CN110836943B

CN110836943B - 一种用于替米沙坦片和替米沙坦胶囊杂质检测的分析方法

Info

Publication number: CN110836943B
Application number: CN201911201015.3A
Authority: CN
Inventors: 李保林; 刘一平; 罗云华; 朱勤
Original assignee: JIANGXI XINGLIN BAIMA PHARMACEUTICAL CO Ltd
Current assignee: JIANGXI XINGLIN BAIMA PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority date: 2019-11-29
Filing date: 2019-11-29
Publication date: 2022-02-15
Anticipated expiration: 2039-11-29
Also published as: CN110836943A

Abstract

本发明提供一种用于替米沙坦片和替米沙坦胶囊杂质检测的分析方法，属于药物检测领域。本发明提供的方法能对替米沙坦片和替米沙坦胶囊中杂质运用超高效液相色谱法进行定性和定量分析，包括杂质A、杂质B、杂质C、杂质E、杂质F、杂质G、杂质H和杂质I中的任意一种或多种。本发明采用的超高效液相色谱法，与传统的高效液相色谱法相比，缩短了分析时间，同时减少了溶剂用量降低了分析成本；流动相中未添加离子对试剂，大大延长了色谱柱的使用寿命；本方法能够将替米沙坦和以上8种替米沙坦杂质完全分离开来，且基线良好，定量限较高，更利于替米沙坦胶囊杂质的定性及定量。

Description

一种用于替米沙坦片和替米沙坦胶囊杂质检测的分析方法

技术领域

本发明涉及药物检测领域，具体是涉及一种用于替米沙坦片和替米沙坦胶囊杂质检测的分析方法。

背景技术

替米沙坦化学名为4′-[[4-甲基-6-(l-甲基-2-苯并咪唑基)-2-丙基-1-苯并咪唑基]甲基]-2-联苯甲酸，分子式为C₃₃H₃₀N₄O₂。本品为特异性的非肽类血管紧张素II受体拮抗剂，能选择性阻断血管平滑肌和肾上腺中的血管紧张素II与其受体亚型AT1的结合，从而阻断血管收缩以及醛固酮的分泌，产生降压作用。本品可使收缩压和舒张压均降低而不影响心率，在AT1受体位点无部分激动剂效应，不抑制血管紧张素转换酶的活性，也不与其他受体或离子通道结合或产生阻断作用，与血管紧张素转换酶抑制剂相比，干咳的发生率明显降低。

替米沙坦中可能存在以下8种杂质：

杂质A：

英文名：

4-methyl-6-(1-methyl-1H-benzimidazol-2-yl)-2-propyl-1H-benzimidazole

中文名：2-正丙基-4-甲基-6-(1'-甲基苯并咪唑-2-基)苯并咪唑

结构式：

CAS号：152628-02-9

分子量：304.389

杂质B：

英文名：

4′-[[7-methyl-5-(1-methyl-1H-benzimidazol-2-yl)-2-propyl-1H-benzimidazol-biphenyl-2-carboxylic acid

中文名：4'-[(1,7'-二甲基-2'-丙基[2,5'-联-1H-苯并咪唑]-1'-基)甲基]-[1,1'-联苯]-2-羧酸

结构式：

CAS号：1026353-20-7

分子量：514.617

杂质C：

英文名：1,1-dimethylethyl

4′-[[4-methyl-6-(1-methyl-1Hbenzimidazol-2-yl)-2-propyl-1H-benzimidazol-1-yl]methyl]biphenyl-2-carboxylate

中文名：4'-[[1,4'-二甲基-2'-丙基(2,6'-联-1H-苯并咪唑)-1'-甲基]-[1,1'-联苯基]-2-羧酸叔丁酯

结构式：

CAS号：144702-26-1

分子量：570.720

杂质E：

英文名：

1-[(2′-carboxybiphenyl-4-yl)methyl]-4-methyl-2-propyl-1H-benzimidazol-6-carboxylic acid

中文名：1-((2-羧基-[1,1-联苯]-4-基)甲基)-4-甲基-2-丙基-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸

结构式：

CAS号：884330-12-5

分子量：428.480

杂质F：

英文名：

4′-[[4-methyl-6-(1-methyl-1H-benzimidazol-2-yl)-2-propyl-1H-benzimidazol-1-yl]methyl]biphenyl-2-carboxamide

