CN110699291A - 一种具有降解硫化物性能的木糖氧化无色杆菌及其应用 - Google Patents

一种具有降解硫化物性能的木糖氧化无色杆菌及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN110699291A
CN110699291A CN201911065738.5A CN201911065738A CN110699291A CN 110699291 A CN110699291 A CN 110699291A CN 201911065738 A CN201911065738 A CN 201911065738A CN 110699291 A CN110699291 A CN 110699291A
Authority
CN
China
Prior art keywords
sulfide
culture
fermentation
achromobacter xylosoxidans
achromobacter
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201911065738.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN110699291B (zh
Inventor
陈浚
柳欢
姚佳超
朵延凯
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zhejiang Shuren University
Original Assignee
Zhejiang Shuren University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zhejiang Shuren University filed Critical Zhejiang Shuren University
Priority to CN201911065738.5A priority Critical patent/CN110699291B/zh
Publication of CN110699291A publication Critical patent/CN110699291A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN110699291B publication Critical patent/CN110699291B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/025—Achromobacter
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C02—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F3/00—Biological treatment of water, waste water, or sewage
    • C02F3/34—Biological treatment of water, waste water, or sewage characterised by the microorganisms used
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C02—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F2101/00—Nature of the contaminant
    • C02F2101/10—Inorganic compounds
    • C02F2101/101—Sulfur compounds

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
  • Hydrology & Water Resources (AREA)
  • Environmental & Geological Engineering (AREA)
  • Water Supply & Treatment (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Purification Treatments By Anaerobic Or Anaerobic And Aerobic Bacteria Or Animals (AREA)

Abstract

本发明公开了一株新菌株—木糖氧化无色杆菌(Achromobacter xylosoxidans)AX及其降解硫化物的应用，所述木糖氧化无色杆菌AX保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国，武汉，武汉大学，保藏编号：CCTCC NO：M 2019483，保藏日期2019年6月24日；本发明提供了一种具有硫化物降解性能的木糖氧化无色杆菌AX，该菌株在12h内对初始浓度为100mg·L‑1的Na2S降解率达到94.4％，该降解菌的发现对工业废水中硫化物的高效净化具有重要意义。

