CN110684756B - 烟粉虱MED隐种可溶性海藻糖酶及其基因BtTreh1和应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于农业生物技术领域，具体涉及烟粉虱MED隐种可溶性海藻糖酶及其基因BtTreh1和应用。本发明的烟粉虱MED隐种可溶性海藻糖酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明明确BtTreh1基因在烟粉虱MED温度耐受性中的作用，为进一步研究烟粉虱MED隐种的温度耐受性机理与抗寒关键物质海藻糖之间的关系及研究控制烟粉虱危害及扩散的方法提供依据。

Description

烟粉虱MED隐种可溶性海藻糖酶及其基因BtTreh1和应用

技术领域

本发明属于农业生物技术领域，具体涉及烟粉虱MED隐种可溶性海藻糖酶及其基因BtTreh1和应用。

背景技术

烟粉虱(Bemisia tabaci(Gennadius))属节肢动物门，昆虫纲，半翅目，粉虱科，小粉虱属，又称棉粉虱或甘薯粉虱。烟粉虱的最适发育温度为26～30℃，发育临界温度在10.8～12.5℃之间，致死高温区在37～42℃之间。17℃和35℃是烟粉虱正常生长发育的最低和最高的温度极限。较强的温度逆境适应能力是烟粉虱在世界范围内广泛分布的原因。随着温室效应的增加，全球气温逐年增高，烟粉虱MED隐种较强的温度逆境适应能力使其在不同地理环境下的成功适应，这已经广泛引起了人们对其入侵机制的理论探讨，对于其温度适应性的分子机制更是近几年来的研究热点之一。

对烟粉虱MED种在中国分布的时间及范围的调查发现，其入侵致我国短短十五年的时间便已扩散至绝大部分省市，其较强的温度适应能力与其体内抗逆物质的含量有着极大关联。

RNA干扰(RNA interference,RNAi)现象是一种进化上保守的抵御转基因或外来病毒侵犯的防御机制。将与靶基因的转录产物mRNA存在同源互补序列的双链RNA(doublestrand RNA,dsRNA)导入细胞后能特异性地降解该mRNA，从而产生相应的功能表型缺失。RNAi广泛存在于生物界，通过RNAi技术沉默昆虫体内某些基因，使昆虫的某些能力增强或丧失，也能在特定时间抑制其功能基因表达使昆虫的发育停留在某个阶段，进而达到利用或防治其危害的目的。由于烟粉虱个体体积小，注射dsRNA不易操作、费时等限制，而饲喂dsRNA具有简便、易于操作等特点而在烟粉虱研究中得以应用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种烟粉虱MED隐种可溶性海藻糖酶。

本发明的再一目的在于提供上述烟粉虱MED隐种可溶性海藻糖酶的编码基因BtTreh1。

本发明的再一目的在于提供含有上述编码基因的重组表达载体。

本发明的再一目的在于提供含有上述编码基因的重组菌株。

本发明的再一目的在于提供上述编码基因的应用。

根据本发明具体实施方式的烟粉虱MED隐种可溶性海藻糖酶，其氨基酸序列如SEQID NO.1所示：

MLWQTFPHLLARSANLLLSDQSKAGHNLHIFRLQLLSDHLFWPRRRVNRNNHYFAAGRRKAAALNAVCLSTSLDYNLIDDYNTNYLPSCYSKIYCDSELLHDVELAHIYPDSKTFVDKRMKFSEPYILSKYEELKAKNEGKPPSKEELVDFVSEHFEDGDELEKWDPPDFKPETTLMAKVSDEGYKKFLSGLQQVWKILARKIKPEVNENSDRYSLIYVPNGFCIPGGRFRELYYWDTYWIINGLLLSDMNDTAKGIIENLLSLVQKIGFIPNGSRVYYLNRSQPPLLIQMMNNYYKATNDFQFIKKNIKTLTKEFEWWQTNRKVKFIKDKKTYNMFRYYAPSNGPRPESYREDYEIAQTLPSESERTRWYTRIKSAAESGWDFSSRWFIKDGAGNGTLLDVHTPSIIPVDLNAFLHKNAVLLSEWWYMMGDKYRGKYFKEIAEKLLASINEVLWNENIGSWFDYDLINKQHRKYFFPSNIAPLWTESYSQPKNFMAAKVIEYIKREKIIKDDYTVHYHGIPSSLERTGQQWDFPNAWAPVQVFLIQGLDRTNVPQAQAIALKLAQDWVHSNYLGFQKTGFMYEKYNVEKAGDNGGGGEYESQISFGWSNGVVFEMMDRYATGLSSATLTR

