CN110684086B - 铜离子检测用荧光蛋白及其编码核苷酸序列和应用 - Google Patents
铜离子检测用荧光蛋白及其编码核苷酸序列和应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了一种铜离子检测用荧光蛋白及其编码核苷酸序列和应用，涉及分子生物学技术领域，该Cu2+检测用荧光蛋白包括如Seq No.01所示的氨基酸序列。该蛋白可以高效的结合藻红色素PEB，发射强烈的橙色荧光，同时上述Cu2+检测用荧光蛋白对铜离子有特异性响应，可以选择性的被铜离子淬灭，而对其它离子基本没有影响。此外，该Cu2+检测用荧光蛋白还有较强的耐盐性，有效缓解了现有铜离子检测用荧光蛋白在高盐浓度下失去效用的问题。
Description
技术领域
本发明涉及分子生物学技术领域，尤其是涉及一种铜离子检测用荧光蛋白及其编码核苷酸序列和应用。
背景技术
重金属的检测和定量对于环境监测和生物临床毒理学检测是非常重要的。现有技术中，某些荧光蛋白由于蛋白质某个位点结合重金属使得发色团微环境的改变，造成荧光淬灭的效应，进而用来作为重金属的生物传感器，在一定的范围内，荧光蛋白的荧光强度取决于周围的重金属浓度。故可以建立起重金属和荧光蛋白荧光强度的关系，用荧光强度的淬灭效应反映重金属的浓度。
但是，目前已报道的荧光蛋白，例如：红色荧光蛋白DsRed，iq-Emerald，Dronpa，绿色荧光蛋白GFP等，在高盐浓度下荧光发射都会很快淬灭。使得这些蛋白质对高盐废水、盐碱地土壤的重金属检测失去效用。故发展耐盐的荧光蛋白并用于蛋白质荧光传感器具有重要的价值。
铜具有重要的生物学功能，但是过量会严重的危害到人类健康。因此，研究开发一种可以在高盐浓度下对重金属铜进行浓度检测的荧光检测产品，变得十分必要与迫切。
有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的目的在于提供一种Cu2+检测用荧光蛋白及其应用，本发明通过利用重组共表达载体的方法将编码Cu2+检测用荧光蛋白的核苷酸序列和显色底物核苷酸序列转入宿主细胞诱导表达，得到Cu2+检测用荧光蛋白。该荧光蛋白可以广泛应用于制备高盐环境下Cu2+荧光检测产品中。
为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
本发明提供的一种Cu2+检测用荧光蛋白，所述Cu2+检测用荧光蛋白包括如SeqNo.01所示的氨基酸序列。
本发明提供的一种编码如上述Cu2+检测用荧光蛋白的核苷酸序列。
进一步的，所述核苷酸序列如Seq No.02所示。
本发明提供的一种重组共表达载体，所述重组共表达载体包含上述核苷酸序列和显色底物核苷酸序列。
进一步的，所述显色底物核苷酸序列包括藻红色素合成酶编码基因ho1-pebS。
更进一步的，所述藻红色素合成酶编码基因ho1-pebS的核苷酸序列如Seq No.03所示。
进一步的，所述重组共表达载体为原核细胞重组表达载体；
优选地，所述原核细胞重组表达载体包括pETDuet-1、pACYCDuet、或pCDFDuet中的任意一种；
优选地，所述原核细胞重组表达载体为pET Duet-1。
本发明提供的一种宿主细胞，所述宿主细胞包含上述重组共表达载体；
优选地，所述宿主细胞为大肠杆菌；
优选地，所述大肠杆菌为E.coli BL21(DE3)。
本发明提供的一种上述Cu2+检测用荧光蛋白的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
首先利用重组共表达载体将编码上述Cu2+检测用荧光蛋白的核苷酸序列和显色底物核苷酸序列转入宿主细胞诱导表达，得到Cu2+检测用荧光蛋白。
进一步的，所述制备方法还包括对Cu2+检测用荧光蛋白进行纯化的步骤；
进一步的，所述制备方法具体步骤如下：
(a)、获取编码上述Cu2+检测用荧光蛋白的核苷酸序列和藻红色素合成酶编码基因ho1-pebS；
(b)、将编码上述Cu2+检测用荧光蛋白的核苷酸序列和藻红色素合成酶编码基因ho1-pebS与原核细胞重组表达载体结合，得到重组共表达载体；
(c)、将重组共表达载体转入宿主细胞诱导表达，纯化，得Cu2+检测用荧光蛋白。
本发明提供的上述Cu2+检测用荧光蛋白、核苷酸序列、重组共表达载体、宿主细胞在制备高盐环境下Cu2+荧光检测产品中的应用；