Description

一种具有降解硫化物性能的木糖氧化无色杆菌及其应用
技术领域
本发明属于环境污染物生物处理技术领域，具体涉及一种具有降解硫化物性能的木糖氧化无色杆菌(Achromobacter xylosoxidans AX)及其应用。
背景技术
工农业废水中的硫化物是造成水体发黑发臭的重要原因，该类废水的排放量大，污染负荷高，毒性大，且会对构筑物的正常运转产生很大影响。含硫化物的废水若不经处理直接排入水体将会危害水生生物，并产生潜在腐蚀性。废水中会有硫化氢气体逸出，这是一种无色的有毒气体，具有强烈的臭鸡蛋气味，不但会引起人的神经中毒，而且能与大气层的臭氧反应生成硫酸，形成酸雨，会对环境造成较大的危害。因此，严格控制硫化物的排放以及研究去除硫化物的处理工艺显得尤为迫切。
目前，国内外处理恶臭硫化物废水的方法很多，依其弱酸性和强还原性而进行脱硫可分为物理法、化学法、生物法。每一种方法都有其各自的适用范围和特点，要根据恶臭物质的来源、浓度、性质及其处理要求确定脱臭方法，在实践中常常采用几种方法结合来处理恶臭气体。与传统物理化学方法比较，生物净化法可以使污染物得到充分地降解和转化，且工艺设备简单，管理维护方便，能耗少，运行费用低，二次污染小，近几年来备受青睐。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有降解硫化物性能的木糖氧化无色杆菌AX及其应用。
本发明采用如下技术方案：一种具有降解硫化物性能的木糖氧化无色杆菌,该木糖氧化无色杆菌命名为AX，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国，武汉，武汉大学，保藏编号：CCTCC NO：M 2019483，保藏日期2019年6月24。所述木糖氧化无色杆菌AX菌株的特征为：菌落颜色为黄色，菌落呈小型单个菌落，圆形，凸起，外缘圆整，半透明，表面湿润单个，短杆状，该菌株16S rDNA序列如SEQ ID No.1所示。
一种所述木糖氧化无色杆菌在生物降解硫化物中的应用。
进一步地，将木糖氧化无色杆菌经发酵培养获得的发酵液即含菌悬液，按所述发酵液体积的5％-10％接种至硫化物选择培养基中，得到硫化物降解液。在20-50℃、120～160rpm条件下培养，降解硫化物；所述硫化物液体选择培养基的组成为：硫源100-500mg·L-1，碳源3800-4000mg·L-1，氮源480-500mg·L-1，KH2PO4 1100-1200mg·L-1，K2HPO4 1100-1200mg·L-1，MgCl2·6H2O 180-200mg·L-1，柠檬酸铁5-10mg·L-1，溶剂为水，pH值5.0-9.0。
进一步地，所述碳源为葡萄糖、蔗糖、甘油、乙醇或乙酸钠。
进一步地，所述氮源为氯化铵、醋酸铵、牛肉膏、蛋白胨或硝酸钠。
进一步地，所述硫化物的浓度为100-500mg·L-1。
进一步地，所述木糖氧化无色杆菌处理废水中硫化物以S2-、HS-形式存在。
进一步地，所述木糖氧化无色杆菌经发酵培养获得的发酵液即含菌悬液通过以下方法制备：
(1)斜面培养：将木糖氧化无色杆菌AX接种至斜面培养基，30℃培养7天，获得菌体斜面；所述斜面培养基组成为：蛋白胨10g·L-1，酵母粉5g·L-1，NaCl 10g·L-1，溶剂为水，pH值7.0～7.5，琼脂15～18g·L-1。
(2)种子培养：从斜面菌体挑取菌落接种至种子培养基，30℃培养1天，获得种子液；所述种子培养基组成为：蛋白胨10g·L-1，酵母粉5g·L-1，NaCl 10g·L-1，溶剂为水，pH值7.0～7.5；
(3)发酵培养：将种子液以体积浓度5～10％的接种量接种至发酵培养基，30℃培养10～12h，获得发酵培养液；所述发酵培养基组成为：蛋白胨10g·L-1，酵母粉5g·L-1，NaCl 10g·L-1，溶剂为水，pH值7.0～7.5。
本发明的有益效果主要体现在：本发明提供了一种高效、耐热能力强的木糖氧化无色杆菌AX及其硫化物降解的应用，该菌株在12h内能对初始浓度为100mg·L-1的Na2S降解效率达到94.4％，该降解菌对工业废水中硫化物的高效净化具有重要意义。
附图说明
图1为菌株AX的透射电镜照片：A为菌体形态照片和B革兰氏染色照片；
图2为菌株AX的系统发育树图；
图3不同碳源下菌株AX对硫化物降解性能比较；
图4不同氮源下菌株AX对硫化物降解性能比较；
图5不同pH下菌株AX对硫化物降解性能比较；
图6不同底物浓度下菌株AX对硫化物降解性能比较；
图7不同温度下菌株AX对硫化物降解性能比较。
具体实施方式
以下面结合具体实施例对本发明进行进一步说明，但本发明的保护范围并不仅限于此。
实施例1：木糖氧化无色杆菌株AX(Achromobacter xylosoxidans AX)的分离、纯化及其鉴定
(1)Achromobacter xylosoxidans AX的分离及纯化
从浙江卫星能源有限公司废水处理池污泥中筛选木糖氧化无色杆菌株AX，具体步骤如下：
