CN110734924B - 一种抑郁症检测、治疗和预后靶点及应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于生物医学技术领域，涉及一种抑郁症检测、治疗和预后靶点及应用。神经元中的伏隔核HDAC7能被HDAC7‑shrna慢病毒中的小发夹RNA抑制，其序列为5'‑GAC AAG AGC AAG CGA AGT G‑3'。本发明证实HDAC7可以调控许多与抑郁样行为密切相关的基因表达,可作为抑郁症检测、治疗和预后靶点。本发明提供了抑郁症治疗的新思路，为抑郁症防治药物的研发提供了新的思路。

Description

一种抑郁症检测、治疗和预后靶点及应用

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，涉及一种抑郁症检测、治疗和预后靶点及应用。

背景技术

根据世界卫生组织2017年发布的《全球健康估计》，全球抑郁症患者总数为3.22亿，其中近一半生活在东南亚地区和西太平洋地区。尽管据报道抑郁症具有很强的遗传成分，并涉及基因表达的异常变化。积累的证据表明，组蛋白乙酰化和组蛋白去乙酰化酶动态调控组蛋白乙酰化水平。表观遗传机制在慢性社会强制压力诱导的抑郁症动物模型中有明显影响。

将表观遗传机制与精神疾病联系起来的最吸引人的特征之一是，表观遗传机制能够对各种环境刺激做出反应、整合并将其转化为染色体结构变化，如组蛋白乙酰化，后者控制特定基因的表达。这一复杂的表观遗传调控过程是由多种酶修饰，尤其是组蛋白去乙酰化酶，这些酶是连接环境刺激和基因表达改变的介质。组蛋白去乙酰酶抑制剂包括四类：Ⅰ，Ⅱ,和Ⅲ类分别基于不同的同源性酵母基因rpd3 hda1和sir2，而只有HDAC11属Ⅳ类。虽然HDAC抑制剂逆转慢性战胜压力的影响与临床抗抑郁的治疗效果惊人的相似,但目前没有直接证据表明是否特定的组蛋白去乙酰酶抑制剂可作为抗抑郁的重要介质,更不用说HDAC目标基因调控的过程。目前对特异性组蛋白去乙酰化酶调控的下调基因的研究较少。

发明内容

本发明针对传统抑郁症治疗过程中存在的问题提出一种新型的抑郁症检测、治疗和预后靶点及应用。

HDAC7作为一种重要的Ⅱ类hdac成员，广泛表达在中枢神经系统。

伏隔核(NAc)参与严重抑郁症的发展和抗抑郁作用。特别是伏隔核中BDNF水平的升高与抑郁样行为有关，这与BDNF在海马中的抗抑郁作用相反。更重要的是，将HDAC(BDNF能调控HDAC的表达)抑制剂直接输注到前额叶mPFC、腹侧海马vHIP、伏隔核NAc或杏仁核等大脑区域，可以产生类似抗抑郁的效果。

在此，本发明研究慢性社会失败应激对小鼠伏隔核HDAC7表达的影响,并进一步用HDAC7- shrna -慢病毒敲除神经元中的HDAC7，然后通过RNA序列显示HDAC7调控的特定基因。

