CN110833555B

CN110833555B - 吡唑并嘧啶衍生物在治疗溃疡性结肠炎的用途

Info

Publication number: CN110833555B
Application number: CN201810928298.0A
Authority: CN
Inventors: 巫鑫; 欧阳静波; 陈焕展; 李柏霖; 韦杰; 钟杰敏; 赖树生; 林艳英; 黄源春
Original assignee: Guangxi Wuzhou Pharmaceutical Group Co Ltd
Current assignee: Guangxi Wuzhou Pharmaceutical Group Co Ltd
Priority date: 2018-08-15
Filing date: 2018-08-15
Publication date: 2023-03-24
Anticipated expiration: 2038-08-15
Also published as: CN110833555A

Abstract

本发明涉及药物技术领域，特别是吡唑并嘧啶衍生物在治疗溃疡性结肠炎的用途。所述溃疡性结肠炎与TNF‑α、IL‑1、PGE₂含量升高，MPO活性增强，IL‑10含量下降有关。本发明吡唑并嘧啶衍生物可通过降低TNF‑α、IL‑1、PGE₂含量，抑制MPO活性，提高IL‑10含量等联合作用机制，对溃疡性结肠炎产生良好的治疗效果。

Description

吡唑并嘧啶衍生物在治疗溃疡性结肠炎的用途

技术领域

本发明涉及药物技术领域，特别是吡唑并嘧啶衍生物在治疗溃疡性结肠炎的用途。

背景技术

溃疡性结肠炎(ulcerative colitis，UC)是一种肠道非特异性疾病，临床表现以腹泻、黏液脓血便、腹痛、里急后重等为主。目前，西医治疗溃疡性结肠炎以氨基水杨酸制剂、糖皮质激素和免疫抑制剂为主，但效果不甚理想且容易复发。

吡唑并嘧啶衍生物(式Ⅰ)是一种靶向作用于FLT3激酶的小分子抑制剂，是申请人自主研发的新型化合物，目前化合物专利已经在中国、美国、日本等地区获得了授权。

目前仅有关于吡唑并嘧啶衍生物在治疗急性髓性白血病及银屑病方面的报道，而未见有在治疗溃疡性结肠炎方面的用途。

发明内容

为了克服现有技术存在的不足，本发明提供吡唑并嘧啶衍生物在治疗溃疡性结肠炎的用途。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：

一种如式Ⅰ所示的吡唑并嘧啶衍生物或其药学上可接受的盐、水合物在制备治疗溃疡性结肠炎药物方面的用途

优选地，所述溃疡性结肠炎与TNF-α、IL-1、PGE₂含量升高，MPO活性增强，IL-10含量下降有关。

优选地，所述药学上可接受的盐包括盐酸盐、硫酸盐、甲磺酸盐、磷酸盐。

本发明还提供一种药物组合物在制备治疗溃疡性结肠炎药物方面的用途，其特征在于，所述药物组合物包含如式Ⅰ所示吡唑并嘧啶衍生物或其药学上可接受的盐、水合物作为有效成分，和药学上可接受的赋形剂。

优选地，所述所述药物组合物为注射制剂、口服制剂、外用制剂、缓释制剂、控释制剂。

优选地，所述所述口服制剂包括片剂、颗粒剂、胶囊剂。

优选地，所述药物组合物为控释制剂、缓释制剂、速释制剂。

UC的发病机制尚不清楚，免疫功能紊乱引起的细胞因子网络调控失衡和炎症介质的释放被认为是UC的主要机制之一。有研究表明，TNF-α及IL-1β则在UC肠道黏膜炎症的扩大中发挥了关键的作用。IL-10能抑制激活的单核细胞、巨噬细胞以及抑制单核细胞产生的IL-1β、TNF-α、IL-6等促炎细胞因子和趋化因子，在UC的发病过程中发挥重要作用。PGE₂能增加血管通透性引起组织水肿，使白细胞趋化、聚集，直接加重炎症反应溃疡性结肠炎发病过程中因免疫系统紊乱会引起脾脏肿大和胸腺萎缩，能反映炎症程度的MPO活性也相应的升高。

本发明吡唑并嘧啶衍生物原为FLT3抑制剂，通过研究发现，本发明吡唑并嘧啶衍生物可通过降低TNF-α、IL-1、PGE₂含量，抑制MPO活性，提高IL-10含量等联合作用机制，对溃疡性结肠炎产生良好的治疗效果。

与现有技术比较，本发明的方法具有以下优点：

本发明提供的吡唑并嘧啶衍生物，是一种新的治疗溃疡性结肠炎的药物，不但扩展了现有治疗溃疡性结肠炎的药物选择性，为该病的有效治疗提供了更多的药物选择，也进一步扩展了本发明吡唑并嘧啶衍生物作为FLT3抑制剂的应用范围。