取浙江卫星能源有限公司污水中污泥，静置24h后，滤去上清液，取下层污泥10mL接种于含100mL硫化物液体选择培养基250mL培养瓶中，培养温度30℃，160rpm振荡培养24h，将菌液离心分离，收集菌体，用无菌水配制成一定浓度的菌液。将所得到的菌液用Na2S固体选择培养基经多次平板划线分离纯化，得到单菌落即还原菌种，记为菌株AX。
配制硫化物液体选择培养基，配制方法如下：硫源100mg·L-1，葡萄糖5g·L-1，KH2PO4 1200mg·L-1，K2HPO4·3H2O 1570mg·L-1，MgCl2·6H2O 200mg·L-1，NH4Cl 1000mg·L-1，柠檬酸铁10mg·L-1，溶剂为水，pH值7.5～8.0，121℃灭菌20min。
(2)菌株AX的鉴定
a、菌株AX的生理生化特征
菌落颜色为黄色，菌落呈小型单个菌落，圆形，凸起，外缘圆整，半透明，表面湿润单个，短杆状。透射电镜下观察该菌体的形态为杆菌(图1中A所示)，具有鞭毛，革兰氏染色阴性(图1中B所示)，氧化酶阳性，接触酶阳性。它生长最适pH值为8.0，最适温度为40℃。
b、菌株AX的16S rRNA序列分析
通过16S rRNA序列分析和生理生化实验鉴定，确定菌株AX为Achromobacterxylosoxidans，具体步骤如下：
采用3S柱离心式环境样品DNA回收试剂盒(V2.2，上海申能博彩生物科技有限公司)提取和纯化菌株AX的DNA，4℃保存。选用细菌的通用引物F27和1492R对纯化的DNA进行PCR扩增，引物序列分别为：
F27：5’-AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG-3’
1492R：5’-GGT TAC CTT GTT ACG ACT T-3’
PCR反应体系为(50μL)：模板DNA 1.75μL，引物F27和引物R1492各1μL，MgCl2(25mmol·L-1)3μL，Taq酶(5U·μL-1)0.25μL，10×PCR缓冲液5μL，dNTP(2.5mmol·L-1)4μL，重蒸水34μL。
PCR反应程序设定为：先94℃预变性4min；然后94℃变性1min，59℃退火1min，72℃延伸1.5min，循环35个周期；然后72℃延伸10min；最后4℃保持10min。将PCR产物进行测序(浙江天科生物科技有限公司)，测序结果见序列SEQ ID NO：1所示。
将AX的16S rRNA序列上传到Genbank，获得Genbank的登录号MN108144，同时同Genbank中的基因序列进行同源性比较，发现其属于Achromobacter属，与Achromobacterxylosoxidans(CP006958)同源性最高，达到92％，图2为该菌株的系统发育树图。为了进一步确定鉴定结果的可靠性，经过生理生化实验，最终确定菌株AX属于Achromobacterxylosoxidans，因此，将该菌株命名为木糖氧化无色杆菌(Achromobacter xylosoxidans)AX。
实施例2木糖氧化无色杆菌AX发酵培养液
(1)斜面培养：将木糖氧化无色杆菌AX接种至斜面培养基，30℃培养7天，获得菌体斜面；所述斜面培养基组成为：蛋白胨10g·L-1，酵母粉5g·L-1，NaCl 10g·L-1，溶剂为水，通过1mol·L-1盐酸和1mol·L-1氢氧化钠调节pH值为7.0，琼脂粉15g·L-1。
(2)种子培养：从菌体斜面挑取菌落接种至种子培养基，30℃培养1天，获得种子液；所述种子培养基组成为：蛋白胨10g·L-1，酵母粉5g·L-1，NaCl 10g·L-1，溶剂为水，通过1mol·L-1盐酸和1mol·L-1氢氧化钠调节pH值为7.0。
(3)发酵培养：将种子液以体积浓度5％的接种量接种至发酵培养基，30℃培养12h，获得发酵培养液即为含菌悬液；所述发酵培养基中各组分的浓度为：蛋白胨10g·L-1，酵母粉5g·L-1，NaCl 10g·L-1，溶剂为水，通过1mol·L-1盐酸和1mol·L-1氢氧化钠调节pH值为7.0。
实施例3木糖氧化无色杆菌AX发酵培养液
(1)斜面培养：将木糖氧化无色杆菌AX接种至斜面培养基，30℃培养7天，获得菌体斜面；所述斜面培养基浓度组成为：蛋白胨10g·L-1，酵母粉5g·L-1，NaCl 10g·L-1，溶剂为水，通过1mol·L-1盐酸和1mol·L-1氢氧化钠调节pH值为7.5，琼脂粉18g·L-1。
(2)种子培养：从菌体斜面挑取菌落接种至种子培养基，30℃培养1天，获得种子液；所述种子培养基组成为：蛋白胨10g·L-1，酵母粉5g·L-1，NaCl 10g·L-1，溶剂为水，通过1mol·L-1盐酸和1mol·L-1氢氧化钠调节pH值为7.5。
(3)发酵培养：将种子液以体积浓度1％的接种量接种至发酵培养基，30℃培养10h，获得发酵培养液即为含菌悬液；所述发酵培养基中各组分的浓度为：蛋白胨10g·L-1，酵母粉5g·L-1，NaCl 10g·L-1，溶剂为水，通过1mol·L-1盐酸和1mol·L-1氢氧化钠调节pH值为7.5。