中文名：4′-[[4-甲基-6-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-2-丙基-1H-苯并咪唑-1-基]甲基]联苯-2-甲酰胺

结构式：

CAS号：915124-86-6

分子量：513.632

杂质G：

英文名：

4′-[[4-methyl-6-(1-methyl-1H-benzimidazol-2-yl)-2-propyl-1H-benzimidazol-1-yl]methyl]biphenyl-2-carbonitrile

中文名：4'-[(1,4'-二甲基-2'-丙基[2,6'-联-1H-苯并咪唑]-1'-基)甲基]联苯-2-甲腈

结构式：

CAS号：144702-27-2

分子量：495.617

杂质H：

英文名：1,1-dimethylethyl 4′-(bromomethyl)biphenyl-2-carboxylate

中文名：4'-溴甲基联苯-2-甲酸叔丁酯

结构式：

CAS号：114772-40-6

分子量：347.246

杂质I：

英文名：Methyl 4'-bromomethyl biphenyl-2-carboxylate

中文名：4'-溴甲基联苯-2-甲酸甲酯

结构式：

CAS号：114772-38-2

分子量：305.166

其中杂质A、杂质B、杂质C、杂质E、杂质F、杂质G和杂质H均为欧洲药典和英国药典收录的替米沙坦质量标准中的杂质，杂质I为中国药典收录的替米沙坦质量标准中的杂质。

目前现有官方收录的标准中包含替米沙坦杂质检测方法的有欧洲药典、英国药典、美国药典、中国药典和日本药典，其中欧洲药典和英国药典中替米沙坦标准的有关物质检查的色谱条件一致，日本药典和美国药典的色谱条件略有不同，而由于中国药典中替米沙坦标准所列出的杂质仅有一个I，故有关物质色谱条件与其他药典中色谱条件差别很大；色谱条件均如表1所示。

表1各药典色谱条件

由于替米沙坦相关杂质数量较多，且结构比较相似，给后续的杂质分析检测带来很大的困难。对比现有各国药典中替米沙坦质量标准的杂质检测技术，欧洲药典、英国药典、美国药典及日本药典均采用高效液相色谱法测定，且均采用梯度洗脱法，但是均不能将以上8种替米沙坦杂质完全分离，且基线较差，影响杂质的检测；再者这些杂质检测技术的流动相中均添加了正戊烷磺酸钠，属于离子对试剂，而离子对试剂会对色谱柱造成不可逆的伤害，离子对试剂和固定相结合产生不可逆吸附，进而影响固定相活性位点；比如十八烷基硅胶键合色谱柱，离子对试剂会影响色谱柱键合，从而达到分析样品的作用，这种反应对色谱柱影响很大，而且离子对试剂很难从色谱柱上冲洗干净，会大大缩短色谱柱的使用寿命；离子对试剂的浓度与其样品的保留时间有直接的影响，而且离子对试剂对pH值比较敏感，配制流动相时要求精确度较高，否则直接影响实验的重复性和重现性。虽然中国药典替米沙坦流动相中未添加离子对试剂，但是此色谱条件仅用于检测杂质I，不能完全检出并分离以上8种替米沙坦杂质。CN107966519A“高效液相色谱分析方法及替米沙坦药中杂质的检测方法”提供了一种能分离出8种杂质的分析方法。该法运用高效液相色谱采用梯度洗脱的方式进行分离，第一流动相为pH3.0-3.6的磷酸盐和正戊烷磺酸盐的水溶液；第二流动相为体积比为1:0.9-1.1的甲醇-乙腈混合溶液。在该法中因流动相和洗脱程序的选择，需要加入离子对试剂正戊烷磺酸盐增强杂质在色谱柱中的保留作用，以便能检测出8种杂质。

因此，开发出一种高效、经济的将替米沙坦及以上8种相关杂质完全分离开来的高效液相色谱法或超高效液相色谱法是目前亟待解决的问题。

发明内容

本发明目的是提供一种高效、经济的超高效液相色谱法，用于分离、检测替米沙坦和杂质A、杂质B、杂质C、杂质E、杂质F、杂质G、杂质H、杂质I的方法。

为了实现上述目的，本发明提供了一种用于替米沙坦片和替米沙坦胶囊杂质的分析方法，包括对替米沙坦片和替米沙坦胶囊中杂质运用超高效液相色谱法进行定性和定量分析，其中超高效液相色谱法采用梯度洗脱，其中梯度洗脱的流动相为流动相A和流动相B；

