CN110746518A - 高纯度灵芝多糖的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种高纯度灵芝多糖的制备方法，包括以下步骤：步骤一、向灵芝中加入乙醇溶液中加热，过滤除去滤液，得到预处理灵芝；步骤二、向预处理灵芝中加入水打浆，得到一次浆液，将一次浆液速冻结冰，再将速冻的一次浆液解冻并打浆，得到二次浆液，然后向二次浆液中加入麦饭石、醋酸、碳酸二甲酯并搅拌，再将二次浆液速冻结冰，最后将速冻的二次浆液解冻，得到三次浆液；步骤三、将三次浆液放入加热罐内，封闭加热罐，过滤除去滤渣，得到粗灵芝多糖；步骤四、将粗灵芝多糖滴加至乙醇溶液中，过滤得到沉淀，并干燥，即得灵芝多糖。本发明不仅有效减少灵芝多糖中色素的含量，而且提高灵芝多糖的得率，同时，有效缩短灵芝多糖的制备时间。
Description
技术领域
本发明涉及灵芝多糖制备技术领域。更具体地说，本发明涉及一种高纯度灵芝多糖的制备方法。
背景技术
灵芝是是多孔菌科真菌灵芝的子实体，为一种名贵中药材，具有补气安神、止咳平喘、延年益寿的功效，可双向调节人体机能的作用，在整体上双向调节人体机能的平衡，全面的使人的免疫系统得到快速的提升。灵芝的活性成份为灵芝多糖、灵芝酸及腺嘌呤核苷等，目前，灵芝多糖多呈黄褐色，含有较多的色素，而色素会影响到灵芝多糖的生物活性，现在一般使用活性炭对灵芝多糖进行脱色处理，这种处理方法脱色效果达不到要求。
发明内容
本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。
本发明还有一个目的是提供一种高纯度灵芝多糖的制备方法，其不仅有效减少灵芝多糖中色素的含量，而且提高灵芝多糖的得率，同时，有效缩短灵芝多糖的制备时间。
为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种高纯度灵芝多糖的制备方法，包括以下步骤：
步骤一、将灵芝粉碎，并向灵芝中加入质量分数为90％的乙醇溶液，置于38～40℃条件下加热，过滤除去滤液，得到预处理灵芝；
步骤二、向预处理灵芝中加入其总质量2倍量的8～10℃的水混合打浆，静置20min，得到一次浆液，将一次浆液速冻结冰，静置10min，再将速冻的一次浆液解冻并打浆，得到二次浆液，然后向二次浆液中加入其总质量0.1倍量的粒径为0.5～1mm的麦饭石，并置于1000r/min的条件下搅拌20min，过筛除去麦饭石，加入二次浆液总质量0.04倍量的醋酸、0.01倍量的碳酸二甲酯并置于1000r/min的条件下搅拌30min，再将二次浆液速冻结冰，静置20min，最后将速冻的二次浆液解冻，得到三次浆液；
步骤三、将三次浆液放入加热罐内，并向加热罐内加入三次浆液总质量3倍量的水混合，封闭加热罐，置于150r/min、40～42℃条件下保温20min，过滤除去滤渣，得到粗灵芝多糖；
步骤四、在400r/min条件下，将粗灵芝多糖滴加至其总质量3倍量的质量分数为80％的乙醇溶液中，过滤得到沉淀，并干燥，即得灵芝多糖。
优选的是，在步骤一中，灵芝与质量分数为90％的乙醇溶液的用量比为1:8。
优选的是，在步骤一中，将灵芝粉碎至粒径为1～2cm。