优选地，所述高盐环境为1～5mol/L的NaCl盐溶液环境。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
本发明提供的Cu2+检测用荧光蛋白，该Cu2+检测用荧光蛋白包括如SeqNo.01所示的氨基酸序列。上述氨基酸序列是一种从盐泽螺旋藻中提取得到的红/绿型蓝细菌光敏色素的GAF结构域蛋白，该蛋白可以高效的结合藻红色素PEB，发射强烈的橙色荧光，经计算该荧光蛋白的荧光量子产率为0.99，比常用的GFP家族要高很多。同时上述Cu2+检测用荧光蛋白对铜离子有特异性响应，可以选择性的被铜离子淬灭，而对其它离子基本没有影响。此外，该Cu2+检测用荧光蛋白还有较强的耐盐性，有效缓解了现有铜离子检测用荧光蛋白在高盐浓度下失去效用的问题。
本发明提供的核苷酸序列，该核苷酸序列用于编码上述Cu2+检测用荧光蛋白，本发明提供的重组共表达载体和宿主细胞包括上述核苷酸序列，可以用于上述Cu2+检测用荧光蛋白的表达。
本发明提供的上述Cu2+检测用荧光蛋白、核苷酸、重组共表达载体以及宿主细胞可广泛应用于高盐环境下Cu2+荧光检测产品的制备中。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明实施例2提供的重组共表达载体构件图；
图2为本发明试验例1提供的Cu2+检测用荧光蛋白的荧光光谱图；
图3为本发明试验例1提供的Cu2+检测用荧光蛋白的荧光淬灭率图；
图4为本发明试验例2提供的Cu2+检测用荧光蛋白对不同浓度Cu2+响应的荧光光谱；
图5为本发明试验例2提供的Cu2+检测用荧光蛋白在不同盐浓度下对不同浓度的Cu2+的荧光淬灭率。
具体实施方式
下面将结合附图对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
根据本发明的一个方面，一种Cu2+检测用荧光蛋白，所述Cu2+检测用荧光蛋白包括如Seq No.01所示的氨基酸序列。
本发明提供的Cu2+检测用荧光蛋白，该Cu2+检测用荧光蛋白包括如Seq No.01所示的氨基酸序列。上述氨基酸序列是一种从盐泽螺旋藻中提取得到的红/绿型蓝细菌光敏色素的GAF结构域蛋白，该蛋白可以高效的结合藻红色素PEB，发射强烈的橙色荧光，经计算该荧光蛋白的荧光量子产率为0.99，比常用的GFP家族要高很多。同时上述Cu2+检测用荧光蛋白对铜离子有特异性响应，可以选择性的被铜离子淬灭，而对其它离子基本没有影响。此外，该Cu2+检测用荧光蛋白还有较强的耐盐性，有效缓解了现有铜离子检测用荧光蛋白在高盐浓度下失去效用的问题。
根据本发明的一个方面，一种编码如上述Cu2+检测用荧光蛋白的核苷酸序列。
在本发明的一种优选实施方式中，所述核苷酸序列如Seq No.02所示。
根据本发明的一个方面，一种重组共表达载体，所述重组共表达载体包含上述核苷酸序列和显色底物核苷酸序列。
本发明提供的重组共表达载体，用于Cu2+检测用荧光蛋白的表达。
在本发明的一种优选实施方式中，所述显色底物核苷酸序列包括藻红色素合成酶编码基因ho1-pebS；
优选地，所述藻红色素合成酶编码基因ho1-pebS的核苷酸序列如Seq No.03所示。
在本发明的一种优选实施方式中，所述重组共表达载体为原核细胞重组表达载体；
在上述优选实施方式中，所述原核细胞重组表达载体包括pETDuet-1、pACYCDuet、或pCDFDuet中的任意一种；
优选地，所述原核细胞重组表达载体为pET Duet-1。
根据本发明的一个方面，一种宿主细胞，所述宿主细胞包含上述重组共表达载体；
本发明提供的宿主细胞，用于Cu2+检测用荧光蛋白的表达。
在上述优选实施方式中，所述宿主细胞为大肠杆菌；
优选地，所述大肠杆菌为E.coli BL21(DE3)。
根据本发明的一个方面，一种上述Cu2+检测用荧光蛋白的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
首先利用重组共表达载体将编码上述Cu2+检测用荧光蛋白的核苷酸序列和显色底物核苷酸序列转入宿主细胞诱导表达，得到Cu2+检测用荧光蛋白。
本发明提供的Cu2+检测用荧光蛋白的制备方法，该制备方法通过基因工程的方法将编码上述Cu2+检测用荧光蛋白的核苷酸序列和显色底物核苷酸序列转入宿主细胞诱导表达，得到Cu2+检测用荧光蛋白。该制备方法可以大规模的生产Cu2+检测用荧光蛋白，具有生产效率高的优势。