上述氨基酸序列具有Treh1蛋白典型的结构特征：包括两个标签序列和一个甘氨酸富集区，其中第一个标签序列“PGGRFRELYYWDTY”位于226-239位点，第二个标签序列“QWDFPNAWAP”位于531-540位点，甘氨酸富集区位于595-600位点。

烟粉虱MED隐种可溶性海藻糖酶的编码基因BtTreh1，其基因组序列如SEQ IDNO.2所示：

GCTTTTTCTCACCATATGTAGGAAGTGCATAAGTTCAAGCTCCAAGGTTGCGATTCCGAAATTTATTGATGAAGTTTTTGTAAACTCCTATTTTGTTCTCTTCTTCCCTCTCAGCATTCAAACAACTCAAACCAAAGTGTACTAGCTCTTGTTTCTTCCCGTCCTCATCGTTTTTCATTCAGCAGATTCAATTCCTTGAAGTTCATCCTAAACTCAGTGTCCAATCACACTTTAAAAGAATGTTGTGGCAGACCTTCCCACACTTACTGGCCCGAAGTGCTAATCTACTTCTCAGCGATCAAAGCAAAGCCGGCCACAATTTGCACATCTTTCGGCTTCAACTCCTGTCAGACCACCTGTTTTGGCCACGCAGGCGAGTGAATAGGAACAATCACTATTTTGCAGCCGGAAGGAGAAAAGCAGCCGCATTAAATGCAGTTTGCTTATCAACAAGCCTTGATTACAATCTTATTGATGATTATAATACTAACTACTTACCCTCTTGTTACAGCAAAATCTACTGCGACAGTGAACTCTTGCATGATGTTGAACTGGCCCACATCTATCCTGACTCAAAGACCTTTGTGGACAAGCGGATGAAATTTTCTGAACCCTATATTCTGTCCAAATATGAAGAACTAAAGGCTAAGAATGAGGGAAAACCGCCTTCAAAAGAAGAGCTTGTCGATTTTGTCTCAGAGCACTTTGAAGATGGAGATGAACTCGAAAAGTGGGACCCGCCTGATTTTAAACCTGAAACAACTCTCATGGCCAAAGTTTCGGATGAAGGTTACAAAAAATTCCTGAGTGGACTACAACAAGTTTGGAAAATTCTAGCCCGAAAGATCAAACCAGAAGTGAATGAAAACAGTGATCGTTATTCATTGATATATGTTCCAAACGGCTTTTGCATTCCTGGTGGCAGGTTCCGAGAGCTGTACTATTGGGACACATACTGGATCATCAATGGACTCCTTTTGAGTGACATGAACGATACAGCCAAAGGAATCATTGAAAATCTACTAAGCCTTGTCCAAAAGATAGGTTTCATACCGAATGGCTCCAGAGTTTATTACTTGAACCGCTCACAACCTCCATTGCTAATCCAGATGATGAATAATTATTACAAAGCTACCAATGATTTTCAGTTCATCAAAAAAAATATCAAGACTTTGACAAAGGAGTTTGAATGGTGGCAGACGAACCGGAAAGTAAAATTTATCAAAGACAAAAAAACTTACAATATGTTCCGATATTATGCTCCCTCAAATGGACCAAGACCAGAATCTTACAGAGAGGATTATGAAATTGCTCAAACCCTTCCATCTGAAAGTGAGCGCACCCGATGGTATACTCGTATCAAGTCAGCAGCTGAAAGCGGGTGGGATTTCTCATCTAGATGGTTCATCAAAGACGGTGCAGGCAATGGCACACTTCTGGATGTTCACACGCCTAGTATAATACCTGTCGACTTAAATGCATTTCTCCACAAGAATGCTGTCTTACTGAGCGAATGGTGGTACATGATGGGCGATAAGTACCGAGGAAAGTACTTTAAGGAAATCGCAGAAAAACTTCTTGCTTCAATAAATGAGGTTTTATGGAATGAAAACATTGGATCCTGGTTTGACTATGACTTAATAAATAAACAGCACCGAAAATACTTTTTCCCTTCCAACATTGCCCCATTATGGACTGAGAGTTACTCTCAGCCGAAAAACTTCATGGCAGCCAAAGTCATTGAGTACATAAAACGGGAGAAAATCATCAAGGATGACTACACTGTTCACTATCATGGTATACCTTCTTCTTTGGAAAGGACAGGACAGCAATGGGACTTTCCCAACGCATGGGCCCCTGTTCAAGTGTTCTTGATTCAAGGCCTTGACCGCACCAATGTTCCCCAGGCGCAAGCAATCGCCTTGAAGCTAGCACAAGACTGGGTCCACTCCAACTACCTTGGTTTCCAAAAAACTGGTTTTATGTATGAAAAATACAATGTGGAAAAGGCAGGTGACAATGGTGGAGGTGGAGAGTATGAGTCTCAGATCAGTTTTGGATGGAGCAACGGAGTCGTTTTTGAAATGATGGATCGTTACGCCACAGGACTCTCCTCTGCAACCCTCACCAGATGATGGAGTGCTCTTCAGGCAGCCCTAAATGAGTGACTCAAGAAAGTCGTGGATAAGCAAATTGTGATATTTTCTAGCCTTTTAATGTTAAGTCTCTCCTTGACTGGGAAACAGAGTCAAGTAAAAAAAAAATTTAGCTCAGTTCCTACTTGAAGTACCTTGTTTTGCCGGACCGAAAGGTTTAGCCGATCTCTTTTAGTTAGTGTTTGCAACTTGAAGGTGTCAAAGATTTCTTCAATTCACACAATGTCTGCAAATATGATGAGGTAAAAGACTATGAAAGTTCAGAAAAAAACATTTTTTGACAGGACCTCTCCGCAGTATGTATGTATTCTCTGAATATCTTAGTTTCTTAAAAATTATATTTGTTTTTTCTGTTTGTTAAGTCAACAATGGCCATTTGTTACATAAGAACTCCAATTTCAACAAAATAGTACAATGAAATGCAAATTATTTCAGTAAAGACGTTTTAGATGAAAGTCTCTTTTGAGAGAAATATAAGTTCAAATGGGTTTTGCACAACTTTATCCTCTCCAGAATGCAAGACATTTGCGGACATTGGTTGCCTTAGGTAGATTTTTTGCTTTTGTTTGTAAAGTGTATAAAATAAATGTACATAAGTAAGTTTTTGTATCGCAGCTTGAGGCAATAATTTCAAAAAGGCCAAATTGAATTTAAATGCATGAACACCAGCAAATTAATAGGAGCATAGCTCAGCCATCAATTGATGTTTCTGCGATCAGTTAGAAGTACAGTCTTTATGACTTCTGCTGAATGTCAAGAGAGGAACTTGTTCACTTGAAACCAGACTTGATAATTTATTATTTATTCATTTGTCACGGCAGCTATGGCAAATTGTTGAAAACAATTTTGAATTTTAAAAAAAAATAATAAACACTTAAGTTCTTCTAGAAAAATTACTGAATTTGAACAAAAAATCACTTGTCTAGAGGTGCTTCTCTTCAAATGGTAAACCTCTAAATTCCAAAGTTTTAACTTTTGACTTTTTTAAAAATGTAGATTTTATCCGTGAAGTATTTTTGACAAGTTTTGCATTCAAGAAGGAATGCGTTTATAATCATTTCAATGTTGTACAGTTTAGTTCCTGTTTAGTCATATGTTTTTAATTTATTTTCAAGTCAAATTTTATATTGTTTGCATCTGTGTTTAAATTATGTTACTACTTAAACTGCAGAACCGTGCAAAGATTAAGGCAACAATTAGTTTCTTAAATTATTTGATGAGAGGGTTTGTAGCATGATATCTTGCAGTAGCAGGTACAACATTTTTATTTTTAAAACATAAAAGTTACCTATTTATTTTATCAATCCACTTGCAAGTGAAGTAATTCAAACAGGTAAAACTTATCAAAGAAAATGACAGATGATCATGGTAGACACTGAAAACCACCCTACTTTTTAAAGGAAATAAATTTAATTTTTTTAAATCTTCCATCAAAAAAAAGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAGTACTCTGCGTTGTTACCACTGCTTAAGGGCGATCCCAATCACTAGTGAATTCGCGGCCGCCTGCAGGTCGACCATATGGGAGAGCTCC