优选的是，在步骤一中，向灵芝中加入质量分数为90％的乙醇溶液，置于38～40℃条件下加热，过滤，得到预处理灵芝，具体过程为：将灵芝粉碎，向灵芝中加入质量分数为90％的乙醇溶液，并置于38～40℃条件下加热20min，然后在38～40℃条件下加入灵芝总质量0.1倍量的柠檬酸和0.1倍量的食用油，继续加热10min，再分5次等量加入灵芝总质量0.013倍量的膦酸甘油酯，滴加完毕后，继续加热40min，同时每间隔10min向体系内鼓入氮气，过滤，即得到预处理灵芝。
优选的是，在步骤一中，将灵芝粉碎后，先向灵芝中加入灵芝总质量4倍量的质量分数为10％的氯化钠水溶液中浸泡30min，取出灵芝，再向灵芝中加入质量分数为90％的乙醇。
优选的是，在步骤二中，在向预处理灵芝中加入8～10℃的水之前，将预处理灵芝先用乙醇冲洗3次，然后使用0℃的水洗涤至清洗液的pH为中性。
优选的是，在步骤四中，将粗灵芝多糖滴加至质量分数为85％的乙醇之前使用氧化铝进行柱层析，处理的具体过程为：将粗灵芝多糖总质量50倍量的氧化铝置于118～120℃的烘箱中13h，然后装柱，得到氧化铝柱，将粗灵芝多糖加入氧化铝树脂柱内，依次使用质量分数为98％的乙醇溶液、质量分数为80％的乙醇溶液、体积比1:1的水和质量分数为90％的乙醇溶液的混合溶液、及水进行洗脱，并收集体积比1:1的水和质量分数为90％的乙醇溶液的混合溶液、及水，其中，使用质量分数为98％的乙醇溶液、质量分数为80％的乙醇溶液、体积比1:1的水和质量分数为90％的乙醇溶液的混合溶液、及水的量与氧化铝柱的体积比依次为1:0.5:2:1:1。
本发明至少包括以下有益效果：
第一、本发明高纯度灵芝多糖的制备方法，不仅有效减少灵芝多糖中色素的含量，而且提高灵芝多糖的得率，同时，有效缩短了灵芝多糖的制备时间。
第二、在制备预处理灵芝时，使用柠檬酸、食用油、磷酸甘油酯进行脱脂，不仅能够使灵芝在低温条件下(38～40℃)条件下脱脂，而且脱脂较为完全，有效提高灵芝多糖的得率，低温条件下有利于减少色素的形成，降低灵芝多糖中色素的含量；根据相似相容原理在体系中加入柠檬酸、食用油、磷酸甘油酯便于灵芝中脂类物质的排出，同时加入柠檬酸不仅为食用油、磷酸甘油酯提供酸性环境(酸性环境更有利于脂类排出)，而且柠檬酸与食用油、磷酸甘油酯的协同作用使脂类在低温条件下即可快速排出，相比于现有技术单纯使用乙醇溶液进行处理，本发明有效缩短了脱脂时间。
第三、通过本发明的方法制备三次浆液，有利于提高细胞的破碎率，进而提高灵芝多糖的得率，同时在低温条件下提取粗灵芝多糖，可有效减少水溶性色素的生成，有效避免了水溶性色素包裹灵芝多糖，进而有效减少灵芝多糖中色素的含量；速冻结冰处理可以促进细胞涨破进而提高细胞破碎率，以便于灵芝多糖的释放，提高灵芝多糖的得率，同时，通过提高细胞涨破，而实现灵芝多糖在低温进行提取，有效避免了高温回流时色素的生成，降低灵芝多糖中的色素含量；添加麦饭石、醋酸、碳酸二甲酯一方面麦饭石可以提高细胞的破碎率，另一方面通过添加麦饭石、醋酸、碳酸二甲酯可以促进灵芝中纤维素的破碎，有利于纤维素与灵芝多糖的分离，提高灵芝多糖的得率和纯度，同时，纤维素的破碎还可以减少纤维素对色素的包覆，从而降低灵芝多糖中色素的含量。
第四、在乙醇溶液中沉淀之前先使用氧化铝柱进行处理，使用氧化铝柱处理一方面可以有效减少粗灵芝多糖中色素的含量，进而降低灵芝多糖中的色素含量，另一方面可以减少粗灵芝多糖中杂质(杂质会影响到乙醇溶液中沉淀的生成)的含量，进而有效提高灵芝多糖的得率。