其中杂质具体为杂质A、杂质B、杂质C、杂质E、杂质F、杂质G、杂质H和杂质I中的任意一种或多种；

其中超高效液相色谱包括：超高效液相色谱仪，检测器，色谱柱为Fortis 4.6mm×250mm，3μm。

液相最常用的色谱柱填料为十八烷基硅烷键合硅胶，而色谱柱的长度和粒径都会影响样品的保留时间和分离效果，一般情况下，柱长越长，保留时间越大；粒径越小，理论塔板数越高，分离效果越好。

梯度洗脱程序如表2所示；流速为每分钟0.5mL；进样体积为10μL；柱温为40℃；检测波长230nm。

表2梯度洗脱程序

时间(分钟)	流动相A(％)	流动相B(％)
			0	40	60
20	40	60
			30	0	100
45	0	100
			50	40	60
60	40	60

其中流动相A为体积比为80:20的溶液Ⅰ-溶液Ⅱ混合溶液，流动相B为体积比为20:80的溶液Ⅰ-溶液Ⅱ混合溶液。

其中溶液Ⅰ为2g/L的磷酸二氢钾溶液[用磷酸调节pH值至3.0]，溶液Ⅱ为体积比20：80的甲醇-乙腈混合溶液。

其中溶液Ⅰ和溶液Ⅱ混合之后，超声脱气得流动相。

流动相由几种不同极性的溶剂组成，通过改变流动相中各溶剂组成的比例改变流动相的极性，使每个流出的组分都有合适的容量因子k，并使样品中的所有组分可在最短时间内实现最佳分离。为了减小梯度洗脱所带来基线波动，将水系流动相和有机系流动相进行预混，当有机系-水系比例为90:10时，室温条件下会析出结晶盐；故将有机系-水系比例预混比例调整为80:20，故确定流动相A为体积比为80：20溶液Ⅰ-溶液Ⅱ的混合溶液，流动相B为体积比为20：80溶液Ⅰ-溶液Ⅱ混合溶液。

本发明还提供了一种用于替米沙坦片和替米沙坦胶囊杂质的检测方法，具体步骤为：

S1.供试品溶液和对照溶液的配制：取替米沙坦胶囊内容物或替米沙坦片适量，混匀，研细，精密称取细粉适量(约相当于替米沙坦50mg)，置100mL容量瓶中，加0.005M氢氧化钠甲醇溶液适量，超声处理5分钟使替米沙坦溶解，放冷，用0.005M氢氧化钠甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；精密量取适量供试品溶液，用0.005M氢氧化钠甲醇溶液定量稀释制成每1mL约含1μg的溶液，作为对照溶液。

S2.系统适用性溶液的配制：取替米沙坦杂质A对照品、杂质B对照品、杂质C对照品、杂质E对照品、杂质F对照品、杂质G对照品、杂质H对照品和杂质I对照品各适量，加0.005M氢氧化钠甲醇溶液溶解并稀释制成每1mL中各约含有0.1mg的溶液，作为杂质对照贮备液；取替米沙坦50mg，精密称定，置100mL容量瓶中，分别精密加杂质对照贮备液1mL，加0.005M氢氧化钠甲醇溶液溶解并稀释至刻度线，摇匀，作为系统适用性溶液，运用上述的分析方法做出系统适用性色谱图。其中系统适用性色谱图，如说明书附图1所示，有11个峰，从左往右分别对应杂质A、杂质F、杂质E、杂质B、峰5、替米沙坦、杂质G、杂质I、峰9、杂质C、杂质H。

S3.测定：精密量取供试品溶液和对照溶液各10μl，分别采用上述的分析方法进行检测，记录色谱图。供试品溶液的色谱图与系统适用性色谱图进行比对，如有杂质峰，采用不加校正因子的自身对照法计算各杂质含量。

步骤S2中所得的系统适用性色谱图中有11个峰，除8种杂质和替米沙坦之外，出现了2个代表未知杂质的峰，并与基线完全分离，说明本发明采用的超高效液相色谱法检测限低，既能对已知杂质进行定性和定量分析，又能对未知杂质进行定性和定量分析。