本发明还提供包含有上述烟粉虱MED隐种可溶性海藻糖酶的编码基因BtTreh1的重组表达载体和重组菌株。

根据本发明具体实施方式的降低烟粉虱温度耐受性的方法包括饲喂烟粉虱上述基因BtTreh1的dsRNA的步骤，其中，dsRNA由以下引物扩增得到：

BtTreh1-F：5’-TAATACGACTCACTATAGGGTCACCTGCCTTTTCCAC-3’，

BtTreh1-R：5’-TCCGATATTATGCTCCC-3’。

根据本发明具体实施方式的一种防治烟粉虱的药剂，其包括上述烟粉虱MED隐种可溶性海藻糖酶基因BtTreh1的dsRNA片段。

本发明的有益效果：

本发明从烟粉虱MED隐种中克隆到BtTreh1基因的cDNA，荧光定量PCR显示BtTreh1基因在MED隐种逆温下胁迫1h、3h时表达量均显著下降，而在胁迫5h后恢复对照的表达水平。饲喂BtTreh1基因dsRNA，使得烟粉虱MED隐种成虫的高温击倒时间显著减少，低温击倒恢复时间增加。

本发明明确了BtTreh1基因在烟粉虱MED隐种中的表达时间及该基因对MED隐种的温度耐受性所起关键的作用，为日后通过温度适应性控制烟粉虱危害的方法提供依据。

附图说明

图1显示BtTreh1基因在烟粉虱MED隐种中梯度温度下的表达模式分析；

图2显示饲喂BtTreh1基因dsRNA、dsEGFP和饲喂10％蔗糖溶液三个处理的表达量变化情况；

图3显示饲喂BtTreh1基因dsRNA、dsEGFP和饲喂10％蔗糖溶液3h后烟粉虱MED隐种成虫高温击倒时间；

图4显示饲喂BtTreh1基因dsRNA、dsEGFP和饲喂10％蔗糖溶液3h后烟粉虱MED隐种成虫低温击倒恢复时间。

具体实施方式

实施例1克隆烟粉虱MED隐种BtTreh1基因全长cDNA序列

1.1总RNA提取及cDNA合成

分别取不同温度胁迫条件下烟粉虱成虫200头放入1.5mL的离心管，液氮冷冻后利用研磨棒将其研成粉末，然后提取得到烟粉虱成虫总RNA，-80℃保存以备用。

利用反转录试剂盒(Super Script First-Strand SynthesisSystem)，反转录合成cDNA。

1.2 PCR扩增烟粉虱MED隐种BtTreh1

(1)设计PCR扩增烟粉虱MED隐种BtTreh1基因的中间片段引物：

BtBtTreh1-F：ACCTTCCCACACTTACTG

BtBtTreh1-R：TCACCTGCTTTTTCTACA

(2)以cDNA为模板，利用(1)所设引物，PCR扩增烟粉虱MED隐种BtTreh1基因的中间片段。

(3)回收目的片段，并测序；

1.3获得烟粉虱MED隐种BtTreh1基因5’RACE和3’RACE

(1)根据步骤2所获得的烟粉虱MED隐种BtTreh1基因的中间片段序列，设计5’RACE和3’RACE特异性引物，PCR扩增BtTreh1基因的5’和3’端序列：

5’RACE Inner Primer:CTTGGTCCATTTGAGGGAGCATA，

5’RACE Outer Primer:TATCTTTTGGACAAGGCTTAGTAG；

3’RACE Inner Primer:CTCAAATGGACCAAGACCAGAAT，

3’RACE Outer Primer:CTCAAATGGACCAAGACCAGAAT；

(2)采用SMARTerTM RACE cDNA Amplification Kit(Clonetch)试剂盒，获得BtTreh1基因的cDNA序列全长,得到BtTreh1基因3709bp序列，所得的基因具有如SEQ IDNo.2所示的核苷酸序列，编码630个氨基酸，该基因所编码的酶具有如SEQ ID No.1所示的氨基酸序列。

实施例2分析BtTreh1基因的表达特性

2.1分析烟粉虱MED隐种中不同温度下表达模式

(1)提取不同温度胁迫下烟粉虱成虫的RNA及cDNA合成

选取初羽化的MED隐种成虫，分别在0、12、26、35、40℃下对烟粉虱成虫进行胁迫处理。各3个生物学重复，共3000头成虫，胁迫结束后立即置于液氮中冷冻3分钟后-80℃保存。按照实例1的方法提取RNA并反转录成cDNA。

