CN109628355B - 一种硫化物降解菌及其应用 - Google Patents

一种硫化物降解菌及其应用 Download PDF

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Abstract

一种硫化物降解菌及其应用，其为呼吸潘多拉菌WX(Pandoraea pnomenusa WX)，生物保藏号为CCTCC NO：M 2018826，保藏日期为2018年11月26日，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏地址为武汉市武昌区珞珈山武汉大学，邮编：430072。本发明的呼吸潘多拉菌WX，可将硫化物中的S2‑氧化为SO4 2‑，实现硫化物的降解，可高效降解硫化物，对初始浓度为100‑500mg·L‑1的硫化物，在8小时内降解率可达到73‑100％，对工业废水中硫化物的高效净化具有重要意义。

Description

一种硫化物降解菌及其应用
技术领域
本发明属于环境污染物的生物处理技术领域，具体涉及一种硫化物降解菌及其应用。
背景技术
含硫废水主要来源于制革、造纸、石化、印染、制药、炼焦等行业，该类废水中硫化物浓度高，毒性大，且会对废水构筑物的正常运转产生很大影响。城市生活污水处理过程中，主要的致臭成分也是含硫化合物；农业废水中含有的硫化物是造成水体发黑发臭的重要因素，由于其毒性、腐蚀性、恶臭和高耗氧量等问题，硫化物从水中以H2S的形式逸出后，不但会引起人的神经中毒，而且能与大气层的臭氧反应生成硫酸，形成酸雨，因此，研究去除废水中的硫化物处理工艺显得尤为迫切。
目前，国内外处理含硫废水的方法很多，依其弱酸性和强还原性而进行脱硫，可分为物理法、化学法和生物法。每一种处理方法都有其各自的适用范围和特点，需要根据含硫物质的来源、浓度、性质及其处理要求确定方法，在实践中，常常采用几种方法结合来处理含硫废水。
与传统物理化学方法比较，利用生物净化法处理废水中硫化物，具有处理效果好、能耗少、经济成本低、无二次污染等优势，目前已引起国内外众多研究者的重视。
现有研究提出根据生物强化的原理，筛选出一株高效脱硫的排硫硫杆菌，并利用上流式填料床反应进行了挂膜试验，研究了特性菌种的筛选以及溶解氧、进水浓度、水力负荷和进水pH值等因素对于废水中硫化物去除的影响规律。
发明内容
本发明的目的在于提供一种硫化物降解菌及其应用，该菌株具有良好的硫化物降解性能，对初始浓度为100-500mg·L-1的硫化物，在8小时内降解率可达到73-100％，为开发高效脱硫工艺提供高效的降解菌株，并可能为菌株基因功能改造提供多样性的基因来源，该降解菌对工业废水中硫化物的高效净化具有重要意义。
为了达到上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种硫化物降解菌，其为呼吸潘多拉菌WX(Pandoraea pnomenusa WX)，其生物保藏号为CCTCC NO：M 2018826，保藏日期为2018年11 月26日，保藏单位为中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)，保藏地址为中国武汉武汉大学，邮编：430072。
所述呼吸潘多拉菌WX呈单个菌落，菌落颜色为白色，无芽孢，不透明，表面光滑，边缘整齐；透射电镜下观察，菌体形态为杆菌，具有鞭毛，革兰氏染色阴性，氧化酶阳性，接触酶阳性；生长最适pH值为8.0，最适温度为40℃；所述呼吸潘多拉菌株WX的16S rDNA序列如SEQ ID No.1所示。
本发明提供所述呼吸潘多拉菌WX在对硫化物进行生物降解中的应用。
本发明中的硫化物指含硫元素、或由硫元素与氢元素组成的化合物，常见的硫化物含有S2-、HS-和H2S，所述呼吸潘多拉菌株WX用于处理废水中硫化物以S2-、HS-形式存在的废液。
