CN110693849A - 一种基于灵芝孢子的氟尿嘧啶靶向缓释药剂的制备方法 - Google Patents

一种基于灵芝孢子的氟尿嘧啶靶向缓释药剂的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种基于灵芝孢子的氟尿嘧啶靶向缓释药剂的制备方法，属于药物载体与缓释技术领域。本发明公开的一种基于灵芝孢子的氟尿嘧啶靶向缓释药剂的制备方法，首先对天然灵芝孢子进行预处理，得到一种天然无毒、生物相容性好并且内外贯通的灵芝孢子载体；然后通过化学共沉淀法将Fe3O4纳米粒子合成在灵芝孢子表面及内部使其具有磁性；再通过真空加载技术将其与广谱抗肿瘤药物氟尿嘧啶相结合，可用于制备氟尿嘧啶口服靶向药物；在外磁场作用下使氟尿嘧啶药物定位在病变部位释放，降低药物不良反应，减少给药次数，发挥药物最大疗效，这为口服用药及磁靶向化疗提供一种全新途径。

Description

一种基于灵芝孢子的氟尿嘧啶靶向缓释药剂的制备方法
技术领域
本发明涉及药物载体与缓释技术领域，更具体的说是涉及一种基于灵芝孢子的氟尿嘧啶靶向缓释药剂的制备方法。
背景技术
传统的药物在人体内释放时血药浓度不稳定，药物利用率较低，且毒副作用大，所以药物缓释载体的研究一直都是国内外缓释药剂的研究热点。而药物的靶向治疗技术也受到了越来越多人的关注，尤其是通过体外的磁导靶向技术，因磁性纳米粒子具有独特的理化性质，可实现靶向药物输送，从而避免给药不足或过量，减少药物对正常组织的损伤，所以对于磁性纳米粒子方面的靶向用药研究也越来越热。而在众多磁性纳米粒子中，Fe3O4由于具有无毒、良好的热力学稳定性和可调磁性等优点被更多的研究者所关注。
而当磁性纳米粒子真正应用于生物医学用药研究时，Fe3O4纳米粒子本身是无法装载药物的，必须将其封装在生物相容性更好的载体中，这样才能防止药物分子的聚集和磁性纳米粒子颗粒的团聚。因此如何选择更好的生物相容性载体材料已成为近年来生物医学材料研究领域的热点之一。
氟尿嘧啶为尿嘧啶类抗代谢药物，是目前临床上应用最广泛的抗癌药。但由于其不溶于水，溶出度及生物利用度低，维持治疗浓度需频繁用药，并且对胃肠道刺激作用较大且毒副作用较强，在一定程度上限制了它的应用。所以此类药物的安全使用问题也越来越受到社会各界的广泛关注。因此，研究和制备出该类药物的靶向给药系统势在必行，提供一种基于灵芝孢子的氟尿嘧啶靶向缓释药剂的制备方法是本领域技术人员亟需解决的问题。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种基于灵芝孢子的氟尿嘧啶靶向缓释药剂的制备方法，首先对天然灵芝孢子进行预处理，得到一种天然无毒、生物相容性好并且内外贯通的灵芝孢子载体；然后通过化学共沉淀法将Fe3O4纳米粒子合成在灵芝孢子表面及内部使其具有磁性；再通过真空加载技术将其与广谱抗肿瘤药物氟尿嘧啶相结合，可用于制备氟尿嘧啶口服靶向药物；在外磁场作用下使氟尿嘧啶药物定位在病变部位释放，降低药物不良反应，减少给药次数，发挥药物最大疗效，这为口服用药及磁靶向化疗提供一种全新途径。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种磁性灵芝孢子载体的制备方法，具体步骤如下：
(1)空心灵芝孢子载体的制备：通过丙酮脱脂、氢氧化钾及正磷酸通孔、扩孔对天然灵芝孢子进行预处理，得到空心灵芝孢子载体；
(2)Fe3O4纳米粒子在孢子体内的合成：通过化学共沉淀法将Fe3O4纳米粒子合成在灵芝孢子体表面及内部，得到磁性灵芝孢子载体。