HDAC7在抑郁症中发挥重要作用，HDAC7及其下降基因是治疗抑郁症的有希望的靶点。HDAC7的序列如下,

atgcacagcccc ggcgctgatg ggacccaggt gagcccgggt gcccactact gcagccccactggcgcaggc tgccccaggc cctgtgcaga cacaccaggc cctcagccgc agcccatgga cctgcgggtgggccagcggc ccccagtgga gcccccacca gagcccacat tgctggccct gcagcgtccc cagcgcctgcaccaccacct cttcctagca ggcctgcagc agcagcgctc ggtggagccc atgaggctct ccatggacacgccgatgccc gagttgcagg tgggacccca ggaacaagag ctgcggcagc ttctccacaa ggacaagagcaagcgaagtg ctgtagccag cagcgtggtc aagcagaagc tagcggaggt gattctgaaa aaacagcaggcggccctaga aagaacagtc catcccaaca gccccggcat tccctacaga accctggagc ccctggagacggaaggagcc acccgctcca tgctcagcag ctttttgcct cctgttccca gcctgcccag tgaccccccagagcacttcc ctctgcgcaa gacagtctct gagcccaacc tgaagctgcg ctataagccc aagaagtccctggagcggag gaagaatcca ctgctccgaa aggagagtgc gccccccagc ctccggcggc ggcccgcagagaccctcgga gactcctccc caagtagtag cagcacgccc gcatcagggt gcagctcccc caatgacagcgagcacggcc ccaatcccat cctgggctcg gaggctgaca gtgaccgcag gacccatccg actctgggccctcgggggcc aatcctgggg agcccccaca ctcccctctt cctgccccat ggcttggagc ccgaggctgggggcaccttg ccctctcgcc tgcagcccat tctcctcctg gacccctcag gctctcatgc cccgctgctgactgtgcccg ggcttgggcc cttgcccttc cactttgccc agtccttaat gaccaccgag cggctctctgggtcaggcct ccactggcca ctgagccgga ctcgctcaga gcccctgccc cccagtgcca ccgctcccccaccgccgggc cccatgcagc cccgcctgga gcagctcaaa actcacgtcc aggtgatcaa gaggtcagccaagccgagtg agaagccccg gctgcggcag ataccctcgg ctgaagacct ggagacagat ggcgggggaccgggccaggt ggtggacgat ggcctggagc acagggagct gggccatggg cagcctgagg ccagaggccccgctcctctc cagcagcacc ctcaggtgtt gctctgggaa cagcagcgac tggctgggcg gctcccccggggcagcaccg gggacactgt gctgcttcct ctggcccagg gtgggcaccg gcctctgtcc cgggctcagtcttccccagc cgcacctgcc tcactgtcag ccccagagcc tgccagccag gcccgagtcc tctccagctcagagacccct gccaggaccc tgcccttcac cacagggctg atctatgact cggtcatgct gaagcaccagtgctcctgcg gtgacaacag caggcacccg gagcacgccg gccgcatcca gagcatctgg tcccggctgcaggagcgggg gctccggagc cagtgtgagt gtctccgagg ccggaaggcc tccctggaag agctgcagtcggtccactct gagcggcacg tgctcctcta cggcaccaac ccgctcagcc gcctcaaact ggacaacgggaagctggcag ggctcctggc acagcggatg tttgtgatgc tgccctgtgg tggggttggg gtggacactgacaccatctg gaatgagctt cattcctcca atgcagcccg ctgggccgct ggcagtgtca ctgacctcgccttcaaagtg gcttctcgtg agctaaagaa tggtttcgct gtggtgcggc ccccaggaca ccatgcagatcattcaacag ccatgggctt ctgcttcttc aactcagtgg ccatcgcctg ccggcagctg caacagcagagcaaggccag caagatcctc attgtagact gggacgtgca ccatggcaac ggcacccagc aaaccttctaccaagacccc agtgtgctct acatctccct gcatcgccat gacgacggca acttcttccc ggggagtggggctgtggatg aggtaggggc tggcagcggt gagggcttca atgtcaatgt ggcctgggct ggaggtctggacccccccat gggggatcct gagtacctgg ctgctttcag gatagtcgtg atgcccatcg cccgagagttctctccagac ctagtcctgg tgtctgctgg atttgatgct gctgagggtc acccggcccc actgggtggctaccatgttt ctgccaaatg ttttggatac atgacgcagc aactgatgaa cctggcagga ggcgcagtggtgctggcctt ggagggtggc catgacctca cagccatctg tgacgcctct gaggcctgtg tggctgctcttctgggtaac agggtggatc ccctttcaga agaaggctgg aaacagaaac ccaacctcaa tgccatccgctctctggagg ccgtgatccg ggtgcacagt aaatactggg gctgcatgca gcgcctggcc tcctgtccagactcctgggt gcctagagtg ccaggggctg acaaagaaga agtggaggca gtgaccgcac tggcgtccctctctgtgggc atcctggctg aagataggcc ctcggagcag ctggtggagg aggaagaacc tatgaatctctaa。

抑制HDAC7的HDAC7- shrna慢病毒中的小发夹RNA，序列为5'-GAC AAG AGC AAGCGA AGT G-3'。

PCR检测引物序列为正向5’- GCC TCC ATC GAC CAC TTA ACC- 3’，反向5’-CGAGGG TAT CTG TCG CAG TC-3’。

