CN110777187B - 一种微生物型时间-温度指示器 - Google Patents

一种微生物型时间-温度指示器 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种微生物型时间‑温度指示器，其特征在于，是由如下步骤制成的：步骤S1：将细胞培养板放入洁净工作台中，打开灭菌灯充分灭菌1‑3小时；步骤S2：将pH混合指示剂，MRS固体培养基按体积比1:9混合均匀后，制得基质；步骤S3：使用0.1mol/L的氢氧化钠标准溶液调节基质的pH至7；步骤S4：使用微生物微胶囊与上述经过PH调节后的基质中，混合均匀，取凝固的混合物灭菌，密封后放置在40‑50℃的恒温水浴锅中。本发明公开的微生物型时间‑温度指示器制备条件温和，制备过程简单，能有效保证乳酸菌的活性，提高微生物菌种的生存几率，可以使制备出的微生物微胶囊应用在固态时间‑温度指示器，用于表征低温下的食品的货架期寿命。

Description

一种微生物型时间-温度指示器
技术领域
本发明涉及时间-温度指示技术领域，尤其涉及一种利用微胶囊技术来固定微生物菌种和保护其在在低温下的活性的微生物型时间-温度指示器。
背景技术
随着生活品质的提高和经济文化的发展，人们对食品质量的要求与日俱增。其中冷链运输由于其对易腐食品货架寿命的延长效果，深受生产商及消费者的青睐。易腐食品，比如新鲜乳制品，通常不适宜在常温下储存和运输，且保质期较短，在生产、运输、储存的环节中，其品质的优劣不但与产品本身有关，还受到所处环境的影响。为了对食品的质量进行保证，减少运输过程中的损耗，对食品的温度和货架寿命在低温环境中进行实时监测是十分必要的。而时间-温度指示器(Time-temperature Indicator)可以解决上述货架期不准确的问题。
时间温度指示器是一种能够记录与跟踪生鲜农产品物流过程中的时间温度历程，并通过机械形变、颜色变化或颜色移动直接反映被监测产品的全部或者部分货架期的标识与感知技术。其监测结果比传统的预设保质期、最迟销售期等标识更加可靠，保障消费安全。根据不同的反应机理，其主要可以分为三类，分别为化学型时间-温度指示器、物理型时间-温度指示器与生物型时间-温度指示器。过去的研究主要集中在化学型物理型时间-温度指示器，而关于微生物型时间-温度指示器的研究很少。
微生物型时间-温度指示器选用引起食品腐败的特定菌种，将其放入培养基中生长代谢，在此过程中产酸，使得体系的pH值降低，最后体系中的指示器产生明显的颜色变化。菌种在培养基中的反应时间，决定了微生物型时间-温度指示器可以指示食品货架寿命的时间。微生物时间-温度指示器预测食品质量的优势在于，微生物的生长代谢导致大多数食品的品质变化。目前存在的微生物型时间-温度指示器活化能范围为82.55～127.28kJ/mol，其活化能与鲜牛奶、冷鲜肉和果蔬的活化能相比较差别较大，不能够十分准确监测它们的品质变化，并指示其货架期，且它们制备原料获取成本高，获取的方式复杂，有些原料带有危害性，前期研究复杂。
因此，开发一种制备条件温和，制备过程简单，能有效保证乳酸菌的活性，提高微生物菌种的生存几率，能用于表征低温下的食品的货架期寿命的微生物型时间-温度指示器符合市场需求，具有广泛的市场价值和应用前景。
发明内容
本发明的目的是为了克服现有技术的不足而提供一种微生物型时间-温度指示器；该微生物型时间-温度指示器制备条件温和，制备过程简单，能有效保证乳酸菌的活性，提高微生物菌种的生存几率，可以使制备出的微生物微胶囊应用在固态时间-温度指示器，用于表征低温下的食品的货架期寿命。
为达到上述目的，本发明采用的技术方案是：
一种微生物型时间-温度指示器，其特征在于，是由如下步骤制成的：
步骤S1：将细胞培养板放入洁净工作台中，打开灭菌灯充分灭菌1-3小时；