(2)荧光定量PCR检测不同组织表达量

设计荧光定量PCR的BtBtTreh1基因和两个内参基因(EF1-α、β-tublin)的引物：

BtTreh1-F:GGTGAGGGTTGCAGAGGAG，

BtTreh1-R:ATGTGGAAAAGGCAGGTGA；

EF1-α-F:TAGCCTTGTGCCAATTTCCG，

EF1-α-R:CCTTCAGCATTACCGTCC；

β-tublin-F：TGTCAGGAGTAACGACGTGTTTG，

β-tublin-R：TTCGGGAACGGTAAGTGCTC；

利用上述引物进行PCR扩增，用2^-ΔΔCt方法计算基因相对表达量。采用SPSS16.0统计软件分析。表达量的比较采用Fisher’s least significant difference(平均数±标准误(Means±SE)表示数据，P<0.05。

如图1显示，实时荧光定量PCR结果表明，BtTreh1在高温和低温胁迫1h和3h后表达量均显著下调，而在胁迫5h后恢复对照的表达水平。

2.2BtTreh1基因的dsRNA处理对烟粉虱MED隐种耐热性的影响

(1)合成dsRNA

设计合成加上T7启动子(下划线所示序列)的引物序列：

T7+BtTreh1-F：5’-TAATACGACTCACTATAGGGTCACCTGCCTTTTCCAC-3’，

BtTreh1-R：5’-TCCGATATTATGCTCCC-3’。

总RNA提取及cDNA合成方法同实施例1。

T7引物PCR扩增、产物纯化，纯化所得的PCR产物即为合成dsRNA的模板。使用试剂盒合成和纯化dsRNA，按照试剂盒说明书进行操作。

(2)dsRNA饲喂

Parafilm膜预先用DEPC水处理以去除RNA酶。在浓度为10％的蔗糖液中加入dsRNA，浓度为0.3～0.5μg/μL。根据实验需求，对Parafilm膜夹营养液法做了相应的改进：取初羽化烟粉虱成虫约200头，放入两端通透的玻璃管中，用双层Parafilm覆盖玻璃管上端，在两膜之间加入浓度为10％的蔗糖溶液200μL，并加入dsRNA，并使其终浓度为0.3-0.5μg/μL，玻璃管下端用纱布覆上，保持通风透气。玻璃管周围及下端用黑色塑料包裹，使烟粉虱向顶端Paraflim膜聚集更好的取食dsRNA，将装置放入人工气候箱，温度26±0.5℃，24h光照，相对湿度为60-70％，饲喂3h BtBtTreh1基因的dsRNA后，将烟粉虱收集于指型管中，一组放入预热的高温水浴锅进行热击倒，并开始记录至烟粉虱不能直立站立的时间，处理温度为45℃。另一组放入低温水浴锅中进行冷击倒十分钟后取出记录击倒后恢复时间，处理温度为-5℃。以饲喂dsEGFP且灭菌处理过的10％的蔗糖溶液的烟粉虱作为阳性对照，和不含dsRNA且灭菌处理过的10％的蔗糖溶液的烟粉虱作为阴性对照，每组3个重复。

利用SPSS16.0统计软件分析饲喂不同溶液后烟粉虱MED隐种高温击倒时间、冷击倒恢复时间。

结果如图2所示，饲喂BtTreh1基因dsRNA的烟粉虱MED隐种的基因表达量显著低于饲喂dsEGFP组和蔗糖组的基因表达量。

结果如图3所示，饲喂BtTreh1基因dsRNA的烟粉虱MED隐种的击倒时间显著低于饲喂dsEGFP组和蔗糖组的击倒时间(P<0.05)。

结果如图4所示，饲喂BtTreh1基因dsRNA的烟粉虱MED隐种的冷击倒恢复时间显著高于饲喂dsEGFP组和蔗糖组的冷击倒恢复时间。

因此，本发明BtTreh1基因在烟粉虱MED隐种高温及低温耐受性中均起着关键作用。

序列表

<110> 中国农业科学院植物保护研究所

<120> 烟粉虱MED 隐种可溶性海藻糖酶及其基因BtTreh1和应用

<160> 4

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 631

<212> PRT

<213> 烟粉虱(Bemisia tabaci Gennadius)