持续的抑郁症状表明大脑中稳定的分子适应的参与，这反映在染色质重构的水平，如组蛋白乙酰化。本发明首次提出，在慢性社会失败应激后，小鼠伏隔核中HDAC7而不是HDAC2类组蛋白去乙酰化酶显著降低。重要的是，通过慢病毒敲除神经元中的HDAC7，然后进行RNA序列分析，发现许多基因表达发生了变化。这些结果表明，HDAC7是慢性社会挫败应激模型中调节基因表达的重要组蛋白去乙酰化酶。

与现有技术相比，本发明的优点和积极效果在于：

1.本发明证实HDAC7可以调控许多与抑郁样行为密切相关的基因表达,可作为抑郁症检测、治疗和预后靶点。

2.本发明提供了抑郁症治疗的新思路，为抑郁症防治药物的研发提供了新的思路。

附图说明

图1显示慢性社会失败压力导致小鼠持续的社会厌恶情况。(A)慢性社会失败压力的示意图。(C-D)与对照组小鼠相比，社交目标减少了在互动区花费的时间，而增加了社交失败后在角落区花费的时间。（B）慢性社会失败应激对实验小鼠的总运动能力没有影响。

图2显示慢性社会失败对焦虑样行为的影响情况。（A）与对照组小鼠相比，慢性社会失败应激小鼠在旷场中心区域停留的时间更短。（B）更重要的是，慢性社会失败应激小鼠进入中心区域的次数更少。（C）与对照组相比，慢性社会失败应激小鼠在高架十字开臂上行走的时间更短，（D）更重要的是，慢性社会失败应激小鼠进入开臂上的次数明显更少。

图3显示慢性社会失败对抑郁样行为的影响情况。（A）与对照组小鼠相比，慢性社会失败应激小鼠在强迫游泳中静止的时间显著增加。（B）与对照组小鼠相比，慢性社会失败应激小鼠在悬尾试验中静止的时间显著增加。

图4显示慢性社会应激失败显著降低伏隔核HDAC7的蛋白表达情况。（A）与对照组小鼠相比，慢性社会失败应激小鼠伏隔核脑区HDAC7蛋白表达明显降低。（B-D）与对照组小鼠相比，慢性社会失败应激小鼠伏隔核脑区HDAC1，HDAC2,HDAC6蛋白表达没有明显变化。

图5显示芯片结果显示HDAC7影响慢性社会挫败应激后神经元中的基因表达情况。（A）干扰HDAC7后，芯片测序热图，提示HDAC7调控的基因。（B）过表达HDAC7后，芯片测序热图，提示HDAC7调控的基因。

具体实施方式

为了能够更清楚地理解本发明的上述目的、特征和优点，下面结合具体实施例对本发明做进一步说明。需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请的实施例及实施例中的特征可以相互组合。

在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但是，本发明还可以采用不同于在此描述的其他方式来实施，因此，本发明并不限于下面公开说明书的具体实施例的限制。

实施例1

材料和方法

采用6-8周龄C57BL/6 J小鼠，体重23-25g, 8-9月龄CD-1小鼠。所有小鼠均置于标准笼中，控制温度(22±2℃)，日光照/暗循环12h。食物和水可以随时供应。所有动物程序均按照《国立卫生研究院实验动物护理和使用指南》的指导方针进行，并经山东大学动物护理和使用机构委员会批准。

慢性社会挫败压力

对慢性社会失败压力(10天)进行了研究，并根据实验要求进行了修改。实验小鼠C57BL/6J, 6-8周龄，连续10天接受社会打败应激。CD1退休育种者在满足以下条件的情况下进行实验:首先，CD1常驻攻击者必须在连续3次180-s筛选过程中连续攻击至少2次；其次，每个会话中记录的攻击延迟必须小于60s。每只实验小鼠每天被引入陌生的CD1入侵小鼠的笼中，进行10分钟的物理打击。经过10分钟的物理对抗后，在接下来的24小时内，用穿孔的有机玻璃将入侵小鼠与入侵小鼠进行感官接触。每天，每只实验小鼠都被引入一个新的CD1攻击者笼中。对照组的动物是成对饲养的，在穿孔的有机玻璃隔板的两边各有一只，每天处理的方法与实验组相同。

