CN110713935B - 一种高产窄分布果胶寡糖的黑曲霉和果胶酶及其应用 - Google Patents

一种高产窄分布果胶寡糖的黑曲霉和果胶酶及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种产窄分布果胶寡糖的黑曲霉及其应用，所述黑曲霉为黑曲霉(Aspergillus niger)1805，其保藏号为：CGMCC No.15670。该菌所产生的果胶酶能使商业化果胶产生聚合度5‑8为主的果胶寡糖产物。

Description

一种高产窄分布果胶寡糖的黑曲霉和果胶酶及其应用
技术领域
本发明属于微生物发酵及其酶工程化应用领域，具体涉及一种高产窄分布果胶寡糖的黑曲霉(Aspergillus niger)1805及所产的果胶寡糖的应用。
背景技术
果胶是一类结构复杂的杂多糖，由D-吡喃半乳糖醛酸以α-1,4糖苷键聚合而成的主链，以鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、和木糖等组成侧链。主要由均聚半乳糖醛酸(HGA)、鼠李半乳糖醛酸聚糖Ⅰ(RG-I)和鼠李半乳糖醛酸聚糖Ⅱ(RG-II)3个结构区域构成。果胶降解产生的果胶寡糖，具有抗菌、抗肿瘤和抑制毒素等作用，在控制棉花黄萎病、苹果花叶病和辣椒病毒病等方面效果显著。
目前，果胶寡糖制备常用的方法有酸法、酶法、超声波法。酶法降解条件温和、无污染、特异性强，是最为理想的方法。果胶酶是指能够分解果胶物质的多种酶的总称。果胶酶广泛分布于高等植物和微生物中,在某些原生动物和昆虫中也有发现。在微生物中，细菌、放线菌、酵母和霉菌都能合成果胶酶。果胶酶一般分为原果胶酶、果胶水解酶、果胶裂解酶和果胶酯酶。目前果胶酶在食品、纺织、医药、造纸、环境、生物技术、饲料等领域得到广泛应用。随着我国食品工业和饲料工业的逐步发展，对果胶酶的需求也逐渐增长，但是由于我国对果胶酶的研究起步较晚，存在着诸多不足，如酶活力普遍较低、应用效果不佳等，严重影响着果胶酶的开发和生产。近年来国内也重视了果胶酶的应用和开发,特别是许多研究单位对果胶酶产生菌的筛选及诱变进行了积极的研究。目前国内所报道的果胶酶产生菌大多为黑曲霉，虽其果胶酶组分较为齐全，但混合酶的产物较杂，功能活性不清，质量不稳，不能满足国内市场日益增长的需要。可见要提高我国果胶酶制剂的质量，关键因素是要选育出适合于工业生产的产一定纯度特定果胶寡糖的高产菌。
而天然菌株产果胶酶的活力一般都比较低，所得产物分布太广，产品的质量较低。果胶利用菌种的选育具有方法快速、简单、收效明显等特点，因而被广泛应用于产果胶寡糖中。而菌种的发酵产酶水平除了与其原始的生理特性及遗传改良有关外，工艺条件的优化也是充分体现生产性能的必要环节，筛选的菌株要在合适的工艺条件下得以体现，因此有必要对筛选菌的发酵工艺条件进行研究。应用黑曲霉产的果胶酶进行果汁澄清具有安全，高效，经济等特点。同时，对果汁的营养成分影响也很小。本专利以商业化果胶为底物，从甘橙中选出黑曲霉作为出发菌株，通过优化其产酶条件，从而降低发酵产酶成本，获得了高产果胶酶的黑曲霉，具有活性高、稳定性好、产物特异高等特点，可在大规模的果胶相关产业中得以应用。