进一步，步骤(1)所述空心灵芝孢子载体的制备方法如下：
①取5～10g灵芝孢子，将其与150～300ml的丙酮溶液在回流装置中加热回流搅拌12～24h，加热温度为40～80℃，回流结束后将其进行水洗烘干，烘箱温度为50～80℃，烘干时间为10～30min，得到脱脂后的灵芝孢子；
②将脱脂灵芝孢子与18％(w/v)氢氧化钾溶液浸泡混合，料液比为(1～5)：(25～125)，混合时间为12～24h，在室温下进行，浸泡结束后，经过滤，用水和95％乙醇各清洗三次，反应结束后将样品置于真空冷冻干燥机内冻干6～12h，得到碱解后的灵芝孢子；
③将碱解后的灵芝孢子与85％(v/v)的正磷酸溶液在回流装置中进行回流混合，料液比为(1～5)：(30～150)，混合时间为6～12h，加热温度为70℃；反应结束后，经过滤，用水和95％乙醇各清洗三次；清洗后将样品置于真空冷冻干燥机内冻干6～12h，得到由“脱脂-碱解-酸解”处理过后的空心灵芝孢子载体。
进一步，步骤(2)所述Fe3O4纳米粒子在孢子体内的合成方法如下：
①在搅拌条件下，将FeCl3·6H2O、FeCl2·4H2O、5M HCl、95％乙醇和去离子水混合在100ml烧瓶中，其中氯化铁与氯化亚铁的质量比为2.5～3:1，加热至40℃直至盐完全溶解，得到混合溶液A；
②将0.5～5g空心灵芝孢子载体分散于5～50ml混合溶液A中，并在室温下搅拌6～12h；将空心灵芝孢子载体过滤，并在过滤器上用水快速冲洗，然后立即转移到1M氨水溶液中(溶液B)；
③将含空心灵芝孢子载体悬浮液的氨溶液在35℃温育6～12h(为了加速灵芝孢子中溶液A的填充，可先将悬浮液在250mmHg真空中保持15～30min，然后在室温下搅拌2～4h即可)；用水和95％乙醇在过滤器上进行清洗，用磁铁收集已经被磁化的孢子，得到磁性灵芝孢子载体，即被磁性纳米粒子修饰的灵芝孢子(MGLS)。
进一步，所述的过滤器采用的是真空抽滤装置。
进一步，合成的Fe3O4纳米粒子粒径均为20～80nm。
进一步，一种基于灵芝孢子的氟尿嘧啶靶向缓释药剂的制备方法，其特征在于，将制备得到的磁性灵芝孢子载体浸泡于氟尿嘧啶溶液中，在真空加载技术处理过后，从溶液中分离出所述磁性灵芝孢子载体，得到装载氟尿嘧啶药物的磁性灵芝孢子复合体5-FU@MGLS；干燥所述复合体，去除复合体中的溶液，得到氟尿嘧啶靶向缓释药剂。在所述氟尿嘧啶靶向缓释药剂进入体内之后，在外加磁场的作用下到达病变位置，从而通过灵芝孢子载体释放的药物对病变位置进行治疗。
进一步，所述的氟尿嘧啶溶液是在磷酸缓冲溶液中溶解配置而成。
进一步，所述的真空加载技术，是将50mg磁性灵芝孢子载体浸泡于10ml5mg/ml的氟尿嘧啶溶液中，并将悬浮液在250mmHg真空中保持15～30min，以达到平衡状态。
进一步，利用磁性分离或离心分离方法，从溶液中分离出所述装载氟尿嘧啶药物的磁性灵芝孢子复合体。
进一步，利用真空冷冻干燥法，去除所述装载氟尿嘧啶药物的磁性灵芝孢子复合体中的溶液。
进一步，所述的外加磁场是利用外加磁铁来控制MGLS的运动速度和运动方向。
灵芝孢子(GLS)为天然高分子中草药，其外壁主要是由孢粉素构成，其物理性质稳定，在化学溶剂中不易溶胀，而且具有较好的弹性；另外，大部分孢粉素囊壁具有均一的形貌结构，壁上还存在着大量用于物质传递的天然孔道，是制备中空微球的良好生物模板。因此本发明将Fe3O4纳米粒子包埋于生物相容性良好的灵芝孢子体内，作为装载抗癌药物氟尿嘧啶的靶向载体，具有很好的应用前景。