旷场实验：利用旷场实验对小鼠的自主运动能力及焦虑情绪进行检测。旷场环境为：一个底部为白色底板，侧壁为黑色金属板，且长×宽×高=40cm×40cm×40cm的立方体。在正中用Smart软件在白色底板上画一个20cm×20cm的正方形，作为中间区域。提前一晚上将小鼠放入该房间适应环境。实验操作，将小鼠温柔的放入旷场实验箱的正中间位置，然后使其自由活动10min，用Smart软件记录小鼠的活动轨迹及速度。整个实验过程保存安静。每两只小鼠测试之间，用50%酒精清理旷场实验环境，包括底板和侧壁，以除去上一只小鼠残留的信息。用Smart软件进行分析，计算10min内小鼠的运动距离，以此作为评价小鼠自主运动能力的指标。以10min内小鼠在中心区域活动的时间与总活动时间的比值作为评价小鼠焦虑情绪的指标。

高架十字迷宫测验（EPM）

EPM由两个张开的手臂(30×5cm)，两个封闭的手臂(30×5cm)和一个中央平台(5×5cm)组成，平台离地面38.5 cm。在5分钟的测试过程中，每只老鼠都被放置在中心平台上，面对一只张开的手臂开始测试。视频跟踪系统(Smart)对张开双臂的时间和进入封闭双臂的次数进行评分。

社交回避冲突

采用视频跟踪系统对C57BL6J小鼠对陌生社会目标的回避行为进行评分。竞技场是一片完全黑暗的黑色金属空地(40×40厘米)。使用装有红外滤光片和照明灯的摄像机进行录像。每只实验小鼠被引入开阔的场地，并连续记录其运动轨迹，每次2.5分钟，持续30秒。在第一次试验中，一个没有目标的空塑料网箱(10 x 6.5厘米)被放置在开阔场地的一端。在第二阶段，将一只不熟悉的CD1雄性小鼠作为社会目标动物放入网箱，不改变任何其他条件。通过视频跟踪系统记录实验小鼠在“交互区”(网箱周围8厘米宽的走廊)和“角落”(网箱位置相对的两个正方形区域)内的时间。

强迫游泳测试

强迫游泳试验简单地说，实验小鼠被放置在一个装满22℃水的玻璃圆筒中，水面高度18厘米(25厘米高，10厘米直径)，在6分钟的测试时间内，确定小鼠静止不动时间的百分比。不动被定义：停止挣扎，保持不动并漂浮在水中。游泳被定义：大量使用前爪向前移动的中心或沿气缸的两侧。攀爬被定义：对气缸壁的主动棘爪和将爪子举过水面。

悬尾测试

将老鼠的尾巴吊在金属支架上，将小鼠倒吊，使它们的头离地面35厘米,用一个相机是用来记录在6min内小鼠静止活动的时间。不动被定义：四肢和尾巴不动。

WB步骤

组织总蛋白提取：取一定大小的脑组织（约20mg）置于1.5mL EP管中，在管中加入100μL RIPA裂解液（强），在冰上进行组织研磨，待组织完全研磨粉碎之后，置于4ºC层析柜的均匀混合器上，慢速旋转进行充分裂解30min。然后4ºC离心：13000rpm离心10min，在冰上进行上清抽取。

蛋白样本的制备 蛋白提取以后，用BCA法测定蛋白浓度：

1)制作一条标准曲线：使用浓度为0.5mg/mL的蛋白标准品，在96孔透明板中，在不同孔中分别加入0、4、8、12、16、20μL，不满20μL的样品加去离子水补齐至20μL，制作标准曲线。

2)BCA显色混合液：按照体积比，A液：B液=50:1的比例混合BCA显色混合液，充分混匀。

3)样本孔，加入18μL/孔去离子水，再向其中分别加入待测蛋白样品2μL（将样品稀释10倍进行检测）。

4)每孔加入200μL BCA显色混合液，37ºC避光孵育30min。

5)酶标仪预热15min，然后使用酶标仪测定562nm波长下的吸光度。

6)根据标准曲线计算各样品蛋白浓度，将各孔蛋白浓度调为一致，根据裂解液体积加入5×上样缓冲液（使其最终为1×），混匀置于100ºC金属浴变性10min，然后置于冰上备用。