果胶寡糖是由2～20个α-1,4-D-半乳糖醛酸(GalA)残基构成的一种功能性低聚糖，部分半乳糖醛酸以甲酯的形式存在。黑莓寡糖酵素中的“果胶寡糖”是采用生物酶法降解黑莓鲜果中的果胶所得，具有生物活性功能。抗辐射、抗氧化活性果胶寡糖在生物体内抵抗超氧阴离子自由基(O2-)、羟基自由基(OH)、脂质自由基(RO，ROO)对机体的损伤，从而预防动脉粥样硬化、糖尿病、高血压、癌症、囊型纤维化、帕金森病、老年痴呆症等神经退行性疾病。促进肠道有益菌(双歧杆菌)的增殖活性因肠道内的有益菌群双歧杆菌能专门酵解吸收果胶寡糖，而肠道中其他有害菌群则无能力酵解利用果胶寡糖，故果胶寡糖具有促进双歧杆菌增殖活性，产生解毒排毒、防治腹泻、改善肠环境、预防肠道癌症、延缓衰老等一系列特殊整肠保健功能，提高机体整体免疫力。增强机体免疫力活性果胶寡糖可有效激活和促进机体特异性和非特异性免疫系统，明显增加细胞膜渗出液中一种具有较强免疫活性的巨噬细胞—多形核白细胞的数量，从而激活机体的免疫系统。抗菌消炎具有抗绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、伤寒沙门氏菌等感染以及提高免疫功能低下患者的抗真菌感染能力。除上述之外，果胶寡糖由于难被唾液酶和小肠消化酶水解，人体难以消化吸收，只能被肠道细菌吸收利用，其热量很低，不会导致肥胖；并且低聚糖属非胰岛素所依赖，不会使血糖升高，适合于高血糖人群和糖尿病人食用。
果胶寡糖的活性与其结构密切相关，果胶寡糖被认为是新的益生元，它具有多种促进健康的特性。它可以刺激人结肠腺癌细胞的凋亡过程，对心血管组织具有保护作用，减少金属所致的损伤，具有抗肥胖，抗毒，抗菌，抗氧化等功能。果胶寡糖也被用于治疗胃肠疾病，糖尿病和高胆固醇血症。具体而言，该寡糖可以增加胃肠道中的益生菌菌群，如真杆菌属(Lactobacillus Eubacterium)，粪肠杆菌属(Faecalibacterium)等。同样，该寡糖增加双歧杆菌种群，但不刺激梭菌的生长。苹果果胶中的阿拉伯寡糖可被双歧杆菌，长双歧杆菌，普通拟杆菌和乳酸杆菌选择。果胶寡糖可以促进从年轻人到老年人的所有人群中双歧杆菌的生长，并增加了他们的免疫调节能力。
目前，果胶寡糖的制备方法主要有化学合成法、微生物发酵法、植物富集法等。其中，化学合成方法成本高、产率低，且在生产过程中涉及到有毒溶剂，存在化学试剂残留，因此安全方面存在隐患；植物富集法依赖于种植业，受到气候、地域等影响较大，产量不稳定，难以满足日益增长的需要。微生物合成法主要是利用微生物发酵，通过筛选优良、高产且稳定的微生物菌株，发酵生产果胶寡糖，主要包括乳酸菌、酵母菌、曲霉菌、谷氨酸棒状杆菌等。然而，目前通过微生物发酵生产果胶寡糖的产物混杂，活性不清，产物质量和产量还较低，主要有以下几个原因：(1)微生物培养产生的果胶酶多为混合酶，大大降低了产物切割的特异性，导致产物分布广，活性不清；(2)由于果胶寡糖是水溶性，因而从发酵产物中提取果胶寡糖的工艺比较复杂。(3)有些产果胶酶的菌种安全性未知，所生产的果胶寡糖难以用于食品工业。因此筛选食品级并能够表达较高纯度果胶酶的菌株，用来生产分布窄的果胶寡糖是非常必要的。
黑曲霉是一种常见的食品级霉菌，在自然界中分布十分广泛。黑曲霉在果胶寡糖生产制备中扮演着十分重要的角色，由于其能产生活性很强的淀粉酶，在酿酒工业上常用作淀粉质原料的糖化菌，我国最早利用根霉糖化淀粉(阿明诺法)生产酒精。黑曲霉在生长过程中能够产生苹果酸、果胶寡糖、乳酸、柠檬酸、富马酸等多种有机酸，广泛应用于食品、医药、饲料以及环境等领域。因此可以采用根霉来生产果胶寡糖，用于食品与医药行业。本发明筛选到一株高产果胶寡糖黑曲霉株，对该菌进行了鉴定，对生产果胶寡糖的培养条件进行了初步研究，为微生物合成果胶寡糖工业化提供了基础。
发明内容
本发明的第一个目的是提供一种高产果胶酶的黑曲霉(Aspergillus niger)1805，该菌于2018年5月03日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为：CGMCC No.15670。