步骤S2：将pH混合指示剂，MRS固体培养基按体积比1:9混合均匀后，制得基质；
步骤S3：使用0.1mol/L的氢氧化钠标准溶液调节基质的pH至7；
步骤S4：使用微生物微胶囊与上述经过PH调节后的基质中，混合均匀，取凝固的混合物灭菌，密封后放置在40-50℃的恒温水浴锅中；使用灭菌后的移液枪，将未凝固的混合物移入细胞培养板中，固体微生物型时间-温度指示器制备完成。
进一步地，所述pH混合指示剂由如下溶液通过等体积混合后制成：溴甲酚紫溶液、溴甲酚绿溶液、甲基橙溶液。
较佳地，所述溴甲酚紫溶液的浓度为0.03-0.05g/mL；所述溴甲酚绿溶液的浓度为0.05g/mL；所述甲基橙溶液的浓度为0.09-0.11g/mL。
较佳地，所述溴甲酚紫溶液、溴甲酚绿溶液、甲基橙溶液的溶剂均为体积分数为92-98％的乙醇。
进一步地，所述MRS固体培养基的制备方法，包括如下步骤：将MRS琼脂培养基，加热溶解于蒸馏水中，用质量分数13-18％氢氧化钠溶液校正pH 6.5±0.2，后分装密封后，121℃±1℃下高压灭菌12-18min。
较佳地，步骤S4中所述微生物微胶囊、经过PH调节后的基质的比例为1g:(1-3mL)。
较佳地，所述MRS琼脂培养基、蒸馏水的比例为(65-70g)/1000mL。
进一步地，所述微生物微胶囊的制备方法，包括如下步骤：
(1)用酒精将SPG设备进行擦拭，将净化工作台的灭菌灯打开，使SPG设备在净化工作台中充分灭菌1-2小时；
(2)将高压灭菌后的SPG膜放入装有连续相的锥形瓶中，使用牛皮纸密封后，放入超声波清洁机中超声0.5-1小时，使SPG膜得到充分润湿；
(3)将瑞士乳杆菌细胞悬液倒入1.5-2％(w/v)海藻酸钠溶液中，充分震荡混合均匀后，倒入分散相罐中；
(4)将SPG膜放入连续相罐中的立柱，并将液体石蜡(连续相)倒入连续相罐中；
(5)将设备与氮气瓶连接，并将数值调至15-17kPa，使用电机将搅拌装置的转速调至250-350r/min；
(6)为了稳定生成的乳液滴，需在乳化结束后继续搅拌半小时；
(7)取下连续相罐，将生成的乳液直接倾倒进装有0.1mol/L氯化钙溶液的烧杯中，并迅速将混合物倒入分液漏斗中；
(8)将密封后的分液漏斗取出，用震荡机充分震荡混合溶液后静置12-15min；
(9)在洁净工作台中取得最下层的微胶囊，并使用灭菌蒸馏水清洗3～5次；
(10)收集微胶囊，保存于3-4℃冰箱中。
较佳地，所述瑞士乳杆菌细胞悬液、海藻酸钠溶液的体积比为1:(18-22)。
进一步地，所述瑞士乳杆菌细胞悬液的制备方法，包括如下步骤：菌种在使用前，应于加入了50％甘油的MRS液体培养基中，-20℃的冷库中保存；从冷库中将菌株取出，融化后使用MRS肉汤进行隔代培养至少两次，而后用涡旋震荡器混合均匀，取细胞悬浮液移液至MRS肉汤中，后经过15-20h，35-40℃的培养后，采用大型离心分离机进行离心分离，获得菌株，并使用0.05m mol/L Tris-Hcl缓冲液对菌株进行三次清洗，获得微生物细胞悬液。
较佳地，所述MRS液体培养基的制备方法，包括如下步骤：将MRS肉汤，加热溶解于蒸馏水中，再向其中加入水溶性壳聚糖、牛肉粉、水溶性蛋白质、吐温80，混合均匀后，用质量分数15％氢氧化钠溶液校正pH至5.7±0.2分装密封后，121℃±1℃高压灭菌12-17min。
较佳地，所述MRS肉汤、蒸馏水、水溶性壳聚糖、牛肉粉、水溶性蛋白质、吐温80的质量比为(50-55):1000:(10-20):(5-8):(6-10):(1-2)。
由于上述技术方案运用，本发明专利与现有技术相比具有下列优点：该微生物型时间-温度指示器制备条件温和，制备过程简单，能有效保证乳酸菌的活性，提高微生物菌种的生存几率，可以使制备出的微生物微胶囊应用在固态时间-温度指示器，用于表征低温下的食品的货架期寿命，具有较高的社会价值、生态价值和经济价值。