由实施例2-实施例3培养得到的木糖氧化无色杆菌AX发酵培养液，木糖氧化无色杆菌在LB液体培养基中培养12小时，其OD600为1.3，说明具有较高的活性。
实施例4：Achromobacter xylosoxidans AX硫化物降解性能检测
(1)考察不同碳源下木糖氧化无色杆菌AX对硫化物的降解性能
在不同碳源下实施木糖氧化无色杆菌降解硫化物的实验，结果表明最佳碳源为葡萄糖，具体实施步骤如下：
以硫化钠为唯一硫源(浓度100mg·L-1)，按体积浓度5％接种量将OD600为1.2的发酵含菌悬液培养液(实施例2方法制备)接种于不同碳源的Na2S液体选择培养基A1、B1、C1、D1、E1，其中碳源分别为葡萄糖、蔗糖、乙醇、甘油和乙酸钠，所述液体选择培养基组成为：碳源均为3800mg·L-1，硫源100mg·L-1，氮源480mg·L-1，KH2PO4 1100mg·L-1，K2HPO41100mg·L-1，MgCl2·6H2O 180mg·L-1，柠檬酸铁5mg·L-1，溶剂为水，通过1mol·L-1盐酸和1mol·L-1氢氧化钠调节pH值为7.0。在30℃，160rpm振荡培养12h，获得培养液，采用亚甲基蓝分光光度法测定硫化物的浓度，即取3mL培养液作为样品，先将样品通过孔径为0.22μm的细菌过滤器过滤去除微生物，然后取滤液用紫外分光光度计测出其在665nm波长下的吸光度值。
碳源为微生物的生长提供重要的能源，并构成微生物的细胞物质。不同的碳源因其结构和分子量不同，对微生物还原的影响程度也不尽相同。结果如图3所示，碳源为葡萄糖时，12h菌株AX对硫化物的降解率达到90.64％，其他碳源也能促进菌株AX对硫化物的降解，但降解效果不如葡萄糖，原因为葡萄糖是小分子物质，易被细菌吸收利用，葡萄糖作为碳源可能更适合脱硫酶的合成，从而使降解率较大。其它碳源可能不利于菌体对其吸收利用，导致降解效率偏低。
2.考察不同氮源下木糖氧化无色杆菌AX对硫化物的降解性能
在不同氮源下实施木糖无色杆菌降解硫化物的实验，结果表明其最佳氮源为氯化铵，具体实施方案如下：
以硫化钠为唯一硫源(浓度500mg·L-1)，按体积浓度5％接种量将OD600为1.2的发酵含菌悬液(实施例3方法制备)接种于不同氮源的Na2S液体选择培养基，其中氮源分别为氯化铵、醋酸铵、牛肉膏、蛋白胨、硝酸钠，所述液体选择培养基的组成为：氮源均为480mg·L-1，碳源均为4000mg·L-1，硫源500mg·L-1，，KH2PO4 1200mg·L-1，K2HPO4 1200mg·L-1，MgCl2·6H2O 200mg·L-1，柠檬酸铁10mg·L-1，溶剂为水，通过1mol·L-1盐酸和1mol·L-1氢氧化钠调节pH值为9。在30℃，160rpm振荡培养12h，获得培养液，采用亚甲基蓝分光光度法测定硫化物的浓度，即取3mL培养液作为样品，先将样品通过孔径为0.22μm的细菌过滤器过滤去除微生物，然后取滤液用紫外分光光度计测出其在665nm波长下的吸光度值。
结果如图4所示，氮源为氯化铵时，12h菌株AX对硫化物的降解率达到91％，其他氮源也能促进菌株AX对硫化物的降解，但降解效果不如氯化铵，原因是：氯化铵可能更利于脱硫酶的合成。蛋白胨、牛肉膏属于有机氮源，文献曾提及：有机氮源更有利于细胞的生长，但是不一定有利于酶的合成。
3.考察不同pH下木糖氧化无色杆菌AX对硫化物的降解性能
在不同pH下实施木糖氧化无色杆菌AX对硫化物的降解实验，结果表明其最佳pH为8.0，具体实施方案如下：
以NaHS为唯一硫源(浓度200mg·L-1)，按体积浓度5％接种量将OD600为1.2的发酵含菌悬液(实施例2方法制备)接种于不同pH的NaHS液体选择培养基，所述液体选择培养基的组成为：氮源为500mg·L-1，碳源均为3800mg·L-1，硫源200mg·L-1，，KH2PO4 1200mg·L-1，K2HPO4 1200mg·L-1，MgCl2·6H2O 200mg·L-1，柠檬酸铁10mg·L-1，溶剂为水，通过1mol·L-1盐酸和1mol·L-1氢氧化钠调节液体选择培养基的pH值分别为5.0、6.0、7.0、8.0和9.0。在30℃，160rpm振荡培养12h，获得培养液，采用亚甲基蓝分光光度法测定硫化物的浓度，即取3mL培养液作为样品，先将样品通过孔径为0.22μm的细菌过滤器过滤去除微生物，然后取滤液用紫外分光光度计测出其在665nm波长下的吸光度值。
结果如图5所示，pH值为8.0时，12h菌株AX对硫化物的降解率达到90.3％。，其他PH也能促进菌株AX对硫化物的降解，但降解效果不如PH为8时的培养基的降解效果，原因为pH为8时，更有利于菌株的生长，当细菌量较大时，降解效率相应的会较好，但是在碱性条件下，由于中和作用导致大量的S在液相中积累，菌体生长被抑制，导致降解效率较低。
4.考察不同硫化物浓度下木糖氧化无色杆菌AX对硫化物的降解性能
在不同Na2S浓度下实施木糖氧化无色杆菌AX对硫化物的降解实验，具体实施方案如下：