<400> 1

Met Leu Trp Gln Thr Phe Pro His Leu Leu Ala Arg Ser Ala Asn Leu

1 5 10 15

Leu Leu Ser Asp Gln Ser Lys Ala Gly His Asn Leu His Ile Phe Arg

20 25 30

Leu Gln Leu Leu Ser Asp His Leu Phe Trp Pro Arg Arg Arg Val Asn

35 40 45

Arg Asn Asn His Tyr Phe Ala Ala Gly Arg Arg Lys Ala Ala Ala Leu

50 55 60

Asn Ala Val Cys Leu Ser Thr Ser Leu Asp Tyr Asn Leu Ile Asp Asp

65 70 75 80

Tyr Asn Thr Asn Tyr Leu Pro Ser Cys Tyr Ser Lys Ile Tyr Cys Asp

85 90 95

Ser Glu Leu Leu His Asp Val Glu Leu Ala His Ile Tyr Pro Asp Ser

100 105 110

Lys Thr Phe Val Asp Lys Arg Met Lys Phe Ser Glu Pro Tyr Ile Leu

115 120 125

Ser Lys Tyr Glu Glu Leu Lys Ala Lys Asn Glu Gly Lys Pro Pro Ser

130 135 140

Lys Glu Glu Leu Val Asp Phe Val Ser Glu His Phe Glu Asp Gly Asp

145 150 155 160

Glu Leu Glu Lys Trp Asp Pro Pro Asp Phe Lys Pro Glu Thr Thr Leu

165 170 175

Met Ala Lys Val Ser Asp Glu Gly Tyr Lys Lys Phe Leu Ser Gly Leu

180 185 190

Gln Gln Val Trp Lys Ile Leu Ala Arg Lys Ile Lys Pro Glu Val Asn

195 200 205

Glu Asn Ser Asp Arg Tyr Ser Leu Ile Tyr Val Pro Asn Gly Phe Cys

210 215 220

Ile Pro Gly Gly Arg Phe Arg Glu Leu Tyr Tyr Trp Asp Thr Tyr Trp

225 230 235 240

Ile Ile Asn Gly Leu Leu Leu Ser Asp Met Asn Asp Thr Ala Lys Gly

245 250 255

Ile Ile Glu Asn Leu Leu Ser Leu Val Gln Lys Ile Gly Phe Ile Pro

260 265 270

Asn Gly Ser Arg Val Tyr Tyr Leu Asn Arg Ser Gln Pro Pro Leu Leu

275 280 285

Ile Gln Met Met Asn Asn Tyr Tyr Lys Ala Thr Asn Asp Phe Gln Phe

290 295 300

Ile Lys Lys Asn Ile Lys Thr Leu Thr Lys Glu Phe Glu Trp Trp Gln

305 310 315 320

Thr Asn Arg Lys Val Lys Phe Ile Lys Asp Lys Lys Thr Tyr Asn Met

325 330 335

Phe Arg Tyr Tyr Ala Pro Ser Asn Gly Pro Arg Pro Glu Ser Tyr Arg

340 345 350

Glu Asp Tyr Glu Ile Ala Gln Thr Leu Pro Ser Glu Ser Glu Arg Thr

355 360 365

Arg Trp Tyr Thr Arg Ile Lys Ser Ala Ala Glu Ser Gly Trp Asp Phe

370 375 380

Ser Ser Arg Trp Phe Ile Lys Asp Gly Ala Gly Asn Gly Thr Leu Leu

385 390 395 400

Asp Val His Thr Pro Ser Ile Ile Pro Val Asp Leu Asn Ala Phe Leu

405 410 415

His Lys Asn Ala Val Leu Leu Ser Glu Trp Trp Tyr Met Met Gly Asp

420 425 430

Lys Tyr Arg Gly Lys Tyr Phe Lys Glu Ile Ala Glu Lys Leu Leu Ala

435 440 445

Ser Ile Asn Glu Val Leu Trp Asn Glu Asn Ile Gly Ser Trp Phe Asp

450 455 460

Tyr Asp Leu Ile Asn Lys Gln His Arg Lys Tyr Phe Phe Pro Ser Asn

465 470 475 480

Ile Ala Pro Leu Trp Thr Glu Ser Tyr Ser Gln Pro Lys Asn Phe Met

485 490 495

Ala Ala Lys Val Ile Glu Tyr Ile Lys Arg Glu Lys Ile Ile Lys Asp

500 505 510

Asp Tyr Thr Val His Tyr His Gly Ile Pro Ser Ser Leu Glu Arg Thr

515 520 525

Gly Gln Gln Trp Asp Phe Pro Asn Ala Trp Ala Pro Val Gln Val Phe

530 535 540

Leu Ile Gln Gly Leu Asp Arg Thr Asn Val Pro Gln Ala Gln Ala Ile

545 550 555 560

Ala Leu Lys Leu Ala Gln Asp Trp Val His Ser Asn Tyr Leu Gly Phe

565 570 575

Gln Lys Thr Gly Phe Met Tyr Glu Lys Tyr Asn Val Glu Lys Ala Gly

580 585 590

Asp Asn Gly Gly Gly Gly Glu Tyr Glu Ser Gln Ile Ser Phe Gly Trp

595 600 605

Ser Asn Gly Val Val Phe Glu Met Met Asp Arg Tyr Ala Thr Gly Leu

610 615 620

Ser Ser Ala Thr Leu Thr Arg

625 630

<210> 2

<211> 3709

<212> DNA

<213> 烟粉虱(Bemisia tabaci Gennadius)