在本发明的一种优选实施方式中，所述制备方法还包括对Cu2+检测用荧光蛋白进行纯化的步骤；
在本发明的一种优选实施方式中，所述制备方法具体步骤如下：
(a)、获取编码上述Cu2+检测用荧光蛋白的核苷酸序列和藻红色素合成酶编码基因ho1-pebS；
(b)、将编码上述Cu2+检测用荧光蛋白的核苷酸序列和藻红色素合成酶编码基因ho1-pebS与原核细胞重组表达载体结合，得到重组共表达载体；
(c)、将重组共表达载体转入宿主细胞诱导表达，纯化，得Cu2+检测用荧光蛋白。
优选地，步骤(c)诱导表达为当表达培养液的最大激发波长为520nm，最大荧光发射波长为555nm时，即为诱导表达完成。
根据本发明的一个方面，上述Cu2+检测用荧光蛋白、核苷酸序列、重组共表达载体、宿主细胞在制备高盐环境下Cu2+荧光检测产品中的应用；
本发明提供的上述Cu2+检测用荧光蛋白、核苷酸序列、重组共表达载体以及宿主细胞可广泛应用于高盐环境下Cu2+荧光检测产品的制备中。
在上述优选实施方式中，所述高盐环境为1～5mol/L的NaCl盐溶液环境。
作为一种优选的实施方式，上述Cu2+检测用荧光蛋白可以用于高盐环境下(1～5mol/L的NaCl)水体和土壤中Cu2+的检测，也可用于生物体内Cu2+的检测，特别是嗜盐生物的体内荧光标记和检测等。
下面将结合实施例和效果例对本发明的技术方案进行进一步地说明。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径购买得到。
实施例1核苷酸序列的获取：
利用PCR技术，设计引物从盐泽螺旋藻S.subsalsa FACHB351中扩增蓝细菌光敏色素SPI1085g2的DNA片段；
上游引物序列为：
5’-CTAGAGCTCTTCCCTCGAAATTGAGCAGATTTTCC-3’；
下游引物序列为：
5-GTTAAGCTTAGCGGGTTTTGGCTAATAATTCGGC-3’。
并在上下游引物上分别设计酶切位点SacI和HindⅢ。PCR产物用SacI和HindⅢ双酶切获取纯化的DNA片段，与SacI和HindⅢ双酶切的载体pETDuet-1连接，构建表达载体pETDuet-SPI1085g2。对SPI1085g2进行测序，获得编码Cu2+检测用荧光蛋白的核苷酸序列。
实施例2重组共表达载体的构建：
如图1所示，将血红素氧化酶基因ho1和胆绿素还原酶基因pebS融合，通过Bgl II和XhoI构建到表达载体pETDuet-SPI1085g2的第二个多克隆位点上，最终构建得到包含Cu2+检测用荧光蛋白的核苷酸序列和显色底物核苷酸序列的重组共表达载体pETDuet-SPI1085g2-ho1:pebS。
实施例3表达载体的转化：
将重组共表达载体pETDuet-SPI1085g2-ho1:pebS转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞，冰浴30min。42℃水浴锅中热休克90s，加入240μL预热过的LB液体培养基，移液枪轻轻吹吸使之悬浮，37℃条件下150rpm振荡培养45-60min，取适量细菌涂布于含有氨苄抗生素的固体培养基，放入37℃恒温培养箱中培养12-14h，即获得包含pETDuet-SPI1085g2-ho1:pebS的转化子质粒。
实施例4诱导表达：
将实施例3获得的重组质粒pETDuet-SPI1085g2-ho1:pebS加入含有含氨苄抗生素(100μg/mL)的LB液体培养基，37℃振荡培养至OD600＝0.5-0.6时，冰浴30min使细胞停止生长，加入终浓度为1mmol/L的IPTG诱导剂，37℃条件下诱导pETDuet-SPI1085g2-ho1:pebS表达蛋白。表达12h后离心收集表达细胞，去离子水清洗两次后，-24℃避光保存备用。
实施例5蛋白纯化：
向收集的细胞中加入Start buffer缓冲液，用漩涡混合仪将细胞充分悬浮于缓冲液中，超声破碎细胞，离心45min，收集上清液。由于表达载体pETDuet-1在SPI1085g2的N端带有His-tag标签，因此使用镍离子层析柱将蛋白提纯。提纯后的蛋白避光过夜透析到50mmol/L KPP，500mmol/LNaCl，pH 7.2)中，透析处理后的胆色素荧光蛋白即是本发明Cu2+检测用荧光蛋白。
试验例1
