CN110694074A - 一种具有pH及谷胱甘肽敏感的抗肿瘤活性聚合物及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种具有pH及谷胱甘肽敏感的抗肿瘤活性聚合物，其以天然高分子葡聚糖作为主链，通过谷胱甘肽敏感的羰基乙烯基硫醚键连接抗癌药物6‑巯基嘌呤，并利用量子点ZnO与DOX、5‑FU、6‑MP的配位作用达到三种抗癌药物的递送；同时使用苯硼酸作为靶向物质并用量子点CdSe与6‑MP配位进行荧光成像。体外释放结果显示，该聚合物可以在微酸及谷胱甘肽的环境中进行药物释放；体外细胞实验表明，三种抗癌药物的同时使用，可以更好的降低B16F10细胞的存活率，并解决单一药物递送系统带来的高剂量、高耐药性的弊端，是一种具有广泛应用前景的药物递送系统。

Description

一种具有pH及谷胱甘肽敏感的抗肿瘤活性聚合物及其制备 方法
技术领域
本发涉及一种抗肿瘤活性聚合物，尤其涉及一种具有pH及谷胱甘肽敏感的抗肿瘤活性聚合物及其制备方法，属于化合物的合成技术领域和药物递送领域。
背景技术
癌症已经发展成为人类健康的第一杀手。目前，使用细胞毒性药物杀死癌细胞（化疗）仍然是治疗癌症的主要方法，但是由于癌细胞易转移，耐药等特点常导致化疗失败。由于纳米颗粒（NP）能够延长血液循环时间并提高抗癌药物的生物利用度，纳米药物递送系统（NDDS）近年来得到了广泛的应用。然而，包裹单一抗癌药物的载体仍有许多缺点，如高剂量和易产生药物抗性等。单一药物化疗引起的不良反应可以通过包裹两种或多种药物来进行克服。目前，开发了多种药物共同递送系统（DDS）用于药物联合治疗。
近年来，影像学的发展为肿瘤诊断提供了良好的技术支持。各种成像方法已广泛应用于疾病的临床诊断。其中量子点因其具有大消光系数，强光致发光和强光稳定性等优越性能，已经成为生物成像的有力工具。ZnO量子点（QDs）由于其具有易于制备，成本低，pH响应等优异的特点而被大量使用。而且，据报道ZnO量子点溶解生成的Zn2+作用于肿瘤细胞，可以优先杀死癌细胞。所以，基于ZnO量子点设计的纳米药物传递系统可以在生物纳米医学中广泛应用。同时，CdSe QDs能与6-MP配位进行荧光成像，可以准确地判断药物及载体在细胞的的分布，更好的观察药物及载体在细胞内的累积程度。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有pH及谷胱甘肽敏感的抗肿瘤活性聚合物；
本发明的目的另一目的是提供一种上述具有pH及谷胱甘肽敏感的抗肿瘤活性聚合物的制备方法；
本发明还有一个目的，就是对上述抗肿瘤活性聚合物的缓释药物的性能进行研究。
一、具有pH及谷胱甘肽敏感的抗肿瘤活性聚合物
本发明具有pH及谷胱甘肽敏感的抗肿瘤活性聚合物，是由谷胱甘肽敏感键——羰基乙烯基硫醚键将抗癌药物6-巯基嘌呤（6-MP）与葡聚糖（Dex）相连，并将4-羧基苯硼酸（PBA）引入聚合物中，同时利用ZnOQDs，CdSeQDs与6-MP的配位作用进行携带形成一种可靶向、可搭载药物、可荧光成像的药物递送系统。其结构如下：
二、具有pH及谷胱甘肽敏感的抗肿瘤活性聚合物的制备
（1）3-（7H-嘌呤-6-基硫代）丙烯酸（PTA）制备
在搅拌下向无水甲醇溶液中加入6-MP、甲醇钠和丙炔酸，在60~65℃下连续回流20~24h；反应结束后加水淬灭反应，再加入过量的HCl溶液沉淀产物，过滤，产物溶解于NaOH溶液中从再次在 HCl中沉淀，所得产物即为棕黄色3-（7H-嘌呤-6-基硫代）丙烯酸PTA。
6-MP与甲醇钠的摩尔比为1:1~ 1:1.5；6-MP与丙炔酸的摩尔比为1:1~ 1:1.5。
化合物PTA的结构式为：