流动相的选择、梯度洗脱程序的优化、色谱柱的选择带来的各替米沙坦杂质峰的理论塔板数、容量因子、选择因子的增加，最终导致各峰之间的分离效果增加，因此可不选择离子对试剂。此外，本发明中流动相的配制方法和梯度洗脱程序还可降低梯度变化所带来的基线波动，更有利于微量杂质的积分，也就是适合于杂质定量分析。

本发明的有益效果：

①本发明采用的超高效液相色谱法，与传统的高效液相色谱法相比，缩短了分析时间，同时减少了溶剂用量降低了分析成本；②本方法流动相中未添加离子对试剂，对色谱柱不会产生不可逆损伤，也就大大延长了色谱柱的使用寿命，节约了检测成本；③本方法能够将替米沙坦和以上8种替米沙坦杂质完全分离开来，并能检测出2种未知杂质，且基线良好，定量检测限＜0.05％，更利于替米沙坦片和替米沙坦胶囊中各种杂质的定性及定量分析。

附图说明

图1是本发明实施例1系统适用性溶液采集色谱图

图2是本发明实施例2参比制剂-美卡素(644434)溶液色谱图

图3是本发明实施例2自研替米沙坦胶囊(190901)溶液色谱图

图4是本发明对比例1替米沙坦杂质分析系统适用性图谱

图5是本发明对比例2替米沙坦杂质分析系统适用性图谱

图6是本发明对比例3替米沙坦杂质分析系统适用性图谱

图7是本发明对比例4替米沙坦杂质分析系统适用性图谱

图8是本发明对比例5替米沙坦杂质分析系统适用性图谱

以下结合附图及实施例对本发明作进一步说明。

具体实施方式

实施例1：

为了进一步缩短替米沙坦主峰保留时间，增加杂质之间分离度，减少基线波动，将对比例5中的色谱条件进行再次优化，如下所示。

仪器：Waters ACQUITY ARC(UHPLC)

色谱柱：C18，250mm×4.6mm 3μm

溶液Ⅰ：取磷酸二氢钾2.0g溶解于适量水中，用磷酸调节pH至3.0，再加水使成1L；

溶液Ⅱ：乙腈-甲醇(4:1)

流动相A：溶液Ⅰ-溶液Ⅱ(80：20)，超声脱气，即得；

流动相B：溶液Ⅰ-溶液Ⅱ(20：80)，超声脱气，即得；

流速：1mL/min 检测波长：230nm

柱温：40℃ 进样量：20μl

梯度洗脱程序如表3所示：

表3梯度洗脱程序

时间(min)	A(％)	B(％)
			0	40	60
20	40	60
			30	0	100
45	0	100
			50	40	60
60	40	60

稀释液：称取氢氧化钠0.2g，置1000ml烧杯中，加甲醇1000ml，超声使溶解，混匀，即得0.005M氢氧化钠甲醇溶液。

杂质对照贮备液：分别取替米沙坦杂质A、杂质B、杂质C、杂质E、杂质F、杂质G、杂质H和杂质I对照品各5mg，精密稳定，分别加入50ml容量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻度线，摇匀，即得，放冰箱中保存备用。

系统适用性溶液：取替米沙坦50mg，精密稳定，置100ml容量瓶中，分别精密加入杂质A、B、C、E、F、G、H、I贮备液各1ml，加稀释液溶解并稀释至刻度线，摇匀，即得。

取上述溶液分别照上述色谱条件进样分析，系统适用性溶液采集色谱图如图1所示，峰结果如表4所示。由图1和表4可以看出，实施例1所得色谱图基线很平稳，所有已知杂质和替米沙坦均被检出，从左往右分别对应杂质A、杂质F、杂质E、杂质B、峰5、替米沙坦、杂质G、杂质I、峰9、杂质C、杂质H。各成分峰的理论塔板数均不低于5000，且之间分离度均不低于1.5，达到基线分离要求；这表明此超高效液相色谱法可以有效的将8种替米沙坦相关杂质进行定性和定量，可以适用于替米沙坦片和替米沙坦胶囊有关物质的检测。

表4峰结果

峰结果

实施例2：

经过对本发明中的替米沙坦杂质分析方法进行方法学验证，确认本方法系统适用性、专属性、定量限与检验限、线性与范围、准确度、重复性及耐用性均符合验证要求；然后采用本发明的超高效液相色谱法进行参比制剂和自研替米沙坦胶囊有关物质的检测。