<400> 2

gctttttctc accatatgta ggaagtgcat aagttcaagc tccaaggttg cgattccgaa 60

atttattgat gaagtttttg taaactccta ttttgttctc ttcttccctc tcagcattca 120

aacaactcaa accaaagtgt actagctctt gtttcttccc gtcctcatcg tttttcattc 180

agcagattca attccttgaa gttcatccta aactcagtgt ccaatcacac tttaaaagaa 240

tgttgtggca gaccttccca cacttactgg cccgaagtgc taatctactt ctcagcgatc 300

aaagcaaagc cggccacaat ttgcacatct ttcggcttca actcctgtca gaccacctgt 360

tttggccacg caggcgagtg aataggaaca atcactattt tgcagccgga aggagaaaag 420

cagccgcatt aaatgcagtt tgcttatcaa caagccttga ttacaatctt attgatgatt 480

ataatactaa ctacttaccc tcttgttaca gcaaaatcta ctgcgacagt gaactcttgc 540

atgatgttga actggcccac atctatcctg actcaaagac ctttgtggac aagcggatga 600

aattttctga accctatatt ctgtccaaat atgaagaact aaaggctaag aatgagggaa 660

aaccgccttc aaaagaagag cttgtcgatt ttgtctcaga gcactttgaa gatggagatg 720

aactcgaaaa gtgggacccg cctgatttta aacctgaaac aactctcatg gccaaagttt 780

cggatgaagg ttacaaaaaa ttcctgagtg gactacaaca agtttggaaa attctagccc 840

gaaagatcaa accagaagtg aatgaaaaca gtgatcgtta ttcattgata tatgttccaa 900

acggcttttg cattcctggt ggcaggttcc gagagctgta ctattgggac acatactgga 960

tcatcaatgg actccttttg agtgacatga acgatacagc caaaggaatc attgaaaatc 1020

tactaagcct tgtccaaaag ataggtttca taccgaatgg ctccagagtt tattacttga 1080

accgctcaca acctccattg ctaatccaga tgatgaataa ttattacaaa gctaccaatg 1140

attttcagtt catcaaaaaa aatatcaaga ctttgacaaa ggagtttgaa tggtggcaga 1200

cgaaccggaa agtaaaattt atcaaagaca aaaaaactta caatatgttc cgatattatg 1260

ctccctcaaa tggaccaaga ccagaatctt acagagagga ttatgaaatt gctcaaaccc 1320

ttccatctga aagtgagcgc acccgatggt atactcgtat caagtcagca gctgaaagcg 1380

ggtgggattt ctcatctaga tggttcatca aagacggtgc aggcaatggc acacttctgg 1440

atgttcacac gcctagtata atacctgtcg acttaaatgc atttctccac aagaatgctg 1500

tcttactgag cgaatggtgg tacatgatgg gcgataagta ccgaggaaag tactttaagg 1560

aaatcgcaga aaaacttctt gcttcaataa atgaggtttt atggaatgaa aacattggat 1620

cctggtttga ctatgactta ataaataaac agcaccgaaa atactttttc ccttccaaca 1680

ttgccccatt atggactgag agttactctc agccgaaaaa cttcatggca gccaaagtca 1740

ttgagtacat aaaacgggag aaaatcatca aggatgacta cactgttcac tatcatggta 1800

taccttcttc tttggaaagg acaggacagc aatgggactt tcccaacgca tgggcccctg 1860

ttcaagtgtt cttgattcaa ggccttgacc gcaccaatgt tccccaggcg caagcaatcg 1920

ccttgaagct agcacaagac tgggtccact ccaactacct tggtttccaa aaaactggtt 1980

ttatgtatga aaaatacaat gtggaaaagg caggtgacaa tggtggaggt ggagagtatg 2040

agtctcagat cagttttgga tggagcaacg gagtcgtttt tgaaatgatg gatcgttacg 2100