本发明提供利用所述呼吸潘多拉菌WX对硫化物进行生物降解的方法，包括以下步骤：
1)将所述呼吸潘多拉菌WX进行发酵培养，获得发酵液，即含菌悬液；
2)将所述含菌悬液接种至硫化物液体选择培养基中，进行培养，降解硫化物；其中，所述硫化物液体选择培养基中，各物质的终浓度为：硫源100～500mg·L-1，碳源3800～4000mg·L-1，氮源480～500mg·L-1，KH2PO4 1100～1200mg·L-1，K2HPO4 1100～1200mg·L-1，MgCl2·6H2O 180～200 mg·L-1，柠檬酸铁5～10mg·L-1，溶剂为水，pH值7.0～9.0。
优选地，所述碳源选自葡萄糖、蔗糖、乙醇、甘油或乙酸钠；氮源为氯化铵、醋酸铵、牛肉膏、蛋白胨或硝酸钠。
进一步，步骤2)中，所述硫化物液体选择培养基中的硫源为Na2S 或K2S。
进一步，步骤2)中，培养温度为20～50℃。
进一步，步骤1)所述含菌悬液的制备方法包括以下步骤：
a)斜面培养
将呼吸潘多拉菌WX接种至斜面培养基进行斜面培养，28～30℃培养 6.5～7天，获得菌体斜面；
所述斜面培养基中，各组分的终浓度为：硫源100mg·L-1，碳源 3800～4000mg·L-1，氮源480～500mg·L-1，KH2PO4 1100～1200mg·L-1， K2HPO4 1100～1200mg·L-1，MgCl2·6H2O 180～200mg·L-1，柠檬酸铁5～10 mg·L-1，溶剂为水，pH值7.0～7.5，琼脂15～18g·L-1；
b)种子培养
从菌体斜面挑取菌落接种至LB培养基进行种子培养，28～30℃培养 20～24h，获得种子液；
c)发酵培养
将种子液以体积浓度5～10％的接种量接种至LB培养基进行发酵培养，28～30℃培养10～12h，获得发酵培养液，即为含菌悬液。
本发明从污水处理系统中筛选得到一株具有较强硫化物氧化能力的菌株，采用传统与现代分子生物学相结合的手段对其进行鉴定，优化其生长条件，考察了最优条件下菌株降解硫化钠特性，将为开发高效脱硫工艺提供高效的降解菌株，并可能为菌株基因功能改造提供多样性的基因来源。
本发明中复热硫化物为含硫元素、或由硫元素与氢元素组成的化合物，溶于水中会生成S2-、HS-和H2S，以S2-为主要成分，本发明菌株可以降解废水中以S2-形式存在的硫化物，与硫氧化细菌的代谢途径大致形同，将S2-最终氧化为SO4 2-，实现硫化物的降解。
本发明中，所述硫化物液体选择培养基中含有硫源，还含有细菌生长所需的其他物质；碳源为微生物的生长提供重要的能源，并构成微生物的细胞物质，不同的碳源因其结构和分子量不同，对微生物还原的影响程度也不尽相同。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明呼吸潘多拉菌WX可高效降解硫化物，在合适的碳源及氮源条件下，更有利于呼吸潘多拉菌WX对硫化物降解，在pH＝8.0、40℃的条件下在8h内，对初始浓度为100-500mg·L-1的Na2S降解率能达到 73％-100％，对工业废水中硫化物的高效净化具有重要意义。
附图说明
图1为本发明的呼吸潘多拉菌WX的透射电镜照片。
图2为本发明的呼吸潘多拉菌WX的革兰氏染色照片。
图3为本发明的呼吸潘多拉菌WX的系统发育树图。
图4为本发明实施例3中不同碳源下呼吸潘多拉菌WX对硫化物降解性能比较。
图5为本发明实施例3中不同氮源下呼吸潘多拉菌WX对硫化物降解性能比较。
图6为本发明实施例3中不同pH下呼吸潘多拉菌WX对硫化物降解性能比较。
图7为本发明实施例3中不同底物浓度下呼吸潘多拉菌WX对硫化物降解性能比较。