附图说明

图1为正常组大鼠结肠经HE染色的组织形态病理观察。

图2为模型组大鼠结肠经HE染色的组织形态病理观察。

图3为吡唑并嘧啶衍生物高剂量组大鼠结肠经HE染色的组织形态病理观察。

图4为吡唑并嘧啶衍生物中剂量组大鼠结肠经HE染色的组织形态病理观察。

图5为吡唑并嘧啶衍生物低剂量组大鼠结肠经HE染色的组织形态病理观察。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1对TNBS诱导大鼠溃疡性结肠炎治疗作用

1.实验动物：SPF级雄性SD大鼠75只，体质量(220±20)g，四川大学实验动物中心提供。

2.实验材料：吡唑并嘧啶衍生物由发明人合成。吡唑并嘧啶衍生物由发明人合成。将蓖麻油与乙醇1：1混合后经过0.22μm的无菌滤膜，得到ELE溶液，称取一定质量的本发明吡唑并嘧啶衍生物粉末，用ELE溶液溶解粉末，待粉末完全溶解后，加入一定体积的灭菌水，混匀待用。ELE溶液与无菌水的体积比为1：3。2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBS)(美国SIGMA公司)，髓过氧化物酶(MPO)、白介素10(IL-10)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1(IL-1)、前列腺素2(PGE₂)(南京建成生物工程研究所)。

3.实验试剂的配置：将5％的TNBS水溶液与无水乙醇按比例配制成50％的TNBS/乙醇溶液；水合氯醛晶体溶于蒸馏水分别配制成5％和10％的混悬液。

4.动物分组及给药：75只SD雄性大鼠分为正常组、模型组、吡唑并嘧啶衍生物高剂量组(以下简称高剂量组)、吡唑并嘧啶衍生物中剂量组(以下简称中剂量组)、吡唑并嘧啶衍生物低剂量组(以下简称低剂量组)，各组均15只。除正常组外，其余各组硝基苯磺酸(TNBS,100mg/kg)灌肠法建立UC模型。造模8h后，各组开始灌胃给药，高剂量组灌胃给予本发明吡唑并嘧啶衍生物12mg/kg/d(1.2mg/mL药液)，中剂量组灌胃给予本发明吡唑并嘧啶衍生物6mg/kg/d(0.6mg/mL药液)，低剂量组灌胃给予本发明吡唑并嘧啶衍生物3mg/kg/d(0.3mg/mL药液)；空白组、模型组均给予ELE溶液和蒸馏水1:3体积比的混合液10mL/kg。共10d。

5.检测指标

(1)造模6h后电子温度计测大鼠肛温，连测3d；末次给药后大鼠称重；统计各组大鼠的死亡数，分析死亡原因；一般行为学观察。

(2)结肠指数及溃疡面积的称量和计算：末次给药后，腹腔注射10％水合氯醛(0.4mL/100g)麻醉，立即剖取肛门上4-10cm间肠段，0.9％氯化钠溶液清洗，滤纸吸干，称重并记录，计算结肠指数；沿肠系膜剪开肠管，记录溃疡面积。

(3)结肠组织细胞因子、炎性介质的检测：取结肠组织0.5g，按照结肠组织与0.9％氯化钠溶液1:9的比例制成匀浆，4000r/min，离心15min，取上清液，按试剂盒说明书检测TNF-α、PGE2、IL-1、IL-10含量和MPO活力。

(4)结肠组织病理形态学观察：取1cm肠段，4％福尔马林浸泡，常规脱水，石蜡包埋、切片，HE染色，显微镜下观察结肠组织形态学改变，并摄取照片。

6.统计学方法：采用SPSS 17.0处理数据，计量数据采用(均数±标准差)表示，采用方差分析；频数资料采用卡方检验，P<0.05为差异有统计学意义。

7.实验结果

(1)对溃疡性结肠炎大鼠死亡率、体质量、结肠指数和溃疡面积的影响

表1各组大鼠死亡率、体质量、结肠指数和溃疡面积

组别	死亡率(g)	体质量(g)	结肠指数	溃疡面积(cm<sup>2</sup>)
					正常组	0	242.6±7.3	8.25±0.23	0
模型组	33.3％	156.1±5.8*	14.46±0.27*	8.16±0.31*
					高剂量组	6.7％	189.3±6.5△	9.57±0.21△	3.93±0.26△
中剂量组	13.3％	178.4±5.3△	10.26±0.14△	5.28±0.29△
					低剂量组	26.7％	161.7±6.1	13.35±0.23	6.17±0.35△