本发明的黑曲霉(Aspergillus niger)1805是从大连甘橙园的果皮中筛选培养出来。其真菌分类学表明：该菌菌丝体起初呈白色，约48-72h后菌落颜色逐渐变成灰黑色。常规方法提取真菌的18s rDNA，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，经18s rDNA序列分析表明，其属于黑曲霉(Aspergillus niger)，将其命名为黑曲霉(Aspergillus niger)1805，该菌于2018年5月03日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为：CGMCCNo.15670。
利用商业化果胶测定果胶酶活，发现黑曲霉(Aspergillus niger)1805能高产果胶酶，该酶的固体发酵酶活最高可达460IU/mg，最适反应pH值为5.5，在pH3.5～6.5之间，酶活残留率高达90-98.8％。在pH6.5时酶活为最佳pH酶活的70％。因此，该菌分泌的果胶酶在pH3.5～6.5之间具有很强的pH稳定性。反应温度为37℃、50℃与55℃时的酶活残留率分别为80.41％、98.96％与79.01％。因此，本发明的第二个目的是用该黑曲霉提供符合果胶酶，其特征在于，以黑曲霉(Aspergillus niger)1805为发酵菌株，经发酵而制得。
本发明的第三个目的是提供黑曲霉(Aspergillus niger)1805在生产果胶酶上的应用。本发明提供的黑曲霉(Aspergillus niger)1805，其能高产高酶活的、产窄分布果胶寡糖，因此在食品果胶领域具有广泛的应用。
附图说明
图1产果胶酶的黑曲霉(Aspergillus niger)1805分离方法；
图2黑曲霉(Aspergillus niger)1805的悬浮培养
图3DNA琼脂糖凝胶电泳对黑曲霉(Aspergillus niger)1805ITS1-ITS4的片段分析。电泳条件：3ul样品+1％琼脂糖凝胶。1，DNA分子marker，标记条带：100bp，250bp，500bp，750bp，1000bp，2000bp，3000bp，5000bp。750bp条带浓度为60ng/3uL，显示为亮带，其余条带浓度为30ng/3uL。电泳方向由上而下；
图4不同p H和温度对黑曲霉表达的果胶酶酶活的影响。A,不同p H对黑曲霉表达的果胶酶酶活的影响。B,不同温度对黑曲霉表达的果胶酶酶活的影响。
图5培养基中的碳氮比对本发明黑曲霉(Aspergillus niger)1805产果胶酶的酶活影响；不同碳氮比(C/N)对果胶酶活性的影响。A,C/N＝1∶1；B,C/N＝1∶2；C,C/N＝1.5∶1；D,C/N＝2∶1；E,C/N＝2.5∶1；F,C/N＝3∶1；
图6黑曲霉(Aspergillus niger)1805在果胶为唯一碳源产果胶酶的SDS-PAGE分析；1，培养0天；2，培养1天；3，培养2天；4，培养3天。该发酵上清只有一条带，并且发酵上清作用果胶后能产生窄分布的果胶寡糖，SDS-PAGE分析得到的是果胶酶；
图7黑曲霉(Aspergillus niger)1805生产较高纯度的果胶寡糖与商业化黑曲霉所产果胶寡糖的对比分析ESI-MS图。A，商业化黑曲霉降解果胶产物；B，自筛黑曲霉降解果胶产物；
图8：黑曲霉降解纯品聚半乳糖醛酸产物的ESI-MS图。A，商业化黑曲霉降解果胶产物，产物未知；B，自筛黑曲霉降解果胶产物。产物为聚半乳糖醛酸寡糖DP1-3.
