可广泛应用于制备调节肠道屏障功能的药物、食品或保健品中。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。同时，以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种益生菌组合物，其特征在于，所述益生菌组合物按重量份数计包括：20-40份吉氏副拟杆菌、20-40份小克里斯滕森氏菌和20-40份嗜黏蛋白阿克曼菌。
2.一种益生菌产品，其特征在于，其包括权利要求1所述的益生菌组合物和食品、保健品或医学上可接受的载体、辅料或添加剂。
3.根据权利要求2所述的益生菌产品，其特征在于，所述益生菌产品还包括益生元成分，优选地，所述益生元成分包括低聚果糖、低聚半乳糖、低聚木糖、低聚异麦芽糖、菊粉和大豆低聚糖中的至少一种。
4.根据权利要求2所述的益生菌产品，其特征在于，所述益生菌产品的剂型为片剂、胶囊、颗粒剂、口服液、混悬液、乳剂或粉末剂；
优选地，所述益生菌产品的类型为食品、保健品或药物。
5.如权利要求1所述的益生菌组合物在制备调节肠道屏障功能的药物中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述肠道屏障功能的异常是由不当饮食或代谢疾病引起的，优选地，所述肠道屏障功能的异常由高脂饮食或肥胖症引起。
7.如权利要求1所述的益生菌组合物在制备降低肠道通透性和/或降低肠道炎症水平的药物中的应用。
8.如权利要求1所述的益生菌组合物在制备增加紧密连接蛋白基因表达水平和/或增加黏蛋白基因表达水平的药物中的应用。
9.如权利要求1所述的益生菌组合物在制备降低炎症因子TNF-α基因表达水平和/或增加抗菌肽Reg3g基因表达水平的药物中的应用。
10.如权利要求1所述的益生菌组合物在制备降低体重、改善血糖水平或改善血脂水平的药物中的应用。
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