以硫化钠为唯一硫源，按体积浓度5％接种量将OD600为1.2的发酵含菌悬液(实施例3方法制备)接种于不同Na2S浓度的液体选择培养基，所述Na2S浓度分别为100mg·L-1，150mg·L-1，200mg·L-1，300mg·L-1，400mg·L-1，500mg·L-1，所述液体选择培养基的组成均为：氮源为480mg·L-1，碳源均为4000mg·L-1，KH2PO4 1200mg·L-1，K2HPO4 1200mg·L-1，MgCl2·6H2O 200mg·L-1，柠檬酸铁10mg·L-1，溶剂为水，通过1mol·L-1盐酸和1mol·L-1氢氧化钠调节液体选择培养基的pH值分别为8.0。在30℃，160rpm振荡培养12h，获得培养液，采用亚甲基蓝分光光度法测定硫化物的浓度，即取3mL培养液作为样品，先将样品通过孔径为0.22μm的细菌过滤器过滤去除微生物，然后取滤液用紫外分光光度计测出其在665nm波长下的吸光度值。
结果如图6所示，在12h后菌株AX对高浓度硫化物的降解率达到了52％。
5.考察不同温度下木糖氧化无色杆菌AX对硫化物的降解性能
在不同温度下实施木糖氧化无色杆菌AX对硫化物的降解实验，结果表明在40℃下菌株AX对硫化物的降解率最高，具体实施方案如下：
以硫化钠为唯一硫源，考察不同温度下木糖氧化无色杆菌AX对硫化物的降解性能，按体积浓度5％接种量将OD600为1.2的含菌悬液(实施例2方法制备)接种于Na2S液体选择培养基，所述液体选择培养基的浓度组成均为：氮源为480mg·L-1，碳源均为4000mg·L-1，KH2PO4 1200mg·L-1，K2HPO4 1200mg·L-1，MgCl2·6H2O 200mg·L-1，柠檬酸铁10mg·L-1，溶剂为水，通过1mol·L-1盐酸和1mol·L-1氢氧化钠调节液体选择培养基的pH值分别为8.0。于不同温度下，分别为20℃、25℃、30℃、35℃、40℃和50℃，160rpm振荡培养12h，获得培养液，采用亚甲基蓝分光光度法测定硫化物的浓度，即取3mL培养液作为样品，先将样品通过孔径为0.22μm的细菌过滤器过滤去除微生物，然后取滤液用紫外分光光度计测出其在665nm波长下的吸光度值。
结果如图7所示，在40℃下，12h后菌株AX对硫化物的降解率达到了94.4％。
序列表
<110> 浙江树人大学
<120> 一种具有降解硫化物性能的木糖氧化无色杆菌及其应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1379
<212> DNA
<213> Achromobacter xylosoxidans
<400> 1
tggttcggga gcacggactt cggtctggtg gcgattggcg aacgggtgag taatgtatcg 60
gaacgtgccc agtagcgggg gataactacg cgaaagcgta gctaataccg catacgccct 120
acgggggaaa gcaggggatc gcaagacctt gcactattgg agcggccgat atcggattag 180
ctagttggtg gggtaacggc tcaccaaggc gacgatccgt agctggtttg agaggacgac 240
cagccacact gggactgaga cacggcccag actcctacgg gaggcagcag tggggaattt 300
tggacaatgg gggaaaccct gatccagcca tcccgcgtgt gcgatgaagg ccttcgggtt 360
gtaaagcact tttggcagga aagaaacgtc gcgggttaat accccgcgaa actgacggta 420
cctgcagaat aagcaccggc taactacgtg ccagcagccg cggtaatacg tagggtgcaa 480
gcgttaatcg gaattactgg gcgtaaagcg tgcgcaggcg gttcggaaag aaagatgtga 540
aatcccagag cttaactttg gaactgcatt tttaactacc gggctagagt gtgtcagagg 600
gaggtggaat tccgcgtgta gcagtgaaat gcgtagatat gcggaggaac accgatggcg 660
aaggcagcct cctgggataa cactgacgct catgcacgaa agcgtgggga gcaaacagga 720
ttagataccc tggtagtcca cgccctaaac gatgtcaact agctgttggg gtcttcggac 780
cttggtagcg cagctaacgc gtgaagttga ccgcctgggg agtacggtcg caagattaaa 840
actcaaagga attgacgggg acccgcacaa gcggtggatg atgtggatta attcgatgca 900
acgcgaaaaa ccttacctac ccttgacatg tctggaatgc cgaagagatt tggcagtgct 960
cgcaagagaa ccggaacaca ggtgctgcat ggctgtcgtc agctcgtgtc gtgagatgtt 1020