将实施例5制备得到的Cu2+检测用荧光蛋白稀释到0.25μM，随后分别添加终浓度为40μM的各种重金属离子(CuSO4、NiCl2、MnCl2、MgCl2、MgCl2、ZnSO4、CrCl3、CoCl2、PbCl2、CdCl2)混合，pH值为7.2，总体积为500μl，在25℃条件下反应30min后，检测样品的荧光强度，激发波长为480nm，最大荧光发射波长为555nm，即用480nm的激发光激发样品，展现最大荧光发射波长为555nm的荧光峰。具体如图2所示，制备的荧光蛋白具有最大吸收波长为520nm的吸收峰，最大荧光发射波长为555nm的荧光峰的特征。
同时，对本申请Cu2+检测用荧光蛋白进行荧光淬灭率实验，利用480nm激发光激发，收集555nm处的荧光。其结果如图3所示。图3为本申请Cu2+检测用荧光蛋白的荧光淬灭率图，没有加任何重金属离子的空白荧光强度没有任何淬灭，加40μM Cu2+的色素蛋白溶液荧光淬灭率超过80％，而加入40μM其它重金属离子后色素蛋白溶液荧光淬灭率均不超过3％，基本保留了荧光。说明至少各种重金属离子在0～40μM范围之内，该荧光蛋白仅对Cu2+有特异性淬灭响应。本申请Cu2+检测用荧光蛋白对铜离子有特异性的响应。
试验例2
将实施例5制备得到的Cu2+检测用荧光蛋白稀释到0.25μM，添加终浓度为0M、1M、3M、5M的NaCl后，再分别添加终浓度为0～40μM的Cu2+混合，pH值为7.2，总体积为500μl，在25℃条件下反应30min后，检测样品的荧光强度，激发波长为480nm，荧光发射波长为555nm。并同时对不同浓度的Cu2+的荧光强度和不同盐浓度下不同浓度的Cu2+的荧光淬灭率进行检测，其结果如图4和图5所示。
图4为本发明Cu2+检测用荧光蛋白对不同浓度Cu2+响应的荧光光谱，由图4可知，随着Cu2+浓度从0开始逐步升高，荧光峰逐步降低，浓度的升高和荧光峰的降低存在相关性，即Cu2+浓度和荧光强度之间存在剂量-效应关系。当浓度达到40μM时，荧光峰大为降低不到原来的20％。
图5本发明Cu2+检测用荧光蛋白在不同盐浓度下对不同浓度的Cu2+的荧光淬灭率，由图5可知，在没有盐的情况下，Cu2+浓度和555nm处的荧光强度存在剂量效应关系(0～10μM时类似线性关系)，在加入1M、3M、5M NaCl后，Cu2+浓度和555nm处的荧光强度仍然存在剂量效应关系，并且这个关系的趋势表现一致。即这个蛋白质荧光传感器具有强烈的耐盐性，在高盐浓度下，仍可用于Cu2+的检测。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。
SEQUENCE LISTING
<110> 南京林业大学
<120> 铜离子检测用荧光蛋白及其编码核苷酸序列和应用
<160> 3
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 154
<212> PRT
<213> 蓝细菌光敏色素的GAF结构域蛋白氨基酸序列
<400> 1
Ile Glu Gln Ile Phe Arg Thr Ser Thr Glu Glu Val Arg Gln Val Leu
1 5 10 15
Gln Ala Glu Arg Val Ala Ile Tyr Arg Phe Phe Pro Asp Trp Ser Gly
20 25 30
Glu Phe Val Ala Glu Ser Lys Gly Glu Glu Trp Cys Ser Leu Val Gly
35 40 45
Gly Glu Gln Pro Ile Ile Ala Asp Thr His Leu Gln Glu Thr Gln Gly
50 55 60
Gly Arg Tyr Val His Gly Glu Thr Phe Ala Ile Asp Asp Ile Tyr Leu
65 70 75 80
Ala Gly His Gln Asp Cys His Ile Ala Leu Leu Glu Gln Phe Gln Ala
85 90 95
Arg Ala Tyr Val Ile Val Pro Ile Leu His Gly Glu Gln Leu Trp Gly
100 105 110
Leu Leu Ala Ala Tyr Gln Asn Ser Gly Pro Arg Arg Trp Glu Ser His
115 120 125
Glu Val Asp Leu Leu Ala Gln Ile Gly Arg Gln Leu Ala Ile Ala Leu