第五、在向预处理灵芝中加入8～10℃的水之前，将预处理灵芝先用乙醇冲洗掉易溶于乙醇的食用油、以及磷酸甘油酯，避免这些物质影响灵芝多糖的得率，使用0℃的水洗涤一方面避免柠檬酸残留，另一方面0℃的水可以减少灵芝多糖在水中的溶解，避免灵芝多糖的浪费，提高灵芝多糖的得率；灵芝粉碎后，将灵芝浸泡在质量分数为10％的氯化钠水溶液中，可以减少灵芝中水的含量，便于使用乙醇进行脱脂处理。
本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
<实施例1>
高纯度灵芝多糖的制备方法，包括以下步骤：
步骤一、将灵芝粉碎，并向灵芝中加入质量分数为90％的乙醇溶液，置于38～40℃条件下加热，过滤除去滤液，得到预处理灵芝；
步骤二、向预处理灵芝中加入其总质量2倍量的8～10℃的水混合打浆，静置20min，得到一次浆液，将一次浆液速冻结冰，静置10min，再将速冻的一次浆液解冻并打浆，得到二次浆液，然后向二次浆液中加入其总质量0.1倍量的粒径为0.5～1mm的麦饭石，并置于1000r/min的条件下搅拌20min，过筛除去麦饭石，加入二次浆液总质量0.04倍量的醋酸、0.01倍量的碳酸二甲酯并置于1000r/min的条件下搅拌30min，再将二次浆液速冻结冰，静置20min，最后将速冻的二次浆液解冻，得到三次浆液；
步骤三、将三次浆液放入加热罐内，并向加热罐内加入三次浆液总质量3倍量的水混合，封闭加热罐，置于150r/min、40～42℃条件下保温20min，过滤除去滤渣，得到粗灵芝多糖；
步骤四、在400r/min条件下，将粗灵芝多糖滴加至其总质量3倍量的质量分数为80％的乙醇溶液中，过滤得到沉淀，并干燥，即得灵芝多糖。
<实施例2>
高纯度灵芝多糖的制备方法，包括以下步骤：
步骤一、将灵芝粉碎，并向灵芝中加入质量分数为90％的乙醇溶液，置于38～40℃条件下加热，过滤除去滤液，得到预处理灵芝；
步骤二、向预处理灵芝中加入其总质量2倍量的8～10℃的水混合打浆，静置20min，得到一次浆液，将一次浆液速冻结冰，静置10min，再将速冻的一次浆液解冻并打浆，得到二次浆液，然后向二次浆液中加入其总质量0.1倍量的粒径为0.5～1mm的麦饭石，并置于1000r/min的条件下搅拌20min，过筛除去麦饭石，加入二次浆液总质量0.04倍量的醋酸、0.01倍量的碳酸二甲酯并置于1000r/min的条件下搅拌30min，再将二次浆液速冻结冰，静置20min，最后将速冻的二次浆液解冻，得到三次浆液；
步骤三、将三次浆液放入加热罐内，并向加热罐内加入三次浆液总质量3倍量的水混合，封闭加热罐，置于150r/min、40～42℃条件下保温20min，过滤除去滤渣，得到粗灵芝多糖；
步骤四、在400r/min条件下，将粗灵芝多糖滴加至其总质量3倍量的质量分数为80％的乙醇溶液中，过滤得到沉淀，并干燥，即得灵芝多糖。
在步骤一中，灵芝与质量分数为90％的乙醇溶液的用量比为1:8。
在步骤一中，将灵芝粉碎至粒径为1～2cm。