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
实施例1：菌株的筛选
筛选样品为甘橙果皮，根据图1将果皮分为4部分，每一部分分为4-6块，分装到5毫升小瓶，封盖后37度培养5天。待长出黑曲霉后经过适当处理，梯度稀释涂布于果胶初筛培养基，该培养基的配方是：每升培养基中含有KH2PO4 1g，(NH4)2SO4 2.0g，MgSO4·7H2O0.2g，果胶(购自阿拉丁)10.0g，琼脂15g，余量为水，pH 6。37℃培养2～5d，挑取水解透明圈较大的菌落在PDA培养基上纯化，纯化后的菌株进行PDA斜面保存。见图1。
产果胶酶菌株发酵活力复筛：将PDA斜面保存的纯化菌株分别接种到等量的发酵复筛培养基液(马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂15～20g、蒸馏水1000ml,自然pH)，37℃，120rpm，培养6d，得到悬浮培养的黑曲霉菌球及酶液(图2)。果胶酶的具体测量方法为：准确称取果胶1g，在pH 5.5(0.2mol/L)的醋酸～醋酸钠缓冲液低速搅拌3h后定容配置成质量浓度1％的底物。取0.9mL 1％的果胶底物置于15mL刻度试管，于39℃恒温预热5min。准确加入0.1mg/mL酶液0.2mL，用秒表精确计时反应30min，立即加入2mL DNS终止反应，沸水浴5min，于540nm处测光吸收值(OD)。然后选择果胶酶活力较高的菌株进行妥善保藏。用商品化的酶作对照(和氏璧果胶酶，30万单位/g)，并计算相应的酶活。经筛选获得1株果胶酶活力极高的菌株，将该菌株命名为菌株黑曲霉1805。见图2。实施例2，菌株鉴定
采用改良CTAB法提取菌株黑曲霉1805总DNA，选择扩增真菌ITS序列的通用引物黑曲霉ITS1-ITS4的PCR片段测序引物：ITS1：5’-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3’；ITS4：5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’。对黑曲霉(Aspergillus niger)1805总DNA进行序列的扩增。在20μL的PCR反应体系中含有10×Buffer 2μL(含MgCl2，2.5mmol/L)，dNTP(10mmol/L)0.4μL，引物量为10pmol，rTaq(5U/μL)0.2μL，约50ng的模板DNA，其余体积以无菌超纯水补足。PCR扩增条件为：95℃预变性3min，94℃变性1min，52℃退火50s，72℃延伸50s，35个循环，72℃延伸10min。PCR扩增产物采用DNA凝胶回收试剂盒进行割胶回收(图3)，进行测序。经测序，其序列如SEQ ID NO.1所示。将该序列与GenBank数据库中的已知序列进行BLAST比较分析，并从数据库获得相关种属的序列，经比较分析并结合BIOLOG鉴定结果，该菌属于黑曲霉，将其命名为黑曲霉(Aspergillus niger)1805，该菌于2018年5月3日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，其保藏编号为：CGMCC No.15670。
见图3。
附录
SEQ ID NO.1.
TAAGGGGTGACCTGCGGAAGGATCATTACCGAGTGCGGGTCCTTTGGGCCCAACCTCCCATCCGTGTCTATTGTACCCTGTTGCTTCGGCGGGCCCGCCGCTTGTCGGCCGCCGGGGGGGCGCCTCTGCCCCCCGGGCCCGTGCCCGCCGGAGACCCCAACACGAACACTGTCTGAAAGCGTGCAGTCTGAGTTGATTGAATGCAATCAGTTAAAACTTTCAACAATGGATCTCTTGGTTCCGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAACTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAGTCTTTGAACGCACATTGCGCCCCCTGGTATTCCGGGGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTGCTGCCCTCAAGCCCGGCTTGTGTGTTGGGTCGCCGTCCCCCTCTCCGGGGGGACGGGCCCGAAAGGCAGCGGCGGCACCGCGTCCGATCCTCGAGCGTATGGGGCTTTGTCACATGCTCTGTAGGATTGGCCGGCGCCTGCCGACGTTTTCCAACCATTCTTTCCAGGTTGACCTCGGATCAGGTAGGGATACCCGCTGAACTTAAGCATATCAAAA
实施例3：果胶酶的制备