图8为本发明实施例3中不同温度下呼吸潘多拉菌WX对硫化物降解性能比较。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1呼吸潘多拉菌株WX(Pandoraea pnomenusa WX)的分离、纯化及其鉴定
1.Pandoraea pnomenusa WX的分离及纯化
从浙江卫星能源有限公司废水处理池污泥中筛选呼吸潘多拉菌株 WX，具体步骤如下：
取废水处理池中污泥，静置24h后，滤去上清液，取下层污泥10mL 接种于含100mL硫化物液体选择培养基的培养瓶中，培养温度30℃，160 rpm振荡培养24h，将菌液离心分离，收集菌体，用无菌水配制成一定浓度的菌液；将所得到的菌液用硫化物固体选择培养基经多次平板划线分离纯化，得到单菌落即还原菌种，记为菌株WX。
配制硫化物液体选择培养基，配制方法如下：硫源100mg·L-1，碳源4000mg·L-1，KH2PO4 1200mg·L-1，K2HPO4 1200mg·L-1，MgCl2·6H2O 200mg·L-1，NH4Cl2 2000mg·L-1，柠檬酸铁10mg·L-1，溶剂为水，pH值 7.0～9.，121℃灭菌20min。
向上述硫化物液体选择培养基中添加琼脂18-20g/L得到硫化物固体选择培养基。
2.菌株WX的鉴定
a、菌株WX的生理生化特征
菌落颜色为白色，菌落呈小型单个菌落，有芽孢，不透明，表面光滑，边缘整齐，透射电镜下观察该菌体的形态为杆菌(图1)，具有鞭毛，革兰氏染色阴性(图2)，氧化酶阳性，接触酶阳性，生长最适pH值为8.0，最适温度为40℃。
b、菌株WX的16S rRNA序列分析
通过16S rRNA序列分析和生理生化实验鉴定，确定菌株WX为 Pandoraeapnomenusa，具体步骤如下：
采用3S柱离心式环境样品DNA回收试剂盒(V2.2，上海申能博彩生物科技有限公司)提取和纯化菌株WX的DNA，4℃保存，选用细菌的通用引物F27和1492R对纯化的DNA进行PCR扩增，引物序列分别为：
F27：5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’
1492R：5’-GGTTACCTTGTTACGACTT-3’
PCR反应体系为(50μL)：模板DNA 1.75μL，引物F27和引物R1492 各1μL，MgCl2(25mmol·L-1)3μL，Taq酶(5U·μL-1)0.25μL，10×PCR缓冲液5μL，dNTP(2.5mmol·L-1)4μL，重蒸水34μL。
PCR反应程序设定为：先94℃预变性4min；然后94℃变性1min， 59℃退火1min，72℃延伸1.5min，循环35个周期；然后72℃延伸10min；最后4℃保持10min，将PCR产物进行测序(浙江天科生物科技有限公司)，测序结果见序列SEQ ID NO：1所示。
将WX的16S rDNA序列上传到Genbank，获得Genbank的登录号 MK167209，与Genbank中的基因序列进行同源性比较，发现其属于 Pandoraea属，与Pandoraeapnomenusa(KT781673.1)同源性最高，达到96％，图3为该菌株的系统发育树图。
为了进一步确定鉴定结果的可靠性，经过生理生化实验，最终确定菌株WX属于Pandoraea pnomenusa，因此，将该菌株命名为呼吸潘多拉菌 WX(Pandoraea pnomenusaWX)。
实施例2呼吸潘多拉菌WX发酵培养液
1.斜面培养
将呼吸潘多拉菌WX接种至斜面培养基，28～30℃培养6.5～7天，获得菌体斜面；所述斜面培养基中各组分的终浓度为：Na2S 100mg·L-1，葡萄糖10g·L-1，KH2PO4 1200mg·L-1，K2HPO4 1200mg·L-1，MgCl2·6H2O 200 mg·L-1，NH4Cl2 2000mg·L-1，柠檬酸铁10mg·L-1，溶剂为水，pH值7.0～7.5，琼脂18g·L-1。