具体实施方式
本发明涉及一种微生物型时间-温度指示器，其特征在于，是由如下步骤制成的：
步骤S1：将细胞培养板放入洁净工作台中，打开灭菌灯充分灭菌1-3小时；
步骤S2：将pH混合指示剂，MRS固体培养基按体积比1:9混合均匀后，制得基质；
步骤S3：使用0.1mol/L的氢氧化钠标准溶液调节基质的pH至7；
步骤S4：使用微生物微胶囊与上述经过PH调节后的基质中，混合均匀，取凝固的混合物灭菌，密封后放置在40-50℃的恒温水浴锅中；使用灭菌后的移液枪，将未凝固的混合物移入细胞培养板中，固体微生物型时间-温度指示器制备完成。
进一步地，所述pH混合指示剂由如下溶液通过等体积混合后制成：溴甲酚紫溶液、溴甲酚绿溶液、甲基橙溶液；所述溴甲酚紫溶液的浓度为0.03-0.05g/mL；所述溴甲酚绿溶液的浓度为0.05g/mL；所述甲基橙溶液的浓度为0.09-0.11g/mL；所述溴甲酚紫溶液、溴甲酚绿溶液、甲基橙溶液的溶剂均为体积分数为92-98％的乙醇。
进一步地，所述MRS固体培养基的制备方法，包括如下步骤：将MRS琼脂培养基，加热溶解于蒸馏水中，用质量分数13-18％氢氧化钠溶液校正pH 6.5±0.2，后分装密封后，121℃±1℃下高压灭菌12-18min。
较佳地，步骤S4中所述微生物微胶囊、经过PH调节后的基质的比例为1g:(1-3mL)。
较佳地，所述MRS琼脂培养基、蒸馏水的比例为(65-70g)/1000mL。
进一步地，所述微生物微胶囊的制备方法，包括如下步骤：
(1)用酒精将SPG设备进行擦拭，将净化工作台的灭菌灯打开，使SPG设备在净化工作台中充分灭菌1-2小时；
(2)将高压灭菌后的SPG膜放入装有连续相的锥形瓶中，使用牛皮纸密封后，放入超声波清洁机中超声0.5-1小时，使SPG膜得到充分润湿；
(3)将瑞士乳杆菌细胞悬液倒入1.5-2％(w/v)海藻酸钠溶液中，充分震荡混合均匀后，倒入分散相罐中；
(4)将SPG膜放入连续相罐中的立柱，并将液体石蜡(连续相)倒入连续相罐中；
(5)将设备与氮气瓶连接，并将数值调至15-17kPa，使用电机将搅拌装置的转速调至250-350r/min；
(6)为了稳定生成的乳液滴，需在乳化结束后继续搅拌半小时；
(7)取下连续相罐，将生成的乳液直接倾倒进装有0.1mol/L氯化钙溶液的烧杯中，并迅速将混合物倒入分液漏斗中；
(8)将密封后的分液漏斗取出，用震荡机充分震荡混合溶液后静置12-15min；
(9)在洁净工作台中取得最下层的微胶囊，并使用灭菌蒸馏水清洗3～5次；
(10)收集微胶囊，保存于3-4℃冰箱中。
较佳地，所述瑞士乳杆菌细胞悬液、海藻酸钠溶液的体积比为1:(18-22)。
进一步地，所述瑞士乳杆菌细胞悬液的制备方法，包括如下步骤：菌种在使用前，应于加入了50％甘油的MRS液体培养基中，-20℃的冷库中保存；从冷库中将菌株取出，融化后使用MRS肉汤进行隔代培养至少两次，而后用涡旋震荡器混合均匀，取细胞悬浮液移液至MRS肉汤中，后经过15-20h，35-40℃的培养后，采用大型离心分离机进行离心分离，获得菌株，并使用0.05m mol/L Tris-Hcl缓冲液对菌株进行三次清洗，获得微生物细胞悬液。
较佳地，所述MRS液体培养基的制备方法，包括如下步骤：将MRS肉汤，加热溶解于蒸馏水中，再向其中加入水溶性壳聚糖、牛肉粉、水溶性蛋白质、吐温80，混合均匀后，用质量分数15％氢氧化钠溶液校正pH至5.7±0.2分装密封后，121℃±1℃高压灭菌12-17min；所述MRS肉汤、蒸馏水、水溶性壳聚糖、牛肉粉、水溶性蛋白质、吐温80的质量比为(50-55):1000:(10-20):(5-8):(6-10):(1-2)。
该微生物型时间-温度指示器制备条件温和，制备过程简单，能有效保证乳酸菌的活性，提高微生物菌种的生存几率，可以使制备出的微生物微胶囊应用在固态时间-温度指示器，用于表征低温下的食品的货架期寿命，具有较高的社会价值、生态价值和经济价值。