gggttaagtc ccgcaacgag cgcaaccctt gtcattagtt gctacgaaag ggcactctaa 1080
tgagactgcc ggtgacaaac cggaggaagg tggggatgac gtcaagtcct catggccctt 1140
atgggtaggg cttcacacgt catacaatgg tcgggacaga gggtcgccaa cccgcgaggg 1200
ggagccaatc ccagaaaccc gatcgtagtc cggatcgcag tctgcaactc gactgcgtga 1260
agtcggaatc gctagtaatc gcggatcagc atgtcgcggt gaatacgttc ccgggtcttg 1320
tacacaccgc ccgtcacacc atgggagtgg gccatccaga agttccagcc tcaccacgt 1379

Claims (8)

1.一种具有降解硫化物性能的木糖氧化无色杆菌，该木糖氧化无色杆菌命名为AX，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC NO：M 2019483，保藏日期2019年6月24日。
2.一种权利要求1所述木糖氧化无色杆菌在生物降解硫化物中的应用。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，将木糖氧化无色杆菌经发酵培养获得的发酵液即含菌悬液，按所述发酵液体积的5％-10％接种至硫化物选择培养基中，得到硫化物降解液。在20-50℃、120～160rpm条件下培养，降解硫化物；所述硫化物液体选择培养基的组成为：硫源100-500mg·L-1，碳源3800-4000mg·L-1，氮源480-500mg·L-1，KH2PO4 1100-1200mg·L-1，K2HPO4 1100-1200mg·L-1，MgCl2·6H2O 180-200mg·L-1，柠檬酸铁5-10mg·L-1，溶剂为水，pH值5.0-9.0。
4.如权利要求3所述应用，其特征在于，所述碳源为葡萄糖、蔗糖、甘油、乙醇或乙酸钠。
5.如权利要求3所述应用，其特征在于，所述氮源为氯化铵、醋酸铵、牛肉膏、蛋白胨或硝酸钠。
6.如权利要求3所述应用，其特征在于，所述硫化物的浓度为100-500mg·L-1。
7.如权利要求3所述应用，其特征在于，所述木糖氧化无色杆菌处理废水中硫化物以S2-、HS-形式存在。
8.如权利要求3所述应用，其特征在于，所述木糖氧化无色杆菌经发酵培养获得的发酵液即含菌悬液通过以下方法制备：
(1)斜面培养：将木糖氧化无色杆菌AX接种至斜面培养基，30℃培养7天，获得菌体斜面；所述斜面培养基组成为：蛋白胨10g·L-1，酵母粉5g·L-1，NaCl 10g·L-1，溶剂为水，pH值7.0～7.5，琼脂15～18g·L-1。
(2)种子培养：从斜面菌体挑取菌落接种至种子培养基，30℃培养1天，获得种子液；所述种子培养基组成为：蛋白胨10g·L-1，酵母粉5g·L-1，NaCl 10g·L-1，溶剂为水，pH值7.0～7.5；
(3)发酵培养：将种子液以体积浓度5～10％的接种量接种至发酵培养基，30℃培养10～12h，获得发酵培养液；所述发酵培养基组成为：蛋白胨10g·L-1，酵母粉5g·L-1，NaCl10g·L-1，溶剂为水，pH值7.0～7.5。
CN201911065738.5A 2019-11-04 2019-11-04 一种具有降解硫化物性能的木糖氧化无色杆菌及其应用 Active CN110699291B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911065738.5A CN110699291B (zh) 2019-11-04 2019-11-04 一种具有降解硫化物性能的木糖氧化无色杆菌及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911065738.5A CN110699291B (zh) 2019-11-04 2019-11-04 一种具有降解硫化物性能的木糖氧化无色杆菌及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN110699291A true CN110699291A (zh) 2020-01-17
CN110699291B CN110699291B (zh) 2021-04-16

Family

ID=69204937

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201911065738.5A Active CN110699291B (zh) 2019-11-04 2019-11-04 一种具有降解硫化物性能的木糖氧化无色杆菌及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110699291B (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109576170A (zh) * 2018-08-30 2019-04-05 常州大学 一株高效硫氧化菌在含硫化黑废水处理中的应用