经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明公开提供了一种基于灵芝孢子的氟尿嘧啶靶向缓释药剂的制备方法，以生物相容性良好的天然高分子灵芝孢子为原料，采用在原料中添加含铁添加剂的方法，制备出了无机质含量极微小的磁性靶向载体，然后通过负载抗癌药物氟尿嘧啶，制备出了具有药物缓释性能，而且还具有潜在靶向能力的缓释药剂，这为氟尿嘧啶靶向缓释药剂的制备提供了新的方法。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
图1附图为本发明灵芝孢子和处理后的灵芝孢子扫描电子显微镜图像；
其中，(a)为灵芝孢子GLS；(b)为脱脂灵芝孢子；(c)和(d)分别表示用18％(w/v)氢氧化钾溶液处理24h后的灵芝孢子表面和截面形貌；(e)和(f)分别表示碱解后再用85％(v/v)正磷酸处理6h后的灵芝孢子表面和截面扫描电子显微镜图像；
图2附图为本发明实施例1制得的MGLS扫描电镜(a)及元素分析(b)图像；
图3附图为本发明实施例1对GLS(a)及MGLS(b)进行X-射线衍射对比分析图像；
图4附图为本发明实施例1分析了磁铁接触MGLS悬浮液10s后和接触30s后吸附到管壁一侧这一过程的图像；
其中，(a)为MGLS悬浮液；(b)为磁铁接触MGLS悬浮液10s后图像；(c)为磁铁接触MGLS悬浮液30s后图像；
图5附图为本发明对实施例1所制得的5-FU@MGLS扫描电镜(a)及元素分析(b)的图像；
图6附图为本发明实施例1对GLS(a)、空心灵芝孢子(b)、MGLS(c)、5-FU@MGLS(d)、5-FU(e)进行红外光谱对比分析图像；
图7附图为本发明实施例1对所制得的5-FU@MGLS在模拟不同人体环境中进行体外释放研究；
图8附图为本发明实施例1分析了不同浓度的GLS和MGLS对正常人胃粘膜细胞(GES-1)的细胞毒性作用的图像；
图9附图为本发明实施例1分析了不同浓度的MGLS、5-FU@MGLS和5-FU对人胃癌细胞(SGC-7901)的细胞毒性作用的图像；
图10附图为本发明实施例2研究了5-FU的初始浓度对载药量的影响；
图11附图为本发明实施例3研究了MGLS用量对载药量的影响；
图12附图为本发明实施例4研究了pH对载药量的影响；
图13附图为本发明实施例5研究了温度对载药量的影响。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1一种基于灵芝孢子的氟尿嘧啶靶向缓释药剂的制备方法
(1)空心灵芝孢子的制备：取10g灵芝孢子，将其与300ml 85％(v/v)丙酮溶液在70℃的回流装置中加热搅拌24h，回流结束后用去离子水冲洗三次，在70℃下烘干，即可得到脱脂后的灵芝孢子。然后将2g脱脂灵芝孢子与18％(w/v)氢氧化钾溶液(9g氢氧化钾颗粒充分混合在41ml去离子水中)在室温下浸泡混合24h；经过滤，用水和95％乙醇各清洗三次，放入冻干机内冻12h，即可得到碱解后的灵芝孢子；最后将其与60ml 85％(v/v)正磷酸溶液放入回流装置中70℃下加热搅拌6h，反应结束后，经过滤，用水和95％乙醇各清洗三次，放入冻干机内冻12h，即可得到由“脱脂-碱解-酸解”处理过后的空心灵芝孢子载体。
利用扫描电镜(SEM)观察GLS，丙酮脱脂处理后灵芝孢子，18％(w/v)氢氧化钾溶液处理后的灵芝孢子表面和截面，以及碱解处理后再进行磷酸酸解的灵芝孢子表面和截面；结果见图1。