130 135 140
Gln Gln Ala Glu Leu Leu Ala Lys Thr Arg
145 150
<210> 2
<211> 462
<212> DNA
<213> 蓝细菌光敏色素的GAF结构域蛋白的核苷酸序列
<400> 2
attgagcaga ttttccgcac cagtaccgaa gaagtccgtc aggtattaca agcggaacga 60
gtggctattt atcgcttttt ccccgactgg agtggggaat ttgtggcgga atctaaaggg 120
gaggagtggt gtagtttagt ggggggagaa cagcccatta ttgccgacac ccaccttcag 180
gaaacccaag gggggcgtta tgttcacggg gaaaccttcg ctattgatga catctactta 240
gcggggcatc aggactgtca tattgccctg ttagagcagt ttcaagcccg cgcctatgtg 300
attgtaccca ttttacatgg agagcagttg tggggccttt tagcggccta tcagaactct 360
ggtccccgac gttgggaaag ccacgaggtg gacttattag cccaaattgg gcgacagtta 420
gccattgcgc tccaacaagc cgaattatta gccaaaaccc gc 462
<210> 3
<211> 1428
<212> DNA
<213> 藻红色素合成酶编码基因ho1-pebS的核苷酸序列
<400> 3
atgagcagca atttagcaaa caaactacgt gtaggtacga aaaaagccca cacaatggca 60
gaaaatgtag gttttgtcaa atgcttctta aaaggagtgg cagaaaaaag ctcttaccgg 120
aagctagtgg ccaacttcta ctacgtctac tccgcaatgg aagaggagat ggaaaagcat 180
agccagcacc caattgtttc taaaataaac ttttcccaac tgaatcgtaa gcagactcta 240
gagcaagacc tgagttacta ttacggcgct aactggcggg aacaaattca actgtcgcca 300
gcaggtgaag cttacgtaca acgcattcgg gaaatctctg caaccgaacc agaattgttg 360
attgcccact cttacacccg ttatttaggt gatttatccg ggggacaaat tctcaaaaac 420
attgctgtga cagcgatgaa tttgaatgat gggcaaggaa ctgcatttta tgagttcgca 480
gatatttctg atgagaaagc ttttaaggct aaatatcgtc caacattaga tgagttggca 540
attgatgaag cgacaggcga tcgcattgtt gatgaagcta acgccgcttt tggtatgaac 600
atgaaaatgt tccaagaact agaagggaac ctcatcaagg caatcggcat gatgctgttc 660
aacaccttga ctcgcaagcg cacacgcggc gctaccgaac tagccactgc agagtatccc 720
atggtaatga ctaaaaaccc aagaaataac aaaccaaaaa agattttaga ttcatcttat 780
aaatctaaaa caatctggca aaattatatt gatgctctat ttgaaacatt tccacagtta 840
gaaatatctg aggtatgggc aaaatgggat ggtgggaacg tcactaagga cggtggagat 900
gctaaactta cagcaaatat ccgtacagga gaacactttc taaaggcaag agaggcacac 960