CN111534458A (zh) * 2020-04-13 2020-08-14 浙江工业大学 无色杆菌tbc-1及其在降解1,3,6,8-四溴咔唑中的应用
CN115141769A (zh) * 2022-06-21 2022-10-04 湖南省蔬菜研究所 提高无色杆菌或肠杆菌的菌体丰度的培养基及其发酵方法

Citations (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2005040130A (ja) * 2003-07-10 2005-02-17 Mitsui Chemicals Inc 新規グルコン酸脱水酵素
CN101914467B (zh) * 2010-07-02 2011-12-07 郑州大学 一株木糖氧化无色杆菌菌株及其应用
WO2012000162A1 (zh) * 2010-06-28 2012-01-05 北京大学 一步去除废水中碳氮污染物的方法
CN102453678A (zh) * 2010-10-26 2012-05-16 中国科学院生态环境研究中心 一种修复石油污染盐碱土壤的微生物复合菌剂
CN102583775A (zh) * 2012-02-14 2012-07-18 福建微水环保技术有限公司 一种复合微生物制剂及其在处理废水中的应用
JP5094970B2 (ja) * 2008-05-29 2012-12-12 日本たばこ産業株式会社 植物体中の重金属含量を低減する細菌
CN102533623B (zh) * 2012-03-06 2013-05-22 北京大学 兼具脱氮除磷功能的木糖氧化无色杆菌及其应用
CN103122332A (zh) * 2013-02-27 2013-05-29 中蓝连海设计研究院 木糖氧化无色杆菌木糖氧化亚种lh-n25与异养硝化好氧反硝化微生物菌剂及制备方法与用途
CN103432900A (zh) * 2013-09-07 2013-12-11 中蓝连海设计研究院 一种微生物菌剂在恶臭气体污染治理中的用途
CN104195090A (zh) * 2014-09-12 2014-12-10 范鸿仁 一种复合微生物制剂及其在废水处理中的应用
CN104232522A (zh) * 2014-08-28 2014-12-24 广西科学院 一种产羧甲基纤维素酶的Achromobacter xylosoxidans菌株
CN104986867A (zh) * 2015-06-23 2015-10-21 四川省畜牧科学研究院 一种改良养殖池塘底泥环境复合菌剂及其制作方法和用途

Patent Citations (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2005040130A (ja) * 2003-07-10 2005-02-17 Mitsui Chemicals Inc 新規グルコン酸脱水酵素
JP5094970B2 (ja) * 2008-05-29 2012-12-12 日本たばこ産業株式会社 植物体中の重金属含量を低減する細菌
WO2012000162A1 (zh) * 2010-06-28 2012-01-05 北京大学 一步去除废水中碳氮污染物的方法
CN101914467B (zh) * 2010-07-02 2011-12-07 郑州大学 一株木糖氧化无色杆菌菌株及其应用
CN102453678A (zh) * 2010-10-26 2012-05-16 中国科学院生态环境研究中心 一种修复石油污染盐碱土壤的微生物复合菌剂
CN102583775A (zh) * 2012-02-14 2012-07-18 福建微水环保技术有限公司 一种复合微生物制剂及其在处理废水中的应用
CN102533623B (zh) * 2012-03-06 2013-05-22 北京大学 兼具脱氮除磷功能的木糖氧化无色杆菌及其应用
CN103122332A (zh) * 2013-02-27 2013-05-29 中蓝连海设计研究院 木糖氧化无色杆菌木糖氧化亚种lh-n25与异养硝化好氧反硝化微生物菌剂及制备方法与用途
CN103432900A (zh) * 2013-09-07 2013-12-11 中蓝连海设计研究院 一种微生物菌剂在恶臭气体污染治理中的用途
CN104232522A (zh) * 2014-08-28 2014-12-24 广西科学院 一种产羧甲基纤维素酶的Achromobacter xylosoxidans菌株
CN104195090A (zh) * 2014-09-12 2014-12-10 范鸿仁 一种复合微生物制剂及其在废水处理中的应用
CN104986867A (zh) * 2015-06-23 2015-10-21 四川省畜牧科学研究院 一种改良养殖池塘底泥环境复合菌剂及其制作方法和用途