配置聚丙烯酰胺凝胶：聚丙烯酰胺凝胶分为浓缩胶和分离胶。浓缩胶聚丙烯酰胺浓度为5%，分离胶根据所测蛋白分子量的不同，制备不同的浓度（7%-10%）的分离胶（所检测蛋白分子量越大所需分离胶浓度越小）。检测HDAC7，HDAC1和HDAC6所用聚丙烯酰胺凝胶的浓度为5%浓缩胶，10%的分离胶。用1.5mm厚的玻璃板配制，需8mL分离胶，4 mL浓缩胶。分离胶制备好，倒入玻璃板，高度为梳子齿下1cm，用异丙醇将液面压平。室温静置凝固30min。然后将无水乙醇倒掉，用双蒸水冲洗，用滤纸吸尽剩余的双蒸水。加入浓缩胶，从一侧缓慢插入梳子，避免产生气泡。室温静置凝固30min。

跑胶：将制备好的聚丙烯酰胺凝胶组装到垂直电泳槽中。加入running buffer，两板之间的溶液加满，电泳槽内的外液没过电阻丝。将梳子垂直拔下，用微量上样针上样。每孔加入15ul（30ug）蛋白样品。连接电极，恒定电压进行电泳，浓缩胶电压80V，分离胶电压120V，待溴酚蓝跑至胶底，停止电泳。准备转膜。

转膜：采用湿转的方法。切一个8.5cm*6.0cm的PVDF膜（可以覆盖整个胶），在甲醇中浸泡15s，然后将转膜用的海绵、滤纸、甲醇浸泡过的PVDF膜放入transfer buffer中。将海绵和滤纸浸湿，PVDF膜上残留的甲醇洗掉。将跑完的胶用翘胶板将其从玻璃板中取出，放入transfer buffer中。组装转膜夹，从负极到正极依次：海绵、滤纸、聚丙烯酰胺凝胶、PVDF膜、滤纸、海绵，叠放整齐后用滚轮赶出中间的气泡，然后用转膜夹夹紧，放入转膜槽中。将降温冰盒置于转膜槽中，然后在转膜槽中加满transfer buffer。将整个转膜槽置于冰水中，连上电极，300mA恒流转膜，HDAC7转膜时间1.5h。根据所要蛋白分子量的大小确定转膜时间（分子量越大，转膜时间越长）。

封闭：转膜结束后，用镊子将PVDF膜取出。放入事先配好的封闭液中，置于水平摇床上，室温慢速摇晃1h。

一抗孵育：封闭完成后，将封闭液弃掉，加入TBST洗膜，置于水平摇床，室温晃动10min。使用抗体稀释液根据抗体说明书的比例稀释抗体。根据所需分子量大小将PVDF膜剪开，置于抗体孵育槽中，然后将对应分子量的稀释抗体倒入孵育槽中，置于水平摇床上，4ºC慢速晃动过夜。

洗膜：一抗孵育完成后，回收一抗置于4ºC冰箱中储存。TBST洗膜，每次10min，洗三次。

孵育二抗：用抗体稀释液根据抗体说明书要求稀释二抗，充分混匀，将其对应属性加入洗好的PVDF膜上，置于水平摇床上，室温慢速摇晃1h。

洗膜：二抗孵育结束后，将二抗倒掉，TBST洗膜三次，每次10min。

显影 将ECL发光液A液和B液按体积比1比1的比例进行混合。用镊子将PVDF膜从TBST中夹出，用滤纸吸尽TBST，然后平铺，将混合好的ECL加到PVDF膜上，将其置于显影仪中，根据抗体的强度调整曝光时间，保存图片。

分析：使用ImageJ对图片进行灰度分析，根据所需的目的蛋白和内参蛋白灰度值的比值，评价目的蛋白的表达量。根据不同实验组与对照组的表达量的比值，评价目的蛋白的变化趋势。

试剂抗体信息：RIPA buffer (50 mM Tris, 150 mM NaCl, 0.1% SDS, 0.5%sodium deoxycholate, 1% IGEPAL CA-630, pH 7.4)