2.种子培养
从菌体斜面挑取菌落接种至LB培养基进行种子培养，28～30℃培养 20～24h，获得种子液；所述LB培养基中各组分的终浓度为：蛋白胨10 g·L-1，酵母粉5g·L-1，NaCl10g·L-1，溶剂为水，pH值7.0～7.5。
3.发酵培养
将种子液以体积浓度1％的接种量接种至LB培养基进行发酵培养， 28～30℃培养10～12h，获得发酵培养液即为含菌悬液；所述LB培养基中各组分的终浓度为：蛋白胨10g·L-1，酵母粉5g·L-1，NaCl 10g·L-1，溶剂为水，pH值7.0～7.5。
实施例3Pandoraea pnomenusa WX硫化物降解性能检测
本发明依据国标GB/T-16489-1996亚甲基蓝分光光度法测定水中硫化物，测试呼吸潘多拉菌株WX对硫化物的生物降解性能。其中，硫化物为Na2S，由于Na2S易被氧化，故先配制高浓度的Na2S溶液，再加入到Na2S液体选择培养基中调整其浓度，并在厌氧瓶中进行菌株的性能测试。
1.考察不同碳源下呼吸潘多拉菌WX对硫化物的降解性能
在不同碳源下实施呼吸潘多拉菌降解硫化物的实验，具体实施步骤如下：
以硫化钠为唯一硫源，浓度100mg·L-1，按体积浓度5％接种量将OD600为1.2的含菌悬液(实施例2方法制备)接种于不同碳源的Na2S液体选择培养基A1、B1、C1、D1、E1，30℃，160rpm振荡培养12h，获得培养液。
硫化物液体选择培养基A1终浓度组成为：硫源100mg·L-1，葡萄糖 10g·L-1，NH4Cl2 2000mg·L-1，KH2PO4 1200mg·L-1，K2HPO4 1200mg·L-1， MgCl2·6H2O 200mg·L-1，柠檬酸铁10mg·L-1，溶剂为水，pH值7.0；
硫化物液体选择培养基B1终浓度组成为：硫源100mg·L-1，蔗糖 9.5g·L-1，NH4Cl22000mg·L-1，KH2PO4 1200mg·L-1，K2HPO4 1200mg·L-1， MgCl2·6H2O 200mg·L-1，柠檬酸铁10mg·L-1，溶剂为水，pH值7.0；
硫化物液体选择培养基C1终浓度组成为：硫源100mg·L-1，甘油 10.22g·L-1，NH4Cl2 2000mg·L-1，KH2PO4 1200mg·L-1，K2HPO4 1200 mg·L-1，MgCl2·6H2O 200mg·L-1，柠檬酸铁10mg·L-1，溶剂为水，pH值 7.0；
硫化物液体选择培养基D1终浓度组成为：硫源100mg·L-1，乙醇 7.6g·L-1，NH4Cl22000mg·L-1，KH2PO4 1200mg·L-1，K2HPO4 1200mg·L-1， MgCl2·6H2O 200mg·L-1，柠檬酸铁10mg·L-1，溶剂为水，pH值7.0；
硫化物液体选择培养基E1终浓度组成为：硫源100mg·L-1，乙酸钠 13.7g·L-1，NH4Cl2 2000mg·L-1，KH2PO4 1200mg·L-1，K2HPO4 1200mg·L-1， MgCl2·6H2O 200mg·L-1，柠檬酸铁10mg·L-1，溶剂为水，pH值7.0。
采用亚甲基蓝分光光度法测定硫化物的浓度，即取3mL培养液作为样品，先将样品通过孔径为0.22μm的细菌过滤器过滤去除微生物，然后取滤液用紫外分光光度计测出其在665nm波长下的吸光度值。
结果如图4所示，碳源为葡萄糖时，12h时，呼吸潘多拉菌株WX 对硫化物的降解率达到100％。
2.考察不同氮源下呼吸潘多拉菌WX对硫化物的降解性能
在不同氮源下实施呼吸潘多拉菌降解硫化物的实验，具体实施方案如下：
以硫化钠为硫源，浓度100mg·L-1，按体积浓度5％接种量将OD600为1.2的含菌悬液(实施例2方法制备)接种于不同氮源(氮源分别为氯化铵、醋酸铵、牛肉膏、蛋白胨、硝酸钠)的Na2S液体选择培养基A2、 B2、C2、D2、E2，30℃，160rpm振荡培养8h，获得培养液。