Figure 456646DEST_PATH_IMAGE002
图1为上述制备PTA化合物的核磁共振氢谱。通过核磁共振氢谱分析可以得出，化学位移在8.80 ppm和8.57 ppm为6-巯基嘌呤上氢的出峰，8.77 ppm和6.29 ppm为碳碳双键上氢的出峰。核磁共振氢谱表明成功合成了PTA化合物。
（2）聚合物Dex-PTA-PBA的制备
将PTA，PBA（4-羧基苯硼酸）溶于 DMSO 中，加入EDC（1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐）混合均匀；将混合物溶液置于45~50℃的油浴锅中活化2~4 h，然后加入Dex（葡聚糖）、NHS（N-羟基琥珀酰亚胺），于室温下反应20~24 h；反应完毕后用截留分子量为3000的透析袋透析20~24h，减压蒸馏，即得黄色固体聚合物Dex-PTA-PBA；
PTA与PBA的摩尔比为1.25:1~1.5:1；PTA与EDC的摩尔比为1:1.5~1:1.7；PTA与Dex的摩尔比为43:1~45:1；PTA与 NHS的摩尔比为1:1.5~1:1.7。
本发明使用Mn=20000的葡聚糖为主链，因为较大分子量的聚合物有利于在体内进行药物循环，能够避免药物在短时间内被排除体外。聚合物Dex-PTA-PBA的结构式为：
Figure 864494DEST_PATH_IMAGE003
图2为上述制备的Dex-PTA-PBA核磁共振氢谱。通过核磁共振氢谱分析可以得出，化学位移在4.88 ppm，4.65 ppm为葡聚糖上氢的特征峰，8.2 ppm，7.8 ppm 为苯硼酸中氢的特征峰；在Dex-PTA-PBA的核磁共振氢谱中可以明显的观察到PTA的特征峰。表明成功合成Dex-PTA-PBA。
（3）DOX@5-FU@ZnO@CdSe@Dex-PTA-PBA 的制备
先将ZnO QDs溶于乙醇溶液中，并向其中加入DOX、5-FU的DMSO溶液，在黑暗条件下搅拌20~24 h；再加入Dex-PTA-PBA的 DMSO溶液，继续在黑暗条件下搅拌20~24 h；然后加入CdSeQDs水溶液，继续在黑暗条件下搅拌20~24 h；最后加入水继续搅拌20~24 h后置于分子量3000的透析袋中避光透析42~48 h，即得紫色的DOX@5-FU@ZnO@CdSe@Dex-PTA-PBA水溶液。
其中，ZnOQDs的用量为Dex-PTA-PBA质量的0.2~0.25倍；DOX的加入量为Dex-PTA-PBA质量的0.2~0.25倍，5-FU的加入量为Dex-PTA-PBA质量的0.75~0.8倍；CdSeQDs的加入量为Dex-PTA-PBA质量的0.1~0.15倍。
图3为ZnO@CdSe@Dex-PTA-PBA的紫外光谱图。从图3中可以看出，ZnO QDs与CdSeQDs的紫外吸收峰在360 nm、525 nm，当ZnOQDs、CdSe QDs与Dex-PTA-PBA配位后，可以明显的在其紫外光谱中观察到ZnOQDs、CdSeQDs的紫外吸收，说明ZnOQDs与CdSe QDs成功配位至Dex-PTA-PBA。
图4为DOX@5-FU@ZnO@CdSe@Dex-PTA-PBA的透射电镜图（TEM）。图5为DOX@5-FU@ZnO@CdSe@Dex-PTA-PBA的动态光散射图（DLS）。图4、5显示，在水溶液中DOX@5-FU@ZnO@CdSe@Dex-PTA-PBA呈168nm球形形态分布。
二、DOX@5-FU@ZnO@Dex-PTA-PBA的药物释放性能
1、体外药物释放实验