下面将结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：
实施例1
本实例提供一种微生物型时间-温度指示器，其特征在于，是由如下步骤制成的：
步骤S1：将细胞培养板放入洁净工作台中，打开灭菌灯充分灭菌1小时；
步骤S2：将pH混合指示剂，MRS固体培养基按体积比1:9混合均匀后，制得基质；
步骤S3：使用0.1mol/L的氢氧化钠标准溶液调节基质的pH至7；
步骤S4：使用微生物微胶囊与上述经过PH调节后的基质中，混合均匀，取凝固的混合物灭菌，密封后放置在40℃的恒温水浴锅中；使用灭菌后的移液枪，将未凝固的混合物移入细胞培养板中，固体微生物型时间-温度指示器制备完成；所述微生物微胶囊、经过PH调节后的基质的比例为1g:1mL。
所述pH混合指示剂由如下溶液通过等体积混合后制成：溴甲酚紫溶液、溴甲酚绿溶液、甲基橙溶液；所述溴甲酚紫溶液的浓度为0.04g/mL；所述溴甲酚绿溶液的浓度为0.05g/mL；所述甲基橙溶液的浓度为0.1g/mL；所述溴甲酚紫溶液、溴甲酚绿溶液、甲基橙溶液的溶剂均为体积分数为92％的乙醇。
所述MRS固体培养基的制备方法，包括如下步骤：将MRS琼脂培养基，加热溶解于蒸馏水中，用质量分数13％氢氧化钠溶液校正pH 6.5±0.2，后分装密封后，121℃±1℃下高压灭菌12min；所述MRS琼脂培养基、蒸馏水的比例为65g/1000mL。
所述微生物微胶囊的制备方法，包括如下步骤：
(1)用酒精将SPG设备进行擦拭，将净化工作台的灭菌灯打开，使SPG设备在净化工作台中充分灭菌1小时；
(2)将高压灭菌后的SPG膜放入装有连续相的锥形瓶中，使用牛皮纸密封后，放入超声波清洁机中超声0.5小时，使SPG膜得到充分润湿；
(3)将瑞士乳杆菌细胞悬液倒入1.5％(w/v)海藻酸钠溶液中，充分震荡混合均匀后，倒入分散相罐中；所述瑞士乳杆菌细胞悬液、海藻酸钠溶液的体积比为1:18；
(4)将SPG膜放入连续相罐中的立柱，并将液体石蜡(连续相)倒入连续相罐中；
(5)将设备与氮气瓶连接，并将数值调至15kPa，使用电机将搅拌装置的转速调至250r/min；
(6)为了稳定生成的乳液滴，需在乳化结束后继续搅拌半小时；
(7)取下连续相罐，将生成的乳液直接倾倒进装有0.1mol/L氯化钙溶液的烧杯中，并迅速将混合物倒入分液漏斗中；
(8)将密封后的分液漏斗取出，用震荡机充分震荡混合溶液后静置12min；
(9)在洁净工作台中取得最下层的微胶囊，并使用灭菌蒸馏水清洗3次；
(10)收集微胶囊，保存于3℃冰箱中。
所述瑞士乳杆菌细胞悬液的制备方法，包括如下步骤：菌种在使用前，应于加入了50％甘油的MRS液体培养基中，-20℃的冷库中保存；从冷库中将菌株取出，融化后使用MRS肉汤进行隔代培养至少两次，而后用涡旋震荡器混合均匀，取细胞悬浮液移液至MRS肉汤中，后经过15h，35℃的培养后，采用大型离心分离机进行离心分离，获得菌株，并使用0.05mmol/L Tris-Hcl缓冲液对菌株进行三次清洗，获得微生物细胞悬液。
所述MRS液体培养基：将MRS肉汤，加热溶解于蒸馏水中，再向其中加入水溶性壳聚糖、牛肉粉、水溶性蛋白质、吐温80，混合均匀后，用质量分数15％氢氧化钠溶液校正pH至5.7±0.2分装密封后，121℃±1℃高压灭菌12min；所述MRS肉汤、蒸馏水、水溶性壳聚糖、牛肉粉、水溶性蛋白质、吐温80的质量比为50:1000:10:5:6:1。
实施例2
本实例提供一种微生物型时间-温度指示器，它与实例1中的基本一致，不同的是，所述pH混合指示剂由如下溶液通过等体积混合后制成：溴甲酚紫溶液、溴甲酚绿溶液、甲基橙溶液；所述溴甲酚紫溶液的浓度为0.03g/mL；所述溴甲酚绿溶液的浓度为0.05g/mL；所述甲基橙溶液的浓度为0.09g/mL；所述溴甲酚紫溶液、溴甲酚绿溶液、甲基橙溶液的溶剂均为体积分数为94％的乙醇。