将黑曲霉(Aspergillus niger)1805经种子培养后活化。培养基为以1.4g/L(NH4)2SO4，2.0g/L KH2PO4，0.3g/L CaCl2，0.3g/L MgSO4，添加适量的微量元素(FeSO4·7H2O，5mg/L；CoCl2,20mg/L；MnSO4,1.6mg/L；ZnSO4，1.4mg/L)，溶剂为水。加入终浓度10g/L的果胶，起始pH 5.5。在120℃下灭菌30min。设定摇床的参数为：37℃，120rpm，培养3天后获得其发酵液即为果胶酶制剂，进行果胶酶酶活测定。
实施例4果胶酶的酶活力测定
准确称取果胶1g，在pH 5.5(0.2mol/L)的醋酸～醋酸钠缓冲液低速搅拌3h后定容配置成质量浓度1％的底物。取0.9mL 1％的果胶底物置于15mL刻度试管，于39℃恒温预热5min。准确加入适当稀释的酶液0.2mL，用秒表精确计时反应30min，立即加入2mL DNS终止反应，沸水浴5min，于540nm处测光吸收值(OD)。然后选择果胶酶活力较高的菌株进行妥善保藏。用商品化的酶作对照(和氏璧果胶酶，30万单位/g)，并计算相应的酶活。经测定，步骤1得到的黑曲霉(Aspergillus niger)1805产的果胶酶的活力达到460IU/mg，远高于商业化酶的活性(300IU/mg)。酶活定义：在1min内催化产生1μmol还原木糖的量定义为一个酶单位。
实施例5果胶酶的酶学性质的测定
按上述测定方法，其它条件不变的情况下，调节缓冲液到不同的pH(3，3.5，4.5，5，5.5.，6，6.5和7)、不同的温度(30，35，40，45和50℃)进行酶活测定反应，以测得最高酶活为100％，其它pH值下或者温度下的酶活与最高酶活相除之后乘以100％即为相对酶活。利用相应的缓冲液进行梯度稀释，在50℃下测定最佳pH。在最佳的pH条件下，设定不同温度以测定酶的最佳温度。结果表明，本发明的黑曲霉(Aspergillus niger)1805产的果胶酶的最佳反应pH为5.5(图4A)，且在pH 5.5的条件下保持酶活稳定，最适反应温度为45℃(图4B)。该酶在pH 3.5～6.5之间具有优良的pH稳定性，其相对酶活为90.2％～99.4％。
实施例6发酵抑制物对于果胶酶的作用
单一的发酵抑制物对黑曲霉(Aspergillus niger)1805产果胶酶的抑制作用：不同的发酵抑制物对果胶酶的抑制作用不同。在乙醇浓度为10g/L时，果胶酶的酶活残留率为23％。在乙酸浓度为10g/L时，果胶酶的酶活残留率为42％。5-羟甲基糠醛浓度为1g/L时，果胶酶的残留率为98％。香草醛的浓度为1g/L时，果胶酶的残留率分别为78％。阿魏酸的浓度为1g/L时，果胶酶的残留率为72％。因此，本发明的果胶酶对于发酵抑制物具有良好的耐受性。本发明的果胶酶的对抑制物的耐受性与现有技术中的果胶酶完全不同，这种耐受性的果胶酶未见有过报道。
实施例7不同碳氮比(C/N)对黑曲霉表达果胶酶的活性的影响
将黑曲霉(Aspergillus niger)1805经种子培养后活化。培养基为以5-15g/L(NH4)2SO4，2.0g/L KH2PO4，0.3g/L CaCl2，0.3g/LMgSO4，添加适量的微量元素(FeSO4·7H2O，5mg/L；CoCl2,20mg/L；MnSO4,1.6mg/L；ZnSO4，1.4mg/L)，溶剂为水。加入终浓度5-10g/L(此处为10g/L)的果胶，起始pH 5.5。在120℃下灭菌30min。设定摇床的参数为：37℃，120rpm，培养3天后获得其发酵液即为果胶酶制剂，进行果胶酶酶活测定。结果显示当C/N＝3时酶活产量最高(图5)。
实施例8果胶诱导本专利黑曲霉表达果胶酶的分析
将黑曲霉(Aspergillus niger)1805经种子培养后活化。培养基为以1.4g/L(NH4)2SO4，2.0g/L KH2PO4，0.3g/L CaCl2，0.3g/L MgSO4，添加适量的微量元素(FeSO4·7H2O，5mg/L；CoCl2,20mg/L；MnSO4,1.6mg/L；ZnSO4，1.4mg/L)，溶剂为水。加入终浓度10g/L的果胶，起始pH 5.5。在120℃下灭菌30min。设定摇床的参数为：37℃，120rpm，培养3天后获得其发酵液。取发酵液20L进行SDS-PAGE分析，发现果胶诱导表达了单一的果胶酶，分子量在40kDa左右(图6)。
实施例9黑曲霉发酵降解果胶产果胶寡糖的产物分析