实验方法：为了避免释放过程中阿霉素的吸收峰受到CdSe量子点的干扰。根据上述制备方法制备DOX@5-FU@ZnO@Dex-PTA-PBA溶液。将溶液调节至两种不同的透析条件：（1）乙酸盐缓冲液（10mM GSH，pH5.0）和（2）PBS（pH7.4），并在37℃下振荡。以所需的时间间隔除去溶液（2mL）并用2mL新鲜PBS或含10mM GSH的PBS代替，并通过紫外线（UV）/可见光测量270nm、310nm、480nm处的吸光度。对于大多数肿瘤细胞来说，谷胱甘肽（GSH）的细胞内浓度约为2-10 mM，比细胞外浓度高出100-1000倍，且溶酶体和内体的pH值约为4.0-5.5。依靠这两种内源性刺激，聚合物载体可释放抗癌药物以杀死癌细胞。为了表征药物载体的释放能力，我们模拟了体外药物释放实验中肿瘤部位的酸度和高GSH含量的条件，使用UV/Vis光谱法监测270nm，310nm，480nm处的吸光度。
为了计算最终的释放速率，通过加入两滴浓HCl和100mM GSH（谷胱甘肽）完全释放这两种溶液，并再次测量以确定100%释放时的吸光度。通过100%释放时的吸光度，药物标准曲线和下面的公式计算药物加载速率（DLC，wt%）：
Figure 155798DEST_PATH_IMAGE004
图6为本发明制备的DOX@5-FU@ZnO@CdSe@Dex-PTA-PBA溶液在含有10mM GSH的pH =5.0的乙酸盐缓冲液中的体外药物释放曲线。如图6所示，在含有10mM GSH的pH= 5.0的乙酸盐缓冲液中，DOX，5-FU和6-MP分别释放76.1%，85.25%和93.1%。图7为本发明制备的DOX@5-FU@ZnO@CdSe@Dex-PTA-PBA溶液在pH=7.4 PBS中的体外药物释放曲线。如图7所示，在pH=7.4 PBS中，DOX，5-FU和6-MP分别释放25.7%，20.9%和19.2%，并且DOX、5-FU和6-MP对药物载体的加载率分别为15.7%，21.8%和52.5%。根据DOX、5-FU和6-MP释放实验的结果，可以得出结论，DOX@5-FU@ZnO@CdSe@Dex-PTA-PBA在体内运输期间是稳定的，并且它可以在癌细胞的酸性及谷胱甘肽环境中释放药物。
2、聚合物毒性试验
聚合物的毒性对生物体是至关重要的，所以我们评估了聚合物对B16F10细胞活力的影响。通过MTT（3-(4，5-二甲基噻唑-2)(4， 二甲基噻唑-2)2，5-二苯基四氮唑溴盐）法测定Dex-PBA和Dex-PTA-PBA的毒性。本次实验中使用高度转移性恶性黑色素瘤（B16F10），这是皮肤癌最臭名昭著的变种，也是转移治疗中已知的最被动的癌变种之一。据报道，唾液酸在多数的肿瘤组织中含量增加，且含有苯硼酸的基团可以特异性识别唾液酸残基。因此基于苯硼酸设计的递送系统可以达到靶向的目的。
图8为Dex-PBA/Dex-PTA-PBA的体外抗肿瘤活性实验图。图8的测试结果显示，当聚合物浓度高达1mg/mL时，细胞活力也超过80％，这表明Dex-PBA几乎无毒。相反，发现使用Dex-PTA-PBA后显着降低了细胞活性，这主要是由细胞中PTA释放高浓度的6-MP引起。
3、抗癌活性实验
将B16F10细胞在含有100 μL胎牛血清（FBS，体积分数为15%）的DMEM培养基中培养，将细胞接种于96孔板（每孔5×103个细胞）中并在潮湿的气氛中培养（37℃，5%体积分数的CO2）24 h。然后，除去培养基，加入180μL新鲜DMEM培养基（含有体积分数为10%的FBS）和20μL 的DOX、ZnO@DOX@Dex-PTA-PBA、ZnO@DOX@5-FU@Dex-PTA-PBA、DOX@5-FU@ZnO@CdSe@Dex-PTA-PBA 四个实验组。将细胞培养40~48 h，然后加入10 μLMTT试剂，将细胞进一步培养2~4 h。使用BioRad X-mark Microplate Reader测量490 nm处的光密度（OD），并将测得的OD作为吸光度。所有实验重复3次，细胞存活率根据下式计算：