在步骤一中，向灵芝中加入质量分数为90％的乙醇溶液，置于38～40℃条件下加热，过滤，得到预处理灵芝，具体过程为：将灵芝粉碎，向灵芝中加入质量分数为90％的乙醇溶液，并置于38～40℃条件下加热20min，然后在38～40℃条件下加入灵芝总质量0.1倍量的柠檬酸和0.1倍量的食用油，继续加热10min，再分5次等量加入灵芝总质量0.013倍量的膦酸甘油酯，滴加完毕后，继续加热40min，同时每间隔10min向体系内鼓入氮气，过滤，即得到预处理灵芝。
在步骤一中，将灵芝粉碎后，先向灵芝中加入灵芝总质量4倍量的质量分数为10％的氯化钠水溶液中浸泡30min，取出灵芝，再向灵芝中加入质量分数为90％的乙醇。
在步骤二中，在向预处理灵芝中加入8～10℃的水之前，将预处理灵芝先用乙醇冲洗3次，然后使用0℃的水洗涤至清洗液的pH为中性。
<实施例3>
高纯度灵芝多糖的制备方法，包括以下步骤：
步骤一、将灵芝粉碎，并向灵芝中加入质量分数为90％的乙醇溶液，置于38～40℃条件下加热，过滤除去滤液，得到预处理灵芝；
步骤二、向预处理灵芝中加入其总质量2倍量的8～10℃的水混合打浆，静置20min，得到一次浆液，将一次浆液速冻结冰，静置10min，再将速冻的一次浆液解冻并打浆，得到二次浆液，然后向二次浆液中加入其总质量0.1倍量的粒径为0.5～1mm的麦饭石，并置于1000r/min的条件下搅拌20min，过筛除去麦饭石，加入二次浆液总质量0.04倍量的醋酸、0.01倍量的碳酸二甲酯并置于1000r/min的条件下搅拌30min，再将二次浆液速冻结冰，静置20min，最后将速冻的二次浆液解冻，得到三次浆液；
步骤三、将三次浆液放入加热罐内，并向加热罐内加入三次浆液总质量3倍量的水混合，封闭加热罐，置于150r/min、40～42℃条件下保温20min，过滤除去滤渣，得到粗灵芝多糖；
步骤四、在400r/min条件下，将粗灵芝多糖滴加至其总质量3倍量的质量分数为80％的乙醇溶液中，过滤得到沉淀，并干燥，即得灵芝多糖。
在步骤一中，灵芝与质量分数为90％的乙醇溶液的用量比为1:8。
在步骤一中，将灵芝粉碎至粒径为1～2cm。该粒径在满足灵芝脱脂的同时可以减少灵芝多糖溶解在乙醇溶液中。
在步骤一中，向灵芝中加入质量分数为90％的乙醇溶液，置于38～40℃条件下加热，过滤，得到预处理灵芝，具体过程为：将灵芝粉碎，向灵芝中加入质量分数为90％的乙醇溶液，并置于38～40℃条件下加热20min，然后在38～40℃条件下加入灵芝总质量0.1倍量的柠檬酸和0.1倍量的食用油，继续加热(38～40℃)10min，再分5次等量加入灵芝总质量0.013倍量的膦酸甘油酯，滴加完毕后，继续加热(38～40℃)40min，同时每间隔10min向体系内鼓入氮气，过滤，即得到预处理灵芝。
在步骤一中，将灵芝粉碎后，先向灵芝中加入灵芝总质量4倍量的质量分数为10％的氯化钠水溶液中浸泡30min，取出灵芝，再向灵芝中加入质量分数为90％的乙醇。
在步骤二中，在向预处理灵芝中加入8～10℃的水之前，将预处理灵芝先用乙醇冲洗3次，然后使用0℃的水洗涤至清洗液的pH为中性。
在步骤四中，将粗灵芝多糖滴加至质量分数为85％的乙醇之前使用氧化铝进行柱层析，处理的具体过程为：将粗灵芝多糖总质量50倍量的氧化铝置于118～120℃的烘箱中13h，然后装柱，得到氧化铝柱，将粗灵芝多糖加入氧化铝树脂柱内，依次使用质量分数为98％的乙醇溶液、质量分数为80％的乙醇溶液、体积比1:1的水和质量分数为90％的乙醇溶液的混合溶液、及水进行洗脱，并收集体积比1:1的水和质量分数为90％的乙醇溶液的混合溶液、及水，其中，使用质量分数为98％的乙醇溶液、质量分数为80％的乙醇溶液、体积比1:1的水和质量分数为90％的乙醇溶液的混合溶液、及水的量与氧化铝柱的体积比依次为1:0.5:2:1:1。