atagtagatc ctaactctga catatacaat accatactct atcctaaaac aggagcagat 1020
ctgccttgtt ttggtatgga tctgatgaag tttagtgata agaaggtcat tatagtattt 1080
gacttccagc atccaagaga gaagtatctg ttctctgttg atggactacc cgaagatgat 1140
ggtaagtata gattctttga aatgggtaat catttctcta agaatatctt tgtaagatac 1200
tgtaaacctg atgaagtgga tcaatatctt gataccttta aattatactt gacaaagtat 1260
aaagagatga tagataacaa taaacctgtt ggtgaagata ccacagtcta tagtgacttt 1320
gatacttata tgactgaact tgatcctgtt agaggatata tgaagaataa gtttggtgag 1380
ggtagatcag aggcatttgt aaacgatttc cttttttcat acaaatga 1428
Claims (15)
1.一种Cu2+检测用荧光蛋白，其特征在于，所述Cu2+检测用荧光蛋白如Seq No.01所示的氨基酸序列；
所述Cu2+检测用荧光蛋白的核苷酸序列如Seq No.02所示。
2.一种重组共表达载体，其特征在于，所述重组共表达载体包含权利要求1所述的核苷酸序列和显色底物核苷酸序列。
3.根据权利要求2所述的重组共表达载体，其特征在于，所述显色底物核苷酸序列包括藻红色素合成酶编码基因ho1-pebS。
4.根据权利要求3所述的重组共表达载体，其特征在于，所述藻红色素合成酶编码基因ho1-pebS的核苷酸序列如Seq No.03所示。
5.根据权利要求2所述的重组共表达载体，其特征在于，所述重组共表达载体为原核细胞重组表达载体。
6.根据权利要求5所述的重组共表达载体，其特征在于，所述原核细胞重组表达载体包括pETDuet-1、pACYCDuet、或pCDFDuet中的任意一种。
7.根据权利要求6所述的重组共表达载体，其特征在于，所述原核细胞重组表达载体为pET Duet-1。
8.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包含权利要求2~7任一项所述的重组共表达载体。
9.根据权利要求8所述的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞为包含权利要求2~7任一项所述的重组共表达载体的大肠杆菌。
10.根据权利要求9所述的宿主细胞，其特征在于，所述大肠杆菌为E.coli BL21。
11.一种根据权利要求1所述Cu2+检测用荧光蛋白的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
首先利用重组共表达载体将编码权利要求1所述Cu2+检测用荧光蛋白的核苷酸序列和显色底物核苷酸序列转入宿主细胞诱导表达，得到Cu2+检测用荧光蛋白。
12.根据权利要求11所述的Cu2+检测用荧光蛋白的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括对Cu2+检测用荧光蛋白进行纯化的步骤。
13.根据权利要求11所述的Cu2+检测用荧光蛋白的制备方法，其特征在于，所述制备方法具体步骤如下：
（a）、获取编码权利要求1所述Cu2+检测用荧光蛋白的核苷酸序列和藻红色素合成酶编码基因ho1-pebS；
（b）、将编码权利要求1所述Cu2+检测用荧光蛋白的核苷酸序列和藻红色素合成酶编码基因ho1-pebS与原核细胞重组表达载体结合，得到重组共表达载体；
（c）、将重组共表达载体转入宿主细胞诱导表达，纯化，得Cu2+检测用荧光蛋白。
14.如权利要求1所述的Cu2+检测用荧光蛋白、如权利要求2~7任一项所述的重组共表达载体、如权利要求8~10任一项所述的宿主细胞在制备高盐环境下Cu2+荧光检测产品中的应用。
15.根据权利要求14所述的应用，其特征在于，所述高盐环境为1~5mol/L的NaCl盐溶液环境。
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