色谱条件：同实施例1

稀释液：同实施例1

杂质对照贮备液：同实施例1

系统适用性溶液：同实施例1

参比制剂溶液：取替米沙坦片-美卡素(644835、644263、644434)适量，研细，精密称取细粉适量(约相当于替米沙坦50mg)，置100mL容量瓶中，加稀释剂适量，超声处理5分钟使替米沙坦溶解，放冷，用稀释剂稀释至刻度线，摇匀，即得。

自研替米沙坦胶囊溶液：取自研替米沙坦胶囊(190801、190802、190901)内容物适量，研细，精密称取细粉适量(约相当于替米沙坦50mg)，置100mL容量瓶中，加稀释剂适量，超声处理5分钟使替米沙坦溶解，放冷，用稀释剂稀释至刻度线，摇匀，即得。

对照溶液：精密量取参比制剂溶液和自研替米沙坦胶囊溶液各1mL，分别置50mL容量瓶中，用稀释剂稀释至刻度线，摇匀；分别精密量取1mL，分别置10mL容量瓶中，用稀释剂稀释至刻度线，摇匀，作为各自的对照溶液。

取上述溶液照本发明的超高效液相色谱法进样分析，其中结果图谱如图2、图3所示，由结果图谱可知，图谱基线很平稳，各成分峰型良好，各峰之间均达到基线分离，确认本发明中的超高效液相色谱法适用于替米沙坦片及替米沙坦胶囊的杂质分析检测。

根据各供试品溶液及对照溶液的色谱图谱，采用不加校正因子的自身对照法以峰面积计算各杂质含量，计算结果如表5所示；可以看出①本方法可以检出并定量报告限0.05％以下的杂质，表明此方法定量限良好；②采用本方法分别检测三批替米沙坦片和替米沙坦胶囊，批间检测结果差别不大，表明重复性良好，且均适用于替米沙坦片和替米沙坦胶囊的杂质检测。

表5参比制剂和自研制剂杂质检测结果

注：N.D.表示未检出。

对比例1：

经过对比各国药典标准，欧洲药典、英国药典和美国药典收录杂质最多，且色谱条件基本一致，综合以上三个药典中替米沙坦质量标准中有关物质的色谱条件，确定采用以下色谱条件对替米沙坦及替米沙坦8种杂质进行检测分析，此色谱条件相对于以上三个药典中的色谱条件来说基本没有变化，仅仅对梯度洗脱程序进行了适当的优化，延长了有机相的变化时间及平衡时间。

仪器：Waters ALLIANCE 2695(HPLC)

色谱柱：C18，250mm×4.6mm 5μm

流动相A：取磷酸二氢钾2.0g和正戊烷磺酸钠3.8g溶解于适量水中，用磷酸调节pH至3.0，再加水使成1L，真空抽滤，即得；

流动相B：乙腈-甲醇(4:1)，真空抽滤，即得；

流速：1ml/min 检测波长：230nm

柱温：40℃ 进样量：20μl

梯度洗脱程序如表6所示：

表6

时间(min)	A(％)	B(％)
			0	70	30
3	70	30
			28	20	80
35	20	80
			40	70	30
45	70	30

稀释液：同实施例1。

杂质对照贮备液：同实施例1。

系统适用性溶液：同实施例1。

取上述溶液分别照上述色谱条件进样分析，系统适用性溶液采集色谱图如图4所示。根据色谱图可以看出，对比例1中仅对梯度洗脱程序进行了适当的优化，延长了有机相的变化时间及平衡时间，替米沙坦与相邻杂质、各杂质之间未完全达到基线分离，且未将8种替米沙坦杂质完全检出，且25分钟后基线波动很大，对杂质的定量影响很大。

对比例2：

由于对比例1中色谱条件不满足替米沙坦杂质分析的要求，故需要对色谱条件进行优化。首要任务排除基线波动的原因，这可能是由于梯度洗脱时，流动相比例的变化所导致的基线波动。故在对比例2中将对比例1中的流动相进行预混，再用于梯度洗脱，色谱条件优化如下所示。

仪器：Waters ALLIANCE 2695(HPLC)

色谱柱：C18，250mm×4.6mm 5μm

溶液Ⅰ：取磷酸二氢钾2.0g和正戊烷磺酸钠3.8g溶解于适量水中，用磷酸调节pH至3.0，再加水使成1L。

溶液Ⅱ：乙腈-甲醇(4:1)