从图1(a)中可见，灵芝孢子大小均匀，为4～5um×6～8um，且表面有许多大小均匀的凹陷，孔径为100～150nm。与图1(a)相比较，图1(b)所示的脱脂后的灵芝孢子在形态上保持不变，但因脱去脂质，微球表面看起来略显粗糙，表面的孔隙清晰可见。从图1(c)和(d)中可以看出，用18％(w/v)氢氧化钾溶液处理后灵芝孢子表面孔隙率较高，且结构较为完整；从截面图中可以看出孢子是由双层壁构成，且外壁多孔，双层壁间有许多支柱，具有天然的内部空腔，但内壁附着着一层纤维素层。图1(e、f)在经过磷酸回流处理后，表面孔隙变的更为明显，而且从截面图上可以发现内壁的纤维素层已被去除，内壁表面平整光滑且成孔，实现了灵芝孢子的内外贯通，这为后续客体材料的负载和填充提供了更大的负载空间。
(2)Fe3O4纳米粒子在孢子体内的合成：在搅拌条件下，将54.05g FeCl3·6H2O、19.88g FeCl2·4H2O、5ml 5M HCl、40ml去离子水和5ml 95％乙醇混合在100ml烧瓶中，加热至40℃直至盐完全溶解，得到混合溶液A；将5g灵芝孢子分散于50ml混合溶液A中，并在室温下搅拌12h(为了加速灵芝孢子中溶液A的填充，可先将悬浮液在250mmHg真空中保持20min，然后在室温下搅拌2h即可)；将灵芝孢子过滤，并在过滤器上用水快速冲洗，然后立即转移到30ml 1M氨水溶液中(溶液B)；含孢子悬浮液的氨溶液在35℃下温育12h；最后，再次用水和95％乙醇在过滤器上分别清洗三次，用磁铁收集已经被磁化的灵芝孢子，即可得到被磁性纳米粒子修饰的灵芝孢子(MGLS)。
对制得的MGLS的SEM图像及EDS元素进行分析，结果见图2。从图2(a)中可以看出空心灵芝孢子载体的表面附着着大小均一的纳米粒子，且合成的纳米粒子粒径均为20～80nm；图2(b)中EDS分析可知灵芝孢子中除了本身含有的C、O元素外还检测到了Fe元素的存在，且含量为12.50％，可以证实灵芝孢子表面附着的颗粒为Fe3O4纳米粒子，并通过内壁形成的孔道进入到了灵芝孢子体内部。
采用X-射线衍射技术(XRD)对GLS及MGLS进行表征，结果见图3。从该图中可见，图3(a)与(b)在2θ位于20左右的位置上均出现了较强的特征峰，这是灵芝孢子的特征峰。而在图3(b)中，2θ位于30.2，35.5，43.2，53.5，57.3和62.8的峰分别对应于面心立方Fe3O4的(220)，(311)，(400)，(422)，(511)和(440)衍射面，这与标准Fe3O4立方尖晶石结构呈现出的特征衍射峰的位相一致，因此可以推断出灵芝孢子表面及内部附着的颗粒为Fe3O4纳米粒子。
图4所示为MGLS悬浮液及与磁铁接触10s和接触30s后的图像，由图4(a)可知，MGLS可以很容易的分散在水中，且由于Fe3O4纳米粒子在空心灵芝孢子载体中的均匀分布，使用磁铁放置10s后部分MGLS已经被分离到离心管侧壁如图4(b)，30s后MGLS已经完全从混合溶液中分离到离心管的侧壁如图4(c)。该结果表明，MGLS具有良好的磁响应性。
(3)氟尿嘧啶靶向缓释药剂的制备：称取50mg上述制备的MGLS，浸泡于10ml 5mg/ml的氟尿嘧啶溶液中，并将悬浮液在250mmHg真空中保持20min，以达到平衡状态；利用离心机将产物分离，收集上清液后即可得到装载5-FU的灵芝孢子复合体(5-FU@MGLS)，并使用5ml去离子水在过滤器上快速清洗以去除表面结合的药物；利用真空低温干燥法，去除复合体中的溶液。
对制得的5-FU@MGLS的SEM图像和EDS元素进行分析，结果见图5。从图5(a)中可以看出，空心灵芝孢子载体表面孔隙已被物质填满，由于内外孔道的贯通，灵芝孢子内部也已含有这些物质；从图5(b)中看出，除了灵芝孢子本身具有的C、O元素外还检测出了N、F、Fe三种元素，因此可以证实灵芝孢子体表面及内部附着的物质是5-FU和Fe3O4纳米粒子。
图6为GLS(a)、空心灵芝孢子(b)、MGLS(c)、5-FU@MGLS(d)、5-FU(e)红外光谱对比分析图像。在3396cm-1的波段是由糖分子中的羟基形成多种氢键、O-H键及酰胺类N-H的伸缩振动吸收引起的。在2924cm-1和2850cm-1的波段主要是-CH2和-CH3的振动引起。1740cm-1和1640cm-1处均呈现出中强度的带，是由蛋白质、氨基酸及其盐类中酰胺键的羰基C＝O伸缩振动以及N-H面内弯曲振动频率与部分C-N键的伸缩振动频率偶合产生的吸收峰，为酰胺Ⅰ键特征峰。在1076cm-1和1037cm-1处出现很强的吸收分叉尖峰，为糖环内酯C-O-C强极性特征吸收峰。895cm-1处出现了一条弱峰，这是由于β-型吡喃环糖苷键C-H的弯曲振动引起的。这些特征峰均出现在了图6(a)、(b)、(c)中，均为灵芝孢子的特征峰，只是在不同阶段处理后峰强有所不同，其图6(c)中因为合成了磁性纳米粒子，所以在580cm-1处出现了Fe-O键的吸收峰。从图6(e)中可以看出，3070cm-1处为5-Fu环结构中N-H的伸缩振动吸收峰，1772cm-1和1674cm-1处为C＝O的伸缩振动吸收峰，1249cm-1为C-F的吸收峰，这些均为5-FU药物的特征峰，同时这些特征峰同样出现在了图6(d)图谱中，并且在图6(d)中的580cm-1处依然存在来自Fe3O4中Fe-O键的伸缩振动峰。这些图谱结果表明，MGLS表面含有大量的-NH2和-OH键为吸附客体材料提供了更多的位点，同样也证实了灵芝孢子表面及内部已成功负载了Fe3O4纳米粒子和5-FU药物。
分别称取100mg 5-FU@MGLS加入到50ml模拟体液(pH 7.4)和模拟胃液(pH 1.4)中，并在模拟人体环境37℃下的锥形瓶中以100r/min的速度摇动进行体外药物释放研究。在预先确定的时间间隔内，每次收集2ml释放介质，并向介质中添加等量的新鲜缓冲溶液以保证释放介质中溶剂的体积保持不变。然后使用紫外-可见分光光度计在266nm波长处测量出每次取样时药物释放的浓度，从而计算出药物的累计释放率，并绘制出体外释放曲线，参见图7。
根据图7图像可知，释放曲线大致可以分为突释、缓释和平衡释放三个阶段。其中，开始的突释阶段，药物释放量较大，释放速度较快，大约维持3～5h；随后进入缓释阶段，该阶段药物释放平稳，释放速度减缓，维持时间大约5～7h；平衡释放阶段，药物浓度变化不大，释药速率平缓，基本上达到了动态平衡状态。在模拟体液中的累计释放率达到了80.11％，而在胃液中的释放率同样也达到了67.14％，这些结果都验证了MGLS可以作为一种非常高效的药物载体材料。
图8所示为正常人胃粘膜细胞GES-1分别与不同浓度GLS和MGLS共培养48h后的细胞活性测试，由图可知两者的细胞活力均在90％以上，表明样品对GES-1细胞几乎无细胞毒性；而且GLS的细胞活力均在100％以上，说明GLS在本身对细胞的存活率无影响的前提下，对细胞的生长有少许的促进作用。