HDAC1抗体(Sigma, 1:1000),HDAC2抗体(Sigma, 1:1000), HDAC6抗体(Sigma,1:1000), HDAC7抗体(Sigma, 1:1000)

病毒信息

过表达HDAC7(Mus musculus)的腺病毒包含EGFP以及与EGFP之间用P2A结构连接的Adv-HDAC7，Adv-con组表达只GFP。干扰HDAC7的慢病毒包括sh-HDAC7的小发夹RNA序列及GFP标记的sh-HDAC7。对照病毒是只表达GFP的sh-control慢病毒。

检测HDAC7分子RNA水平的基因PCR引物序列为：正向5’- GCC TCC ATC GAC CACTTA ACC- 3’，反向5’-CGA GGG TAT CTG TCG CAG TC-3’。

干扰（抑制）HDAC7的慢病毒sh-HDAC7的小发夹RNA序列为5'-GAC AAG AGC AAGCGA AGT G-3'。

结果

CSDS成功地诱导了社会回避行为。

通过视频跟踪系统将新型CD-1鼠标置于塑料网箱中，实现社交化(图1A)。未被打败的对照组小鼠大部分时间都呆在互动区，而很少时间呆在角落里，面对的是一只陌生的目标小鼠。然而，被打败的老鼠对目标老鼠表现出强烈的厌恶反应，它们更喜欢呆在角落里，但在互动区呆的时间更少。这种差异只在有社会目标存在的情况下观察到，而对空铁丝笼的反应并不显著。在整个竞技场中没有观察到运动的差异。

焦虑行为测试

采用旷场试验和高架十字迷宫实验，观察被打败的小鼠是否表现出焦虑样行为的改变。与对照组相比，被打败的老鼠在中心区域停留的时间更短。而被打败的老鼠则在开阔地带的中心地带走更短的距离。更重要的是，被打败的老鼠进入中心区域的次数更少。为了进一步证实CSDS诱发的焦虑样行为，我们采用了高架十字迷宫。与对照组相比，被打败的老鼠行走的时间更短，并且在伸开的手臂上的活动明显更少。

抑郁样行为测试

为了评估慢性社会应激失败后的抑郁样行为变化，我们依次进行了强迫游泳和悬尾实验。不出所料，在强迫游泳实验中，被攻击者击败的小鼠表现出更多的静止时间。为了进一步验证我们的结果，我们进行了尾悬架试验。尽管如此，长期遭受社会挫败压力的老鼠在悬尾测试中表现出更多的静止时间。

慢性社会失败应激抑制伏隔核HDAC7的表达

Western blot分析组蛋白去乙酰化酶是否参与慢性社会挫败性应激所致的抑郁。值得注意的是，我们观察到慢性社会挫败应激后伏隔核的HDAC7明显降低，而不是PFC和海马腹侧，这表明HDAC7在CSDS诱导的行为改变中具有脑区特异性的作用。然而，其他组蛋白去乙酰化酶如HDAC1、HDAC2、HDAC6在NAc中不发生变化，这表明HDAC7可能在CSDS伏隔核诱导行为改变中发挥重要作用。

芯片结果显示HDAC7影响慢性社会挫败应激后神经元中的基因表达

鉴于HDAC7在慢性社会挫败应激后伏隔核显著降低，抑郁样行为和焦虑样行为被认为是重度抑郁症的经典行为改变。我们想知道HDAC7调节的基因对抑郁症的影响。我们用hdac7 - shrna慢病毒或对照载体转染神经元，通过rna测序分析研究其基因表达模式。在热图中，我们发现在神经元慢病毒敲除HDAC7后，许多基因表达发生了变化(图5)。在热图上显示了最重要的基因。值得注意的是，众所周知的与抑郁相关的c-Fos。我们还发现受HDAC7调控的新的目标基因Srxn1 Irf1, Tf,这写基因可能是治疗重度抑郁障碍的新目标。为了证实这些基因是由HDAC7特异表达的，我们用advhdac7或advcontrol转染神经元，并通过rna测序分析研究其表达模式。前10位显著性改变基因如下，c-Fos表达明显上调。这些结果提示HDAC7-c-fos轴可能在MDD中起关键作用。