流动相A：溶液Ⅰ-溶液Ⅱ(9：1)，真空抽滤，即得；

流动相B：溶液Ⅰ-溶液Ⅱ(1：9)，真空抽滤，即得；

流速：1ml/min 检测波长：230nm

柱温：40℃ 进样量：20μl

梯度洗脱程序如表7所示：

表7

时间(min)	A(％)	B(％)
			0	70	30
3	70	30
			28	20	80
35	20	80
			40	70	30
45	70	30

稀释液：同实施例1；

杂质对照贮备液：同实施例1；

系统适用性溶液：同实施例1；

取上述溶液分别照上述色谱条件进样分析，系统适用性溶液采集色谱图如图5所示。由替米沙坦系统适用性图谱可知，25分钟之后的基线波动仍然很大，表明可能不是由于流动相比例的变化导致的基线波动，仍然需要对色谱条件进行优化。

对比例3：

由于对比例2中色谱条件仍不满足替米沙坦杂质分析的要求，故需要继续对色谱条件进行优化。该色谱条件未将杂质完全检出且基线波动很大，可能是由于梯度洗脱程序不够完善的原因，故需要将梯度洗脱程序进行优化，色谱条件优化如下所示。

仪器：Waters ALLIANCE 2695(HPLC)

色谱柱：C18，250mm×4.6mm 5μm

溶液Ⅱ：乙腈-甲醇(4:1)

流动相A：溶液Ⅰ-溶液Ⅱ(9：1)，真空抽滤，即得；

流动相B：溶液Ⅰ-溶液Ⅱ(1：9)，真空抽滤，即得；

流速：1ml/min 检测波长：230nm

柱温：40℃ 进样量：20μl

梯度洗脱程序如表8所示：

表8

时间(min)	A(％)	B(％)
			0	60	40
30	60	40
			40	90	10
55	90	10
			55.01	60	40
60	60	40

稀释液：同实施例1；

杂质对照贮备液：同实施例1；

系统适用性溶液：同实施例1；

取上述溶液分别照上述色谱条件进样分析，系统适用性溶液采集色谱图如图6所示。由替米沙坦系统适用性图谱可知，杂质H未检出，这可能是由于45分钟之后的基线波动影响而导致的，故仍然需要对色谱条件进行优化。

对比例4：

由于对比例3中色谱条件仍然不满足替米沙坦杂质分析的要求，故仍需要对色谱条件进行优化。首先考虑到离子对试剂-正戊烷磺酸钠会对色谱柱产生不可逆的损伤，也可能会对基线产生一定的影响，故将正戊烷磺酸钠从流动相中去除掉；其次从上述对比例中可以得知，基线波动均是在有机相比例增加的一段时间内，这可能是由于滤膜质量较差，导致真空抽滤脱气时滤膜上的杂质进入流动相中，然后在高比例的乙腈中洗脱出来，导致基线波动很大，故将脱气方式更改为超声脱气，色谱条件优化如下所示。

仪器：Waters ALLIANCE 2695(HPLC)

色谱柱：C18，250mm×4.6mm 5μm

溶液Ⅱ：乙腈-甲醇(4:1)

流动相A：溶液Ⅰ-溶液Ⅱ(9：1)，超声脱气，即得；

流动相B：溶液Ⅰ-溶液Ⅱ(1：9)，超声脱气，即得；

流速：1ml/min 检测波长：230nm

柱温：40℃ 进样量：20μl

梯度洗脱程序如表9所示：

表9

稀释液：同实施例1；

杂质对照贮备液：同实施例1；

系统适用性溶液：同实施例1；

取上述溶液分别照上述色谱条件进样分析，系统适用性溶液采集色谱图如图7所示。由结果图谱可以看出，基线很平稳，但是未检测出所有替米沙坦杂质，且杂质E和杂质F保留时间基本重合。

对比例5：

由于实施例4中替米沙坦杂质E和杂质F未分离开来，故需要对色谱条件进行优化。为了提高杂质E和杂质F之间分离度，而又不添加离子对试剂，考虑是否可以通过采用超高效液相色谱仪和微小粒径色谱柱进行替米沙坦杂质分析，色谱条件暂时优化如下。

仪器：Waters ACQUITY ARC(UHPLC)