硫化物液体选择培养基A2终浓度组成：硫源100mg·L-1，葡萄糖10 g·L-1，NH4Cl21900mg·L-1，KH2PO4 1200mg·L-1，K2HPO4 1200mg·L-1， MgCl2·6H2O 200mg·L-1，柠檬酸铁10mg·L-1，溶剂为水，pH值7.0。
硫化物液体选择培养基B2终浓度组成：硫源100mg·L-1，葡萄糖10 g·L-1，醋酸铵2800mg·L-1，KH2PO4 1200mg·L-1，K2HPO4 1200mg·L-1， MgCl2·6H2O 200mg·L-1，柠檬酸铁10mg·L-1，溶剂为水，pH值7.0。
硫化物液体选择培养基C2终浓度组成：硫源100mg·L-1，葡萄糖10 g·L-1，牛肉膏3800mg·L-1，KH2PO4 1200mg·L-1，K2HPO4 1200mg·L-1， MgCl2·6H2O 200mg·L-1，柠檬酸铁10mg·L-1，溶剂为水，pH值7.0。
硫化物液体选择培养基D2终浓度组成:硫源100mg·L-1，葡萄糖10 g·L-1，蛋白胨3900mg·L-1，KH2PO4 1200mg·L-1，K2HPO4 1200mg·L-1， MgCl2·6H2O 200mg·L-1，柠檬酸铁10mg·L-1，溶剂为水，pH值7.0。
硫化物液体选择培养基E2终浓度组成:硫源100mg·L-1，葡萄糖10 g·L-1，NaNO33000mg·L-1，KH2PO4 1200mg·L-1，K2HPO4 1200mg·L-1， MgCl2·6H2O 200mg·L-1，柠檬酸铁10mg·L-1，溶剂为水，pH值7.0。
采用亚甲基蓝分光光度法测定硫化物的浓度，即取3mL培养液作为样品，先将样品通过孔径为0.22μm的细菌过滤器过滤去除微生物，然后取滤液用紫外分光光度计测出其在665nm波长下的吸光度值。
结果如图5所示，氮源为醋酸钠时，8h时，呼吸潘多拉菌株WX对硫化物的降解率达到96％，在其他氮源下呼吸潘多拉菌株WX对硫化物的降解率也都达到90％以上。
3.考察不同pH下呼吸潘多拉菌WX对硫化物的降解性能
在不同pH下实施呼吸潘多拉菌WX对硫化物的降解实验，具体实施方案如下：
以硫化钠为硫源，浓度100mg·L-1，按体积浓度5％接种量将OD600为1.2的含菌悬液(实施例2方法制备)接种于Na2S液体选择培养基， 30℃，160rpm振荡培养8h，获得培养液。
硫化物液体选择培养基终浓度组成：硫源100mg·L-1，葡萄糖10 g·L-1，醋酸钠2800mg·L-1，KH2PO4 1200mg·L-1，K2HPO4 1200mg·L-1， MgCl2·6H2O 200mg·L-1，柠檬酸铁10mg·L-1，溶剂为水，pH值分别为 5.0、6.0、7.0、8.0和9.0。
采用亚甲基蓝分光光度法测定硫化物的浓度，即取3mL培养液作为样品，先将样品通过孔径为0.22μm的细菌过滤器过滤去除微生物，然后取滤液用紫外分光光度计测出其在665nm波长下的吸光度值。
结果如图6所示，pH值为8.0时，8h呼吸潘多拉菌株WX对硫化物的降解率达到96.2％，在酸性条件下会抑制呼吸潘多拉菌株WX对硫化物的降解。
4.考察不同底物浓度下呼吸潘多拉菌WX对硫化物的降解性能
在不同底物浓度下实施呼吸潘多拉菌WX对硫化物的降解实验，具体实施方案如下：
以硫化钠为硫源，考察不同硫化钠浓度下呼吸潘多拉菌WX对硫化物的降解性能，Na2S浓度分别为100mg·L-1、200mg·L-1、300mg·L-1、 400mg·L-1、500mg·L-1，按体积浓度5％接种量将OD600为1.2的含菌悬液 (实施例2方法制备)接种于Na2S液体选择培养基，30℃，160rpm振荡培养8h，获得培养液。