讨论

最近的研究表明，组蛋白去乙酰化酶在伏隔核异常表达引起的组蛋白乙酰化改变可能在抑郁症中起重要作用，而特异性组蛋白去乙酰化酶在伏隔核过表达可对抑郁小鼠产生治疗作用。在这里，我们实施了慢性社会失败应激小鼠抑郁症模型，在该模型中，小鼠每天被新的CD-1攻击者击败10分钟，连续10天。采用社会回避测验、开放场地测验、高架加迷宫和强迫游泳测验对抑郁模型引起的行为变化进行评价。被打败的小鼠的社交回避、抑郁和焦虑水平明显高于对照组。使用慢性社交失败压力模型的研究在社交回避行为、焦虑类行为、抑郁类行为方面也得出了类似的结果，证实了我们的发现。这些结果表明，我们的小鼠模型适用于探索抑郁症和抗抑郁反应相关的细胞和分子机制。

伏隔核被证实与抑郁有关，并证实组蛋白去乙酰化酶如HDAC5、HDAC2在伏隔核中的异常表达。HDAC7,作为一个类Ⅱhistone去乙酰酶抑制剂的重要成员,小的工作已经对其功能的萧条,我们以前的工作表明,HDAC7表示对大脑广泛包括PFC,海马,amydala。在这里，我们表明，在慢性社会战胜压力后，伏隔核的HDAC7明显降低，而不是CPU。

结果表明，HDAC7可以调控许多与抑郁样行为密切相关的基因表达。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例应用于其它领域，但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。