我们采用ESI-MS对黑曲霉降解果胶的产物进行分析。反应体系为500μL，将10μL发酵液与1mL1％的果胶溶液于37℃条件下反应72h，沸水水浴10min终止反应，12000rpm离心20min，取上清液，采用Sevage试剂除去反应体系中的蛋白，步骤如下：(1)500μL反应体系中加入250μL事先配置好的Sevage试剂，振荡混匀30min。(2)将混合体系12000rpm 20min离心，小心吸取上清，重复第一步三次，直至体系中没有蛋白存在。将除去蛋白的酶反应体系，利用安捷伦公司生产的Carbograph column除去反应体系中的盐类，冷冻干燥后用1mLl甲醇-水混合液(1∶1，v/v)溶解备用。产物在正离子模式下检测，质谱条件设置为离子源电压4.5kV，毛细管温度275～300℃，tube lens电压250V，鞘气流速30arb，扫描范围150～2000m/z。以商业化果胶为底物，质谱结果分析商业化黑曲霉产物以3到9寡糖为主(图7A)，产物较杂。本专利分离的黑曲霉产物以5到8寡糖为主(图7B)，聚合度分布窄，产物纯度高，减少了低聚寡糖的成分。以纯聚半乳糖醛酸为底物，质谱结果分析商业化黑曲霉产物未知(图8A)，估计底物未被降解。本专利分离的黑曲霉产物以1到3寡糖为主(图8B)，聚合度分布窄，产物纯度高。
上述详细说明是针对本发明的可行实施例的具体说明，该实施例并非用以限制本发明的专利范围，凡未脱离本发明的等效实施或变更，均应包含于本发明的专利范围中。
序列表
<110> 中国科学院大连化学物理研究所
<120> 一种高产窄分布果胶寡糖的黑曲霉和果胶酶及其应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 588
<212> DNA
<213> 黑曲霉(Aspergillus niger)
<400> 1
taaggggtga cctgcggaag gatcattacc gagtgcgggt cctttgggcc caacctccca 60
tccgtgtcta ttgtaccctg ttgcttcggc gggcccgccg cttgtcggcc gccggggggg 120
cgcctctgcc ccccgggccc gtgcccgccg gagaccccaa cacgaacact gtctgaaagc 180
gtgcagtctg agttgattga atgcaatcag ttaaaacttt caacaatgga tctcttggtt 240
ccggcatcga tgaagaacgc agcgaaatgc gataactaat gtgaattgca gaattcagtg 300
aatcatcgag tctttgaacg cacattgcgc cccctggtat tccggggggc atgcctgtcc 360
gagcgtcatt gctgccctca agcccggctt gtgtgttggg tcgccgtccc cctctccggg 420
gggacgggcc cgaaaggcag cggcggcacc gcgtccgatc ctcgagcgta tggggctttg 480
tcacatgctc tgtaggattg gccggcgcct gccgacgttt tccaaccatt ctttccaggt 540
tgacctcgga tcaggtaggg atacccgctg aacttaagca tatcaaaa 588

Claims (9)

1.一种黑曲霉，其为黑曲霉(Aspergillus niger)1805，其保藏号为：CGMCC No.15670。
2.一种权利要求1所述的黑曲霉，其特征在于：该黑曲霉由甘橙的果皮分离得到。
3.一种权利要求1所述的黑曲霉的应用，其特征在于：其发酵能产生的果胶酶。
4.根据权利要求3所述的黑曲霉的应用，其特征在于：经SDS-PAG分析其发酵能产生单一果胶酶条带，该酶在pH3.5-6.5之间具有较强稳定性。
5.一种权利要求3或4所述黑曲霉发酵获得的果胶酶，其特征在于：该酶在pH3.5-6.5之间具有较强稳定性，可耐受果胶发酵产物导致的酸性环境。
6.一种权利要求1或2所述的黑曲霉或权利要求5所述的果胶酶的应用，其特征在于：果胶经该黑曲霉发酵或经果胶酶酶解可制得聚合度窄分布的果胶寡糖；DP5至DP8为果胶寡糖的主要成份，含量可占总寡糖产物的80％以上。
7.一种权利要求6所述的应用，黑曲霉发酵或果胶酶的诱导底物为果胶，包括苹果果胶，甘橙果胶，桔子果胶和富含果胶的其它水果果胶中的一种或二种以上。
8.一种权利要求6或7所述的应用，黑曲霉发酵或果胶酶诱导培养基中的C:N>＝3:1到10：1。
9.一种权利要求6-8任一所述应用获得的聚合度窄分布寡糖的应用，其特征在于，该寡糖可促进植物生长、提高植物免疫力，作为植物生长调节剂。
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Agnan Marie Michel Combo 等.Enzymatic production of pectic oligosaccharides from polygalacturonic acid with commercial pectinase preparations..《food and bioproducts processing》.2012,第90卷第588-596页. *

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