CN110742024A - 一种黑腹果蝇蛹的简易大量繁殖方法 - Google Patents
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Abstract
本发明专利涉及害虫生物防治领域，提供一种黑腹果蝇蛹的简易大量繁殖方法。方法主要内容为：黑腹果蝇养虫罐的准备、黑腹果蝇采卵盘与人工饲料的准备；黑腹果蝇的繁殖；黑腹果蝇卵的收集；黑腹果蝇蛹化；黑腹果蝇蛹的大量繁殖。本方法省时、省力、装置简易、成本低廉，能够短时间内大量繁殖黑腹果蝇蛹，以便于达到实验对黑腹果蝇蛹大量需要的要求。
Description
技术领域
本发明属于害虫生物防治领域、针对防治对象为黑腹果蝇，具体涉及一种黑腹果蝇蛹的简易大量繁殖方法。
背景技术
在中国，黑腹果蝇种组有着丰富的物种种群，至少包括67个种群。其中六种果蝇D. auraria, D. kikkawai, D. melanogaster, D. simulans, D.suzukii, D. takahashii在地理上广泛分布，至少在22个省发现了斑翅果蝇。在过去的十年里，果蝇一直是中国最重要的水果害虫之一，特别是在樱桃、蓝莓的生产中。之前有记录表明，在樱桃中有三种果蝇占主导地位：D. melanogaster, D. suzukii,D. hydei；但斑翅果蝇并不是中国水果生产中占主导地位的果蝇种类，其的危害并不像北美和欧洲那样严重。主要原因可能是因为北美与欧洲作为入侵地区，不像作为斑翅果蝇发源地的国内有着丰富的天敌资源将其控制在一定危害范围之内，又或许国外的天敌还不能迅速适应这一新兴害虫的到来；另一方面可能与北美与欧洲对于果蝇害虫的综合防治有关，比如及时清理果园内的烂果等措施，这样虽然对斑翅果蝇的控制达到了一定作用，但作为腐蚀性的其它果蝇种群数量也被消减，更有利于缺少了种间竞争的斑翅果蝇的种群扩增。
黑腹果蝇作为一种模式昆虫是现在研究最为深入的一种昆虫，2000年，黑腹果蝇全基因组测序完成，对遗传与进化、胚胎发育、细胞生理学的发展做出了巨大贡献。黑腹果蝇作为模式昆虫的优势在于：易饲养、生活周期短、高繁殖、雌雄易分辨、基因组小、遗传工具丰富、基因保守性高等特点。雌蝇一生可产400只卵(有绒毛膜和卵黄膜包被)。幼虫在25℃条件下22 h后即可破壳形成可立刻觅食的一龄幼虫。一龄幼虫24 h后蜕皮、生长为二龄幼虫；二龄幼虫24 h后蜕皮、生长为三龄幼虫。黑腹果蝇喜欢在稍硬的地方化蛹并有聚集现象，度过4d蛹期，再经过1d，即可发育为成蝇(25℃条件下可成活约37 d)。羽化后8h的雌蝇即可交配，2d后又可以产卵。 黑腹果蝇一直以来作为最理想的模式昆虫之一，然而近来成为杨梅、樱桃等浆果果实主要的虫害。黑腹果蝇的寄生习性是可以寄生因为成熟导致果皮破裂、受到机械损伤、腐烂的水果，比如果皮损坏的苹果、桃子；而斑翅果蝇的寄生习性是更喜欢寄生于即将成熟或者已经成熟的浆果。
现阶段对于果蝇的防治主要有：（1）农业防治，及时清理果园，降低果蝇基数；（2）诱杀，包括药液诱杀、色板诱杀、性引诱剂诱杀；（3）化学防治，但是直接喷施至樱桃、杨梅等果树或果实上难以清洗，在成熟期不宜喷施，而且会引起“3R”问题，不能根本解决问题。对于一种害虫的控制主要有寄生性天敌、捕食性天敌、病原微生物等部分组成；生物防治与化学防治、物理防治方法不同，具有绿色安全，耗费人力物力低，甚至一劳永逸的特点；其中，利用寄生蜂对果蝇进行防控时，一种果蝇蛹期寄生蜂毛角锤角细蜂作用重大；其繁殖寄主需要大量的果蝇蛹，果蝇蛹的大量获取成为能够顺利大量繁殖果蝇蛹期寄生蜂毛角锤角细蜂的保障。