图9所示为人胃癌细胞SGC-7901与不同浓度的MGLS、5-FU@MGLS、5-FU分别共培养48h后的细胞活性测试，由图可知随着浓度的增加，MGLS对细胞的活力均在90％以上，说明MGLS对SGC-7901细胞无毒副作用；然而5-FU@MGLS和5-FU的细胞毒性随着5-FU浓度的增加而增加，这表明细胞毒性是由药物引起的，而不是载体系统引起的，且在相同的药物浓度下，由于5-FU@MGLS系统起到了缓慢释放的作用，因此释放5-FU的效果略低于游离5-FU。
实施例2不同初始浓度对载药量的影响
配置5-FU溶液的浓度为0.5mg/ml、1mg/ml、2mg/ml、3mg/ml、4mg/ml、5mg/ml、6mg/ml、7mg/ml、8mg/ml，准确称取0.05g MGLS分别放入离心管中，再分别加入10ml上述浓度的5-FU溶液，放置恒温水浴锅中振荡2h，待吸附平衡后，利用外加磁场分离，并测量分离后上清液中的吸光度从而计算其浓度，得到不同5-FU浓度对载药量的影响，结果参见图10。
图10实验结果表明，在相同质量的MGLS下，随着5-FU浓度的升高，载药量也逐渐增加，这是因为5-FU溶液浓度越高，溶液中的分子就会越多，这样MGLS上附着的药量也就越高，当达到载药量的上限时，即当5-FU浓度超过5mg/ml后，载药量逐渐趋于饱和，因此在5-FU浓度为5mg/ml时有最大载药量，为250.23mg/g。
实施例3不同MGLS用量对载药量的影响
准确称取0.01g、0.03g、0.05g、0.07g、0.09g的MGLS分别放入10ml浓度为5mg/ml的5-FU溶液中，放置恒温水浴锅中振荡2h，待吸附平衡后，利用外加磁场分离，并测量分离后上清液中的吸光度从而计算其浓度，得到不同微球用量对载药量的影响，结果参见图11。
图11实验结果表明，在相同浓度的5-FU溶液中，随着MGLS用量的增加载药量呈线性下降趋势，这是因为MGLS用量的增加提供了更多的负载位点，而5-FU溶液的浓度是一定的，所以负载的药量会随着MGLS用量的增多而下降。
实施例4不同pH对载药量的影响
分别用不同pH的缓冲液(5、6、7、8、9)配置浓度为5mg/ml的5-FU溶液，并分别选取10ml加入0.05g MGLS于离心管中，放置恒温水浴锅中振荡2h，待吸附平衡后，利用外加磁场分离，并测量分离后上清液中的吸光度从而计算其浓度，得到不同pH环境下对载药量的影响，结果参见图12。
图12实验结果表明，在其他条件不变，溶液环境呈中性(pH＝7)时具有最大载药量，但与最低载药量(pH＝9)相差不大，因此pH对载药量的影响并不显著。
实施例5不同温度对载药量的影响
配置5mg/ml的5-FU溶液于容量瓶中，选取10ml分别加入0.05g MGLS于离心管中，并将其分别放置在不同温度(20℃、30℃、40℃、50℃、60℃)下的恒温水浴锅中振荡2h，待吸附平衡后，利用外加磁场分离，并测量分离后上清液中的吸光度从而计算其浓度，得到不同温度环境下对载药量的影响，结果参见图13。
图13实验结果表明，从总体来看MGLS的载药量随着温度的增加而减弱，温度在30℃时的载药量最高，因此在室温环境下进行药物负载实验即可。
综上所述，本发明所述的技术方案具有操作简单，易于广泛应用的优点，所制备的磁性靶向载体以天然灵芝孢子为原料，生物相容性较好、磁性能稳定、无毒无害，可通过外加磁场控制载体移动的方向，到达靶向部位后，能够缓慢释放5-FU且速度可控，具有很好的应用前景。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

Claims (8)

1.一种磁性灵芝孢子载体的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：