其中，粗灵芝多糖在使用氧化铝柱处理前先采用Sevage法去除蛋白质。
<对比例1>
步骤一、向灵芝中加入质量分数为90％的乙醇溶液，加热回流2.5h，过滤除去滤液得到预处理灵芝；
步骤二、向预处理灵芝多糖中加入水，加热回流2.5h，过滤，得到粗灵芝多糖；
步骤三、将粗灵芝多糖滴加至质量分数为80％的乙醇溶液中，过滤除去滤液，得到灵芝多糖。
<对比例2>
在实施例3的基础上制备灵芝多糖，其中，不同的是步骤一中预处理灵芝的制备方法，具体为：向灵芝中加入质量分数为90％的乙醇溶液，置于38～40℃条件下加热70min，过滤，即得预处理灵芝。
<对比例3>
在实施例3的基础上制备灵芝多糖，其中，不同的是步骤一中预处理灵芝的制备方法，具体为：将灵芝粉碎，向灵芝中加入质量分数为90％的乙醇溶液，回流(78℃)20min，然后在78℃条件下加入灵芝总质量0.1倍量的柠檬酸和0.1倍量的食用油，继续回流10min，再分5次等量加入灵芝总质量0.013倍量的膦酸甘油酯，滴加完毕后，继续回流40min，同时每间隔10min向体系内鼓入氮气，过滤，即得到预处理灵芝。
<对比例4>
在实施例3的基础上制备灵芝多糖，其中，不同的是步骤一中预处理灵芝的制备方法，具体为：将灵芝粉碎，向灵芝中加入质量分数为90％的乙醇溶液，并置于38～40℃条件下加热20min，然后在38～40℃条件下加入灵芝总质量0.1倍量的食用油，继续加热(38～40℃)10min，再分5次等量加入灵芝总质量0.013倍量的膦酸甘油酯，滴加完毕后，继续加热(38～40℃)40min，同时每间隔10min向体系内鼓入氮气，过滤，即得到预处理灵芝。
<对比例5>
在实施例3的基础上制备灵芝多糖，其中，不同的是步骤一中预处理灵芝的制备方法，具体为：将灵芝粉碎，向灵芝中加入质量分数为90％的乙醇溶液，并置于38～40℃条件下加热20min，然后在38～40℃条件下加入灵芝总质量0.1倍量的柠檬酸，继续加热40min，同时每间隔10min向体系内鼓入氮气，过滤，即得到预处理灵芝。
<对比例6>
在实施例3的基础上制备灵芝多糖，其中，不同的是三次浆液的制备方法，具体为：向预处理灵芝中加入其总质量2倍量的8～10℃的水混合打浆，静置20min，得到一次浆液，将一次浆液继续打浆，得到二次浆液，然后向二次浆液中加入其总质量0.1倍量的粒径为0.5～1mm的麦饭石，并置于1000r/min的条件下搅拌20min，过筛除去麦饭石，加入二次浆液总质量0.04倍量的醋酸、0.01倍量的碳酸二甲酯并置于1000r/min的条件下搅拌30min，得到三次浆液。
<对比例7>
在实施例3的基础上制备灵芝多糖，其中，不同的是三次浆液的制备方法，具体为：向预处理灵芝中加入其总质量2倍量的8～10℃的水混合打浆，静置20min，得到一次浆液，将一次浆液速冻结冰，静置10min，再将速冻的一次浆液解冻并打浆，得到二次浆液，将二次浆液速冻结冰，静置20min，最后将速冻的二次浆液解冻，得到三次浆液。
<对比例8>