申请号CN201410098356.3的中国专利公开了一种利用液体培养基繁殖果蝇的方法及装置，与本方法相比，其有关操作为洗脱过滤并收集老熟幼虫然后置于袋中待其化蛹后备用；但本法为洗脱过滤并收集果蝇蛹；可以避免果蝇幼虫提前与培养基分离而因营养缺乏导致化蛹质量较差。申请号CN201610212741.5的中国专利公开了一种室内繁殖斑翅果蝇的方法，利用冷冻的香蕉作为繁殖斑翅果蝇的基础，但是在繁殖果蝇寄生蜂时，果蝇蛹的分离操作步骤较为复杂、且斑翅果蝇化蛹多在新鲜水果之上，获取斑翅果蝇蛹主要以人共挑取为主，较为费时费力；而利用本法获取果蝇蛹，一次性获取数量多且蛹龄较为一致，能够满足果蝇蛹期寄生蜂大量繁殖的需求。申请号CN201820809551.6的中国专利公开了一种果蝇蛹收集装置，装置主要包括吸蛹器和离心式抽风机，提供了一种结构简单且容易操作的果蝇蛹动力收集装置。本发明提供一种黑腹果蝇蛹简易大量繁殖方法，旨在能够在短时间内大量繁殖并获取黑腹果蝇蛹，以满足实验对果蝇蛹的大量需求；例如，大量扩繁果蝇蛹期寄生蜂所需果蝇蛹的准备等。此发明可以将果蝇蛹与其原有的取食饲养环境分离，简便快捷的将果蝇人共培养基等与实验所需的果蝇蛹进行分离，快速高效、省时省力，对果蝇蛹伤害率极低。
发明内容
本发明要解决的技术问题是，克服现有技术的不足，提供一种黑腹果蝇蛹的简易大量繁殖方法。
为了解决以上问题，本发明首先提供一种果蝇的繁殖方法，通过繁殖大量果蝇蛹进一步为大量获取果蝇蛹提供前提保障，从而满足实验对果蝇蛹的大量需要。
该方法包括以下步骤：
（1）黑腹果蝇养虫罐的准备
黑腹果蝇养虫罐：黑腹果蝇的饲养利用玻璃养虫罐，供试前将玻璃养虫罐清洗干净并自然晾干备用、养虫罐内放虫前首先用棉花沾取酒精将其内外擦拭一遍；玻璃养虫罐最底部放有两层吸水纸巾，纸巾上面放有折叠过两次的A4纸，A4纸上面放有果蝇人工饲料100g，一颗清洗干净且用酒精擦拭过果皮的苹果去核并切块均匀的摆放在人工饲料上，最后用纱网与皮筋将养虫罐封口；
（2）黑腹果蝇采卵盘的准备
将人工饲料倒入直径9cm的培养皿内，待饲料冷却到室温成为固体饲料，将培养皿倒置放入冰箱冷藏备用；
（3）黑腹果蝇的繁殖
将初羽化的黑腹果蝇利用CO2麻醉，选取100对雌雄虫引入果蝇养虫罐内；待其取食产卵发育至5~6d时，黑腹果蝇后代开始化蛹；待其发育至9~10d时，后代开始羽化；
（4）黑腹果蝇卵的收集
将初羽化的黑腹果蝇利用CO2麻醉，选取600对雌雄虫引入果蝇养虫笼（30cm*30cm*30cm）内，将黑腹果蝇采卵盘置于笼内、培养皿内放有浸润过10%蜂蜜水的脱脂棉以补充营养，将盛有无菌水的保鲜盒置于养虫笼内以补充水分、保鲜盒盖子上钻一直径约1cm的圆孔并将脱脂棉条通过孔插入水中；将黑腹果蝇采卵盘置于养虫笼内采卵24h；
（5）黑腹果蝇蛹化
将采卵24h后的采卵盘置于柱形塑料瓶（长：20cm、直径：9cm）内，将原装瓶盖中间割一边长约3cm的正方形开口，且开口用纱网封住以保证果蝇不能飞出柱形塑料瓶与瓶内正常气体流动。24h后开始出现初孵幼虫，幼虫取食3d左右开始化蛹，此时，黑腹果蝇的老熟幼虫会从采卵盘内爬出至塑料瓶瓶壁并在瓶壁大量化蛹；
（6）黑腹果蝇蛹的大量繁殖
待黑腹果蝇化蛹于柱形塑料瓶瓶壁，用镊子将塑料瓶内的采卵盘取出，用清水冲洗附着在瓶壁的黑腹果蝇蛹，同时利用毛刷将未冲洗下来的黑腹果蝇蛹刷下；将塑料瓶内含有黑腹果蝇蛹的悬浊液用50目网筛过筛，即可得到大量的黑腹果蝇蛹。置于塑料瓶内的采卵盘开始化蛹到瓶壁蛹化大量黑腹果蝇时间较短，应注意及时将蛹冲洗出塑料瓶；并保持瓶内环境稳定，尽量降低人工操作对黑腹果蝇后续化蛹的影响。
进一步，所得到的大量黑腹果蝇蛹，可以用于果蝇蛹期寄生蜂的大量繁殖，可以用于黑腹果蝇的大量繁殖，也可以利用于其他有关需要以果蝇蛹作为实验材料的实验中。