ccacaggact ctcctctgca accctcacca gatgatggag tgctcttcag gcagccctaa 2160

atgagtgact caagaaagtc gtggataagc aaattgtgat attttctagc cttttaatgt 2220

taagtctctc cttgactggg aaacagagtc aagtaaaaaa aaaatttagc tcagttccta 2280

cttgaagtac cttgttttgc cggaccgaaa ggtttagccg atctctttta gttagtgttt 2340

gcaacttgaa ggtgtcaaag atttcttcaa ttcacacaat gtctgcaaat atgatgaggt 2400

aaaagactat gaaagttcag aaaaaaacat tttttgacag gacctctccg cagtatgtat 2460

gtattctctg aatatcttag tttcttaaaa attatatttg ttttttctgt ttgttaagtc 2520

aacaatggcc atttgttaca taagaactcc aatttcaaca aaatagtaca atgaaatgca 2580

aattatttca gtaaagacgt tttagatgaa agtctctttt gagagaaata taagttcaaa 2640

tgggttttgc acaactttat cctctccaga atgcaagaca tttgcggaca ttggttgcct 2700

taggtagatt ttttgctttt gtttgtaaag tgtataaaat aaatgtacat aagtaagttt 2760

ttgtatcgca gcttgaggca ataatttcaa aaaggccaaa ttgaatttaa atgcatgaac 2820

accagcaaat taataggagc atagctcagc catcaattga tgtttctgcg atcagttaga 2880

agtacagtct ttatgacttc tgctgaatgt caagagagga acttgttcac ttgaaaccag 2940

acttgataat ttattattta ttcatttgtc acggcagcta tggcaaattg ttgaaaacaa 3000

ttttgaattt taaaaaaaaa taataaacac ttaagttctt ctagaaaaat tactgaattt 3060

gaacaaaaaa tcacttgtct agaggtgctt ctcttcaaat ggtaaacctc taaattccaa 3120

agttttaact tttgactttt ttaaaaatgt agattttatc cgtgaagtat ttttgacaag 3180

ttttgcattc aagaaggaat gcgtttataa tcatttcaat gttgtacagt ttagttcctg 3240

tttagtcata tgtttttaat ttattttcaa gtcaaatttt atattgtttg catctgtgtt 3300

taaattatgt tactacttaa actgcagaac cgtgcaaaga ttaaggcaac aattagtttc 3360

ttaaattatt tgatgagagg gtttgtagca tgatatcttg cagtagcagg tacaacattt 3420

ttatttttaa aacataaaag ttacctattt attttatcaa tccacttgca agtgaagtaa 3480

ttcaaacagg taaaacttat caaagaaaat gacagatgat catggtagac actgaaaacc 3540

accctacttt ttaaaggaaa taaatttaat ttttttaaat cttccatcaa aaaaaagaaa 3600

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa gtactctgcg ttgttaccac tgcttaaggg cgatcccaat 3660

cactagtgaa ttcgcggccg cctgcaggtc gaccatatgg gagagctcc 3709

<210> 3

<211> 37

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

taatacgact cactataggg tcacctgcct tttccac 37

<210> 4

<211> 17

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

tccgatatta tgctccc 17

Claims (1)

1.降低烟粉虱温度耐受性的方法，其特征在于，所述方法包括饲喂烟粉虱可溶性海藻糖酶基因BtTreh1的dsRNA的步骤，

所述可溶性海藻糖酶基因BtTreh的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，

所述dsRNA由以下引物扩增得到：

BtTreh1-F：5’-TAATACGACTCACTATAGGGTCACCTGCCTTTTCCAC-3’，

BtTreh1-R：5’-TCCGATATTATGCTCCC-3’，

其中，dsRNA的浓度为0.3～0.5μg/μL。

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