图9为DOX、ZnO@DOX@Dex-PTA-PBA、ZnO@DOX@5-FU@Dex-PTA-PBA、DOX@5-FU@ZnO@CdSe@Dex-PTA-PBA 的抗肿瘤活性实验图。其中，DOX和CdSe QDs和ZnO QDs的质量浓度分别为0.5，1，5，10，50和100μg/ mL，5-Fu和6-MP的质量浓度分别为1，2，10，20，100和200μg/ mL。以自由DOX的IC50为基准，可以看出每组的IC50低于游离DOX·HCl（1.76 μg/mL），并且5-FU/DOX@ZnO@CdSe@Dex-PTA-PBA具有最低的IC50（0.62μg/mL）。特别值得注意的是，发现DOX@ZnO@Dex-PTA-PBA组的IC50（0.82 μg/mL）远低于游离DOX，这很可能是因为6-MP和DOX更容易接近细胞。说明在PBA的作用下，使递送系统积极靶向肿瘤部位的唾酸。结合ZnO QDs溶解产生的Zn2+，显示出对癌细胞更大的细胞毒性。此外，ZnO@DOX@5-FU@CdSe@Dex-PTA-PBA 与ZnO@DOX@5-FU@ Dex-PTA-PBA相比，并没有发现细胞活性减少，这表明我们所使用的CdSeQDs无毒。
4、荧光实验
将B16F10细胞接种于96孔板中，每孔5×103个细胞，孵育24小时（37℃，5%体积分数的CO2）。然后除去培养基，加入180μL新鲜DMEM培养基（含有体积分数为10%的FBS）和20μL5-FU@DOX@ZnO@CdSe@Dex-PTA-PBA溶液，将细胞温育4小时和10小时。之后再次除去培养基并加入Hoechst 33342。观察细胞并用倒置的OLYMPUS IX7荧光显微镜拍照。
图10为ZnO@CdSe@DOX@5-FU@Dex-PTA-PBA的荧光图片，其中,蓝色-hoechst33342,红色-DOX, 黄色-CdSe QDs，Merge1: Hoechst33342@DOX；Merge 2：Hoechst33342@CdSe；Merge 3：Hoechst33342@DOX@CdSe。由于DOX释放的增加，在10小时后观察到细胞核中的荧光增强（Merge1）。但是，与游离DOX相比，它显示出相对较弱的荧光，这是由于小分子的抗癌药物主要通过简单的扩散进入细胞。而药物传递系统则通过内吞作用进入肿瘤细胞，并在酸性条件下释放药物。释放药物的过程一个相对耗时的过程，导致荧光强度低于游离。ZnO@DOX@5-FU@Dex-PTA-PBA与CdSe QDs的配位在肿瘤微酸的环境中引起质子海绵效应，这导致CdSe QDs从载体上分离并更好地进入细胞核。Merge 2表明随着时间的延长，细胞核中CdSeQDs的荧光显着增强，证明CdSe从6-MP分离进入细胞核。
综上所述，本发明以天然高分子葡聚糖作为主链，通过谷胱甘肽敏感的羰基乙烯基硫醚键连接抗癌药物6-巯基嘌呤，并利用量子点ZnO与阿霉素（DOX）、5-氟尿嘧啶（5-FU）、6-巯基嘌呤（6-MP）的配位作用达到三种抗癌药物的递送；同时使用苯硼酸作为靶向物质并用量子点CdSe与6-MP配位进行荧光成像。体外释放结果显示，该聚合物由于存在ZnO QDs和羰基乙烯基硫醚键，可以在微酸及谷胱甘肽的环境中进行药物释放，不仅降低了药物毒性，还可以更好的杀伤癌细胞。由于葡聚糖的存在，体现了更好的生物相容性，并增强了疏水性药物的溶解度。体外细胞实验表明，三种抗癌药物的同时使用，可以更好的降低B16F10细胞的存活率，并解决单一药物递送系统带来的高剂量、高耐药性的弊端，是一种具有广泛应用前景的药物递送系统。