在实施例3的基础上制备灵芝多糖，其中，不同的是粗灵芝多糖的制备方法，具体为：向预处理灵芝放入加热罐内，并加入与预处理灵芝5倍量的水，置于150r/min、40～42℃条件下保温50min，过滤，得到粗灵芝多糖(即未进行步骤二的操作)。
<对比例9>
在实施例3的基础上制备灵芝多糖，其中，不同的是粗灵芝多糖的制备方法，具体为：将三次浆液放入加热罐内，并向加热罐内加入三次浆液总质量3倍量的水混合，封闭加热罐，置于150r/min、88～90℃条件下保温20min，过滤除去滤渣，即得到粗灵芝多糖。
<对比例10>
在实施例3的基础上制备灵芝多糖，其中，不同的是粗灵芝多糖的制备方法，具体为：向预处理灵芝多糖中加入预处理灵芝5倍量的水，加热回流2.5h，过滤，得到粗灵芝多糖(具体为进行步骤二的操作)。
<试验表征>
1、灵芝多糖的颜色及灵芝多糖含量
观察由实施例1～3、对比例1、对比例3、对比例9、对比例10所制备的灵芝多糖的颜色，并用色度进行表示，结果如表1所示；
采用苯酚-硫酸法分别测定由实施例1～3、对比例1、对比例3、对比例9、对比例10所制备的灵芝多糖中多糖的含量，结果如表1所示；
表1、灵芝多糖的颜色及灵芝多糖含量
注：色度由1→10表示颜色由米白色→黄褐色，数字越大颜色越深；
对比分析实施例3的色素含量与灵芝多糖的含量均优于实施例1、实施例2、对比例1、对比例3、对比例9、对比例10的测试数据，表明本发明的灵芝多糖的制备方法能够提高灵芝多糖的质量。
2、灵芝多糖的得率
计算由实施例1～3、对比例1～2、对比例4～10的所制备灵芝多糖的灵芝多糖得率，结果如表2所示；
表2、灵芝多糖的得率
对比分析实施例3的灵芝多糖的得率均优于实施例1～2、对比例1～2、对比例4～10的测试数据，表明本发明的制备方法能够有效提高灵芝多糖的得率。
3、细胞破壁率
在400倍的显微镜下观察实施例3、对比例6、对比例7中三次浆液中细胞破壁情况，并计算相应的细胞破碎率，结果如表3所示；
表3、细胞破壁率
| 组别 | 细胞破碎率 |
| 实施例3 | 98％ |
| 对比例1 | 75％ |
| 对比例6 | 86％ |
| 对比例7 | 89％ |
由表3可知，实施例3中细胞破碎率明显高于对比例1、对比例6、对比例7，表明本发明灵芝多糖的制备方法能够提高灵芝多糖的得率。
4、灵芝多糖对吞噬细胞的影响
4.1取实施例3、对比例1、对比例9所制备的灵芝多糖进行试验，将每组灵芝多糖分别配置成20mg/mL的灵芝多糖水溶液；
4.2取40只体重为100～150g的小白鼠，并随机平均分成4组，其中一组中的小鼠每天使用0.5mL生理盐水连续灌胃7天，剩余3组中的小白鼠分别使用0.5mL实施例1、对比例1、对比例9的灵芝多糖溶液连续灌胃7天，于第8天将小鼠断尾，并取血进行白细胞吞噬实验，所得数据用SPSS10.0软件分析，结果如表4所示；
表4、灵芝多糖对吞噬细胞的影响
由表4可知，实施例3的吞噬率和吞噬指数明显优于对比例1和对比例9，表明小白鼠食用本发明的灵芝多糖后，白细胞的吞噬细菌的能力有所提高。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的实施例。
Claims (7)
1.高纯度灵芝多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一、将灵芝粉碎，并向灵芝中加入质量分数为90％的乙醇溶液，置于38～40℃条件下加热，过滤除去滤液，得到预处理灵芝；