本发明中，所有的步骤都是在养虫室内温度为25±1℃、相对湿度为70±10%、光周期为14L：10D的环境条件下培养。本发明中，所述果蝇饲料的配置方法参考的是林清彩2015的硕士论文，配置方法：①.玉米粉50g、蔗糖40g、酵母粉20g，加入温水300ml将其搅拌均匀，加入95%酒精7ml、乙酸3ml；②.琼脂10g加入500ml水中，将其加热溶解成琼脂溶液；③.将步骤①中的混合溶液加入步骤②中，加水定容至1000ml并搅拌均匀，加热将饲料煮熟后加入1g山梨酸钾，搅拌均匀；④.将饲料倒入饲料盘内并用保鲜膜封住，待饲料冷却到室温成为固体饲料，将其放入冰箱冷藏备用。
本发明的有益效果
与现有技术相比，本发明技术的有益效果为：
本发明通过果蝇人工饲料快速繁殖黑腹果蝇，利用不同的养虫容器将黑腹果蝇的饲养、采卵、化蛹等阶段有机分离；利用黑腹果蝇蛹化时更趋向于干燥环境的特性，将柱形塑料瓶的内环境进行合理分割，一部分是以瓶底培养皿相对湿润的环境、另一部分是以瓶壁为主的相对干燥的环境；因此，黑腹果蝇在化蛹的时候老熟幼虫会爬至瓶壁进行化蛹；同时，配合过筛收集，省时、省力、经济且易于操作，能够在短时间内获得大量的黑腹果蝇蛹，可以满足连续实验对于黑腹果蝇蛹的大量需求。
具体实施方式
下面结合具体事例对本发明做进一步的详细描述：
实施例1
培养条件：养虫室内温度为25±1℃、相对湿度为70±10%、光周期为14L：10D。
人工饲料的配置方法：①玉米粉50g、蔗糖40g、酵母粉20g，加入温水300ml将其搅拌均匀，加入95%v/v酒精7ml、乙酸3ml；②琼脂10g加入500ml水中，将其加热溶解成琼脂溶液；③将步骤①中的混合溶液加入步骤②中，加水定容至1000ml并搅拌均匀，加热将饲料煮熟后加入1g山梨酸钾，搅拌均匀；④将饲料倒入饲料盘内并用保鲜膜封住，待饲料冷却到室温成为固体饲料，将其放入冰箱冷藏。
（1）黑腹果蝇养虫罐的准备
黑腹果蝇养虫罐：黑腹果蝇的饲养利用玻璃养虫罐，供试前将玻璃养虫罐清洗干净并自然晾干备用、养虫罐内放虫前首先用棉花沾取酒精将其内外擦拭一遍；玻璃养虫罐最底部放有两层吸水纸巾，纸巾上面放有折叠过两次的A4纸，A4纸上面放有果蝇人工饲料100g，一颗清洗干净且用酒精擦拭过果皮的苹果去核并切块均匀的摆放在人工饲料上，最后用纱网与皮筋将养虫罐封口；
（2）黑腹果蝇采卵盘的准备
将人工饲料倒入直径9cm的培养皿内，待饲料冷却到室温成为固体饲料，将培养皿倒置放入冰箱冷藏备用；
（3）黑腹果蝇的繁殖
将初羽化的黑腹果蝇利用CO2麻醉，选取100对雌雄虫引入果蝇养虫罐内；待其取食产卵发育至5~6d时，黑腹果蝇后代开始化蛹；待其发育至9~10d时，后代开始羽化；
（4）黑腹果蝇卵的收集
将初羽化的黑腹果蝇利用CO2麻醉，选取600对雌雄虫引入果蝇养虫笼（30cm*30cm*30cm）内，将黑腹果蝇采卵盘置于笼内、培养皿内放有浸润过10%蜂蜜水的脱脂棉以补充营养，将盛有无菌水的保鲜盒置于养虫笼内以补充水分、保鲜盒盖子上钻一直径约1cm的圆孔并将脱脂棉条通过孔插入水中；将黑腹果蝇采卵盘置于养虫笼内采卵24h；
（5）黑腹果蝇蛹化
将采卵24h后的采卵盘置于柱形塑料瓶（长：20cm、直径：9cm）内，将原装瓶盖中间割一边长约3cm的正方形开口，且开口用纱网封住以保证果蝇不能飞出柱形塑料瓶与瓶内正常气体流动。24h后开始出现初孵幼虫，幼虫取食3d左右开始化蛹，此时，黑腹果蝇的老熟幼虫会从采卵盘内爬出至塑料瓶瓶壁并在瓶壁大量化蛹；
（6）黑腹果蝇蛹的大量繁殖