附图说明
图1为本发明制备的PTA的核磁共振氢谱；
图2为本发明制备的Dex-PTA-PBA的核磁共振氢谱；
图3为本发明制备的ZnO@CdSe@Dex-PTA-PBA的紫外光谱；
图4为本发明制备的DOX@5-FU@ZnO@CdSe@Dex-PTA-PBA的透射电镜图；
图5为本发明制备的DOX@5-FU@ZnO@CdSe@Dex-PTA-PBA的动态光散射图；
图6为本发明制备的DOX@5-FU@ZnO@CdSe@Dex-PTA-PBA在含有10mM GSH的pH = 5.0的乙酸盐缓冲液中的体外药物释放曲线；
图7为本发明制备的DOX@5-FU@ZnO@CdSe@Dex-PTA-PBA在pH=7.4 PBS中的体外药物释放曲线；
图8为Dex-PBA/Dex-PTA-PBA的体外抗肿瘤活性实验图。
图9为DOX、ZnO@DOX@Dex-PTA-PBA、ZnO@DOX@5-FU@Dex-PTA-PBA、ZnO@CdSe@DOX@5-FU@Dex-PTA-PBA抗肿瘤活性实验图；
图10为ZnO@CdSe@DOX@5-FU@Dex-PTA-PBA的荧光图片（Merge 1：Hoechst 33342 @DOX；Merge 2：Hoechst 33342 @ CdSe；Merge 3：Hoechst 33342 @DOX @CdSe）。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明抗肿瘤活性聚合物DOX@5-FU@ZnO@CdSe@Dex-PTA-PBA的合成作进一步的说明。
（1）3-(7H-嘌呤-6-基硫代)丙烯酸（PTA）的制备
将6-MP（0.17g，1 mmol）、甲醇钠（0.2 g，3.7 mmol）和丙炔酸（0.07g，1 mmol）搅拌下加入20 mL无水甲醇溶液中，混合物回流24小时后加入4mL水以淬灭反应。然后加入过量的HCl溶液（1 M）以沉淀产物；将沉淀物重新溶解在NaOH（1 M）中并在HCl（1 M）中再沉淀，得到棕黄色PTA（0.12 g，54%）。1H NMR (600 MHz, DMSO-d 6) : δ 8.80 (d,J=19.9Hz,1H)-COOH-CH-CH-S-C-N-CH-N,8.77(d,10.1Hz,1H)-COOH-CH-CH-S-C-N-CH-N,8.57(s,1H)-COOH-CH-CH-S-C-C-NH-CH-N,6.29 (d,J=10.1Hz,1H)-COOH-CH-CH-S-C-N-CH-N。
（2）Dex-PTA-PBA的制备
将PTA（0.10g，0.45mmol）、PBA（0.05g，0.30mmol），EDC（0.19g，1.00mmol）在50℃下溶解于5mL DMSO中2小时，然后在室温下将Dex（0.2g，0.01mmol）和NHS（0.13g，1.00mmol）加入混合物中，搅拌24 h后，将溶液透析（MWCO 3000透析袋）24小时，减压蒸馏，得到0.25g Dex-PTA-PBA黄色固体。1H NMR (600 MHz, DMSO-d 6): 8.76 -COOC-CH-CH-S-C-N-CH-N,8.70-COOC-CH-CH-S-C-N-CH-N,8.51-COOC-CH-CH-S-C-C-NH-CH-N,8.2 (-Ar-CH of PBA), 7.8(Ar-CH2 of PBA),6.23.-COOC-CH-CH-S-C-N-CH-N ,4.88(OH of Dex）, 4.65（CH of Dex）.