实施例3
本实例提供一种微生物型时间-温度指示器，它与实例1中的基本一致，不同的是，所述pH混合指示剂由如下溶液通过等体积混合后制成：溴甲酚紫溶液、溴甲酚绿溶液、甲基橙溶液；所述溴甲酚紫溶液的浓度为0.05g/mL；所述溴甲酚绿溶液的浓度为0.05g/mL；所述甲基橙溶液的浓度为0.11g/mL；所述溴甲酚紫溶液、溴甲酚绿溶液、甲基橙溶液的溶剂均为体积分数为98％的乙醇。
实施例4
本实例提供一种微生物型时间-温度指示器，它与实例1中的基本一致，不同的是，所述MRS肉汤、蒸馏水、水溶性壳聚糖、牛肉粉、水溶性蛋白质、吐温80的质量比为52:1000:12:6:7:1.2。
实施例5
本实例提供一种微生物型时间-温度指示器，它与实例1中的基本一致，不同的是，所述MRS肉汤、蒸馏水、水溶性壳聚糖、牛肉粉、水溶性蛋白质、吐温80的质量比为55:1000:20:8:10:2。
对比例1
本实例提供一种微生物型时间-温度指示器，它与实例1中的基本一致，不同的是：所述MRS液体培养基的制备过程中没有添加水溶性壳聚糖。
对比例2
本实例提供一种微生物型时间-温度指示器，它与实例1中的基本一致，不同的是：所述MRS液体培养基的制备过程中没有添加水溶性蛋白质。
对比例3
本实例提供一种微生物型时间-温度指示器，它与实例1中的基本一致，不同的是：所述MRS液体培养基的制备过程中没有添加牛肉粉。
为了进一步说明本发明实施例的技术效果，对采用本发明实施例1-5及对比例1-3所制得的微生物型时间-温度指示器可指示产品活化能范围进行测试，测试结果表明，本发明实施例可指示产品活化能范围更大，在25-85KJ/mol之间，而对比例范围较窄，在35-75KJ/mol之间。
上述实施例只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人士能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种微生物型时间-温度指示器，其特征在于，是由如下步骤制成的：
步骤S1：将细胞培养板放入洁净工作台中，打开灭菌灯充分灭菌1-3小时；
步骤S2：将pH混合指示剂，MRS固体培养基按体积比1:9混合均匀后，制得基质；
步骤S3：使用0.1mol/L的氢氧化钠标准溶液调节基质的pH至7；
步骤S4：使用微生物微胶囊与上述经过PH调节后的基质中，混合均匀，取凝固的混合物灭菌，密封后放置在40-50℃的恒温水浴锅中；使用灭菌后的移液枪，将未凝固的混合物移入细胞培养板中，固体微生物型时间-温度指示器制备完成；
所述微生物微胶囊的制备方法，包括如下步骤：
（1）用酒精将SPG设备进行擦拭，将净化工作台的灭菌灯打开，使SPG设备在净化工作台中充分灭菌1-2小时；
（2）将高压灭菌后的SPG膜放入装有连续相的锥形瓶中，使用牛皮纸密封后，放入超声波清洁机中超声0.5-1小时，使SPG膜得到充分润湿；
（3）将瑞士乳杆菌细胞悬液倒入1.5-2%（w/v）海藻酸钠溶液中，充分震荡混合均匀后，倒入分散相罐中；所述瑞士乳杆菌细胞悬液、海藻酸钠溶液的体积比为1:(18-22)；
（4）将SPG膜放入连续相罐中的立柱，并将液体石蜡（连续相）倒入连续相罐中；
（5）将设备与氮气瓶连接，并将数值调至15-17kPa，使用电机将搅拌装置的转速调至250-350r/min；
（6）为了稳定生成的乳液滴，需在乳化结束后继续搅拌半小时；
（7）取下连续相罐，将生成的乳液直接倾倒进装有0.1mol/L氯化钙溶液的烧杯中，并迅速将混合物倒入分液漏斗中；
（8）将密封后的分液漏斗取出，用震荡机充分震荡混合溶液后静置12-15min；