色谱柱：C18，250mm×4.6mm 3μm

流动相A：取磷酸二氢钾2.0g溶解于适量水中，用磷酸调节pH至3.0，再加水使成1L；

流动相B：甲醇；

流速：1mL/min 检测波长：230nm

柱温：40℃ 进样量：20μl

梯度洗脱程序如表10所示：

表10

时间(min)	A(％)	B(％)
			0	40	60
20	40	60
			40	10	90
60	10	90
			60.01	40	60
70	40	60

稀释液：同实施例1。

杂质对照贮备液：同实施例1。

系统适用性溶液：同实施例1。

取上述溶液分别照上述色谱条件进样分析，系统适用性溶液采集色谱图如图8所示。由结果图谱可以看出，基线基本平稳，杂质之间也基本达到基线分离，但是替米沙坦主峰保留时间偏后，可以将色谱再进一步优化。

最后需要强调的是，以上所述仅为本发明的优选实施例，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种变化和更改，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种用于替米沙坦片和替米沙坦胶囊杂质的分析方法，其特征在于，包括对替米沙坦片和替米沙坦胶囊中杂质运用超高效液相色谱法进行定性和定量分析，所述超高效液相色谱法采用梯度洗脱，所述梯度洗脱的流动相包括流动相A和流动相B；色谱柱为Fortis4.6mm×250mm，3μm；所述色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；

所述杂质具体为杂质A、杂质B、杂质C、杂质E、杂质F、杂质G、杂质H和杂质I；

杂质A结构式为

杂质B结构式为

杂质C结构式为

杂质E结构式为

杂质F结构式为

杂质G结构式为

杂质H结构式为

杂质I结构式为

所述流动相为溶液Ⅰ、溶液Ⅱ预混后经超声脱气制得，所述流动相A为体积比为80:20的溶液Ⅰ-溶液Ⅱ混合溶液，所述流动相B为体积比为20:80的溶液Ⅰ-溶液Ⅱ混合溶液；

所述溶液Ⅰ为2g/L的磷酸二氢钾溶液，pH为3.0，pH调节剂为磷酸；

所述溶液Ⅱ为体积比为20:80的甲醇-乙腈溶液；

梯度洗脱程序为：

。

2.根据权利要求1所述的用于替米沙坦片和替米沙坦胶囊杂质的分析方法，其特征在于，所述超高效液相色谱包括：超高效液相色谱仪，检测器，色谱柱为Fortis 4.6mm×250mm，3μm。

3.根据权利要求2所述的用于替米沙坦片和替米沙坦胶囊杂质的分析方法，其特征在于，所述检测器检测波长为230nm，所述色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶。

4.根据权利要求1所述的用于替米沙坦片和替米沙坦胶囊杂质的分析方法，其特征在于，所述梯度洗脱程序如表2所示；流速为每分钟0.5mL；进样体积为10μL；柱温为40℃；

表2梯度洗脱程序

。

5.根据权利要求1所述的用于替米沙坦片和替米沙坦胶囊杂质的分析方法，其特征在于，具体步骤为：

S1.供试品溶液和对照溶液的配制：取替米沙坦胶囊内容物或替米沙坦片适量，混匀，研细，精密称取细粉适量，置容量瓶中，加稀释剂适量，超声处理5分钟使替米沙坦溶解，放冷，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；精密量取适量供试品溶液，用稀释剂定量稀释制成每1mL约含1μg的溶液，作为对照溶液；

S2.系统适用性溶液的配制：取替米沙坦杂质A对照品、杂质B对照品、杂质C对照品、杂质E对照品、杂质F对照品、杂质G对照品、杂质H对照品和杂质I对照品各适量，加稀释剂溶解并稀释制成每1mL中各约含有0.1mg的溶液，作为杂质对照贮备液；取替米沙坦50mg，精密称定，置100mL容量瓶中，分别精密加杂质对照贮备液各1mL，加稀释剂溶解并稀释至刻度线，摇匀，作为系统适用性溶液；

S3.测定：精密量取供试品溶液、对照溶液、系统适用性溶液各10μl，进样进行检测，记录色谱图；供试品溶液的色谱图与系统适用性色谱图进行比对，如有杂质峰，采用不加校正因子的自身对照法计算各杂质含量。

6.根据权利要求5所述的用于替米沙坦片和替米沙坦胶囊杂质的分析方法，其特征在于，所述步骤S1、S2中稀释剂为0.005M氢氧化钠甲醇溶液。