(1)空心灵芝孢子载体的制备：通过丙酮脱脂、氢氧化钾及正磷酸通孔、扩孔对天然灵芝孢子进行预处理，得到空心灵芝孢子载体；
(2)Fe3O4纳米粒子在孢子体内的合成：通过化学共沉淀法将Fe3O4纳米粒子合成在灵芝孢子体表面及内部，得到磁性灵芝孢子载体。
2.根据权利要求1所述的一种磁性灵芝孢子载体的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述空心灵芝孢子载体的制备方法如下：
①将灵芝孢子与丙酮溶液在回流装置中进行回流混合，料液比为(5～10)：(150～300)，混合时间为12～24h，加热温度为40～80℃，反应结束后将样品置于50～80℃烘箱中烘10～30min，得到脱脂后的灵芝孢子；
②将脱脂灵芝孢子与18％(w/v)氢氧化钾溶液浸泡混合，料液比为(1～5)：(25～125)，混合时间为12～24h，在室温下进行，浸泡结束后，经过滤，用水和95％乙醇进行清洗，反应结束后将样品置于真空冷冻干燥机内冻干6～12h，得到碱解后的灵芝孢子；
③将碱解后的灵芝孢子与85％(v/v)的正磷酸溶液在回流装置中进行回流混合，料液比为(1～5)：(30～150)，混合时间为6～12h，加热温度为70℃；反应结束后，经过滤，用水和95％乙醇进行清洗；清洗后将样品置于真空冷冻干燥机内冻干6～12h，得到空心灵芝孢子载体。
3.根据权利要求1所述的一种磁性灵芝孢子载体的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述Fe3O4纳米粒子在孢子体内的合成方法如下：
①在搅拌条件下，将FeCl3·6H2O、FeCl2·4H2O、5M HCl、95％乙醇和去离子水混合，其中氯化铁与氯化亚铁的质量比为2.5～3:1，加热至40℃直至盐完全溶解，得到混合溶液A；
②将0.5～5g空心灵芝孢子载体分散于5～50ml混合溶液A中，并在室温下搅拌6～12h；将空心灵芝孢子载体过滤，并在过滤器上用水快速冲洗，然后立即转移到1M氨水溶液中；
③将含空心灵芝孢子载体悬浮液的氨溶液在35℃温育6～12h；用水和95％乙醇在过滤器上进行清洗，用磁铁收集已经被磁化的孢子，得到磁性灵芝孢子载体。
4.根据权利要求3所述的一种磁性灵芝孢子载体的制备方法，其特征在于，合成的Fe3O4纳米粒子粒径均为20～80nm。
5.一种基于灵芝孢子的氟尿嘧啶靶向缓释药剂的制备方法，其特征在于，将权利要求1-4任一项制备得到的磁性灵芝孢子载体浸泡于氟尿嘧啶溶液中，在真空加载技术处理过后，从溶液中分离出所述磁性灵芝孢子载体，得到装载氟尿嘧啶药物的磁性灵芝孢子复合体5-FU@MGLS；干燥所述复合体，去除复合体中的溶液，得到氟尿嘧啶靶向缓释药剂。
6.根据权利要求5所述的一种基于灵芝孢子的氟尿嘧啶靶向缓释药剂的制备方法，其特征在于，在磁性灵芝孢子负载氟尿嘧啶药物的过程中，将悬浮液在250mmHg真空中保持15～30min。
7.根据权利要求5所述的一种基于灵芝孢子的氟尿嘧啶靶向缓释药剂的制备方法，其特征在于，利用磁性分离或离心分离方法，从溶液中分离出所述装载氟尿嘧啶药物的磁性灵芝孢子复合体。
8.根据权利要求5所述的一种基于灵芝孢子的氟尿嘧啶靶向缓释药剂的制备方法，其特征在于，利用真空冷冻干燥法，去除所述装载氟尿嘧啶药物的磁性灵芝孢子复合体中的溶液。
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