SEQUENCE LISTING

<110> 山东大学第二医院

<120> 一种抑郁症检测、治疗和预后靶点及应用

<130> 1

<160> 3

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 2865

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 1

atgcacagcc ccggcgctga tgggacccag gtgagcccgg gtgcccacta ctgcagcccc 60

actggcgcag gctgccccag gccctgtgca gacacaccag gccctcagcc gcagcccatg 120

gacctgcggg tgggccagcg gcccccagtg gagcccccac cagagcccac attgctggcc 180

ctgcagcgtc cccagcgcct gcaccaccac ctcttcctag caggcctgca gcagcagcgc 240

tcggtggagc ccatgaggct ctccatggac acgccgatgc ccgagttgca ggtgggaccc 300

caggaacaag agctgcggca gcttctccac aaggacaaga gcaagcgaag tgctgtagcc 360

agcagcgtgg tcaagcagaa gctagcggag gtgattctga aaaaacagca ggcggcccta 420

gaaagaacag tccatcccaa cagccccggc attccctaca gaaccctgga gcccctggag 480

acggaaggag ccacccgctc catgctcagc agctttttgc ctcctgttcc cagcctgccc 540

agtgaccccc cagagcactt ccctctgcgc aagacagtct ctgagcccaa cctgaagctg 600

cgctataagc ccaagaagtc cctggagcgg aggaagaatc cactgctccg aaaggagagt 660

gcgcccccca gcctccggcg gcggcccgca gagaccctcg gagactcctc cccaagtagt 720

agcagcacgc ccgcatcagg gtgcagctcc cccaatgaca gcgagcacgg ccccaatccc 780

atcctgggct cggaggctga cagtgaccgc aggacccatc cgactctggg ccctcggggg 840

ccaatcctgg ggagccccca cactcccctc ttcctgcccc atggcttgga gcccgaggct 900

gggggcacct tgccctctcg cctgcagccc attctcctcc tggacccctc aggctctcat 960

gccccgctgc tgactgtgcc cgggcttggg cccttgccct tccactttgc ccagtcctta 1020

atgaccaccg agcggctctc tgggtcaggc ctccactggc cactgagccg gactcgctca 1080

gagcccctgc cccccagtgc caccgctccc ccaccgccgg gccccatgca gccccgcctg 1140

gagcagctca aaactcacgt ccaggtgatc aagaggtcag ccaagccgag tgagaagccc 1200

cggctgcggc agataccctc ggctgaagac ctggagacag atggcggggg accgggccag 1260

gtggtggacg atggcctgga gcacagggag ctgggccatg ggcagcctga ggccagaggc 1320

cccgctcctc tccagcagca ccctcaggtg ttgctctggg aacagcagcg actggctggg 1380

cggctccccc ggggcagcac cggggacact gtgctgcttc ctctggccca gggtgggcac 1440

cggcctctgt cccgggctca gtcttcccca gccgcacctg cctcactgtc agccccagag 1500

cctgccagcc aggcccgagt cctctccagc tcagagaccc ctgccaggac cctgcccttc 1560

accacagggc tgatctatga ctcggtcatg ctgaagcacc agtgctcctg cggtgacaac 1620

agcaggcacc cggagcacgc cggccgcatc cagagcatct ggtcccggct gcaggagcgg 1680

gggctccgga gccagtgtga gtgtctccga ggccggaagg cctccctgga agagctgcag 1740

tcggtccact ctgagcggca cgtgctcctc tacggcacca acccgctcag ccgcctcaaa 1800

ctggacaacg ggaagctggc agggctcctg gcacagcgga tgtttgtgat gctgccctgt 1860

ggtggggttg gggtggacac tgacaccatc tggaatgagc ttcattcctc caatgcagcc 1920

cgctgggccg ctggcagtgt cactgacctc gccttcaaag tggcttctcg tgagctaaag 1980

aatggtttcg ctgtggtgcg gcccccagga caccatgcag atcattcaac agccatgggc 2040

ttctgcttct tcaactcagt ggccatcgcc tgccggcagc tgcaacagca gagcaaggcc 2100

agcaagatcc tcattgtaga ctgggacgtg caccatggca acggcaccca gcaaaccttc 2160

taccaagacc ccagtgtgct ctacatctcc ctgcatcgcc atgacgacgg caacttcttc 2220

ccggggagtg gggctgtgga tgaggtaggg gctggcagcg gtgagggctt caatgtcaat 2280

gtggcctggg ctggaggtct ggaccccccc atgggggatc ctgagtacct ggctgctttc 2340

aggatagtcg tgatgcccat cgcccgagag ttctctccag acctagtcct ggtgtctgct 2400

ggatttgatg ctgctgaggg tcacccggcc ccactgggtg gctaccatgt ttctgccaaa 2460

tgttttggat acatgacgca gcaactgatg aacctggcag gaggcgcagt ggtgctggcc 2520

ttggagggtg gccatgacct cacagccatc tgtgacgcct ctgaggcctg tgtggctgct 2580

cttctgggta acagggtgga tcccctttca gaagaaggct ggaaacagaa acccaacctc 2640

aatgccatcc gctctctgga ggccgtgatc cgggtgcaca gtaaatactg gggctgcatg 2700

cagcgcctgg cctcctgtcc agactcctgg gtgcctagag tgccaggggc tgacaaagaa 2760

gaagtggagg cagtgaccgc actggcgtcc ctctctgtgg gcatcctggc tgaagatagg 2820

ccctcggagc agctggtgga ggaggaagaa cctatgaatc tctaa 2865

<210> 2

<211> 19

<212> DNA

<213> 未知

<400> 2

gacaagagca agcgaagtg 19

<210> 3

<211> 41

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 3

gcctccatcg accacttaac ccgagggtat ctgtcgcagt c 41

Claims (3)

1.一种慢病毒小发夹RNA在抑制抑郁症相关靶基因中的应用,其特征在于,所述靶基因为神经元中的伏隔核HDAC7, 所述HDAC7基因序列如序列表SEQ ID NO:1所示，抑制神经元中的伏隔核HDAC7的慢病毒中的小发夹RNA，序列为5'-GAC AAG AGC AAG CGA AGT G-3',所述抑郁症为慢性社交障碍引起的抑郁。

2.抑制伏隔核HDAC7的慢病毒小发夹RNA在制备治疗慢性社交障碍引起的抑郁药物中的应用，其特征在于,所述慢病毒小发夹RNA序列为5'-GAC AAG AGC AAG CGA AGT G-3'。

3.检测HDAC7分子水平的引物在制备诊断慢性社交障碍引起的抑郁症的试剂或试剂盒中的应用，其特征在于，所述引物序列为正向5’- GCC TCC ATC GAC CAC TTA ACC- 3’，反向5’-CGA GGG TAT CTG TCG CAG TC-3’。

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