待黑腹果蝇化蛹于柱形塑料瓶瓶壁，用镊子将塑料瓶内的采卵盘取出，用清水冲洗附着在瓶壁的黑腹果蝇蛹，同时利用毛刷将未冲洗下来的黑腹果蝇蛹刷下；将塑料瓶内含有黑腹果蝇蛹的悬浊液用50目网筛过筛，即可得到大量的黑腹果蝇蛹。置于塑料瓶内的采卵盘开始化蛹到瓶壁蛹化大量黑腹果蝇时间较短，应注意及时将蛹冲洗出塑料瓶；并保持瓶内环境稳定，尽量降低人工操作对黑腹果蝇后续化蛹的影响。
Claims (5)
1.一种黑腹果蝇蛹的简易大量繁殖方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：
（1）黑腹果蝇养虫罐的准备
黑腹果蝇养虫罐：黑腹果蝇的饲养利用玻璃养虫罐，供试前将玻璃养虫罐清洗干净并自然晾干备用、养虫罐内放虫前首先用棉花沾取酒精将其内外擦拭一遍；玻璃养虫罐最底部放有两层吸水纸巾，纸巾上面放有折叠过两次的A4纸，A4纸上面放有果蝇人工饲料100g，一颗清洗干净且用酒精擦拭过果皮的苹果去核并切块均匀的摆放在人工饲料上，最后用纱网与皮筋将养虫罐封口；
（2）黑腹果蝇采卵盘的准备
将人工饲料倒入直径9cm的培养皿内，待饲料冷却到室温成为固体饲料，将培养皿倒置放入冰箱冷藏备用；
（3）黑腹果蝇的繁殖
将初羽化的黑腹果蝇利用CO2麻醉，选取100对雌雄虫引入果蝇养虫罐内；待其取食产卵发育至5~6d时，黑腹果蝇后代开始化蛹；待其发育至9~10d时，后代开始羽化；
（4）黑腹果蝇卵的收集
将初羽化的黑腹果蝇利用CO2麻醉，选取600对雌雄虫引入果蝇养虫笼内，将黑腹果蝇采卵盘置于笼内、培养皿内放有浸润过10%蜂蜜水的脱脂棉以补充营养，将盛有无菌水的保鲜盒置于养虫笼内以补充水分、保鲜盒盖子上钻一直径1cm的圆孔并将脱脂棉条通过孔插入水中；将黑腹果蝇采卵盘置于养虫笼内采卵24h；
（5）黑腹果蝇蛹化
将采卵24h后的采卵盘置于柱形塑料瓶内，将原装瓶盖中间割一边长3cm的正方形开口，且开口用纱网封住以保证果蝇不能飞出柱形塑料瓶与瓶内正常气体流动；24h后开始出现初孵幼虫，幼虫取食3d左右开始化蛹，此时，黑腹果蝇的老熟幼虫会从采卵盘内爬出至塑料瓶瓶壁并在瓶壁大量化蛹；
（6）黑腹果蝇蛹的大量繁殖
待黑腹果蝇化蛹于柱形塑料瓶瓶壁，用镊子将塑料瓶内的采卵盘取出，用清水冲洗附着在瓶壁的黑腹果蝇蛹，同时利用毛刷将未冲洗下来的黑腹果蝇蛹刷下；将塑料瓶内含有黑腹果蝇蛹的悬浊液用50目网筛过筛，即可得到大量的黑腹果蝇蛹。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述人工饲料的配置方法：①玉米粉50g、蔗糖40g、酵母粉20g，加入温水300ml将其搅拌均匀，加入95%v/v酒精7ml、乙酸3ml；②琼脂10g加入500ml水中，将其加热溶解成琼脂溶液；③将步骤①中的混合溶液加入步骤②中，加水定容至1000ml并搅拌均匀，加热将饲料煮熟后加入1g山梨酸钾，搅拌均匀；④将饲料倒入饲料盘内并用保鲜膜封住，待饲料冷却到室温成为固体饲料，将其放入冰箱冷藏。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（4）中所述果蝇养虫笼的尺寸为30cm×30cm×30cm。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（5）中所述柱形塑料瓶的尺寸为长20cm，直径9cm。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所有步骤的培养如下：养虫室内温度为25±1℃、相对湿度为70±10%、光周期为14L：10D。
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