硫化物液体选择培养基终浓度组成：硫源100-500mg·L-1，葡萄糖 10g·L-1，醋酸钠2800mg·L-1，KH2PO4 1200mg·L-1，K2HPO4 1200mg·L-1， MgCl2·6H2O 200mg·L-1，柠檬酸铁10mg·L-1，溶剂为水，pH值为8.0。
采用亚甲基蓝分光光度法测定硫化物的浓度，即取3mL培养液作为样品，先将样品通过孔径为0.22μm的细菌过滤器过滤去除微生物，然后取滤液用紫外分光光度计测出其在665nm波长下的吸光度值。
结果如图7所示，在8h时，呼吸潘多拉菌株WX对高浓度硫化物(即Na2S浓度为500mg·L-1时)的降解率达到了75％。
5.考察不同温度下呼吸潘多拉菌WX对硫化物的降解性能
在不同温度下实施呼吸潘多拉菌WX对硫化物的降解实验，具体实施方案如下：
以硫化钠为唯一硫源，考察不同温度下呼吸潘多拉菌WX对硫化物的降解性能，按体积浓度5％接种量将OD600为1.2的含菌悬液(实施例2 方法制备)接种于Na2S液体选择培养基，于不同温度下，分别为20℃、 25℃、30℃、35℃、40℃和50℃，160rpm振荡培养8h，获得培养液。
Na2S液体选择培养基中各物质含量：硫源100mg·L-1，蔗糖10g·L-1，醋酸钠2800mg·L-1，KH2PO4 1200mg·L-1，K2HPO4 1200mg·L-1， MgCl2·6H2O 200mg·L-1，柠檬酸铁10mg·L-1，溶剂为水，pH值为8.0。
采用亚甲基蓝分光光度法测定硫化物的浓度，即取3mL培养液作为样品，先将样品通过孔径为0.22μm的细菌过滤器过滤去除微生物，然后取滤液用紫外分光光度计测出其在665nm波长下的吸光度值。
结果如图8所示，8h后，在25-50℃时呼吸潘多拉菌株WX对硫化物的降解率为73-100％，在40℃时，呼吸潘多拉菌株WX对硫化物的降解率达到了100％。
序列表
<110> 浙江卫星能源有限公司
<120> 一种硫化物降解菌及其应用
<130> 1911033
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 926
<212> DNA
<213> Pandoraea pnomenusa
<400> 1
ggcagcacgg gtgcttgcac ctggtggcga gtggcgaacg ggtgagtaat acatcggaac 60
gtaccttgta gtgggggata gctcggcgaa agccggatta ataccgcata cgctctgagg 120
aggaaagcgg gggaccttcg ggcctcgcgc tacaagagcg gccgatgtca gattagctag 180
ttggtgaggt aaaagctcac caaggcgacg atctgtagct ggtctgagag gacgaccagc 240
cacactggga ctgagacacg gcccagactc ctacgggagg cagcagtggg gaattttgga 300
caatgggcga aagcctgatc cagcaatgcc gcgtgtgtga agaaggcctt cgggttgtaa 360
agcacttttg tccggaaaga aatcctctgg gttaatacct cggggggatg acggtaccgg 420
aagaataagc accggctaac tacgtgccag cagccgcggt aatacgtagg gtgcaagcgt 480
taatcggaat tactgggcgt aaagcgtgcg caggcggttt tgtaagacgg atgtgaaatc 540