与模型组比较，△P＜0.05；与正常组比较，*P＜0.05。

如表1所示，与正常组比较，模型组大鼠死亡率、结肠指数、溃疡面积均显著升高(P<0.05)，体质量显著降低(P<0.05)；与模型组比较，高剂量组、中剂量组大鼠体质量均升高(P<0.05)；高剂量组、中剂量组、低剂量组大鼠结肠指数均降低，其中以高剂量组、中剂量组最显著(P<0.05)；高剂量组、中剂量组、低剂量组大鼠结肠溃疡面积均减小(P<0.05)，以高剂量组最明显。

(2)对溃疡性结肠炎大鼠体温、TNF-α、IL-1含量的影响

表2各组大鼠体温、TNF-α、IL-1含量

组别	n	体温(℃)	TNF-α(pg/mL)	IL-1(pg/mL)
					正常组	15	37.5±0.2	162.54±15.21	120.26±20.15
模型组	10	39.5±0.4*	594.32±28.64*	546.37±29.36*
					高剂量组	14	37.4±0.3△	354.68±22.39△	356.92±32.51△
中剂量组	13	38.2±0.5△	427.82±25.47△	398.36±25.72△
					低剂量组	11	38.9±0.4	546.75±18.96	451.63±30.42△

与模型组比较，△P＜0.05；与正常组比较，*P＜0.05。

如表2所示，与空白组比较，模型组大鼠体温、TNF-α、IL-1含量均显著升高(P<0.05)；与模型组比较，高剂量组、中剂量组大鼠体温、TNF-α、IL-1含量均显著降低(P<0.05)，以高剂量组最显著。低剂量组大鼠体温、TNF-α无明显变化，但IL-1含量均显著降低(P<0.05)。

(3)对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织IL-10、PGE₂及MPO活性的影响

表3各组大鼠结肠组织IL-10、PGE₂含量和MPO活性

组别	n	IL-10(pg/mL)	PGE<sub>2</sub>(pg/mL)	MPO(pg/mL)
					正常组	15	453.84±22.95	213.64±30.18	0.53±0.10
模型组	10	286.75±28.31*	616.31±35.53*	2.83±0.15*
					高剂量组	14	462.36±25.72△	388.62±28.04△	0.76±0.08△
中剂量组	13	438.58±23.45△	492.95±32.48△	1.25±0.14△
					低剂量组	11	382.52±19.56△	586.46±36.74	2.41±0.12

如表3所示，与正常组比较，模型组大鼠结肠组织IL-10含量降低(P<0.05)；与模型组比较，高剂量组、中剂量组、低剂量组大鼠结肠组织IL-10含量升高(P<0.05)，以高剂量组最显著。

如表3所示，与正常组比较，模型组大鼠结肠组织PGE₂含量及MPO活性升高(P<0.05)；与模型组比较，高剂量组、中剂量组大鼠结肠组织PGE₂含量及MPO活性均降低(P<0.05)。低剂量组仅表现出降低趋势。

(4)对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织的病理改变

如图1所示，正常组黏膜表面光滑，上皮结构完整，大肠腺清晰，杯状细胞形态正常，无炎症细胞浸润；如图2所示，模型组黏膜表面起伏不平，可见大量炎性细胞浸润，腺体萎缩，排列紊乱，杯状细胞形态改变，有脓肿形成，可见溃疡面形成或黏膜大面积缺损，严重的甚至损害黏膜下层，表现为黏膜下层大量炎性浸润；如图3、4所示，高剂量组及中剂量组结肠组黏膜仍可见炎性细胞浸润，但明显少于模型组，仍可见腺体及杯状细胞；如图5所示，低剂量仍可见大量炎性细胞浸润，甚至达黏膜下层，腺体结构不完整，杯状细胞数目明显减少。

结论

本发明吡唑并嘧啶衍生物对溃疡性结肠炎有较好的治疗作用，其主要机制为调节细胞因子间平衡，减少炎性介质等。

虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims

1.一种如式Ⅰ所示的吡唑并嘧啶衍生物或其药学上可接受的盐在制备治疗溃疡性结肠炎的药物方面的用途

式Ⅰ。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述溃疡性结肠炎与TNF-α、IL-1、PGE2含量升高，MPO活性增强，IL-10含量下降有关。

3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述药学上可接受的盐包括盐酸盐、硫酸盐、甲磺酸盐、磷酸盐。

4.一种药物组合物在制备治疗溃疡性结肠炎的药物方面的用途，其特征在于，所述药物组合物包含如权利要求1中所述的如式Ⅰ所示吡唑并嘧啶衍生物或其药学上可接受的盐作为有效成分，和药学上可接受的赋形剂。

5.根据权利要求4所述的用途，所述药物组合物为口服制剂。

6.根据权利要求5所述的用途，所述口服制剂包括片剂、颗粒剂、胶囊剂。

7.根据权利要求4所述的用途，所述药物组合物为控释制剂、缓释制剂、速释制剂。