步骤二、向预处理灵芝中加入其总质量2倍量的8～10℃的水混合打浆，静置20min，得到一次浆液，将一次浆液速冻结冰，静置10min，再将速冻的一次浆液解冻并打浆，得到二次浆液，然后向二次浆液中加入其总质量0.1倍量的粒径为0.5～1mm的麦饭石，并置于1000r/min的条件下搅拌20min，过筛除去麦饭石，加入二次浆液总质量0.04倍量的醋酸、0.01倍量的碳酸二甲酯并置于1000r/min的条件下搅拌30min，再将二次浆液速冻结冰，静置20min，最后将速冻的二次浆液解冻，得到三次浆液；
步骤三、将三次浆液放入加热罐内，并向加热罐内加入三次浆液总质量3倍量的水混合，封闭加热罐，置于150r/min、40～42℃条件下保温20min，过滤除去滤渣，得到粗灵芝多糖；
步骤四、在400r/min条件下，将粗灵芝多糖滴加至其总质量3倍量的质量分数为80％的乙醇溶液中，过滤得到沉淀，并干燥，即得灵芝多糖。
2.如权利要求1所述的高纯度灵芝多糖的制备方法，其特征在于，在步骤一中，灵芝与质量分数为90％的乙醇溶液的用量比为1:8。
3.如权利要求2所述的高纯度灵芝多糖的制备方法，其特征在于，在步骤一中，将灵芝粉碎至粒径为1～2cm。
4.如权利要求3所述的高纯度灵芝多糖的制备方法，其特征在于，在步骤一中，向灵芝中加入质量分数为90％的乙醇溶液，置于38～40℃条件下加热，过滤，得到预处理灵芝，具体过程为：将灵芝粉碎，向灵芝中加入质量分数为90％的乙醇溶液，并置于38～40℃条件下加热20min，然后在38～40℃条件下加入灵芝总质量0.1倍量的柠檬酸和0.1倍量的食用油，继续加热10min，再分5次等量加入灵芝总质量0.013倍量的膦酸甘油酯，滴加完毕后，继续加热40min，同时每间隔10min向体系内鼓入氮气，过滤，即得到预处理灵芝。
5.如权利要求4所述的高纯度灵芝多糖的制备方法，其特征在于，在步骤一中，将灵芝粉碎后，先向灵芝中加入灵芝总质量4倍量的质量分数为10％的氯化钠水溶液中浸泡30min，取出灵芝，再向灵芝中加入质量分数为90％的乙醇。
6.如权利要求4所述的高纯度灵芝多糖的制备方法，其特征在于，在步骤二中，在向预处理灵芝中加入8～10℃的水之前，将预处理灵芝先用乙醇冲洗3次，然后使用0℃的水洗涤至清洗液的pH为中性。
7.如权利要求1所述的高纯度灵芝多糖的制备方法，其特征在于，在步骤四中，将粗灵芝多糖滴加至质量分数为85％的乙醇之前使用氧化铝进行柱层析，处理的具体过程为：将粗灵芝多糖总质量50倍量的氧化铝置于118～120℃的烘箱中13h，然后装柱，得到氧化铝柱，将粗灵芝多糖加入氧化铝树脂柱内，依次使用质量分数为98％的乙醇溶液、质量分数为80％的乙醇溶液、体积比1:1的水和质量分数为90％的乙醇溶液的混合溶液、及水进行洗脱，并收集体积比1:1的水和质量分数为90％的乙醇溶液的混合溶液、及水，其中，使用质量分数为98％的乙醇溶液、质量分数为80％的乙醇溶液、体积比1:1的水和质量分数为90％的乙醇溶液的混合溶液、及水的量与氧化铝柱的体积比依次为1:0.5:2:1:1。
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