cccgggctta acctgggaac tgcattcgtg actgcaaggc tagagtatgg cagagggggg 600
tagaattcca cgtgtagcag tgaaatgcgt agagatgtgg aggaataccg atggcgaagg 660
ataccctggt agtccacgcc ctaaacgatg tcaactagtt gttggggatt catttcctta 720
gtaacgtagc taacgcgtga agttgaccgc ctggggagta cggtcgcaag attaaaactc 780
aaaggaattg acggggaccc gcacaagcgg tggatgatgt ggattaattc gatgcaacgc 840
gaaaaacctt acctaccctt gacatgtacg gaatcctgct gagaggtggg agtgctcgaa 900
agagaaccgt aacacaggtg ctgcat 926

Claims (7)

1.一种硫化物降解菌，其为呼吸潘多拉菌WX(Pandoraea pnomenusa WX)，其生物保藏号为CCTCC NO：M 2018826；
所述呼吸潘多拉菌WX的16S rDNA序列如SEQ ID No.1所示；
所述呼吸潘多拉菌WX呈单个菌落，菌落颜色为白色，无芽孢，不透明，表面光滑，边缘整齐；透射电镜下菌体形态为杆菌，具有鞭毛，革兰氏染色阴性，氧化酶阳性，接触酶阳性。
2.如权利要求1所述硫化物降解菌在对硫化物进行生物降解中的应用。
3.利用权利要求1所述硫化物降解菌对硫化物进行生物降解的方法，包括以下步骤：
1)将呼吸潘多拉菌WX经斜面培养、种子培养和发酵培养，获得发酵液，即含菌悬液；
2)将所述含菌悬液接种至硫化物液体选择培养基中，进行培养，降解硫化物；
其中，所述硫化物液体选择培养基中，各物质的终浓度为：硫源100～500mg·L-1，碳源3800～4000mg·L-1，氮源480～500mg·L-1，KH2PO41100～1200mg·L-1，K2HPO4 1100～1200mg·L-1，MgCl2·6H2O 180～200mg·L-1，柠檬酸铁5～10mg·L-1，溶剂为水，pH值7.0～9.0。
4.根据权利要求3所述硫化物降解菌对硫化物进行生物降解的方法，其特征在于，所述碳源选自葡萄糖、蔗糖、乙醇、甘油或乙酸钠；氮源为氯化铵、醋酸铵、牛肉膏、蛋白胨或硝酸钠。
5.根据权利要求3所述硫化物降解菌对硫化物进行生物降解的方法，其特征在于，步骤2)中，所述硫化物液体选择培养基中的硫源为Na2S或K2S。
6.根据权利要求3所述硫化物降解菌对硫化物进行生物降解的方法，其特征在于，步骤2)中，培养温度为20～50℃。
7.根据权利要求3所述硫化物降解菌对硫化物进行生物降解的方法，其特征在于，步骤1)所述含菌悬液的制备方法包括以下步骤：
a)斜面培养
将呼吸潘多拉菌WX接种至斜面培养基进行斜面培养，28～30℃培养6.5～7天，获得菌体斜面；
所述斜面培养基中，各组分的终浓度为：硫源100～500mg·L-1，碳源3800～4000mg·L-1，氮源480～500mg·L-1，KH2PO4 1100～1200mg·L-1，K2HPO4 1100～1200mg·L-1，MgCl2·6H2O 180～200mg·L-1，柠檬酸铁5～10mg·L-1，溶剂为水，pH值7.0～7.5，琼脂15～18g·L-1；
b)种子培养
从菌体斜面挑取菌落接种至LB培养基进行种子培养，28～30℃培养20～24h，获得种子液；
c)发酵培养
将种子液以体积浓度5～10％的接种量接种至LB培养基进行发酵培养，28～30℃培养10～12h，获得发酵培养液，即为含菌悬液。
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