聚合物Dex-PTA-PBA中，葡聚糖，3-(7H-嘌呤-6-基硫代)丙烯酸，4-羧基苯硼酸的摩尔比为1:45:30。同时以δ 4.65 ppm的积分为基准，计算各物质的含量，Mn=3.67×104 (Dex-PTA80-PBA8)。
（3）DOX@5-FU@ZnO@CdSe@Dex-PTA-PBA 的制备
称取ZnO QDs（5 mg）溶于2 ml乙醇溶液中；另称取DOX（4 mg），5-FU（15 mg）溶于1 mLDMSO中，并逐滴加入ZnO QDs的乙醇溶液中，在置于黑暗条件下搅拌24 h。然后称取 Dex-PTA-PBA（20 mg）溶于1 mL DMSO中并逐滴加入上述混合溶液中继续搅拌24 h。称取CdSe（2mg ）溶于1 mL 水中，并加入上述溶液搅拌24 h 后再加入8 ml 水继续搅拌24 h；最后浆混合溶液置于分子量3000的透析袋中避光透析48 h，即得紫色的DOX@5-FU@ZnO@CdSe@Dex-PTA-PBA水溶液。

Claims (10)

1.一种具有pH及谷胱甘肽敏感的抗肿瘤活性聚合物，其结构如下：
Figure 268002DEST_PATH_IMAGE002
。
2.如权利要求1所述具有pH及谷胱甘肽敏感的抗肿瘤活性聚合物的制备方法，包括以下步骤：
（1）3-（7H-嘌呤-6-基硫代）丙烯酸PTA制备：在搅拌下向无水甲醇溶液中加入6-巯基嘌呤、甲醇钠和丙炔酸，在60~65℃下搅拌回流20~24 h；反应结束后加水淬灭反应，再加入过量的HCl溶液沉淀产物，过滤，产物溶解于NaOH溶液中从再次在 HCl中沉淀，所得产物即为棕黄色PTA；
（2）聚合物Dex-PTA-PBA的制备：将PTA、 4-羧基苯硼酸溶于 DMSO 中，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐混合均匀后将混合物溶液置于45~50℃的油浴锅中活化2~4 h，然后加入葡聚糖、N-羟基琥珀酰亚胺，于室温下反应20~24 h；反应完毕后用截留分子量为3000的透析袋透析20~24h，减压蒸馏，即得黄色固体聚合物Dex-PTA-PBA；
（3）DOX@5-FU@ZnO@CdSe@Dex-PTA-PBA 的制备：先将ZnO QDs溶于乙醇溶液中，并向其中加入DOX、5-FU的DMSO溶液，在黑暗条件下搅拌20~24 h；再加入Dex-PTA-PBA的 DMSO溶液，继续在黑暗条件下搅拌20~24 h；然后加入CdSe QDs水溶液，继续在黑暗条件下搅拌20~24 h；最后加入水继续搅拌20~24 h后置于分子量3000的透析袋中避光透析42~48 h，即得紫色的DOX@5-FU@ZnO@CdSe@Dex-PTA-PBA水溶液。
3.如权利要求2所述具有pH及谷胱甘肽敏感的抗肿瘤活性聚合物的制备方法，其特征在于：步骤（1）中，6-巯基嘌呤与甲醇钠的摩尔比为1:1~ 1:1.5。
4.如权利要求2所述具有pH及谷胱甘肽敏感的抗肿瘤活性聚合物的制备方法，其特征在于：步骤（1）中，6-巯基嘌呤与丙炔酸的摩尔比为1:1~ 1:1.5。
5.如权利要求2所述具有pH及谷胱甘肽敏感的抗肿瘤活性聚合物的制备方法，其特征在于：步骤（2）中，PTA与4-羧基苯硼酸的摩尔比为1.25:1~1.5:1。
6.如权利要求2所述具有pH及谷胱甘肽敏感的抗肿瘤活性聚合物的制备方法，其特征在于：步骤（2）中，PTA与1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的摩尔比为1:1.5~1:1.7。
7.如权利要求2所述具有pH及谷胱甘肽敏感的抗肿瘤活性聚合物的制备方法，其特征在于：步骤（2）中，PTA与葡聚糖的摩尔比为摩尔比为43:1~45:1。
8.如权利要求2所述具有pH及谷胱甘肽敏感的抗肿瘤活性聚合物的制备方法，其特征在于：步骤（2）中，PTA与N-羟基琥珀酰亚胺的摩尔比为1:1.5~1:1.7。
9.如权利要求2所述具有pH及谷胱甘肽敏感的抗肿瘤活性聚合物的制备方法，其特征在于：步骤（3）中，ZnOQDs的用量为Dex-PTA-PBA质量的0.2~0.25倍；CdSeQDs的加入量为Dex-PTA-PBA质量的0.1~0.15倍。
10.如权利要求2所述具有pH及谷胱甘肽敏感的抗肿瘤活性聚合物的制备方法，其特征在于：步骤（3）中，DOX的加入量为Dex-PTA-PBA质量的0.2~0.25倍，5-FU的加入量为Dex-PTA-PBA质量的0.75~0.8倍。
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