（9）在洁净工作台中取得最下层的微胶囊，并使用灭菌蒸馏水清洗3~5次；
（10）收集微胶囊，保存于3-4℃冰箱中；
其中，所述瑞士乳杆菌细胞悬液的制备方法，包括如下步骤：菌种在使用前，应于加入了50%甘油的 MRS液体培养基中，-20℃的冷库中保存；从冷库中将菌株取出，融化后使用MRS 肉汤进行隔代培养至少两次，而后用涡旋震荡器混合均匀，取细胞悬浮液移液至MRS肉汤中，后经过15-20h，35-40℃的培养后，采用大型离心分离机进行离心分离，获得菌株，并使用0.05m mol/L Tris-Hcl缓冲液对菌株进行三次清洗，获得微生物细胞悬液；
所述MRS液体培养基的制备方法，包括如下步骤：将MRS肉汤，加热溶解于蒸馏水中，再向其中加入水溶性壳聚糖、牛肉粉、水溶性蛋白质、吐温80，混合均匀后，用质量分数15%氢氧化钠溶液校正pH至5.7±0.2分装密封后，121℃±1℃高压灭菌12-17 min；所述MRS肉汤、蒸馏水、水溶性壳聚糖、牛肉粉、水溶性蛋白质、吐温80的质量比为(50-55):1000:(10-20):(5-8):(6-10):(1-2)。
2.根据权利要求1所述的微生物型时间-温度指示器，其特征在于，所述pH混合指示剂由如下溶液通过等体积混合后制成：溴甲酚紫溶液、溴甲酚绿溶液、甲基橙溶液。
3.根据权利要求2所述的微生物型时间-温度指示器，其特征在于，所述溴甲酚紫溶液的浓度为0.03-0.05g/mL；所述溴甲酚绿溶液的浓度为0.05g/mL；所述甲基橙溶液的浓度为0.09-0.11g/mL；所述溴甲酚紫溶液、溴甲酚绿溶液、甲基橙溶液的溶剂均为体积分数为92-98%的乙醇。
4.根据权利要求1所述的微生物型时间-温度指示器，其特征在于，所述MRS固体培养基的制备方法，包括如下步骤：将MRS琼脂培养基，加热溶解于蒸馏水中，用质量分数13-18%氢氧化钠溶液校正pH 6.5±0.2，后分装密封后，121℃±1℃下高压灭菌12-18 min。
5.根据权利要求1所述的微生物型时间-温度指示器，其特征在于，步骤S4中所述微生物微胶囊、经过PH调节后的基质的比例为1g:(1-3mL)。
6.根据权利要求4所述的微生物型时间-温度指示器，其特征在于，所述MRS琼脂培养基、蒸馏水的比例为(65-70g)/1000mL。
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US2950202A (en) * 1958-07-29 1960-08-23 Hygrade Food Products Corp Meat spoilage indicator
WO2005078402A1 (en) * 2004-02-09 2005-08-25 Sun Chemical Corporation Time temperature indicator (tti) system
CN102507576B (zh) * 2011-10-31 2013-07-24 江南大学 微生物型低温流通物品时间温度指示器
CN104964968B (zh) * 2015-05-14 2018-04-13 中国农业大学 一种用于鲜食葡萄品质感知的微生物型时间温度指示器
CN105865653B (zh) * 2016-03-23 2018-04-17 江南大学 一种固态酶型时间‑温度指示器的制备方法
CN108037116A (zh) * 2017-11-14 2018-05-15 中国农业大学 一种微生物型时间-温度指示卡及其制备方法和应用
CN108048444A (zh) * 2017-12-01 2018-05-18 江南大学 一种微胶囊微生物型时间温度指示器及其制备方法

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