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
C BRUEGGEMANN等: "Achromobacter xylosoxidans putative taurine dehydrogenase large subunit (tauY) gene, partial cds", 《RESEARCHGATE》 *
CASPI R等: "The MetaCyc database of metabolic pathways and enzymes and the BioCyc collection of pathway/genome databases", 《NUCLEIC ACIDS RES》 *
PRENAFETA-BOLDU, FX等: "Role of Thiobacillus thioparus in the biodegradation of carbon disulfide in a biofilter packed with a recycled organic pelletized material", 《BIODEGRADATION》 *
尚建中: "木糖氧化产碱杆菌生物学特性研究 ", 《河北医科大学学报》 *
梁亮: "木糖氧化无色杆菌研究进展", 《右江医学》 *
陈双喜等: "石油降解菌的筛选、鉴定及其菌剂制备的初步优化", 《河南大学学报(自然科学版)》 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109576170A (zh) * 2018-08-30 2019-04-05 常州大学 一株高效硫氧化菌在含硫化黑废水处理中的应用
CN111534458A (zh) * 2020-04-13 2020-08-14 浙江工业大学 无色杆菌tbc-1及其在降解1,3,6,8-四溴咔唑中的应用
CN111534458B (zh) * 2020-04-13 2022-01-14 浙江工业大学 无色杆菌tbc-1及其在降解1,3,6,8-四溴咔唑中的应用
CN115141769A (zh) * 2022-06-21 2022-10-04 湖南省蔬菜研究所 提高无色杆菌或肠杆菌的菌体丰度的培养基及其发酵方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN110699291B (zh) 2021-04-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110699291B (zh) 一种具有降解硫化物性能的木糖氧化无色杆菌及其应用
CN111423996B (zh) 一种复合菌剂、其制备方法及在土壤修复领域的应用
CN108977399B (zh) 一株粪产碱杆菌及其应用
CN109182178B (zh) 一株具有铬耐受和Cr(VI)去除能力的菌株及其在原位修复中轻度铬污染土壤中的应用
CN111518715B (zh) 磺胺类抗生素协同降解细菌及其应用
CN107699513B (zh) 一种黑臭水体降解菌及其应用
CN108977398B (zh) 一株巨大芽孢杆菌及其应用
CN110791444B (zh) 一种施氏假单胞菌、采用该施氏假单胞菌制得的复合菌剂及该复合菌剂的应用
CN111647536A (zh) 一种耐高温辣椒素降解菌、应用及餐厨垃圾处理方法
CN106635908A (zh) 一种海洋石油降解菌、菌剂及其应用
CN110218682B (zh) 一株假真菌样芽孢杆菌及其在污泥减量中的应用
JP7062322B2 (ja) シュードモナス・バレアリカ及びそのゴミ浸出液の膜濃縮液の処理における使用
CN109609404B (zh) 芽孢杆菌hy-1及其降解有机污染物的应用
CN109280631B (zh) 一株磺胺二甲基嘧啶降解菌s-2及其应用
CN109628355B (zh) 一种硫化物降解菌及其应用
CN107586751B (zh) 一株二恶烷降解菌d2及其应用
CN113980851B (zh) 具有二甲基乙酰胺降解能力的副球菌ybh-x及应用
CN102533595B (zh) 一株1,2-二氯乙烷降解菌及其应用
CN111004742B (zh) 具有二氯甲烷降解性能的微杆菌zy及其应用
CN115786179A (zh) 降解邻二氯苯的菌株及其应用
CN112300961B (zh) 一种喹啉降解菌株及其在含喹啉废水中的应用
CN110819553B (zh) 一株阿耶波多氏芽孢杆菌及其在丙烯酸降解上的应用
CN114045238A (zh) 高效降解二甲基乙酰胺的赤红球菌hjm-8及应用
CN110144308B (zh) 一种耐受高盐、高效降解硝酸盐的反硝化菌及其制备与用途
CN114045239A (zh) 具有二甲基乙酰胺降解能力的泛养副球菌ybh-7及应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant