CN110678482A - 包含pd-1结合蛋白的制剂及其制备方法 - Google Patents

包含pd-1结合蛋白的制剂及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本文提供了包含与程序性死亡蛋白‑1(PD‑1)特异性结合的抗体的制剂及制备这类制剂的方法。

Description

包含PD-1结合蛋白的制剂及其制备方法
1.相关申请的交叉引用
本申请要求2017年3月29日提交的系列号为62/478,524的美国申请的权益，该申请的内容以引用的方式整体并入。
2.技术领域
本文提供了包含与人程序性死亡蛋白-1(PD-1)特异性结合的抗体的制剂以及制备该制剂的方法。
3.发明内容
药物物质通常作为制剂的一部分与起不同和专门的药物功能的一种或多种其它剂组合施用。可通过选择性使用药物赋形剂来制备各种类型的剂型。作为药物赋形剂具有多种功能，并且以许多不同的方式对药物制剂作出贡献，例如增溶、稀释、增稠、稳定、保存、着色、调味等。在配制活性药物物质时通常会考虑的性质包括剂型的生物利用度、制造的方便性、施用的方便性以及稳定性。由于所配制的活性药物物质的不同性质，剂型通常需要独特地适合于活性药物物质的药物赋形剂，以便获得有利的物理和药学性质。
本公开提供了包含蛋白质的制剂，所述蛋白质与PD-1(例如，人PD-1，SEQ ID NO:43)结合，包括与PD-1结合的结合蛋白，如抗体。这类结合蛋白(包括抗体)可与PD-1多肽、PD-1片段和/或PD-1表位结合。这类结合蛋白(包括抗体)可以是激动剂(例如，诱导PD-1配体样信号传导)。在一些实施方案中，结合蛋白不同PD-1配体(例如，PD-L1和PD-L2)竞争与PD-1的相互作用(例如，非阻断性抗体)。
本公开在某些实施方案中还提供包含结合蛋白(包括抗体或其片段)的制剂，所述结合蛋白(i)与人PD-1结合，(ii)诱导PD-1配体样信号传导，并且(iii)不同PD-L1和/或PD-L2竞争与PD-1的相互作用。
本文还提供了制备包含蛋白质的制剂的方法，所述蛋白质与PD-1(例如，人PD-1，SEQ ID NO:43)结合，包括与PD-1结合的结合蛋白，如抗体。
在本文提供的各种制剂的一些实施方案中，结合蛋白(例如，抗PD-1抗体)包含六个互补决定区(CDR)或少于六个CDR。在其它实施方案中，结合蛋白(例如，抗PD-1抗体)包含一个、两个、三个、四个、五个或六个选自重链可变区(VH)CDR1、VH CDR2、VH CDR3、轻链可变区(VL)CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3的CDR。在某些实施方案中，结合蛋白(例如，抗PD-1抗体)包含一个、两个、三个、四个、五个或六个选自如本文所述定名为PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6的单克隆抗体或其人源化变体的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3的CDR。在一些实施方案中，结合蛋白(例如，抗PD-1抗体)进一步包含支架区或框架区(FR)，包括人免疫球蛋白氨基酸序列或其变体的VHFR1、VH FR2、VH FR3、VH FR4、VL FR1、VL FR2、VL FR3和/或VL FR4。
在一些实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段与人PD-1的由包含具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的轻链可变区和具有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的重链可变区的抗体识别的表位结合。
在其它实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗体片段，所述抗体或其抗体片段同包含具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的轻链可变区和具有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的重链可变区的抗体竞争与人PD-1的结合。
在一些实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含VL，所述VL包含如表1中所示的抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3。
在其它实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含VH，所述VH包含如表2中所示的抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3。
在其它实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)VL，所述VL包含如表3中所示的抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者的VL FR1、VL FR2、VL FR3和VL FR4；和
(b)VH，所述VH包含如表4中所示的抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者的VH FR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4。
在某些实施方案中，所述制剂的抗体或其抗原结合片段的VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:1、2和3的氨基酸序列，且所述制剂的抗体或其抗原结合片段的VHCDR1、VH CDR2和VH CDR3分别包含SEQ ID NO:4、5和6的氨基酸序列。
在又一实施方案中，所述制剂的抗体或其抗原结合片段的VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:7、2和3的氨基酸序列，且所述制剂的抗体或其抗原结合片段的VHCDR1、VH CDR2和VH CDR3分别包含SEQ ID NO:4、5和6的氨基酸序列。
在另一实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含VL，所述VL包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述氨基酸序列包含其一个或多个保守修饰。
在某些实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含VL，所述VL包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述氨基酸序列包含其一个或多个保守修饰。
在一些实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含VL，所述VL包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述氨基酸序列包含其一个或多个保守修饰。
在某些实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含VH，所述VH包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述氨基酸序列包含其一个或多个保守修饰。
在其它实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含VH，所述VH包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述氨基酸序列包含其一个或多个保守修饰。
在另一实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含VH，所述VH包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述氨基酸序列包含其一个或多个保守修饰。
在某些实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：(a)包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的VL；和(b)包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VH。
在一些实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：(a)包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的VL；和(b)包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VH。
在其它实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：(a)包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的VL；和(b)包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VH。
在一个实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：(a)包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的VL；和(b)包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的VH。
在另一实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：(a)包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的VL；和(b)包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的VH。
在某些实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：(a)包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的VL；和(b)包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的VH。
在一些实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：(a)包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的VL；和(b)包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的VH。
在其它实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：(a)包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的VL；和(b)包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的VH。
在某些实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：(a)包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的VL；和(b)包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的VH。
在一些实施方案中，VL的氨基酸序列包含其一个或多个保守修饰。在一些实施方案中，VH的氨基酸序列包含其一个或多个保守修饰。在一些实施方案中，VL和VH的氨基酸序列包含其一个或多个保守修饰。
在一些实施方案中，所述制剂包含抗体，所述抗体包含人IgG1 Fc区。在其它实施方案中，所述制剂包含抗体，所述抗体包含变体人IgG1 Fc区。
在一个实施方案中，所述制剂包含抗体，所述抗体包含人IgG1-K322A Fc区。
在一些实施方案中，所述制剂包含抗体，所述抗体包含人IgG4 Fc区。在其它实施方案中，所述制剂包含抗体，所述抗体包含变体人IgG4 Fc区。
在另一实施方案中，所述制剂包含抗体，所述抗体包含人IgG4P Fc区。
在再一实施方案中，所述制剂包含抗体，所述抗体包含人IgG4PE Fc区。
在一些实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段进一步包含轻链恒定区，所述轻链恒定区包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列。
在其它实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段进一步包含重链Fc区，所述重链Fc区包含选自SEQ ID NO:36-40的氨基酸序列。
在又一实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段进一步包含轻链恒定区和重链Fc区，所述轻链恒定区包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列；所述重链Fc区包含选自SEQ ID NO:36-40的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列。
在另一实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列。
在其它实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：(a)包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的轻链；和(b)包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的重链。
在某些实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列。
在其它实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：(a)包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的轻链；和(b)包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的重链。
在一个实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列。
在又一实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：(a)包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的轻链；和(b)包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的重链。
在一些实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列。
在其它实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：(a)包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的轻链；和(b)包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的重链。
在某些实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的残基100-109中的至少一个结合。
在一些实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的残基100-105中的至少一个结合。
在特定的实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与至少一个选自SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的N33、T51、S57、L100、N102、G103、R104、D105、H107和S109的残基结合。
在一些实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与两个或更多个选自SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的N33、T51、S57、L100、N102、G103、R104、D105、H107和S109的残基结合。
在其它实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与三个或更多个选自SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的N33、T51、S57、L100、N102、G103、R104、D105、H107和S109的残基结合。
在某些实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与四个或更多个选自SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的N33、T51、S57、L100、N102、G103、R104、D105、H107和S109的残基结合。
在一个实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与五个或更多个选自SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的N33、T51、S57、L100、N102、G103、R104、D105、H107和S109的残基结合。
在另一实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与六个或更多个选自SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的N33、T51、S57、L100、N102、G103、R104、D105、H107和S109的残基结合。
在又一实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与七个或更多个选自SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的N33、T51、S57、L100、N102、G103、R104、D105、H107和S109的残基结合。
在再一实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与八个或更多个选自SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的N33、T51、S57、L100、N102、G103、R104、D105、H107和S109的残基结合。
在某些实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与九个或更多个选自SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的N33、T51、S57、L100、N102、G103、R104、D105、H107和S109的残基结合。
在其它实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与来自SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的N33、T51、S57、L100、N102、G103、R104、D105、H107和S109的所有十个残基结合。
在一个实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的N33结合。
在另一实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的T51结合。
在特定的实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的S57结合。
在一个具体实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的L100结合。
在一些实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的N102结合。
在其它实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的G103结合。
在另一实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的R104结合。
在又一实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的G103和R104结合。
在再一实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的D105结合。
在一些实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的H107结合。
在某些实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的S109结合。
在一个实施方案中，人PD-1的表位不同于PD-L1结合位点。在另一实施方案中，人PD-1的表位不同于PD-L2结合位点。在具体的实施方案中，人PD-1的表位既不同于PD-L1结合位点也不同于PD-L2结合位点。
在一实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段与人PD-1和/或猴PD-1(例如，食蟹猴)特异性结合，但不与啮齿动物PD-1特异性结合。
在某些实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段具有减弱的抗体依赖性细胞性细胞毒性(ADCC)活性。在其它实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段具有减弱的补体依赖性细胞毒性(CDC)活性。在一些实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段具有减弱的ADCC和/或减弱的CDC活性。
在一方面，本文提供了包含与人PD-1的表位结合的抗体或其抗原结合片段的制剂，其中所述抗体或其抗原结合片段：(a)减弱T细胞活性；和/或(b)下调T细胞的表面上的PD-1表达。
在一个实施方案中，所述制剂包含减弱T细胞活性的抗体。在另一实施方案中，所述制剂包含下调T细胞的表面上的PD-1表达的抗体。
在一些实施方案中，通过T细胞效应功能度量T细胞活性的减弱。
在某些实施方案中，由所述抗体或其抗原结合片段减弱T细胞活性发生在人PBMC或全血样品中。
在一些实施方案中，通过细胞因子产生的抑制来度量T细胞活性的减弱。
在其它实施方案中，由所述抗体或其抗原结合片段抑制的细胞因子包括IL-2、IL-17和/或IFN-γ。在某些实施方案中，所述细胞因子选自IL-1、IL-2、IL-6、IL-12、IL-17、IL-22、IL-23、GM-CSF、IFN-γ和TNF-α。在某些实施方案中，所述细胞因子是IL-1。在一些实施方案中，所述细胞因子是IL-2。在其它实施方案中，所述细胞因子是IL-6。在另一实施方案中，所述细胞因子是IL-12。在一些其它实施方案中，所述细胞因子是IL-17。还在其它实施方案中，所述细胞因子是IL-22。仍在其它实施方案中，所述细胞因子是IL-23。在一些实施方案中，所述细胞因子是GM-CSF。在其它实施方案中，所述细胞因子是IFN-γ。还在其它实施方案中，所述细胞因子是TNF-α。在某些实施方案中，所述细胞因子是IL-2和IL-17。在一些实施方案中，所述细胞因子是IL-2和IFN-γ。还在其它实施方案中，所述细胞因子是IL-17和IFN-γ。仍在其它实施方案中，所述细胞因子是IL-2、IL-17和IFN-γ。还涵盖上面提到的细胞因子中的两种、三种或更多种的其它组合。
在某些实施方案中，T细胞的表面上的PD-1表达的下调早在与所述制剂的抗体或其抗原结合片段接触后4小时发生。在另一实施方案中，下调早在接触后6小时发生。在又一实施方案中，下调早在接触后8小时发生。在再一实施方案中，下调早在接触后10小时发生。在一个实施方案中，下调早在接触后12小时发生。在另一实施方案中，下调早在接触后14小时发生。在又一实施方案中，下调早在接触后16小时发生。在再一实施方案中，下调早在接触后18小时发生。在一个实施方案中，下调早在接触后20小时发生。在另一实施方案中，下调早在接触后22小时发生。在又一实施方案中，下调早在接触后24小时发生。在一些实施方案中，所述接触是与所述制剂的抗体接触。在其它实施方案中，所述接触是与所述制剂的其抗原结合片段接触。
在一些实施方案中，T细胞的表面上的PD-1表达的下调先于细胞因子抑制。在一个实施方案中，T细胞的表面上的PD-1表达的下调早在与所述制剂的抗体或其抗原结合片段接触后4小时发生，并且先于细胞因子抑制。在另一实施方案中，下调早在与所述制剂的抗体或其抗原结合片段接触后6小时发生，并且先于细胞因子抑制。在又一实施方案中，下调早在与所述制剂的抗体或其抗原结合片段接触后8小时发生，并且先于细胞因子抑制。在再一实施方案中，下调早在与所述制剂的抗体或其抗原结合片段接触后10小时发生，并且先于细胞因子抑制。在一个实施方案中，下调早在与所述制剂的抗体或其抗原结合片段接触后12小时发生，并且先于细胞因子抑制。在另一实施方案中，下调早在与所述制剂的抗体或其抗原结合片段接触后14小时发生，并且先于细胞因子抑制。在又一实施方案中，下调早在与所述制剂的抗体或其抗原结合片段接触后16小时发生，并且先于细胞因子抑制。在再一实施方案中，下调早在与所述制剂的抗体或其抗原结合片段接触后18小时发生，并且先于细胞因子抑制。在一个实施方案中，下调早在与所述制剂的抗体或其抗原结合片段接触后20小时发生，并且先于细胞因子抑制。在另一实施方案中，下调早在与所述制剂的抗体或其抗原结合片段接触后22小时发生，并且先于细胞因子抑制。在又一实施方案中，下调早在与所述制剂的抗体或其抗原结合片段接触后24小时发生，并且先于细胞因子抑制。
在其它实施方案中，T细胞的表面上的PD-1表达的下调是与细胞因子抑制同时的。在一个实施方案中，T细胞的表面上的PD-1表达的下调早在与所述制剂的抗体或其抗原结合片段接触后4小时发生，并且是与细胞因子抑制同时的。在另一实施方案中，下调早在与所述制剂的抗体或其抗原结合片段接触后6小时发生，并且是与细胞因子抑制同时的。在又一实施方案中，下调早在与所述制剂的抗体或其抗原结合片段接触后8小时发生，并且是与细胞因子抑制同时的。在再一实施方案中，下调早在与所述制剂的抗体或其抗原结合片段接触后10小时发生，并且是与细胞因子抑制同时的。在一个实施方案中，下调早在与所述制剂的抗体或其抗原结合片段接触后12小时发生，并且是与细胞因子抑制同时的。在另一实施方案中，下调早在与所述制剂的抗体或其抗原结合片段接触后14小时发生，并且是与细胞因子抑制同时的。在又一实施方案中，下调早在与所述制剂的抗体或其抗原结合片段接触后16小时发生，并且是与细胞因子抑制同时的。在再一实施方案中，下调早在与所述制剂的抗体或其抗原结合片段接触后18小时发生，并且是与细胞因子抑制同时的。在一个实施方案中，下调早在与所述制剂的抗体或其抗原结合片段接触后20小时发生，并且是与细胞因子抑制同时的。在另一实施方案中，下调早在与所述制剂的抗体或其抗原结合片段接触后22小时发生，并且是与细胞因子抑制同时的。在又一实施方案中，下调早在与所述制剂的抗体或其抗原结合片段接触后24小时发生，并且是与细胞因子抑制同时的。
还在其它实施方案中，T细胞的表面上的PD-1表达的下调是在细胞因子抑制后。在一个实施方案中，T细胞的表面上的PD-1表达的下调早在与所述制剂的抗体或其抗原结合片段接触后4小时发生，并且是在细胞因子抑制后。在另一实施方案中，下调早在与所述制剂的抗体或其抗原结合片段接触后6小时发生，并且是在细胞因子抑制后。在又一实施方案中，下调早在与所述制剂的抗体或其抗原结合片段接触后8小时发生，并且是在细胞因子抑制后。在再一实施方案中，下调早在与所述制剂的抗体或其抗原结合片段接触后10小时发生，并且是在细胞因子抑制后。在一个实施方案中，下调早在与所述制剂的抗体或其抗原结合片段接触后12小时发生，并且是在细胞因子抑制后。在另一实施方案中，下调早在与所述制剂的抗体或其抗原结合片段接触后14小时发生，并且是在细胞因子抑制后。在又一实施方案中，下调早在与所述制剂的抗体或其抗原结合片段接触后16小时发生，并且是在细胞因子抑制后。在再一实施方案中，下调早在与所述制剂的抗体或其抗原结合片段接触后18小时发生，并且是在细胞因子抑制后。在一个实施方案中，下调早在与所述制剂的抗体或其抗原结合片段接触后20小时发生，并且是在细胞因子抑制后。在另一实施方案中，下调早在与所述制剂的抗体或其抗原结合片段接触后22小时发生，并且是在细胞因子抑制后。在又一实施方案中，下调早在与所述制剂的抗体或其抗原结合片段接触后24小时发生，并且是在细胞因子抑制后。
在一个实施方案中，所述制剂的抗体或其抗原结合片段与纯化的人PD-1结合的KD为约1nM至约100nM。在另一实施方案中，所述制剂的抗体或其抗原结合片段与在细胞表面上表达的人PD-1结合的KD为约100pM至约10nM。在另一实施方案中，所述制剂的抗体或其抗原结合片段与在细胞表面上表达的猴PD-1结合的KD为约100pM至约10nM。
在一些实施方案中，所述制剂的抗体或其抗原结合片段减弱T细胞活性的EC50为约1pM至约10pM、约10pM至约100pM、约100pM至约1nM、约1nM至约10nM或约10nM至约100nM。
在其它实施方案中，所述制剂的抗体或其抗原结合片段对T细胞活性的最大减弱百分比为至少约10％、20％、30％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。
在另一实施方案中，所述制剂的抗体或其抗原结合片段对PD-1表达的最大下调百分比为至少约10％、20％、30％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。
在某些实施方案中，所述制剂包含抗体，所述抗体是单克隆抗体。在一些实施方案中，所述制剂包含抗体，所述抗体是人源化抗体、人抗体或嵌合抗体。在另一实施方案中，所述制剂包含人源化抗体，所述人源化抗体是去免疫化抗体或复合人抗体。在某些实施方案中，所述制剂包含抗体，所述抗体是人源化抗体。在具体的实施方案中，所述制剂包含抗体，所述抗体是特异性结合人PD-1的人源化抗体。在一些实施方案中，所述抗体是人源化单克隆抗体。
在某些实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段是Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、scFv、dsFv、双抗体、三抗体或四抗体。在一些实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段是由抗体片段形成的多特异性抗体。在其它实施方案中，所述制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段是双特异性抗体。在某些实施方案中，所述抗体不是抗体片段。
在一些实施方案中，所述制剂包含与剂缀合的抗体或其抗原结合片段。在一个实施方案中，所述剂是放射性同位素、金属螯合剂、酶、荧光化合物、生物发光化合物或化学发光化合物。
在某些实施方案中，药物制剂包含缓冲液。在一些实施方案中，所述缓冲液是乙酸盐缓冲液、琥珀酸盐缓冲液、组氨酸缓冲液或柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述缓冲液是乙酸盐缓冲液。在另一实施方案中，所述缓冲液是琥珀酸盐缓冲液。在又一实施方案中，所述缓冲液是组氨酸缓冲液。在再一实施方案中，所述缓冲液是柠檬酸盐缓冲液。
在一些实施方案中，所述缓冲液的浓度为0.1mM至1M。在其它实施方案中，所述缓冲液的浓度为1mM至100mM。在其它实施方案中，所述缓冲液的浓度为10mM。
在一个实施方案中，所述制剂包含浓度为0.1mM至1M的乙酸盐缓冲液。在另一实施方案中，所述制剂包含浓度为0.1mM至100mM的乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂包含浓度为0.1mM至10mM的乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂包含浓度为1mM至100mM的乙酸盐缓冲液。在另一实施方案中，所述制剂包含浓度为1mM至10mM的乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂包含浓度为5mM至15mM的乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂包含浓度为5mM的乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂包含浓度为15mM的乙酸盐缓冲液。在另一实施方案中，所述制剂包含浓度为10mM的乙酸盐缓冲液。
在一个实施方案中，所述制剂包含浓度为0.1mM至1M的琥珀酸盐缓冲液。在另一实施方案中，所述制剂包含浓度为0.1mM至100mM的琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂包含浓度为0.1mM至10mM的琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂包含浓度为1mM至100mM的琥珀酸盐缓冲液。在另一实施方案中，所述制剂包含浓度为1mM至10mM的琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂包含浓度为5mM至15mM的琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂包含浓度为5mM的琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂包含浓度为15mM的琥珀酸盐缓冲液。在另一实施方案中，所述制剂包含浓度为10mM的琥珀酸盐缓冲液。
在一个实施方案中，所述制剂包含浓度为0.1mM至1M的组氨酸缓冲液。在另一实施方案中，所述制剂包含浓度为0.1mM至100mM的组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂包含浓度为0.1mM至10mM的组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂包含浓度为1mM至100mM的组氨酸缓冲液。在另一实施方案中，所述制剂包含浓度为1mM至10mM的组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂包含浓度为5mM至15mM的组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂包含浓度为5mM的组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂包含浓度为15mM的组氨酸缓冲液。在另一实施方案中，所述制剂包含浓度为10mM的组氨酸缓冲液。
在一个实施方案中，所述制剂包含浓度为0.1mM至1M的柠檬酸盐缓冲液。在另一实施方案中，所述制剂包含浓度为0.1mM至100mM的柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂包含浓度为0.1mM至10mM的柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂包含浓度为1mM至100mM的柠檬酸盐缓冲液。在另一实施方案中，所述制剂包含浓度为1mM至10mM的柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂包含浓度为5mM至15mM的柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂包含浓度为5mM的柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂包含浓度为15mM的柠檬酸盐缓冲液。在另一实施方案中，所述制剂包含浓度为10mM的柠檬酸盐缓冲液。
在某些实施方案中，缓冲液的pH在pH 4和6.5的范围内。在一些实施方案中，缓冲液的pH在pH 4.7和5.7的范围内。在其它实施方案中，缓冲液的pH为约5.2。在其它实施方案中，缓冲液的pH为5.2。在一个实施方案中，缓冲液是10mM乙酸盐缓冲液，且pH为约5.2。在另一实施方案中，缓冲液是10mM琥珀酸盐缓冲液，且pH为约5.2。在又一实施方案中，缓冲液是10mM组氨酸缓冲液，且pH为约5.2。在再一实施方案中，缓冲液是10mM柠檬酸盐缓冲液，且pH为约5.2。
在某些实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内。在一些实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内。在其它实施方案中，所述制剂的pH为约5.2。在其它实施方案中，所述制剂的pH为5.2。
在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含浓度为5mM至15mM的乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含浓度为10mM的乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含浓度为5mM至15mM的乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含浓度为10mM的乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含浓度为5mM至15mM的乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含浓度为10mM的乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含浓度为5mM至15mM的乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含浓度为10mM的乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，乙酸盐缓冲液是存在于所述制剂中的仅有的缓冲液。
在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含浓度为5mM至15mM的琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含浓度为10mM的琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含浓度为5mM至15mM的琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含浓度为10mM的琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含浓度为5mM至15mM的琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含浓度为10mM的琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含浓度为5mM至15mM的琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含浓度为10mM的琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，琥珀酸盐缓冲液是存在于所述制剂中的仅有的缓冲液。
在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含浓度为5mM至15mM的组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含浓度为10mM的组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含浓度为5mM至15mM的组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含浓度为10mM的组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含浓度为5mM至15mM的组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含浓度为10mM的组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含浓度为5mM至15mM的组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含浓度为10mM的组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，组氨酸缓冲液是存在于所述制剂中的仅有的缓冲液。
在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含浓度为5mM至15mM的柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含浓度为10mM的柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含浓度为5mM至15mM的柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含浓度为10mM的柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含浓度为5mM至15mM的柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含浓度为10mM的柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含浓度为5mM至15mM的柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含浓度为10mM的柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，柠檬酸盐缓冲液是存在于所述制剂中的仅有的缓冲液。
在一些实施方案中，所述药物制剂进一步包含表面活性剂。在某些实施方案中，所述表面活性剂是聚山梨醇酯。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-20。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-40。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-60。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-80。
在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.005％(w/v)。
在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为5mM至15mM的乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为10mM的乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为5mM至15mM的乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为10mM的乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为5mM至15mM的乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为10mM的乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为5mM至15mM的乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为10mM的乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，乙酸盐缓冲液是存在于所述制剂中的仅有的缓冲液。在一个实施方案中，所述表面活性剂是聚山梨醇酯。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-20。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-40。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-60。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-80。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.005％(w/v)。
在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为5mM至15mM的琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为10mM的琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为5mM至15mM的琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为10mM的琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为5mM至15mM的琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为10mM的琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为5mM至15mM的琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为10mM的琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，琥珀酸盐缓冲液是存在于所述制剂中的仅有的缓冲液。在一个实施方案中，所述表面活性剂是聚山梨醇酯。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-20。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-40。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-60。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-80。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.005％(w/v)。
在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为5mM至15mM的组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为10mM的组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为5mM至15mM的组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为10mM的组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为5mM至15mM的组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为10mM的组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为5mM至15mM的组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为10mM的组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，组氨酸缓冲液是存在于所述制剂中的仅有的缓冲液。在一个实施方案中，所述表面活性剂是聚山梨醇酯。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-20。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-40。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-60。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-80。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.005％(w/v)。
在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为5mM至15mM的柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为10mM的柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为5mM至15mM的柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为10mM的柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为5mM至15mM的柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为10mM的柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为5mM至15mM的柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为10mM的柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，柠檬酸盐缓冲液是存在于所述制剂中的仅有的缓冲液。在一个实施方案中，所述表面活性剂是聚山梨醇酯。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-20。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-40。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-60。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-80。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.005％(w/v)。
在一些实施方案中，所述药物制剂进一步包含多元醇。在某些实施方案中，所述多元醇是糖、糖醇或糖酸。在一个实施方案中，所述多元醇是糖。在另一实施方案中，所述多元醇是糖醇。在又一实施方案中，所述多元醇是糖酸。在一个具体实施方案中，所述多元醇是蔗糖。在一个实施方案中，蔗糖的浓度为5-10％(w/v)。在一个实施方案中，蔗糖的浓度为8-9％(w/v)。在另一实施方案中，蔗糖的浓度为9％(w/v)。在另一实施方案中，蔗糖的浓度为约8.5％(w/v)。在另一实施方案中，蔗糖的浓度为8.5％(w/v)。在一个具体实施方案中，所述多元醇是麦芽糖。在一个实施方案中，麦芽糖的浓度为5-10％(w/v)。在一个实施方案中，麦芽糖的浓度为8-9％(w/v)。在另一实施方案中，麦芽糖的浓度为9％(w/v)。在另一实施方案中，麦芽糖的浓度为约8.5％(w/v)。在另一实施方案中，麦芽糖的浓度为8.5％(w/v)。在一个具体实施方案中，所述多元醇是海藻糖。在一个实施方案中，海藻糖的浓度为5-10％(w/v)。在一个实施方案中，海藻糖的浓度为8-9％(w/v)。在另一实施方案中，海藻糖的浓度为9％(w/v)。在另一实施方案中，海藻糖的浓度为约8.5％(w/v)。在另一实施方案中，海藻糖的浓度为8.5％(w/v)。在一个具体实施方案中，所述多元醇是甘露糖醇。在一个实施方案中，甘露糖醇的浓度为5-10％(w/v)。在一个实施方案中，甘露糖醇的浓度为8-9％(w/v)。在另一实施方案中，甘露糖醇的浓度为9％(w/v)。在另一实施方案中，甘露糖醇的浓度为约8.5％(w/v)。在另一实施方案中，甘露糖醇的浓度为8.5％(w/v)。在一个具体实施方案中，所述多元醇是山梨糖醇。在一个实施方案中，山梨糖醇的浓度为5-10％(w/v)。在一个实施方案中，山梨糖醇的浓度为8-9％(w/v)。在另一实施方案中，山梨糖醇的浓度为9％(w/v)。在另一实施方案中，山梨糖醇的浓度为约8.5％(w/v)。在另一实施方案中，山梨糖醇的浓度为8.5％(w/v)。
在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)乙酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为5mM至15mM的乙酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为10mM的乙酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)乙酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为5mM至15mM的乙酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为10mM的乙酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)乙酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为5mM至15mM的乙酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为10mM的乙酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)乙酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为5mM至15mM的乙酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为10mM的乙酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，乙酸盐缓冲液是存在于所述制剂中的仅有的缓冲液。在某些实施方案中，所述多元醇是糖、糖醇或糖酸。在一个实施方案中，所述多元醇是糖。在另一实施方案中，所述多元醇是糖醇。在又一实施方案中，所述多元醇是糖酸。在一个具体实施方案中，所述多元醇是蔗糖。在一个实施方案中，蔗糖的浓度为5-10％(w/v)。在一个实施方案中，蔗糖的浓度为8-9％(w/v)。在另一实施方案中，蔗糖的浓度为9％(w/v)。在另一实施方案中，蔗糖的浓度为约8.5％(w/v)。在另一实施方案中，蔗糖的浓度为8.5％(w/v)。在一个具体实施方案中，所述多元醇是麦芽糖。在一个实施方案中，麦芽糖的浓度为5-10％(w/v)。在一个实施方案中，麦芽糖的浓度为8-9％(w/v)。在另一实施方案中，麦芽糖的浓度为9％(w/v)。在另一实施方案中，麦芽糖的浓度为约8.5％(w/v)。在另一实施方案中，麦芽糖的浓度为8.5％(w/v)。在一个具体实施方案中，所述多元醇是海藻糖。在一个实施方案中，海藻糖的浓度为5-10％(w/v)。在一个实施方案中，海藻糖的浓度为8-9％(w/v)。在另一实施方案中，海藻糖的浓度为9％(w/v)。在另一实施方案中，海藻糖的浓度为约8.5％(w/v)。在另一实施方案中，海藻糖的浓度为8.5％(w/v)。在一个具体实施方案中，所述多元醇是甘露糖醇。在一个实施方案中，甘露糖醇的浓度为5-10％(w/v)。在一个实施方案中，甘露糖醇的浓度为8-9％(w/v)。在另一实施方案中，甘露糖醇的浓度为9％(w/v)。在另一实施方案中，甘露糖醇的浓度为约8.5％(w/v)。在另一实施方案中，甘露糖醇的浓度为8.5％(w/v)。在一个具体实施方案中，所述多元醇是山梨糖醇。在一个实施方案中，山梨糖醇的浓度为5-10％(w/v)。在一个实施方案中，山梨糖醇的浓度为8-9％(w/v)。在另一实施方案中，山梨糖醇的浓度为9％(w/v)。在另一实施方案中，山梨糖醇的浓度为约8.5％(w/v)。在另一实施方案中，山梨糖醇的浓度为8.5％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂是聚山梨醇酯。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-20。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-40。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-60。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-80。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.005％(w/v)。
在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)琥珀酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为5mM至15mM的琥珀酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为10mM的琥珀酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)琥珀酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为5mM至15mM的琥珀酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为10mM的琥珀酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)琥珀酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为5mM至15mM的琥珀酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为10mM的琥珀酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)琥珀酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为5mM至15mM的琥珀酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为10mM的琥珀酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，琥珀酸盐缓冲液是存在于所述制剂中的仅有的缓冲液。在某些实施方案中，所述多元醇是糖、糖醇或糖酸。在一个实施方案中，所述多元醇是糖。在另一实施方案中，所述多元醇是糖醇。在又一实施方案中，所述多元醇是糖酸。在一个具体实施方案中，所述多元醇是蔗糖。在一个实施方案中，蔗糖的浓度为5-10％(w/v)。在一个实施方案中，蔗糖的浓度为8-9％(w/v)。在另一实施方案中，蔗糖的浓度为9％(w/v)。在另一实施方案中，蔗糖的浓度为约8.5％(w/v)。在另一实施方案中，蔗糖的浓度为8.5％(w/v)。在一个具体实施方案中，所述多元醇是麦芽糖。在一个实施方案中，麦芽糖的浓度为5-10％(w/v)。在一个实施方案中，麦芽糖的浓度为8-9％(w/v)。在另一实施方案中，麦芽糖的浓度为9％(w/v)。在另一实施方案中，麦芽糖的浓度为约8.5％(w/v)。在另一实施方案中，麦芽糖的浓度为8.5％(w/v)。在一个具体实施方案中，所述多元醇是海藻糖。在一个实施方案中，海藻糖的浓度为5-10％(w/v)。在一个实施方案中，海藻糖的浓度为8-9％(w/v)。在另一实施方案中，海藻糖的浓度为9％(w/v)。在另一实施方案中，海藻糖的浓度为约8.5％(w/v)。在另一实施方案中，海藻糖的浓度为8.5％(w/v)。在一个具体实施方案中，所述多元醇是甘露糖醇。在一个实施方案中，甘露糖醇的浓度为5-10％(w/v)。在一个实施方案中，甘露糖醇的浓度为8-9％(w/v)。在另一实施方案中，甘露糖醇的浓度为9％(w/v)。在另一实施方案中，甘露糖醇的浓度为约8.5％(w/v)。在另一实施方案中，甘露糖醇的浓度为8.5％(w/v)。在一个具体实施方案中，所述多元醇是山梨糖醇。在一个实施方案中，山梨糖醇的浓度为5-10％(w/v)。在一个实施方案中，山梨糖醇的浓度为8-9％(w/v)。在另一实施方案中，山梨糖醇的浓度为9％(w/v)。在另一实施方案中，山梨糖醇的浓度为约8.5％(w/v)。在另一实施方案中，山梨糖醇的浓度为8.5％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂是聚山梨醇酯。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-20。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-40。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-60。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-80。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.005％(w/v)。
在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)组氨酸缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为5mM至15mM的组氨酸缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为10mM的组氨酸缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)组氨酸缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为5mM至15mM的组氨酸缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为10mM的组氨酸缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)组氨酸缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为5mM至15mM的组氨酸缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为10mM的组氨酸缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)组氨酸缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为5mM至15mM的组氨酸缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为10mM的组氨酸缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，组氨酸缓冲液是存在于所述制剂中的仅有的缓冲液。在某些实施方案中，所述多元醇是糖、糖醇或糖酸。在一个实施方案中，所述多元醇是糖。在另一实施方案中，所述多元醇是糖醇。在又一实施方案中，所述多元醇是糖酸。在一个具体实施方案中，所述多元醇是蔗糖。在一个实施方案中，蔗糖的浓度为5-10％(w/v)。在一个实施方案中，蔗糖的浓度为8-9％(w/v)。在另一实施方案中，蔗糖的浓度为9％(w/v)。在另一实施方案中，蔗糖的浓度为约8.5％(w/v)。在另一实施方案中，蔗糖的浓度为8.5％(w/v)。在一个具体实施方案中，所述多元醇是麦芽糖。在一个实施方案中，麦芽糖的浓度为5-10％(w/v)。在一个实施方案中，麦芽糖的浓度为8-9％(w/v)。在另一实施方案中，麦芽糖的浓度为9％(w/v)。在另一实施方案中，麦芽糖的浓度为约8.5％(w/v)。在另一实施方案中，麦芽糖的浓度为8.5％(w/v)。在一个具体实施方案中，所述多元醇是海藻糖。在一个实施方案中，海藻糖的浓度为5-10％(w/v)。在一个实施方案中，海藻糖的浓度为8-9％(w/v)。在另一实施方案中，海藻糖的浓度为9％(w/v)。在另一实施方案中，海藻糖的浓度为约8.5％(w/v)。在另一实施方案中，海藻糖的浓度为8.5％(w/v)。在一个具体实施方案中，所述多元醇是甘露糖醇。在一个实施方案中，甘露糖醇的浓度为5-10％(w/v)。在一个实施方案中，甘露糖醇的浓度为8-9％(w/v)。在另一实施方案中，甘露糖醇的浓度为9％(w/v)。在另一实施方案中，甘露糖醇的浓度为约8.5％(w/v)。在另一实施方案中，甘露糖醇的浓度为8.5％(w/v)。在一个具体实施方案中，所述多元醇是山梨糖醇。在一个实施方案中，山梨糖醇的浓度为5-10％(w/v)。在一个实施方案中，山梨糖醇的浓度为8-9％(w/v)。在另一实施方案中，山梨糖醇的浓度为9％(w/v)。在另一实施方案中，山梨糖醇的浓度为约8.5％(w/v)。在另一实施方案中，山梨糖醇的浓度为8.5％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂是聚山梨醇酯。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-20。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-40。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-60。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-80。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.005％(w/v)。
在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)柠檬酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为5mM至15mM的柠檬酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为10mM的柠檬酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)柠檬酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为5mM至15mM的柠檬酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为10mM的柠檬酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)柠檬酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为5mM至15mM的柠檬酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为10mM的柠檬酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)柠檬酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为5mM至15mM的柠檬酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为10mM的柠檬酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，柠檬酸盐缓冲液是存在于所述制剂中的仅有的缓冲液。在某些实施方案中，所述多元醇是糖、糖醇或糖酸。在一个实施方案中，所述多元醇是糖。在另一实施方案中，所述多元醇是糖醇。在又一实施方案中，所述多元醇是糖酸。在一个具体实施方案中，所述多元醇是蔗糖。在一个实施方案中，蔗糖的浓度为5-10％(w/v)。在一个实施方案中，蔗糖的浓度为8-9％(w/v)。在另一实施方案中，蔗糖的浓度为9％(w/v)。在另一实施方案中，蔗糖的浓度为约8.5％(w/v)。在另一实施方案中，蔗糖的浓度为8.5％(w/v)。在一个具体实施方案中，所述多元醇是麦芽糖。在一个实施方案中，麦芽糖的浓度为5-10％(w/v)。在一个实施方案中，麦芽糖的浓度为8-9％(w/v)。在另一实施方案中，麦芽糖的浓度为9％(w/v)。在另一实施方案中，麦芽糖的浓度为约8.5％(w/v)。在另一实施方案中，麦芽糖的浓度为8.5％(w/v)。在一个具体实施方案中，所述多元醇是海藻糖。在一个实施方案中，海藻糖的浓度为5-10％(w/v)。在一个实施方案中，海藻糖的浓度为8-9％(w/v)。在另一实施方案中，海藻糖的浓度为9％(w/v)。在另一实施方案中，海藻糖的浓度为约8.5％(w/v)。在另一实施方案中，海藻糖的浓度为8.5％(w/v)。在一个具体实施方案中，所述多元醇是甘露糖醇。在一个实施方案中，甘露糖醇的浓度为5-10％(w/v)。在一个实施方案中，甘露糖醇的浓度为8-9％(w/v)。在另一实施方案中，甘露糖醇的浓度为9％(w/v)。在另一实施方案中，甘露糖醇的浓度为约8.5％(w/v)。在另一实施方案中，甘露糖醇的浓度为8.5％(w/v)。在一个具体实施方案中，所述多元醇是山梨糖醇。在一个实施方案中，山梨糖醇的浓度为5-10％(w/v)。在一个实施方案中，山梨糖醇的浓度为8-9％(w/v)。在另一实施方案中，山梨糖醇的浓度为9％(w/v)。在另一实施方案中，山梨糖醇的浓度为约8.5％(w/v)。在另一实施方案中，山梨糖醇的浓度为8.5％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂是聚山梨醇酯。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-20。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-40。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-60。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-80。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.005％(w/v)。
在具体的实施方案中，本文提供了包含与PD-1结合的抗体的药物制剂，其中所述制剂的pH为5.2，并且包含(i)10mM乙酸钠缓冲液，(ii)8.5％(w/v)蔗糖，和(iii)0.005％(w/v)聚山梨醇酯-80。在另一具体实施方案中，本文提供了包含与PD-1结合的抗原结合片段的药物制剂，其中所述制剂的pH为5.2，并且包含(i)10mM乙酸钠缓冲液，(ii)8.5％(w/v)蔗糖，和(iii)0.005％(w/v)聚山梨醇酯-80。
在本文提供的各种药物制剂的某实施方案中，所述制剂包含PD-1抗体。在本文提供的各种药物制剂的其它实施方案中，所述制剂包含PD-1抗原结合片段。
在本文提供的各种药物制剂的一些实施方案中，所述制剂包含PD-1抗体，所述PD-1抗体包含VL，所述VL包含如表1中所示的抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3。在本文提供的各种药物制剂的一些实施方案中，所述制剂包含PD-1抗体，所述PD-1抗体包含VL，所述VL包含如表1中所示的PD1AB-1的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3。在本文提供的各种药物制剂的一些实施方案中，所述制剂包含PD-1抗体，所述PD-1抗体包含VL，所述VL包含如表1中所示的PD1AB-2的VLCDR1、VL CDR2和VL CDR3。在本文提供的各种药物制剂的一些实施方案中，所述制剂包含PD-1抗体，所述PD-1抗体包含VL，所述VL包含如表1中所示的PD1AB-3的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3。在本文提供的各种药物制剂的一些实施方案中，所述制剂包含PD-1抗体，所述PD-1抗体包含VL，所述VL包含如表1中所示的PD1AB-4的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3。在本文提供的各种药物制剂的一些实施方案中，所述制剂包含PD-1抗体，所述PD-1抗体包含VL，所述VL包含如表1中所示的PD1AB-5的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3。在本文提供的各种药物制剂的一些实施方案中，所述制剂包含PD-1抗体，所述PD-1抗体包含VL，所述VL包含如表1中所示的PD1AB-6的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3。
在本文提供的各种药物制剂的其它实施方案中，所述制剂包含PD-1抗体，所述PD-1抗体包含VH，所述VH包含如表2中所示的抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3。在本文提供的各种药物制剂的一些实施方案中，所述制剂包含PD-1抗体，所述PD-1抗体包含VH，所述VH包含如表2中所示的PD1AB-1的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3。在本文提供的各种药物制剂的一些实施方案中，所述制剂包含PD-1抗体，所述PD-1抗体包含VH，所述VH包含如表2中所示的PD1AB-2的VHCDR1、VH CDR2和VH CDR3。在本文提供的各种药物制剂的一些实施方案中，所述制剂包含PD-1抗体，所述PD-1抗体包含VH，所述VH包含如表2中所示的PD1AB-3的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3。在本文提供的各种药物制剂的一些实施方案中，所述制剂包含PD-1抗体，所述PD-1抗体包含VH，所述VH包含如表2中所示的PD1AB-4的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3。在本文提供的各种药物制剂的一些实施方案中，所述制剂包含PD-1抗体，所述PD-1抗体包含VH，所述VH包含如表2中所示的PD1AB-5的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3。在本文提供的各种药物制剂的一些实施方案中，所述制剂包含PD-1抗体，所述PD-1抗体包含VH，所述VH包含如表2中所示的PD1AB-6的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3。
在本文提供的各种药物制剂的其它实施方案中，所述制剂包含PD-1抗体，所述PD-1抗体包含：(a)VL，所述VL包含如表1中所示的抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3，和(b)VH，所述VH包含如表2中所示的抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者的VHCDR1、VH CDR2和VH CDR3。在本文提供的各种药物制剂的一个实施方案中，所述制剂包含PD-1抗体，所述PD-1抗体包含：(a)VL，所述VL包含如表1中所示的PD1AB-1的VL CDR1、VLCDR2和VL CDR3，和(b)VH，所述VH包含如表2中所示的PD1AB-1中的任一者的VH CDR1、VHCDR2和VH CDR3。在本文提供的各种药物制剂的一个实施方案中，所述制剂包含PD-1抗体，所述PD-1抗体包含：(a)VL，所述VL包含如表1中所示的PD1AB-2的VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3，和(b)VH，所述VH包含如表2中所示的PD1AB-2的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3。在本文提供的各种药物制剂的一个实施方案中，所述制剂包含PD-1抗体，所述PD-1抗体包含：(a)VL，所述VL包含如表1中所示的PD1AB-3的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3，和(b)VH，所述VH包含如表2中所示的PD1AB-3的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3。在本文提供的各种药物制剂的一个实施方案中，所述制剂包含PD-1抗体，所述PD-1抗体包含：(a)VL，所述VL包含如表1中所示的PD1AB-4的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3，和(b)VH，所述VH包含如表2中所示的PD1AB-4的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3。在本文提供的各种药物制剂的一个实施方案中，所述制剂包含PD-1抗体，所述PD-1抗体包含：(a)VL，所述VL包含如表1中所示的PD1AB-5的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3，和(b)VH，所述VH包含如表2中所示的PD1AB-5的VH CDR1、VH CDR2和VHCDR3。在本文提供的各种药物制剂的一个实施方案中，所述制剂包含PD-1抗体，所述PD-1抗体包含：(a)VL，所述VL包含如表1中所示的PD1AB-6的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3，和(b)VH，所述VH包含如表2中所示的PD1AB-6的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3。
在本文提供的各种药物制剂的某些实施方案中，所述制剂包含PD1AB-1。在本文提供的各种药物制剂的一些实施方案中，所述制剂包含PD1AB-2。在本文提供的各种药物制剂的其它实施方案中，所述制剂包含PD1AB-3。在本文提供的各种药物制剂的一些实施方案中，所述制剂包含PD1AB-4。在本文提供的各种药物制剂的其它实施方案中，所述制剂包含PD1AB-5。在本文提供的各种药物制剂的一些实施方案中，所述制剂包含PD1AB-6。在某些实施方案中，所述药物制剂包含PD-1抗体，所述PD-1抗体是IgG1抗体。在一些实施方案中，所述药物制剂包含PD-1抗体，所述PD-1抗体是IgG1变体抗体。在本文提供的各种药物制剂的一些实施方案中，所述制剂包含PD1AB-6-K3。在本文提供的各种药物制剂的一些实施方案中，所述制剂包含PD1AB-6-4P。
在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂是含水药物制剂。
在某些实施方案中，本文提供的各种药物制剂是稳定的。可在选定的温度下持续选定的时间段测量本文提供的药物制剂的稳定性。在一个实施方案中，液体制剂中的抗体以液体形式稳定至少约3个月。在一个实施方案中，液体制剂中的抗体以液体形式稳定至少约4个月。在一个实施方案中，液体制剂中的抗体以液体形式稳定至少约5个月。在一个实施方案中，液体制剂中的抗体以液体形式稳定至少约6个月。在一个实施方案中，液体制剂中的抗体以液体形式稳定至少约12个月。在一个实施方案中，液体制剂中的抗体以液体形式稳定至少约18个月。在一个实施方案中，液体制剂中的抗体以液体形式稳定至少约24个月。还涵盖上面叙述的时间段中间的值和范围，例如约3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24个月。此外，旨在包括使用任何上面叙述的值的组合作为上限和/或下限的值的范围。在一些实施方案中，所述药物制剂在-70℃下是稳定的。在一些实施方案中，所述药物制剂在4℃下是稳定的。在一些实施方案中，所述药物制剂在25℃下是稳定的。在一些实施方案中，所述药物制剂在30℃下是稳定的。在具体的实施方案中，当在-70℃±10℃下储存时，所述药物制剂稳定至少12个月。在其它实施方案中，当在5℃±3℃下储存时，所述药物制剂稳定至少6个月。
本文进一步提供了制备本文公开的各种药物制剂的方法，所述方法包括：(a)在培养基中培养细胞，其中所述细胞包含一种或多种多核苷酸，所述多核苷酸包含编码本文提供的抗体的重链、轻链或重链和轻链两者或其抗原结合片段的核苷酸序列；(b)收获所述培养基；并且(c)对所述培养基进行一系列纯化步骤。
在所述方法的某些实施方案中，纯化步骤包括：(i)亲和色谱；(ii)病毒灭活；(iii)离子交换色谱；(iv)病毒过滤；和(v)超滤/渗滤。在一个实施方案中，亲和色谱是蛋白A亲和色谱。在另一实施方案中，病毒灭活步骤是低pH病毒灭活步骤。在又一实施方案中，离子交换色谱是阴离子交换色谱。在再一实施方案中，亲和色谱是蛋白A亲和色谱，病毒灭活步骤是低pH病毒灭活步骤，且离子交换色谱是阴离子交换色谱。
在所述方法的某些实施方案中，纯化步骤包括：(i)蛋白A亲和色谱；(ii)低pH病毒灭活步骤；(iii)阴离子交换色谱；(iv)病毒过滤步骤；和(v)超滤/渗滤。
在一些实施方案中，制备本文公开的各种药物制剂的方法进一步包括配制步骤。
4.附图说明
图1A-1B显示T细胞减弱性抗PD-1抗体(PD1AB)不同PD-L1(PD-L1-DyL650表示与染料DyL650缀合的PD-L1)竞争与PD-1结合：(A)PD1AB-1、PD1AB-2和PD1AB-6；(B)PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4和PD1AB-5。拮抗剂抗体MDX 4H1阻断PD-L1与PD-1的结合。
图2描绘PD-1:PD1AB-6Fab相互作用位点相对于PD-1:PD-L1相互作用位点在PD-1的远侧。
图3描绘PD1AB-6Fab针对PD-1β折叠发生结合，且与由残基100-105组成的PD-1环形成实质性相互作用。
图4显示PD1AB-6-IgG1的重链(HC)和轻链(LC)以及其变体PD1AB-6-K3和PD1AB-6-4P的HC的氨基酸序列。
图5A-5B描绘PD1AB-6-IgG1对在CHO细胞上表达的食蟹猴(A)或人(B)PD-1的亲和力。
图6描绘PD1AB-6-IgG1、同种型对照和人PD-L1 Fc融合蛋白(hPD-L1 Fc)与对CD4+T细胞设门的活化人PBMC的结合。
图7描绘PD1AB-6-IgG1、同种型对照和人PD-L1 Fc融合蛋白(hPD-L1 Fc)与对CD4+T细胞设门的活化食蟹猴PBMC的结合。
图8A-8D显示采用Cisbio Tag-liteTM检测获得的PD1AB-6变体与在HEK293细胞上表达的FcγRI(A)、FcγRIIIa(V158)(B)或FcγRIIb(C)的结合，以及(D)PD1AB-6变体与FcγRI、FcγRIIIa(V158)或FcγRIIb结合的EC50值。
图9A-9C描绘采用FACS获得的PD1AB-6变体与在CHO细胞上表达的FcγRIIIa(V158)(A)或FcγRI(B)的结合，以及(C)PD-1抗体变体与FcγRI或FcγRIIIa结合的EC50值。
图10A-10B描绘在四个个别健康供体的两个代表当中PD1AB-6变体和对照人IgG1Fc的ADCC活性：(A)供体7和(B)供体8。
图11描绘PD1AB-6变体的CDC活性。数据代表3次独立实验：(i)PD1AB-6-IgG1和抗人CD20 IgG1的CDC活性；(ii)PD1AB-6-IgG1和PD1AB-6-K3的CDC活性；(iii)PD1AB-6-4P和市售人IgG4同种型对照抗体及人IgG1 Fc蛋白的CDC活性。
图12描绘在人PBMC测定中通过在刺激后24小时的培养物上清液中的IL-2水平度量的PD1AB-6变体的有效减弱活性。
图13描绘在人全血测定中的PD1AB-6-K3的活性。图形显示了由供体4获得的用于计算IFN-γ抑制的EC50的代表性曲线。表中显示对于4个健康供体用PD1AB-6变体和CTLA4Ig产生的IFN-γ抑制的EC50值。
图14A-14C描绘PD1AB-6-IgG1对PD-1表达的下调，如通过(A)在用抗CD3+抗CD28活化48小时的人PBMC中对CD3+T细胞的同种型对比PD-1染色，(B)在同种型IgG1对比PD1AB-6-IgG1处理的PBMC中的PD-1表达(检测抗PD-1抗体不被PD1AB-6阻断)，和(C)在来自3个不同供体的用抗CD3+抗CD28及三种不同浓度的同种型IgG1或PD1AB-6-IgG1活化的人PBMC中CD3+T细胞上的PD-1表达所确定。
图15A-15C显示在
Figure BDA0002285022320000321
T200上(A)PD1AB-6-IgG1、(B)PD1AB-6-4P和(C)PD1AB-6-K3与PD-1抗原的结合。
图16显示PD1AB-6变体的差示扫描量热分析。
图17显示如通过在一系列pH下的单体含量的每周变化所测量的在40℃下的PD1AB-6-K3稳定性。
图18显示如通过DLS在一系列缓冲液和pH下对在CHO细胞中表达的PD1AB-6-K3所测量的在40℃热应力条件下经8周的亚微米粒度的增加。
图19显示如通过A360在一系列缓冲液和pH下对在CHO细胞中表达的PD1AB-6-K3所测量的在40℃热应力条件下经8周的浊度增加速率。
图20显示如通过在一系列pH下的单体含量的每周变化所测量的在5℃下的PD1AB-6-K3稳定性。
图21A-21B示出PD1AB-6-K3药物物质的制备方法的流程图，其中(A)显示上游细胞培养和收获步骤，并且(B)显示下游纯化步骤。
图22是pH和表面活性剂浓度(例如，PS-80)对含有10mM乙酸钠、9％(w/v)蔗糖和125mg/mL的PD1AB-6-K3抗体的制剂样品的影响的双臂(2×2)全因子建模的实验设计的示意图
图23A-23D描绘在不同的时间点进行尺寸排除色谱法(SEC)以定量候选制剂中的抗体的单体、高分子量(HMW)物质(聚集体)和低分子量(LMW)物质(片段或段片)的分数的结果。(A)具有125mg/ml抗体、10mM乙酸钠、9％(w/v)蔗糖、0.005％(w/v)PS-80并且在4℃下储存12周后调节至不同pH(即，pH 5.2、5.5和5.8)的候选抗体制剂的SEC分析的结果。储存在-80℃下的对照制剂包括在内。左图是右图中的10与20(分钟的洗脱时间)之间的下部区域的放大视图。显示了在4℃下储存的候选制剂中的抗体的HMW的分数(％)在(B)12周、(C)26周或(D)14个月内的变化。误差条是重复注射内标物的标准偏差，并且代表了方法/积分的精度。
图24A-24C描绘在不同的时间点进行SEC以定量候选制剂中的抗体的单体、HMW物质(聚集体)和LMW物质(片段或段片)的分数的结果(A)具有125mg/ml抗体、10mM乙酸钠、9％(w/v)蔗糖、0.005％(w/v)PS-80并且在25℃下储存12周后调节至不同pH(即，pH 5.2、5.5和5.8)的候选抗体制剂的SEC分析的结果。储存在-80℃下的对照制剂包括在内。左图是右图中的10与20(分钟的洗脱时间)之间的下部区域的放大视图。显示了在25℃下储存的候选制剂中的抗体的HMW的分数(％)在(B)12周或(C)26周内的变化。误差条是重复注射内标物的标准偏差，并且代表了方法/积分的精度。
图25A-25C描绘在不同的时间点进行SEC以定量候选制剂中的抗体的单体HMW物质(聚集体)和LMW物质(片段或段片)的分数的结果。(A)具有125mg/ml抗体、10mM乙酸钠、9％(w/v)蔗糖、0.005％(w/v)PS-80并且在40℃下储存4周后调节至不同pH(即，pH 5.2、5.5和5.8)的候选抗体制剂的SEC分析的结果。储存在-80℃下的对照制剂包括在内。左图是右图中的10与20(分钟的洗脱时间)之间的下部区域的放大视图。显示了在40℃下储存的候选制剂中的抗体的(B)HMW或(C)LMW的分数(％)在4周内的变化。误差条是重复注射内标物的标准偏差，并且代表了方法/积分的精度。
图26显示具有125mg/ml抗体、10mM乙酸钠、9％(w/v)蔗糖和PS-80含量(从0.005％(w/v)不等)与pH值(从pH 5.2至pH 5.8不等)的不同组合的候选抗体制剂在候选制剂已于5℃、25℃或40℃下储存4周后的CE-SDS分析的结果。每个条显示如通过CE-SDS检测的候选制剂中的抗体的LMW分数(％)的定量。储存在-80℃下的对照制剂包括在内。
图27显示具有125mg/ml抗体、10mM乙酸钠、9％(w/v)蔗糖和PS-80含量(从0.005％(w/v)不等)与pH值(从pH 5.2至pH 5.8不等)的不同组合的候选抗体制剂在候选制剂已于4℃下储存26周后的CE-SDS分析的结果。显示了代表HMW、单体和LMW级分的峰。
图28A-28B显示具有125mg/ml抗体、10mM乙酸钠、9％(w/v)蔗糖和PS-80含量(从0.005％(w/v)不等)与pH值(从pH 5.2至pH 5.8不等)的不同组合的候选抗体制剂在候选制剂已于(A)4℃下储存12周或(B)25℃下储存12周后的流动成像显微镜检查的结果。显示了在≥2μm、≥10μm和≥25μm粒度范围内的亚可见颗粒的密度(计数/ml)。
图29显示具有125mg/ml抗体、10mM乙酸钠、9％(w/v)蔗糖和PS-80含量(从0.005％(w/v)不等)与pH值(从pH 5.2至pH 5.8不等)的不同组合的候选抗体制剂在候选制剂已于4℃下储存12和/或26周后的流动成像显微镜检查的结果。显示了在≥10μm和≥25μm粒度范围内的亚可见颗粒的密度(计数/ml)。
图30A-30C描绘在采用阳离子交换色谱(CEX)评估的候选制剂中的抗体的电荷同种型分布的结果。(A)在时间零(T0，即在4℃或25℃下储存候选制剂前)对配制抗体进行CEX分析的代表性结果。显示了分别代表配制抗体的主要物质、酸物质和碱性物质的三个峰。还显示了通过对具有125mg/ml抗体、10mM乙酸钠、9％(w/v)蔗糖和PS-80含量(从0.005％(w/v)不等)与pH值(从pH 5.2至pH 5.8不等)的不同组合的候选制剂在候选制剂已于4℃或25℃下储存12周后进行CEX分析确认的(B)主要抗体物质(主峰)或(C)酸性抗体物质(酸性峰)的定量。包括在T0时的数据作为对照。
图31显示通过对具有125mg/ml抗体、10mM乙酸钠、9％(w/v)蔗糖和PS-80含量(从0.005％(w/v)不等)与pH值(从pH 5.2至pH 5.8不等)的不同组合的候选制剂在候选制剂已于4℃下储存12周或26周后进行CEX分析确认的主要抗体物质(主峰)的定量。包括在T0时的数据作为对照。
图32显示对具有125mg/ml抗体、10mM乙酸钠、9％(w/v)蔗糖和PS-80含量(从0.005％(w/v)不等)与pH值(从pH 5.2至pH 5.8不等)的不同组合的候选抗体制剂在候选制剂已于4℃下储存12周或25℃下储存12周后进行反相高效液相色谱法(RP-HPLC)的代表性结果。HC：重链；LC：轻链。
图33A-33B描绘制剂样品中的抗体的
Figure BDA0002285022320000341
分析的结果。(A)在40℃下持续4周(左)和在T0(右)储存的候选制剂的代表性
Figure BDA0002285022320000342
测定结果。(B)具有125mg/ml抗体、10mM乙酸钠、9％(w/v)蔗糖和PS-80含量(从0.005％(w/v)不等)与pH值(从pH 5.2至pH 5.8不等)的不同组合的候选抗体制剂在T0时或者在候选制剂已于25℃下储存4周或40℃下储存4周或4℃下储存12周或25℃下储存12周后的KD(nM)值的定量。
图34A-34B描绘用SEC和MFI检查的搅动对候选制剂的液体稳定性的影响的结果。(A)具有125mg/ml抗体、10mM乙酸钠(pH 5.2)、8.5％(w/v)蔗糖、0.001％(w/v)或0.015％(w/v)PS-80的候选制剂在候选制剂于4℃下搅动长达24小时后的SEC分析的结果。显示了在0、4、8和24小时时间点的HMW分数的定量。(B)具有125mg/ml抗体、10mM乙酸钠(pH 5.2)、8.5％(w/v)蔗糖、0.001％(w/v)或0.015％(w/v)PS-80的候选制剂在候选制剂于4℃下搅动24小时后的流动成像显微镜检查的结果。显示了在≥2μm、≥10μm和≥25μm粒度范围内的亚可见颗粒的密度(计数/ml)。
图35A-35C显示用SEC和MFI检查的重复冷冻-解冻循环对候选制剂的液体稳定性的影响。(A)具有125mg/ml抗体、10mM乙酸钠、9％(w/v)蔗糖和PS-80含量(从0.005％(w/v)不等)与pH值(从pH 5.2至pH 5.8不等)的不同组合的候选制剂在候选制剂已经历重复循环后的SEC分析的结果。显示了在0、3或5个冷冻-解冻循环后的单体分数的定量。在(B)≥10μm和(C)≥25μm粒度范围内的亚可见颗粒的密度仍远低于静脉内施用的USP标准，该标准是如通过对具有125mg/ml抗体、10mM乙酸钠、9％(w/v)蔗糖和PS-80含量(从0.005％(w/v)不等)与pH值(从pH 5.2至pH 5.8不等)的不同组合的候选制剂在候选制剂已经历5个冷冻-解冻循环后进行流动成像显微镜检查确定的。
5.具体实施方式
本文提供了与PD-1(包括人和/或食蟹猴PD-1)结合的结合蛋白(如抗体)的药物制剂，以及制备这类药物制剂的方法。
在本文提供的各种药物制剂的一些实施方案中，所述抗体与人和/或食蟹猴PD-1结合。在一些实施方案中，与人和/或食蟹猴PD-1结合的结合蛋白(如抗体)不与啮齿动物PD-1结合。在某些实施方案中，PD-1结合蛋白(包括本文公开的抗体)是激动剂(例如，可模拟PD-1配体的作用，并诱导PD-1信号传导)。在一些实施方案中，本文提供的结合蛋白(如针对PD-1的抗体)(i)与人和/或食蟹猴PD-1结合，(ii)不竞争与PD-1配体(例如，PD-L1和/或PD-L2)的结合，和/或(iii)诱导PD-1信号传导。在一个实施方案中，PD-1抗体与人PD-1结合。在一个实施方案中，PD-1抗体与食蟹猴PD-1结合。在一个实施方案中，PD-1抗体与人PD-1和食蟹猴PD-1两者结合。在一些实施方案中，PD-1抗体不同PD-L1竞争与PD-1的结合。在其它实施方案中，PD-1抗体不同PD-L2竞争与PD-1的结合。还在其它实施方案中，PD-1抗体不同PD-L1或PD-L2竞争与PD-1的结合。在其它实施方案中，PD-1抗体诱导PD-1信号传导。在具体的实施方案中，本文提供的PD-1抗体与人PD-1和食蟹猴PD-1两者结合，不同PD-L1或PD-L2竞争与PD-1的结合，并且诱导PD-1信号传导。在一些实施方案中，在体外(例如，在基于细胞的测定中)测定结合、竞争和/或信号传导。在其它实施方案中，离体(例如，在T细胞功能测定中)测定结合、竞争和/或信号传导。在其它实施方案中，使用来自受试者(例如，人受试者)的样品测定结合、竞争和/或信号传导。在某些实施方案中，测定包括(1)人或食蟹猴PBMC测定(参见例如实施例5.2.1和5.2.2)；(2)人全血样品测定(参见例如实施例5.2.1)。在某些实施方案中，如本文所述的结合蛋白(如抗PD-1抗体)表现出与PD-L1和/或PD-L2的天然生物学功能一致的活性。在一些实施方案中，所述活性是在体外表现的。在其它实施方案中，所述活性是离体表现的。
在本文提供的各种药物制剂的具体实施方案中，本文提供的与PD-1结合的结合蛋白(如抗体)共有彼此竞争与PD-1的结合的共同特征。这种竞争性抑制可指示每种抗体与PD-1的相同区域(例如，相同表位)结合，从而显露出类似的作用。在某些实施方案中，本文提供的抗PD-1抗体包括人源化抗PD-1抗体，如来源于或基于抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5和/或PD1AB-6的那些。在其它实施方案中，本文提供的抗PD-1抗体竞争与来源于或基于PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5和/或PD1AB-6的抗体的结合。在一些实施方案中，抗PD-1抗体具有如表1-2中所述的CDR序列。在某些实施方案中，抗PD-1抗体与人PD-1的特定结构域或表位(例如，残基100-105；参见实施例5.1.4)结合。此外，这种结合可在很大程度上归因于所述区域内的特定氨基酸残基(例如，G103和R104；参见实施例5.1.4)，其包含由本文提供的抗PD-1抗体识别的表位。总的来说，本文描述的结果表明，对来源于或基于PD1AB-6的抗PD-1抗体(包括具有一个或多个表1-2中所述的CDR的抗体)所观察到的作用可外推至本文提供的具有相同或类似表位特异性(例如，相同或类似CDR)的其它抗PD-1抗体。例如，如示例性人源化抗PD-1抗体的实施例5.1.2-3、5.1.7-10、5.2.1-3和5.3.1中所示的抗体的活性代表了本文提供的抗PD-1抗体的活性和作用。
在本文提供的各种药物制剂的一些实施方案中，结合蛋白如抗PD-1抗体可包含免疫球蛋白可变区，所述免疫球蛋白可变区包含一个或多个如表1-2中所述的CDR。在这类结合蛋白(例如，抗PD-1抗体)中，CDR可与一个或多个支架区或框架区(FR)连接，所述支架区或框架区使CDR定向，使得CDR实现适当的抗原结合性质。包括如本文所述的抗PD-1抗体在内的这类结合蛋白可诱导PD-1信号传导。
5.1一般技术
本文描述或引用的技术和程序包括本领域技术人员用常规的方法一般很好理解和/或通常采用的技术和程序，举例如以下文献中描述的广泛采用的方法：Sambrook等人，Molecular Cloning:A Laboratory Manual(第3版，2001)；Current Protocols in Molecular Biology(Ausubel等人编，2003)；Therapeutic Monoclonal Antibodies:From Bench to Clinic(An编，2009)；Monoclonal Antibodies:Methods and Protocols(Albitar编，2010)；和Antibody Engineering第1和2卷(Kontermann和Dübel编，第2版，2010)。
5.2术语
除另有描述外，本文所用的所有技术和科学术语具有的含义与本领域普通技术人员通常所理解的相同。出于解释本说明书的目的，术语将适用以下描述，并且每当适当时，以单数使用的术语也将包括复数，反之亦然。所有专利、申请、公布的申请及其它出版物均以引用的方式全文并入。在给出的任何术语描述与以引用的方式并入本文的任何文献冲突的情况下，将以下面给出的术语描述为准。
除另有说明外，术语“程序性死亡蛋白1”、“程序性细胞死亡蛋白1”、“蛋白质PD-1”、“PD-1”、“PD-1多肽”或“PD1”涵盖来自任何脊椎动物来源的多肽(“多肽”和“蛋白质”在本文中可互换使用)，包括任何天然多肽，所述脊椎动物来源包括哺乳动物，如灵长类动物(例如，人和食蟹猴(cynomolgus monkey/cynomolgus))、狗和啮齿动物(例如，小鼠和大鼠)。在某些实施方案中，所述术语包括“相关PD-1多肽”，包括其SNP变体。术语“PD-1”还涵盖“全长”未加工的PD-1以及由在细胞中的加工产生的PD-1的任何形式。在一些实施方案中，PD1具有SEQ ID NO:43的氨基酸序列。GenBankTM登录号U64863另一示例性人PD-1核酸序列。
“相关PD-1多肽”包括可保留PD-1活性的等位基因变体(例如，SNP变体)；剪接变体；片段；衍生物；取代、缺失和插入变体；融合多肽；和种间同源物。如本领域技术人员将理解的那样，本文提供的抗PD-1抗体可与PD-1多肽、PD-1多肽片段、PD-1抗原和/或PD-1表位结合。“表位”可以是较大的PD-1抗原的一部分，所述较大的PD-1抗原可以是较大的PD-1多肽片段的一部分，所述较大的PD-1多肽片段又可以是较大的PD-1多肽的一部分。PD-1可以天然或变性形式存在。本文所述的PD-1多肽可分离自多种来源，如分离自人组织类型或分离自别的来源，或者通过重组或合成方法制备。PD-1多肽的直系同源物也是本领域中熟知的。
PD-1多肽“胞外结构域”或“ECD”是指PD-1多肽的基本上不含跨膜和胞质结构域的形式。例如，PD-1多肽ECD可具有少于1％的这类跨膜和/或胞质结构域，并且可具有少于0.5％的这类结构域。
术语“PD1AB-6-IgG1”、“PD1AB-6IgG1”、“PD1AB-6_IgG1”、“IgG1_PD1AB-6”和“IgG1-PD1AB-6”可互换使用，并且是指具有IgG1 Fc区的抗体PD1AB-6。在某些实施方案中，抗体PD1AB-6包含LC_PD1AB-6-IgG1(SEQ ID NO:31)的轻链氨基酸序列和HC_PD1AB-6-IgG1(SEQ ID NO:32)的重链氨基酸序列，例如如图4中所示。
术语“PD1AB-6-K3”、“PD1AB-6-IgG1-K322A”、“PD1AB-6-K322A”、“IgG1_PD1AB-6_K322A”、“IgG1_PD1AB-6_K3”、“IgG1-PD1AB-6-K322A”和“IgG1-PD1AB-6-K3”可互换使用，并且是指在IgG1 Fc区中具有K322A取代的PD1AB-6变体。在某些实施方案中，PD1AB-6变体具有HC_PD1AB-6-IgG1-K322A(SEQ ID NO:33)的重链氨基酸序列，例如如图4中所示。
术语“PD1AB-6-4P”、“IgG4P_PD1AB-6”、“IgG4P-PD1AB-6”、“PD1AB-6_IgG4P”和“PD1AB-6-IgG4P”可互换使用，并且是指具有IgG4P Fc区的PD1AB-6变体。在某些实施方案中，PD-1抗体变体具有HC_PD1AB-6-IgG4P(SEQ ID NO:34)的重链氨基酸序列，例如如图4中所示。
术语“PD1AB-6-4PE”、“IgG4PE_PD1AB-6”、“IgG4PE-PD1AB-6”和“PD1AB-6_IgG4PE”及“PD1AB-6-IgG4PE”可互换使用，并且是指具有如HC_PD1AB-6-IgG4PE(SEQ ID NO:35)的IgG4PE重链氨基酸序列的PD1AB-6变体。
术语“PD-1配体”是指例如在体内或在体外与PD-1结合的分子。PD-1配体的非限制性实例包括天然存在的配体，例如PD-1配体1(PD-L1，也称为B7-H1或CD274)和PD-1配体2(PD-L2，也称为B7-DC或CD273)，以及人工产生的配体。
术语“PD-L1”和“PDL-1”在本文中可互换使用，并且是指PD-1配体1(也称为B7-H1或CD274)。
当应用于本公开的与PD-1结合的结合蛋白(如抗体)时，术语“PD-1活性”、“PD-1信号传导”和“PD-1配体样信号传导”意指所述结合蛋白(例如，抗体)例如在体内或在体外模拟或调节由PD-1配体的结合诱导的生物效应，并且诱导不然将由PD-1配体与PD-1结合产生的生物应答。在评估抗PD-1抗体(例如，与PD-1(例如，人PD-1)结合的抗体或其片段)的结合特异性时，所述抗体当在如下情况下时被视为诱导生物应答：所述应答等于或大于野生型PD-1配体标准物的活性的5％，如等于或大于野生型PD-1配体标准物的活性的10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、125％、150％、175％或200％。在一个实施方案中，抗PD-1抗体或PD-1配体被固定(例如，在塑料表面或珠粒上)。在某些实施方案中，所述抗体具有以下性质：在(1)人或食蟹猴PBMC测定(参见例如，实施例4.2.1和4.2.2)；或(2)人全血样品测定(参见例如，实施例4.2.1)中表现出等于或大于PD-1配体标准物的5％的功效水平，其中EC50等于或小于100nM，例如为90nM、80nM、70nM、60nM、50nM、40nM、30nM、20nM、10nM、5nM、2nM、1nM、0.5nM、0.2nM或0.1nM。
术语“结合蛋白”是指这样的蛋白质，其包含与PD-1(包括人和/或食蟹猴PD-1)结合的部分(例如，一个或多个结合区，如CDR)以及任选允许结合部分采取促进结合蛋白与PD-1多肽、片段或表位结合的构象的支架或框架部分(例如，一个或多个支架或框架区)。这类结合蛋白的实例包括抗体，如人抗体、人源化抗体、嵌合抗体、重组抗体、单链抗体、双抗体、三抗体、四抗体、Fab片段、F(ab’)2片段、IgD抗体、IgE抗体、IgM抗体、IgG1抗体、IgG2抗体、IgG3抗体或IgG4抗体及其片段。结合蛋白可包含例如具有移植CDR或CDR衍生物的替代性蛋白质支架或人工支架。这类支架包括但不限于包含引入来例如稳定结合蛋白的三维结构的突变的抗体衍生支架以及包含例如生物相容性聚合物的全合成支架。参见例如Korndorfer等人，2003，Proteins:Structure,Function,and Bioinformatics 53(1):121-29；和Roque等人，2004，Biotechnol.Prog.20:639-54。此外，可以使用肽抗体模拟物(“PAM”)，以及基于利用纤连蛋白组分作为支架的抗体模拟物的支架。在本公开的背景下，例如当解离常数(KD)≤10-7M时，结合蛋白被认为是与PD-1特异性结合或选择性结合。在一些实施方案中，结合蛋白(例如，抗体)可以约10-7M至约10-12M的KD与PD-1特异性结合。在某些实施方案中，当KD≤10-8M或KD≤10-9M时，结合蛋白(例如，抗体)可以高亲和力与PD-1特异性结合。在一个实施方案中，如通过
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测量，结合蛋白(例如，抗体)可以1x 10-9M至10x 10-9M的KD与纯化的人PD-1特异性结合。在另一实施方案中，如通过KinExATM(Sapidyne，Boise，ID)测量，结合蛋白(例如，抗体)可以0.1x 10-9M至1x 10-9M的KD与纯化的人PD-1特异性结合。在又一实施方案中，结合蛋白(例如，抗体)以0.1x 10-9M至10x 10-9M的KD与在细胞上表达的人PD-1特异性结合。在某些实施方案中，结合蛋白(例如，抗体)以0.1x 10-9M至1x10-9M的KD与在细胞上表达的人PD-1特异性结合。在一些实施方案中，结合蛋白(例如，抗体)以1x 10-9M至10x 10-9M的KD与在细胞上表达的人PD-1特异性结合。在某些实施方案中，结合蛋白(例如，抗体)以约0.1x 10-9M、约0.5x 10-9M、约1x 10-9M、约5x 10-9M、约10x 10-9M或其任何范围或区间内的KD与在细胞上表达的人PD-1特异性结合。在再一实施方案中，结合蛋白(例如，抗体)可以0.1x 10-9M至10x 10-9M的KD与在细胞上表达的食蟹猴PD-1特异性结合。在某些实施方案中，结合蛋白(例如，抗体)以0.1x 10-9M至1x 10-9M的KD与在细胞上表达的食蟹猴PD-1特异性结合。在一些实施方案中，结合蛋白(例如，抗体)以1x 10-9M至10x 10-9M的KD与在细胞上表达的食蟹猴PD-1特异性结合。在某些实施方案中，结合蛋白(例如，抗体)以约0.1x 10-9M、约0.5x 10-9M、约1x 10-9M、约5x 10-9M、约10x 10-9M或其任何范围或区间内的KD与在细胞上表达的食蟹猴PD-1特异性结合。
术语“抗体”、“免疫球蛋白”或“Ig”在本文中可互换使用，且在最广泛的意义上使用，并且具体涵盖例如个别抗PD-1单克隆抗体(包括激动剂、拮抗剂、中和抗体、全长或完整单克隆抗体)、具有多表位或单表位特异性的抗PD-1抗体组合物、多克隆或单价抗体、多价抗体、由至少两种完整抗体形成的多特异性抗体(例如双特异性抗体，只要它们表现出所需的生物活性)、单链抗PD-1抗体以及抗PD-1抗体的片段，如下所述。抗体可以是人抗体、人源化抗体、嵌合抗体和/或亲和力成熟抗体以及来自其它物种的抗体，例如来自小鼠和兔等。术语“抗体”旨在包括B细胞的属于免疫球蛋白类多肽的多肽产物，其能够与特异性分子抗原结合，并且由两个相同的多肽链对组成，其中每对具有一条重链(约50-70kDa)和一条轻链(约25kDa)，每条链的每个氨基末端部分包括约100至约130个或更多氨基酸的可变区，并且每条链的每个羧基末端部分包括恒定区。参见例如Antibody Engineering(Borrebaeck编，第2版，1995)；和Kuby，Immunology(第3版，1997)。在具体的实施方案中，特异性分子抗原可由本文提供的抗体结合，包括PD-1多肽、PD-1片段或PD-1表位。抗体还包括但不限于合成抗体、重组产生的抗体、骆驼源化抗体、胞内抗体、抗独特型(抗Id)抗体以及任何上述抗体的功能片段(例如，抗原结合片段，如PD-1结合片段)，所述功能片段是指抗体重链或轻链多肽的保留了作为所述片段的来源的抗体的一些或全部结合活性的部分。功能片段(例如，抗原结合片段，如PD-1结合片段)的非限制性实例包括单链Fv(scFv)(例如，包括单特异性的、双特异性的等)、Fab片段、F(ab’)片段、F(ab)2片段、F(ab’)2片段、二硫键连接的Fv(dsFv)、Fd片段、Fv片段、双抗体、三抗体、四抗体和微型抗体。特别地，本文提供的抗体包括免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性部分，例如含有与PD-1抗原结合的抗原结合位点的抗原结合结构域或分子(例如，抗PD-1抗体的一个或多个CDR)。这类抗体片段可见于例如Harlow和Lane，Antibodies:A Laboratory Manual(1989)；Mol.Biology and Biotechnology:A Comprehensive Desk Reference(Myers编，1995)；Huston等人，1993，Cell Biophysics 22:189-224；Plückthun和Skerra，1989，Meth.Enzymol.178:497-515；和Day，Advanced Immunochemistry(第2版，1990)。本文提供的抗体可为免疫球蛋白分子的任何类别(例如，IgG、IgE、IgM、IgD和IgA)或任何亚类(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)。抗PD-1抗体可以是激动性抗体或拮抗性抗体。本文提供了针对PD-1的激动性抗体，包括诱导PD-1信号传导的抗体。在具体的实施方案中，针对PD-1的激动性抗体不竞争PD-L1和/或PD-L2与PD-1的结合。
如本文所用的术语“单克隆抗体”是指由基本上同质的抗体的群体获得的抗体，例如除了可能少量存在的可能自然发生的突变之外，构成所述群体的个别抗体是相同的，并且每种单克隆抗体通常将识别抗原上的单个表位。在具体的实施方案中，如本文所用的“单克隆抗体”是由单一杂交瘤或其它细胞产生的抗体，其中例如通过ELISA或本领域中已知的其它抗原结合或竞争性结合测定所确定，所述抗体仅与PD-1表位结合。术语“单克隆”不受限于制备抗体的任何特定方法。例如，可通过Kohler等人，1975，Nature 256:495中首次描述的杂交瘤方法制备或者可采用重组DNA方法在细菌或真核动物或植物细胞中制备(参见例如第4,816,567号美国专利)可用于本公开的单克隆抗体。也可采用例如Clackson等人，1991，Nature 352:624-28和Marks等人，1991，J.Mol.Biol.222:581-97中描述的技术从噬菌体抗体文库中分离“单克隆抗体”。制备克隆细胞系和由此表达的单克隆抗体的其它方法是本领域中熟知的。参见例如，Short Protocols in Molecular Biology(Ausubel等人编，第5版，2002)。本文的实施例中提供了产生单克隆抗体的示例性方法。
如本文所用的“多克隆抗体”是指在对具有许多表位的蛋白质的免疫原性应答中产生的抗体群体，因此包括针对所述蛋白质内的相同或不同表位的多种不同抗体。产生多克隆抗体的方法是本领域中已知的(参见例如，Short Protocols in Molecular Biology(Ausubel等人编，第5版，2002))。
在肽或多肽的上下文中，如本文所用的术语“片段”是指包含小于全长氨基酸序列的肽或多肽。这种片段可例如由在氨基末端处截短、在羧基末端处截短和/或残基从氨基酸序列中内部缺失产生。片段可例如由选择性RNA剪接或由体内蛋白酶活性产生。在某些实施方案中，PD-1片段或抗PD-1抗体片段包括多肽，所述多肽包含PD-1多肽或抗PD-1抗体的氨基酸序列的至少5个连续氨基酸残基、至少10个连续氨基酸残基、至少15个连续氨基酸残基、至少20个连续氨基酸残基、至少25个连续氨基酸残基、至少30个连续氨基酸残基、至少40个连续氨基酸残基、至少50个连续氨基酸残基、至少60个连续氨基酸残基、至少70个连续氨基酸残基、至少80个连续氨基酸残基、至少90个连续氨基酸残基、至少连续100个氨基酸残基、至少125个连续氨基酸残基、至少150个连续氨基酸残基、至少175个连续氨基酸残基、至少200个连续氨基酸残基、至少250个、至少300个、至少350个、至少400个、至少450个、至少500个、至少550个、至少600个、至少个650、至少700个、至少750个、至少800个、至少850个、至少900个或至少950个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在具体的实施方案中，PD-1多肽或抗PD-1抗体的片段保留所述多肽或抗体的至少1种、至少2种、至少3种或更多种功能。
“抗原”是抗体可与其选择性结合的预定抗原。靶抗原可以是多肽、碳水化合物、核酸、脂质、半抗原或其它天然存在或合成的化合物。在一些实施方案中，靶抗原是多肽。
术语“抗原结合片段”、“抗原结合结构域”、“抗原结合区”及类似的术语是指抗体的包含与抗原相互作用并对结合剂赋予其对所述抗原的特异性和亲和力的氨基酸残基的那个部分(例如，CDR)。
“表位”是抗原分子的表面上的位点，单一抗体分子与其结合，如抗原的表面上的局部区域，如PD-1多肽或PD-1多肽片段，其能够结合于抗体的一个或多个抗原结合区，并且在诸如哺乳动物(例如，人)的动物中具有抗原性或免疫原性活性，能够引起免疫应答。具有免疫原性活性的表位是多肽的在动物中引起抗体应答的部分。具有抗原性活性的表位是多肽的一部分，如通过本领域中熟知的任何方法(例如，通过免疫测定)确定，抗体与该部分结合。抗原性表位不一定是免疫原性的。表位通常由诸如氨基酸或糖侧链的分子的化学活性表面基团组成，并且具有特定的三维结构特征以及特定的电荷特征。抗体表位可以是线性表位或构象表位。线性表位由蛋白质中氨基酸的连续序列形成。构象表位由在蛋白质序列中不连续、但在蛋白质折叠成其三维结构时聚在一起的氨基酸形成。当蛋白质的三维结构呈改变的构象时，如在活化或结合另一种蛋白质或配体后，形成诱导表位。在某些实施方案中，PD-1表位是PD-1多肽的三维表面特征。在其它实施方案中，PD-1表位是PD-1多肽的线性特征。通常抗原具有若干或许多不同的表位，并且可与许多不同的抗体反应。
当一种抗体和参考抗体识别三维空间中的相同、重叠或相邻的表位时，该抗体结合“表位”、与参考抗体“基本上相同的表位”或“相同的表位”。用于确定两种抗体是否与三维空间中的相同、重叠或相邻表位结合的最广泛采用且快速的方法是竞争测定法，其可按若干不同的格式配置，例如使用标记抗原或标记抗体。在一些测定中，将抗原固定在96孔板上，或者在细胞表面上进行表达，并且使用放射性、荧光或酶标记测量未标记抗体阻断标记抗体的结合的能力。
“表位映射”是鉴别抗体在其靶抗原上的结合位点或表位的过程。“表位分类”(Epitope binning)是基于抗体识别的表位将抗体分组的过程。更具体地，表位分类包括采用竞争测定法结合计算过程区别不同抗体的表位识别性质的方法和系统，所述计算过程用于基于抗体的表位识别性质对其进行聚类并识别具有不同结合特异性的抗体。
术语“结合”(bind/binding)是指分子之间例如用以形成复合物的相互作用。相互作用可以是例如非共价相互作用，包括氢键、离子键、疏水相互作用和/或范德华相互作用。复合物还可包括通过共价或非共价键、相互作用或力保持在一起的两个或更多个分子的结合。抗体上的单个抗原结合位点与靶分子(如PD-1)的单个表位之间的总非共价相互作用的强度是所述抗体或功能片段对该表位的亲和力。抗体与单价抗原的解离速率(koff)与缔合速率(kon)之比(koff/kon)是解离常数KD，其与亲和力成反比。KD值越低，抗体的亲和力越高。不同的抗体和抗原复合物的KD值不同，并且取决于kon和koff两者。可采用本文提供的任何方法或本领域技术人员熟知的任何其它方法来确定本文提供的抗体的解离常数KD。在一个结合位点上的亲和力并不总是反映抗体与抗原之间的相互作用的真实强度。当含有多个重复抗原决定簇的复合抗原如多价PD-1与含有多个结合位点的抗体接触时，抗体与抗原在一个位点上的相互作用将增加在第二位点上反应的可能性。多价抗体与抗原之间的这类多重相互作用的强度称为亲合力(avidity)。相比于抗体的个别结合位点的亲和力，抗体的亲合力可以是其结合能力的更好的量度。例如，高亲合力可补偿低亲和力，如有时见于五聚IgM抗体，其可具有比IgG低的亲和力，但IgM的来源于其多价的高亲合力使其能够有效地结合抗原。
术语“与PD-1特异性结合的抗体”、“与PD-1表位特异性结合的抗体”及类似术语在本文中也可互换使用，并且是指与PD-1多肽如PD-1抗原或片段或表位(例如，人PD-1，如人PD-1多肽、抗原或表位)特异性结合的抗体。与PD-1(例如，人PD-1)特异性结合的抗体可与PD-1的胞外结构域或来源于胞外结构域的肽结合。与PD-1抗原(例如，人PD-1)特异性结合的抗体可与相关抗原(例如，食蟹猴PD-1)具有交叉反应性。在某些实施方案中，与PD-1抗原特异性结合的抗体不与其它抗原交叉反应。可例如通过免疫测定、
Figure BDA0002285022320000421
或本领域技术人员已知的其它技术来确认与PD-1抗原特异性结合的抗体。如采用诸如放射免疫测定(RIA)和酶联免疫吸附测定(ELISA)的实验技术所确定，当抗体以比对任何交叉反应性抗原更高的亲和力与PD-1抗原结合时，其与PD-1抗原特异性结合。通常特异性或选择性反应将是背景信号或噪声的至少两倍，并且可超过背景的10倍。有关抗体特异性的讨论，参见例如Fundamental Immunology 332-36(Paul编,第2版，1989)。“结合所关注的抗原”(例如，靶抗原，如PD-1)的抗体是这样的抗体，其以足够的亲和力结合所述抗原，使得所述抗体可用作靶向表达所述抗原的细胞或组织中的治疗剂，并且不与其它蛋白质有显著的交叉反应。在这类实施方案中，例如通过荧光活化细胞分选(FACS)分析或RIA确定，抗体与“非靶标”蛋白质结合的程度将小于抗体与其特定靶蛋白结合的约10％。关于抗体与靶分子的结合，术语“特异性结合”特定多肽或特定多肽靶标上的表位、与特定多肽或特定多肽靶标上的表位“特异性结合”或对特定多肽或特定多肽靶标上的表位“特异性的”意指结合在可测量的程度上不同于非特异性相互作用。可例如通过与对照分子的结合相比测定分子的结合来测量特异性结合，所述对照分子通常是不具有结合活性的结构类似的分子。例如，可通过与类似于靶标(例如，过量的非标记靶标)的对照分子竞争来确定特异性结合。在这种情况下，如果标记靶标与探针的结合受过量的未标记靶标竞争性地抑制，则表明是特异性结合。术语“抗PD-1抗体”或“与PD-1结合的抗体”包括这样的抗体，其能够以足够的亲和力结合PD-1，使得所述抗体可用作例如靶向PD-1中的诊断剂。如本文所用的术语“特异性结合”特定多肽或特定多肽靶标上的表位、与特定多肽或特定多肽靶标上的表位“特异性结合”或对特定多肽或特定多肽靶标上的表位“特异性的”是指这样的结合，其中分子与特定多肽或特定多肽上的表位结合，而与任何其它多肽或多肽表位基本上不结合。在某些实施方案中，与PD-1结合的抗体的解离常数(KD)小于或等于10nM、5nM、4nM、3nM、2nM、1nM、0.9nM、0.8nM、0.7nM、0.6nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM或0.1nM。在某些实施方案中，抗PD-1抗体与PD-1的在来自不同物种的PD-1之间(例如，在人与食蟹猴PD-1之间)保守的表位结合。
术语“竞争”当用在抗PD-1抗体(例如，与PD-1结合并竞争靶标上的相同表位或结合位点的激动性抗体和结合蛋白)的上下文中时意指如通过以下测定所确定的竞争，在所述测定中所研究的抗体(或其结合片段)阻止或抑制参考分子(例如，参考配体或参考抗原结合蛋白，如参考抗体)与共同抗原(例如，PD-1或其片段)的特异性结合。许多类型的竞争性结合测定可用于确定测试抗体是否同参考抗体竞争与PD-1(例如，人PD-1)的结合。可采用的测定的实例包括固相直接或间接RIA、固相直接或间接酶免疫测定(EIA)、夹心竞争测定(参见例如Stahli等人，1983，Methods in Enzymology 9:242-53)、固相直接生物素-亲合素EIA(参见例如Kirkland等人，1986，J.Immunol.137:3614-19)、固相直接标记测定、固相直接标记夹心测定(参见例如Harlow和Lane，Antibodies,A Laboratory Manual(1988))、使用I-125标记的固相直接标记RIA(参见例如Morel等人，1988，Mol.Immunol.25:7-15)和直接标记RIA(Moldenhauer等人，1990，Scand.J.Immunol.32:77-82)。通常，这种测定涉及使用结合于固体表面的纯化抗原(例如，PD-1，如人PD-1)或携带未标记的测试抗原结合蛋白(例如，测试抗PD-1抗体)或标记的参考抗原结合蛋白(例如，参考抗PD-1抗体)任一者的细胞。可通过在测试抗原结合蛋白存在下测定结合于固体表面或细胞的标记物的量来测量竞争性抑制。通常测试抗原结合蛋白过量存在。通过竞争测定确认的抗体(竞争抗体)包括与参考抗体结合相同表位的抗体和/或与足够接近由参考抗体结合的表位而发生空间位阻的相邻表位结合的抗体。本文描述了关于确定竞争性结合的方法的另外的细节。通常，当竞争抗体蛋白质过量存在时，其将抑制参考抗体与共同抗原的特异性结合达至少30％，例如40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％或75％。在一些情况下，结合被抑制达至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更多。
“分离”抗体基本上不含细胞物质或来自细胞或组织来源的其它污染蛋白质和/或作为抗体来源的其它污染物组分，或者基本上不含化学合成时的化学前体或其它化学物质。措辞“基本上不含细胞物质”包括抗体的制剂，其中所述抗体与从中分离或重组产生所述抗体的细胞的细胞组分分离。因此，基本上不含细胞物质的抗体包括具有少于约30％、25％、20％、15％,10％、5％或1％(以干重计)的异源蛋白质(本文中也称为“污染蛋白质”)的抗体的制剂。在某些实施方案中，当重组产生抗体时，其基本上不含培养基，例如培养基占蛋白质制剂的体积的不到约20％、15％、10％、5％或1％。在某些实施方案中，当通过化学合成产生抗体时，其基本上不含化学前体或其它化学物质，例如其与参与蛋白质合成的化学前体或其它化学物质分离。因此，这类抗体的制剂具有少于约30％、25％、20％、15％、10％、5％或1％(以干重计)的所关注的抗体以外的化学前体或化合物。污染物组分也可包括但不限于将会干扰抗体的治疗用途的物质，并且可包括酶、激素及其它蛋白质或非蛋白质溶质。在某些实施方案中，抗体将被纯化(1)至超过95重量％的抗体，如通过Lowry方法(Lowry等人，1951，J.Bio.Chem.193:265-75)确定，如96％、97％、98％或99％，(2)至足以通过使用旋转杯测序仪获得至少15个残基的N末端或内部氨基酸序列的程度，或(3)至采用考马斯蓝或银染色在还原或非还原条件下通过SDS-PAGE显示的同质性。分离抗体包括重组细胞内的原位抗体，因为抗体的天然环境的至少一个组分将不存在。然而，通常来说将通过至少一个纯化步骤制备分离抗体。在具体的实施方案中，分离本文提供的抗体。
4链抗体单元是由两条相同的轻(L)链和两条相同的重(H)链组成的异四聚糖蛋白。在IgG的情况下，4链单元通常为约150,000道尔顿。每条L链通过一个共价二硫键与H链连接，而两个H链根据H链同种型通过一个或多个二硫键彼此连接。每条H和L链还具有规则间隔的链内二硫桥。每条H链在N末端具有可变结构域(VH)，接着是对于α和γ链每一者的三个恒定结构域(CH)以及对于μ和ε同种型的四个CH结构域。每条L链在N末端具有可变结构域(VL)，接着是在其另一端的恒定结构域(CL)。VL与VH对齐，且CL与重链的第一恒定结构域(CH1)对齐。据信特定的氨基酸残基形成轻链与重链可变结构域之间的界面。成对的VH和VL一起形成单个抗原结合位点。关于不同类别抗体的结构和性质，参见例如Basic and Clinical Immunology 71(Stites等人编，第8版，1994)。
关于抗体使用的术语“重链”是指约50-70kDa的多肽链，其中氨基末端部分包括约120至130或更多个氨基酸的可变区，且羧基末端部分包括恒定区。基于重链恒定区的氨基酸序列，恒定区可以是被称为alpha(α)、delta(δ)、epsilon(ε)、gamma(γ)和mu(μ)的五种不同类型(例如，同种型)之一。不同重链大小不同：α、δ和γ含有大约450个氨基酸，而μ和ε含有大约550个氨基酸。当与轻链组合时，这些不同类型的重链产生抗体的五种熟知类别(例如，同种型)，分别是IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，包括IgG的四个亚类，即IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。重链可以是人重链。
关于抗体使用的术语“轻链”是指约25kDa的多肽链，其中氨基末端部分包括约100至约110或更多个氨基酸的可变区，且羧基末端部分包括恒定区。轻链的近似长度为211至217个氨基酸。基于恒定结构域的氨基酸序列有被称为kappa(κ)或lambda(λ)的两种不同类型。轻链氨基酸序列是本领域中熟知的。轻链可以是人轻链。
术语“可变区”、“可变结构域”、“V区”或“V结构域”是指抗体的轻链或重链的一部分，其通常位于轻链或重链的氨基末端，并且具有的长度是在重链中为约120至130个氨基酸，且在轻链中为约100至110个氨基酸，并且用于每种特定抗体对其特定抗原的结合及特异性。重链的可变区可以被称为“VH”。轻链的可变区可以被称为“VL”。术语“可变”是指这样的事实，即在抗体之间，可变区的某些区段序列差异很大。V区介导抗原结合，并且限定特定抗体对其特定抗原的特异性。然而，在可变区的110个氨基酸的跨度上，可变性不是均匀分布的。而是，V区由被各自约9-12个氨基酸长的被称为“高变区”的可变性较大(例如，极端可变性)的较短区隔开的约15-30个氨基酸的被称为框架区(FR)的可变性较小(例如，相对不变)的链段组成。重链和轻链的可变区各自包含四个FR，它们主要采取β折叠构型，由三个高变区连接，所述高变区形成连接β折叠结构的环，并且在一些情况下形成β折叠结构的一部分。每条链中的高变区由FR紧密保持在一起，并且与来自另一条链的高变区一起促成抗体的抗原结合位点的形成(参见例如Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest(第5版，1991))。恒定区不直接参与抗体与抗原结合，但表现出各种效应功能，如抗体参与抗体依赖性细胞性细胞毒性(ADCC)和补体依赖性细胞毒性(CDC)。在不同抗体之间，可变区序列差异很大。在具体的实施方案中，可变区是人可变区。
术语“如Kabat中的可变区残基编号”或“如Kabat中的氨基酸位置编号”及其变化形式是指在Kabat等人同上中用于抗体汇编的重链可变区或轻链可变区的编号系统。采用这一编号系统，实际直链氨基酸序列可含有较少或额外的氨基酸，对应于可变结构域的FR或CDR的缩短，或向FR或CDR当中的插入。例如，重链可变结构域可包括残基52后的单个氨基酸插入物(根据Kabat的残基52a)和残基82后的三个插入残基(例如，根据Kabat的残基82a、82b和82c等)。可通过在抗体的序列的同源区与“标准”Kabat编号的序列进行比对来对给定的抗体确定残基的Kabat编号。当提及可变结构域中的残基(大致为轻链的残基1-107和重链的残基1-113)时，通常使用Kabat编号系统(例如，Kabat等人，同上)。当提及免疫球蛋白重链恒定区中的残基时，通常使用“EU编号系统”或“EU索引”(例如，Kabat等人同上中报道的EU索引)。“如Kabat中的EU索引”是指人IgG 1EU抗体的残基编号。其它编号系统已例如由AbM、Chothia、Contact、IMGT和AHon进行过描述。
“CDR”是指免疫球蛋白(Ig或抗体)VHβ折叠框架的非框架区内的三个高变区(H1、H2或H3)之一或抗体VLβ折叠框架的非框架区内的三个高变区(L1、L2或L3)之一。因此，CDR是散布在框架区序列内的可变区序列。CDR区是本领域技术人员熟知的，并且已由例如Kabat定义为抗体可变(V)结构域内高变性最大的区域(Kabat等人，1997，J.Biol.Chem.252:6609-16；Kabat，1978，Adv.Prot.Chem.32:1-75)。CDR区序列也已由Chothia在结构上定义为不是保守β折叠框架的一部分的那些残基，并且因此能够适应不同的构象(Chothia和Lesk，1987，J.Mol.Biol.196:901-17)。两个术语在本领域中都是公认的。CDR区序列也已由AbM、Contact和IMGT定义过。已通过许多结构的比较确定了规范抗体可变区内的CDR的位置(Al-Lazikani等人，1997，J.Mol.Biol.273:927-48；Morea等人，2000，Methods 20:267-79)。因为高变区内的残基的数目在不同的抗体中是不同的，所以在规范可变区编号方案中在残基编号旁边用a、b、c等将相对于规范位置的额外残基进行常规编号(Al-Lazikani等人，同上)。这种命名法类似地为本领域技术人员所熟知。
术语“高变区”、“HVR”或“HV”在本文中使用时是指抗体可变区的在序列上高变和/或形成在结构上限定的环的区域。一般地，抗体包含六个高变区，三个在VH中(H1、H2、H3)，且三个在VL中(L1、L2、L3)。许多高变区描述是在使用着的，并且涵盖在本文中。Kabat互补决定区(CDR)是基于序列可变性，并且是最常用的(参见例如，Kabat等人，同上)。Chothia则是提及结构环的位置(参见例如Chothia和Lesk，1987，J.Mol.Biol.196:901-17)。当使用Kabat编号约定编号时，Chothia CDR-H1环的端部在H32与H34之间变化，这取决于环的长度(这是因为Kabat编号方案将插入置于H35A和H35B；如果35A和35B都不存在，则环在32终止；如果仅35A存在，则环在33终止；如果35A和35B都存在，则环在34终止)。AbM高变区代表Kabat CDR与Chothia结构环之间的折衷，并且被Oxford Molecular’s AbM抗体建模软件使用(参见例如Antibody Engineering第2卷(Kontermann和Dübel编，第2版，2010))。“contact”高变区是基于对可获得的复杂晶体结构的分析。来自这些高变区或CDR中的每一者的残基如下所示。
最近，已经开发并广泛采用一种通用编号系统ImMunoGeneTics(IMGT)Information(Lafranc等人，2003，Dev.Comp.Immunol.27(1):55-77)。IMGT是一个专门针对人及其他脊椎动物的免疫球蛋白(IG)、T细胞受体(TCR)和主要组织相容性复合物(MHC)的集成信息系统。在本文中，CDR是根据氨基酸序列和在轻链或重链内的位置而被提及的。因为CDR在免疫球蛋白可变结构域的结构内的“位置”在物种之间是保守的，并且存在于被称为环的结构中，所以通过使用根据结构特征来比对可变结构域序列的编号系统，可以很容易鉴定CDR和框架残基。此信息可用于将来自一个物种的免疫球蛋白的CDR残基移植和替换到通常为来自人抗体的受体框架当中。Honegger和Plückthun，2001，J.Mol.Biol.309:657-70已开发了另外的编号系统(AHon)。包括例如Kabat编号的编号系统与IMGT独特编号系统之间的对应关系是本领域技术人员熟知的(参见例如Kabat，同上；Chothia和Lesk，同上；Martin，同上；Lefranc等人，同上)。在一些实施方案中，CDR如由IMGT编号系统所定义。在其它实施方案中，CDR如由Kabat编号系统所定义。在某些实施方案中，CDR如由AbM编号系统所定义。在其它实施方案中，CDR如由Chothia系统所定义。还在其它实施方案中，CDR如由Contact编号系统所定义。
<u>IMGT</u> <u>Kabat</u> <u>AbM</u> <u>Chothia</u> <u>Contact</u>
V<sub>H</sub> CDR1 27-38 31-35 26-35 26-32 30-35
V<sub>H</sub> CDR2 56-65 50-65 50-58 53-55 47-58
V<sub>H</sub> CDR3 105-117 95-102 95-102 96-101 93-101
V<sub>L</sub> CDR1 27-38 24-34 24-34 26-32 30-36
V<sub>L</sub> CDR2 56-65 50-56 50-56 50-52 46-55
V<sub>L</sub> CDR3 105-117 89-97 89-97 91-96 89-96
高变区可包含如下的“扩展高变区”：VL中的24-36或24-34(L1)、46-56或50-56(L2)和89-97或89-96(L3)，以及VH中的26-35或26-35A(H1)、50-65或49-65(H2)和93-102、94-102或95-102(H3)。如本文所用，术语“HVR”和“CDR”可互换使用。
术语“恒定区”或“恒定结构域”是指轻链和重链的羧基末端部分，其不直接参与抗体与抗原的结合，但表现出各种效应功能，如与Fc受体的相互作用。该术语是指免疫球蛋白分子的相对于免疫球蛋白的含有抗原结合位点的另一部分(可变区)具有更保守的氨基酸序列的部分。恒定区可含有重链的CH1、CH2和CH3区以及轻链的CL区。
术语“框架”或“FR”是指在CDR侧翼的那些可变区残基。FR残基例如存在于嵌合抗体、人源化抗体、人抗体、结构域抗体、双抗体、线性抗体和双特异性抗体中。FR残基是除高变区残基或CDR残基以外的那些可变结构域残基。
术语“Fc区”在本文中用于定义免疫球蛋白重链的C末端区域，包括例如天然序列Fc区、重组Fc区和变体Fc区。虽然免疫球蛋白重链的Fc区的边界可能会有所不同，但人IgG重链Fc区常常被定义为从在位置Cys226的氨基酸残基或者或Pro230伸展到其羧基末端。可以例如在抗体的产生或纯化期间或者通过重组工程改造编码抗体的重链的核酸来移除Fc区的C末端赖氨酸(根据EU编号系统的残基447)。因此，完整抗体的组成可包含所有K447残基被移除的抗体群体、没有K447残基被移除的抗体群体以及具有含和不含K447残基的抗体的混合物的抗体群体。
“功能性Fc区”具有天然序列Fc区的“效应功能”。示例性“效应功能”包括C1q结合；CDC；Fc受体结合；ADCC；吞噬作用；细胞表面受体(例如，B细胞受体)的下调等。这类效应功能通常需要Fc区与结合区或结合结构域(例如，抗体可变区或结构域)组合，并且可采用如所公开的各种测定进行评估。
“天然序列Fc区”包含与天然存在且未被人操作、修饰和/或改变(例如分离、纯化、选择，包括其它序列(如可变区序列)或与其它序列(如可变区序列)组合)的Fc区的氨基酸序列具有同一性的氨基酸序列。天然序列人IgG1 Fc区包括天然序列人IgG1 Fc区(非A和A同种异型)；天然序列人IgG2Fc区；天然序列人IgG3 Fc区；和天然序列人IgG4 Fc区，以及其天然存在的变体。例如，下面提供了天然人IgG1 Fc区氨基酸序列：
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:36，K322被突出显示)。
下面提供了示例性天然人IgG4 Fc区序列：
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:38，S228和L235被突出显示)。
“变体Fc区”包含由于至少一个氨基酸修饰(例如，取代、添加或缺失)而与天然序列Fc区的氨基酸序列不同的氨基酸序列。在某些实施方案中，与天然序列Fc区或与亲本多肽的Fc区相比，变体Fc区具有至少一个氨基酸取代，在天然序列Fc区中或在亲本多肽的Fc区中有约一至约十个氨基酸取代或约一至约五个氨基酸取代。本文的变体Fc区可具有与天然序列Fc区和/或与亲本多肽的Fc区至少约80％的同源性，或与其具有至少约90％的同源性，例如与其具有至少约95％的同源性。例如，下面提供了在人IgG1 Fc氨基酸序列中的322位置的一个氨基酸K变为A的变体，即IgG1-K322A Fc区：
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCAVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:37，K322A取代被突出显示)。
下面提供了在人IgG4 Fc氨基酸序列中的228位置的一个氨基酸S变为P的示例性变体，即IgG4P Fc区：
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:39，S228P取代被突出显示)。
下面提供了在人IgG4 Fc氨基酸序列中的228和235位置的两个氨基酸变化的示例性变体，即IgG4PE Fc区：
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:40，S228P和L235E取代被突出显示)。
关于PD-1或关于抗PD-1抗体使用的术语“变体”可指与天然或未修饰的序列相比包含一个或多个(举例如约1至约25、约1至约20、约1至约15、约1至约10或约1至约5个)氨基酸序列取代、缺失和/或添加的肽或多肽。例如，PD-1变体可由天然PD-1的氨基酸序列的一个或多个(举例如约1至约25、约1至约20、约1至约15、约1至约10或约1至约5个)变化产生。同样作为实例，抗PD-1抗体的变体可由天然或先前未修饰的抗PD-1抗体的氨基酸序列的一个或多个(举例如约1至约25、约1至约20、约1至约15、约1至约10或约1至约5个)变化产生。变体可以是天然存在的，如等位基因或剪接变体，或者可以是人工构建的。多肽变体可由编码变体的相应核酸分子进行制备。在具体的实施方案中，PD-1变体或抗PD-1抗体变体分别至少保留PD-1或抗PD-1抗体功能活性。在具体的实施方案中，抗PD-1抗体变体结合PD-1和/或对PD-1活性具有拮抗作用。在具体的实施方案中，抗PD-1抗体变体结合PD-1和/或对PD-1活性具有激动作用。在某些实施方案中，变体由编码PD-1或抗PD-1抗体VH或VL区或亚区(如一个或多个CDR)的核酸分子的单核苷酸多态(SNP)变体编码。
“完整”抗体是包含抗原结合位点以及CL和至少重链恒定区CH1、CH2及CH3的抗体。恒定区可包括人恒定区或其氨基酸序列变体。在某些实施方案中，完整抗体具有一种或多种效应功能。
“抗体片段”包含完整抗体的一部分，如完整抗体的抗原结合区或可变区。抗体片段的实例包括但不限于Fab、Fab’、F(ab’)2和Fv片段；双抗体和二双抗体(参见例如，Holliger等人，1993，Proc.Natl.Acad.Sci.90:6444-48；Lu等人，2005，J.Biol.Chem.280:19665-72；Hudson等人，2003，Nat.Med.9:129-34；WO 93/11161；以及第5,837,242和6,492,123号美国专利)；单链抗体分子(参见例如，第4,946,778；5,260,203；5,482,858；和5,476,786号美国专利)；双重可变结构域抗体(参见例如，第7,612,181号美国专利)；单可变结构域抗体(sdAb)(参见例如，Woolven等人，1999，Immunogenetics 50:98-101；和Streltsov等人，2004，Proc Natl Acad Sci USA.101:12444-49)；和由抗体片段形成的多特异性抗体。
治疗性抗体的“功能片段”、“结合片段”或“抗原结合片段”将表现出至少一种(如果不是一些或全部)归因于完整抗体的生物学功能，所述功能包括至少与靶抗原(例如，PD-1结合片段或与PD-1结合的片段)的结合。
如本文所用的术语“融合蛋白”是指包含抗体的氨基酸序列和异源多肽或蛋白质(例如，通常不是抗体(例如，非抗PD-1抗原结合抗体)的一部分的多肽或蛋白质)的氨基酸序列的多肽。关于PD-1或关于抗PD-1抗体使用的术语“融合”是指肽或多肽或其片段、变体和/或衍生物与异源肽或多肽的连接。在某些实施方案中，融合蛋白保留PD-1或抗PD-1抗体的生物活性。在某些实施方案中，融合蛋白包含PD-1抗体VH区、VL区、VH CDR(一个、两个或三个VH CDR)和/或VL CDR(一个、两个或三个VL CDR)，其中融合蛋白与PD-1表位、PD-1片段和/或PD-1多肽结合。
结合生物物质如核酸分子、多肽、宿主细胞等使用的术语“天然”是指天然存在且未被人操作、修饰和/或改变(例如，分离、纯化、选择)的那些生物物质。
本文提供的抗体可包括“嵌合”抗体，其中重链和/或轻链的一部分与来源于特定物种或属于特定抗体类别或亚类的抗体中的相应序列具有同一性或同源性，而链的其余部分与来源于另一物种或属于另一抗体类别或亚类的抗体中的相应序列具有同一性或同源性，以及这类抗体的片段，只要它们表现出所需的生物活性即可(参见第4,816,567号美国专利；和Morrison等人，1984，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81:6851-55)。
非人(例如，鼠)抗体的“人源化”形式是包括人免疫球蛋白(例如，接受者抗体)的嵌合抗体，其中天然CDR残基被来自非人物种(例如，供者抗体)如小鼠、大鼠、兔或非人灵长类动物的具有所需特异性、亲和力和能力的相应CDR的残基置换。在一些情况下，人免疫球蛋白的一个或多个FR区残基被相应的非人残基置换。此外，人源化抗体可包含接受者抗体或供者抗体中不存在的残基。进行这些修饰以进一步精细调解抗体性能。人源化抗体重链或轻链可包含基本上所有的至少一个或多个可变区，其中所有或基本上所有的CDR对应于非人免疫球蛋白的CDR，并且所有或基本上所有的FR是人免疫球蛋白序列的FR。在某些实施方案中，人源化抗体将包含免疫球蛋白恒定区(Fc)的至少一部分，通常是人免疫球蛋白的恒定区的至少一部分。关于进一步的细节，参见Jones等人，1986，Nature 321:522-25；Riechmann等人，1988，Nature 332:323-29；Presta，1992，Curr.Op.Struct.Biol.2:593-96；Carter等人，1992，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89:4285-89；第6,800,738；6,719,971；6,639,055；6,407,213；和6,054,297号美国专利。
“人抗体”是具有与由人产生的抗体的氨基酸序列相对应的氨基酸序列和/或采用如本文公开的制备人抗体的任何技术制备的抗体。人抗体的这一定义明确地排除了包含非人抗原结合残基的人源化抗体。可采用本领域中已知的各种技术产生人抗体，包括噬菌体展示文库(Hoogenboom和Winter，1991，J.Mol.Biol.227:381；Marks等人，1991，J.Mol.Biol.222:581)和酵母展示文库(Chao等人，2006，Nature Protocols 1:755-68)。还可用Cole等人，Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy 77(1985)；Boerner等人，1991，J.Immunol.147(1):86-95；及van Dijk和van de Winkel，2001，Curr.Opin.Pharmacol.5:368-74中描述的方法制备人单克隆抗体。可通过对转基因动物施用抗原来制备人抗体，所述转基因动物已被修饰为响应于抗原攻击而产生这类抗体，但其内源性基因座已失能，例如小鼠(参见例如，Jakobovits，1995，Curr.Opin.Biotechnol.6(5):561-66；Brüggemann和Taussing，1997，Curr.Opin.Biotechnol.8(4):455-58；以及关于XENOMOUSETM技术的第6,075,181和6,150,584号美国专利)。关于借助人B细胞杂交瘤技术产生的人抗体，还参见例如Li等人，2006，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 103:3557-62。
“亲和力成熟”抗体是在其一个或多个HVR中具有一个或多个变更(例如，氨基酸序列变化，包括改变、添加和/或缺失)，所述变更导致与不具有这些变更的亲本抗体相比，抗体对抗原的亲和力提高。亲和力成熟抗体对靶抗原可具有纳摩尔或甚至皮摩尔的亲和力。通过本领域中已知的程序产生亲和力成熟抗体。关于综述，参见Hudson和Souriau，2003，Nature Medicine 9:129-34；Hoogenboom，2005，Nature Biotechnol.23:1105-16；Quiroz和Sinclair，2010，Revista Ingeneria Biomedia 4:39-51。
“阻断”抗体或“拮抗剂”抗体是抑制或降低其结合的抗原的生物活性的抗体。例如，阻断抗体或拮抗剂抗体可基本上或完全抑制所述抗原的生物活性。
“激动剂”抗体是引发应答的抗体，例如模拟所关注的多肽(例如，PD-L1)的功能活性中的至少一者的抗体。激动剂抗体包括是配体模拟物的抗体，例如其中配体与细胞表面受体结合，并且所述结合经由细胞间细胞信号传导途径诱导细胞信号传导或活性，且其中所述抗体诱导类似的细胞信号传导或活化。PD-1的“激动剂”是指能够活化PD-1或以其它方式增加其生物活性的分子，如在表达PD-1的细胞中。在一些实施方案中，PD-1的激动剂(例如，如本文所述的激动性抗体)可例如通过活化表达PD-1蛋白的细胞或以其它方式增加其活化和/或细胞信号传导途径而起作用，从而相对于在不存在激动剂情况下的PD-1介导的生物活性增加PD-1介导的细胞的生物活性。在一些实施方案中，本文提供的抗体是激动性抗PD-1抗体，包括诱导PD-1信号传导的抗体。
“结合亲和力”通常是指分子(例如，结合蛋白，如抗体)的单个结合位点与其结合配偶体(例如，抗原)之间的非共价相互作用的总和的强度。除另指出外，如本文所用，“结合亲和力”是指反映结合对的成员(例如，抗体和抗原)之间的1:1相互作用的内在结合亲和力。通常可由解离常数(KD)表示结合分子X对其结合配偶体Y的亲和力。可通过本领域中已知的常用方法来测量亲和力，包括本文所述的那些方法。低亲和力抗体通常缓慢结合抗原，并且往往容易解离，而高亲和力抗体通常较快地结合抗原，并且往往较长时间地保持结合。测量结合亲和力的多种方法是本领域中已知的，其中的任何方法都可用于本公开的目的。具体的说明性实施方案包括以下内容。在一个实施方案中，可通过本领域中已知的测定法(例如通过结合测定法)来测量“KD”或“KD值”。可在例如用所关注的抗体的Fab形式及其抗原进行的RIA中测量KD(Chen等人，1999，J.Mol Biol 293:865-81)。也可通过采用表面等离子体共振测定法由使用例如
Figure BDA0002285022320000521
TM-2000或
Figure BDA0002285022320000526
TM-3000的
Figure BDA0002285022320000527
来测量或者通过使用例如
Figure BDA0002285022320000522
QK384系统的生物层干涉测量法来测量KD或KD值。也可使用例如
Figure BDA0002285022320000523
TM-2000或
Figure BDA0002285022320000525
TM-3000或QK384系统，用上述同样的表面等离子体共振或生物层干涉测量技术来确定“缔合速率”(on-rate/rate of association/association rate)或“kon”。
用在本文中的术语“抑制”(inhibition/inhibit)是指部分(如1％、2％、5％、10％、20％、25％、50％、75％、90％、95％、99％)或完全(即，100％)抑制。
用在本文中的术语“减弱”(attenuate/attenuation/attenuated)是指性质、活性、作用或值的部分(如1％、2％、5％、10％、20％、25％、50％、75％、90％、95％、99％)或完全(即，100％)下降。
“抗体效应功能”是指可归因于抗体的Fc区(例如，天然序列Fc区或氨基酸序列变体Fc区)，并且随抗体同种型而变化的生物活性。抗体效应功能的实例包括但不限于：C1q结合；CDC；Fc受体结合；ADCC；吞噬作用；细胞表面受体(例如，B细胞受体)的下调；和B细胞活化。
“T细胞效应功能”是指可归因于包括但不限于细胞毒性T细胞、T辅助细胞和记忆T细胞的各种类型的T细胞的生物活性。T细胞效应功能的实例包括：增加T细胞增殖、分泌细胞因子、释放细胞毒素、表达膜相关分子、杀灭靶细胞、活化巨噬细胞和活化B细胞。
“抗体依赖性细胞介导的细胞毒性”或“ADCC”是指细胞毒性的一种形式，其中结合在某些细胞毒性细胞(例如，自然杀伤(NK)细胞、中性粒细胞和巨噬细胞)上存在的Fc受体(FcR)上面的分泌免疫球蛋白使得这些细胞毒性效应细胞能够与携带抗原的靶细胞特异性结合，并随后用细胞毒素杀灭靶细胞。抗体对细胞毒性细胞进行“武装”，并且对于这种杀灭是绝对需要的。NK细胞作为用于介导ADCC的原代细胞仅表达FcγRIII，而单核细胞表达FcγRI、FcγRII和FcγRIII。造血细胞上的FcR表达是已知的((参见例如Ravetch和Kinet，1991，Annu.Rev.Immunol.9:457-92)。为了评估所关注的分子的ADCC活性，可以进行体外ADCC测定(参见例如第5,500,362和5,821,337号美国专利)。用于这类测定的有用效应细胞包括外周血单核细胞(PBMC)和自然杀伤(NK)细胞。替代地或者另外地，可在体内评估所关注的分子的ADCC活性，例如在动物模型中(参见例如，Clynes等人，1998，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 95:652-56)。可选择使用ADCC活性很少或没有ADCC活性的抗体。
“抗体依赖性细胞吞噬作用”或“ADCP”是指当结合在某些吞噬细胞(例如，中性粒细胞、单核细胞和巨噬细胞)上存在的Fc受体(FcR)上面的免疫球蛋白使得这些吞噬细胞能够与携带抗原的靶细胞特异性结合并随后杀灭靶细胞时，经由单核细胞或巨噬细胞介导的吞噬作用破坏靶细胞。为了评估所关注的分子的ADCP活性，可以进行体外ADCP测定(参见例如，Bracher等人，2007，J.Immunol.Methods 323:160-71)。用于这类测定的有用吞噬细胞包括外周血单核细胞(PBMC)、来自PBMC的纯化单核细胞或分化成单核类型的U937细胞。替代地或者另外地，可在体内评估所关注的分子的ADCP活性，例如在动物模型中(参见例如，Wallace等人，2001，J.Immunol.Methods 248:167-82)。可选择使用ADCP活性很少或没有ADCP活性的抗体。
“Fc受体”或“FcR”描述与抗体的Fc区结合的受体。一种示例性FcR是天然序列人FcR。此外，一种示例性FcR是结合IgG抗体的FcR(例如，γ受体)，并且包括FcγRI、FcγRII和FcγRIII亚类的受体，包括这些受体的等位基因变体和选择性剪接形式。FcγRII受体包括FcγRIIA(“活化受体”)和FcγRIIB(“抑制受体”)，它们具有类似的氨基酸序列，差别主要在于其胞质结构域(参见例如1997，Annu.Rev.Immunol.15:203-34)。各种FcR是已知的(参见例如Ravetch和Kinet，1991，Annu.Rev.Immunol.9:457-92；Capel等人，1994，Immunomethods 4:25-34；以及de Haas等人，1995，J.Lab.Clin.Med.126:330-41)。本文的术语“FcR”涵盖其它的FcR，包括有待将来鉴定的那些。该术语还包括负责将母体IgG转移至胎儿的新生儿受体FcRn(参见例如Guyer等人，1976，J.Immunol.117:587-93；和Kim等人，1994，Eu.J.Immunol.24:2429-34)。已经描述了与FcR的结合提高或减弱的抗体变体(参见例如，WO 2000/42072；第7,183,387；7,332,581；和7.335,742号美国专利；Shields等人，2001，J.Biol.Chem.9(2):6591-604)。
“补体依赖性细胞毒性”或“CDC”是指靶细胞在补体存在下的裂解。经典补体途径的活化由补体系统的第一组分(C1q)与结合于其同源抗原的(适当亚类的)抗体的结合启动。为了评估补体活化，可以进行CDC测定(参见例如Gazzano-Santoro等人，1996，J.Immunol.Methods 202:163)。已经描述了Fc区氨基酸序列改变(具有变体Fc区的多肽)和C1q结合能力提高或降低的多肽变体(参见例如，第6,194,551号美国专利；WO 1999/51642；Idusogie等人，2000，J.Immunol.164:4178-84)。可选择使用CDC活性很少或没有CDC活性的抗体。
术语“同一性”是指如通过比对和比较序列所确定的两种或更多种多肽分子或者两种或更多种核酸分子的序列之间的关系。相对于参考多肽序列的“氨基酸序列同一性百分比(％)”定义为在比对序列并且必要时引入空隙以达到最大序列同一性百分比后以及不将任何保守性取代视为序列同一性的一部分的情况下，在候选序列中与参考多肽序列中的氨基酸残基具有同一性的氨基酸残基的百分比。可以本领域技术范围内的各种方式实施以确定氨基酸序列同一性百分比为目的的比对，例如使用可公开获得的计算机软件，如BLAST、BLAST-2、ALIGN或MEGALIGN(DNAStar，Inc.)软件。本领域技术人员可确定用于比对序列的适当参数，包括在所比较的序列的全长上实现最大比对所需的任何算法。
对氨基酸残基/位置的“修饰”是指与起始氨基酸序列相比的初级氨基酸序列的变化，其中所述变化由涉及所述氨基酸残基/位置的序列改变引起。例如，典型的修饰包括用另一氨基酸取代残基(例如，保守或非保守性取代)、邻近所述残基/位置插入一个或多个(例如，通常少于5、4或3个)氨基酸和/或使所述残基/位置缺失。
在多肽的上下文中，如本文所用的术语“类似物”是指这样的多肽，其具有与PD-1多肽、PD-1多肽的片段或抗PD-1抗体类似或相同的功能，但不一定包含PD-1多肽、PD-1多肽的片段或抗PD-1抗体的类似或相同的氨基酸序列，或者具有PD-1多肽、PD-1多肽的片段或抗PD-1抗体的类似或相同结构。具有类似氨基酸序列的多肽是指满足以下至少之一的多肽：(a)具有与本文提供的PD-1多肽、PD-1多肽的片段或抗PD-1抗体的氨基酸序列具有至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％同一性的氨基酸序列的多肽；(b)由在严格条件下与编码本文所述的PD-1多肽、PD-1多肽的片段或抗PD-1抗体(或其VH或VL区)的核苷酸序列杂交至少5个氨基酸残基、至少10个氨基酸残基、至少15个氨基酸残基、至少20个氨基酸残基、至少25个氨基酸残基、至少30个氨基酸残基、至少40个氨基酸残基、至少50个氨基酸残基、至少60个氨基残基、至少70个氨基酸残基、至少80个氨基酸残基、至少90个氨基酸残基、至少100个氨基酸残基、至少125个氨基酸残基或至少150个氨基酸残基的核苷酸序列编码的多肽(参见例如Sambrook等人，Molecular Cloning:A Laboratory Manual(2001)；和Maniatis等人，Molecular Cloning:A Laboratory Manual(1982))；或(c)由与编码本文所述的PD-1多肽、PD-1多肽的片段或抗PD-1抗体(或其VH或VL区)的核苷酸序列具有至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％同一性的核苷酸序列编码的多肽。具有与本文提供的PD-1多肽、PD-1多肽的片段或抗PD-1抗体类似的结构的多肽是指具有本文提供的PD-1多肽、PD-1多肽的片段或抗PD-1抗体的类似二级、三级或四级结构的多肽。可通过本领域技术人员已知的方法确定多肽的结构，包括但不限于X射线结晶法、核磁共振法和结晶电子显微镜法。
在多肽的上下文中，如本文所用的术语“衍生物”是指包含PD-1多肽、PD-1多肽的片段或与PD-1多肽结合的抗体的氨基酸序列的多肽，其已通过引入氨基酸残基取代、缺失或添加而改变。如本文所用的术语“衍生物”还指这样的PD-1多肽、PD-1多肽的片段或与PD-1多肽结合的抗体，其已例如通过将任何类型的分子共价连接于多肽而被化学修饰。例如但不限于，可例如通过已知的保护/阻断基团、蛋白水解裂解、化学裂解、与细胞配体或其它蛋白质连接等方式，通过增加或减少糖基化、乙酰化、聚乙二醇化、磷酸化、酰胺化、衍生化对PD-1多肽、PD-1多肽的片段或抗PD-1抗体进行化学修饰。以在连接分子的类型或位置上不同于天然存在或起始的肽或多肽的方式修饰衍生物。衍生物进一步包括天然存在于肽或多肽上的一个或多个化学基团的缺失。进一步地，PD-1多肽、PD-1多肽的片段或抗PD-1抗体的衍生物可含有一种或多种非经典氨基酸。多肽衍生物具有与本文提供的PD-1多肽、PD-1多肽的片段或抗PD-1抗体类似或相同的功能。
如本文所用的术语“宿主”是指动物，如哺乳动物(例如，人)。
如本文所用的术语“宿主细胞”是指可用核酸分子转染的特定受试细胞以及这种细胞的子代或潜在子代。由于在继代中可能会发生突变或环境影响，或者核酸分子整合到宿主细胞基因组，这种细胞的子代可能与用核酸分子转染的亲本细胞不同。
术语“载体”是指用于携带或包括核酸序列(包括例如编码如本文所述的抗PD-1抗体的核酸序列)以便将核酸序列引入宿主细胞的物质。适于使用的载体包括例如表达载体、质粒、噬菌体载体、病毒载体、游离体和人工染色体，其可包括可操作用于稳定整合到宿主细胞染色体的选择序列或标记。另外，载体可包括一个或多个可选择标记基因和适当的表达控制序列。可包括的可选择标记基因例如提供对抗生素或毒素的抗性，补充营养缺陷性不足，或者供给在培养基中没有的关键营养素。表达控制序列可包括本领域中熟知的组成型和诱导型启动子、转录增强子、转录终止子等。当要共表达两种或更多种核酸分子(例如，抗体重链和轻链或抗体VH和VL)时，两种核酸分子可例如被插入单个表达载体中或者插入分开的表达载体。对于单个载体表达，编码核酸可操作地连接于一个共同表达控制序列，或者连接于不同的表达控制序列，如一个诱导型启动子和一个组成型启动子。可采用本领域中熟知的方法确认将核酸分子引入宿主细胞。这类方法包括例如核酸分析，如RNA印迹或mRNA的聚合酶链式反应(PCR)扩增、用于基因产物的表达的免疫印迹法或用来测试引入的核酸序列或其相应基因产物的表达的其它合适的分析方法。本领域技术人员要理解的是，核酸分子以足以产生所需产物(例如，如本文所述的抗PD-1抗体)的量表达，并且要进一步理解的是，可采用本领域中熟知的方法优化表达水平以获得足够的表达。
“分离的核酸”是基本上与天然地伴随天然序列的其它基因组DNA序列以及蛋白质或复合物如核糖体和聚合酶分开的核酸，例如RNA、DNA或混合核酸。“分离”的核酸分子是与核酸分子的天然来源中存在的其它核酸分子分开的核酸分子。此外，“分离”的核酸分子如cDNA分子可基本上不含其它细胞物质或培养基(当通过重组技术产生时)，或者基本上不含化学前体或其它化学物质(当化学合成时)。在具体的实施方案中，分离或纯化编码如本文所述的抗体的一种或多种核酸分子。该术语涵盖已从其天然存在的环境中移除的核酸序列，并且包括重组或克隆的DNA分离物以及化学合成的类似物或由异源系统生物合成的类似物。基本上纯的分子可包括分子的分离形式。
如本文中可互换使用的“多核苷酸”或“核酸”是指任意长度的核苷酸的聚合物，并且包括DNA和RNA。核苷酸可以是脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、修饰的核苷酸或碱基和/或它们的类似物，或可通过DNA或RNA聚合酶或通过合成反应结合到聚合物当中的任何底物。多核苷酸可包含修饰的核苷酸，如甲基化核苷酸以及它们的类似物。如本文所用的“寡核苷酸”是指短的、通常为单链的合成多核苷酸，其长度通常但不一定少于约200个核苷酸。术语“寡核苷酸”和“多核苷酸”不是相互排斥的。以上关于多核苷酸的描述同样且完全适用于寡核苷酸。产生本公开的抗PD-1抗体的细胞可包括亲本杂交瘤细胞以及已向其中引入编码抗体的核酸的细菌和真核宿主细胞。下面公开了合适的宿主细胞。
除另有说明外，本文公开的任何单链多核苷酸序列的左手端是5’端；双链多核苷酸序列的左手方向被称为5’方向。新生RNA转录物的5’至3’添加的方向被称为转录方向；DNA链上具有与RNA转录物相同的序列且位于RNA转录物5’端的5’的序列区被称为“上游序列”；DNA链上具有与RNA转录物相同的序列且位于RNA转录物3’端的3’的序列区被称为“下游序列”。
关于核酸分子使用的术语“编码核酸”或其语法同义语是指呈其天然状态或通过本领域技术人员熟知的方法操作时的核酸分子，其可被转录以产生mRNA，后者然后被翻译成多肽和/或其片段。反义链是这种核酸分子的互补链，并且可由此推导出编码序列。
术语“重组抗体”是指通过重组方式制备、表达、产生或分离的抗体。重组抗体可以是使用转染到宿主细胞当中的重组表达载体表达的抗体；分离自重组组合抗体文库的抗体；分离自针对人免疫球蛋白基因为转基因和/或转染色体的动物(例如，小鼠或母牛)的抗体(参见例如，Taylor等人，1992，Nucl.Acids Res.20:6287-95)；或通过涉及将免疫球蛋白基因序列剪接到其它DNA序列中的任何其它方式制备、表达、产生或分离的抗体。这类重组抗体可具有可变区和恒定区，包括来源于人种系免疫球蛋白序列的那些(参见Kabat等人，同上)。然而，在某些实施方案中，可使这类重组抗体经受体外诱变(或者，当使用针对人Ig序列转基因的动物时，经受体内体细胞诱变)，因此重组抗体的VH和VL区的氨基酸序列是虽然来源于人种系VH和VL序列并与之相关，但在体内可能不天然存在于人抗体种系谱内的序列。
术语“可检测探针”是指提供可检测信号的组合物。该术语包括但不限于借助其活性提供可检测信号的任何荧光团、发色团、放射性标记、酶、抗体或抗体片段等。
术语“可检测剂”是指可用于确定在样品或受试者中存在或有所需分子(如本文所述的抗PD-1抗体)的物质。可检测剂可以是能够被可视化的物质或者以其它方式能够被确定和/或测量(例如，通过定量)的物质。
术语“诊断剂”是指对受试者施用的有助于诊断疾病、病症或病状的物质。这类物质可用于显露、查明和/或确定致病过程的定位。在某些实施方案中，诊断剂包括与如本文所述的抗PD-1抗体缀合的物质，其在施用于受试者或与来自受试者的样品接触时有助于诊断PD-1介导的疾病。
术语“组合物”旨在涵盖含有任选指定量的指定成分(例如，本文提供的抗体)的产品。
如本文所用的“载体”包括药学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂，其在所用剂量和浓度下对暴露于其中的细胞或哺乳动物是无毒的。通常生理学上可接受的载体是pH缓冲水溶液。生理学上可接受的载体的实例包括缓冲液，如磷酸盐、柠檬酸盐及其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸；低分子量(例如，少于约10个氨基酸残基)多肽；蛋白质，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖及其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，如EDTA；糖醇，如甘露糖醇或山梨糖醇；成盐抗衡离子，如钠；和/或非离子表面活性剂，如TWEENTM、聚乙二醇(PEG)和PLURONICSTM。术语“载体”还可指稀释剂、佐剂(例如，弗氏佐剂(完全或不完全))、赋形剂或媒介物。包括药物载体在内的这类载体可以是无菌液体，如水和油，包括石油、动物、植物或合成来源的那些，如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。当静脉内施用组合物(例如，药物组合物)时，水是示例性载体。盐水溶液和右旋糖水溶液及甘油溶液也可用作液体载体，特别是用于可注射溶液。合适的赋形剂(例如，药物赋形剂)包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、稻米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑石、氯化钠、脱脂奶粉、甘油、丙烯、二醇、水、乙醇等。必要时组合物还可含有少量的润湿剂或乳化剂或pH缓冲剂。组合物可采取溶液、混悬液、乳液、片剂、丸剂、胶囊、粉剂、缓释制剂等形式。口服组合物(包括制剂)可包括标准载体，如药物级甘露糖醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、纤维素、碳酸镁等。Remington和Gennaro，Remington’s Pharmaceutical Sciences(第18版，1990)中描述了合适的药物载体的实例。包括药物化合物的组合物可含有例如呈分离或纯化形式的抗PD-1抗体连同适量的载体。
如本文所用的术语“药学上可接受”意指由联邦或州政府的管理机构批准或在美 国药典、欧洲药典或其它公认的药典中列出可用于动物，更具体地用于人。
术语“赋形剂”是指常用作稀释剂、媒介物、防腐剂、粘结剂或稳定剂的惰性物质，并且包括但不限于蛋白质(例如，血清白蛋白等)、氨基酸(例如，天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸、甘氨酸、组氨酸等)、脂肪酸和磷脂(例如，烷基磺酸盐、辛酸盐等)、表面活性剂(例如，SDS、聚山梨醇酯、非离子表面活性剂等)、多元醇(例如，蔗糖、麦芽糖、海藻糖、甘露糖醇、山梨糖醇等)。还参见Remington和Gennaro，Remington’s Pharmaceutical Sciences(第18版，1990)，其特此以引用的方式整体并入。
术语“受试者”和“患者”可互换使用。如本文所用，在某些实施方案中，受试者是哺乳动物，如非灵长类动物(例如，母牛、猪、马、猫、狗、大鼠等)或灵长类动物(例如，猴和人)。在具体的实施方案中，受试者是人。
“施用”(administer/administration)是指诸如通过经粘膜、皮内、静脉内、肌肉内递送和/或本文所述或本领域中已知的任何其它物理递送方法将存在于体外的物质(例如，如本文所述的抗PD-1抗体)注射或以其它方式物理递送给患者的动作。
如本文所用的术语“有效量”是指本文提供的抗体或药物组合物的足以产生所需结果的量。
术语“约”和“大约”意指在给定值或范围的20％以内、15％以内，10％以内，9％以内、8％以内、7％以内、6％以内、5％以内、4％以内、3％以内、2％以内、1％或更少以内。
“基本上所有”是指至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约98％、至少约99％或约100％。
短语“基本上类似”或“基本上相同”表示两个数值(例如，与本公开的抗体相关的一个数值和与参考抗体相关的另一个数值)之间有足够高的相似性程度，使得本领域技术人员将会认为两个值之间的差异很小，或者在由所述值(例如，KD值)度量的生物学特征的情形下没有生物学和/或统计学显著性。例如，两个值之间的差异可小于约50％、小于约40％、小于约30％、小于约20％、小于约10％或小于约5％，随参考抗体的值而变化。
如本文所用的短语“基本上增加”、“基本上减少”或“基本上不同”表示两个数值(例如，与本公开的抗体相关的一个数值和与参考抗体相关的另一个数值)之间有足够高的差异程度，使得本领域技术人员将会认为两个值之间的差异在由所述值度量的生物学特征的情形下具有统计学显著性。例如，所述两个值之间的差异可大于约10％、大于约20％、大于约30％、大于约40％或大于约50％，随参考抗体的值而变化。
5.3组合物及其制备方法
本文提供了包含与PD-1多肽、PD-1多肽片段、PD-1肽或PD-1表位结合的抗体的药物制剂。
在某些实施方案中，本文提供的药物制剂包含与人和/或食蟹猴PD-1结合的抗体。在一个实施方案中，PD-1抗体与人PD-1结合。在一个实施方案中，PD-1抗体与食蟹猴PD-1结合。在一个实施方案中，PD-1抗体与人PD-1和食蟹猴PD-1两者结合。在其它实施方案中，本文提供的抗体不与啮齿动物PD-1结合。
在本文提供的各种药物制剂的一些实施方案中，抗PD-1抗体与PD-1的胞外结构域(ECD)结合。在某些实施方案中，抗PD-1抗体与PD-1的ECD中不同于PD-L1结合位点的表位结合。在某些实施方案中，抗PD-1抗体与PD-1的ECD中不同于PD-L2结合位点的表位结合。在某些实施方案中，抗PD-1抗体与PD-1的ECD中不同于PD-L1和PD-L2结合位点两者的表位结合。
在其它实施方案中，药物制剂包含竞争性阻断本文公开的抗PD-1抗体与PD-1多肽结合的抗体。
在其它实施方案中，药物制剂包含同本文提供的抗PD-1抗体竞争与PD-1多肽的结合的抗体。
在一些实施方案中，药物制剂包含不阻断PD-L1与PD-1多肽结合的抗体。在一些实施方案中，药物制剂包含不阻断PD-L2与PD-1多肽结合的抗体。在一些实施方案中，药物制剂包含不阻断PD-L1或PD-L2与PD-1多肽结合的抗体。
在一些实施方案中，药物制剂包含不同PD-L1竞争与PD-1多肽的结合的抗体。在一些实施方案中，药物制剂包含不同PD-L2竞争与PD-1多肽的结合的抗体。在一些实施方案中，药物制剂包含不同PD-L1或PD-L2竞争与PD-1多肽的结合的抗体。
在某些实施方案中，药物制剂包含不抑制PD-L1与PD-1结合的抗体。在其它实施方案中，药物制剂包含不抑制PD-L2与PD-1结合的抗体。在具体的实施方案中，药物制剂包含不抑制PD-L1与PD-1结合或PD-L2与PD-1结合的抗体。
在一些实施方案中，药物制剂包含例如与诊断剂或可检测剂缀合或重组融合的抗PD-1抗体。
5.3.1抗PD-1抗体
在一个实施方案中，本公开提供包含抗PD-1抗体的药物制剂，其在本文中可用作治疗剂。在另一实施方案中，本公开提供包含抗PD-1抗体的药物制剂，其在本文中可用作诊断剂。制剂的示例性抗体包括多克隆抗体、单克隆抗体、人源化抗体、人抗体、双特异性抗体和异源缀合抗体，以及它们的具有改进的亲和力或其它性质的变体。
在一些实施方案中，本文提供了包含与PD-1(包括PD-1多肽、PD-1多肽片段、PD-1肽或PD-1表位)结合的抗体的药物制剂。在某些实施方案中，药物制剂包含与人和/或食蟹猴PD-1结合的抗体。在其它实施方案中，药物制剂包含不与啮齿动物PD-1(例如，小鼠PD-1)结合的抗体。在一个实施方案中，药物制剂包含与人PD-1结合的抗体。在另一实施方案中，药物制剂包含与食蟹猴PD-1结合的抗体。在另一实施方案中，药物制剂包含与人PD-1和食蟹猴PD-1结合的抗体。在一些实施方案中，药物制剂包含与人PD-1结合且不与啮齿动物PD-1(例如，小鼠PD-1)结合的抗体。在一些实施方案中，药物制剂包含与食蟹猴PD-1结合且不与啮齿动物PD-1(例如，小鼠PD-1)结合的抗体。在一些实施方案中，药物制剂包含与人PD-1结合、与食蟹猴PD-1结合且不与啮齿动物PD-1(例如，小鼠PD-1)结合的抗体。在一些实施方案中，药物制剂包含不阻断PD-L1与PD-1多肽的结合的抗体。在一些实施方案中，抗PD-1抗体不阻断PD-L2与PD-1多肽的结合。在一些实施方案中，药物制剂包含不阻断PD-L1或PD-L2与PD-1多肽的结合的抗体。在其它实施方案中，药物制剂包含抗PD-1抗体，所述抗PD-1抗体是与PD-1(包括PD-1多肽、PD-1多肽片段、PD-1肽或PD-1表位)结合的人源化抗体(例如，包含人恒定区)。
在某些实施方案中，药物制剂包含抗PD-1抗体，所述抗PD-1抗体包含本文提供的任一种鼠单克隆抗体的VH区、VL区、VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和/或VLCDR3，如表1-6中所示的氨基酸序列。因此，在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的分离抗体或其功能片段包含来自以下的一个、两个和/或三个重链CDR和/或一个、两个和/或三个轻链CDR：(a)抗体PD1AB-1，(b)抗体PD1AB-2，(c)抗体PD1AB-3，(d)抗体PD1AB-4，(e)抗体PD1AB-5，或(f)抗体PD1AB-6，如表1-2中所示。
表1.VL CDR氨基酸序列
Figure BDA0002285022320000601
表2.VH CDR氨基酸序列
Figure BDA0002285022320000611
在一些实施方案中，本文提供的药物制剂包含抗体，所述抗体包含六个CDR或由六个CDR组成，例如表1-2中确认的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和/或VLCDR3。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂包含抗体，所述抗体可包含少于六个CDR。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂包含抗体，所述抗体包含一个、两个、三个、四个或五个选自表1-2中确认的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3的CDR或由一个、两个、三个、四个或五个所述CDR组成。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂包含抗体，所述抗体包含一个、两个、三个、四个或五个选自单克隆抗体的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3的CDR或由一个、两个、三个、四个或五个所述CDR组成，所述单克隆抗体选自：本文所述的(a)抗体PD1AB-1，(b)抗体PD1AB-2，(c)抗体PD1AB-3，(d)抗体PD1AB-4，(e)抗体PD1AB-5，和(f)抗体PD1AB-6。因此，在一些实施方案中，本文提供的药物制剂包含抗体，所述抗体包含一个、两个、三个、四个或五个表1-2中确认的VHCDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3中的任一者的CDR或由一个、两个、三个、四个或五个所述CDR组成。
在一些实施方案中，本文提供的药物制剂包含抗体，所述抗体包含一个或多个(例如，一个、两个或三个)表2中列出的VH CDR。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂包含抗体，所述抗体包含一个或多个(例如，一个、两个或三个)表1中列出的VL CDR。还在其它实施方案中，本文提供的药物制剂包含抗体，所述抗体包含一个或多个(例如，一个、两个或三个)表2中列出的VH CDR和一个或多个表1中列出的VL CDR。因此，在一些实施方案中，本文提供的药物制剂包含抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的VH CDR1。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂包含抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的VH CDR2。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂包含抗体，所述抗体包含具有SEQID NO:6的氨基酸序列的VH CDR3。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂包含抗体，所述抗体包含独立地选自如表2中所示的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3氨基酸序列中的任一者的VH CDR1和/或VH CDR2和/或VH CDR3。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂包含抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:1和7中的任一者的氨基酸序列的VL CDR1。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂包含抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VLCDR2。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂包含抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VL CDR3。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂包含抗体，所述抗体包含独立地选自如表1中所示的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3氨基酸序列中的任一者的VL CDR1和/或VL CDR2和/或VL CDR3。
在某些实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH区，所述VH区包含：(1)具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的VH CDR1；(2)具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的VH CDR2；和(3)具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的VH CDR3；以及VL区，所述VL区包含：(1)具有SEQ IDNO:1的氨基酸序列的VL CDR1；(2)具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VL CDR2；和(3)具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VL CDR3。
在某些实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH区，所述VH区包含：(1)具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的VH CDR1；(2)具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的VH CDR2；和(3)具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的VH CDR3；以及VL区，所述VL区包含：(1)具有SEQ IDNO:7的氨基酸的VL CDR1；(2)具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VL CDR2；和(3)具有SEQ IDNO:3的氨基酸序列的VL CDR3。
在一些实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH区，所述VH区包含：(1)具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的VH CDR1；(2)具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的VH CDR2；和(3)具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的VH CDR3。
在其它实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VL区，所述VL区包含：(1)具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的VL CDR1；(2)具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VL CDR2；和(3)具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VL CDR3。
在一些实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VL区，所述VL区包含：(1)具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的VL CDR1；(2)具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VL CDR2；和(3)具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VL CDR3。
本文还提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体包含表1-2中列出的一个或多个(例如，一个、两个或三个)VH CDR和一个或多个(例如，一个、两个或三个)VL CDR。特别地，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)和VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)。在一个实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体包含VH CDR1(SEQID NO:4)和VL CDR2(SEQ ID NO:2)。在其它实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)和VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在另一实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体包含VH CDR2(SEQ ID NO:5)和VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)。在一些实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体包含VH CDR2(SEQID NO:5)和VL CDR2(SEQ ID NO:2)。在一个实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体包含VH CDR2(SEQ ID NO:5)和VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在另一实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体包含VH CDR3(SEQ ID NO:6)和VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)。在其它实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体包含VH CDR3(SEQID NO:6)和VL CDR2(SEQ ID NO:2)。在一些实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体包含VH CDR3(SEQ ID NO:6)和VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在另一实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR2(SEQ ID NO:5)和VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)。在一个实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR2(SEQ ID NO:5)和VL CDR2(SEQ ID NO:2)。在其它实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR2(SEQ ID NO:5)和VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在另一实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体包含VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VH CDR3(SEQ ID NO:6)和VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)。在一些实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体包含VHCDR2(SEQ ID NO:5)、VH CDR3(SEQ ID NO:6)和VL CDR2(SEQ ID NO:2)。在一个实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体包含VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VH CDR3(SEQID NO:6)和VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在另一实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR3(SEQ ID NO:6)和VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)。在其它实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体包含VH CDR1(SEQ IDNO:4)、VH CDR3(SEQ ID NO:6)和VL CDR2(SEQ ID NO:2)。在一些实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR3(SEQ ID NO:6)和VLCDR3(SEQ ID NO:3)。在另一实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)和VL CDR2(SEQ ID NO:2)。在一个实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)和VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在其它实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VL CDR2(SEQ ID NO:2)和VL CDR3(SEQID NO:3)。在另一实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体包含VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)和VL CDR2(SEQ ID NO:2)。在一些实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体包含VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VL CDR1(SEQ IDNO:1或7)和VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在一个实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体包含VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VL CDR2(SEQ ID NO:2)和VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在另一实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体包含VH CDR3(SEQ ID NO:6)、VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)和VL CDR2(SEQ ID NO:2)。在其它实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体包含VH CDR3(SEQ ID NO:6)、VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)和VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在一些实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体包含VH CDR3(SEQ ID NO:6)、VL CDR2(SEQ ID NO:2)和VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在另一实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VH CDR3(SEQ ID NO:6)和VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)。在一个实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR2(SEQ IDNO:5)、VH CDR3(SEQ ID NO:6)和VL CDR2(SEQ ID NO:2)。在其它实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VHCDR3(SEQ ID NO:6)和VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在另一实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VL CDR1(SEQ IDNO:1或7)和VL CDR2(SEQ ID NO:2)。在一些实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)和VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在一个实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VL CDR2(SEQ ID NO:2)和VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在另一实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体包含VHCDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR3(SEQ ID NO:6)、VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)和VL CDR2(SEQID NO:2)。在其它实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR3(SEQ ID NO:6)、VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)和VL CDR3(SEQ IDNO:3)。在一些实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体包含VH CDR1(SEQID NO:4)、VH CDR3(SEQ ID NO:6)、VL CDR2(SEQ ID NO:2)和VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在另一实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体包含VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VHCDR3(SEQ ID NO:6)、VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)和VL CDR2(SEQ ID NO:2)。在一个实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体包含VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VH CDR3(SEQ ID NO:6)、VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)和VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在其它实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体包含VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VH CDR3(SEQ IDNO:6)、VL CDR2(SEQ ID NO:2)和VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在另一实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VHCDR3(SEQ ID NO:6)、VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)和VL CDR2(SEQ ID NO:2)。在一些实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VH CDR3(SEQ ID NO:6)、VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)和VL CDR3(SEQ IDNO:3)。在一个实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体包含VH CDR1(SEQID NO:4)、VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VH CDR3(SEQ ID NO:6)、VL CDR2(SEQ ID NO:2)和VLCDR3(SEQ ID NO:3)。在另一实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)、VL CDR2(SEQID NO:2)和VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在其它实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR3(SEQ ID NO:6)、VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)、VL CDR2(SEQ ID NO:2)和VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在一些实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体包含VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VH CDR3(SEQ ID NO:6)、VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)、VL CDR2(SEQ ID NO:2)和VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在另一实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VL CDR1(SEQ IDNO:1或7)、VL CDR2(SEQ ID NO:2)和VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在一个实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体包含VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)、VL CDR2(SEQ ID NO:2)和VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在其它实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体包含VH CDR3(SEQ ID NO:6)、VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)、VLCDR2(SEQ ID NO:2)和VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在另一实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体包含表1-2中列出的VH CDR和VL CDR的任意组合。
在又一方面，本文公开的CDR包括来源于相关抗体(参见例如，表1-2)的组的共有序列。如本文所述，“共有序列”是指具有在许多序列之间共同的保守氨基酸和在给定的氨基酸序列内变化的可变氨基酸的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的分离抗体或其功能片段进一步包含来自以下的一个、两个、三个和/或四个重链FR和/或一个、两个、三个和/或四个轻链FR：(a)抗体PD1AB-1，(b)抗体PD1AB-2，(c)抗体PD1AB-3，(d)抗体PD1AB-4，(e)抗体PD1AB-5，或(f)抗体PD1AB-6，如表3-4中所示。
表3.VL FR氨基酸序列
Figure BDA0002285022320000651
Figure BDA0002285022320000661
表4.VH FR氨基酸序列
Figure BDA0002285022320000662
Figure BDA0002285022320000671
在某些实施方案中，本文提供的药物制剂的分离抗体或其功能片段进一步包含一个、两个、三个和/或四个来自以下的重链FR：(a)抗体PD1AB-1，(b)抗体PD1AB-2，(c)抗体PD1AB-3，(d)抗体PD1AB-4，(e)抗体PD1AB-5，或(f)抗体PD1AB-6，如表4中所示。在一些实施方案中，抗体重链FR来自抗体PD1AB-1。在一些实施方案中，抗体重链FR来自抗体PD1AB-2。在其它实施方案中，抗体重链FR来自抗体PD1AB-3。在某些实施方案中，抗体重链FR来自抗体PD1AB-4。在其它实施方案中，抗体重链FR来自抗体PD1AB-5。在另一实施方案中，抗体重链FR来自抗体PD1AB-6。
在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的分离抗体或其功能片段进一步包含一个、两个、三个和/或四个来自以下的轻链FR：(a)抗体PD1AB-1，(b)抗体PD1AB-2，(c)抗体PD1AB-3，(d)抗体PD1AB-4，(e)抗体PD1AB-5，或(f)抗体PD1AB-6，如表3中所示。在一些实施方案中，抗体轻链FR来自抗体PD1AB-1。在一些实施方案中，抗体轻链FR来自抗体PD1AB-2。在其它实施方案中，抗体轻链FR来自抗体PD1AB-3。在某些实施方案中，抗体轻链FR来自抗体PD1AB-4。在其它实施方案中，抗体轻链FR来自抗体PD1AB-5。在另一实施方案中，抗体轻链FR来自抗体PD1AB-6。
在某些实施方案中，本文所述的药物制剂的抗体或其片段包含VH区，所述VH区包含：(1)具有选自SEQ ID NO:19和24的氨基酸序列的VH FR1；(2)具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的VH FR2；(3)具有选自SEQ ID NO:21和23的氨基酸序列的VH FR3；和/或(4)具有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的VH FR4。在某些实施方案中，本文所述的药物制剂的抗体或其片段包含VH区，所述VH区包含：(1)具有SEQ ID NO:19的氨基酸的VH FR1；(2)具有SEQ IDNO:20的氨基酸序列的VH FR2；(3)具有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的VH FR3；和/或(4)具有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的VH FR4。在某些实施方案中，本文所述的药物制剂的抗体或其片段包含VH区，所述VH区包含：(1)具有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的VH FR1；(2)具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的VH FR2；(3)具有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的VH FR3；和/或(4)具有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的VH FR4。在某些实施方案中，本文所述的药物制剂的抗体或其片段包含VH区，所述VH区包含：(1)具有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的VH FR1；(2)具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的VH FR2；(3)具有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的VHFR3；和/或(4)具有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的VH FR4。在某些实施方案中，本文所述的药物制剂的抗体或其片段包含VH区，所述VH区包含：(1)具有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的VH FR1；(2)具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的VH FR2；(3)具有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的VH FR3；和/或(4)具有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的VH FR4。在具体的实施方案中，所述抗体包含VH区，所述VH区包含所有四个上面提到的VH FR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4。
因此，在一些实施方案中，药物制剂的人源化抗体包含VH区，所述VH区包括具有选自SEQ ID NO:19和24的氨基酸序列的VH FR1。在一个实施方案中，药物制剂的人源化抗体包含VH区，所述VH区包括具有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的VH FR1。在一个实施方案中，药物制剂的人源化抗体包含VH区，所述VH区包括具有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的VH FR1。在一些实施方案中，药物制剂的人源化抗体包含VH区，所述VH区包括具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的VH FR2。在一些实施方案中，药物制剂的人源化抗体包含VH区，所述VH区包括具有选自SEQ ID NO:21和23的氨基酸序列的VH FR3。在一个实施方案中，药物制剂的人源化抗体包含VH区，所述VH区包括具有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的VH FR3。在一个实施方案中，药物制剂的人源化抗体包含VH区，所述VH区包括具有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的VH FR3。在其它实施方案中，药物制剂的人源化抗体包含VH区，所述VH区包括具有SEQ IDNO:22的氨基酸序列的VH FR4。
在某些实施方案中，本文所述的药物制剂的抗体或其片段包含VL区，所述VL区包含：(1)具有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VL FR1；(2)具有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VL FR2；(3)具有选自SEQ ID NO:16和18的氨基酸序列的VL FR3；和/或(4)具有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的VL FR4。在一些实施方案中，VL区包含：(1)具有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VL FR1；(2)具有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VL FR2；(3)具有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL FR3；和/或(4)具有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的VL FR4。在其它实施方案中，VL区包含：(1)具有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VL FR1；(2)具有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VL FR2；(3)具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的VL FR3；和/或(4)具有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的VL FR4。
因此，在一些实施方案中，药物制剂的人源化抗体包含VL区，所述VL区包括具有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VL FR1。在某些实施方案中，药物制剂的人源化抗体包含VL区，所述VL区包括具有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VL FR2。在其它实施方案中，药物制剂的人源化抗体包含VL区，所述VL区包括具有选自SEQ ID NO:16和18的氨基酸序列的VLFR3。在一个实施方案中，药物制剂的人源化抗体包含VL区，所述VL区包括具有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL FR3。在其它实施方案中，药物制剂的人源化抗体包含VL区，所述VL区包括具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的VL FR3。还在其它实施方案中，药物制剂的人源化抗体包含VL区，所述VL区包括具有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的VL FR4。
在某些实施方案中，本文所述的药物制剂的抗体或其片段包含VH区和VL区，其中VH区包含：(1)具有选自SEQ ID NO:19和24的氨基酸序列的VH FR1；(2)具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的VH FR2；(3)具有选自SEQ ID NO:21和23的氨基酸序列的VH FR3；和/或(4)具有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的VH FR4；且其中VL区包含：(1)具有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VL FR1；(2)具有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VL FR2；(3)具有选自SEQ ID NO:16和18的氨基酸序列的VL FR3；和/或(4)具有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的VL FR4。在一些实施方案中，药物制剂的抗体包含VH区，所述VH区包含所有四个上面提到的VH FR1、VHFR2、VH FR3和VH FR4。在其它实施方案中，药物制剂的抗体包含VL区，所述VL区包含所有四个上面提到的VL FR1、VL FR2、VL FR3和VL FR4。还在其它实施方案中，药物制剂的抗体包含：VH区，所述VH区包含所有四个上面提到的VH FR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4，和VL区，所述VL区包含所有四个上面提到的VL FR1、VL FR2、VL FR3和VL FR4。
在一些实施方案中，药物制剂的抗体或其片段包含VH区和VL区，其中VH区包含：(1)具有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的VH FR1；(2)具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的VHFR2；(3)具有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的VH FR3；和/或(4)具有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的VH FR4；且其中VL区包含：(1)具有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VL FR1；(2)具有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VL FR2；(3)具有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL FR3；和/或(4)具有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的VL FR4。在一些实施方案中，药物制剂的抗体包含VH区，所述VH区包含所有四个上面提到的VH FR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4。在其它实施方案中，药物制剂的抗体包含VL区，所述VL区包含所有四个上面提到的VL FR1、VL FR2、VLFR3和VL FR4。还在其它实施方案中，药物制剂的抗体包含：VH区，所述VH区包含所有四个上面提到的VH FR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4，和VL区，所述VL区包含所有四个上面提到的VLFR1、VL FR2、VL FR3和VL FR4。
在一些实施方案中，药物制剂的抗体或其片段包含VH区和VL区，其中VH区包含：(1)具有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的VH FR1；(2)具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的VHFR2；(3)具有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的VH FR3；和/或(4)具有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的VH FR4；且其中VL区包含：(1)具有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VL FR1；(2)具有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VL FR2；(3)具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的VL FR3；和/或(4)具有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的VL FR4。在一些实施方案中，药物制剂的抗体包含VH区，所述VH区包含所有四个上面提到的VH FR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4。在其它实施方案中，药物制剂的抗体包含VL区，所述VL区包含所有四个上面提到的VL FR1、VL FR2、VLFR3和VL FR4。还在其它实施方案中，药物制剂的抗体包含：VH区，所述VH区包含所有四个上面提到的VH FR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4，和VL区，所述VL区包含所有四个上面提到的VLFR1、VL FR2、VL FR3和VL FR4。
在一些实施方案中，药物制剂的抗体或其片段包含VH区和VL区，其中VH区包含：(1)具有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的VH FR1；(2)具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的VHFR2；(3)具有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的VH FR3；和/或(4)具有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的VH FR4；且其中VL区包含：(1)具有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VL FR1；(2)具有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VL FR2；(3)具有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL FR3；和/或(4)具有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的VL FR4。在一些实施方案中，药物制剂的抗体包含VH区，所述VH区包含所有四个上面提到的VH FR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4。在其它实施方案中，药物制剂的抗体包含VL区，所述VL区包含所有四个上面提到的VL FR1、VL FR2、VLFR3和VL FR4。还在其它实施方案中，药物制剂的抗体包含：VH区，所述VH区包含所有四个上面提到的VH FR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4，和VL区，所述VL区包含所有四个上面提到的VLFR1、VL FR2、VL FR3和VL FR4。
在一些实施方案中，药物制剂的抗体或其片段包含VH区和VL区，其中VH区包含：(1)具有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的VH FR1；(2)具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的VHFR2；(3)具有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的VH FR3；和/或(4)具有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的VH FR4；且其中VL区包含：(1)具有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VL FR1；(2)具有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VL FR2；(3)具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的VL FR3；和/或(4)具有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的VL FR4。在一些实施方案中，药物制剂的抗体包含VH区，所述VH区包含所有四个上面提到的VH FR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4。在其它实施方案中，药物制剂的抗体包含VL区，所述VL区包含所有四个上面提到的VL FR1、VL FR2、VLFR3和VL FR4。还在其它实施方案中，药物制剂的抗体包含：VH区，所述VH区包含所有四个上面提到的VH FR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4，和VL区，所述VL区包含所有四个上面提到的VLFR1、VL FR2、VL FR3和VL FR4。
在一些实施方案中，药物制剂的抗体或其片段包含VH区和VL区，其中VH区包含：(1)具有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的VH FR1；(2)具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的VHFR2；(3)具有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的VH FR3；和/或(4)具有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的VH FR4；且其中VL区包含：(1)具有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VL FR1；(2)具有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VL FR2；(3)具有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL FR3；和/或(4)具有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的VL FR4。在一些实施方案中，药物制剂的抗体包含VH区，所述VH区包含所有四个上面提到的VH FR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4。在其它实施方案中，药物制剂的抗体包含VL区，所述VL区包含所有四个上面提到的VL FR1、VL FR2、VLFR3和VL FR4。还在其它实施方案中，药物制剂的抗体包含：VH区，所述VH区包含所有四个上面提到的VH FR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4，和VL区，所述VL区包含所有四个上面提到的VLFR1、VL FR2、VL FR3和VL FR4。
在一些实施方案中，药物制剂的抗体或其片段包含VH区和VL区，其中VH区包含：(1)具有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的VH FR1；(2)具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的VHFR2；(3)具有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的VH FR3；和/或(4)具有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的VH FR4；且其中VL区包含：(1)具有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VL FR1；(2)具有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VL FR2；(3)具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的VL FR3；和/或(4)具有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的VL FR4。在一些实施方案中，药物制剂的抗体包含VH区，所述VH区包含所有四个上面提到的VH FR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4。在其它实施方案中，药物制剂的抗体包含VL区，所述VL区包含所有四个上面提到的VL FR1、VL FR2、VLFR3和VL FR4。还在其它实施方案中，药物制剂的抗体包含：VH区，所述VH区包含所有四个上面提到的VH FR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4，和VL区，所述VL区包含所有四个上面提到的VLFR1、VL FR2、VL FR3和VL FR4。
在一些实施方案中，药物制剂的抗体或其片段包含VH区和VL区，其中VH区包含：(1)具有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的VH FR1；(2)具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的VHFR2；(3)具有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的VH FR3；和/或(4)具有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的VH FR4；且其中VL区包含：(1)具有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VL FR1；(2)具有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VL FR2；(3)具有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL FR3；和/或(4)具有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的VL FR4。在一些实施方案中，药物制剂的抗体包含VH区，所述VH区包含所有四个上面提到的VH FR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4。在其它实施方案中，药物制剂的抗体包含VL区，所述VL区包含所有四个上面提到的VL FR1、VL FR2、VLFR3和VL FR4。还在其它实施方案中，药物制剂的抗体包含：VH区，所述VH区包含所有四个上面提到的VH FR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4，和VL区，所述VL区包含所有四个上面提到的VLFR1、VL FR2、VL FR3和VL FR4。
在一些实施方案中，药物制剂的抗体或其片段包含VH区和VL区，其中VH区包含：(1)具有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的VH FR1；(2)具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的VHFR2；(3)具有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的VH FR3；和/或(4)具有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的VH FR4；且其中VL区包含：(1)具有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VL FR1；(2)具有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VL FR2；(3)具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的VL FR3；和/或(4)具有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的VL FR4。在一些实施方案中，药物制剂的抗体包含VH区，所述VH区包含所有四个上面提到的VH FR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4。在其它实施方案中，药物制剂的抗体包含VL区，所述VL区包含所有四个上面提到的VL FR1、VL FR2、VLFR3和VL FR4。还在其它实施方案中，药物制剂的抗体包含：VH区，所述VH区包含所有四个上面提到的VH FR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4，和VL区，所述VL区包含所有四个上面提到的VLFR1、VL FR2、VL FR3和VL FR4。
本文还提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体包含表3-4中列出的一个或多个(例如，一个、两个、三个或四个)VH FR和一个或多个(例如，一个、两个、三个或四个)VL FR。特别地，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)和VLFR1(SEQ ID NO:14)。在一个实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ IDNO:19或24)和VL FR2(SEQ ID NO:15)。在一些实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在另一实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在其它实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)和VL FR1(SEQ IDNO:14)。在一个实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)和VLFR2(SEQ ID NO:15)。在一些实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ IDNO:20)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在另一实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一个实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR3(SEQ ID NO:21)和VL FR1(SEQ ID NO:14)。在其它实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR3(SEQ ID NO:21)和VL FR2(SEQ ID NO:15)。在另一实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR3(SEQ ID NO:21)和VL FR3(SEQ IDNO:16或18)。在一些实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR3(SEQ ID NO:21)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一个实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR4(SEQ ID NO:22)和VL FR1(SEQ ID NO:14)。在另一实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR4(SEQ ID NO:22)和VL FR2(SEQ ID NO:15)。在一个实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR4(SEQ ID NO:22)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一些实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR4(SEQ ID NO:22)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VHFR2(SEQ ID NO:20)和VL FR1(SEQ ID NO:14)。在其它实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)和VL FR2(SEQ ID NO:15)。在一个实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VHFR2(SEQ ID NO:20)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在另一实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)和VL FR4(SEQ IDNO:17)。在一些实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VHFR3(SEQ ID NO:21或23)和VL FR1(SEQ ID NO:14)。在一个实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)和VL FR2(SEQ IDNO:15)。在另一实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VHFR3(SEQ ID NO:21或23)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在其它实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)和VL FR4(SEQ IDNO:17)。在一些实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VL FR1(SEQ ID NO:14)和VL FR2(SEQ ID NO:15)。在另一实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VL FR1(SEQ ID NO:14)和VL FR3(SEQ IDNO:16或18)。在一个实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VL FR1(SEQ ID NO:14)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一个实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VL FR2(SEQ ID NO:15)和VL FR3(SEQID NO:16或18)。在另一实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VL FR2(SEQ ID NO:15)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VLFR4(SEQ ID NO:17)。在其它实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ IDNO:20)、VL FR1(SEQ ID NO:14)和VL FR2(SEQ ID NO:15)。在另一实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VL FR1(SEQ ID NO:14)和VL FR3(SEQ IDNO:16或18)。在一个实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VL FR1(SEQ ID NO:14)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VL FR2(SEQ ID NO:15)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在另一实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VLFR2(SEQ ID NO:15)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一个实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VLFR1(SEQ ID NO:14)和VL FR2(SEQ ID NO:15)。在其它实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR1(SEQ ID NO:14)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一些实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR1(SEQ ID NO:14)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR2(SEQ ID NO:15)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一个实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR2(SEQ ID NO:15)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一个实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR4(SEQ IDNO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)和VL FR2(SEQ ID NO:15)。在一些实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)和VL FR3(SEQ IDNO:16或18)。在其它实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR2(SEQ ID NO:15)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一个实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR4(SEQ ID NO:22)、VLFR2(SEQ ID NO:15)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VHFR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21)和VL FR1(SEQ ID NO:14)。在一个实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21)和VL FR2(SEQ ID NO:15)。在其它实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ IDNO:21)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在另一实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ IDNO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR4(SEQ ID NO:22)和VL FR1(SEQ ID NO:14)。在一个实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR4(SEQ ID NO:22)和VL FR2(SEQ ID NO:15)。在另一实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VHFR4(SEQ ID NO:22)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一个实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR4(SEQ IDNO:22)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VHFR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR3(SEQ ID 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NO:19或24)、VH FR3(SEQID NO:21或23)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一个实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ IDNO:19或24)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VHFR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在其它实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在另一实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ IDNO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一个实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQID NO:14)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VLFR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一个实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ IDNO:21或23)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在其它实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQID NO:21或23)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ IDNO:17)。在另一实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VHFR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ IDNO:20)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一个实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQID NO:20)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)和VLFR4(SEQ ID NO:17)。在另一实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ IDNO:20)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VLFR4(SEQ ID NO:17)。在一个实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ IDNO:20)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VLFR4(SEQ ID NO:17)。在一些实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR3(SEQ IDNO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)和VLFR3(SEQ ID NO:16或18)。在另一实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ IDNO:15)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在其它实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VHFR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR3(SEQ IDNO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一个实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一个实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在其它实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)和VLFR2(SEQ ID NO:15)。在一些实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ IDNO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在另一实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一个实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VHFR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR2(SEQ IDNO:15)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一个实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VHFR4(SEQ ID NO:22)、VL FR2(SEQ ID NO:15)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在其它实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQID NO:21或23)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VHFR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR3(SEQ IDNO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一个实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VLFR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在另一实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一个实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在其它实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQID NO:20)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一些实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)和VL FR4(SEQ IDNO:17)。在一个实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一个实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ IDNO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)和VLFR3(SEQ ID NO:16或18)。在一些实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ IDNO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在其它实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ IDNO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一个实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VLFR4(SEQ ID NO:17)。在一些实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ IDNO:19或24)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VLFR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一个实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR1(SEQ IDNO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR4(SEQID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在其它实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ IDNO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ IDNO:15)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在另一实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VHFR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)和VL FR4(SEQ IDNO:17)。在一个实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一个实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VLFR4(SEQ ID NO:17)。在一些实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ IDNO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VLFR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在其它实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一个实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含表3-4中列出的VHFR(SEQ ID NO:19-24)和VL FR(SEQ ID NO:14-18)的任意组合。
在一些实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH区或VH结构域。在其它实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含VL区或VL结构域。在某些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体具有(i)VH结构域或VH区；和/或(ii)VL结构域或VL区的组合。还在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体具有选自如表5-6中所示的SEQ ID NO:8-13的(i)VH结构域或VH区；和/或(ii)VL结构域或VL区的组合。仍在其它实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体具有如表5-6中所示的抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者的(i)VH结构域或VH区；和/或(ii)VL结构域或VL区的组合。
在某些实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含：VH区，所述VH区包含：(1)具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的VH CDR1；(2)具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的VH CDR2；和(3)具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的VH CDR3；以及选自如表5中所示的SEQ ID NO:8-10的VL区。在一些实施方案中，VL区具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列。在其它实施方案中，VL区具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列。在一些实施方案中，VL区具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列。
在其它实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含：选自如表6中所示的SEQID NO:11-13的VH区；和VL区，所述VL区包含：(1)具有选自SEQ ID NO:1和7的氨基酸序列的VL CDR1；(2)具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VL CDR2；和(3)具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VL CDR3。在又一些实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含：选自如表6中所示的SEQ ID NO:11-13的VH区；和VL区，所述VL区包含：(1)具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的VL CDR1；(2)具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VL CDR2；和(3)具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VL CDR3。仍在其它实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含：选自如表6中所示的SEQ ID NO:11-13的VH区；和VL区，所述VL区包含：(1)具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的VL CDR1；(2)具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VL CDR2；和(3)具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VL CDR3。在一些实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含具有SEQ IDNO:11的氨基酸序列的VH区。在一些实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含具有SEQID NO:12的氨基酸序列的VH区。在一些实施方案中，药物制剂包含抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的VH区。
表5.VL结构域氨基酸序列
Figure BDA0002285022320000861
表6.VH结构域氨基酸序列
Figure BDA0002285022320000862
Figure BDA0002285022320000871
本文还提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体由分离的核酸分子编码，例如与PD-1多肽、PD-1多肽片段、PD-1肽或PD-1表位结合的抗PD-1抗体的免疫球蛋白重链、轻链、VH区、VL区、VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3。抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5和PD1AB-6中的任一者的VL区和VH区的示例性核酸序列示于表7-8中。
表7.VL核酸序列
Figure BDA0002285022320000872
Figure BDA0002285022320000881
表8.VH核酸序列
Figure BDA0002285022320000882
Figure BDA0002285022320000901
在一些实施方案中，药物制剂包含具有PD1AB-1的VH和VL氨基酸序列的抗体。在一些实施方案中，药物制剂包含具有SEQ ID NO:11的VH氨基酸序列和SEQ ID NO:8的VL氨基酸序列的抗体。
在其它实施方案中，药物制剂包含具有PD1AB-2的VH和VL氨基酸序列的抗体。在一些实施方案中，药物制剂包含具有SEQ ID NO:11的VH氨基酸序列和SEQ ID NO:9的VL氨基酸序列的抗体。
在一些实施方案中，药物制剂包含具有PD1AB-3的VH和VL氨基酸序列的抗体。在一些实施方案中，药物制剂包含具有SEQ ID NO:12的VH氨基酸序列和SEQ ID NO:10的VL氨基酸序列的抗体。
在其它实施方案中，药物制剂包含具有PD1AB-4的VH和VL氨基酸序列的抗体。在一些实施方案中，药物制剂包含具有SEQ ID NO:12的VH氨基酸序列和SEQ ID NO:9的VL氨基酸序列的抗体。
在一些实施方案中，药物制剂包含具有PD1AB-5的VH和VL氨基酸序列的抗体。在一些实施方案中，药物制剂包含具有SEQ ID NO:13的VH氨基酸序列和SEQ ID NO:9的VL氨基酸序列的抗体。
在其它实施方案中，药物制剂包含具有PD1AB-6的VH和VL氨基酸序列的抗体。在一些实施方案中，药物制剂包含具有SEQ ID NO:13的VH氨基酸序列和SEQ ID NO:8的VL氨基酸序列的抗体。
在其它实施方案中，药物制剂包含具有PD1AB-1的VH区的VH CDR1、VH CDR2和VHCDR3的抗体。在其它实施方案中，药物制剂包含具有PD1AB-1的VL区的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的抗体。在其它实施方案中，药物制剂包含具有PD1AB-2的VH区的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3以及PD1AB-1的VL区的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的抗体。在一些实施方案中，药物制剂包含具有VH区的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3的抗体，所述VH区具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列。在其它实施方案中，药物制剂包含具有VL区的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的抗体，所述VL区具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列。在一些实施方案中，药物制剂包含具有VH区的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3以及VL区的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的抗体，所述VH区具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列，所述VL区具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列。
在其它实施方案中，药物制剂包含具有PD1AB-2的VH区的VH CDR1、VH CDR2和VHCDR3的抗体。在其它实施方案中，药物制剂包含具有PD1AB-2的VL区的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的抗体。在其它实施方案中，药物制剂包含具有PD1AB-2的VH区的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3以及PD1AB-2的VL区的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的抗体。在一些实施方案中，药物制剂包含具有VH区的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3的抗体，所述VH区具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列。在其它实施方案中，药物制剂包含具有VL区的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的抗体，所述VL区具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列。在一些实施方案中，药物制剂包含具有VH区的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3以及VL区的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的抗体，所述VH区具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列，所述VL区具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列。
在其它实施方案中，药物制剂包含具有PD1AB-3的VH区的VH CDR1、VH CDR2和VHCDR3的抗体。在其它实施方案中，药物制剂包含具有PD1AB-3的VL区的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的抗体。在其它实施方案中，药物制剂包含具有PD1AB-3的VH区的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3以及PD1AB-3的VL区的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的抗体。在一些实施方案中，药物制剂包含具有VH区的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3的抗体，所述VH区具有SEQ ID NO:12的氨基酸序列。在其它实施方案中，药物制剂包含具有VL区的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的抗体，所述VL区具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列。在一些实施方案中，药物制剂包含具有VH区的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3以及VL区的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的抗体，所述VH区具有SEQ ID NO:12的氨基酸序列，所述VL区具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列。
在其它实施方案中，药物制剂包含具有PD1AB-4的VH区的VH CDR1、VH CDR2和VHCDR3的抗体。在其它实施方案中，药物制剂包含具有PD1AB-4的VL区的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的抗体。在其它实施方案中，药物制剂包含具有PD1AB-4的VH区的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3以及PD1AB-4的VL区的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的抗体。在一些实施方案中，药物制剂包含具有VH区的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3的抗体，所述VH区具有SEQ ID NO:12的氨基酸序列。在其它实施方案中，药物制剂包含具有VL区的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的抗体，所述VL区具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列。在一些实施方案中，药物制剂包含具有VH区的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3以及VL区的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的抗体，所述VH区具有SEQ ID NO:12的氨基酸序列，所述VL区具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列。
在其它实施方案中，药物制剂包含具有PD1AB-5的VH区的VH CDR1、VH CDR2和VHCDR3的抗体。在其它实施方案中，药物制剂包含具有PD1AB-5的VL区的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的抗体。在其它实施方案中，药物制剂包含具有PD1AB-5的VH区的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3以及PD1AB-5的VL区的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的抗体。在一些实施方案中，药物制剂包含具有VH区的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3的抗体，所述VH区具有SEQ ID NO:13的氨基酸序列。在其它实施方案中，药物制剂包含具有VL区的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的抗体，所述VL区具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列。在一些实施方案中，药物制剂包含具有VH区的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3以及VL区的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的抗体，所述VH区具有SEQ ID NO:13的氨基酸序列，所述VL区具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列。
在其它实施方案中，药物制剂包含具有PD1AB-6的VH区的VH CDR1、VH CDR2和VHCDR3的抗体。在其它实施方案中，药物制剂包含具有PD1AB-6的VL区的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的抗体。在其它实施方案中，药物制剂包含具有PD1AB-6的VH区的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3以及PD1AB-6的VL区的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的抗体。在一些实施方案中，药物制剂包含具有VH区的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3的抗体，所述VH区具有SEQ ID NO:13的氨基酸序列。在其它实施方案中，药物制剂包含具有VL区的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的抗体，所述VL区具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列。在一些实施方案中，药物制剂包含具有VH区的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3以及VL区的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的抗体，所述VH区具有SEQ ID NO:13的氨基酸序列，所述VL区具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列。
在某些实施方案中，药物制剂包含本文所述的抗体或其抗原结合片段，其与PD-1多肽(例如，PD-1(例如人PD-1)的ECD)特异性结合，并且包含轻链和重链，其中所述轻链包含具有以下氨基酸序列的恒定区：
TVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNAL QSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSS PVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:41)。
在其它实施方案中，药物制剂包含本文所述的抗体或其抗原结合片段，其与PD-1多肽(例如，PD-1(例如人PD-1)的ECD)特异性结合，并且包含轻链和重链，其中所述重链包含具有以下氨基酸序列的人IgG1 Fc区：
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:36，K322被突出显示)。
在一些实施方案中，药物制剂包含本文所述的抗体或其抗原结合片段，其与PD-1多肽(例如，PD-1(例如人PD-1)的ECD)特异性结合，并且包含轻链和重链，其中所述重链不包含具有SEQ ID NO:36的氨基酸序列的人IgG1 Fc区。
在某些实施方案中，药物制剂包含本文所述的抗体或其抗原结合片段，其与PD-1多肽(例如，PD-1(例如人PD-1)的ECD)特异性结合，并且包含轻链和重链，其中所述重链包含具有以下氨基酸序列的人IgG1-K322A Fc区：
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCAVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:37，K322A取代被突出显示)。
在一些实施方案中，药物制剂包含本文所述的抗体或其抗原结合片段，其与PD-1多肽(例如，PD-1(例如人PD-1)的ECD)特异性结合，并且包含轻链和重链，其中所述重链包含具有以下氨基酸序列的人IgG4 Fc区：
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:38，S228和L235被突出显示)。
在另一实施方案中，药物制剂包含本文所述的抗体或其抗原结合片段，其与PD-1多肽(例如，PD-1(例如人PD-1)的ECD)特异性结合，并且包含轻链和重链，其中所述重链包含具有以下氨基酸序列的人IgG4P Fc区：
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:39，S228P取代被突出显示)。
在又一实施方案中，药物制剂包含本文所述的抗体或其抗原结合片段，其与PD-1多肽(例如，PD-1(例如人PD-1)的ECD)特异性结合，并且包含轻链和重链，其中所述重链包含具有以下氨基酸序列的人IgG4PE Fc区：
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:40，S228P和L235E取代被突出显示)。
在一些实施方案中，药物制剂包含本文所述的抗体或其抗原结合片段，其与PD-1多肽(例如，PD-1(例如人PD-1)的ECD)特异性结合，并且包含轻链和重链，其中所述重链不包含具有SEQ ID NO:40的氨基酸序列的人IgG4PE Fc区。
在再一实施方案中，药物制剂包含本文所述的抗体或其抗原结合片段，其与PD-1多肽(例如，PD-1(例如人PD-1)的ECD)特异性结合，并且包含轻链和重链，其中所述轻链包含具有SEQ ID NO:41的氨基酸序列的恒定区；且所述重链包含具有选自SEQ ID NO:36-40的氨基酸序列的Fc区。
在某些实施方案中，药物制剂包含本文提供的抗体，其与PD-1多肽(例如，PD-1(例如人PD-1)的ECD)特异性结合，并且包含轻链和重链，其中所述轻链包含如下的氨基酸序列：
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSGQSVLYSSNQKNFLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLYSWTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:31，LC_PD1AB-6-IgG1)。
在一些实施方案中，药物制剂包含本文提供的抗体，其与PD-1多肽(例如，PD-1(例如人PD-1)的ECD)特异性结合，并且包含轻链和重链，其中所述重链包含如下的氨基酸序列：
EVQLVQSGAEVKKPGATVKISCKASGFNIKDTYMHWVQQAPGKGLEWMGRIDPANGDRKYDPKFQGRVTITADTSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSGPVYYYGSSYVMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:32，HC_PD1AB-6-IgG1，K322被突出显示)。
在其它实施方案中，药物制剂包含本文提供的抗体，其与PD-1多肽(例如，PD-1(例如人PD-1)的ECD)特异性结合，并且包含轻链和重链，其中所述重链包含如下的氨基酸序列：
EVQLVQSGAEVKKPGATVKISCKASGFNIKDTYMHWVQQAPGKGLEWMGRIDPANGDRKYDPKFQGRVTITADTSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSGPVYYYGSSYVMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCAVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:33，HC_PD1AB-6-IgG1-K322A，K322A取代被突出显示)。
在另一实施方案中，药物制剂包含本文提供的抗体，其与PD-1多肽(例如，PD-1(例如人PD-1)的ECD)特异性结合，并且包含轻链和重链，其中所述重链包含如下的氨基酸序列：
Figure BDA0002285022320000951
Figure BDA0002285022320000952
（SEQ IDNO：34，HC_PD1AB-6-IgG4P，IgG4P Fc骨架以斜体表示并加下划线)。
在又一实施方案中，药物制剂包含本文提供的抗体，其与PD-1多肽(例如，PD-1(例如人PD-1)的ECD)特异性结合，并且包含轻链和重链，其中所述重链包含如下的氨基酸序列：
Figure BDA0002285022320000954
(SEQ IDNO:35，HC_PD1AB-6-IgG4PE，IgG4PE Fc骨架以斜体表示并加下划线)。
在一个特定实施方案中，药物制剂包含本文提供的抗体，其与PD-1多肽(例如，PD-1(例如人PD-1)的ECD)特异性结合，并且包含轻链和重链，其中(i)所述轻链包含SEQ IDNO:31的氨基酸序列；且(ii)所述重链包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列。
在另一特定实施方案中，药物制剂包含本文提供的抗体，其与PD-1多肽(例如，PD-1(例如人PD-1)的ECD)特异性结合，并且包含轻链和重链，其中(i)所述轻链包含SEQ IDNO:31的氨基酸序列；且(ii)所述重链包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列。
在又一特定实施方案中，药物制剂包含本文提供的抗体，其与PD-1多肽(例如，PD-1(例如人PD-1)的ECD)特异性结合，并且包含轻链和重链，其中(i)所述轻链包含SEQ IDNO:31的氨基酸序列；且(ii)所述重链包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列。
在再一特定实施方案中，药物制剂包含本文提供的抗体，其与PD-1多肽(例如，PD-1(例如人PD-1)的ECD)特异性结合，并且包含轻链和重链，其中(i)所述轻链包含SEQ IDNO:31的氨基酸序列；且(ii)所述重链包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列。
在又一方面，药物制剂包含同例示抗体或功能片段中的一者竞争与PD-1的结合的抗体。这类抗体也可与本文例示的抗体中的一者结合相同的表位或结合重叠表位。预期与例示抗体竞争或结合相同表位的抗体及片段显示出类似的功能性质。例示抗原结合蛋白及片段包括具有本文提供的VH和VL区及CDR的那些，包括表1-6中的那些。因此，作为具体实例，本文提供的药物制剂包含抗体，所述抗体包括同包含以下的抗体竞争的那些：(a)针对表1-2中列出的抗体所列出的1、2、3、4、5或全部6个CDR；(b)选自针对表5-6中列出的抗体所列出的VH和VL区的VH和VL；或(c)包含如针对表5-6中列出的抗体指定的VH和VL的两条轻链和两条重链。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂包含抗体，所述抗体是PD1AB-1。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂包含抗体，所述抗体是PD1AB-2。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂包含抗体，所述抗体是PD1AB-3。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂包含抗体，所述抗体是PD1AB-4。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂包含抗体，所述抗体是PD1AB-5。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂包含抗体，所述抗体是PD1AB-6。
在另一方面，本文提供的药物制剂包含与人PD-1或食蟹猴PD-1的区域(包括表位)结合的抗体或其抗原结合片段。例如，在一些实施方案中，本文提供的药物制剂包含与人PD-1(SEQ ID NO:42)的区域结合的抗体，所述区域包含人PD-1的氨基酸残基33至109。在再一方面，本文提供的药物制剂包含与人PD-1的特定表位结合的抗体。
在某些实施方案中，本文提供的药物制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的残基100-109(SEQID NO:43)中的至少一个结合。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的残基100-105(SEQ ID NO:44)中的至少一个结合。
在特定的实施方案中，本文提供的药物制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与至少一个选自SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的N33、T51、S57、L100、N102、G103、R104、D105、H107和S109的残基结合。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与至少一个选自SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的L100、N102、G103、R104、D105、H107和S109的残基结合。
在一些实施方案中，本文提供的药物制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与两个或更多个选自SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的N33、T51、S57、L100、N102、G103、R104、D105、H107和S109的残基结合。
在其它实施方案中，本文提供的药物制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与三个或更多个选自SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的N33、T51、S57、L100、N102、G103、R104、D105、H107和S109的残基结合。
在某些实施方案中，本文提供的药物制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与四个或更多个选自SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的N33、T51、S57、L100、N102、G103、R104、D105、H107和S109的残基结合。
在一个实施方案中，本文提供的药物制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与五个或更多个选自SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的N33、T51、S57、L100、N102、G103、R104、D105、H107和S109的残基结合。
在另一实施方案中，本文提供的药物制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与六个或更多个选自SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的N33、T51、S57、L100、N102、G103、R104、D105、H107和S109的残基结合。
在又一实施方案中，本文提供的药物制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与七个或更多个选自SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的N33、T51、S57、L100、N102、G103、R104、D105、H107和S109的残基结合。
在再一实施方案中，本文提供的药物制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与八个或更多个选自SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的N33、T51、S57、L100、N102、G103、R104、D105、H107和S109的残基结合。
在某些实施方案中，本文提供的药物制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与九个或更多个选自SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的N33、T51、S57、L100、N102、G103、R104、D105、H107和S109的残基结合。
在其它实施方案中，本文提供的药物制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与来自SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的N33、T51、S57、L100、N102、G103、R104、D105、H107和S109的所有十个残基结合。
在另一实施方案中，本文提供的药物制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的N33结合。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的T51结合。在特定的实施方案中，本文提供的药物制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的S57结合。在一个具体实施方案中，本文提供的药物制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的L100结合。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的N102结合。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的G103结合。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的R104结合。在又一实施方案中，本文提供的药物制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的G103和R104结合。在再一实施方案中，本文提供的药物制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的D105结合。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的H107结合。在某些实施方案中，本文提供的药物制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的S109结合。还涵盖上面提到的氨基酸PD-1结合位点中的两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或更多个的任意组合。
在一方面，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体与PD-1特异性结合，并且可调节PD-1活性和/或表达(例如，活化PD-1信号传导和/或抑制PD-1表达)。在某些实施方案中，本文提供了包含PD-1激动剂的药物制剂，所述PD-1激动剂是本文提供的抗体，其与人PD-1的ECD特异性结合，并且活化(例如，部分地活化)至少一种PD-1活性(例如，抑制细胞因子产生)。在某些实施方案中，本文提供了包含PD-1激动剂的药物制剂，所述PD-1激动剂是本文提供的抗体，其与人PD-1的ECD特异性结合，并且下调PD-1表达。在某些实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体与PD-1特异性结合，并且(a)减弱T细胞活性，例如通过细胞因子产生的抑制所确定；和/或(b)下调细胞中的PD-1表达。在某些实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体与PD-1特异性结合，并且(a)减弱T细胞活性，例如通过细胞因子产生的抑制所确定；(b)下调细胞中的PD-1表达；和/或(c)不抑制PD-L1和/或PD-L2与PD-1的结合。在某些实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体与PD-1(人PD-1的ECD或其人PD-1的ECD的表位)特异性结合。在某些实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体与人PD-1的ECD的不同于PD-L1结合位点的表位特异性结合。在某些实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体与人PD-1的ECD的不同于PD-L2结合位点的表位特异性结合。在某些实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体与人PD-1的ECD的不同于PD-L1和PD-L2结合位点两者的表位特异性结合。在某些实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体不抑制PD-L1与PD-1的结合。在其它实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体不抑制PD-L2与PD-1的结合。在具体的实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体不抑制PD-L1与PD-1的结合或PD-L2与PD-1的结合。
PD-1活性可涉及PD-1的任何活性，如本领域中已知或描述的那些。PD-1活性和PD-1信号传导在本文中可互换使用。在某些方面，PD-1活性由PD-1配体(例如，PD-L1)与PD-1的结合诱导。可通过本文所述的方法或本领域技术人员已知的方法(例如，免疫印迹法、ELISA、免疫组织化学或流式细胞术)评估PD-1的表达水平。在某些实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体与PD-1特异性结合并降低PD-1表达。在某些实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体与PD-1特异性结合并减弱T细胞活性。在某些实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体与PD-1特异性结合并抑制细胞因子产生。在某些实施方案中，本文提供了包含抗体的药物制剂，所述抗体与PD-1特异性结合并活化(例如，部分地活化)PD-1信号传导。在某些实施方案中，本文提供的药物制剂包含与PD-1(人PD-1的ECD或其人PD-1的ECD的表位)特异性结合的抗体。在某些实施方案中，本文提供的药物制剂包含抗体，所述抗体与人PD-1的ECD的不同于PD-L1结合位点的表位特异性结合。在某些实施方案中，本文提供的药物制剂包含抗体，所述抗体与人PD-1的ECD的不同于PD-L2结合位点的表位特异性结合。在某些实施方案中，本文提供的药物制剂包含抗体，所述抗体与人PD-1的ECD的不同于PD-L1和PD-L2结合位点两者的表位特异性结合。在某些实施方案中，本文提供的药物制剂包含抗体，所述抗体不抑制PD-L1与PD-1的结合。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂包含抗体，所述抗体不抑制PD-L2与PD-1的结合。在具体的实施方案中，本文提供的药物制剂包含抗体，所述抗体不抑制PD-L1与PD-1的结合或PD-L2与PD-1的结合。
在某些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体减弱(例如，部分地减弱)T细胞活性。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体使T细胞活性减弱至少约10％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体使T细胞活性减弱至少约15％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体使T细胞活性减弱至少约20％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体使T细胞活性减弱至少约25％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体使T细胞活性减弱至少约30％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体使T细胞活性减弱至少约35％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体使T细胞活性减弱至少约40％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体使T细胞活性减弱至少约45％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体使T细胞活性减弱至少约50％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体使T细胞活性减弱至少约55％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体使T细胞活性减弱至少约60％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体使T细胞活性减弱至少约65％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体使T细胞活性减弱至少约70％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体使T细胞活性减弱至少约75％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体使T细胞活性减弱至少约80％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体使T细胞活性减弱至少约85％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体使T细胞活性减弱至少约90％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体使T细胞活性减弱至少约95％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体使T细胞活性减弱至少约98％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体使T细胞活性减弱至少约99％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体使T细胞活性减弱至少约100％。在某些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体可使T细胞活性减弱(例如，部分地减弱)至少约25％至约65％。在具体的实施方案中，通过本文所述的方法评估T细胞活性减弱。在一些实施方案中，通过本领域技术人员已知的方法评估T细胞活性减弱。在某些实施方案中，T细胞活性减弱是相对于在没有任何抗PD-1抗体的刺激存在下的T细胞活性。在某些实施方案中，T细胞活性减弱是相对于在有无关抗体(例如，不与PD-1特异性结合的抗体)的刺激存在下的T细胞活性。T细胞活性的非限制性实例有细胞因子的分泌。在一些实施方案中，所述细胞因子选自IL-2、IL-17、IFN-γ或其任意组合。在某些实施方案中，所述细胞因子选自IL-1、IL-2、IL-6、IL-12、IL-17、IL-22、IL-23、GM-CSF、IFN-γ和TNF-α。在某些实施方案中，所述细胞因子是IL-1。在一些实施方案中，所述细胞因子是IL-2。在其它实施方案中，所述细胞因子是IL-6。在另一实施方案中，所述细胞因子是IL-12。在其它实施方案中，所述细胞因子是IL-17。还在其它实施方案中，所述细胞因子是IL-22。仍在其它实施方案中，所述细胞因子是IL-23。在一些实施方案中，所述细胞因子是GM-CSF。在其它实施方案中，所述细胞因子是IFN-γ。还在其它实施方案中，所述细胞因子是TNF-α。在某些实施方案中，所述细胞因子是IL-2和IL-17。在一些实施方案中，所述细胞因子是IL-2和IFN-γ。还在其它实施方案中，所述细胞因子是IL-17和IFN-γ。仍在其它实施方案中，所述细胞因子是IL-2、IL-17和IFN-γ。
在具体的实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体(例如，抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者或其抗原结合片段或包含抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者的CDR的抗体)与PD-1特异性结合并抑制IL-2分泌(例如，从细胞(例如，T细胞)中)。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-2分泌抑制至少约5％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-2分泌抑制至少约10％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-2分泌抑制至少约15％。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-2分泌抑制至少约20％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-2分泌抑制至少约25％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-2分泌抑制至少约30％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-2分泌抑制至少约35％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-2分泌抑制至少约40％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-2分泌抑制至少约45％。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-2分泌抑制至少约50％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-2分泌抑制至少约55％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-2分泌抑制至少约60％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-2分泌抑制至少约65％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-2分泌抑制至少约70％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-2分泌抑制至少约75％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-2分泌抑制至少约80％。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-2分泌抑制至少约85％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-2分泌抑制至少约90％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-2分泌抑制至少约95％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-2分泌抑制至少约98％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-2分泌抑制至少约99％。在具体的实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-2分泌抑制至少约25％或35％，任选约75％。在一些实施方案中，通过本文所述的方法评估IL-2分泌的抑制。在其它实施方案中，通过本领域技术人员已知的方法(例如，MesoScaleTM Discovery(MSD)多重测定)评估IL-2分泌的抑制。在具体的实施方案中，相对于不存在抗PD-1抗体情况下的IL-2分泌，IL-2分泌受到抑制。在其它实施方案中，相对于在无关抗体(例如，不与PD-1特异性结合的抗体)存在下的IL-2分泌，IL-2分泌受到抑制。
在某些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体(例如，抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者或其抗原结合片段或包含抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者的CDR的抗体)抑制IL-2分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约50nM的EC50抑制IL-2分泌。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约40nM的EC50抑制IL-2分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约30nM的EC50抑制IL-2分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约20nM的EC50抑制IL-2分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约10nM的EC50抑制IL-2分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约5nM的EC50抑制IL-2分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约1nM的EC50抑制IL-2分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.75nM的EC50抑制IL-2分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.5nM的EC50抑制IL-2分泌。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.1nM的EC50抑制IL-2分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.05nM的EC50抑制IL-2分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.01nM的EC50抑制IL-2分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.005nM的EC50抑制IL-2分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.001nM的EC50抑制IL-2分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约50nM的EC50抑制IL-2分泌。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约40nM的EC50抑制IL-2分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约30nM的EC50抑制IL-2分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约20nM的EC50抑制IL-2分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约10nM的EC50抑制IL-2分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约5nM的EC50抑制IL-2分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约1nM的EC50抑制IL-2分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.75nM的EC50抑制IL-2分泌。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.5nM的EC50抑制IL-2分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.1nM的EC50抑制IL-2分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.05nM的EC50抑制IL-2分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.01nM的EC50抑制IL-2分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.005nM的EC50抑制IL-2分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.001nM的EC50抑制IL-2分泌。在具体的实施方案中，通过本文所述的方法评估EC50。在其它实施方案中，通过本领域技术人员已知的其它方法(例如，MSD多重测定)评估EC50。在具体的实施方案中，通过MSD多重测定评估EC50。
在具体的实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体(例如，抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者或其抗原结合片段或包含抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者的CDR的抗体)与PD-1特异性结合并抑制IL-17分泌(例如，从细胞(例如，T细胞)中)。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-17分泌抑制至少约5％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-17分泌抑制至少约10％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-17分泌抑制至少约15％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-17分泌抑制至少约20％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-17分泌抑制至少约25％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-17分泌抑制至少约30％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-17分泌抑制至少约35％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-17分泌抑制至少约40％。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-17分泌抑制至少约45％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-17分泌抑制至少约50％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-17分泌抑制至少约55％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-17分泌抑制至少约60％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-17分泌抑制至少约65％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-17分泌抑制至少约70％。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-17分泌抑制至少约75％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-17分泌抑制至少约80％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-17分泌抑制至少约85％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-17分泌抑制至少约90％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-17分泌抑制至少约95％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-17分泌抑制至少约98％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-17分泌抑制至少约99％。在具体的实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-17分泌抑制至少约25％或35％，任选约75％。在一些实施方案中，通过本文所述的方法评估IL-17分泌的抑制。在其它实施方案中，通过本领域技术人员已知的方法(例如，MSD多重测定)评估IL-17分泌的抑制。在具体的实施方案中，相对于在不存在抗PD-1抗体情况下的IL-17分泌，IL-17分泌受到抑制。在其它实施方案中，相对于在无关抗体(例如，不与PD-1特异性结合的抗体)存在下的IL-17分泌，IL-17分泌受到抑制。
在某些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体(例如，抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者或其抗原结合片段或包含抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者的CDR的抗体)抑制IL-17分泌。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约50nM的EC50抑制IL-17分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约40nM的EC50抑制IL-17分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约30nM的EC50抑制IL-17分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约20nM的EC50抑制IL-17分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约10nM的EC50抑制IL-17分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约5nM的EC50抑制IL-17分泌。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约1nM的EC50抑制IL-17分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.75nM的EC50抑制IL-17分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.5nM的EC50抑制IL-17分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.1nM的EC50抑制IL-17分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.05nM的EC50抑制IL-17分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.01nM的EC50抑制IL-17分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.005nM的EC50抑制IL-17分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.001nM的EC50抑制IL-17分泌。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约50nM的EC50抑制IL-17分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约40nM的EC50抑制IL-17分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约30nM的EC50抑制IL-17分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约20nM的EC50抑制IL-17分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约10nM的EC50抑制IL-17分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约5nM的EC50抑制IL-17分泌。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约1nM的EC50抑制IL-17分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.75nM的EC50抑制IL-17分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.5nM的EC50抑制IL-17分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.1nM的EC50抑制IL-17分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.05nM的EC50抑制IL-17分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.01nM的EC50抑制IL-17分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.005nM的EC50抑制IL-17分泌。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.001nM的EC50抑制IL-17分泌。在具体的实施方案中，通过本文所述的方法评估EC50。在其它实施方案中，通过本领域技术人员已知的其它方法(例如，MSD多重测定)评估EC50。在具体的实施方案中，通过MSD多重测定评估EC50。
在具体的实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体(例如，抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者或其抗原结合片段或包含抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者的CDR的抗体)与PD-1特异性结合并抑制IFN-γ分泌(例如，从细胞(例如，T细胞)中)。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IFN-γ分泌抑制至少约5％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IFN-γ分泌抑制至少约10％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IFN-γ分泌抑制至少约15％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IFN-γ分泌抑制至少约20％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IFN-γ分泌抑制至少约25％。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IFN-γ分泌抑制至少约30％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IFN-γ分泌抑制至少约35％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IFN-γ分泌抑制至少约40％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IFN-γ分泌抑制至少约45％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IFN-γ分泌抑制至少约50％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IFN-γ分泌抑制至少约55％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IFN-γ分泌抑制至少约60％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IFN-γ分泌抑制至少约65％。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IFN-γ分泌抑制至少约70％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IFN-γ分泌抑制至少约75％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IFN-γ分泌抑制至少约80％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IFN-γ分泌抑制至少约85％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IFN-γ分泌抑制至少约90％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IFN-γ分泌抑制至少约95％。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IFN-γ分泌抑制至少约98％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IFN-γ分泌抑制至少约99％。在具体的实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IFN-γ分泌抑制至少约25％或35％，任选约75％。在一些实施方案中，通过本文所述的方法评估IFN-γ分泌的抑制。在其它实施方案中，通过本领域技术人员已知的方法(例如，MSD多重测定)评估IFN-γ分泌的抑制。在具体的实施方案中，相对于不存在抗PD-1抗体情况下的IFN-γ分泌，IFN-γ分泌受到抑制。在其它实施方案中，相对于在无关抗体(例如，不与PD-1特异性结合的抗体)存在下的IFN-γ分泌，IFN-γ分泌受到抑制。
在某些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体(例如，抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者或其抗原结合片段或包含抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者的CDR的抗体)抑制IFN-γ分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约50nM的EC50抑制IFN-γ分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约40nM的EC50抑制IFN-γ分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约30nM的EC50抑制IFN-γ分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约20nM的EC50抑制IFN-γ分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约10nM的EC50抑制IFN-γ分泌。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约5nM的EC50抑制IFN-γ分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约1nM的EC50抑制IFN-γ分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.75nM的EC50抑制IFN-γ分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.5nM的EC50抑制IFN-γ分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.1nM的EC50抑制IFN-γ分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.05nM的EC50抑制IFN-γ分泌。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.01nM的EC50抑制IFN-γ分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.005nM的EC50抑制IFN-γ分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.001nM的EC50抑制IFN-γ分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约50nM的EC50抑制IFN-γ分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约40nM的EC50抑制IFN-γ分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约30nM的EC50抑制IFN-γ分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约20nM的EC50抑制IFN-γ分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约10nM的EC50抑制IFN-γ分泌。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约5nM的EC50抑制IFN-γ分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约1nM的EC50抑制IFN-γ分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.75nM的EC50抑制IFN-γ分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.5nM的EC50抑制IFN-γ分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.1nM的EC50抑制IFN-γ分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.05nM的EC50抑制IFN-γ分泌。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.01nM的EC50抑制IFN-γ分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.005nM的EC50抑制IFN-γ分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.001nM的EC50抑制IFN-γ分泌。在具体的实施方案中，通过本文所述的方法评估EC50。在其它实施方案中，通过本领域技术人员已知的其它方法(例如，MSD多重测定)评估EC50。在具体的实施方案中，通过MSD多重测定评估EC50。
在具体的实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体(例如，抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者或其抗原结合片段或包含抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者的CDR的抗体)与PD-1特异性结合并抑制IL-1分泌(例如，从细胞(例如，T细胞)中)。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-1分泌抑制至少约5％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-1分泌抑制至少约10％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-1分泌抑制至少约15％。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-1分泌抑制至少约20％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-1分泌抑制至少约25％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-1分泌抑制至少约30％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-1分泌抑制至少约35％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-1分泌抑制至少约40％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-1分泌抑制至少约45％。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-1分泌抑制至少约50％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-1分泌抑制至少约55％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-1分泌抑制至少约60％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-1分泌抑制至少约65％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-1分泌抑制至少约70％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-1分泌抑制至少约75％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-1分泌抑制至少约80％。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-1分泌抑制至少约85％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-1分泌抑制至少约90％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-1分泌抑制至少约95％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-1分泌抑制至少约98％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-1分泌抑制至少约99％。在具体的实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-1分泌抑制至少约25％或35％，任选约75％。在一些实施方案中，通过本文所述的方法评估IL-1分泌的抑制。在其它实施方案中，通过本领域技术人员已知的方法(例如，MSD多重测定)评估IL-1分泌的抑制。在具体的实施方案中，相对于在不存在抗PD-1抗体情况下的IL-1分泌，IL-1分泌受到抑制。在其它实施方案中，相对于在无关抗体(例如，不与PD-1特异性结合的抗体)存在下的IL-1分泌，IL-1分泌受到抑制。
在某些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体(例如，抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者或其抗原结合片段或包含抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者的CDR的抗体)抑制IL-1分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约50nM的EC50抑制IL-1分泌。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约40nM的EC50抑制IL-1分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约30nM的EC50抑制IL-1分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约20nM的EC50抑制IL-1分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约10nM的EC50抑制IL-1分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约5nM的EC50抑制IL-1分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约1nM的EC50抑制IL-1分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.75nM的EC50抑制IL-1分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.5nM的EC50抑制IL-1分泌。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.1nM的EC50抑制IL-1分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.05nM的EC50抑制IL-1分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.01nM的EC50抑制IL-1分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.005nM的EC50抑制IL-1分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.001nM的EC50抑制IL-1分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约50nM的EC50抑制IL-1分泌。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约40nM的EC50抑制IL-1分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约30nM的EC50抑制IL-1分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约20nM的EC50抑制IL-1分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约10nM的EC50抑制IL-1分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约5nM的EC50抑制IL-1分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约1nM的EC50抑制IL-1分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.75nM的EC50抑制IL-1分泌。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.5nM的EC50抑制IL-1分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少0.1nM的EC50抑制IL-1分泌约。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.05nM的EC50抑制IL-1分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.01nM的EC50抑制IL-1分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.005nM的EC50抑制IL-1分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.001nM的EC50抑制IL-1分泌。在具体的实施方案中，通过本文所述的方法评估EC50。在其它实施方案中，通过本领域技术人员已知的其它方法(例如，MSD多重测定)评估EC50。在具体的实施方案中，通过MSD多重测定评估EC50。
在具体的实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体(例如，抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者或其抗原结合片段或包含抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者的CDR的抗体)与PD-1特异性结合并抑制IL-6分泌(例如，从细胞(例如，T细胞)中)。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-6分泌抑制至少约5％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-6分泌抑制至少约10％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-6分泌抑制至少约15％。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-6分泌抑制至少约20％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-6分泌抑制至少约25％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-6分泌抑制至少约30％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-6分泌抑制至少约35％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-6分泌抑制至少约40％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-6分泌抑制至少约45％。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-6分泌抑制至少约50％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-6分泌抑制至少约55％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-6分泌抑制至少约60％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-6分泌抑制至少约65％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-6分泌抑制至少约70％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-6分泌抑制至少约75％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-6分泌抑制至少约80％。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-6分泌抑制至少约85％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-6分泌抑制至少约90％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-6分泌抑制至少约95％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-6分泌抑制至少约98％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-6分泌抑制至少约99％。在具体的实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-6分泌抑制至少约25％或35％，任选约75％。在一些实施方案中，通过本文所述的方法评估IL-6分泌的抑制。在其它实施方案中，通过本领域技术人员已知的方法(例如，MSD多重测定)评估IL-6分泌的抑制。在具体的实施方案中，相对于在不存在抗PD-1抗体情况下的IL-6分泌，IL-6分泌受到抑制。在其它实施方案中，相对于在无关抗体(例如，不与PD-1特异性结合的抗体)存在下的IL-6分泌，IL-6分泌受到抑制。
在某些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体(例如，抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者或其抗原结合片段或包含抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者的CDR的抗体)抑制IL-6分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约50nM的EC50抑制IL-6分泌。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约40nM的EC50抑制IL-6分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约30nM的EC50抑制IL-6分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约20nM的EC50抑制IL-6分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约10nM的EC50抑制IL-6分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约5nM的EC50抑制IL-6分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约1nM的EC50抑制IL-6分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.75nM的EC50抑制IL-6分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.5nM的EC50抑制IL-6分泌。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.1nM的EC50抑制IL-6分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.05nM的EC50抑制IL-6分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.01nM的EC50抑制IL-6分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.005nM的EC50抑制IL-6分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.001nM的EC50抑制IL-6分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约50nM的EC50抑制IL-6分泌。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约40nM的EC50抑制IL-6分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约30nM的EC50抑制IL-6分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约20nM的EC50抑制IL-6分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约10nM的EC50抑制IL-6分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约5nM的EC50抑制IL-6分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约1nM的EC50抑制IL-6分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.75nM的EC50抑制IL-6分泌。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.5nM的EC50抑制IL-6分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.1nM的EC50抑制IL-6分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.05nM的EC50抑制IL-6分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.01nM的EC50抑制IL-6分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.005nM的EC50抑制IL-6分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.001nM的EC50抑制IL-6分泌。在具体的实施方案中，通过本文所述的方法评估EC50。在其它实施方案中，通过本领域技术人员已知的其它方法(例如，MSD多重测定)评估EC50。在具体的实施方案中，通过MSD多重测定评估EC50。
在具体的实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体(例如，抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者或其抗原结合片段或包含抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者的CDR的抗体)与PD-1特异性结合并抑制IL-12分泌(例如，从细胞(例如，T细胞)中)。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-12分泌抑制至少约5％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-12分泌抑制至少约10％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-12分泌抑制至少约15％。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-12分泌抑制至少约20％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-12分泌抑制至少约25％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-12分泌抑制至少约30％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-12分泌抑制至少约35％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-12分泌抑制至少约40％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-12分泌抑制至少约45％。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-12分泌抑制至少约50％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-12分泌抑制至少约55％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-12分泌抑制至少约60％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-12分泌抑制至少约65％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-12分泌抑制至少约70％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-12分泌抑制至少约75％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-12分泌抑制至少约80％。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-12分泌抑制至少约85％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-12分泌抑制至少约90％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-12分泌抑制至少约95％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-12分泌抑制至少约98％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-12分泌抑制至少约99％。在具体的实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-12分泌抑制至少约25％或35％，任选约75％。在一些实施方案中，通过本文所述的方法评估IL-12分泌的抑制。在其它实施方案中，通过本领域技术人员已知的方法(例如，MSD多重测定)评估IL-12分泌的抑制。在具体的实施方案中，相对于在不存在抗PD-1抗体情况下的IL-12分泌，IL-12分泌受到抑制。在其它实施方案中，相对于在无关抗体(例如，不与PD-1特异性结合的抗体)存在下的IL-12分泌，IL-12分泌受到抑制。
在某些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体(例如，抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者或其抗原结合片段或包含抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者的CDR的抗体)抑制IL-12分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约50nM的EC50抑制IL-12分泌。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约40nM的EC50抑制IL-12分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约30nM的EC50抑制IL-12分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约20nM的EC50抑制IL-12分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约10nM的EC50抑制IL-12分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约5nM的EC50抑制IL-12分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约1nM的EC50抑制IL-12分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.75nM的EC50抑制IL-12分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.5nM的EC50抑制IL-12分泌。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.1nM的EC50抑制IL-12分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.05nM的EC50抑制IL-12分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.01nM的EC50抑制IL-12分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.005nM的EC50抑制IL-12分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.001nM的EC50抑制IL-12分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约50nM的EC50抑制IL-12分泌。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约40nM的EC50抑制IL-12分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约30nM的EC50抑制IL-12分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约20nM的EC50抑制IL-12分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约10nM的EC50抑制IL-12分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约5nM的EC50抑制IL-12分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约1nM的EC50抑制IL-12分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.75nM的EC50抑制IL-12分泌。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.5nM的EC50抑制IL-12分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.1nM的EC50抑制IL-12分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.05nM的EC50抑制IL-12分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.01nM的EC50抑制IL-12分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.005nM的EC50抑制IL-12分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.001nM的EC50抑制IL-12分泌。在具体的实施方案中，通过本文所述的方法评估EC50。在其它实施方案中，通过本领域技术人员已知的其它方法(例如，MSD多重测定)评估EC50。在具体的实施方案中，通过MSD多重测定评估EC50。
在具体的实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体(例如，抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者或其抗原结合片段或包含抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者的CDR的抗体)与PD-1特异性结合并抑制IL-22分泌(例如，从细胞(例如，T细胞)中)。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-22分泌抑制至少约5％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-22分泌抑制至少约10％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-22分泌抑制至少约15％。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-22分泌抑制至少约20％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-22分泌抑制至少约25％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-22分泌抑制至少约30％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-22分泌抑制至少约35％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-22分泌抑制至少约40％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-22分泌抑制至少约45％。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-22分泌抑制至少约50％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-22分泌抑制至少约55％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-22分泌抑制至少约60％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-22分泌抑制至少约65％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-22分泌抑制至少约70％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-22分泌抑制至少约75％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-22分泌抑制至少约80％。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-22分泌抑制至少约85％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-22分泌抑制至少约90％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-22分泌抑制至少约95％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-22分泌抑制至少约98％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-22分泌抑制至少约99％。在具体的实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-22分泌抑制至少约25％或35％，任选约75％。在一些实施方案中，通过本文所述的方法评估IL-22分泌的抑制。在其它实施方案中，通过本领域技术人员已知的方法(例如，MSD多重测定)评估IL-22分泌的抑制。在具体的实施方案中，相对于在不存在抗PD-1抗体情况下的IL-22分泌，IL-22分泌受到抑制。在其它实施方案中，相对于在无关抗体(例如，不与PD-1特异性结合的抗体)存在下的IL-22分泌，IL-22分泌受到抑制。
在某些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体(例如，抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者或其抗原结合片段或包含抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者的CDR的抗体)抑制IL-22分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约50nM的EC50抑制IL-22分泌。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约40nM的EC50抑制IL-22分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约30nM的EC50抑制IL-22分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约20nM的EC50抑制IL-22分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约10nM的EC50抑制IL-22分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约5nM的EC50抑制IL-22分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约1nM的EC50抑制IL-22分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.75nM的EC50抑制IL-22分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.5nM的EC50抑制IL-22分泌。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.1nM的EC50抑制IL-22分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.05nM的EC50抑制IL-22分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.01nM的EC50抑制IL-22分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.005nM的EC50抑制IL-22分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.001nM的EC50抑制IL-22分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约50nM的EC50抑制IL-22分泌。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约40nM的EC50抑制IL-22分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约30nM的EC50抑制IL-22分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约20nM的EC50抑制IL-22分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约10nM的EC50抑制IL-22分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约5nM的EC50抑制IL-22分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约1nM的EC50抑制IL-22分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.75nM的EC50抑制IL-22分泌。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.5nM的EC50抑制IL-22分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.1nM的EC50抑制IL-22分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.05nM的EC50抑制IL-22分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.01nM的EC50抑制IL-22分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.005nM的EC50抑制IL-22分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.001nM的EC50抑制IL-22分泌。在具体的实施方案中，通过本文所述的方法评估EC50。在其它实施方案中，通过本领域技术人员已知的其它方法(例如，MSD多重测定)评估EC50。在具体的实施方案中，通过MSD多重测定评估EC50。
在具体的实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体(例如，抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者或其抗原结合片段或包含抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者的CDR的抗体)与PD-1特异性结合并抑制IL-23分泌(例如，从细胞(例如，T细胞)中)。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-23分泌抑制至少约5％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-23分泌抑制至少约10％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-23分泌抑制至少约15％。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-23分泌抑制至少约20％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-23分泌抑制至少约25％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-23分泌抑制至少约30％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-23分泌抑制至少约35％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-23分泌抑制至少约40％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-23分泌抑制至少约45％。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-23分泌抑制至少约50％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-23分泌抑制至少约55％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-23分泌抑制至少约60％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-23分泌抑制至少约65％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-23分泌抑制至少约70％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-23分泌抑制至少约75％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-23分泌抑制至少约80％。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-23分泌抑制至少约85％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-23分泌抑制至少约90％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-23分泌抑制至少约95％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-23分泌抑制至少约98％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-23分泌抑制至少约99％。在具体的实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将IL-23分泌抑制至少约25％或35％，任选约75％。在一些实施方案中，通过本文所述的方法评估IL-23分泌的抑制。在其它实施方案中，通过本领域技术人员已知的方法(例如，MSD多重测定)评估IL-23分泌的抑制。在具体的实施方案中，相对于在不存在抗PD-1抗体情况下的IL-23分泌，IL-23分泌受到抑制。在其它实施方案中，相对于在无关抗体(例如，不与PD-1特异性结合的抗体)存在下的IL-23分泌，IL-23分泌受到抑制。
在某些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体(例如，抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者或其抗原结合片段或包含抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者的CDR的抗体)抑制IL-23分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约50nM的EC50抑制IL-23分泌。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约40nM的EC50抑制IL-23分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约30nM的EC50抑制IL-23分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约20nM的EC50抑制IL-23分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约10nM的EC50抑制IL-23分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约5nM的EC50抑制IL-23分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约1nM的EC50抑制IL-23分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.75nM的EC50抑制IL-23分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.5nM的EC50抑制IL-23分泌。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.1nM的EC50抑制IL-23分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.05nM的EC50抑制IL-23分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.01nM的EC50抑制IL-23分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.005nM的EC50抑制IL-23分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.001nM的EC50抑制IL-23分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约50nM的EC50抑制IL-23分泌。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约40nM的EC50抑制IL-23分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约30nM的EC50抑制IL-23分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约20nM的EC50抑制IL-23分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约10nM的EC50抑制IL-23分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约5nM的EC50抑制IL-23分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约1nM的EC50抑制IL-23分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.75nM的EC50抑制IL-23分泌。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.5nM的EC50抑制IL-23分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.1nM的EC50抑制IL-23分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.05nM的EC50抑制IL-23分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.01nM的EC50抑制IL-23分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.005nM的EC50抑制IL-23分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.001nM的EC50抑制IL-23分泌。在具体的实施方案中，通过本文所述的方法评估EC50。在其它实施方案中，通过本领域技术人员已知的其它方法(例如，MSD多重测定)评估EC50。在具体的实施方案中，通过MSD多重测定评估EC50。
在具体的实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体(例如，抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者或其抗原结合片段或包含抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者的CDR的抗体)与PD-1特异性结合并抑制GM-CSF分泌(例如，从细胞(例如，T细胞)中)。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将GM-CSF分泌抑制至少约5％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将GM-CSF分泌抑制至少约10％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将GM-CSF分泌抑制至少约15％。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将GM-CSF分泌抑制至少约20％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将GM-CSF分泌抑制至少约25％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将GM-CSF分泌抑制至少约30％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将GM-CSF分泌抑制至少约35％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将GM-CSF分泌抑制至少约40％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将GM-CSF分泌抑制至少约45％。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将GM-CSF分泌抑制至少约50％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将GM-CSF分泌抑制至少约55％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将GM-CSF分泌抑制至少约60％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将GM-CSF分泌抑制至少约65％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将GM-CSF分泌抑制至少约70％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将GM-CSF分泌抑制至少约75％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将GM-CSF分泌抑制至少约80％。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将GM-CSF分泌抑制至少约85％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将GM-CSF分泌抑制至少约90％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将GM-CSF分泌抑制至少约95％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将GM-CSF分泌抑制至少约98％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将GM-CSF分泌抑制至少约99％。在具体的实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将GM-CSF分泌抑制至少约25％或35％，任选约75％。在一些实施方案中，通过本文所述的方法评估GM-CSF分泌的抑制。在其它实施方案中，通过本领域技术人员已知的方法(例如，MSD多重测定)评估GM-CSF分泌的抑制。在具体的实施方案中，相对于在不存在抗PD-1抗体情况下的GM-CSF分泌，GM-CSF分泌受到抑制。在其它实施方案中，相对于在无关抗体(例如，不与PD-1特异性结合的抗体)存在下的GM-CSF分泌，GM-CSF分泌受到抑制。
在某些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体(例如，抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者或其抗原结合片段或包含抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者的CDR的抗体)抑制GM-CSF分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约50nM的EC50抑制GM-CSF分泌。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约40nM的EC50抑制GM-CSF分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约30nM的EC50抑制GM-CSF分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约20nM的EC50抑制GM-CSF分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约10nM的EC50抑制GM-CSF分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约5nM的EC50抑制GM-CSF分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约1nM的EC50抑制GM-CSF分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.75nM的EC50抑制GM-CSF分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.5nM的EC50抑制GM-CSF分泌。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.1nM的EC50抑制GM-CSF分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.05nM的EC50抑制GM-CSF分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.01nM的EC50抑制GM-CSF分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.005nM的EC50抑制GM-CSF分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.001nM的EC50抑制GM-CSF分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约50nM的EC50抑制GM-CSF分泌。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约40nM的EC50抑制GM-CSF分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约30nM的EC50抑制GM-CSF分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约20nM的EC50抑制GM-CSF分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约10nM的EC50抑制GM-CSF分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约5nM的EC50抑制GM-CSF分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约1nM的EC50抑制GM-CSF分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.75nM的EC50抑制GM-CSF分泌。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.5nM的EC50抑制GM-CSF分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.1nM的EC50抑制GM-CSF分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.05nM的EC50抑制GM-CSF分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.01nM的EC50抑制GM-CSF分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.005nM的EC50抑制GM-CSF分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.001nM的EC50抑制GM-CSF分泌。在具体的实施方案中，通过本文所述的方法评估EC50。在其它实施方案中，通过本领域技术人员已知的其它方法(例如，MSD多重测定)评估EC50。在具体的实施方案中，通过MSD多重测定评估EC50。
在具体的实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体(例如，抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者或其抗原结合片段或包含抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者的CDR的抗体)与PD-1特异性结合并抑制TNF-α分泌(例如，从细胞(例如，T细胞)中)。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将TNF-α分泌抑制至少约5％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将TNF-α分泌抑制至少约10％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将TNF-α分泌抑制至少约15％。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将TNF-α分泌抑制至少约20％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将TNF-α分泌抑制至少约25％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将TNF-α分泌抑制至少约30％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将TNF-α分泌抑制至少约35％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将TNF-α分泌抑制至少约40％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将TNF-α分泌抑制至少约45％。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将TNF-α分泌抑制至少约50％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将TNF-α分泌抑制至少约55％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将TNF-α分泌抑制至少约60％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将TNF-α分泌抑制至少约65％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将TNF-α分泌抑制至少约70％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将TNF-α分泌抑制至少约75％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将TNF-α分泌抑制至少约80％。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将TNF-α分泌抑制至少约85％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将TNF-α分泌抑制至少约90％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将TNF-α分泌抑制至少约95％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将TNF-α分泌抑制至少约98％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将TNF-α分泌抑制至少约99％。在具体的实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将TNF-α分泌抑制至少约25％或35％，任选约75％。在一些实施方案中，通过本文所述的方法评估TNF-α分泌的抑制。在其它实施方案中，通过本领域技术人员已知的方法(例如，MSD多重测定)评估TNF-α分泌的抑制。在具体的实施方案中，相对于在不存在抗PD-1抗体情况下的TNF-α分泌，TNF-α分泌受到抑制。在其它实施方案中，相对于在无关抗体(例如，不与PD-1特异性结合的抗体)存在下的TNF-α分泌，TNF-α分泌受到抑制。
在某些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体(例如，抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者或其抗原结合片段或包含抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者的CDR的抗体)抑制TNF-α分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约50nM的EC50抑制TNF-α分泌。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约40nM的EC50抑制TNF-α分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约30nM的EC50抑制TNF-α分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约20nM的EC50抑制TNF-α分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约10nM的EC50抑制TNF-α分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约5nM的EC50抑制TNF-α分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约1nM的EC50抑制TNF-α分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.75nM的EC50抑制TNF-α分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.5nM的EC50抑制TNF-α分泌。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.1nM的EC50抑制TNF-α分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.05nM的EC50抑制TNF-α分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.01nM的EC50抑制TNF-α分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.005nM的EC50抑制TNF-α分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.001nM的EC50抑制TNF-α分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约50nM的EC50抑制TNF-α分泌。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约40nM的EC50抑制TNF-α分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约30nM的EC50抑制TNF-α分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约20nM的EC50抑制TNF-α分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约10nM的EC50抑制TNF-α分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约5nM的EC50抑制TNF-α分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约1nM的EC50抑制TNF-α分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.75nM的EC50抑制TNF-α分泌。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.5nM的EC50抑制TNF-α分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.1nM的EC50抑制TNF-α分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.05nM的EC50抑制TNF-α分泌。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.01nM的EC50抑制TNF-α分泌。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.005nM的EC50抑制TNF-α分泌。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.001nM的EC50抑制TNF-α分泌。在具体的实施方案中，通过本文所述的方法评估EC50。在其它实施方案中，通过本领域技术人员已知的其它方法(例如，MSD多重测定)评估EC50。在具体的实施方案中，通过MSD多重测定评估EC50。
在具体的实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体(例如，抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者或其抗原结合片段或包含抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者的CDR的抗体)与PD-1特异性结合并下调PD-1表达(例如，在细胞(例如，T细胞)中)。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将PD-1表达下调至少约5％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将PD-1表达下调至少约10％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将PD-1表达下调至少约15％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将PD-1表达下调至少约20％。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将PD-1表达下调至少约25％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将PD-1表达下调至少约30％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将PD-1表达下调至少约35％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将PD-1表达下调至少约40％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将PD-1表达下调至少约45％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将PD-1表达下调至少约50％。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将PD-1表达下调至少约55％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将PD-1表达下调至少约60％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将PD-1表达下调至少约65％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将PD-1表达下调至少约70％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将PD-1表达下调至少约75％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将PD-1表达下调至少约80％。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将PD-1表达下调至少约85％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将PD-1表达下调至少约90％。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将PD-1表达下调至少约95％。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将PD-1表达下调至少约98％。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将PD-1表达下调至少约99％。在具体的实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将PD-1表达下调至少约25％或35％，任选约75％。在一些实施方案中，通过本文所述的方法评估PD-1表达的下调。在其它实施方案中，通过本领域技术人员已知的方法(例如，流式细胞术、免疫印迹法、RNA印迹法或RT-PCR)评估PD-1表达的下调。在具体的实施方案中，通过流式细胞术评估PD-1表达的下调。在另一实施方案中，通过免疫印迹法评估PD-1表达的下调。在又一实施方案中，通过RNA印迹法评估PD-1表达的下调。在再一实施方案中，通过RT-PCR评估PD-1表达的下调。在具体的实施方案中，相对于在不存在抗PD-1抗体情况下的PD-1表达下调，PD-1表达被下调。在其它实施方案中，相对于在无关抗体(例如，不与PD-1特异性结合的抗体)存在下的PD-1表达下调，PD-1表达被下调。
在某些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体(例如，抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者或其抗原结合片段或包含抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者的CDR的抗体)下调PD-1表达。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约50nM的EC50下调PD-1表达。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约40nM的EC50下调PD-1表达。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约30nM的EC50下调PD-1表达。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约20nM的EC50下调PD-1表达。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约10nM的EC50下调PD-1表达。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约5nM的EC50下调PD-1表达。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约1nM的EC50下调PD-1表达。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.75nM的EC50下调PD-1表达。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.5nM的EC50下调PD-1表达。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.1nM的EC50下调PD-1表达。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.05nM的EC50下调PD-1表达。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.01nM的EC50下调PD-1表达。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.005nM的EC50下调PD-1表达。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至多约0.001nM的EC50下调PD-1表达。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约50nM的EC50下调PD-1表达。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约40nM的EC50下调PD-1表达。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约30nM的EC50下调PD-1表达。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约20nM的EC50下调PD-1表达。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约10nM的EC50下调PD-1表达。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约5nM的EC50下调PD-1表达。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约1nM的EC50下调PD-1表达。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.75nM的EC50下调PD-1表达。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.5nM的EC50下调PD-1表达。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.1nM的EC50下调PD-1表达。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.05nM的EC50下调PD-1表达。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.01nM的EC50下调PD-1表达。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.005nM的EC50下调PD-1表达。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体以至少约0.001nM的EC50下调PD-1表达。在具体的实施方案中，通过本文所述的方法评估EC50。在其它实施方案中，通过本领域技术人员已知的其它方法(例如，流式细胞术、免疫印迹法、RNA印迹法或RT-PCR)评估EC50。在具体的实施方案中，通过流式细胞术评估EC50。在另一实施方案中，通过免疫印迹法评估EC50。在又一实施方案中，通过RNA印迹法评估EC50。在再一实施方案中，通过RT-PCR评估EC50。
在某些实施方案中，T细胞的表面上的PD-1表达的下调早在与本文提供的药物制剂的抗体或其抗原结合片段接触后4小时发生。在另一实施方案中，下调早在接触后6小时发生。在又一实施方案中，下调早在接触后8小时发生。在再一实施方案中，下调早在接触后10小时发生。在一个实施方案中，下调早在接触后12小时发生。在另一实施方案中，下调早在接触后14小时发生。在又一实施方案中，下调早在接触后16小时发生。在再一实施方案中，下调早在接触后18小时发生。在一个实施方案中，下调早在接触后20小时发生。在另一实施方案中，下调早在接触后22小时发生。在又一实施方案中，下调早在接触后24小时发生。在一些实施方案中，所述接触是与所述抗体接触。在其它实施方案中，所述接触是与其抗原结合片段接触。
在一些实施方案中，T细胞的表面上的PD-1表达的下调先于细胞因子抑制。在一个实施方案中，T细胞的表面上的PD-1表达的下调早在与药物制剂的抗体或其抗原结合片段接触后4小时发生，并且先于细胞因子抑制。在另一实施方案中，下调早在与药物制剂的抗体或其抗原结合片段接触后6小时发生，并且先于细胞因子抑制。在又一实施方案中，下调早在与药物制剂的抗体或其抗原结合片段接触后8小时发生，并且先于细胞因子抑制。在再一实施方案中，下调早在与药物制剂的抗体或其抗原结合片段接触后10小时发生，并且先于细胞因子抑制。在一个实施方案中，下调早在与药物制剂的抗体或其抗原结合片段接触后12小时发生，并且先于细胞因子抑制。在另一实施方案中，下调早在与药物制剂的抗体或其抗原结合片段接触后14小时发生，并且先于细胞因子抑制。在又一实施方案中，下调早在与药物制剂的抗体或其抗原结合片段接触后16小时发生，并且先于细胞因子抑制。在再一实施方案中，下调早在与药物制剂的抗体或其抗原结合片段接触后18小时发生，并且先于细胞因子抑制。在一个实施方案中，下调早在与药物制剂的抗体或其抗原结合片段接触后20小时发生，并且先于细胞因子抑制。在另一实施方案中，下调早在与药物制剂的抗体或其抗原结合片段接触后22小时发生，并且先于细胞因子抑制。在又一实施方案中，下调早在与药物制剂的抗体或其抗原结合片段接触后24小时发生，并且先于细胞因子抑制。
在其它实施方案中，T细胞的表面上的PD-1表达的下调是与细胞因子抑制同时的。在一个实施方案中，T细胞的表面上的PD-1表达的下调早在与药物制剂的抗体或其抗原结合片段接触后4小时发生，并且是与细胞因子抑制同时的。在另一实施方案中，下调早在与药物制剂的抗体或其抗原结合片段接触后6小时发生，并且是与细胞因子抑制同时的。在又一实施方案中，下调早在与药物制剂的抗体或其抗原结合片段接触后8小时发生，并且是与细胞因子抑制同时的。在再一实施方案中，下调早在与药物制剂的抗体或其抗原结合片段接触后10小时发生，并且是与细胞因子抑制同时的。在一个实施方案中，下调早在与药物制剂的抗体或其抗原结合片段接触后12小时发生，并且是与细胞因子抑制同时的。在另一实施方案中，下调早在与药物制剂的抗体或其抗原结合片段接触后14小时发生，并且是与细胞因子抑制同时的。在又一实施方案中，下调早在与药物制剂的抗体或其抗原结合片段接触后16小时发生，并且是与细胞因子抑制同时的。在再一实施方案中，下调早在与药物制剂的抗体或其抗原结合片段接触后18小时发生，并且是与细胞因子抑制同时的。在一个实施方案中，下调早在与药物制剂的抗体或其抗原结合片段接触后20小时发生，并且是与细胞因子抑制同时的。在另一实施方案中，下调早在与药物制剂的抗体或其抗原结合片段接触后22小时发生，并且是与细胞因子抑制同时的。在又一实施方案中，下调早在与药物制剂的抗体或其抗原结合片段接触后24小时发生，并且是与细胞因子抑制同时的。
还在其它实施方案中，T细胞的表面上的PD-1表达的下调是在细胞因子抑制之后。在一个实施方案中，T细胞的表面上的PD-1表达的下调早在与药物制剂的抗体或其抗原结合片段接触后4小时发生，并且是在细胞因子抑制之后。在另一实施方案中，下调早在与药物制剂的抗体或其抗原结合片段接触后6小时发生，并且是在细胞因子抑制之后。在又一实施方案中，下调早在与药物制剂的抗体或其抗原结合片段接触后8小时发生，并且是在细胞因子抑制之后。在再一实施方案中，下调早在与药物制剂的抗体或其抗原结合片段接触后10小时发生，并且是在细胞因子抑制之后。在一个实施方案中，下调早在与药物制剂的抗体或其抗原结合片段接触后12小时发生，并且是在细胞因子抑制之后。在另一实施方案中，下调早在与药物制剂的抗体或其抗原结合片段接触后14小时发生，并且是在细胞因子抑制之后。在又一实施方案中，下调早在与药物制剂的抗体或其抗原结合片段接触后16小时发生，并且是在细胞因子抑制之后。在再一实施方案中，下调早在与药物制剂的抗体或其抗原结合片段接触后18小时发生，并且是在细胞因子抑制之后。在一个实施方案中，下调早在与药物制剂的抗体或其抗原结合片段接触后20小时发生，并且是在细胞因子抑制之后。在另一实施方案中，下调早在与药物制剂的抗体或其抗原结合片段接触后22小时发生，并且是在细胞因子抑制之后。在又一实施方案中，下调早在与药物制剂的抗体或其抗原结合片段接触后24小时发生，并且是在细胞因子抑制之后。
5.3.1.1多克隆抗体
本公开的药物制剂的抗体可包含多克隆抗体。制备多克隆抗体的方法是本领域技术人员已知的。可在哺乳动物中产生多克隆抗体，例如通过一次或多次注射免疫剂，并且如果需要的话，注射佐剂。通常，通过多次皮下或腹膜内注射将免疫剂和/或佐剂注射到哺乳动物体内。免疫剂可包括PD-1多肽或其融合蛋白。可能有用的是使免疫剂与已知在被免疫的哺乳动物中具有免疫原性的蛋白质缀合，或者用所述蛋白质和一种或多种佐剂使哺乳动物免疫。这类免疫原性蛋白质的实例包括但不限于钥孔戚血蓝蛋白、血清白蛋白、牛甲状腺球蛋白和大豆胰蛋白酶抑制剂。可以使用的佐剂的实例包括Ribi、CpG、聚1C、弗氏完全佐剂和MPL-TDM佐剂(单磷酰脂质A、合成海藻糖二棒分枝菌酸酯)。免疫方案可由本领域技术人员选择而无需过度实验。然后可使哺乳动物放血，并测定血清的PD-1抗体效价。如果需要的话，可使哺乳动物加强免疫，直到抗体效价提高或平稳。另外或可替代地，可由免疫动物获得淋巴细胞，用于融合及由杂交瘤制备单克隆抗体，如下所述。
5.3.1.2单克隆抗体
本公开的药物制剂的抗体或者可以是单克隆抗体。可采用由Kohler等人，1975，Nature 256:495-97首次描述的杂交瘤方法制备或可通过重组DNA方法(参见例如，第4,816,567号美国专利)制备单克隆抗体。
在杂交瘤方法中，如上所述使小鼠或诸如仓鼠的其它适当宿主动物免疫，以引发产生或能够产生将与用于免疫的蛋白质特异性结合的抗体的淋巴细胞。或者，可在体外使淋巴细胞免疫。免疫后，将淋巴细胞分离，然后使用诸如聚乙二醇的合适融合剂与骨髓瘤细胞系融合以形成杂交瘤细胞(Goding，Monoclonal Antibodies:Principles and Practice59-103(1986))。
将由此制备的杂交瘤细胞接种，并在合适的培养基中生长，在某些实施方案中，所述培养基含有一种或多种抑制未融合的亲本骨髓瘤细胞(也被称为融合配偶体)生长或存活的物质。例如，如果亲本骨髓瘤细胞缺乏酶-次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT或HPRT)，则用于杂交瘤的选择性培养基通常将包括阻止HGPRT缺陷细胞生长的次黄嘌呤、氨基喋呤和胸苷(HAT培养基)。
示例性融合配偶体骨髓瘤细胞是有效地融合、支持由选定的产生抗体的细胞稳定高水平地产生抗体并且对针对未融合亲本细胞选择的选择性培养基敏感的那些。示例性骨髓瘤细胞系有鼠骨髓瘤细胞系，如SP-2及衍生物，例如可得自美国模式培养物保藏所(Manassas，VA)的X63-Ag8-653细胞，以及来源于MOPC-21和MPC-11小鼠肿瘤的那些，可得自Salk Institute Cell Distribution Center(San Diego，CA)。人骨髓瘤及小鼠-人异源骨髓瘤细胞系也已被描述用于产生人单克隆抗体(Kozbor，1984，Immunol.133:3001-05；和Brodeur等人，Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications 51-63(1987))。
对在其中生长杂交瘤细胞的培养基，测定其针对抗原的单克隆抗体的产生。通过免疫沉淀法或者通过诸如RIA或ELISA的体外结合测定法确定由杂交瘤细胞产生的单克隆抗体的结合特异性。可例如通过Munson等人，1980，Anal.Biochem.107:220-39中描述的斯卡查德分析(Scatchard analysis)来确定单克隆抗体的结合亲和力。
一旦鉴定了产生具有所需特异性、亲和力和/或活性的抗体的杂交瘤细胞，则可通过有限稀释程序对克隆体进行亚克隆并通过标准方法使其生长(Goding，同上)。用于此目的的合适培养基包括例如DMEM或RPMI-1640培养基。此外，可使杂交瘤细胞作为动物中的腹水肿瘤在体内生长，例如通过将细胞i.p.注射到小鼠中来实现。
通过常规的抗体纯化程序使由亚克隆分泌的单克隆抗体适当地与培养基、腹水液或血清分离，所述常规的抗体纯化程序举例如亲和色谱(例如，使用蛋白A或蛋白G-琼脂糖)或离子交换色谱、羟基磷灰石色谱、凝胶电泳、渗析等。
采用常规程序(例如，通过使用能够与编码鼠抗体的重链和轻链的基因特异性结合的寡核苷酸探针)很容易将编码单克隆抗体的DNA分离并进行测序。杂交瘤细胞可充当这种DNA的来源。一经分离，即可将DNA置于表达载体当中，然后将表达载体转染到原本不产生抗体蛋白质的宿主细胞当中，如大肠杆菌细胞、猿猴COS细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或骨髓瘤细胞当中，以获得在重组宿主细胞中的单克隆抗体的合成。有关编码抗体的DNA在细菌中的重组表达的综述文章包括Skerra等人，1993，Curr.Opinion in Immunol.5:256-62和Plückthun，1992，Immunol.Revs.130:151-88。
在一些实施方案中，药物制剂的结合PD-1表位的抗体包含由核苷酸序列编码的VH结构域的氨基酸序列和/或VL结构域的氨基酸序列，所述核苷酸序列在严格条件下(例如，与在6X氯化钠/柠檬酸钠(SSC)中的滤膜结合的DNA在约45℃下杂交，接着在约50-65℃下在0.2X SSC/0.1％SDS中洗涤一次或多次)、在高度严格条件下(例如，与在6X SSC中的滤膜结合的核酸在约45℃下杂交，接着在约68℃下在0.1X SSC/0.2％SDS中洗涤一次或多次)或者在本领域技术人员已知的其它严格杂交条件下，与(1)编码本文所述的VH和/或VL结构域中的任一者的核苷酸序列的互补序列杂交。参见例如，Current Protocols in Molecular Biology第I卷，6.3.1-6.3.6和2.10.3(Ausubel等人编，1989)。
在一些实施方案中，药物制剂的结合PD-1表位的抗体包含由核苷酸序列编码的VHCDR的氨基酸序列或VL CDR的氨基酸序列，所述核苷酸序列在严格条件下(例如，与在6XSSC中的滤膜结合的DNA在约45℃下杂交，接着在约50-65℃下在0.2X SSC/0.1％SDS中洗涤一次或多次)、在高度严格条件下(例如，与在6X SSC中的滤膜结合的核酸在约45℃下杂交，接着在约68℃下在0.1X SSC/0.2％SDS中洗涤一次或多次)或者在本领域技术人员已知的其它严格杂交条件下，与编码表1-2中所示的VH CDR和/或VL CDR中的任一者的核苷酸序列的互补序列杂交(参见例如，Ausubel等人，同上)。
在进一步的实施方案中，药物制剂的单克隆抗体或抗体片段可分离自采用例如Antibody Phage Display:Methods and Protocols(O’Brien和Aitken编，2002)中所述的技术产生的抗体噬菌体文库。原则上，通过筛选含有噬菌体的噬菌体文库来选择合成抗体克隆，所述噬菌体展示与噬菌体外壳蛋白融合的抗体可变区(Fv)的各种片段。针对所需抗原筛选这类噬菌体文库。表达能够与所需抗原结合的Fv片段的克隆被吸附到抗原上，并因此与文库中的非结合克隆分离。然后将结合克隆从抗原中洗脱，并且可通过另外的抗原吸附/洗脱循环进一步富集。
可变结构域可在噬菌体上被功能性地展示为单链Fv(scFv)片段，其中VH和VL通过短的柔性肽共价连接，或展示为Fab片段，其中它们各自与恒定结构域融合，并且非共价地相互作用，例如Winter等人，1994，Ann.Rev.Immunol.12:433-55中所述。
可通过PCR将VH和VL基因的谱系单独克隆，并在噬菌体文库中随机重组，然后可如Winter等人，同上中所述搜索抗原结合克隆。来自经免疫的来源的文库为免疫原提供高亲和力抗体而无需构建杂交瘤。或者，可克隆天然谱系以对宽范围的非自体抗原还有自体抗原提供单一来源的人抗体而不进行如Griffiths等人，1993，EMBO J 12:725-34所述的任何免疫。最后，也可通过如下方式合成制备天然文库：由干细胞克隆未重排的V基因区段，并使用含有随机序列的PCR引物以编码高变CDR3区，并在体外实现重排，例如由Hoogenboom和Winter，1992，J.Mol.Biol.227:381-88所述。
可通过本领域中已知的各种技术来完成文库的筛选。例如，PD-1(例如，PD-1多肽、片段或表位)可用于涂覆吸附板的孔，在附着于吸附板或用在细胞分选中的宿主细胞上表达，与生物素缀合用于以包被链霉亲和素的珠粒捕集，或者用在用于淘选展示文库的任何其它方法中。可通过采用如Bass等人，1990，Proteins 8:309-14和WO 92/09690中所述的长时间洗涤和单价噬菌体展示以及通过采用如Marks等人，1992，Biotechnol.10:779-83中所述的低抗原包被密度来促进选择具有慢解离动力学(例如，良好的结合亲和力)的抗体。
可通过如下方式获得药物制剂的抗PD-1抗体：设计合适的抗原筛选程序以选择所关注的噬菌体克隆，接着使用VH和/或VL序列(例如，Fv序列)或来自VH和VL序列的各种CDR序列，由所关注的噬菌体克隆及Kabat等人，同上中所述的合适恒定区(例如，Fc)序列来构建全长抗PD-1抗体克隆。
在另一实施方案中，通过采用如Bowers等人，2011，Proc Natl Acad SciUSA.108:20455-60中所述的方法(例如，SHM-XHLTM平台(AnaptysBio，San Diego，CA))来产生药物制剂的抗PD-1抗体。简言之，在此方法中，在哺乳动物细胞系(例如，HEK293)中构建完整的人IgG文库作为起始文库。选择(例如，通过FACS分选)展示与靶肽或表位结合的免疫球蛋白的哺乳动物细胞，然后在体外复制活化诱导的胞苷脱氨酶(AID)触发型体细胞超突变，以扩展初始选择的抗体库的多样性。在通过将哺乳动物细胞表面展示与体外体细胞超突变偶联来进行数轮亲和力成熟之后，产生了高亲和力、高特异性的抗PD-1抗体。在例如第8,685,897和8,603,930号美国专利以及第2014/0170705、2014/0094392、2012/0028301、2011/0183855和2009/0075378号美国公布中公开了可用于产生抗体文库和/或抗体亲和力成熟的进一步的方法，上述中的每一者以引用的方式并入本文。
5.3.1.3抗体片段
本公开提供包含与PD-1结合的抗体和抗体片段的药物制剂。在某些情况下，使用抗体片段而非整个抗体是有利的。较小尺寸的片段允许快速清除，并且可改善向细胞、组织或器官的接近。关于对某些抗体片段的综述，参见Hudson等人，2003，Nature Med.9:129-34。
已经开发出用于产生抗体片段的各种技术。传统上，这些片段是经由完整抗体的蛋白水解消化衍生的(参见例如，Morimoto等人，1992，J.Biochem.Biophys.Methods 24:107-17；和Brennan等人，1985，Science 229:81-83)。然而，现在可通过重组宿主细胞直接产生这些片段。Fab、Fv和scFv抗体片段均可在大肠杆菌或酵母细胞中表达和由大肠杆菌或酵母细胞分泌，从而允许容易地产生大量的这些片段。可从上面讨论的抗体噬菌体文库中分离抗体片段。或者，可直接从大肠杆菌中回收Fab’-SH片段并进行化学偶联以形成F(ab’)2片段(Carter等人，1992，Bio/Technology 10:163-67)。根据另一种方法，可直接从重组宿主细胞培养物中分离F(ab’)2片段。在例如第5,869,046号美国专利中描述了包含补救受体结合表位残基的体内半衰期延长的Fab和F(ab’)2片段。用于产生抗体片段的其它技术对于技术人员来说将是显而易见的。在某些实施方案中，抗体是单链Fv片段(scFv)(参见例如，WO 93/16185；第5,571,894和5,587,458号美国专利)。Fv和scFv具有无恒定区的完整组合位点；因此，它们可适合在体内使用期间减少的非特异性结合。可构建scFv融合蛋白，以在scFv的氨基或羧基末端产生效应蛋白的融合(参见例如，Borrebaeck编，同上)。抗体片段例如也可以是“线性抗体”，如上面引用的参考文献中所述。这类线性抗体可以是单特异性的或多特异性的，如双特异性的。
源于较小抗体的结合结构是单独可变结构域(V结构域)，也称为单可变结构域抗体(sdAb)。某些类型的生物体(骆驼科动物和软骨鱼)具有高亲和力单V样结构域，其作为它们的免疫系统的一部分安放在Fc等效结构域结构上。(Woolven等人，1999，Immunogenetics50:98-101；和Streltsov等人，2004，Proc Natl Acad Sci USA.101:12444-49)。V样结构域(在骆驼科动物中称为VhH，并且在鲨鱼中称为V-NAR)通常展示长表面环，其允许穿透靶抗原的空腔。它们还通过掩蔽疏水表面小片段(hydrophobic surface patch)而稳定分离的VH结构域。
这些VhH和V-NAR结构域已被用于对sdAb进行工程改造。已采用从噬菌体文库中进行选择及其它方法设计人V结构域变体，所述方法已产生稳定的高结合VL及VH源结构域。
本文提供的药物制剂的抗体包括但不限于免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性部分，例如含有与PD-1表位结合的抗原结合位点的分子。本文提供的免疫球蛋白分子可以是任何类别(例如，IgG、IgE、IgM、IgD和IgA)或任何亚类(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)的免疫球蛋白分子。
药物制剂的抗体的变体和衍生物包括保留与PD-1表位结合的能力的抗体功能片段。示例性功能片段包括Fab片段(例如，含有抗原结合结构域并且包含通过二硫键桥接的轻链和部分重链的抗体片段)；Fab’(例如，含有包含Fab及重链的穿过铰链区的另外部分的单抗原结合结构域的抗体片段)；F(ab’)2(例如，通过重链的铰链区中的链间二硫键连接的两个Fab’分子；Fab’分子可针对相同或不同表位)；双特异性Fab(例如，具有两个抗原结合结构域的Fab分子，每个抗原结合结构域可针对不同的表位)；包含可变区的单链，也称为scFv(例如，抗体的单个轻链和重链的通过10-25个氨基酸的链连接在一起的可变抗原结合决定区)；二硫键连接的Fv或dsFv(例如，抗体的单个轻链和重链的通过二硫键连接在一起的可变抗原结合决定区)；骆驼源化VH(例如，抗体的单个重链的可变抗原结合决定区，其中在VH界面处的一些氨基酸是见于天然存在的骆驼抗体的重链中的那些)；双特异性scFv(例如，具有两个抗原结合结构域的scFv或dsFv分子，每个抗原结合结构域可针对不同的表位)；双抗体(例如，当第一scFv的VH结构域与第二scFv的VL结构域一起组装并且第一scFv的VL结构域与第二scFv的VH结构域一起组装时形成的二聚化scFv；双抗体的两个抗原结合区可针对相同或不同表位)；和三抗体(例如，以类似于双抗体的方式形成的三聚化scFv，但其中三个抗原结合结构域以单一复合物的形式产生；三个抗原结合结构域可针对相同或不同表位)。
5.3.1.4人源化抗体
在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体可以是结合PD-1(包括人和/或食蟹猴PD-1)的人源化抗体。例如，本公开的药物制剂的人源化抗体可包含一个或多个如表1-2中所示的CDR。使非人抗体人源化的各种方法是本领域中已知的。例如，人源化抗体可具有从非人来源引入的一个或多个氨基酸残基。这些非人氨基酸残基常被称为“输入”残基，其通常取自“输入”可变结构域。可例如按照Jones等人，1986，Nature 321:522-25；Riechmann等人，1988，Nature 332:323-27；和Verhoeyen等人，1988，Science 239:1534-36)的方法，通过以人抗体的相应序列取代高变区序列来进行人源化。
在一些情况下，通过CDR移植来构建药物制剂的人源化抗体，其中将亲本非人抗体(例如，啮齿动物)的六个CDR的氨基酸序列移植到人抗体框架上。例如，Padlan等人确定CDR中仅约三分之一的残基实际上接触抗原，并将这些称为“特异性决定残基”或SDR(Padlan等人，1995，FASEB J.9:133-39)。在SDR移植的技术中，仅SDR残基被移植到人抗体框架上(参见例如Kashmiri等人，2005，Methods 36:25-34)。
选择要用于制备人源化抗体的人可变结构域(轻链和重链)对于降低抗原性可能是重要的。例如，根据所谓的“最佳拟合”方法，针对已知的人可变结构域序列的整个文库筛选非人(例如，啮齿动物)抗体的可变结构域的序列。可选择最接近啮齿动物的人序列作为用于人源化抗体的人框架(Sims等人，1993，J.Immunol.151:2296-308；和Chothia等人，1987，J.Mol.Biol.196:901-17)。另一种方法使用来源于轻链或重链的特定亚组的所有人抗体的共有序列的特定框架。相同的框架可用于若干不同的人源化抗体(Carter 等人，1992，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89:4285-89；和Presta等人，1993，J.Immunol.151:2623-32)。在一些情况下，框架来源于最丰富的人亚类VL6亚组I(VL6I)和VH亚组III(VHIII)的共有序列。在另一种方法中，人种系基因被用作框架区的来源。
在被称为超人源化的基于CDR的比较的替代范例中，FR同源性是无关的。所述方法包括将非人序列与功能性人种系基因谱系进行比较。然后选择编码与鼠序列相同或密切相关的规范结构的那些基因。接下来，在与非人抗体共享规范结构的基因内，选择CDR内同源性最高的那些作为FR供体。最后，将非人CDR移植到这些FR上(参见例如Tan等人，2002，J.Immunol.169:1119-25)。
通常进一步可取的是使药物制剂的抗体在保留其对抗原的亲和力及其它有利的生物学性质的情况下人源化。为实现这一目标，根据一种方法，通过使用亲本和人源化序列的三维模型分析亲本序列及各种概念性人源化产物的方法来制备人源化抗体。三维免疫球蛋白模型是通常可用的，并且是本领域技术人员熟悉的。说明并展示选定候选免疫球蛋白序列的可能的三维构象结构的计算机程序是可用的。这些包括例如WAM(Whitelegg和Rees，2000，Protein Eng.13:819-24)、Modeller(Sali和Blundell，1993，J.Mol.Biol.234:779-815)和Swiss PDB Viewer(Guex和Peitsch，1997，Electrophoresis 18:2714-23)。检查这些展示允许分析残基在候选免疫球蛋白序列发挥功能方面中的可能作用，例如分析影响候选免疫球蛋白结合其抗原的能力的残基。以这种方式，可从受者和输入序列中选择FR残基并进行组合，从而实现所需的抗体特性，如对靶抗原增加的亲和力。一般来说，高变区残基直接且最基本地参与影响抗原结合。
另一种抗体人源化的方法基于被称为人区段含量(Human String Content，HSC)的抗体人源化度量。这种方法将小鼠序列与人种系基因的谱系进行比较，并将差异以HSC形式评分。然后通过使靶序列的HSC最大化而不是使用整体同一性测量来使其人源化，以产生多种多样的人源化变体(Lazar等人，2007，Mol.Immunol.44:1986-98)。
除了上述方法之外，可采用经验方法产生和选择人源化抗体。这些方法包括基于产生大的人源化变体文库以及采用富集技术或高通量筛选技术选择最佳克隆的方法。可以自噬菌体、核糖体和酵母展示文库以及通过细菌菌落筛选来分离抗体变体(参见例如Hoogenboom，2005，Nat.Biotechnol.23:1105-16；Dufner等人，2006，TrendsBiotechnol.24:523-29；Feldhaus等人，2003，Nat.Biotechnol.21:163-70；和Schlapschy等人，2004，Protein Eng.Des.Sel.17:847-60)。
在FR文库方法中，在FR中的特定位置处引入残基变体的集合，接着筛选文库以选择最佳地支持移植CDR的FR。要取代的残基可包括被鉴定为可能对CDR结构有贡献的一些或所有“游标”残基(参见例如Foote和Winter，1992，J.Mol.Biol.224:487-99)或来自由Baca等人(1997，J.Biol.Chem.272:10678-84)鉴定的更有限的靶残基组的残基。
在FR改组中，将整个FR与非人CDR组合而不是产生选定残基变体的组合文库(参见例如Dall’Acqua等人，2005，Methods 36:43-60)。可筛选文库，用于以两步方法结合，首先是使VL人源化，接着使VH人源化。或者，可采用一步FR改组方法。已显示这种方法比两步筛选更有效，因为所得抗体表现出生物化学和物理化学性质的改进，包括增强的表达、增加的亲和力及热稳定性(参见例如Damschroder等人，2007，Mol.Immunol.44:3049-60)。
“人工程化(humaneering)”方法基于实验鉴定必需最小特异性决定簇(MSD)，并且基于将非人片段顺序地置换到人FR的文库当中并评估结合。其以非人VH和VL链的CDR3的区域开始，并且逐步将非人抗体的其它区域置换到人FR当中，包括VH和VL两者的CDR1和CDR2。这种方法通常导致表位保留和来自具有不同人V区段CDR的多个亚类的抗体的。人工程化允许分离与人种系基因抗体具有91-96％同源性的抗体(参见例如Alfenito，CambridgeHealthtech Institute’s Third Annual PEGS，The Protein Engineering Summit，2007)。
“人工程改造”方法涉及通过如下方式改变非人抗体或抗体片段，如小鼠或嵌合抗体或抗体片段：使抗体的氨基酸序列产生特定的变化，从而产生在人中免疫原性降低但仍然保留了原始非人抗体的理想结合性质的修饰抗体。一般地，该技术涉及将非人(例如，小鼠)抗体的氨基酸残基分类为“低风险”、“中等风险”或“高风险”残基。采用整体风险/奖励计算进行分类，所述计算评估进行特定取代(例如，关于人中的免疫原性)针对取代将影响所得抗体的折叠的风险所预测的益处。可通过将来自非人抗体的可变区的氨基酸序列与特定或共有人抗体序列的相应区域进行比对来选择要在非人(例如，小鼠)抗体序列的给定位置(例如，低或中等风险)处进行取代的特定人氨基酸残基。可根据比对以人抗体序列中的相应残基取代非人序列中的低或中等风险位置处的氨基酸残基。Studnicka等人，1994，Protein Engineering 7:805-14；第5,766,886、5,770,196、5,821,123和5,869,619号美国专利以及PCT公布WO 93/11794中更详细地描述了制备人工程改造蛋白质的技术。
5.3.1.5人抗体
可通过将选自人源性噬菌体展示文库的Fv克隆可变结构域序列与已知的人恒定结构域序列组合来构建药物制剂的人抗PD-1抗体。或者，可通过杂交瘤方法制备本公开的药物制剂的人单克隆抗PD-1抗体。例如，Kozbor，1984，J.Immunol.133:3001-05；Brodeur等人，Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications 51-63(1987)；和Boerner等人，1991，J.Immunol.147:86-95已经描述了用于产生人单克隆抗体的人骨髓瘤和小鼠-人异源骨髓瘤细胞系。
也有可能产生转基因动物(例如，小鼠)，其在免疫后能够在没有内源性免疫球蛋白产生的情况下产生人抗体的完全谱系。表达人抗体谱系的转基因小鼠已被用于产生针对广泛多种潜在药物靶标的高亲和力人序列单克隆抗体(参见例如Jakobovits，A.，1995，Curr.Opin.Biotechnol.6(5):561-66；Brüggemann和Taussing，1997，Curr.Opin.Biotechnol.8(4):455-58；第6,075,181和6,150,584号美国专利；以及Lonberg等人，2005，Nature Biotechnol.23:1117-25)。
或者，可经由人B淋巴细胞的永生化来制备人抗体，产生针对靶抗原的抗体(例如，这类B淋巴细胞可回收自个体，或者可已被体外免疫)(参见例如Cole等人，Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy(1985)；Boerner等人，1991，J.Immunol.147(1):86-95；和第5,750,373号美国专利)。
基因改组也可用于由非人(例如，啮齿动物)抗体获得人抗体，其中所述人抗体具有类似的亲和力和对起始非人抗体的特异性。根据这种方法(也称为“表位铭记(epitopeimprinting)”或“引导选择(guided selection)”)，通过如本文所述的噬菌体展示技术获得的非人抗体片段的重链或轻链可变区被人V结构域基因的谱系置换，产生非人链/人链scFv或Fab嵌合体的群体。用抗原进行选择导致非人链/人链嵌合scFv或Fab的分离，其中人链恢复在移除初级噬菌体展示克隆中的相应非人链后被破坏的抗原结合位点(例如，表位引导(铭记)人链配偶体的选择)。当重复该过程以便置换剩余的非人链时，获得人抗体(参见例如，PCT WO 93/06213；和Osbourn等人，2005，Methods 36:61-68)。与通过CDR移植进行的非人抗体的传统人源化不同，此技术提供没有非人起源的FR或CDR残基。引导选择以使小鼠抗体针对细胞表面抗原人源化的实例包括存在于卵巢癌细胞上的叶酸结合蛋白(参见例如Figini等人，1998，Cancer Res.58:991-96)和在肝细胞癌上高度表达的CD147(参见例如Bao等人，2005，Cancer Biol.Ther.4:1374-80)。
引导选择方法的潜在缺点是改组一个抗体链且同时保持另一个不变可能会导致表位漂移。为了维持由非人抗体识别的表位，可应用CDR保留(参见例如Klimka等人，2000，Br.J.Cancer.83:252-60；和Beiboer等人，2000，J.Mol.Biol.296:833-49)。在此方法中，通常保留非人VH CDR3，因为此CDR可能在抗原结合位点的中心，并且可能是抗体用于抗原识别的最重要区域。然而，在一些情况下，可以保留非人抗体的VH CDR3和VL CDR3以及VHCDR2、VL CDR2和VL CDR1。
5.3.1.6双特异性抗体
本文还提供包含双特异性抗体的药物制剂，所述双特异性抗体是对至少两种不同抗原具有结合特异性的单克隆抗体。在某些实施方案中，双特异性抗体是人抗体或人源化抗体。在某些实施方案中，结合特异性之一针对PD-1，而另一者针对任何其它抗原。在一些实施方案中，结合特异性之一针对PD-1，而另一者针对在表达PD-1的细胞上表达的别的表面抗原。在某些实施方案中，双特异性抗体可与PD-1的两个不同表位结合。双特异性抗体可被制备为全长抗体或抗体片段(例如，F(ab’)2双特异性抗体)。
制备双特异性抗体的方法是本领域中已知的，如通过两个免疫球蛋白重链-轻链对的共表达，其中两条重链具有不同的特异性(参见例如Milstein和Cuello，1983，Nature305:537-40)。关于产生双特异性抗体的进一步细节，参见例如Bispecific Antibodies(Kontermann编，2011)。
5.3.1.7多价抗体
通过表达抗体所结合的抗原的细胞，多价抗体可比二价抗体更快地内化(和/或分解代谢)。本公开的药物制剂的抗体可以是具有三个或更多个抗原结合位点的多价抗体(其不同于IgM类别)(例如，四价抗体)，其可很容易地通过编码抗体的多肽链的核酸的重组表达产生。多价抗体可包含二聚化结构域和三个或更多个抗原结合位点。在某些实施方案中，二聚化结构域包含Fc区或铰链区(或由其组成)。在这种情形下，抗体将包含Fc区和在Fc区的氨基末端的三个或更多个抗原结合位点。在某些实施方案中，多价抗体包含三至约八个抗原结合位点(或由其组成)。在一个这样的实施方案中，多价抗体包含四个抗原结合位点(或由其组成)。多价抗体包含至少一条多肽链(例如，两条多肽链)，其中多肽链包含两个或更多个可变结构域。例如，多肽链可包含VD1-(X1)n-VD2-(X2)n-Fc，其中VD1是第一可变结构域，VD2是第二可变结构域，Fc是Fc区的一条多肽链，X1和X2代表氨基酸或多肽，并且n是0或1。例如，多肽链可包含：VH-CH1-柔性接头-VH-CH1-Fc区链；或VH-CH1-VH-CH1-Fc区链。本文的多价抗体可进一步包含至少两个(例如，四个)轻链可变结构域多肽。本文的多价抗体可例如包含约两个至约八个轻链可变结构域多肽。本文涵盖的轻链可变结构域多肽包含轻链可变结构域，并且任选进一步包含CL结构域。
5.3.1.8 Fc工程改造
可取的是通过Fc工程改造修饰本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体。在某些实施方案中，对抗体的Fc区的修饰导致降低或消除抗体的效应功能。在某些实施方案中，效应功能是ADCC、ADCP和/或CDC。在一些实施方案中，效应功能是ADCC。在其它实施方案中，效应功能是ADCP。在其它实施方案中，效应功能是CDC。在一个实施方案中，效应功能是ADCC和ADCP。在一个实施方案中，效应功能是ADCC和CDC。在一个实施方案中，效应功能是ADCP和CDC。在一个实施方案中，效应功能是ADCC、ADCP和CDC。这可通过在抗体的Fc区中引入一个或多个氨基酸取代来实现。例如，显示采用位置233-236处的IgG2残基以及位置327、330和331处的IgG4残基取代进入人IgG1极大地降低ADCC和CDC(参见例如Armour等人，1999，Eur.J.Immunol.29(8):2613-24；和Shields等人，2001，J.Biol.Chem.276(9):6591-604)。在本文的别处提供了其它Fc变体。
为了延长药物制剂的抗体的血清半衰期，可例如将补救受体结合表位并入抗体(特别是抗体片段)当中，如第5,739,277号美国专利中所述。术语“补救受体结合表位”是指IgG分子(例如，IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)的Fc区的致使IgG分子的体内血清半衰期延长的表位。
5.3.1.9替代性结合剂
本公开涵盖包含非免疫球蛋白结合剂的药物制剂，所述非免疫球蛋白结合剂特异性结合与本文公开的抗PD-1抗体相同的表位。在一些实施方案中，非免疫球蛋白结合剂被鉴定为在竞争性结合测定中置换本公开的抗PD-1抗体或被本公开的抗PD-1抗体置换的剂。这些替代性结合剂可包括例如本领域中已知的任何工程改造蛋白质支架。这类支架可包含一个或多个如表1-2中所示的CDR。这类支架包括例如基于脂质运载蛋白支架的抗运载蛋白，这是一种蛋白质结构，其特征在于支撑形成配体结合位点的四个高变环的刚性β管。可通过环区域中的靶向随机诱变与功能性展示和引导选择相结合来设计新结合特异性(参见例如Skerra，2008，FEBS J.275:2677-83)。其它合适的支架可包括例如基于人纤连蛋白III的第十胞外结构域的adnectin或单体(monobody)(参见例如Koide和Koide，2007，MethodsMol.Biol.352:95-109)；基于葡萄球菌蛋白A的Z结构域的亲和体(参见例如Nygren等人，2008，FEBS J.275:2668-76)；基于锚蛋白重复蛋白的DARPin(参见例如Stumpp等人，2008，Drug.Discov.Today 13:695-701)；基于人Fyn蛋白激酶的SH3结构域的fynomer(参见例如Grabulovski等人，2007，J.Biol.Chem.282:3196-204)；基于来自硫化叶菌acidolarius的Sac7d的affitin(参见例如Krehenbrink等人，2008，J.Mol.Biol.383:1058-68)；基于人y-B-晶状体蛋白的affilin(参见例如Ebersbach等人，2007，J.Mol.Biol.372:172-85)；基于膜受体蛋白的A结构域的avimer(参见例如Silverman等人，2005，Biotechnol.23:1556-61)；富含半胱氨酸的打结素肽(参见例如Kolmar，2008，FEBS J.275:2684-90)；和工程改造的Kunitz型抑制剂(参见例如Nixon和Wood，2006，Curr.Opin.Drug.Discov.Dev.9:261-68)。关于综述，参见例如Gebauer和Skerra，2009，Curr.Opin.Chem.Biol.13:245-55。
5.3.2抗体变体
在一些实施方案中，涵盖对与PD-1结合或本文所述的抗体的氨基酸序列修饰。例如，可取的是改善抗体的结合亲和力和/或其它生物学性质，包括但不限于特异性、热稳定性、表达水平、效应功能、糖基化、降低的免疫原性或溶解度。因此，除了本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体之外，预期可制备抗PD-1抗体变体。例如，可通过将适当的核苷酸变化引入到编码DNA当中和/或通过合成所需的抗体或多肽来制备抗PD-1抗体变体。了解氨基酸变化的本领域技术人员可改变抗PD-1抗体的翻译后过程，如更改糖基化位点的数目或位置，或者改变膜锚定特征。
在一些实施方案中，例如通过使任何类型的分子与抗体共价连接来化学修饰本文提供的药物制剂的抗体。抗体衍生物可包括已例如通过如下方式经化学修饰的抗体：通过已知的保护/阻断基团增加或减少糖基化、乙酰化、聚乙二醇化、磷酸化、酰胺化、衍生化；化学裂解；蛋白水解裂解；与细胞配体或其它蛋白质连接等。另外，抗体可含有一种或多种非经典氨基酸。
变化可以是编码抗体或多肽的一个或多个密码子的取代、缺失或插入，其导致与天然序列抗体或多肽相比，氨基酸序列发生变化。氨基酸取代可以是将一种氨基酸置换为具有类似结构和/或化学性质的另一种氨基酸的结果，如将亮氨酸置换为丝氨酸，例如保守性氨基酸置换。插入或缺失可任选在约1至5个氨基酸的范围内。在某些实施方案中，取代、缺失或插入包括相对于原始分子少于25个氨基酸的取代、少于20个氨基酸的取代、少于15个氨基酸的取代、少于10个氨基酸的取代、少于5个氨基酸的取代、少于4个氨基酸的取代、少于3个氨基酸的取代或少于2个氨基酸的取代。在具体的实施方案中，取代是在一个或多个预测非必需氨基酸残基处进行的保守性氨基酸取代。可通过在序列中系统地进行氨基酸的插入、缺失或取代并测试所得变体由全长或成熟天然序列表现出的活性来确定允许的变化。
氨基酸序列插入物包括长度在一个残基至含有一百个或更多残基的多肽范围内的氨基末端和/或羧基末端融合物以及单个或多个氨基酸残基的序列内插入物。末端插入物的实例包括具有N末端甲硫氨酰基残基的抗体。抗体分子的其它插入性变体包括抗体的N或C末端与酶的融合物(例如，用于抗体导向酶前药疗法)或延长抗体的血清半衰期的多肽。
通过选择取代来实现抗体的生物学性质的实质性改变，所述取代在其对维持以下各项的作用方面显著不同：(a)取代的区域中的多肽骨架的结构，例如呈片层或螺旋构象，(b)分子在靶位点处的电荷或疏水性，或(c)侧链的体积。或者，可进行保守性(例如，在具有类似性质和/或侧链的氨基酸组内)取代，以便维持或不显著改变性质。氨基酸可根据其侧链性质的相似性来进行分组(参见例如Lehninger，Biochemistry 73-75(第2版，1975))：(1)非极性：Ala(A)、Val(V)、Leu(L)、Ile(I)、Pro(P)、Phe(F)、Trp(W)、Met(M)；(2)不带电极性：Gly(G)、Ser(S)、Thr(T)、Cys(C)、Tyr(Y)、Asn(N)、Gln(Q)；(3)酸性：Asp(D)、Glu(E)；和(4)碱性：Lys(K)、Arg(R)、His(H)。
或者，可基于常见的侧链性质将天然存在的残基分成组：(1)疏水：正亮氨酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile；(2)中性亲水：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；(3)酸性：Asp、Glu；(4)碱性：His、Lys、Arg；(5)影响链取向的残基：Gly、Pro；和(6)芳香性：Trp、Tyr、Phe。
非保守性取代需要将这些类别中的一者的成员交换为另一类别。这类取代残基也可被引入保守性取代位点或引入剩余的(非保守)位点。因此，在一个实施方案中，与PD-1表位结合的抗体或其片段包含与本文提供的药物制剂的鼠单克隆抗体的氨基酸序列具有至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，与PD-1表位结合的抗体或其片段包含与表1-6中所示的氨基酸序列具有至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％同一性的氨基酸序列。在又一实施方案中，与PD-1表位结合的抗体或其片段包含与表2中所示的VH CDR氨基酸序列和/或表1中所示的VL CDR氨基酸序列具有至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％同一性的VH CDR和/或VL CDR氨基酸序列。可采用本领域中已知的方法进行变异，如寡核苷酸介导的(定点)诱变、丙氨酸扫描和PCR诱变。可对克隆DNA进行定点诱变(参见例如Carter，1986，Biochem J.237:1-7；和Zoller等人，1982，Nucl.Acids Res.10:6487-500)、盒式诱变(参见例如Wells等人，1985，Gene 34:315-23)或其它已知的技术以产生抗PD-1抗体变体DNA。
不参与维持抗PD-1抗体的适当构象的任何半胱氨酸残基也可以被取代，例如被取代为另一种氨基酸，如丙氨酸或丝氨酸，以提高分子的氧化稳定性并防止异常交联。相反，可将半胱氨酸键添加到抗PD-1抗体中以提高其稳定性(例如，其中抗体是抗体片段，如Fv片段)。
在一些实施方案中，本公开的药物制剂的抗PD-1抗体分子是“去免疫化”抗体。“去免疫化”抗PD-1抗体是来源于人源化或嵌合抗PD-1抗体的抗体，其在其氨基酸序列中有一个或多个改变，导致与相应的原始非去免疫化抗体相比，抗体的免疫原性降低。产生这类抗体突变体的程序之一涉及确认和移除抗体分子的T细胞表位。在第一步中，可通过若干方法来确定抗体分子的免疫原性，例如通过体外测定T细胞表位或经由电脑模拟预测这类表位，如本领域中已知的那样。一旦鉴定T细胞表位功能的关键残基，就可进行突变以消除免疫原性并保留抗体活性。关于综述，参见例如Jones等人，2009，Methods in Molecular Biology525:405-23。
5.3.2.1体外亲和力成熟
在一些实施方案中，可通过体外亲和力成熟来制备本文提供的药物制剂的相比于亲本抗体具有改进的性质(如亲和力、稳定性或表达水平)的抗体变体。如同天然原型一样，体外亲和力成熟基于突变和选择的原理。抗体的文库在生物体(例如，噬菌体、细菌、酵母或哺乳动物细胞)上展示为Fab、scFv或V结构域片段，或与它们的编码mRNA或DNA缔合(例如，共价或非共价)展示。展示抗体的亲和力选择允许分离携带编码抗体的遗传信息的生物体或复合体。采用诸如噬菌体展示的展示方法进行两轮或三轮突变和选择通常产生亲和力在低纳摩尔范围内的抗体片段。亲和力成熟抗体对靶抗原可具有纳摩尔或甚至皮摩尔的亲和力。
噬菌体展示是用于展示和选择抗体的普遍方法。抗体在Fd或M13噬菌体的表面上被展示为与噬菌体外壳蛋白的融合物。选择涉及暴露于抗原以允许噬菌体展示抗体结合其靶标，该过程被称为“淘选”。结合于抗原的噬菌体被回收并用于感染细菌以产生用于进一步轮次选择的噬菌体。关于综述，参见例如Hoogenboom，2002，Methods.Mol.Biol.178:1-37；以及Bradbury和Marks，2004，J.Immunol.Methods 290:29-49。
在酵母展示系统(参见例如Boder等人，1997，Nat.Biotech.15:553-57；和Chao等人，2006，Nat.Protocols 1:755-68)中，抗体可被展示为单链可变融合物(scFv)，其中重链和轻链通过柔性接头连接。scFv与通过同Aga1p的二硫键与酵母细胞壁连接的酵母凝集素蛋白Aga2p的粘附亚基融合。借助Aga2p展示蛋白质使蛋白质远离细胞表面突出，从而使与酵母细胞壁上的其它分子的可能的相互作用最小化。采用磁性分离和流式细胞术来筛选文库以选择亲和力或稳定性改善的抗体。通过用生物素化抗原和二级试剂如与荧光团缀合的链霉亲和素标记酵母来确定与所关注的可溶性抗原的结合。可通过对在scFv侧翼的血球凝集素或c-Myc表位标签进行免疫荧光标记来测量抗体的表面表达的变化。已显示表达与展示蛋白质的稳定性相关联，因此可选择稳定性以及亲和力改善的抗体(参见例如Shusta等人，1999，J.Mol.Biol.292:949-56)。酵母展示的另外的优点是展示蛋白质在真核酵母细胞的内质网中是折叠的，从而利用了内质网分子伴侣和质量控制机制。一旦成熟完成，即可在展示于酵母的表面上的同时方便地进行抗体亲和力的“滴定”，从而消除对每一克隆进行表达和纯化的需求。酵母表面展示的理论局限性是功能文库大小可能比其它展示方法的小；然而，新近的方法利用酵母细胞的交配系统来创建估计大小有1014的组合多样性(参见例如美国专利公布2003/0186374；和Blaise等人，2004，Gene 342:211-18)。
在核糖体展示中，产生抗体-核糖体-mRNA(ARM)复合物用于在无细胞系统中进行选择。使编码特定抗体文库的DNA文库与缺少终止密码子的间隔序列遗传融合。当被翻译时，此间隔序列仍附接于肽基tRNA并占据核糖体隧道，且因此允许所关注的蛋白质突出核糖体并折叠。所得mRNA、核糖体和蛋白质的复合物可与表面结合的配体结合，从而允许通过用配体进行亲和捕获来同时分离抗体及其编码mRNA。然后将核糖体结合的mRNA逆转录返回到cDNA当中，其然后可经历诱变并用于下一轮选择(参见例如Fukuda等人，2006，NucleicAcids Res.34:e127)。在mRNA展示中，使用嘌呤霉素作为衔接分子建立抗体与mRNA之间的共价键(Wilson等人，2001，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 98:3750-55)。
由于这些方法是完全在体外进行的，因此它们提供了优于其它选择技术的两个主要优点。首先，文库的多样性不受细菌细胞的转化效率的限制，而仅受试管中存在的核糖体及不同的mRNA分子数量的限制。其次，在每轮选择后可以很容易地引入随机突变，例如通过非校正聚合酶，因为在任何多样化步骤之后不必转化文库。
在哺乳动物细胞展示系统(参见例如Bowers等人，2011，Proc Natl Acad SciUSA.108:20455-60)中，基于与预先重组的D(J)区连接的种系序列V基因区段构建完全人IgG文库。将重链和轻链的全长V区与人重链和轻链恒定区一起组装并转染到哺乳动物细胞系(例如，HEK293)当中。扩增转染的文库并使其经受针对链霉亲和素(SA)偶联磁珠的数轮负选择，接着进行一轮针对涂有生物素化靶蛋白、肽片段或表位的SA偶联磁珠的阳性选择。将阳性选择的细胞扩增，然后通过若干轮FACS进行分选以分离展示与靶蛋白、肽片段或表位特异性结合的抗体的单细胞克隆。将来自这些单细胞克隆的重链和轻链对用AID再转染以进行进一步成熟。数轮哺乳动物细胞展示结合AID触发的体细胞超突变产生高特异性、高亲和力抗体。
也可按靶向方式或借助随机引入来向抗体文库的CDR或全部V基因当中引入多样性。前一种方法包括借助高水平或低水平诱变顺序地靶向抗体的所有CDR，或者靶向体细胞超突变的弧立热点(参见例如Ho等人，2005，J.Biol.Chem.280:607-17)或基于实验或结构原因怀疑影响亲和力的残基。在具体的实施方案中，体细胞超突变是通过AID触发的体细胞超突变进行的，例如使用SHM-XELTM平台(AnaptysBio，San Diego，CA)。可利用大肠杆菌增变株、用DNA聚合酶进行的易错复制(参见例如Hawkins等人，1992，J.Mol.Biol.226:889-96)或RNA复制酶在整个全部V基因当中引入随机突变。也可通过借助DNA改组或类似技术置换天然多样化的区域来引入多样性(参见例如Lu等人，2003，J.Biol.Chem.278:43496-507；第5,565,332和6,989,250号美国专利)。替代性技术靶向延伸到框架区残基当中的高变环(参见例如Bond等人，2005，J.Mol.Biol.348:699-709)，采用在CDR中进行的环缺失和插入，或者利用基于杂交的多样化(参见例如第2004/0005709号美国专利公布)。在CDR中产生多样性的另外的方法例如公开在第7,985,840号美国专利中。可用于产生抗体文库和/或抗体亲和力成熟的进一步的方法公开在例如第8,685,897和8,603,930号美国专利以及第2014/0170705、2014/0094392、2012/0028301、2011/0183855和2009/0075378号美国专利公布中，上述每一者以引用的方式并入本文。
可通过本领域中已知的各种技术来完成文库的筛选。例如，可将PD-1固定在固体载体、柱、针或纤维素/聚(偏二氟乙烯)膜/其它滤膜上，在贴附于吸附板或用于细胞分选的宿主细胞上表达，或与生物素缀合用于以链霉亲和素包被珠粒进行捕获，或用于淘选展示文库的任何其它方法。
关于体外亲和力成熟方法的综述，参见例如Hoogenboom，2005，NatureBiotechnology 23:1105-16；Quiroz和Sinclair，2010，Revista Ingeneria Biomedia 4:39-51；以及其中的参考文献。
5.3.2.2抗PD-1抗体的修饰
本公开的范围内包括本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体的共价修饰。共价修饰包括使抗PD-1抗体的靶向氨基酸残基与有机衍生剂反应，所述有机衍生剂能够与抗PD-1抗体的选定侧链或N或C末端残基反应。其它修饰包括分别使谷氨酰胺酰基和天冬酰胺酰基脱酰胺基成相应的谷氨酰基和天冬氨酰基残基，使脯氨酸和赖氨酸羟基化，使丝氨酰基或苏氨酰基残基的羟基磷酸化，使赖氨酸、精氨酸和组氨酸侧链的α-氨基甲基化(参见例如Creighton，Proteins:Structure and Molecular Properties 79-86(1983))，使N末端胺乙酰化，以及使任何C末端羧基酰胺化。
包括在本公开的范围内的抗PD-1抗体的其它类型的共价修饰包括改变抗体或多肽的天然糖基化模式(参见例如Beck等人，2008，Curr.Pharm.Biotechnol.9:482-501；和Walsh，2010，Drug Discov.Today 15:773-80)，以及以例如第4,640,835、4,496,689、4,301,144、4,670,417、4,791,192或4,179,337号美国专利中阐述的方式使抗体与多种非蛋白质聚合物例如聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇或聚氧化烯中的一者连接。
也可修饰本公开的药物制剂的抗PD-1抗体以形成包含与另一种异源多肽或氨基酸序列(例如，表位标签)融合的抗PD-1抗体的嵌合分子(参见例如Terpe，2003，Appl.Microbiol.Biotechnol.60:523-33)或IgG分子的Fc区(参见例如Aruffo，Antibody Fusion Proteins 221-42(Chamow和Ashkenazi编，1999))。
本文还提供了包含本文提供的药物制剂的与PD-1抗原结合的抗体和异源多肽的融合蛋白。在一些实施方案中，抗体所融合的异源多肽适用于将抗体靶向具有细胞表面表达的PD-1的细胞。
本文还提供了与PD-1抗原结合的抗体组。在具体的实施方案中，抗体组具有不同的缔合速率、不同的解离速率、对PD-1抗原不同的亲和力和/或对PD-1抗原不同的特异性。在一些实施方案中，所述组包含以下或由以下组成：约10、约25、约50、约75、约100、约125、约150、约175、约200、约250、约300、约350、约400、约450、约500、约550、约600、约650、约700、约750、约800、约850、约900、约950或约1000个抗体或更多。可例如在96孔或384孔板中使用抗体组，用于诸如ELISA的测定。
5.3.3抗PD-1抗体的制备
可通过培养用含有抗PD-1抗体编码核酸的载体转化或转染的细胞来产生本文提供的药物制剂的抗PD-1抗体。可采用标准重组技术获得编码本公开的抗体的多肽组分的多核苷酸序列。可从产生抗体的细胞如杂交瘤细胞中分离所需的多核苷酸序列并进行测序。或者，可利用核苷酸合成仪或PCR技术合成多核苷酸。一旦获得，就将编码多肽的序列插入到能够在宿主细胞中复制并表达异源多核苷酸的重组载体当中。本领域中可用且已知的许多载体可用于本公开的目的。适当载体的选择将主要取决于要插入到载体当中的核酸的大小以及要用载体转化的特定宿主细胞。适合表达本公开的抗体的宿主细胞包括原核生物如古细菌和真细菌，包括革兰氏阴性或革兰氏阳性生物体；真核微生物如丝状真菌或酵母；无脊椎动物细胞如昆虫或植物细胞；以及脊椎动物细胞如哺乳动物宿主细胞系。将宿主细胞用上述表达载体转化，并在适当修饰的常规营养培养基中进行培养，用于诱导启动子、选择转化子或扩增编码所需序列的基因。采用如本领域中已知的标准蛋白质纯化方法纯化由宿主细胞产生的抗体。
以下文献中进一步描述了包括载体构建、表达和纯化的抗体产生方法：Plückthun等人，Antibody Engineering:Producing antibodies in Escherichia coli:From PCR to fermentation 203-52(McCafferty等人编，1996)；Kwong和Rader，E.coli Expressionand Purification of Fab Antibody Fragments，见于Current Protocols in Protein Science(2009)；Tachibana和Takekoshi，Production of Antibody Fab Fragments inEscherischia coli，见于Antibody Expression and Production(Al-Rubeai编，2011)；和Therapeutic Monoclonal Antibodies:From Bench to Clinic(An编，2009)。
当然，预期可采用本领域中熟知的替代方法来制备抗PD-1抗体。例如，可通过采用固相技术进行直接肽合成来产生适当的氨基酸序列或其部分(参见例如Stewart等人，Solid-Phase Peptide Synthesis(1969)；和Merrifield，1963，J.Am.Chem.Soc.85:2149-54)。可采用手动技术或通过自动化进行体外蛋白质合成。可单独地化学合成抗PD-1抗体的各部分，并采用化学或酶促方法进行组合，以产生所需的抗PD-1抗体。或者，可如在例如第5,545,807和5,827,690号美国专利中公开的那样，由经工程改造以表达抗体的转基因动物的细胞或体液(如乳汁)纯化抗体。
5.3.4免疫缀合物
本公开还提供包含缀合物的药物制剂，所述缀合物包含本公开的抗PD-1抗体中的任一者，其通过合成接头共价结合于一种或多种非抗体剂。
在一些实施方案中，使本文提供的药物制剂的抗体例如与诊断分子或可检测分子缀合或重组融合。缀合或重组融合的抗体可用于例如监测或预测PD-1介导的疾病的发作、发展、进展和/或严重性。
可例如通过使抗体与可检测物质偶联来实现这类诊断和检测，所述可检测物质包括但不限于各种酶，如但不限于辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或乙酰胆碱酯酶；辅基，如但不限于链霉亲和素/生物素或亲和素/生物素；荧光物质，如但不限于伞形酮、荧光素、异硫氰酸荧光素、罗丹明、二氯三嗪基胺荧光素、丹磺酰氯或藻红素；发光物质，如但不限于鲁米诺；生物发光物质，如但不限于荧光素酶、荧光素或水母素；化学发光物质，如但不限于基于吖啶鎓的化合物或HALOTAG；放射性物质，如但不限于碘(131I、125I、123I和121I,)、碳(14C)、硫(35S)、氚(3H)、铟(115In、113In、112In和111In)、锝(99Tc)、铊(201Ti)、镓(68Ga和67Ga)、钯(103Pd)、钼(99Mo)、氙(133Xe)、氟(18F)、153Sm、177Lu、159Gd、149Pm、140La、175Yb、166Ho、90Y、47Sc、186Re、188Re、142Pr、105Rh、97Ru、68Ge、57Co、65Zn、85Sr、32P、153Gd、169Yb、51Cr、54Mn、75Se、113Sn或117Sn；使用各种正电子发射断层扫描的正电子发射金属；以及非放射性顺磁金属离子。
本文还提供了与异源蛋白质或多肽(或其片段，例如与约10、约20、约30、约40、约50、约60、约70、约80、约90或约100个氨基酸的多肽)重组融合或化学缀合(共价或非共价缀合)以产生融合蛋白的抗体以及它们的用途。特别地，本文提供了包含本文提供的药物制剂的抗体的抗原结合片段(例如，Fab片段、Fc片段、Fv片段、F(ab)2片段、VH结构域、VH CDR、VL结构域或VL CDR)和异源蛋白质、多肽或肽的融合蛋白。在一个实施方案中，抗体所融合的异源蛋白质、多肽或肽可用于将抗体靶向特定的细胞类型，如表达PD-1的细胞。例如，可使与由特定细胞类型表达的细胞表面受体结合的抗体与本文提供的药物制剂的修饰抗体融合或缀合。
此外，可使本文提供的药物制剂的抗体与标记或“标签”序列(如肽)融合以利于纯化。在具体的实施方案中，标记或标签氨基酸序列是六组氨酸肽，如pQE载体中提供的标签(参见例如，QIAGEN，Inc.)等等，其中的许多是市售的。例如，如Gentz等人，1989，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86:821-24中所述，六组氨酸提供对融合蛋白的方便纯化。适用于纯化的其它肽标签包括但不限于对应于源自流感血球凝集素蛋白的表位的血球凝集素(“HA”)标签(Wilson等人，1984，Cell 37:767-78)以及“FLAG”标签。
使部分(包括多肽)与抗体融合或缀合的方法是已知的(参见例如Arnon等人，Monoclonal Antibodies for Immunotargeting of Drugs in Cancer Therapy，见于Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy 243-56(Reisfeld等人编，1985)；Hellstrom等人，Antibodies for Drug Delivery，见于Controlled Drug Delivery 623-53(Robinson等人编，第2版，1987)；Thorpe，Antibody Carriers of Cytotoxic Agents inCancer Therapy:A Review，见于Monoclonal Antibodies:Biological and Clinical Applications 475-506(Pinchera等人编，1985)；Analysis,Results,and FutureProspective of the Therapeutic Use of Radiolabeled Antibody in CancerTherapy，见于Monoclonal Antibodies for Cancer Detection and Therapy 303-16(Baldwin等人编，1985)；Thorpe等人，1982，Immunol.Rev.62:119-58；第5,336,603、5,622,929、5,359,046、5,349,053、5,447,851、5,723,125、5,783,181、5,908,626、5,844,095和5,112,946号美国专利；EP 307,434；EP 367,166；EP 394,827；PCT公布WO 91/06570、WO 96/04388、WO 96/22024、WO 97/34631和WO 99/04813；Ashkenazi等人，1991，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,88:10535-39；Traunecker等人，1988，Nature，331:84-86；Zheng等人，1995，J.Immunol.154:5590-600；以及Vil等人，1992，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89:11337-41)。
可例如通过基因改组、基序改组、外显子改组和/或密码子改组(统称为“DNA改组”)的技术产生融合蛋白。DNA改组可用于改变本文提供的抗PD-1抗体(包括例如具有较高亲和力和较低解离速率的抗体)的活性(参见例如，第5,605,793、5,811,238、5,830,721、5,834,252和5,837,458号美国专利；Patten等人，1997，Curr.Opinion Biotechnol.8:724-33；Harayama，1998，Trends Biotechnol.16(2):76-82；Hansson等人，1999，J.Mol.Biol.287:265-76；以及Lorenzo和Blasco，1998，Biotechniques 24(2):308-13)。抗体或编码的抗体可通过在重组之前通过易错PCR、随机核苷酸插入或其它方法经受随机诱变而改变。可使编码本文提供的药物制剂的抗体的多核苷酸与一种或多种异源分子的一个或多个组分、基序、节段、部分、结构域、片段等重组。
也可使本文提供的药物制剂的抗体与第二抗体缀合以形成如在例如第4,676,980号美国专利中所述的抗体异源缀合物。
也可使如本文提供的与PD-1结合的抗体附接于特别适用于免疫测定或靶抗原纯化的固体载体。这类固体载体包括但不限于玻璃、纤维素、聚丙烯酰胺、尼龙、聚苯乙烯、聚氯乙烯或聚丙烯。
接头可以是有助于释放细胞中缀合的剂的“可裂解接头”，但本文也涵盖不可裂解的接头。用于本公开的缀合物的接头包括但不限于酸不稳定性接头(例如，腙接头)、含二硫键的接头、肽酶敏感性接头(例如，包含氨基酸的肽接头，例如包含缬氨酸和/或瓜氨酸，如瓜氨酸-缬氨酸或苯丙氨酸-赖氨酸)、光不稳定性接头、二甲基接头(参见例如Chari等人，1992，Cancer Res.52:127-31；和第5,208,020号美国专利)、硫醚接头或设计成规避多药物转运蛋白介导的抗性的亲水性接头(参见例如Kovtun等人，2010，Cancer Res.70:2528-37)。
可使用多种双功能蛋白偶联剂制备抗体和剂的缀合物，如使用BMPS、EMCS、GMBS、HBVS、LC-SMCC、MBS、MPBH、SBAP、SIA、SIAB、SMCC、SMPB、SMPH、磺基-EMCS、磺基-GMBS、磺基-KMUS、磺基-MBS、磺基-SIAB、磺基-SMCC、磺基-SMPB和SVSB(琥珀酰亚胺基-(4-乙烯基砜)苯甲酸酯)。本公开进一步预期可采用如本领域中公开的任意合适的方法制备抗体和剂的缀合物(参见例如，Bioconjugate Techniques(Hermanson编，第2版，2008))。
用于抗体和剂的常规缀合策略基于涉及Lys残基的ε-氨基或Cys残基的硫醇基团的随机缀合化学，其产生异源缀合物。新近开发的技术允许与抗体进行位点特异性缀合，导致均匀加载并避免抗原结合或药代动力学改变的缀合物亚群。这些包括“thiomab”的工程改造，所述thiomab在重链和轻链上的位置处的半胱氨酸取代，其提供反应性硫醇基团并且不破坏免疫球蛋白折叠和组装或改变抗原结合(参见例如Junutula等人，2008，J.Immunol.Meth.332:41-52；和Junutula等人，2008，Nature Biotechnol.26:925-32)。在另一种方法中，通过将终止密码子UGA从终止重新编码到硒代半胱氨酸插入来将硒代半胱氨酸以共翻译方式插入到抗体序列当中，从而允许在其它天然氨基酸存在下在硒代半胱氨酸的亲核硒醇基团处进行位点特异性共价缀合(参见例如Hofer等人，2008，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 105:12451-56；和Hofer等人，2009，Biochemistry 48(50):12047-57)。
5.4抗体和组合物的使用方法
本文提供了在受试者中(a)减弱T细胞活性和/或(b)下调PD-1表达的方法。在某些实施方案中，本文提供的方法下调受试者的细胞中的PD-1表达。在某些实施方案中，本文提供的方法减弱受试者中的T细胞活性。T细胞活性的非限制性实例有细胞因子的分泌。在某些实施方案中，本文提供了抑制细胞因子的分泌的方法。在某些实施方案中，所述细胞因子选自IL-1、IL-2、IL-6、IL-12、IL-17、IL-22、IL-23、GM-CSF、IFN-γ和TNF-α。在一些实施方案中，所述细胞因子是IL-2、IL-17、IFN-γ或其任意组合。在某些实施方案中，所述细胞因子是IL-2。在其它实施方案中，所述细胞因子是IL-17。还在其它实施方案中，所述细胞因子是IFN-γ。在某些实施方案中，所述细胞因子是IL-2和IL-17。在一些实施方案中，所述细胞因子是IL-2和IFN-γ。还在其它实施方案中，所述细胞因子是IL-17和IFN-γ。仍在其它实施方案中，所述细胞因子是IL-2、IL-17和IFN-γ。在某些实施方案中，所述细胞因子是IL-1。在其它实施方案中，所述细胞因子是IL-6。还在其它实施方案中，所述细胞因子是IL-12。仍在其它实施方案中，所述细胞因子是IL-22。在某些实施方案中，所述细胞因子是IL-23。在一些实施方案中，所述细胞因子是GM-CSF。在其它实施方案中，所述细胞因子是TNF-α。还涵盖上面提到的细胞因子中的两种、三种或更多种的其它组合。
在一个实施方案中，本文提供了抑制IL-2的分泌的方法。在一些实施方案中，本文提供了抑制IL-17的分泌的方法。在又一实施方案中，减弱T细胞活性的方法是抑制IFN-γ的分泌的方法。
在一方面，本文提供了减弱T细胞的活性的方法，包括使T细胞与有效量的本文提供的药物制剂的抗体或其抗原结合片段接触。在其它实施方案中，T细胞活性的最大减弱百分比为至少约10％。在另一实施方案中，T细胞活性的最大减弱百分比为至少约20％。在一些实施方案中，T细胞活性的最大减弱百分比为至少约30％。在一个实施方案中，T细胞活性的最大减弱百分比为至少约40％。在另一实施方案中，T细胞活性的最大减弱百分比为至少约45％。在其它实施方案中，T细胞活性的最大减弱百分比为至少约50％。在一个实施方案中，T细胞活性的最大减弱百分比为至少约55％。在另一实施方案中，T细胞活性的最大减弱百分比为至少约60％。在一些实施方案中，T细胞活性的最大减弱百分比为至少约65％。在其它实施方案中，T细胞活性的最大减弱百分比为至少约70％。在另一实施方案中，T细胞活性的最大减弱百分比为至少约75％。在一个实施方案中，T细胞活性的最大减弱百分比为至少约80％。在其它实施方案中，T细胞活性的最大减弱百分比为至少约85％。在另一实施方案中，T细胞活性的最大减弱百分比为至少约90％。在一个实施方案中，T细胞活性的最大减弱百分比为至少约95％。在一些实施方案中，T细胞活性的最大减弱百分比为至少约100％。
在一些实施方案中，通过细胞因子产生的调节来度量T细胞活性的减弱。在一些实施方案中，通过细胞因子分泌的调节来度量T细胞活性的减弱。在一些实施方案中，通过细胞因子表达的调节来度量T细胞活性的减弱。在一些实施方案中，通过细胞因子产生的抑制来度量T细胞活性的减弱。在一些实施方案中，通过细胞因子分泌的抑制来度量T细胞活性的减弱。在一些实施方案中，通过细胞因子表达的抑制来度量T细胞活性的减弱。在某些实施方案中，细胞因子产生(例如，细胞因子蛋白质产生)被调节。在某些实施方案中，细胞因子分泌(例如，细胞因子蛋白质分泌)被调节。在其它实施方案中，细胞因子表达(例如，细胞因子基因表达)被调节。在一些实施方案中，调节是细胞因子的减少、抑制或下调。在其它实施方案中，调节是细胞因子的增加或上调。在某些实施方案中，细胞因子产生(例如，细胞因子蛋白质产生)被抑制。在某些实施方案中，细胞因子分泌(例如，细胞因子蛋白质分泌)被抑制。在其它实施方案中，细胞因子表达(例如，细胞因子基因表达)被抑制。在某些实施方案中，来自细胞的细胞因子产生被调节。在某些实施方案中，来自细胞的细胞因子分泌被调节。在某些实施方案中，来自细胞的细胞因子表达被调节。在某些实施方案中，来自细胞的细胞因子产生被抑制。在某些实施方案中，来自细胞的细胞因子分泌被抑制。在某些实施方案中，来自细胞的细胞因子表达被抑制。在某些实施方案中，所述细胞是T细胞。在一些实施方案中，所述细胞不是T细胞。
在一些实施方案中，所述细胞因子选自IL-2、IL-17、IFN-γ或其任意组合。在一个实施方案中，所述细胞因子是IL-2。在另一实施方案中，所述细胞因子是IL-17。在其它实施方案中，所述细胞因子是IFN-γ。在一些实施方案中，所述细胞因子是IL-2和IL-17。在一些实施方案中，所述细胞因子是IL-2和IFN-γ。在其它实施方案中，所述细胞因子是IL-17和IFN-γ。在某些实施方案中，所述细胞因子是IL-2、IL-17和IFN-γ。在某些实施方案中，所述细胞因子选自IL-1、IL-2、IL-6、IL-12、IL-17、IL-22、IL-23、GM-CSF、IFN-γ和TNF-α。在某些实施方案中，所述细胞因子是IL-1。在其它实施方案中，所述细胞因子是IL-6。还在其它实施方案中，所述细胞因子是IL-12。仍在其它实施方案中，所述细胞因子是IL-22。在某些实施方案中，所述细胞因子是IL-23。在一些实施方案中，所述细胞因子是GM-CSF。在其它实施方案中，所述细胞因子是TNF-α。还涵盖上面提到的细胞因子中的两种、三种或更多种的其它组合。
在一些实施方案中，细胞因子产生的抑制是与T细胞的表面上的PD-1表达的下调同时的。在一些实施方案中，细胞因子产生的抑制之前是T细胞的表面上的PD-1表达的下调。在一些实施方案中，细胞因子产生的抑制先于T细胞的表面上的PD-1表达的下调。在一个实施方案中，T细胞的表面上的PD-1表达的下调早在与抗体或其抗原结合片段接触后4小时发生。
在一方面，本文提供了调节细胞中的PD-1活性和/或表达的方法，包括使细胞与如本文提供的与PD-1特异性结合的抗体接触。在具体的实施方案中，所述细胞是T细胞。在某些实施方案中，使细胞与有效量的如本文所述的抗体或其抗原结合片段接触。在一个实施方案中，调节PD-1活性。在另一实施方案中，调节PD-1表达。在其它实施方案中，调节PD-1活性和PD-1表达两者。在一个实施方案中，活化PD-1信号传导。在另一实施方案中，抑制PD-1表达。在某些实施方案中，所述抗体是PD-1激动剂。在某些实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与人PD-1特异性结合，并且活化(例如，部分地活化)或以其它方式调节至少一种PD-1活性。在具体的实施方案中，至少一种PD-1活性是细胞因子产生的抑制。在某些实施方案中，与PD-1特异性结合的抗体与人PD-1的ECD或其人PD-1的ECD的表位结合。在某些实施方案中，所述抗体与人PD-1的ECD的不同于PD-L1结合位点的表位特异性结合。在某些实施方案中，所述抗体与人PD-1的ECD的不同于PD-L2结合位点的表位特异性结合。在某些实施方案中，所述抗体与人PD-1的ECD的不同于PD-L1和PD-L2结合位点两者的表位特异性结合。在某些实施方案中，PD-L1与PD-1的结合不被所述抗体抑制。在其它实施方案中，PD-L2与PD-1的结合不被所述抗体抑制。在具体的实施方案中，PD-L1与PD-1的结合及PD-L2与PD-1的结合都不被所述抗体抑制。
在另一方面，本文提供了下调细胞中的PD-1表达的方法，包括使细胞与如本文提供的与PD-1特异性结合的抗体接触。在具体的实施方案中，所述细胞是T细胞。在某些实施方案中，使细胞与有效量的本文所述的抗体或其抗原结合片段接触。在某些实施方案中，所述抗体是本文提供的PD-1激动剂。在某些实施方案中，所述抗体与人PD-1的ECD的不同于PD-L1结合位点的表位特异性结合。在某些实施方案中，所述抗体与人PD-1的ECD的不同于PD-L2结合位点的表位特异性结合。在某些实施方案中，所述抗体与人PD-1的ECD的不同于PD-L1和PD-L2结合位点两者的表位特异性结合。在某些实施方案中，PD-L1与PD-1的结合不被所述抗体抑制。在其它实施方案中，PD-L2与PD-1的结合不被所述抗体抑制。在具体的实施方案中，PD-L1与PD-1的结合及PD-L2与PD-1的结合都不被所述抗体抑制。
在另一方面，本文提供了减弱T细胞活性并下调细胞中的PD-1表达的方法，包括使细胞与如本文提供的与PD-1特异性结合的抗体接触。在具体的实施方案中，所述细胞是T细胞。在某些实施方案中，使细胞与有效量的如本文所述的抗体或其抗原结合片段接触。在某些实施方案中，T细胞活性的减弱是细胞因子产生的抑制。在某些实施方案中，所述抗体与人PD-1的ECD的不同于PD-L1结合位点的表位特异性结合。在某些实施方案中，所述抗体与人PD-1的ECD的不同于PD-L2结合位点的表位特异性结合。在某些实施方案中，所述抗体与人PD-1的ECD的不同于PD-L1和PD-L2结合位点两者的表位特异性结合。在某些实施方案中，PD-L1与PD-1的结合不被所述抗体抑制。在其它实施方案中，PD-L2与PD-1的结合不被所述抗体抑制。在具体的实施方案中，PD-L1与PD-1的结合及PD-L2与PD-1的结合都不被所述抗体抑制。
PD-1活性可涉及PD-1的任何活性，如本领域中已知或描述的那些。PD-1活性和PD-1信号传导在本文中可互换使用。在某些方面，PD-1活性由PD-1配体(例如，PD-L1)与PD-1的结合诱导。可通过本文所述的方法或本领域技术人员已知的方法(例如，免疫印迹、ELISA、免疫组织化学或流式细胞术)评估PD-1的表达水平。
本文还提供了抑制细胞中的细胞因子产生的方法，包括使细胞与如本文提供的与PD-1(例如，人PD-1的ECD或人PD-1的ECD的表位)特异性结合的抗体接触。在具体的实施方案中，所述细胞是T细胞。在某些实施方案中，使细胞与有效量的如本文所述的抗体或其抗原结合片段接触。在一些实施方案中，所述抗体与人PD-1的ECD结合。在一些实施方案中，所述抗体与人PD-1的ECD的表位结合。在某些实施方案中，所述抗体与人PD-1的ECD的不同于PD-L1结合位点的表位特异性结合。在某些实施方案中，所述抗体与人PD-1的ECD的不同于PD-L2结合位点的表位特异性结合。在某些实施方案中，所述抗体与人PD-1的ECD的不同于PD-L1和PD-L2结合位点两者的表位特异性结合。在某些实施方案中，PD-L1与PD-1的结合不被所述抗体抑制。在其它实施方案中，PD-L2与PD-1的结合不被所述抗体抑制。在具体的实施方案中，PD-L1与PD-1的结合及PD-L2与PD-1的结合都不被所述抗体抑制。
本文还提供了活化细胞中的PD-1信号传导的方法，包括使细胞与如本文提供的与PD-1(例如，人PD-1的ECD或人PD-1的ECD的表位)特异性结合的抗体接触。在具体的实施方案中，所述细胞是T细胞。在某些实施方案中，使细胞与有效量的如本文所述的抗体或其抗原结合片段接触。在一些实施方案中，所述抗体与人PD-1的ECD结合。在一些实施方案中，所述抗体与人PD-1的ECD的表位结合。在某些实施方案中，所述抗体与人PD-1的ECD的不同于PD-L1结合位点的表位特异性结合。在某些实施方案中，所述抗体与人PD-1的ECD的不同于PD-L2结合位点的表位特异性结合。在某些实施方案中，所述抗体与人PD-1的ECD的不同于PD-L1和PD-L2结合位点两者的表位特异性结合。在某些实施方案中，PD-L1与PD-1的结合不被所述抗体抑制。在其它实施方案中，PD-L2与PD-1的结合不被所述抗体抑制。在具体的实施方案中，PD-L1与PD-1的结合及PD-L2与PD-1的结合都不被所述抗体抑制。在一个实施方案中，PD-1信号传导被部分地活化。
在一方面，本文提供了减弱T细胞活性的方法，包括使细胞与如本文提供的与PD-1(例如，人PD-1的ECD或人PD-1的ECD的表位)特异性结合的抗体接触。在具体的实施方案中，所述细胞是T细胞。在某些实施方案中，使细胞与有效量的如本文所述的抗体或其抗原结合片段接触。在一些实施方案中，所述抗体与人PD-1的ECD结合。在一些实施方案中，所述抗体与人PD-1的ECD的表位结合。在某些实施方案中，所述抗体与人PD-1的ECD的不同于PD-L1结合位点的表位特异性结合。在某些实施方案中，所述抗体与人PD-1的ECD的不同于PD-L2结合位点的表位特异性结合。在某些实施方案中，所述抗体与人PD-1的ECD的不同于PD-L1和PD-L2结合位点两者的表位特异性结合。在某些实施方案中，PD-L1与PD-1的结合不被所述抗体抑制。在其它实施方案中，PD-L2与PD-1的结合不被所述抗体抑制。在具体的实施方案中，PD-L1与PD-1的结合及PD-L2与PD-1的结合都不被所述抗体抑制。在一些实施方案中，T细胞活性减弱至少约10％。在一些实施方案中，T细胞活性减弱至少约15％。在一些实施方案中，T细胞活性减弱至少约20％。在一些实施方案中，T细胞活性减弱至少约25％。在一些实施方案中，T细胞活性减弱至少约30％。在一些实施方案中，T细胞活性减弱至少约35％。在一些实施方案中，T细胞活性减弱至少约40％。在一些实施方案中，T细胞活性减弱至少约45％。在一些实施方案中，T细胞活性减弱至少约50％。在一些实施方案中，T细胞活性减弱至少约55％。在一些实施方案中，T细胞活性减弱至少约60％。在一些实施方案中，T细胞活性减弱至少约65％。在一些实施方案中，T细胞活性减弱至少约70％。在一些实施方案中，T细胞活性减弱至少约75％。在一些实施方案中，T细胞活性减弱至少约80％。在一些实施方案中，T细胞活性减弱至少约85％。在一些实施方案中，T细胞活性减弱至少约90％。在一些实施方案中，T细胞活性减弱至少约95％。在一些实施方案中，T细胞活性减弱至少约98％。在一些实施方案中，T细胞活性减弱至少约99％。在一些实施方案中，T细胞活性减弱至少约100％。在某些实施方案中，T细胞活性减弱至少约25％至约65％。在具体的实施方案中，通过本文所述的方法评估T细胞活性减弱。在一些实施方案中，通过本领域技术人员已知的方法评估T细胞活性减弱。在某些实施方案中，T细胞活性减弱是相对于不与抗PD-1抗体接触的细胞中的T细胞活性。在某些实施方案中，T细胞活性减弱是相对于与无关抗体(例如，不与PD-1特异性结合的抗体)接触的T细胞活性。
T细胞活性的非限制性实例有细胞因子的分泌。在某些实施方案中，所述细胞因子选自IL-1、IL-2、IL-6、IL-12、IL-17、IL-22、IL-23、GM-CSF、IFN-γ和TNF-α。在一些实施方案中，所述细胞因子是IL-2、IL-17、IFN-γ或其任意组合。在某些实施方案中，所述细胞因子是IL-2。在其它实施方案中，所述细胞因子是IL-17。还在其它实施方案中，所述细胞因子是IFN-γ。在某些实施方案中，所述细胞因子是IL-2和IL-17。在一些实施方案中，所述细胞因子是IL-2和IFN-γ。还在其它实施方案中，所述细胞因子是IL-17和IFN-γ。仍在其它实施方案中，所述细胞因子是IL-2、IL-17和IFN-γ。在某些实施方案中，所述细胞因子是IL-1。在其它实施方案中，所述细胞因子是IL-6。还在其它实施方案中，所述细胞因子是IL-12。仍在其它实施方案中，所述细胞因子是IL-22。在某些实施方案中，所述细胞因子是IL-23。在一些实施方案中，所述细胞因子是GM-CSF。在其它实施方案中，所述细胞因子是TNF-α。还涵盖上面提到的细胞因子中的两种、三种或更多种的其它组合。
在某些实施方案中，细胞因子分泌由于细胞因子产生的抑制而被抑制。在其它实施方案中，细胞因子分泌由于细胞因子表达的抑制而被抑制。
在具体的实施方案中，本文提供了抑制来自细胞的细胞因子分泌的方法，包括使细胞与如本文提供的与PD-1(例如，人PD-1的ECD或人PD-1的ECD的表位)特异性结合的抗体接触。在具体的实施方案中，所述细胞是T细胞。在某些实施方案中，使细胞与有效量的本文所述的抗体或其抗原结合片段接触。在某些实施方案中，所述抗体是抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者或其抗原结合片段或包含抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者的CDR的抗体。在某些实施方案中，所述细胞因子选自IL-1、IL-2、IL-6、IL-12、IL-17、IL-22、IL-23、GM-CSF、IFN-γ和TNF-α。在一些实施方案中，所述细胞因子是IL-2、IL-17、IFN-γ或其任意组合。在某些实施方案中，所述细胞因子是IL-2。在其它实施方案中，所述细胞因子是IL-17。还在其它实施方案中，所述细胞因子是IFN-γ。在某些实施方案中，所述细胞因子是IL-2和IL-17。在一些实施方案中，所述细胞因子是IL-2和IFN-γ。还在其它实施方案中，所述细胞因子是IL-17和IFN-γ。仍在其它实施方案中，所述细胞因子是IL-2、IL-17和IFN-γ。在某些实施方案中，所述细胞因子是IL-1。在其它实施方案中，所述细胞因子是IL-6。还在其它实施方案中，所述细胞因子是IL-12。仍在其它实施方案中，所述细胞因子是IL-22。在某些实施方案中，所述细胞因子是IL-23。在一些实施方案中，所述细胞因子是GM-CSF。在其它实施方案中，所述细胞因子是TNF-α。还涵盖上面提到的细胞因子中的两种、三种或更多种的其它组合。
在一些实施方案中，本文提供了抑制来自细胞的IL-2分泌的方法，包括使细胞与如本文提供的与PD-1(例如，人PD-1的ECD或人PD-1的ECD的表位)特异性结合的抗体接触。在具体的实施方案中，所述细胞是T细胞。在某些实施方案中，使细胞与有效量的本文所述的抗体或其抗原结合片段接触。在某些实施方案中，所述抗体是抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者或其抗原结合片段或包含抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者的CDR的抗体。
在一个实施方案中，IL-2分泌被抑制至少约5％。在一些实施方案中，IL-2分泌被抑制至少约10％。在另一实施方案中，IL-2分泌被抑制至少约15％。在其它实施方案中，IL-2分泌被抑制至少约20％。在一个实施方案中，IL-2分泌被抑制至少约25％。在另一实施方案中，IL-2分泌被抑制至少约30％。在一些实施方案中，IL-2分泌被抑制至少约35％。在一个实施方案中，IL-2分泌被抑制至少约40％。在另一实施方案中，IL-2分泌被抑制至少约45％。在其它实施方案中，IL-2分泌被抑制至少约50％。在一些实施方案中，IL-2分泌被抑制至少约55％。在另一实施方案中，IL-2分泌被抑制至少约60％。在一个实施方案中，IL-2分泌被抑制至少约65％。在一个实施方案中，IL-2分泌被抑制至少约70％。在另一实施方案中，IL-2分泌被抑制至少约75％。在一些实施方案中，IL-2分泌被抑制至少约80％。在其它实施方案中，IL-2分泌被抑制至少约85％。在另一实施方案中，IL-2分泌被抑制至少约90％。在一个实施方案中，IL-2分泌被抑制至少约95％。在一些实施方案中，IL-2分泌被抑制至少约98％。在另一实施方案中，IL-2分泌被抑制至少约99％。在具体的实施方案中，IL-2分泌被抑制至少约25％或35％，任选约75％。在一些实施方案中，通过本文所述的方法评估IL-2分泌的抑制。在其它实施方案中，通过本领域技术人员已知的方法(例如，MSD多重测定)评估IL-2分泌的抑制。在具体的实施方案中，相对于来自不与抗PD-1抗体接触的细胞的IL-2分泌，IL-2分泌受到抑制。在其它实施方案中，相对于来自与无关抗体(例如，不与PD-1特异性结合的抗体)接触的细胞的IL-2分泌，IL-2分泌受到抑制。
在某些实施方案中，IL-2分泌以至多约50nM的EC50被抑制。在其它实施方案中，IL-2分泌以至多约40nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-2分泌以至多约30nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，IL-2分泌以至多约20nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-2分泌以至多约10nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-2分泌以至多约5nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-2分泌以至多约1nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，IL-2分泌以至多约0.75nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-2分泌以至多约0.5nM的EC50被抑制。在其它实施方案中，IL-2分泌以至多约0.1nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-2分泌以至多约0.05nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-2分泌以至多约0.01nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，IL-2分泌以至多约0.005nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-2分泌以至多约0.001nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-2分泌以至少约50nM的EC50被抑制。在其它实施方案中，IL-2分泌以至少约40nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，IL-2分泌以至少约30nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-2分泌以至少约20nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-2分泌以至少约10nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-2分泌以至少约5nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-2分泌以至少约1nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，IL-2分泌以至少约0.75nM的EC50被抑制。在其它实施方案中，IL-2分泌以至少约0.5nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-2分泌以至少约0.1nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-2分泌以至少约0.05nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，IL-2分泌以至少约0.01nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-2分泌以至少约0.005nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-2分泌以至少约0.001nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，通过本文所述的方法评估EC50。在其它实施方案中，通过本领域技术人员已知的方法(例如，MSD多重测定)评估EC50。在具体的实施方案中，相对于来自不与抗PD-1抗体接触的细胞的IL-2分泌，IL-2分泌受到抑制。在其它实施方案中，相对于来自与无关抗体(例如，不与PD-1特异性结合的抗体)接触的细胞的IL-2分泌，IL-2分泌受到抑制。
在一些实施方案中，本文提供了抑制来自细胞的IL-17分泌的方法，包括使细胞与如本文提供的与PD-1(例如，人PD-1的ECD或人PD-1的ECD的表位)特异性结合的抗体接触。在具体的实施方案中，所述细胞是T细胞。在某些实施方案中，使细胞与有效量的本文所述的抗体或其抗原结合片段接触。在某些实施方案中，所述抗体是抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者或其抗原结合片段或包含抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者的CDR的抗体。
在一个实施方案中，IL-17分泌被抑制至少约5％。在一些实施方案中，IL-17分泌被抑制至少约10％。在另一实施方案中，IL-17分泌被抑制至少约15％。在其它实施方案中，IL-17分泌被抑制至少约20％。在一个实施方案中，IL-17分泌被抑制至少约25％。在另一实施方案中，IL-17分泌被抑制至少约30％。在一些实施方案中，IL-17分泌被抑制至少约35％。在一个实施方案中，IL-17分泌被抑制至少约40％。在另一实施方案中，IL-17分泌被抑制至少约45％。在其它实施方案中，IL-17分泌被抑制至少约50％。在一些实施方案中，IL-17分泌被抑制至少约55％。在另一实施方案中，IL-17分泌被抑制至少约60％。在一个实施方案中，IL-17分泌被抑制至少约65％。在一个实施方案中，IL-17分泌被抑制至少约70％。在另一实施方案中，IL-17分泌被抑制至少约75％。在一些实施方案中，IL-17分泌被抑制至少约80％。在其它实施方案中，IL-17分泌被抑制至少约85％。在另一实施方案中，IL-17分泌被抑制至少约90％。在一个实施方案中，IL-17分泌被抑制至少约95％。在一些实施方案中，IL-17分泌被抑制至少约98％。在另一实施方案中，IL-17分泌被抑制至少约99％。在具体的实施方案中，IL-17分泌被抑制至少约25％或35％，任选约75％。在一些实施方案中，通过本文所述的方法评估IL-17分泌的抑制。在其它实施方案中，通过本领域技术人员已知的方法(例如，MSD多重测定)评估IL-17分泌的抑制。在具体的实施方案中，相对于来自不与抗PD-1抗体接触的细胞的IL-17分泌，IL-17分泌受到抑制。在其它实施方案中，相对于与无关抗体(例如，不与PD-1特异性结合的抗体)接触的细胞中的IL-17分泌，IL-17分泌受到抑制。
在某些实施方案中，IL-17分泌以至多约50nM的EC50被抑制。在其它实施方案中，IL-17分泌以至多约40nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-17分泌以至多约30nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，IL-17分泌以至多约20nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-17分泌以至多约10nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-17分泌以至多约5nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-17分泌以至多约1nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，IL-17分泌以至多约0.75nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-17分泌以至多约0.5nM的EC50被抑制。在其它实施方案中，IL-17分泌以至多约0.1nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-17分泌以至多约0.05nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-17分泌以至多约0.01nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，IL-17分泌以至多约0.005nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-17分泌以至多约0.001nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-17分泌以至少约50nM的EC50被抑制。在其它实施方案中，IL-17分泌以至少约40nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，IL-17分泌以至少约30nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-17分泌以至少约20nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-17分泌以至少约10nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-17分泌以至少约5nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-17分泌以至少约1nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，IL-17分泌以至少约0.75nM的EC50被抑制。在其它实施方案中，IL-17分泌以至少约0.5nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-17分泌以至少约0.1nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-17分泌以至少约0.05nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，IL-17分泌以至少约0.01nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-17分泌以至少约0.005nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-17分泌以至少约0.001nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，通过本文所述的方法评估EC50。在其它实施方案中，通过本领域技术人员已知的方法(例如，MSD多重测定)评估EC50。在具体的实施方案中，相对于来自不与抗PD-1抗体接触的细胞的IL-17分泌，IL-17分泌受到抑制。在其它实施方案中，相对于来自与无关抗体(例如，不与PD-1特异性结合的抗体)接触的细胞的IL-17分泌，IL-17分泌受到抑制。
在一些实施方案中，本文提供了抑制来自细胞的IFN-γ分泌的方法，包括使细胞与如本文提供的与PD-1(例如，人PD-1的ECD或人PD-1的ECD的表位)特异性结合的抗体接触。在具体的实施方案中，所述细胞是T细胞。在某些实施方案中，使细胞与有效量的本文所述的抗体或其抗原结合片段接触。在某些实施方案中，所述抗体是抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者或其抗原结合片段或包含抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者的CDR的抗体。
在一个实施方案中，IFN-γ分泌被抑制至少约5％。在一些实施方案中，IFN-γ分泌被抑制至少约10％。在另一实施方案中，IFN-γ分泌被抑制至少约15％。在其它实施方案中，IFN-γ分泌被抑制至少约20％。在一个实施方案中，IFN-γ分泌被抑制至少约25％。在另一实施方案中，IFN-γ分泌被抑制至少约30％。在一些实施方案中，IFN-γ分泌被抑制至少约35％。在一个实施方案中，IFN-γ分泌被抑制至少约40％。在另一实施方案中，IFN-γ分泌被抑制至少约45％。在其它实施方案中，IFN-γ分泌被抑制至少约50％。在一些实施方案中，IFN-γ分泌被抑制至少约55％。在另一实施方案中，IFN-γ分泌被抑制至少约60％。在一个实施方案中，IFN-γ分泌被抑制至少约65％。在一个实施方案中，IFN-γ分泌被抑制至少约70％。在另一实施方案中，IFN-γ分泌被抑制至少约75％。在一些实施方案中，IFN-γ分泌被抑制至少约80％。在其它实施方案中，IFN-γ分泌被抑制至少约85％。在另一实施方案中，IFN-γ分泌被抑制至少约90％。在一个实施方案中，IFN-γ分泌被抑制至少约95％。在一些实施方案中，IFN-γ分泌被抑制至少约98％。在另一实施方案中，IFN-γ分泌被抑制至少约99％。在具体的实施方案中，IFN-γ分泌被抑制至少约25％或35％，任选约75％。在一些实施方案中，通过本文所述的方法评估IFN-γ分泌的抑制。在其它实施方案中，通过本领域技术人员已知的方法(例如，MSD多重测定)评估IFN-γ分泌的抑制。在具体的实施方案中，相对于来自不与抗PD-1抗体接触的细胞的IFN-γ分泌，IFN-γ分泌受到抑制。在其它实施方案中，相对于来自与无关抗体(例如，不与PD-1特异性结合的抗体)接触的细胞的IFN-γ分泌，IFN-γ分泌受到抑制。
在某些实施方案中，IFN-γ分泌以至多约50nM的EC50被抑制。在其它实施方案中，IFN-γ分泌以至多约40nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IFN-γ分泌以至多约30nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，IFN-γ分泌以至多约20nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IFN-γ分泌以至多约10nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IFN-γ分泌以至多约5nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IFN-γ分泌以至多约1nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，IFN-γ分泌以至多约0.75nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IFN-γ分泌以至多约0.5nM的EC50被抑制。在其它实施方案中，IFN-γ分泌以至多约0.1nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IFN-γ分泌以至多约0.05nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IFN-γ分泌以至多约0.01nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，IFN-γ分泌以至多约0.005nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IFN-γ分泌以至多约0.001nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IFN-γ分泌以至少约50nM的EC50被抑制。在其它实施方案中，IFN-γ分泌以至少约40nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，IFN-γ分泌以至少约30nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IFN-γ分泌以至少约20nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IFN-γ分泌以至少约10nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IFN-γ分泌以至少约5nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IFN-γ分泌以至少约1nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，IFN-γ分泌以至少约0.75nM的EC50被抑制。在其它实施方案中，IFN-γ分泌以至少约0.5nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IFN-γ分泌以至少约0.1nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IFN-γ分泌以至少约0.05nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，IFN-γ分泌以至少约0.01nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IFN-γ分泌以至少约0.005nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IFN-γ分泌以至少约0.001nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，通过本文所述的方法评估EC50。在其它实施方案中，通过本领域技术人员已知的方法(例如，MSD多重测定)评估EC50。在具体的实施方案中，相对于来自不与抗PD-1抗体接触的细胞的IFN-γ分泌，IFN-γ分泌受到抑制。在其它实施方案中，相对于来自与无关抗体(例如，不与PD-1特异性结合的抗体)接触的细胞的IFN-γ分泌，IFN-γ分泌受到抑制。
在一些实施方案中，本文提供了抑制来自细胞的IL-1分泌的方法，包括使细胞与如本文提供的与PD-1(例如，人PD-1的ECD或人PD-1的ECD的表位)特异性结合的抗体接触。在具体的实施方案中，所述细胞是T细胞。在某些实施方案中，使细胞与有效量的本文所述的抗体或其抗原结合片段接触。在某些实施方案中，所述抗体是抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者或其抗原结合片段或包含抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者的CDR的抗体。
在一个实施方案中，IL-1分泌被抑制至少约5％。在一些实施方案中，IL-1分泌被抑制至少约10％。在另一实施方案中，IL-1分泌被抑制至少约15％。在其它实施方案中，IL-1分泌被抑制至少约20％。在一个实施方案中，IL-1分泌被抑制至少约25％。在另一实施方案中，IL-1分泌被抑制至少约30％。在一些实施方案中，IL-1分泌被抑制至少约35％。在一个实施方案中，IL-1分泌被抑制至少约40％。在另一实施方案中，IL-1分泌被抑制至少约45％。在其它实施方案中，IL-1分泌被抑制至少约50％。在一些实施方案中，IL-1分泌被抑制至少约55％。在另一实施方案中，IL-1分泌被抑制至少约60％。在一个实施方案中，IL-1分泌被抑制至少约65％。在一个实施方案中，IL-1分泌被抑制至少约70％。在另一实施方案中，IL-1分泌被抑制至少约75％。在一些实施方案中，IL-1分泌被抑制至少约80％。在其它实施方案中，IL-1分泌被抑制至少约85％。在另一实施方案中，IL-1分泌被抑制至少约90％。在一个实施方案中，IL-1分泌被抑制至少约95％。在一些实施方案中，IL-1分泌被抑制至少约98％。在另一实施方案中，IL-1分泌被抑制至少约99％。在具体的实施方案中，IL-1分泌被抑制至少约25％或35％，任选约75％。在一些实施方案中，通过本文所述的方法评估IL-1分泌的抑制。在其它实施方案中，通过本领域技术人员已知的方法(例如，MSD多重测定)评估IL-1分泌的抑制。在具体的实施方案中，相对于来自不与抗PD-1抗体接触的细胞的IL-1分泌，IL-1分泌受到抑制。在其它实施方案中，相对于来自与无关抗体(例如，不与PD-1特异性结合的抗体)接触的细胞的IL-1分泌，IL-1分泌受到抑制。
在某些实施方案中，IL-1分泌以至多约50nM的EC50被抑制。在其它实施方案中，IL-1分泌以至多约40nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-1分泌以至多约30nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，IL-1分泌以至多约20nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-1分泌以至多约10nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-1分泌以至多约5nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-1分泌以至多约1nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，IL-1分泌以至多约0.75nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-1分泌以至多约0.5nM的EC50被抑制。在其它实施方案中，IL-1分泌以至多约0.1nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-1分泌以至多约0.05nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-1分泌以至多约0.01nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，IL-1分泌以至多约0.005nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-1分泌以至多约0.001nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-1分泌以至少约50nM的EC50被抑制。在其它实施方案中，IL-1分泌以至少约40nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，IL-1分泌以至少约30nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-1分泌以至少约20nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-1分泌以至少约10nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-1分泌以至少约5nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-1分泌以至少约1nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，IL-1分泌以至少约0.75nM的EC50被抑制。在其它实施方案中，IL-1分泌以至少约0.5nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-1分泌以至少约0.1nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-1分泌以至少约0.05nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，IL-1分泌以至少约0.01nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-1分泌以至少约0.005nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-1分泌以至少约0.001nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，通过本文所述的方法评估EC50。在其它实施方案中，通过本领域技术人员已知的方法(例如，MSD多重测定)评估EC50。在具体的实施方案中，相对于来自不与抗PD-1抗体接触的细胞的IL-1分泌，IL-1分泌受到抑制。在其它实施方案中，相对于来自与无关抗体(例如，不与PD-1特异性结合的抗体)接触的细胞的IL-1分泌，IL-1分泌受到抑制。
在一些实施方案中，本文提供了抑制来自细胞的IL-6分泌的方法，包括使细胞与如本文提供的与PD-1(例如，人PD-1的ECD或人PD-1的ECD的表位)特异性结合的抗体接触。在具体的实施方案中，所述细胞是T细胞。在某些实施方案中，使细胞与有效量的本文所述的抗体或其抗原结合片段接触。在某些实施方案中，所述抗体是抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者或其抗原结合片段或包含抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者的CDR的抗体。
在一个实施方案中，IL-6分泌被抑制至少约5％。在一些实施方案中，IL-6分泌被抑制至少约10％。在另一实施方案中，IL-6分泌被抑制至少约15％。在其它实施方案中，IL-6分泌被抑制至少约20％。在一个实施方案中，IL-6分泌被抑制至少约25％。在另一实施方案中，IL-6分泌被抑制至少约30％。在一些实施方案中，IL-6分泌被抑制至少约35％。在一个实施方案中，IL-6分泌被抑制至少约40％。在另一实施方案中，IL-6分泌被抑制至少约45％。在其它实施方案中，IL-6分泌被抑制至少约50％。在一些实施方案中，IL-6分泌被抑制至少约55％。在另一实施方案中，IL-6分泌被抑制至少约60％。在一个实施方案中，IL-6分泌被抑制至少约65％。在一个实施方案中，IL-6分泌被抑制至少约70％。在另一实施方案中，IL-6分泌被抑制至少约75％。在一些实施方案中，IL-6分泌被抑制至少约80％。在其它实施方案中，IL-6分泌被抑制至少约85％。在另一实施方案中，IL-6分泌被抑制至少约90％。在一个实施方案中，IL-6分泌被抑制至少约95％。在一些实施方案中，IL-6分泌被抑制至少约98％。在另一实施方案中，IL-6分泌被抑制至少约99％。在具体的实施方案中，IL-6分泌被抑制至少约25％或35％，任选约75％。在一些实施方案中，通过本文所述的方法评估IL-6分泌的抑制。在其它实施方案中，通过本领域技术人员已知的方法(例如，MesoScaleTM Discovery(MSD)多重测定)评估IL-6分泌的抑制。在具体的实施方案中，相对于来自不与抗PD-1抗体接触的细胞的IL-6分泌，IL-6分泌受到抑制。在其它实施方案中，相对于来自与无关抗体(例如，不与PD-1特异性结合的抗体)接触的细胞的IL-6分泌，IL-6分泌受到抑制。
在某些实施方案中，IL-6分泌以至多约50nM的EC50被抑制。在其它实施方案中，IL-6分泌以至多约40nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-6分泌以至多约30nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，IL-6分泌以至多约20nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-6分泌以至多约10nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-6分泌以至多约5nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-6分泌以至多约1nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，IL-6分泌以至多约0.75nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-6分泌以至多约0.5nM的EC50被抑制。在其它实施方案中，IL-6分泌以至多约0.1nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-6分泌以至多约0.05nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-6分泌以至多约0.01nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，IL-6分泌以至多约0.005nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-6分泌以至多约0.001nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-6分泌以至少约50nM的EC50被抑制。在其它实施方案中，IL-6分泌以至少约40nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，IL-6分泌以至少约30nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-6分泌以至少约20nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-6分泌以至少约10nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-6分泌以至少约5nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-6分泌以至少约1nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，IL-6分泌以至少约0.75nM的EC50被抑制。在其它实施方案中，IL-6分泌以至少约0.5nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-6分泌以至少约0.1nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-6分泌以至少约0.05nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，IL-6分泌以至少约0.01nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-6分泌以至少约0.005nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-6分泌以至少约0.001nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，通过本文所述的方法评估EC50。在其它实施方案中，通过本领域技术人员已知的方法(例如，MSD多重测定)评估EC50。在具体的实施方案中，相对于来自不与抗PD-1抗体接触的细胞的IL-6分泌，IL-6分泌受到抑制。在其它实施方案中，相对于来自与无关抗体(例如，不与PD-1特异性结合的抗体)接触的细胞的IL-6分泌，IL-6分泌受到抑制。
在一些实施方案中，本文提供了抑制来自细胞的IL-12分泌的方法，包括使细胞与如本文提供的与PD-1(例如，人PD-1的ECD或人PD-1的ECD的表位)特异性结合的抗体接触。在具体的实施方案中，所述细胞是T细胞。在某些实施方案中，使细胞与有效量的本文所述的抗体或其抗原结合片段接触。在某些实施方案中，所述抗体是抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者或其抗原结合片段或包含抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者的CDR的抗体。
在一个实施方案中，IL-12分泌被抑制至少约5％。在一些实施方案中，IL-12分泌被抑制至少约10％。在另一实施方案中，IL-12分泌被抑制至少约15％。在其它实施方案中，IL-12分泌被抑制至少约20％。在一个实施方案中，IL-12分泌被抑制至少约25％。在另一实施方案中，IL-12分泌被抑制至少约30％。在一些实施方案中，IL-12分泌被抑制至少约35％。在一个实施方案中，IL-12分泌被抑制至少约40％。在另一实施方案中，IL-12分泌被抑制至少约45％。在其它实施方案中，IL-12分泌被抑制至少约50％。在一些实施方案中，IL-12分泌被抑制至少约55％。在另一实施方案中，IL-12分泌被抑制至少约60％。在一个实施方案中，IL-12分泌被抑制至少约65％。在一个实施方案中，IL-12分泌被抑制至少约70％。在另一实施方案中，IL-12分泌被抑制至少约75％。在一些实施方案中，IL-12分泌被抑制至少约80％。在其它实施方案中，IL-12分泌被抑制至少约85％。在另一实施方案中，IL-12分泌被抑制至少约90％。在一个实施方案中，IL-12分泌被抑制至少约95％。在一些实施方案中，IL-12分泌被抑制至少约98％。在另一实施方案中，IL-12分泌被抑制至少约99％。在具体的实施方案中，IL-12分泌被抑制至少约25％或35％，任选约75％。在一些实施方案中，通过本文所述的方法评估IL-12分泌的抑制。在其它实施方案中，通过本领域技术人员已知的方法(例如，MSD多重测定)评估IL-12分泌的抑制。在具体的实施方案中，相对于来自不与抗PD-1抗体接触的细胞的IL-12分泌，IL-12分泌受到抑制。在其它实施方案中，相对于与无关抗体(例如，不与PD-1特异性结合的抗体)接触的细胞中的IL-12分泌，IL-12分泌受到抑制。
在某些实施方案中，IL-12分泌以至多约50nM的EC50被抑制。在其它实施方案中，IL-12分泌以至多约40nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-12分泌以至多约30nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，IL-12分泌以至多约20nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-12分泌以至多约10nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-12分泌以至多约5nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-12分泌以至多约1nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，IL-12分泌以至多约0.75nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-12分泌以至多约0.5nM的EC50被抑制。在其它实施方案中，IL-12分泌以至多约0.1nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-12分泌以至多约0.05nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-12分泌以至多约0.01nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，IL-12分泌以至多约0.005nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-12分泌以至多约0.001nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-12分泌以至少约50nM的EC50被抑制。在其它实施方案中，IL-12分泌以至少约40nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，IL-12分泌以至少约30nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-12分泌以至少约20nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-12分泌以至少约10nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-12分泌以至少约5nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-12分泌以至少约1nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，IL-12分泌以至少约0.75nM的EC50被抑制。在其它实施方案中，IL-12分泌以至少约0.5nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-12分泌以至少约0.1nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-12分泌以至少约0.05nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，IL-12分泌以至少约0.01nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-12分泌以至少约0.005nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-12分泌以至少约0.001nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，通过本文所述的方法评估EC50。在其它实施方案中，通过本领域技术人员已知的方法(例如，MSD多重测定)评估EC50。在具体的实施方案中，相对于来自不与抗PD-1抗体接触的细胞的IL-12分泌，IL-12分泌受到抑制。在其它实施方案中，相对于与无关抗体(例如，不与PD-1特异性结合的抗体)接触的细胞中的IL-12分泌，IL-12分泌受到抑制。
在一些实施方案中，本文提供了抑制来自细胞的IL-22分泌的方法，包括使细胞与如本文提供的与PD-1(例如，人PD-1的ECD或人PD-1的ECD的表位)特异性结合的抗体接触。在具体的实施方案中，所述细胞是T细胞。在某些实施方案中，使细胞与有效量的本文所述的抗体或其抗原结合片段接触。在某些实施方案中，所述抗体是抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者或其抗原结合片段或包含抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者的CDR的抗体。
在一个实施方案中，IL-22分泌被抑制至少约5％。在一些实施方案中，IL-22分泌被抑制至少约10％。在另一实施方案中，IL-22分泌被抑制至少约15％。在其它实施方案中，IL-22分泌被抑制至少约20％。在一个实施方案中，IL-22分泌被抑制至少约25％。在另一实施方案中，IL-22分泌被抑制至少约30％。在一些实施方案中，IL-22分泌被抑制至少约35％。在一个实施方案中，IL-22分泌被抑制至少约40％。在另一实施方案中，IL-22分泌被抑制至少约45％。在其它实施方案中，IL-22分泌被抑制至少约50％。在一些实施方案中，IL-22分泌被抑制至少约55％。在另一实施方案中，IL-22分泌被抑制至少约60％。在一个实施方案中，IL-22分泌被抑制至少约65％。在一个实施方案中，IL-22分泌被抑制至少约70％。在另一实施方案中，IL-22分泌被抑制至少约75％。在一些实施方案中，IL-22分泌被抑制至少约80％。在其它实施方案中，IL-22分泌被抑制至少约85％。在另一实施方案中，IL-22分泌被抑制至少约90％。在一个实施方案中，IL-22分泌被抑制至少约95％。在一些实施方案中，IL-22分泌被抑制至少约98％。在另一实施方案中，IL-22分泌被抑制至少约99％。在具体的实施方案中，IL-22分泌被抑制至少约25％或35％，任选约75％。在一些实施方案中，通过本文所述的方法评估IL-22分泌的抑制。在其它实施方案中，通过本领域技术人员已知的方法(例如，MSD多重测定)评估IL-22分泌的抑制。在具体的实施方案中，相对于来自不与抗PD-1抗体接触的细胞的IL-22分泌，IL-22分泌受到抑制。在其它实施方案中，相对于来自与无关抗体(例如，不与PD-1特异性结合的抗体)接触的细胞的IL-22分泌，IL-22分泌受到抑制。
在某些实施方案中，IL-22分泌以至多约50nM的EC50被抑制。在其它实施方案中，IL-22分泌以至多约40nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-22分泌以至多约30nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，IL-22分泌以至多约20nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-22分泌以至多约10nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-22分泌以至多约5nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-22分泌以至多约1nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，IL-22分泌以至多约0.75nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-22分泌以至多约0.5nM的EC50被抑制。在其它实施方案中，IL-22分泌以至多约0.1nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-22分泌以至多约0.05nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-22分泌以至多约0.01nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，IL-22分泌以至多约0.005nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-22分泌以至多约0.001nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-22分泌以至少约50nM的EC50被抑制。在其它实施方案中，IL-22分泌以至少约40nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，IL-22分泌以至少约30nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-22分泌以至少约20nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-22分泌以至少约10nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-22分泌以至少约5nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-22分泌以至少约1nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，IL-22分泌以至少约0.75nM的EC50被抑制。在其它实施方案中，IL-22分泌以至少约0.5nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-22分泌以至少约0.1nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-22分泌以至少约0.05nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，IL-22分泌以至少约0.01nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-22分泌以至少约0.005nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-22分泌以至少约0.001nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，通过本文所述的方法评估EC50。在其它实施方案中，通过本领域技术人员已知的方法(例如，MSD多重测定)评估EC50。在具体的实施方案中，相对于来自不与抗PD-1抗体接触的细胞的IL-22分泌，IL-22分泌受到抑制。在其它实施方案中，相对于来自与无关抗体(例如，不与PD-1特异性结合的抗体)接触的细胞的IL-22分泌，IL-22分泌受到抑制。
在一些实施方案中，本文提供了抑制来自细胞的IL-23分泌的方法，包括使细胞与如本文提供的与PD-1(例如，人PD-1的ECD或人PD-1的ECD的表位)特异性结合的抗体接触。在具体的实施方案中，所述细胞是T细胞。在某些实施方案中，使细胞与有效量的本文所述的抗体或其抗原结合片段接触。在某些实施方案中，所述抗体是抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者或其抗原结合片段或包含抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者的CDR的抗体。
在一个实施方案中，IL-23分泌被抑制至少约5％。在一些实施方案中，IL-23分泌被抑制至少约10％。在另一实施方案中，IL-23分泌被抑制至少约15％。在其它实施方案中，IL-23分泌被抑制至少约20％。在一个实施方案中，IL-23分泌被抑制至少约25％。在另一实施方案中，IL-23分泌被抑制至少约30％。在一些实施方案中，IL-23分泌被抑制至少约35％。在一个实施方案中，IL-23分泌被抑制至少约40％。在另一实施方案中，IL-23分泌被抑制至少约45％。在其它实施方案中，IL-23分泌被抑制至少约50％。在一些实施方案中，IL-23分泌被抑制至少约55％。在另一实施方案中，IL-23分泌被抑制至少约60％。在一个实施方案中，IL-23分泌被抑制至少约65％。在一个实施方案中，IL-23分泌被抑制至少约70％。在另一实施方案中，IL-23分泌被抑制至少约75％。在一些实施方案中，IL-23分泌被抑制至少约80％。在其它实施方案中，IL-23分泌被抑制至少约85％。在另一实施方案中，IL-23分泌被抑制至少约90％。在一个实施方案中，IL-23分泌被抑制至少约95％。在一些实施方案中，IL-23分泌被抑制至少约98％。在另一实施方案中，IL-23分泌被抑制至少约99％。在具体的实施方案中，IL-23分泌被抑制至少约25％或35％，任选约75％。在一些实施方案中，通过本文所述的方法评估IL-23分泌的抑制。在其它实施方案中，通过本领域技术人员已知的方法(例如，MSD多重测定)评估IL-23分泌的抑制。在具体的实施方案中，相对于来自不与抗PD-1抗体接触的细胞的IL-23分泌，IL-23分泌受到抑制。在其它实施方案中，相对于来自与无关抗体(例如，不与PD-1特异性结合的抗体)接触的细胞的IL-23分泌，IL-23分泌受到抑制。
在某些实施方案中，IL-23分泌以至多约50nM的EC50被抑制。在其它实施方案中，IL-23分泌以至多约40nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-23分泌以至多约30nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，IL-23分泌以至多约20nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-23分泌以至多约10nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-23分泌以至多约5nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-23分泌以至多约1nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，IL-23分泌以至多约0.75nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-23分泌以至多约0.5nM的EC50被抑制。在其它实施方案中，IL-23分泌以至多约0.1nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-23分泌以至多约0.05nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-23分泌以至多约0.01nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，IL-23分泌以至多约0.005nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-23分泌以至多约0.001nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-23分泌以至少约50nM的EC50被抑制。在其它实施方案中，IL-23分泌以至少约40nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，IL-23分泌以至少约30nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-23分泌以至少约20nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-23分泌以至少约10nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-23分泌以至少约5nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-23分泌以至少约1nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，IL-23分泌以至少约0.75nM的EC50被抑制。在其它实施方案中，IL-23分泌以至少约0.5nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-23分泌以至少约0.1nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-23分泌以至少约0.05nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，IL-23分泌以至少约0.01nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，IL-23分泌以至少约0.005nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，IL-23分泌以至少约0.001nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，通过本文所述的方法评估EC50。在其它实施方案中，通过本领域技术人员已知的方法(例如，MSD多重测定)评估EC50。在具体的实施方案中，相对于来自不与抗PD-1抗体接触的细胞的IL-23分泌，IL-23分泌受到抑制。在其它实施方案中，相对于来自与无关抗体(例如，不与PD-1特异性结合的抗体)接触的细胞的IL-23分泌，IL-23分泌受到抑制。
在一些实施方案中，本文提供了抑制来自细胞的GM-CSF分泌的方法，包括使细胞与如本文提供的与PD-1(例如，人PD-1的ECD或人PD-1的ECD的表位)特异性结合的抗体接触。在具体的实施方案中，所述细胞是T细胞。在某些实施方案中，使细胞与有效量的本文所述的抗体或其抗原结合片段接触。在某些实施方案中，所述抗体是抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者或其抗原结合片段或包含抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者的CDR的抗体。
在一个实施方案中，GM-CSF分泌被抑制至少约5％。在一些实施方案中，GM-CSF分泌被抑制至少约10％。在另一实施方案中，GM-CSF分泌被抑制至少约15％。在其它实施方案中，GM-CSF分泌被抑制至少约20％。在一个实施方案中，GM-CSF分泌被抑制至少约25％。在另一实施方案中，GM-CSF分泌被抑制至少约30％。在一些实施方案中，GM-CSF分泌被抑制至少约35％。在一个实施方案中，GM-CSF分泌被抑制至少约40％。在另一实施方案中，GM-CSF分泌被抑制至少约45％。在其它实施方案中，GM-CSF分泌被抑制至少约50％。在一些实施方案中，GM-CSF分泌被抑制至少约55％。在另一实施方案中，GM-CSF分泌被抑制至少约60％。在一个实施方案中，GM-CSF分泌被抑制至少约65％。在一个实施方案中，GM-CSF分泌被抑制至少约70％。在另一实施方案中，GM-CSF分泌被抑制至少约75％。在一些实施方案中，GM-CSF分泌被抑制至少约80％。在其它实施方案中，GM-CSF分泌被抑制至少约85％。在另一实施方案中，GM-CSF分泌被抑制至少约90％。在一个实施方案中，GM-CSF分泌被抑制至少约95％。在一些实施方案中，GM-CSF分泌被抑制至少约98％。在另一实施方案中，GM-CSF分泌被抑制至少约99％。在具体的实施方案中，GM-CSF分泌被抑制至少约25％或35％，任选约75％。在一些实施方案中，通过本文所述的方法评估GM-CSF分泌的抑制。在其它实施方案中，通过本领域技术人员已知的方法(例如，MesoScaleTM Discovery(MSD)多重测定)评估GM-CSF分泌的抑制。在具体的实施方案中，相对于来自不与抗PD-1抗体接触的细胞的GM-CSF分泌，GM-CSF分泌受到抑制。在其它实施方案中，相对于来自与无关抗体(例如，不与PD-1特异性结合的抗体)接触的细胞的GM-CSF分泌，IL-2分泌受到抑制。
在某些实施方案中，GM-CSF分泌以至多约50nM的EC50被抑制。在其它实施方案中，GM-CSF分泌以至多约40nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，GM-CSF分泌以至多约30nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，GM-CSF分泌以至多约20nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，GM-CSF分泌以至多约10nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，GM-CSF分泌以至多约5nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，GM-CSF分泌以至多约1nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，GM-CSF分泌以至多约0.75nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，GM-CSF分泌以至多约0.5nM的EC50被抑制。在其它实施方案中，GM-CSF分泌以至多约0.1nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，GM-CSF分泌以至多约0.05nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，GM-CSF分泌以至多约0.01nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，GM-CSF分泌以至多约0.005nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，GM-CSF分泌以至多约0.001nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，GM-CSF分泌以至少约50nM的EC50被抑制。在其它实施方案中，GM-CSF分泌以至少约40nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，GM-CSF分泌以至少约30nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，GM-CSF分泌以至少约20nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，GM-CSF分泌以至少约10nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，GM-CSF分泌以至少约5nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，GM-CSF分泌以至少约1nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，GM-CSF分泌以至少约0.75nM的EC50被抑制。在其它实施方案中，GM-CSF分泌以至少约0.5nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，GM-CSF分泌以至少约0.1nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，GM-CSF分泌以至少约0.05nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，GM-CSF分泌以至少约0.01nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，GM-CSF分泌以至少约0.005nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，GM-CSF分泌以至少约0.001nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，通过本文所述的方法评估EC50。在其它实施方案中，通过本领域技术人员已知的方法(例如，MSD多重测定)评估EC50。在具体的实施方案中，相对于来自不与抗PD-1抗体接触的细胞的GM-CSF分泌，GM-CSF分泌受到抑制。在其它实施方案中，相对于来自与无关抗体(例如，不与PD-1特异性结合的抗体)接触的细胞的GM-CSF分泌，IL-2分泌受到抑制。
在一些实施方案中，本文提供了抑制来自细胞的TNF-α分泌的方法，包括使细胞与如本文提供的与PD-1(例如，人PD-1的ECD或人PD-1的ECD的表位)特异性结合的抗体接触。在具体的实施方案中，所述细胞是T细胞。在某些实施方案中，使细胞与有效量的本文所述的抗体或其抗原结合片段接触。在某些实施方案中，所述抗体是抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者或其抗原结合片段或包含抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者的CDR的抗体。
在一个实施方案中，TNF-α分泌被抑制至少约5％。在一些实施方案中，TNF-α分泌被抑制至少约10％。在另一实施方案中，TNF-α分泌被抑制至少约15％。在其它实施方案中，TNF-α分泌被抑制至少约20％。在一个实施方案中，TNF-α分泌被抑制至少约25％。在另一实施方案中，TNF-α分泌被抑制至少约30％。在一些实施方案中，TNF-α分泌被抑制至少约35％。在一个实施方案中，TNF-α分泌被抑制至少约40％。在另一实施方案中，TNF-α分泌被抑制至少约45％。在其它实施方案中，TNF-α分泌被抑制至少约50％。在一些实施方案中，TNF-α分泌被抑制至少约55％。在另一实施方案中，TNF-α分泌被抑制至少约60％。在一个实施方案中，TNF-α分泌被抑制至少约65％。在一个实施方案中，TNF-α分泌被抑制至少约70％。在另一实施方案中，TNF-α分泌被抑制至少约75％。在一些实施方案中，TNF-α分泌被抑制至少约80％。在其它实施方案中，TNF-α分泌被抑制至少约85％。在另一实施方案中，TNF-α分泌被抑制至少约90％。在一个实施方案中，TNF-α分泌被抑制至少约95％。在一些实施方案中，TNF-α分泌被抑制至少约98％。在另一实施方案中，TNF-α分泌被抑制至少约99％。在具体的实施方案中，TNF-α分泌被抑制至少约25％或35％，任选约75％。在一些实施方案中，通过本文所述的方法评估TNF-α分泌的抑制。在其它实施方案中，通过本领域技术人员已知的方法(例如，MSD多重测定)评估TNF-α分泌的抑制。在具体的实施方案中，相对于来自不与抗PD-1抗体接触的细胞的TNF-α分泌，TNF-α分泌受到抑制。在其它实施方案中，相对于来自与无关抗体(例如，不与PD-1特异性结合的抗体)接触的细胞的TNF-α分泌，TNF-α分泌受到抑制。
在某些实施方案中，TNF-α分泌以至多约50nM的EC50被抑制。在其它实施方案中，TNF-α分泌以至多约40nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，TNF-α分泌以至多约30nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，TNF-α分泌以至多约20nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，TNF-α分泌以至多约10nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，TNF-α分泌以至多约5nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，TNF-α分泌以至多约1nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，TNF-α分泌以至多约0.75nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，TNF-α分泌以至多约0.5nM的EC50被抑制。在其它实施方案中，TNF-α分泌以至多约0.1nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，TNF-α分泌以至多约0.05nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，TNF-α分泌以至多约0.01nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，TNF-α分泌以至多约0.005nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，TNF-α分泌以至多约0.001nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，TNF-α分泌以至少约50nM的EC50被抑制。在其它实施方案中，TNF-α分泌以至少约40nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，TNF-α分泌以至少约30nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，TNF-α分泌以至少约20nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，TNF-α分泌以至少约10nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，TNF-α分泌以至少约5nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，TNF-α分泌以至少约1nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，TNF-α分泌以至少约0.75nM的EC50被抑制。在其它实施方案中，TNF-α分泌以至少约0.5nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，TNF-α分泌以至少约0.1nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，TNF-α分泌以至少约0.05nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，TNF-α分泌以至少约0.01nM的EC50被抑制。在另一实施方案中，TNF-α分泌以至少约0.005nM的EC50被抑制。在一个实施方案中，TNF-α分泌以至少约0.001nM的EC50被抑制。在一些实施方案中，通过本文所述的方法评估EC50。在其它实施方案中，通过本领域技术人员已知的方法(例如，MSD多重测定)评估EC50。在具体的实施方案中，相对于来自不与抗PD-1抗体接触的细胞的TNF-α分泌，TNF-α分泌受到抑制。在其它实施方案中，相对于来自与无关抗体(例如，不与PD-1特异性结合的抗体)接触的细胞的TNF-α分泌，TNF-α分泌受到抑制。
在一些实施方案中，本文提供了下调细胞中的PD-1表达的方法，包括使细胞与如本文提供的与PD-1(例如，人PD-1的ECD或人PD-1的ECD的表位)特异性结合的抗体接触。在具体的实施方案中，所述细胞是T细胞。在某些实施方案中，使细胞与有效量的本文所述的抗体或其抗原结合片段接触。在某些实施方案中，所述抗体是抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者或其抗原结合片段或包含抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者的CDR的抗体。
在一个实施方案中，PD-1表达被下调至少约5％。在一个实施方案中，PD-1表达被下调至少约10％。在另一实施方案中，PD-1表达被下调至少约15％。在一些实施方案中，PD-1表达被下调至少约20％。在其它实施方案中，PD-1表达被下调至少约25％。在另一实施方案中，PD-1表达被下调至少约30％。在一个实施方案中，PD-1表达被下调至少约35％。在一些实施方案中，PD-1表达被下调至少约40％。在另一实施方案中，PD-1表达被下调至少约45％。在一个实施方案中，PD-1表达被下调至少约50％。在其它实施方案中，PD-1表达被下调至少约55％。在另一实施方案中，PD-1表达被下调至少约60％。在一些实施方案中，PD-1表达被下调至少约65％。在一个实施方案中，PD-1表达被下调至少约70％。在另一实施方案中，PD-1表达被下调至少约75％。在一个实施方案中，PD-1表达被下调至少约80％。在一些实施方案中，PD-1表达被下调至少约85％。在另一实施方案中，PD-1表达被下调至少约90％。在其它实施方案中，PD-1表达被下调至少约95％。在一个实施方案中，PD-1表达被下调至少约98％。在另一实施方案中，PD-1表达被下调至少约99％。在具体的实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体与PD-1特异性结合，并将PD-1表达下调至少约25％或35％，任选约75％。在一些实施方案中，通过本文所述的方法评估PD-1表达的下调。在其它实施方案中，通过本领域技术人员已知的方法(例如，流式细胞术、免疫印迹法、RNA印迹法或RT-PCR)评估PD-1表达的下调。在具体的实施方案中，通过流式细胞术评估PD-1表达的下调。在另一实施方案中，通过免疫印迹法评估PD-1表达的下调。在又一实施方案中，通过RNA印迹法评估PD-1表达的下调。在再一实施方案中，通过RT-PCR评估PD-1表达的下调。在具体的实施方案中，相对于不与抗PD-1抗体接触的细胞中的PD-1表达，PD-1表达被下调。在其它实施方案中，相对于与无关抗体(例如，不与PD-1特异性结合的抗体)接触的细胞中的PD-1表达，PD-1表达被下调。
在一个实施方案中，本文提供了下调T细胞的表面上的PD-1表达的方法，包括使T细胞与有效量的本文提供的药物制剂的抗体或其抗原结合片段接触。在一个实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段对PD-1表达的最大下调百分比为至少约10％。在一个实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段对PD-1表达的最大下调百分比为至少约20％。在一个实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段对PD-1表达的最大下调百分比为至少约30％。在一个实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段对PD-1表达的最大下调百分比为至少约40％。在一个实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段对PD-1表达的最大下调百分比为至少约45％。在一个实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段对PD-1表达的最大下调百分比为至少约50％。在一个实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段对PD-1表达的最大下调百分比为至少约55％。在一个实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段对PD-1表达的最大下调百分比为至少约60％。在一个实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段对PD-1表达的最大下调百分比为至少约65％。在一个实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段对PD-1表达的最大下调百分比为至少约70％。在一个实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段对PD-1表达的最大下调百分比为至少约75％。在一个实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段对PD-1表达的最大下调百分比为至少约80％。在一个实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段对PD-1表达的最大下调百分比为至少约85％。在一个实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段对PD-1表达的最大下调百分比为至少约90％。在一个实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段对PD-1表达的最大下调百分比为至少约95％。在一个实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段对PD-1表达的最大下调百分比为至少约100％。
在某些实施方案中，T细胞的表面上的PD-1表达的下调早在与抗体或其抗原结合片段接触后4小时发生。在其它实施方案中，T细胞的表面上的PD-1表达的下调早在与抗体或其抗原结合片段接触后4小时、6小时、8小时、10小时、12小时、14小时、16小时、18小时、20小时或22小时发生。在一个实施方案中，下调早在接触后4小时发生。在一个实施方案中，下调早在接触后6小时发生。在另一实施方案中，下调早在接触后8小时发生。在其它实施方案中，下调早在接触后10小时发生。在一些实施方案中，下调早在接触后12小时发生。在一个实施方案中，下调早在接触后14小时发生。在另一实施方案中，下调早在接触后16小时发生。在一些实施方案中，下调早在接触后18小时发生。在其它实施方案中，下调早在接触后20小时发生。在其它实施方案中，下调早在接触后22小时发生。还在其它实施方案中，T细胞的表面上的PD-1表达的下调早在与抗体或其抗原结合片段接触后24小时发生。
在一个实施方案中，T细胞的表面上的PD-1表达的下调先于细胞因子抑制。在另一实施方案中，T细胞的表面上的PD-1表达的下调是与细胞因子抑制同时的。在又一实施方案中，T细胞的表面上的PD-1表达的下调之前是细胞因子抑制。在某些实施方案中，所述细胞因子是IL-2、IL-17、IFN-γ或其任意组合。在一个实施方案中，所述细胞因子是IL-2。在另一实施方案中，所述细胞因子是IL-17。在其它实施方案中，所述细胞因子是IFN-γ。在某些实施方案中，所述细胞因子选自IL-1、IL-2、IL-6、IL-12、IL-17、IL-22、IL-23、GM-CSF、IFN-γ和TNF-α。在某些实施方案中，所述细胞因子是IL-1。在其它实施方案中，所述细胞因子是IL-6。还在其它实施方案中，所述细胞因子是IL-12。仍在其它实施方案中，所述细胞因子是IL-22。在某些实施方案中，所述细胞因子是IL-23。在一些实施方案中，所述细胞因子是GM-CSF。在其它实施方案中，所述细胞因子是TNF-α。还涵盖上面提到的细胞因子中的两种、三种或更多种的其它组合。
在其它方面，本公开的抗PD-1抗体及其片段可用于检测生物样品中的PD-1的存在。这类抗PD-1抗体可包括与人和/或食蟹猴PD-1结合但不诱导PD-1信号传导活性的那些。如本文所用的术语“检测”涵盖定量或定性检测。在某些实施方案中，生物样品包括体液、细胞或组织。
5.5药物组合物
在一方面，本公开进一步提供包含至少一种本公开的抗PD-1抗体的药物组合物。在一些实施方案中，药物组合物包含1)抗PD-1抗体，和2)药学上可接受的载体。
通过将具有所需纯度的抗体与任选的生理上可接受的载体、赋形剂或稳定剂(参见例如Remington，Remington’s Pharmaceutical Sciences(第18版，1980))混合来制备包含所述抗体的药物组合物，用于以水溶液的形式或冻干或其它干燥形式储存。
可将本公开的抗体配制成适合递送至靶细胞/组织的任意形式，例如作为微胶囊或大粒子乳液(Remington，同上；Park等人，2005，Molecules 10:146-61；Malik等人，2007，Curr.Drug.Deliv.4:141-51)、作为缓释制剂(Putney和Burke，1998，NatureBiotechnol.16:153-57)或在脂质体中(Maclean等人，1997，Int.J.Oncol.11:325-32；Kontermann，2006，Curr.Opin.Mol.Ther.8:39-45)。
也可将本文提供的药物制剂的抗体包埋在例如通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微胶囊(例如，分别为羟甲基纤维素或明胶-微胶囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊)中、包埋在胶体药物递送系统(例如，脂质体、白蛋白微球体、微乳液、纳米颗粒和纳米胶囊)中或包埋在大粒子乳液中。Remington，同上中例如公开了这类技术。
各种组合物和递送系统是已知的，并且可与如本文所述与PD-1结合的抗体一起使用，包括但不限于在脂质体中胶囊包封、微颗粒、微胶囊、能够表达抗体的重组细胞、受体介导的胞吞(参见例如Wu和Wu，1987，J.Biol.Chem.262:4429-32)、构建核酸作为逆转录病毒或其它载体的一部分等。在另一实施方案中，可将组合物以控释或缓释系统形式提供。在一个实施方案中，可使用泵来实现控释或缓释(参见例如，Langer，同上；Sefton，1987，Crit.Ref.Biomed.Eng.14:201-40；Buchwald等人，1980，Surgery 88:507-16；和Saudek等人，1989，N.Engl.J.Med.321:569-74)。在另一实施方案中，聚合物材料可用于实现本发明的预防或治疗剂(例如，如本文所述与PD-1结合的抗体)或组合物的控释或缓释(参见例如，Medical Applications of Controlled Release(Langer和Wise编，1974)；Controlled Drug Bioavailability,Drug Product Design and Performance(Smolen和Ball编，1984)；Ranger和Peppas，1983，J.Macromol.Sci.Rev.Macromol.Chem.23:61-126；Levy等人，1985，Science 228:190-92；During等人，1989，Ann.Neurol.25:351-56；Howard等人，1989，J.Neurosurg.71:105-12；第5,679,377、5,916,597、5,912,015、5,989,463和5,128,326号美国专利；第WO 99/15154和WO 99/20253号PCT公布)。用在缓释制剂中的聚合物的实例包括但不限于聚(甲基丙烯酸2-羟乙酯)、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(丙烯酸)、聚(乙烯-共-乙酸乙烯酯)、聚(甲基丙烯酸)、聚乙交酯(PLG)、聚酐、聚(N-乙烯基吡咯烷酮)、聚(乙烯醇)、聚丙烯酰胺、聚(乙二醇)、聚丙交酯(PLA)、聚(丙交酯-共-乙交酯)(PLGA)和聚原酸酯。在一个实施方案中，用在缓释制剂中的聚合物是惰性的，不含可浸出的杂质，在储存时稳定，无菌并且可生物降解。
在又一实施方案中，可将控释或缓释系统置于特定的靶组织(例如，鼻腔通道或肺)附近，从而仅需要全身剂量的一小部分(参见例如Goodson，Medical Applications of Controlled Release第2卷，115-38(1984))。Langer，1990，Science 249:1527-33例如讨论过控释系统。本领域技术人员已知的任何技术均可用于产生包含一种或多种如本文所述与PD-1结合的抗体的缓释制剂(参见例如，第4,526,938号美国专利；第WO 91/05548和WO 96/20698号PCT公布；Ning等人，1996，Radiotherapy&Oncology 39:179-89；Song等人，1995，PDA J.of Pharma.Sci.&Tech.50:372-97；Cleek等人，1997，Pro.Int’l.Symp.Control.Rel.Bioact.Mater.24:853-54；以及Lam等人，1997，Proc.Int’l.Symp.ControlRel.Bioact.Mater.24:759-60)。
在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含与PD-1(包括PD-1多肽、PD-1多肽片段、PD-1肽或PD-1表位)结合的抗体。在某些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含与人和/或食蟹猴PD-1结合的抗体。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含不与啮齿动物PD-1(例如，小鼠PD-1)结合的抗体。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含与人PD-1结合的抗体。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含与食蟹猴PD-1结合的抗体。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含与人PD-1和食蟹猴PD-1结合的抗体。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含与人PD-1结合且不与啮齿动物PD-1(例如，小鼠PD-1)结合的抗体。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含与食蟹猴PD-1结合且不与啮齿动物PD-1(例如，小鼠PD-1)结合的抗体。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含与人PD-1结合、与食蟹猴PD-1结合且不与啮齿动物PD-1(例如，小鼠PD-1)结合的抗体。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含不阻断PD-L1与PD-1多肽的结合的抗体。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含不阻断PD-L2与PD-1多肽的结合的抗体。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含不阻断PD-L1或PD-L2与PD-1多肽的结合的抗体。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体是结合PD-1(包括PD-1多肽、PD-1多肽片段、PD-1肽或PD-1表位)的人源化抗体(例如，包含人恒定区)。在某些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含本文提供的药物制剂的鼠单克隆抗体中的任一者的VH区、VL区、VH CDR1、VH CDR2、VHCDR3、VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3，如表1-6中所示的氨基酸序列。因此，在一些实施方案中，本文提供的药物制剂的分离抗体或其功能片段包含来自以下的一个、两个和/或三个重链CDR和/或一个、两个和/或三个轻链CDR：(a)抗体PD1AB-1，(b)抗体PD1AB-2，(c)抗体PD1AB-3，(d)抗体PD1AB-4，(e)抗体PD1AB-5，或(f)抗体PD1AB-6，如表1-2中所示。
在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含六个CDR或由六个CDR组成，例如表1-2中鉴定的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和/或VLCDR3。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体可包含少于六个CDR。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含以下或由以下组成：一个、两个、三个、四个或五个选自表1-2中鉴定的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VLCDR1、VL CDR2和/或VL CDR3的CDR。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含以下或由以下组成：一个、两个、三个、四个或五个选自单克隆抗体的VHCDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3的CDR，所述单克隆抗体选自本文所述的：(a)抗体PD1AB-1，(b)抗体PD1AB-2，(c)抗体PD1AB-3，(d)抗体PD1AB-4，(e)抗体PD1AB-5，和(f)抗体PD1AB-6。因此，在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含以下或由以下组成：表1-2中鉴定的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3中的任一者的一个、两个、三个、四个或五个CDR。
在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含一个或多个(例如，一个、两个或三个)表2中列出的VH CDR。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含一个或多个(例如，一个、两个或三个)表1中列出的VL CDR。还在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含一个或多个(例如，一个、两个或三个)表2中列出的VH CDR和一个或多个表1中列出的VL CDR。因此，在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的VH CDR1。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的VH CDR2。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的VH CDR3。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含独立地选自如表2中所示的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3氨基酸序列中的任一者的VH CDR1和/或VH CDR2和/或VH CDR3。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:1和7中的任一者的氨基酸序列的VL CDR1。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VL CDR2。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VL CDR3。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含独立地选自如表1中所示的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3氨基酸序列中的任一者的VL CDR1和/或VL CDR2和/或VL CDR3。
在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含：包含以下的VH区：(1)具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的VH CDR1；(2)具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的VH CDR2；和(3)具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的VH CDR3；以及包含以下的VL区：(1)具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的VL CDR1；(2)具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VL CDR2；和(3)具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VL CDR3。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含：包含以下的VH区：(1)具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的VHCDR1；(2)具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的VH CDR2；和(3)具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的VH CDR3；以及包含以下的VL区：(1)具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的VL CDR1；(2)具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VL CDR2；和(3)具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VL CDR3。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含：包含以下的VH区：(1)具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的VH CDR1；(2)具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的VH CDR2；和(3)具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的VH CDR3。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VL区，所述VL区包含：(1)具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的VLCDR1；(2)具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VL CDR2；和(3)具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VL CDR3。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VL区，所述VL区包含：(1)具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的VL CDR1；(2)具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VL CDR2；和(3)具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VL CDR3。
在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含表1-2中列出的一个或多个(例如，一个、两个或三个)VH CDR和一个或多个(例如，一个、两个或三个)VL CDR。在特定的实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)和VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)和VL CDR2(SEQ ID NO:2)。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)和VLCDR3(SEQ ID NO:3)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH CDR2(SEQ ID NO:5)和VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH CDR2(SEQ ID NO:5)和VL CDR2(SEQ ID NO:2)。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH CDR2(SEQ ID NO:5)和VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH CDR3(SEQ ID NO:6)和VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH CDR3(SEQ ID NO:6)和VL CDR2(SEQ ID NO:2)。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH CDR3(SEQ IDNO:6)和VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR2(SEQ ID NO:5)和VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH CDR1(SEQ IDNO:4)、VH CDR2(SEQ ID NO:5)和VL CDR2(SEQ ID NO:2)。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR2(SEQ ID NO:5)和VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VH CDR3(SEQ ID NO:6)和VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VHCDR3(SEQ ID NO:6)和VL CDR2(SEQ ID NO:2)。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VH CDR3(SEQ ID NO:6)和VL CDR3(SEQID NO:3)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR3(SEQ ID NO:6)和VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR3(SEQID NO:6)和VL CDR2(SEQ ID NO:2)。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR3(SEQ ID NO:6)和VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH CDR1(SEQ IDNO:4)、VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)和VL CDR2(SEQ ID NO:2)。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)和VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VL CDR2(SEQ ID NO:2)和VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)和VL CDR2(SEQ ID NO:2)。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)和VLCDR3(SEQ ID NO:3)。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VL CDR2(SEQ ID NO:2)和VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH CDR3(SEQ ID NO:6)、VLCDR1(SEQ ID NO:1或7)和VL CDR2(SEQ ID NO:2)。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH CDR3(SEQ ID NO:6)、VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)和VLCDR3(SEQ ID NO:3)。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH CDR3(SEQ ID NO:6)、VL CDR2(SEQ ID NO:2)和VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VHCDR2(SEQ ID NO:5)、VH CDR3(SEQ ID NO:6)和VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VH CDR3(SEQ ID NO:6)和VL CDR2(SEQ ID NO:2)。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR2(SEQ IDNO:5)、VH CDR3(SEQ ID NO:6)和VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VLCDR1(SEQ ID NO:1或7)和VL CDR2(SEQ ID NO:2)。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)和VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VL CDR2(SEQID NO:2)和VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR3(SEQ ID NO:6)、VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)和VL CDR2(SEQ ID NO:2)。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR3(SEQ ID NO:6)、VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)和VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR3(SEQ ID NO:6)、VL CDR2(SEQ ID NO:2)和VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VHCDR2(SEQ ID NO:5)、VH CDR3(SEQ ID NO:6)、VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)和VL CDR2(SEQID NO:2)。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VH CDR3(SEQ ID NO:6)、VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)和VL CDR3(SEQ IDNO:3)。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH CDR2(SEQID NO:5)、VH CDR3(SEQ ID NO:6)、VL CDR2(SEQ ID NO:2)和VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VH CDR3(SEQ ID NO:6)、VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)和VL CDR2(SEQ ID NO:2)。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VHCDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VH CDR3(SEQ ID NO:6)、VL CDR1(SEQ IDNO:1或7)和VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VH CDR3(SEQ ID NO:6)、VL CDR2(SEQ ID NO:2)和VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VLCDR1(SEQ ID NO:1或7)、VL CDR2(SEQ ID NO:2)和VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR3(SEQ ID NO:6)、VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)、VL CDR2(SEQ ID NO:2)和VL CDR3(SEQ IDNO:3)。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH CDR2(SEQID NO:5)、VH CDR3(SEQ ID NO:6)、VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)、VL CDR2(SEQ ID NO:2)和VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)、VL CDR2(SEQ ID NO:2)和VLCDR3(SEQ ID NO:3)。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)、VL CDR2(SEQ ID NO:2)和VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VHCDR3(SEQ ID NO:6)、VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)、VL CDR2(SEQ ID NO:2)和VL CDR3(SEQID NO:3)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含表1-2中列出的VH CDR和VL CDR的其任意组合。
在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含本文公开的包括来源于相关抗体组的共有序列的CDR(参见例如，表1-2)。
在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体(或其功能片段)，其进一步包含来自以下的一个、两个、三个和/或四个重链FR和/或一个、两个、三个和/或四个轻链FR：(a)抗体PD1AB-1，(b)抗体PD1AB-2，(c)抗体PD1AB-3，(d)抗体PD1AB-4，(e)抗体PD1AB-5，或(f)抗体PD1AB-6，如表3-4中所示。
在某些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体(或其功能片段)，其进一步包含一个、两个、三个和/或四个来自以下的重链FR：(a)抗体PD1AB-1，(b)抗体PD1AB-2，(c)抗体PD1AB-3，(d)抗体PD1AB-4，(e)抗体PD1AB-5，或(f)抗体PD1AB-6，如表4中所示。在一些实施方案中，抗体重链FR来自抗体PD1AB-1。在一些实施方案中，抗体重链FR来自抗体PD1AB-2。在其它实施方案中，抗体重链FR来自抗体PD1AB-3。在某些实施方案中，抗体重链FR来自抗体PD1AB-4。在其它实施方案中，抗体重链FR来自抗体PD1AB-5。在另一实施方案中，抗体重链FR来自抗体PD1AB-6。
在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体(或其功能片段)，其进一步包含一个、两个、三个和/或四个来自以下的轻链FR：(a)抗体PD1AB-1，(b)抗体PD1AB-2，(c)抗体PD1AB-3，(d)抗体PD1AB-4，(e)抗体PD1AB-5，或(f)抗体PD1AB-6，如表3中所示。在一些实施方案中，抗体轻链FR来自抗体PD1AB-1。在一些实施方案中，抗体轻链FR来自抗体PD1AB-2。在其它实施方案中，抗体轻链FR来自抗体PD1AB-3。在某些实施方案中，抗体轻链FR来自抗体PD1AB-4。在其它实施方案中，抗体轻链FR来自抗体PD1AB-5。在另一实施方案中，抗体轻链FR来自抗体PD1AB-6。
在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH区，所述VH区包含：(1)具有选自SEQ ID NO:19和24的氨基酸序列的VH FR1；(2)具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的VH FR2；(3)具有选自SEQ ID NO:21和23的氨基酸序列的VH FR3；和/或(4)具有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的VH FR4。在某些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH区，所述VH区包含：(1)具有SEQ ID NO:19的氨基酸的VH FR1；(2)具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的VH FR2；(3)具有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的VHFR3；和/或(4)具有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的VH FR4。在某些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH区，所述VH区包含：(1)具有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的VH FR1；(2)具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的VH FR2；(3)具有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的VH FR3；和/或(4)具有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的VH FR4。在某些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH区，所述VH区包含：(1)具有SEQID NO:24的氨基酸序列的VH FR1；(2)具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的VH FR2；(3)具有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的VH FR3；和/或(4)具有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的VHFR4。在某些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH区，所述VH区包含：(1)具有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的VH FR1；(2)具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的VH FR2；(3)具有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的VH FR3；和/或(4)具有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的VH FR4。在具体的实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH区，所述VH区包含所有四个上面提到的VH FR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4。
因此，在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含人源化抗体，所述人源化抗体包含VH区，所述VH区包括具有选自SEQ ID NO:19和24的氨基酸序列的VH FR1。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含人源化抗体，所述人源化抗体包含VH区，所述VH区包括具有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的VH FR1。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含人源化抗体，所述人源化抗体包含VH区，所述VH区包括具有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的VH FR1。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含人源化抗体，所述人源化抗体包含VH区，所述VH区包括具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的VH FR2。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含人源化抗体，所述人源化抗体包含VH区，所述VH区包括具有选自SEQ ID NO:21和23的氨基酸序列的VH FR3。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含人源化抗体，所述人源化抗体包含VH区，所述VH区包括具有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的VH FR3。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含人源化抗体，所述人源化抗体包含VH区，所述VH区包括具有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的VH FR3。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含人源化抗体，所述人源化抗体包含VH区，所述VH区包括具有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的VH FR4。
在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VL区，所述VL区包含：(1)具有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VL FR1；(2)具有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VL FR2；(3)具有选自SEQ ID NO:16和18的氨基酸序列的VL FR3；和/或(4)具有SEQID NO:17的氨基酸序列的VL FR4。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VL区，所述VL区包含：(1)具有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VL FR1；(2)具有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VL FR2；(3)具有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL FR3；和/或(4)具有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的VL FR4。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VL区，所述VL区包含：(1)具有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VL FR1；(2)具有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VL FR2；(3)具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的VL FR3；和/或(4)具有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的VL FR4。
因此，在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含人源化抗体，所述人源化抗体包含VL区，所述VL区包括具有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VL FR1。在某些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含人源化抗体，所述人源化抗体包含VL区，所述VL区包括具有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VL FR2。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含人源化抗体，所述人源化抗体包含VL区，所述VL区包括具有选自SEQ ID NO:16和18的氨基酸序列的VL FR3。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含人源化抗体，所述人源化抗体包含VL区，所述VL区包括具有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL FR3。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含人源化抗体，所述人源化抗体包含VL区，所述VL区包括具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的VL FR3。还在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含人源化抗体，所述人源化抗体包含VL区，所述VL区包括具有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的VL FR4。
在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH区和VL区，其中VH区包含：(1)具有选自SEQ ID NO:19和24的氨基酸序列的VH FR1；(2)具有SEQ IDNO:20的氨基酸序列的VH FR2；(3)具有选自SEQ ID NO:21和23的氨基酸序列的VH FR3；和/或(4)具有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的VH FR4；且其中VL区包含：(1)具有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VL FR1；(2)具有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VL FR2；(3)具有选自SEQID NO:16和18的氨基酸序列的VL FR3；和/或(4)具有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的VLFR4。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH区，所述VH区包含所有四个上面提到的VH FR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VL区，所述VL区包含所有四个上面提到的VL FR1、VL FR2、VL FR3和VL FR4。还在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含：包含所有四个上面提到的VH FR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4的VH区以及包含所有四个上面提到的VL FR1、VL FR2、VL FR3和VL FR4的VL区。
在某些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH区和VL区，其中VH区包含：(1)具有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的VH FR1；(2)具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的VH FR2；(3)具有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的VH FR3；和/或(4)具有SEQ IDNO:22的氨基酸序列的VH FR4；且其中VL区包含：(1)具有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VLFR1；(2)具有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VL FR2；(3)具有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL FR3；和/或(4)具有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的VL FR4。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH区，所述VH区包含所有四个上面提到的VH FR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VL区，所述VL区包含所有四个上面提到的VL FR1、VL FR2、VL FR3和VL FR4。还在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含：包含所有四个上面提到的VH FR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4的VH区以及包含所有四个上面提到的VL FR1、VL FR2、VL FR3和VL FR4的VL区。
在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH区和VL区，其中VH区包含：(1)具有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的VH FR1；(2)具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的VH FR2；(3)具有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的VH FR3；和/或(4)具有SEQ IDNO:22的氨基酸序列的VH FR4；且其中VL区包含：(1)具有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VLFR1；(2)具有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VL FR2；(3)具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的VL FR3；和/或(4)具有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的VL FR4。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH区，所述VH区包含所有四个上面提到的VH FR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VL区，所述VL区包含所有四个上面提到的VL FR1、VL FR2、VL FR3和VL FR4。还在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含：包含所有四个上面提到的VH FR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4的VH区以及包含所有四个上面提到的VL FR1、VL FR2、VL FR3和VL FR4的VL区。
在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH区和VL区，其中VH区包含：(1)具有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的VH FR1；(2)具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的VH FR2；(3)具有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的VH FR3；和/或(4)具有SEQ IDNO:22的氨基酸序列的VH FR4；且其中VL区包含：(1)具有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VLFR1；(2)具有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VL FR2；(3)具有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL FR3；和/或(4)具有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的VL FR4。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH区，所述VH区包含所有四个上面提到的VH FR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VL区，所述VL区包含所有四个上面提到的VL FR1、VL FR2、VL FR3和VL FR4。还在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含：包含所有四个上面提到的VH FR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4的VH区以及包含所有四个上面提到的VL FR1、VL FR2、VL FR3和VL FR4的VL区。
在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH区和VL区，其中VH区包含：(1)具有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的VH FR1；(2)具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的VH FR2；(3)具有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的VH FR3；和/或(4)具有SEQ IDNO:22的氨基酸序列的VH FR4；且其中VL区包含：(1)具有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VLFR1；(2)具有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VL FR2；(3)具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的VL FR3；和/或(4)具有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的VL FR4。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH区，所述VH区包含所有四个上面提到的VH FR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VL区，所述VL区包含所有四个上面提到的VL FR1、VL FR2、VL FR3和VL FR4。还在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含：包含所有四个上面提到的VH FR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4的VH区以及包含所有四个上面提到的VL FR1、VL FR2、VL FR3和VL FR4的VL区。
在某些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH区和VL区，其中VH区包含：(1)具有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的VH FR1；(2)具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的VH FR2；(3)具有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的VH FR3；和/或(4)具有SEQ IDNO:22的氨基酸序列的VH FR4；且其中VL区包含：(1)具有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VLFR1；(2)具有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VL FR2；(3)具有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL FR3；和/或(4)具有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的VL FR4。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH区，所述VH区包含所有四个上面提到的VH FR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VL区，所述VL区包含所有四个上面提到的VL FR1、VL FR2、VL FR3和VL FR4。还在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含：包含所有四个上面提到的VH FR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4的VH区以及包含所有四个上面提到的VL FR1、VL FR2、VL FR3和VL FR4的VL区。
在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH区和VL区，其中VH区包含：(1)具有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的VH FR1；(2)具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的VH FR2；(3)具有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的VH FR3；和/或(4)具有SEQ IDNO:22的氨基酸序列的VH FR4；且其中VL区包含：(1)具有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VLFR1；(2)具有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VL FR2；(3)具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的VL FR3；和/或(4)具有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的VL FR4。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH区，所述VH区包含所有四个上面提到的VH FR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VL区，所述VL区包含所有四个上面提到的VL FR1、VL FR2、VL FR3和VL FR4。还在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含：包含所有四个上面提到的VH FR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4的VH区以及包含所有四个上面提到的VL FR1、VL FR2、VL FR3和VL FR4的VL区。
在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH区和VL区，其中VH区包含：(1)具有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的VH FR1；(2)具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的VH FR2；(3)具有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的VH FR3；和/或(4)具有SEQ IDNO:22的氨基酸序列的VH FR4；且其中VL区包含：(1)具有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VLFR1；(2)具有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VL FR2；(3)具有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL FR3；和/或(4)具有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的VL FR4。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH区，所述VH区包含所有四个上面提到的VH FR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VL区，所述VL区包含所有四个上面提到的VL FR1、VL FR2、VL FR3和VL FR4。还在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含：包含所有四个上面提到的VH FR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4的VH区以及包含所有四个上面提到的VL FR1、VL FR2、VL FR3和VL FR4的VL区。
在某些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH区和VL区，其中VH区包含：(1)具有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的VH FR1；(2)具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的VH FR2；(3)具有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的VH FR3；和/或(4)具有SEQ IDNO:22的氨基酸序列的VH FR4；且其中VL区包含：(1)具有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VLFR1；(2)具有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VL FR2；(3)具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的VL FR3；和/或(4)具有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的VL FR4。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH区，所述VH区包含所有四个上面提到的VH FR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VL区，所述VL区包含所有四个上面提到的VL FR1、VL FR2、VL FR3和VL FR4。还在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含：包含所有四个上面提到的VH FR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4的VH区以及包含所有四个上面提到的VL FR1、VL FR2、VL FR3和VL FR4的VL区。
本文提供的药物制剂在某些实施方案中包含抗体，所述抗体包含表3-4中列出的一个或多个(例如，一个、两个、三个或四个)VH FR和一个或多个(例如，一个、两个、三个或四个)VL FR。特别地，在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)和VL FR1(SEQ ID NO:14)。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)和VL FR2(SEQ ID NO:15)。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ IDNO:19或24)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)和VLFR1(SEQ ID NO:14)。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)和VL FR2(SEQ ID NO:15)。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR3(SEQ ID NO:21)和VL FR1(SEQ ID NO:14)。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR3(SEQ ID NO:21)和VL FR2(SEQ ID NO:15)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR3(SEQ IDNO:21)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR3(SEQ ID NO:21)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR4(SEQ ID NO:22)和VL FR1(SEQID NO:14)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR4(SEQ ID NO:22)和VL FR2(SEQ ID NO:15)。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR4(SEQ ID NO:22)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR4(SEQ ID NO:22)和VLFR4(SEQ ID NO:17)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)和VL FR1(SEQ ID NO:14)。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)和VL FR2(SEQ ID NO:15)。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ IDNO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)和VL FR1(SEQ ID NO:14)。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)和VL FR2(SEQ ID NO:15)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VL FR1(SEQ ID NO:14)和VL FR2(SEQ ID NO:15)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VL FR1(SEQ ID NO:14)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VL FR1(SEQ ID NO:14)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VL FR2(SEQ ID NO:15)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VL FR2(SEQ ID NO:15)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ IDNO:17)。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQID NO:20)、VL FR1(SEQ ID NO:14)和VL FR2(SEQ ID NO:15)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VL FR1(SEQ ID NO:14)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VL FR1(SEQ ID NO:14)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ IDNO:20)、VL FR2(SEQ ID NO:15)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VL FR2(SEQ ID NO:15)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR3(SEQ IDNO:21或23)、VL FR1(SEQ ID NO:14)和VL FR2(SEQ ID NO:15)。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR1(SEQ IDNO:14)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR1(SEQ ID NO:14)和VL FR4(SEQ IDNO:17)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR3(SEQID NO:21或23)、VL FR2(SEQ ID NO:15)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR2(SEQ ID NO:15)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VLFR4(SEQ ID NO:17)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)和VL FR2(SEQ ID NO:15)。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VHFR4(SEQ ID NO:22)、VL FR2(SEQ ID NO:15)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR2(SEQ ID NO:15)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VHFR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21)和VL FR1(SEQID NO:14)。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21)和VL FR2(SEQ IDNO:15)。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ IDNO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR4(SEQ ID NO:22)和VL FR1(SEQ ID NO:14)。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR4(SEQ ID NO:22)和VL FR2(SEQ ID NO:15)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR4(SEQ ID NO:22)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR4(SEQ ID NO:22)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)和VL FR1(SEQ ID NO:14)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)和VL FR2(SEQ ID NO:15)。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)和VL FR1(SEQ ID NO:14)。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VHFR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)和VL FR2(SEQ ID NO:15)。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VL FR1(SEQ ID NO:14)和VL FR2(SEQ ID NO:15)。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQID NO:20)、VL FR1(SEQ ID NO:14)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQID NO:20)、VL FR1(SEQ ID NO:14)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ IDNO:20)、VL FR2(SEQ ID NO:15)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ IDNO:20)、VL FR2(SEQ ID NO:15)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR3(SEQ ID NO:21)、VL FR1(SEQ ID NO:14)和VL FR2(SEQ ID NO:15)。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR3(SEQ ID NO:21)、VL FR1(SEQ ID NO:14)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR3(SEQ ID NO:21)、VL FR1(SEQ ID NO:14)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR3(SEQ ID NO:21)、VLFR2(SEQ ID NO:15)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR3(SEQ ID NO:21)、VLFR2(SEQ ID NO:15)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR3(SEQ ID NO:21)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)和VL FR2(SEQ ID NO:15)。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQID NO:14)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQID NO:14)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR2(SEQ IDNO:15)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR2(SEQ IDNO:15)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21)、VL FR1(SEQ ID NO:14)和VL FR2(SEQ ID NO:15)。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21)、VL FR1(SEQ ID NO:14)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21)、VL FR1(SEQ ID NO:14)和VL FR4(SEQID NO:17)。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21)、VL FR2(SEQ ID NO:15)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21)、VL FR2(SEQ ID NO:15)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)和VL FR2(SEQ ID NO:15)。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR4(SEQID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR2(SEQ ID NO:15)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR2(SEQ ID NO:15)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)和VL FR2(SEQ ID NO:15)。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQID NO:14)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQID NO:14)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR2(SEQ IDNO:15)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR2(SEQ IDNO:15)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ IDNO:15)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL 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NO:17)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ IDNO:19或24)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ IDNO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)和VL FR2(SEQ ID NO:15)。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VHFR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR2(SEQ IDNO:15)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ IDNO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR2(SEQ ID NO:15)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VLFR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VHFR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)和VL FR3(SEQID NO:16或18)。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VHFR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQID NO:15)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR4(SEQID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ IDNO:17)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQID NO:19或24)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)和VLFR4(SEQ ID NO:17)。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VLFR1(SEQ ID NO:14)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VHFR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ IDNO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ IDNO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ IDNO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VLFR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VLFR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQID NO:17)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR4(SEQID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VLFR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)和VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ IDNO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ IDNO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ IDNO:21或23)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VLFR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQID NO:17)。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH FR2(SEQ IDNO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VLFR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)和VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含表3-4中列出的VH FR(SEQ ID NO:19-24)和VL FR(SEQ ID NO:14-18)的其任意组合。
在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VH区或VH结构域。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含VL区或VL结构域。在某些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含(i)VH结构域或VH区；和/或(ii)VL结构域或VL区的组合。本文中的别处示出了药物制剂中的抗体的示例性VH区、VH结构域、VL区和VL结构域。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含(i)VH结构域或VH区；和/或(ii)选自如表5-6中所示的SEQ ID NO:8-13的VL结构域或VL区的组合。在其它实施方案中，本文提供的药物制剂的抗体具有如表5-6中所示的抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者的(i)VH结构域或VH区；和/或(ii)VL结构域或VL区的组合。
在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含：包含以下的VH区：(1)具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的VH CDR1；(2)具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的VH CDR2；和(3)具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的VH CDR3；以及选自如表5中所示的SEQID NO:8-10的VL区。在一些实施方案中，VL区具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列。在其它实施方案中，VL区具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列。在一些实施方案中，VL区具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列。
在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含：选自如表6中所示的SEQ ID NO:11-13的VH区；以及包含以下的VL区：(1)具有选自SEQ ID NO:1和7的氨基酸序列的VL CDR1；(2)具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VL CDR2；和(3)具有SEQ IDNO:3的氨基酸序列的VL CDR3。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含：选自如表6中所示的SEQ ID NO:11-13的VH区；以及包含以下的VL区：(1)具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的VL CDR1；(2)具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VL CDR2；和(3)具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VL CDR3。还在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含：选自如表6中所示的SEQ ID NO:11-13的VH区；以及包含以下的VL区：(1)具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的VL CDR1；(2)具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VL CDR2；和(3)具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VL CDR3。在一些实施方案中，VH区具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列。在一些实施方案中，VH区具有SEQ ID NO:12的氨基酸序列。在一些实施方案中，VH区具有SEQ ID NO:13的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含PD1AB-1的VH和VL氨基酸序列。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含SEQ ID NO:11的VH氨基酸序列和SEQ ID NO:8的VL氨基酸序列。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含PD1AB-2的VH和VL氨基酸序列。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含SEQ ID NO:11的VH氨基酸序列和SEQID NO:9的VL氨基酸序列。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含PD1AB-3的VH和VL氨基酸序列。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含SEQ ID NO:12的VH氨基酸序列和SEQ ID NO:10的VL氨基酸序列。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含PD1AB-4的VH和VL氨基酸序列。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含SEQ ID NO:12的VH氨基酸序列和SEQ ID NO:9的VL氨基酸序列。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含PD1AB-5的VH和VL氨基酸序列。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含SEQ ID NO:13的VH氨基酸序列和SEQ ID NO:9的VL氨基酸序列。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含PD1AB-6的VH和VL氨基酸序列。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含SEQ ID NO:13的VH氨基酸序列和SEQ ID NO:8的VL氨基酸序列。在某些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体与PD-1多肽(例如，PD-1(例如人PD-1)的ECD)特异性结合，包含轻链和重链，其中所述轻链包含具有SEQ ID NO:41的氨基酸序列的恒定区。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含轻链和重链，其中所述重链包含具有SEQ ID NO:36的氨基酸序列的人IgG1 Fc区。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含轻链和重链，其中所述重链不包含具有SEQ IDNO:36的氨基酸序列的人IgG1 Fc区。在某些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含轻链和重链，其中所述重链包含具有SEQ ID NO:37的氨基酸序列的人IgG1-K322A Fc区。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含轻链和重链，其中所述重链包含具有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的人IgG4 Fc区。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含轻链和重链，其中所述重链包含具有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的人IgG4P Fc区。在又一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含轻链和重链，其中所述重链包含具有SEQ ID NO:40的氨基酸序列的人IgG4PE Fc区。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含轻链和重链，其中所述重链不包含具有SEQ ID NO:40的氨基酸序列的人IgG4PEFc区。在再一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含轻链和重链，其中所述轻链包含具有SEQ ID NO:41的氨基酸序列的恒定区；且所述重链包含具有选自SEQ ID NO:36-40的氨基酸序列的Fc区。
在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含轻链和重链，其中所述轻链包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含轻链和重链，其中所述重链包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含轻链和重链，其中所述重链包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含轻链和重链，其中所述重链包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列。在又一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含轻链和重链，其中所述重链包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列。在一个特定实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含轻链和重链，其中(i)所述轻链包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列；且(ii)所述重链包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列。在另一特定实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含轻链和重链，其中(i)所述轻链包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列；且(ii)所述重链包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列。在又一特定实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含轻链和重链，其中(i)所述轻链包含SEQ IDNO:31的氨基酸序列；且(ii)所述重链包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列。在再一特定实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体，所述抗体包含轻链和重链，其中(i)所述轻链包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列；且(ii)所述重链包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列。
在又一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含同例示抗体或功能片段之一竞争与本文提供的PD-1结合的抗体。这类抗体也可结合与本文例示的抗体之一相同的表位或结合重叠表位。预期与例示抗体竞争或结合相同表位的抗体及片段显示出类似的功能性质。例示抗原结合蛋白及片段包括具有本文提供的VH和VL区及CDR的那些，包括表1-6中的那些。因此，作为具体实例，本文提供的药物制剂中的抗体包括同包含以下的抗体竞争的那些：(a)针对表1-2中列出的抗体所列出的1、2、3、4、5或全部6个CDR；(b)选自针对表5-6中列出的抗体所列出的VH和VL区的VH和VL；或(c)包含如针对表5-6中列出的抗体指定的VH和VL的两条轻链和两条重链。在一些实施方案中，所述抗体是PD1AB-1。在一些实施方案中，所述抗体是PD1AB-2。在一些实施方案中，所述抗体是PD1AB-3。在一些实施方案中，所述抗体是PD1AB-4。在一些实施方案中，所述抗体是PD1AB-5。在一些实施方案中，所述抗体是PD1AB-6。
因此，因此，本文提供了包含抗PD-1抗体的药物制剂。在一些实施方案中，本文提供了包含抗PD-1抗体的药物制剂，所述抗PD-1抗体是PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6。在一些实施方案中，本文提供了包含抗PD-1抗体的药物制剂，所述抗PD-1抗体是PD1AB-1。在一些实施方案中，本文提供了包含抗PD-1抗体的药物制剂，所述抗PD-1抗体是PD1AB-2。在一些实施方案中，本文提供了包含抗PD-1抗体的药物制剂，所述抗PD-1抗体是PD1AB-3。在一些实施方案中，本文提供了包含抗PD-1抗体的药物制剂，所述抗PD-1抗体是PD1AB-4。在一些实施方案中，本文提供了包含抗PD-1抗体的药物制剂，所述抗PD-1抗体是PD1AB-5。在一些实施方案中，本文提供了包含抗PD-1抗体的药物制剂，所述抗PD-1抗体是PD1AB-6。本文还提供了包含抗PD-1抗体的抗原结合片段的药物制剂。在某些实施方案中，抗原结合片段是PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6抗体的片段。在一些实施方案中，本文提供了包含抗PD-1抗体片段的药物制剂，所述抗PD-1抗体片段是PD1AB-1的片段。在一些实施方案中，本文提供了包含抗PD-1抗体片段的药物制剂，所述抗PD-1抗体片段是PD1AB-2的片段。在一些实施方案中，本文提供了包含抗PD-1抗体片段的药物制剂，所述抗PD-1抗体片段是PD1AB-3的片段。在一些实施方案中，本文提供了包含抗PD-1抗体片段的药物制剂，所述抗PD-1抗体片段是PD1AB-4的片段。在一些实施方案中，本文提供了包含抗PD-1抗体片段的药物制剂，所述抗PD-1抗体片段是PD1AB-5的片段。在一些实施方案中，本文提供了包含抗PD-1抗体片段的药物制剂，所述抗PD-1抗体片段是PD1AB-6的片段。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂中的抗PD-1抗体或其抗原结合片段的VL包含PD1AB-1的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂中的抗PD-1抗体或其抗原结合片段的VH包含PD1AB-1的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3。在某些实施方案中，本文提供的药物制剂中的抗PD-1抗体或其抗原结合片段的VL包含PD1AB-1的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3，且本文提供的药物制剂中的抗PD-1抗体或其抗原结合片段的VH包含PD1AB-1的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂中的抗PD-1抗体或其抗原结合片段的VL包含PD1AB-2的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂中的抗PD-1抗体或其抗原结合片段的VH包含PD1AB-2的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3。在某些实施方案中，本文提供的药物制剂中的抗PD-1抗体或其抗原结合片段的VL包含PD1AB-2的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3，且本文提供的药物制剂中的抗PD-1抗体或其抗原结合片段的VH包含PD1AB-2的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂中的抗PD-1抗体或其抗原结合片段的VL包含PD1AB-3的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂中的抗PD-1抗体或其抗原结合片段的VH包含PD1AB-3的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3。在某些实施方案中，本文提供的药物制剂中的抗PD-1抗体或其抗原结合片段的VL包含PD1AB-3的VL CDR1、VLCDR2和VL CDR3，且本文提供的药物制剂中的抗PD-1抗体或其抗原结合片段的VH包含PD1AB-3的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂中的抗PD-1抗体或其抗原结合片段的VL包含PD1AB-4的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂中的抗PD-1抗体或其抗原结合片段的VH包含PD1AB-4的VHCDR1、VH CDR2和VH CDR3。在某些实施方案中，本文提供的药物制剂中的抗PD-1抗体或其抗原结合片段的VL包含PD1AB-4的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3，且本文提供的药物制剂中的抗PD-1抗体或其抗原结合片段的VH包含PD1AB-4的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂中的抗PD-1抗体或其抗原结合片段的VL包含PD1AB-5的VLCDR1、VL CDR2和VL CDR3。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂中的抗PD-1抗体或其抗原结合片段的VH包含PD1AB-5的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3。在某些实施方案中，本文提供的药物制剂中的抗PD-1抗体或其抗原结合片段的VL包含PD1AB-5的VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3，且本文提供的药物制剂中的抗PD-1抗体或其抗原结合片段的VH包含PD1AB-5的VHCDR1、VH CDR2和VH CDR3。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂中的抗PD-1抗体或其抗原结合片段的VL包含PD1AB-6的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3。在一些实施方案中，本文提供的药物制剂中的抗PD-1抗体或其抗原结合片段的VH包含PD1AB-6的VH CDR1、VH CDR2和VHCDR3。在某些实施方案中，本文提供的药物制剂中的抗PD-1抗体或其抗原结合片段的VL包含PD1AB-6的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3，且本文提供的药物制剂中的抗PD-1抗体或其抗原结合片段的VH包含PD1AB-6的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂中的抗PD-1抗体或其抗原结合片段的VL包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列。在另一实施方案中，本文提供的药物制剂中的抗PD-1抗体或其抗原结合片段的VH包含SEQ IDNO:13的氨基酸序列。在又一实施方案中，本文提供的药物制剂中的抗PD-1抗体或其抗原结合片段的VL包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列，且本文提供的药物制剂中的抗PD-1抗体或其抗原结合片段的VH包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列。在另一实施方案中，本文提供了包含抗PD-1抗体或其抗原结合片段的药物制剂，所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定区，所述轻链恒定区包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列。在又一实施方案中，本文提供了包含抗PD-1抗体或其抗原结合片段的药物制剂，所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段包含重链恒定区，所述重链恒定区包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列。在再一实施方案中，本文提供了包含抗PD-1抗体或其抗原结合片段的药物制剂，所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的轻链恒定区和包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列的重链恒定区。在一个实施方案中，本文提供了包含抗PD-1抗体或其抗原结合片段的药物制剂，所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的轻链。在另一实施方案中，本文提供了包含抗PD-1抗体或其抗原结合片段的药物制剂，所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的重链。在又一实施方案中，本文提供了包含抗PD-1抗体或其抗原结合片段的药物制剂，所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的轻链和包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的重链。在某些实施方案中，本文提供了包含抗PD-1抗体的药物制剂，所述抗PD-1抗体包含人IgG1恒定区。在具体的实施方案中，本文提供了包含抗PD-1抗体的药物制剂，所述抗PD-1抗体包含：包含K322A取代的IgG1恒定区。在一个实施方案中，本文提供了包含抗PD-1抗体的药物制剂，所述抗PD-1抗体是PD1AB-6-K3(PD1AB-6-K322A)。
在又一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含本文所述的抗体或其抗原结合片段，其与人PD-1或食蟹猴PD-1的区域(包括表位)结合。例如，在一些实施方案中，药物制剂的抗体与人PD-1(SEQ ID NO:42)的包含人PD-1的氨基酸残基33至109的区域结合。在再一方面，药物制剂的抗体与人PD-1的特定表位结合。
在某些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的残基100-109(SEQ ID NO:43)中的至少一个结合。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的残基100-105(SEQ ID NO:44)中的至少一个结合。在特定的实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与至少一个选自SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的N33、T51、S57、L100、N102、G103、R104、D105、H107和S109的残基结合。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与至少一个选自SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的L100、N102、G103、R104、D105、H107和S109的残基结合。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与两个或更多个选自SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的N33、T51、S57、L100、N102、G103、R104、D105、H107和S109的残基结合。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与三个或更多个选自SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的N33、T51、S57、L100、N102、G103、R104、D105、H107和S109的残基结合。在某些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与四个或更多个选自SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的N33、T51、S57、L100、N102、G103、R104、D105、H107和S109的残基结合。在一个实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与五个或更多个选自SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的N33、T51、S57、L100、N102、G103、R104、D105、H107和S109的残基结合。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与六个或更多个选自SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的N33、T51、S57、L100、N102、G103、R104、D105、H107和S109的残基结合。在又一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与七个或更多个选自SEQ IDNO:42的氨基酸序列内的N33、T51、S57、L100、N102、G103、R104、D105、H107和S109的残基结合。在再一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与八个或更多个选自SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的N33、T51、S57、L100、N102、G103、R104、D105、H107和S109的残基结合。在某些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与九个或更多个选自SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的N33、T51、S57、L100、N102、G103、R104、D105、H107和S109的残基结合。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与来自SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的N33、T51、S57、L100、N102、G103、R104、D105、H107和S109的所有十个残基结合。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的N33结合。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的T51结合。在特定的实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的S57结合。在一个具体实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的L100结合。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的N102结合。在其它实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的G103结合。在另一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的R104结合。在又一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的G103和R104结合。在再一实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的D105结合。在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的H107结合。在某些实施方案中，本文提供的各种药物制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段当结合于PD-1时与SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的S109结合。还涵盖上面提到的氨基酸PD-1结合位点中的两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或更多个的任意组合。
可在多种缓冲液中配制本文提供的制剂的抗体。在某些实施方案中，在选自乙酸盐缓冲液、组氨酸缓冲液、琥珀酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液和精氨酸缓冲液的缓冲液中配制抗体。在一些实施方案中，在乙酸盐缓冲液中配制抗体。在其它实施方案中，在组氨酸缓冲液中配制抗体。在某些实施方案中，在琥珀酸盐缓冲液中配制抗体。在另一实施方案中，在柠檬酸盐缓冲液中配制抗体。在一些实施方案中，在磷酸盐缓冲液中配制抗体。在其它实施方案中，在精氨酸缓冲液中配制抗体。在一些实施方案中，在一种以上选自乙酸盐缓冲液、组氨酸缓冲液、琥珀酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液和精氨酸缓冲液的缓冲液中配制抗体。在某些实施方案中，在两种选自乙酸盐缓冲液、组氨酸缓冲液、琥珀酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液和精氨酸缓冲液的缓冲液的混合物中配制抗体。两种缓冲液的示例性混合物包括但不限于组氨酸-精氨酸缓冲液、磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液和组氨酸-乙酸盐缓冲液等。
可在宽pH值范围内配制本文提供的抗体。在一些实施方案中，缓冲液的pH在1.0-14.0的范围内。在其它实施方案中，缓冲液的pH在4.0-6.5的范围内。还在其它实施方案中，缓冲液的pH在4.7-5.7的范围内。还在其它实施方案中，缓冲液的pH在5.2-5.8的范围内。在一个实施方案中，缓冲液的pH为约5.0。在另一实施方案中，缓冲液的pH为约5.2。在又一实施方案中，缓冲液的pH为约5.5。在又一实施方案中，缓冲液的pH为约5.6。在又一实施方案中，缓冲液的pH为约5.8。在再一实施方案中，缓冲液的pH为约6.0。在另一实施方案中，缓冲液的pH为约6.5。在一个实施方案中，缓冲液的pH为5.0。在另一实施方案中，缓冲液的pH为5.2。在又一实施方案中，缓冲液的pH为5.5。在又一实施方案中，缓冲液的pH为5.6。在又一实施方案中，缓冲液的pH为5.8。在再一实施方案中，缓冲液的pH为6.0。在另一实施方案中，缓冲液的pH为6.5。
在某些实施方案中，可在乙酸盐缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为约5.0。在一些实施方案中，在乙酸盐缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为约5.2。在其它实施方案中，在乙酸盐缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为约5.5。在其它实施方案中，在乙酸盐缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为约5.6。在其它实施方案中，在乙酸盐缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为约5.8。还在其它实施方案中，在乙酸盐缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为约6.0。仍在其它实施方案中，在乙酸盐缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为约6.5。在某些实施方案中，可在乙酸盐缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为5.0。在一些实施方案中，在乙酸盐缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为5.2。在其它实施方案中，在乙酸盐缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为5.5。在其它实施方案中，在乙酸盐缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为5.6。在其它实施方案中，在乙酸盐缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为5.8。还在其它实施方案中，在乙酸盐缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为6.0。仍在其它实施方案中，在乙酸盐缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为6.5。
在某些实施方案中，在组氨酸缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为约5.0。在一些实施方案中，在组氨酸缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为约5.2。在其它实施方案中，在组氨酸缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为约5.5。在其它实施方案中，在组氨酸缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为约5.6。在其它实施方案中，在组氨酸缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为约5.8。还在其它实施方案中，在组氨酸缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为约6.0。仍在其它实施方案中，在组氨酸缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为约6.5。在某些实施方案中，在组氨酸缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为5.0。在一些实施方案中，在组氨酸缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为5.2。在其它实施方案中，在组氨酸缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为5.5。在其它实施方案中，在组氨酸缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为5.6。在其它实施方案中，在组氨酸缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为5.8。还在其它实施方案中，在组氨酸缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为6.0。仍在其它实施方案中，在组氨酸缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为6.5。
在某些实施方案中，在琥珀酸盐缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为约5.0。在一些实施方案中，在琥珀酸盐缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为约5.2。在其它实施方案中，在琥珀酸盐缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为约5.5。在其它实施方案中，在琥珀酸盐缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为约5.6。在其它实施方案中，在琥珀酸盐缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为约5.8。还在其它实施方案中，在琥珀酸盐缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为约6.0。仍在其它实施方案中，在琥珀酸盐缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为约6.5。在某些实施方案中，在琥珀酸盐缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为5.0。在一些实施方案中，在琥珀酸盐缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为5.2。在其它实施方案中，在琥珀酸盐缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为5.5。在其它实施方案中，在琥珀酸盐缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为5.6。在其它实施方案中，在琥珀酸盐缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为5.8。还在其它实施方案中，在琥珀酸盐缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为6.0。仍在其它实施方案中，在琥珀酸盐缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为6.5。
在某些实施方案中，在柠檬酸盐缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为约5.0。在一些实施方案中，在柠檬酸盐缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为约5.2。在其它实施方案中，在柠檬酸盐缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为约5.5。在其它实施方案中，在柠檬酸盐缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为约5.6。在其它实施方案中，在柠檬酸盐缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为约5.8。还在其它实施方案中，在柠檬酸盐缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为约6.0。仍在其它实施方案中，在柠檬酸盐缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为约6.5。在某些实施方案中，在柠檬酸盐缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为5.0。在一些实施方案中，在柠檬酸盐缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为5.2。在其它实施方案中，在柠檬酸盐缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为5.5。在其它实施方案中，在柠檬酸盐缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为5.6。在其它实施方案中，在柠檬酸盐缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为5.8。还在其它实施方案中，在柠檬酸盐缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为6.0。仍在其它实施方案中，在柠檬酸盐缓冲液中配制本文提供的抗体，且缓冲液的pH为6.5。
在其它实施方案中，本文提供的抗体的制剂含有0.1mM、0.2mM、0.3mM、0.4mM、0.5mM、0.6mM、0.7mM、0.8mM、0.9mM、1mM、2mM、3mM、4mM、5mM、6mM、7mM、8mM、9mM、10mM、12.5mM、15mM、17.5mM、20mM、25mM、30mM、35mM、40mM、50mM、60mM、70mM、80mM、90mM、100mM、150mM、200mM、300mM、400mM、500mM、1M或以上本文提供的缓冲液。在一些实施方案中，本文提供的抗体的制剂含有0.1-0.5mM、0.5-1mM、1-5mM、5-10mM、10-50mM、50-100mM、100-500mM、500mM-1M或以上本文提供的缓冲液。在一些实施方案中，本文提供的抗体的制剂含有0.1mM-1M的本文提供的缓冲液。在其它实施方案中，本文提供的抗体的制剂含有1-100mM的本文提供的缓冲液。在其它实施方案中，本文提供的抗体的制剂含有10mM的本文提供的缓冲液。
在一个实施方案中，所述制剂包含浓度为0.1mM至1M的乙酸盐缓冲液。在另一实施方案中，所述制剂包含浓度为0.1mM至100mM的乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂包含浓度为0.1mM至10mM的乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂包含浓度为1mM至100mM的乙酸盐缓冲液。在另一实施方案中，所述制剂包含浓度为1mM至10mM的乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂包含浓度为5mM至15mM的乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂包含浓度为5mM的乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂包含浓度为15mM的乙酸盐缓冲液。在另一实施方案中，所述制剂包含浓度为10mM的乙酸盐缓冲液。
在一个实施方案中，所述制剂包含浓度为0.1mM至1M的琥珀酸盐缓冲液。在另一实施方案中，所述制剂包含浓度为0.1mM至100mM的琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂包含浓度为0.1mM至10mM的琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂包含浓度为1mM至100mM的琥珀酸盐缓冲液。在另一实施方案中，所述制剂包含浓度为1mM至10mM的琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂包含浓度为5mM至15mM的琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂包含浓度为5mM的琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂包含浓度为15mM的琥珀酸盐缓冲液。在另一实施方案中，所述制剂包含浓度为10mM的琥珀酸盐缓冲液。
在一个实施方案中，所述制剂包含浓度为0.1mM至1M的组氨酸缓冲液。在另一实施方案中，所述制剂包含浓度为0.1mM至100mM的组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂包含浓度为0.1mM至10mM的组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂包含浓度为1mM至100mM的组氨酸缓冲液。在另一实施方案中，所述制剂包含浓度为1mM至10mM的组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂包含浓度为5mM至15mM的组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂包含浓度为5mM的组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂包含浓度为15mM的组氨酸缓冲液。在另一实施方案中，所述制剂包含浓度为10mM的组氨酸缓冲液。
在一个实施方案中，所述制剂包含浓度为0.1mM至1M的柠檬酸盐缓冲液。在另一实施方案中，所述制剂包含浓度为0.1mM至100mM的柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂包含浓度为0.1mM至10mM的柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂包含浓度为1mM至100mM的柠檬酸盐缓冲液。在另一实施方案中，所述制剂包含浓度为1mM至10mM的柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂包含浓度为5mM至15mM的柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂包含浓度为5mM的柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂包含浓度为15mM的柠檬酸盐缓冲液。在另一实施方案中，所述制剂包含浓度为10mM的柠檬酸盐缓冲液。
在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含浓度为5mM至15mM的乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含浓度为10mM的乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含浓度为5mM至15mM的乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含浓度为10mM的乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 5.2和5.8的范围内，且所述制剂包含乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 5.2和5.8的范围内，且所述制剂包含浓度为5mM至15mM的乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 5.2和5.8的范围内，且所述制剂包含浓度为10mM的乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含浓度为5mM至15mM的乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含浓度为10mM的乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含浓度为5mM至15mM的乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含浓度为10mM的乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，乙酸盐缓冲液是存在于所述制剂中的仅有的缓冲液。
在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含浓度为5mM至15mM的琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含浓度为10mM的琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含浓度为5mM至15mM的琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含浓度为10mM的琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 5.2和5.8的范围内，且所述制剂包含琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 5.2和5.8的范围内，且所述制剂包含浓度为5mM至15mM的琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 5.2和5.8的范围内，且所述制剂包含浓度为10mM的琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含浓度为5mM至15mM的琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含浓度为10mM的琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含浓度为5mM至15mM的琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含浓度为10mM的琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，琥珀酸盐缓冲液是存在于所述制剂中的仅有的缓冲液。
在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含浓度为5mM至15mM的组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含浓度为10mM的组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含浓度为5mM至15mM的组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含浓度为10mM的组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 5.2和5.8的范围内，且所述制剂包含组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 5.2和5.8的范围内，且所述制剂包含浓度为5mM至15mM的组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 5.2和5.8的范围内，且所述制剂包含浓度为10mM的组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含浓度为5mM至15mM的组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含浓度为10mM的组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含浓度为5mM至15mM的组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含浓度为10mM的组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，组氨酸缓冲液是存在于所述制剂中的仅有的缓冲液。
在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含浓度为5mM至15mM的柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含浓度为10mM的柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含浓度为5mM至15mM的柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含浓度为10mM的柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 5.2和5.8的范围内，且所述制剂包含柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 5.2和5.8的范围内，且所述制剂包含浓度为5mM至15mM的柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 5.2和5.8的范围内，且所述制剂包含浓度为10mM的柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含浓度为5mM至15mM的柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含浓度为10mM的柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含浓度为5mM至15mM的柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含浓度为10mM的柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，柠檬酸盐缓冲液是存在于所述制剂中的仅有的缓冲液。
在本文提供的药物制剂的各种实施方案中，所述制剂进一步包含表面活性剂，包括但不限于聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60和聚山梨醇酯80。在一个实施方案中，所述表面活性剂是聚山梨醇酯20。在另一实施方案中，所述表面活性剂是聚山梨醇酯40。在一个实施方案中，所述表面活性剂是聚山梨醇酯60。在另一实施方案中，所述表面活性剂是聚山梨醇酯80。在一些实施方案中，本文提供的抗体的制剂含有0.001％、0.002％、0.003％、0.004％、0.005％、0.006％、0.007％、0.008％、0.009％、0.01％、0.015％、0.02％、0.025％、0.03％、0.035％、0.04％、0.045％、0.05％、0.055％、0.06％、0.065％、0.07％、0.075％、0.08％、0.085％、0.09％、0.095％、0.1％、0.15％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％(w/v)或更多的聚山梨醇酯20。在其它实施方案中，本文提供的抗体的制剂含有0.001-0.005％、0.005-0.01％、0.01-0.05％、0.05-0.1％、0.1-0.5％(w/v)或更多的聚山梨醇酯20。在一个具体实施方案中，本文提供的抗体的制剂含有0.005％(w/v)的聚山梨醇酯20。在一些实施方案中，本文提供的抗体的制剂含有0.001％、0.002％、0.003％、0.004％、0.005％、0.006％、0.007％、0.008％、0.009％、0.01％、0.015％、0.02％、0.025％、0.03％、0.035％、0.04％、0.045％、0.05％、0.055％、0.06％、0.065％、0.07％、0.075％、0.08％、0.085％、0.09％、0.095％、0.1％、0.15％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％(w/v)或更多的聚山梨醇酯40。在其它实施方案中，本文提供的抗体的制剂含有0.001-0.005％、0.005-0.01％、0.01-0.05％、0.05-0.1％、0.1-0.5％(w/v)或更多的聚山梨醇酯40。在一个具体实施方案中，本文提供的抗体的制剂含有0.005％(w/v)的聚山梨醇酯40。在一些实施方案中，本文提供的抗体的制剂含有0.001％、0.002％、0.003％、0.004％、0.005％、0.006％、0.007％、0.008％、0.009％、0.01％、0.015％、0.02％、0.025％、0.03％、0.035％、0.04％、0.045％、0.05％、0.055％、0.06％、0.065％、0.07％、0.075％、0.08％、0.085％、0.09％、0.095％、0.1％、0.15％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％(w/v)或更多的聚山梨醇酯60。在其它实施方案中，本文提供的抗体的制剂含有0.001-0.005％、0.005-0.01％、0.01-0.05％、0.05-0.1％、0.1-0.5％(w/v)或更多的聚山梨醇酯60。在一个具体实施方案中，本文提供的抗体的制剂含有0.005％(w/v)的聚山梨醇酯60。在一些实施方案中，本文提供的抗体的制剂含有0.001％、0.002％、0.003％、0.004％、0.005％、0.006％、0.007％、0.008％、0.009％、0.01％、0.015％、0.02％、0.025％、0.03％、0.035％、0.04％、0.045％、0.05％、0.055％、0.06％、0.065％、0.07％、0.075％、0.08％、0.085％、0.09％、0.095％、0.1％、0.15％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％(w/v)或更多的聚山梨醇酯80。在其它实施方案中，本文提供的抗体的制剂含有0.001-0.005％、0.005-0.01％、0.01-0.05％、0.05-0.1％、0.1-0.5％(w/v)或更多的聚山梨醇酯80。在一个具体实施方案中，本文提供的抗体的制剂含有0.005％(w/v)的聚山梨醇酯80。
在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.005-0.015％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.005-0.015％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.005-0.015％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.005-0.015％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.005-0.015％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.005％(w/v)。
在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为5mM至15mM的乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为10mM的乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为5mM至15mM的乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为10mM的乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 5.2和5.8的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 5.2和5.8的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为5mM至15mM的乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 5.2和5.8的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为10mM的乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为5mM至15mM的乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为10mM的乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为5mM至15mM的乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为10mM的乙酸盐缓冲液。在一个实施方案中，乙酸盐缓冲液是存在于所述制剂中的仅有的缓冲液。在一个实施方案中，所述表面活性剂是聚山梨醇酯。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-20。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-40。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-60。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-80。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.005-0.015％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.005-0.015％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.005-0.015％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.005-0.015％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.005-0.015％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.005％(w/v)。
在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为5mM至15mM的琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为10mM的琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为5mM至15mM的琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为10mM的琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 5.2和5.8的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 5.2和5.8的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为5mM至15mM的琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 5.2和5.8的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为10mM的琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为5mM至15mM的琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为10mM的琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为5mM至15mM的琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为10mM的琥珀酸盐缓冲液。在一个实施方案中，琥珀酸盐缓冲液是存在于所述制剂中的仅有的缓冲液。在一个实施方案中，所述表面活性剂是聚山梨醇酯。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-20。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-40。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-60。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-80。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.005-0.015％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.005-0.015％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.005-0.015％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.005-0.015％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.005-0.015％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.005％(w/v)。
在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为5mM至15mM的组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为10mM的组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为5mM至15mM的组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为10mM的组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 5.2和5.8的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 5.2和5.8的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为5mM至15mM的组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 5.2和5.8的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为10mM的组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为5mM至15mM的组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为10mM的组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为5mM至15mM的组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为10mM的组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，组氨酸缓冲液是存在于所述制剂中的仅有的缓冲液。在一个实施方案中，所述表面活性剂是聚山梨醇酯。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-20。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-40。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-60。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-80。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.005-0.015％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.005-0.015％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.005-0.015％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.005-0.015％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.005-0.015％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.005％(w/v)。
在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为5mM至15mM的柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为10mM的柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为5mM至15mM的柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为10mM的柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 5.2和5.8的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 5.2和5.8的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为5mM至15mM的柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 5.2和5.8的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为10mM的柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为5mM至15mM的柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为10mM的柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为5mM至15mM的柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，和(iii)浓度为10mM的柠檬酸盐缓冲液。在一个实施方案中，柠檬酸盐缓冲液是存在于所述制剂中的仅有的缓冲液。在一个实施方案中，所述表面活性剂是聚山梨醇酯。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-20。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-40。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-60。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-80。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.005-0.015％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.005-0.015％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.005-0.015％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.005-0.015％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.005-0.015％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.005％(w/v)。
在本文提供的药物制剂的各种实施方案中，所述制剂进一步包含多元醇。在一些实施方案中，所述多元醇选自糖、糖醇和糖酸。在一个实施方案中，所述多元醇是糖。在另一实施方案中，所述多元醇是糖醇。在又一实施方案中，所述多元醇是糖酸。多元醇的非限制性实例包括蔗糖、麦芽糖、海藻糖、甘露糖醇、山梨糖醇等。在一个具体实施方案中，所述多元醇是蔗糖。在一些实施方案中，本文提供的抗体的制剂含有1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、12.5％、15％、17.5％、20％、25％、30％、35％、40％、50％(w/v)或更多的蔗糖。在某些实施方案中，本文提供的抗体的制剂含有1-5％、5-10％、10-15％、15-20％、20-25％、25-30％、30-35％、35-40％、40-45％、45-50％(w/v)或更多的蔗糖。在一个实施方案中，蔗糖的浓度为5-10％(w/v)。在一个实施方案中，蔗糖的浓度为8-9％(w/v)。在另一实施方案中，蔗糖的浓度为9％(w/v)。在另一实施方案中，蔗糖的浓度为约8.5％(w/v)。在另一实施方案中，蔗糖的浓度为8.5％(w/v)。在一个具体实施方案中，所述多元醇是麦芽糖。在一些实施方案中，本文提供的抗体的制剂含有1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、12.5％、15％、17.5％、20％、25％、30％、35％、40％、50％(w/v)或更多的麦芽糖。在某些实施方案中，本文提供的抗体的制剂含有1-5％、5-10％、10-15％、15-20％、20-25％、25-30％、30-35％、35-40％、40-45％、45-50％(w/v)或更多的麦芽糖。在一个实施方案中，麦芽糖的浓度为5-10％(w/v)。在一个实施方案中，麦芽糖的浓度为8-9％(w/v)。在另一实施方案中，麦芽糖的浓度为9％(w/v)。在另一实施方案中，麦芽糖的浓度为约8.5％(w/v)。在另一实施方案中，麦芽糖的浓度为8.5％(w/v)。在一个具体实施方案中，所述多元醇是海藻糖。在一些实施方案中，本文提供的抗体的制剂含有1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、12.5％、15％、17.5％、20％、25％、30％、35％、40％、50％(w/v)或更多的海藻糖。在某些实施方案中，本文提供的抗体的制剂含有1-5％、5-10％、10-15％、15-20％、20-25％、25-30％、30-35％、35-40％、40-45％、45-50％(w/v)或更多的海藻糖。在一个实施方案中，海藻糖的浓度为5-10％(w/v)。在一个实施方案中，海藻糖的浓度为8-9％(w/v)。在另一实施方案中，海藻糖的浓度为9％(w/v)。在另一实施方案中，海藻糖的浓度为约8.5％(w/v)。在另一实施方案中，海藻糖的浓度为8.5％(w/v)。在一个具体实施方案中，所述多元醇是甘露糖醇。在一些实施方案中，本文提供的抗体的制剂含有1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、12.5％、15％、17.5％、20％、25％、30％、35％、40％、50％(w/v)或更多的甘露糖醇。在某些实施方案中，本文提供的抗体的制剂含有1-5％、5-10％、10-15％、15-20％、20-25％、25-30％、30-35％、35-40％、40-45％、45-50％(w/v)或更多的甘露糖醇。在一个实施方案中，甘露糖醇的浓度为5-10％(w/v)。在一个实施方案中，甘露糖醇的浓度为8-9％(w/v)。在另一实施方案中，甘露糖醇的浓度为9％(w/v)。在另一实施方案中，甘露糖醇的浓度为约8.5％(w/v)。在另一实施方案中，甘露糖醇的浓度为8.5％(w/v)。在一个具体实施方案中，所述多元醇是山梨糖醇。在一些实施方案中，本文提供的抗体的制剂含有1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、12.5％、15％、17.5％、20％、25％、30％、35％、40％、50％(w/v)或更多的山梨糖醇。在某些实施方案中，本文提供的抗体的制剂含有1-5％、5-10％、10-15％、15-20％、20-25％、25-30％、30-35％、35-40％、40-45％、45-50％(w/v)或更多的山梨糖醇。在一个实施方案中，山梨糖醇的浓度为5-10％(w/v)。在一个实施方案中，山梨糖醇的浓度为8-9％(w/v)。在另一实施方案中，山梨糖醇的浓度为9％(w/v)。在另一实施方案中，山梨糖醇的浓度为约8.5％(w/v)。在另一实施方案中，山梨糖醇的浓度为8.5％(w/v)。
在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)乙酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为5mM至15mM的乙酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为10mM的乙酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)乙酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为5mM至15mM的乙酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为10mM的乙酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 5.2和5.8的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)乙酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 5.2和5.8的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为5mM至15mM的乙酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 5.2和5.8的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为10mM的乙酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)乙酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为5mM至15mM的乙酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为10mM的乙酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)乙酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为5mM至15mM的乙酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为10mM的乙酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，乙酸盐缓冲液是存在于所述制剂中的仅有的缓冲液。在某些实施方案中，所述多元醇是糖、糖醇或糖酸。在一个实施方案中，所述多元醇是糖。在另一实施方案中，所述多元醇是糖醇。在又一实施方案中，所述多元醇是糖酸。在一个具体实施方案中，所述多元醇是蔗糖。在一个实施方案中，蔗糖的浓度为5-10％(w/v)。在一个实施方案中，蔗糖的浓度为8-9％(w/v)。在另一实施方案中，蔗糖的浓度为9％(w/v)。在另一实施方案中，蔗糖的浓度为约8.5％(w/v)。在另一实施方案中，蔗糖的浓度为8.5％(w/v)。在一个具体实施方案中，所述多元醇是麦芽糖。在一个实施方案中，麦芽糖的浓度为5-10％(w/v)。在一个实施方案中，麦芽糖的浓度为8-9％(w/v)。在另一实施方案中，麦芽糖的浓度为9％(w/v)。在另一实施方案中，麦芽糖的浓度为约8.5％(w/v)。在另一实施方案中，麦芽糖的浓度为8.5％(w/v)。在一个具体实施方案中，所述多元醇是海藻糖。在一个实施方案中，海藻糖的浓度为5-10％(w/v)。在一个实施方案中，海藻糖的浓度为8-9％(w/v)。在另一实施方案中，海藻糖的浓度为9％(w/v)。在另一实施方案中，海藻糖的浓度为约8.5％(w/v)。在另一实施方案中，海藻糖的浓度为8.5％(w/v)。在一个具体实施方案中，所述多元醇是甘露糖醇。在一个实施方案中，甘露糖醇的浓度为5-10％(w/v)。在一个实施方案中，甘露糖醇的浓度为8-9％(w/v)。在另一实施方案中，甘露糖醇的浓度为9％(w/v)。在另一实施方案中，甘露糖醇的浓度为约8.5％(w/v)。在另一实施方案中，甘露糖醇的浓度为8.5％(w/v)。在一个具体实施方案中，所述多元醇是山梨糖醇。在一个实施方案中，山梨糖醇的浓度为5-10％(w/v)。在一个实施方案中，山梨糖醇的浓度为8-9％(w/v)。在另一实施方案中，山梨糖醇的浓度为9％(w/v)。在另一实施方案中，山梨糖醇的浓度为约8.5％(w/v)。在另一实施方案中，山梨糖醇的浓度为8.5％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂是聚山梨醇酯。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-20。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-40。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-60。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-80。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.005-0.015％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.005-0.015％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.005-0.015％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.005-0.015％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.005-0.015％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.005％(w/v)。
在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)琥珀酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为5mM至15mM的琥珀酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为10mM的琥珀酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)琥珀酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为5mM至15mM的琥珀酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为10mM的琥珀酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)琥珀酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 5.2和5.8的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)琥珀酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 5.2和5.8的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为5mM至15mM的琥珀酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH5.2和5.8的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为10mM的琥珀酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为5mM至15mM的琥珀酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为10mM的琥珀酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)琥珀酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为5mM至15mM的琥珀酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为10mM的琥珀酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，琥珀酸盐缓冲液是存在于所述制剂中的仅有的缓冲液。在某些实施方案中，所述多元醇是糖、糖醇或糖酸。在一个实施方案中，所述多元醇是糖。在另一实施方案中，所述多元醇是糖醇。在又一实施方案中，所述多元醇是糖酸。在一个具体实施方案中，所述多元醇是蔗糖。在一个实施方案中，蔗糖的浓度为5-10％(w/v)。在一个实施方案中，蔗糖的浓度为8-9％(w/v)。在另一实施方案中，蔗糖的浓度为9％(w/v)。在另一实施方案中，蔗糖的浓度为约8.5％(w/v)。在另一实施方案中，蔗糖的浓度为8.5％(w/v)。在一个具体实施方案中，所述多元醇是麦芽糖。在一个实施方案中，麦芽糖的浓度为5-10％(w/v)。在一个实施方案中，麦芽糖的浓度为8-9％(w/v)。在另一实施方案中，麦芽糖的浓度为9％(w/v)。在另一实施方案中，麦芽糖的浓度为约8.5％(w/v)。在另一实施方案中，麦芽糖的浓度为8.5％(w/v)。在一个具体实施方案中，所述多元醇是海藻糖。在一个实施方案中，海藻糖的浓度为5-10％(w/v)。在一个实施方案中，海藻糖的浓度为8-9％(w/v)。在另一实施方案中，海藻糖的浓度为9％(w/v)。在另一实施方案中，海藻糖的浓度为约8.5％(w/v)。在另一实施方案中，海藻糖的浓度为8.5％(w/v)。在一个具体实施方案中，所述多元醇是甘露糖醇。在一个实施方案中，甘露糖醇的浓度为5-10％(w/v)。在一个实施方案中，甘露糖醇的浓度为8-9％(w/v)。在另一实施方案中，甘露糖醇的浓度为9％(w/v)。在另一实施方案中，甘露糖醇的浓度为约8.5％(w/v)。在另一实施方案中，甘露糖醇的浓度为8.5％(w/v)。在一个具体实施方案中，所述多元醇是山梨糖醇。在一个实施方案中，山梨糖醇的浓度为5-10％(w/v)。在一个实施方案中，山梨糖醇的浓度为8-9％(w/v)。在另一实施方案中，山梨糖醇的浓度为9％(w/v)。在另一实施方案中，山梨糖醇的浓度为约8.5％(w/v)。在另一实施方案中，山梨糖醇的浓度为8.5％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂是聚山梨醇酯。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-20。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-40。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-60。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-80。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.005-0.015％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.005-0.015％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.005-0.015％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.005-0.015％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.005-0.015％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.005％(w/v)。
在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)组氨酸缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为5mM至15mM的组氨酸缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为10mM的组氨酸缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)组氨酸缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为5mM至15mM的组氨酸缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为10mM的组氨酸缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 5.2和5.8的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)组氨酸缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 5.2和5.8的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为5mM至15mM的组氨酸缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 5.2和5.8的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为10mM的组氨酸缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)组氨酸缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为5mM至15mM的组氨酸缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为10mM的组氨酸缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)组氨酸缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为5mM至15mM的组氨酸缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为10mM的组氨酸缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，组氨酸缓冲液是存在于所述制剂中的仅有的缓冲液。在某些实施方案中，所述多元醇是糖、糖醇或糖酸。在一个实施方案中，所述多元醇是糖。在另一实施方案中，所述多元醇是糖醇。在又一实施方案中，所述多元醇是糖酸。在一个具体实施方案中，所述多元醇是蔗糖。在一个实施方案中，蔗糖的浓度为5-10％(w/v)。在一个实施方案中，蔗糖的浓度为8-9％(w/v)。在另一实施方案中，蔗糖的浓度为9％(w/v)。在另一实施方案中，蔗糖的浓度为约8.5％(w/v)。在另一实施方案中，蔗糖的浓度为8.5％(w/v)。在一个具体实施方案中，所述多元醇是麦芽糖。在一个实施方案中，麦芽糖的浓度为5-10％(w/v)。在一个实施方案中，麦芽糖的浓度为8-9％(w/v)。在另一实施方案中，麦芽糖的浓度为9％(w/v)。在另一实施方案中，麦芽糖的浓度为约8.5％(w/v)。在另一实施方案中，麦芽糖的浓度为8.5％(w/v)。在一个具体实施方案中，所述多元醇是海藻糖。在一个实施方案中，海藻糖的浓度为5-10％(w/v)。在一个实施方案中，海藻糖的浓度为8-9％(w/v)。在另一实施方案中，海藻糖的浓度为9％(w/v)。在另一实施方案中，海藻糖的浓度为约8.5％(w/v)。在另一实施方案中，海藻糖的浓度为8.5％(w/v)。在一个具体实施方案中，所述多元醇是甘露糖醇。在一个实施方案中，甘露糖醇的浓度为5-10％(w/v)。在一个实施方案中，甘露糖醇的浓度为8-9％(w/v)。在另一实施方案中，甘露糖醇的浓度为9％(w/v)。在另一实施方案中，甘露糖醇的浓度为约8.5％(w/v)。在另一实施方案中，甘露糖醇的浓度为8.5％(w/v)。在一个具体实施方案中，所述多元醇是山梨糖醇。在一个实施方案中，山梨糖醇的浓度为5-10％(w/v)。在一个实施方案中，山梨糖醇的浓度为8-9％(w/v)。在另一实施方案中，山梨糖醇的浓度为9％(w/v)。在另一实施方案中，山梨糖醇的浓度为约8.5％(w/v)。在另一实施方案中，山梨糖醇的浓度为8.5％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂是聚山梨醇酯。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-20。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-40。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-60。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-80。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.005-0.015％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.005-0.015％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.005-0.015％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.005-0.015％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.005-0.015％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.005％(w/v)。
在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)柠檬酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为5mM至15mM的柠檬酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4和6.5的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为10mM的柠檬酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)柠檬酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为5mM至15mM的柠檬酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 4.7和5.7的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为10mM的柠檬酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 5.2和5.8的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)柠檬酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 5.2和5.8的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为5mM至15mM的柠檬酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH在pH 5.2和5.8的范围内，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为10mM的柠檬酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)柠檬酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为5mM至15mM的柠檬酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH为约5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为10mM的柠檬酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)柠檬酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为5mM至15mM的柠檬酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，所述制剂的pH为5.2，且所述制剂包含(i)本文提供的PD-1抗体或抗原结合片段，(ii)表面活性剂，(iii)浓度为10mM的柠檬酸盐缓冲液，和(iv)多元醇。在一个实施方案中，柠檬酸盐缓冲液是存在于所述制剂中的仅有的缓冲液。在某些实施方案中，所述多元醇是糖、糖醇或糖酸。在一个实施方案中，所述多元醇是糖。在另一实施方案中，所述多元醇是糖醇。在又一实施方案中，所述多元醇是糖酸。在一个具体实施方案中，所述多元醇是蔗糖。在一个实施方案中，蔗糖的浓度为5-10％(w/v)。在一个实施方案中，蔗糖的浓度为8-9％(w/v)。在另一实施方案中，蔗糖的浓度为9％(w/v)。在另一实施方案中，蔗糖的浓度为约8.5％(w/v)。在另一实施方案中，蔗糖的浓度为8.5％(w/v)。在一个具体实施方案中，所述多元醇是麦芽糖。在一个实施方案中，麦芽糖的浓度为5-10％(w/v)。在一个实施方案中，麦芽糖的浓度为8-9％(w/v)。在另一实施方案中，麦芽糖的浓度为9％(w/v)。在另一实施方案中，麦芽糖的浓度为约8.5％(w/v)。在另一实施方案中，麦芽糖的浓度为8.5％(w/v)。在一个具体实施方案中，所述多元醇是海藻糖。在一个实施方案中，海藻糖的浓度为5-10％(w/v)。在一个实施方案中，海藻糖的浓度为8-9％(w/v)。在另一实施方案中，海藻糖的浓度为9％(w/v)。在另一实施方案中，海藻糖的浓度为约8.5％(w/v)。在另一实施方案中，海藻糖的浓度为8.5％(w/v)。在一个具体实施方案中，所述多元醇是甘露糖醇。在一个实施方案中，甘露糖醇的浓度为5-10％(w/v)。在一个实施方案中，甘露糖醇的浓度为8-9％(w/v)。在另一实施方案中，甘露糖醇的浓度为9％(w/v)。在另一实施方案中，甘露糖醇的浓度为约8.5％(w/v)。在另一实施方案中，甘露糖醇的浓度为8.5％(w/v)。在一个具体实施方案中，所述多元醇是山梨糖醇。在一个实施方案中，山梨糖醇的浓度为5-10％(w/v)。在一个实施方案中，山梨糖醇的浓度为8-9％(w/v)。在另一实施方案中，山梨糖醇的浓度为9％(w/v)。在另一实施方案中，山梨糖醇的浓度为约8.5％(w/v)。在另一实施方案中，山梨糖醇的浓度为8.5％(w/v)。在另一实施方案中，蔗糖的浓度为8.5％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂是聚山梨醇酯。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-20。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-40。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-60。在一个实施方案中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯-80。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.005-0.015％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.005-0.015％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-20的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.005-0.015％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-40的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.005-0.015％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-60的浓度为0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.001-0.1％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.001-0.01％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.005-0.015％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.05％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为约0.005％(w/v)。在一个实施方案中，聚山梨醇酯-80的浓度为0.005％(w/v)。
在具体的实施方案中，本文提供了包含与PD-1结合的抗体的药物制剂，其中所述制剂的pH为5.2，并且包含(i)10mM乙酸钠缓冲液，(ii)8.5％(w/v)蔗糖，和(iii)0.005％(w/v)聚山梨醇酯-80。在另一具体实施方案中，本文提供了包含与PD-1结合的抗原结合片段的药物制剂，其中所述制剂的pH为5.2，并且包含(i)10mM乙酸钠缓冲液，(ii)8.5％(w/v)蔗糖，和(iii)0.005％(w/v)聚山梨醇酯-80。
在某些实施方案中，本文提供的抗体的制剂含有1mg/mL、2mg/mL、3mg/mL、4mg/mL、5mg/mL、6mg/mL、7mg/mL、8mg/mL、9mg/mL、10mg/mL、12.5mg/mL、15mg/mL、17.5mg/mL、20mg/mL、25mg/mL、30mg/mL、35/mg/mL、40mg/mL、50mg/mL、60mg/mL、70mg/mL、80mg/mL、90mg/mL、100mg/mL、125mg/mL、150mg/mL、200mg/mL、250mg/mL、300mg/mL、400mg/mL、500mg/mL或以上的抗体。
在一些实施方案中，本文提供的抗体的制剂含有125mg/ml抗体、10mM乙酸盐缓冲液(pH 5.2)、8.5％(w/v)蔗糖和0.005％(w/v)的聚山梨醇酯80。在一个实施方案中，本文提供的抗体的制剂含有125mg/mL的PD1AB-1、10mM乙酸盐缓冲液(pH 5.2)、8.5％(w/v)蔗糖和0.005％(w/v)的聚山梨醇酯80。在另一实施方案中，本文提供的抗体的制剂含有125mg/mL的PD1AB-2、10mM乙酸盐缓冲液(pH 5.2)、8.5％(w/v)蔗糖和0.005％(w/v)的聚山梨醇酯80。在又一实施方案中，本文提供的抗体的制剂含有125mg/mL的PD1AB-3、10mM乙酸盐缓冲液(pH 5.2)、8.5％(w/v)蔗糖和0.005％(w/v)的聚山梨醇酯80。在再一实施方案中，本文提供的抗体的制剂含有125mg/mL的PD1AB-4、10mM乙酸盐缓冲液(pH 5.2)、8.5％(w/v)蔗糖和0.005％(w/v)的聚山梨醇酯80。在一个实施方案中，本文提供的抗体的制剂含有125mg/mL的PD1AB-5、10mM乙酸盐缓冲液(pH 5.2)、8.5％(w/v)蔗糖和0.005％(w/v)的聚山梨醇酯80。在另一实施方案中，本文提供的抗体的制剂含有125mg/mL的PD1AB-6、10mM乙酸盐缓冲液(pH 5.2)、8.5％(w/v)蔗糖和0.005％(w/v)的聚山梨醇酯80。在又一实施方案中，本文提供的抗体的制剂含有125mg/mL的PD1AB-6-K3、10mM乙酸盐缓冲液(pH 5.2)、8.5％(w/v)蔗糖和0.005％(w/v)的聚山梨醇酯80。在再一实施方案中，本文提供的抗体的制剂含有125mg/mL的PD1AB-6-4P、10mM乙酸盐缓冲液(pH 5.2)、8.5％(w/v)蔗糖和0.005％(w/v)的聚山梨醇酯80。
在一些实施方案中，本文提供的各种药物制剂是水性药物制剂。
在一些实施方案中，将本文提供的配制抗体等分装入到合适的容器(例如，小瓶)当中并密封储存。在一个实施方案中，将0.1mL、0.15mL、0.2mL、0.25mL、0.3mL、0.35mL、0.4mL、0.45mL、0.5mL、0.55mL、0.6mL、0.65mL、0.7mL、0.75mL、0.8mL、0.85mL、0.9mL、0.95mL、1mL、2mL、5mL或更多的配制抗体等分。
在某些实施方案中，本文提供的各种药物制剂是稳定的。可在选定的温度下持续选定的时间段测量本文提供的药物制剂的稳定性。在一个实施方案中，液体制剂中的抗体以液体形式稳定至少约4周。在一个实施方案中，液体制剂中的抗体以液体形式稳定至少约12周。在一个实施方案中，液体制剂中的抗体以液体形式稳定至少约26周。在一个实施方案中，液体制剂中的抗体以液体形式稳定至少约14个月。在一个实施方案中，液体制剂中的抗体以液体形式稳定至少约3个月。在一个实施方案中，液体制剂中的抗体以液体形式稳定至少约4个月。在一个实施方案中，液体制剂中的抗体以液体形式稳定至少约5个月。在一个实施方案中，液体制剂中的抗体以液体形式稳定至少约6个月。在一个实施方案中，液体制剂中的抗体以液体形式稳定至少约12个月。在一个实施方案中，液体制剂中的抗体以液体形式稳定至少约18个月。在一个实施方案中，液体制剂中的抗体以液体形式稳定至少约24个月。还涵盖上面叙述的时间段中间的值和范围，例如约3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24个月。此外，旨在包括使用任何上面叙述的值的组合作为上限和/或下限的值的范围。在一些实施方案中，所述药物制剂在-70℃下是稳定的。在一些实施方案中，所述药物制剂在4℃下是稳定的。在一些实施方案中，所述药物制剂在25℃下是稳定的。在一些实施方案中，所述药物制剂在30℃下是稳定的。在一些实施方案中，所述药物制剂在40℃下是稳定的。
在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在5±3℃下在1周、2周、4周、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、26周、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、14个月或更长时间内保持稳定。在另一实施方案中，本文提供的配制抗体在-20±5℃下在1周、2周、4周、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、18个月、24个月或更长时间内保持稳定。在又一实施方案中，本文提供的配制抗体在-70±10℃下在1周、2周、4周、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、18个月、24个月、30个月、36个月、48个月或更长时间内保持稳定。在又一实施方案中，本文提供的配制抗体在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多个-80℃/5℃每日冷冻/解冻循环之后保持稳定。在再一实施方案中，本文提供的配制抗体在5℃下连续涡旋1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、30或更多天后保持稳定。在再一实施方案中，本文提供的配制抗体在5℃±3℃下连续涡旋1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或更多小时后保持稳定。在再一实施方案中，本文提供的配制抗体在4℃下连续涡旋4、8、24或更多小时后保持稳定。在具体的实施方案中，所述药物制剂当在-70℃±10℃下储存时稳定至少12个月。在其它实施方案中，所述药物制剂当在5℃±3℃下储存时稳定至少6个月。
1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多个-80℃/5℃每日冷冻/解冻循环。在再一实施方案中，本文提供的配制抗体在5℃下连续涡旋1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、30或更多天后保持稳定。在具体的实施方案中，所述药物制剂当在-70℃±10℃下储存时稳定至少12个月。在其它实施方案中，所述药物制剂当在5℃±3℃下储存时稳定至少6个月。
在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在5±3℃下在1周、2周、4周、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、26周、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、14个月、24个月或更长时间内保持基本上呈单体形式。在另一实施方案中，本文提供的配制抗体在25±5℃下在1周、2周、4周、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、26周、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、14个月、24个月或更长时间内保持稳定。在另一实施方案中，本文提供的配制抗体在40±5℃下在1周、2周、4周、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、26周、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、14个月24个月或更长时间内保持稳定。
在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在4℃下在1周、2周、4周、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、26周、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、14个月、24个月或更长时间内保持基本上呈单体形式。在一个实施方案中，抗体的单体形式量达制剂中总蛋白质的50-60％(w/w)、60-70％(w/w)、70-80％(w/w)、80-85％(w/w)、85-90％(w/w)、90-95％(w/w)或95-100％(w/w)。在一个实施方案中，抗体的单体形式量达制剂中总蛋白质的约50％(w/w)、60％(w/w)、70％(w/w)、80％(w/w)、85％(w/w)、90％(w/w)、91％(w/w)、92％(w/w)、93％(w/w)、94％(w/w)、95％(w/w)、96％(w/w)、97％(w/w)、98％(w/w)或99％(w/w)以上。在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在4℃下在12周内保持基本上呈单体形式，且在12周结束时抗体的单体形式超过制剂中总蛋白质的90％(w/w)、91％(w/w)、92％(w/w)、93％(w/w)、94％(w/w)、95％(w/w)、96％(w/w)、97％(w/w)、98％(w/w)或99％(w/w)。在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在4℃下在12周内保持基本上呈单体形式，且在12周结束时抗体的单体形式在制剂中总蛋白质的98-99％(w/w)范围内。在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在4℃下在26周内保持基本上呈单体形式，且在26周结束时抗体的单体形式超过制剂中总蛋白质的90％(w/w)、91％(w/w)、92％(w/w)、93％(w/w)、94％(w/w)、95％(w/w)、96％(w/w)、97％(w/w)、98％(w/w)或99％(w/w)。在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在4℃下在26周内保持基本上呈单体形式，且在26周结束时抗体的单体形式在制剂中总蛋白质的98-99％(w/w)范围内。在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在4℃下在14个月内保持基本上呈单体形式，且在14个月结束时抗体的单体形式超过制剂中总蛋白质的90％(w/w)、91％(w/w)、92％(w/w)、93％(w/w)、94％(w/w)、95％(w/w)、96％(w/w)、97％(w/w)、98％(w/w)或99％(w/w)。在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在4℃下在14个月内保持基本上呈单体形式，且在14个月结束时抗体的单体形式在制剂中总蛋白质的98-99％(w/w)范围内。
在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在25℃下在1周、2周、4周、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、26周、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、14个月、24个月或更长时间内保持基本上呈单体形式。在一个实施方案中，抗体的单体形式量达制剂中总蛋白质的50-60％(w/w)、60-70％(w/w)、70-80％(w/w)、80-85％(w/w)、85-90％(w/w)、90-95％(w/w)或95-100％(w/w)。在一个实施方案中，抗体的单体形式量达制剂中总蛋白质的约50％(w/w)、60％(w/w)、70％(w/w)、80％(w/w)、85％(w/w)、90％(w/w)、91％(w/w)、92％(w/w)、93％(w/w)、94％(w/w)、95％(w/w)、96％(w/w)、97％(w/w)、98％(w/w)或99％(w/w)以上。在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在25℃下在12周内保持基本上呈单体形式，且在12周结束时抗体的单体形式超过制剂中总蛋白质的90％(w/w)、91％(w/w)、92％(w/w)、93％(w/w)、94％(w/w)、95％(w/w)、96％(w/w)、97％(w/w)、98％(w/w)或99％(w/w)。在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在25℃下在12周内保持基本上呈单体形式，且在12周结束时抗体的单体形式在制剂中总蛋白质的96-99％(w/w)范围内。在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在25℃下在26周内保持基本上呈单体形式，且在26周结束时抗体的单体形式超过制剂中总蛋白质的90％(w/w)、91％(w/w)、92％(w/w)、93％(w/w)、94％(w/w)、95％(w/w)、96％(w/w)、97％(w/w)、98％(w/w)或99％(w/w)。在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在25℃下在26周内保持基本上呈单体形式，且在26周结束时抗体的单体形式在制剂中总蛋白质的96-99％(w/w)范围内。
在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在40℃下在1周、2周、4周、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、26周、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、14个月、24个月或更长时间内保持基本上呈单体形式。在一个实施方案中，抗体的单体形式量达制剂中总蛋白质的50-60％(w/w)、60-70％(w/w)、70-80％(w/w)、80-85％(w/w)、85-90％(w/w)、90-95％(w/w)或95-100％(w/w)。在一个实施方案中，抗体的单体形式量达制剂中总蛋白质的约50％(w/w)、60％(w/w)、70％(w/w)、80％(w/w)、85％(w/w)、90％(w/w)、91％(w/w)、92％(w/w)、93％(w/w)、94％(w/w)、95％(w/w)、96％(w/w)、97％(w/w)、98％(w/w)或99％(w/w)以上。在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在40℃下在4周内保持基本上呈单体形式，且在4周结束时抗体的单体形式超过制剂中总蛋白质的90％(w/w)、91％(w/w)、92％(w/w)、93％(w/w)、94％(w/w)、95％(w/w)、96％(w/w)、97％(w/w)、98％(w/w)或99％(w/w)。在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在40℃下在4周内保持基本上呈单体形式，且在4周结束时抗体的单体形式在制剂中总蛋白质的92-95％(w/w)范围内。
在具体的实施方案中，本文提供了包含与PD-1结合的抗体的药物制剂，其中所述制剂的pH为5.2，并且包含(i)10mM乙酸钠缓冲液，(ii)8.5％(w/v)蔗糖，和(iii)0.005％(w/v)聚山梨醇酯-80，且其中在4℃下储存14个月后，与PD-1结合的抗体的单体形式在药物制剂中总蛋白质的98-99％(w/w)范围内。在另一具体实施方案中，本文提供了包含与PD-1结合的抗原结合片段的药物制剂，其中所述制剂的pH为5.2，并且包含(i)10mM乙酸钠缓冲液，(ii)8.5％(w/v)蔗糖，和(iii)0.005％(w/v)聚山梨醇酯-80，且其中在4℃下储存14个月后，与PD-1结合的抗体的单体形式在药物制剂中总蛋白质的98-99％(w/w)范围内。
在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在5±3℃下在1周、2周、4周、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、26周、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、14个月、24个月或更长时间内形成不超过痕量的聚集HMW物质。在另一实施方案中，本文提供的配制抗体在25±5℃下在1周、2周、4周、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、26周、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、14个月、24个月或更长时间内形成不超过痕量的聚集HMW物质。在另一实施方案中，本文提供的配制抗体在40±5℃下在1周、2周、4周、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、26周、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、14个月24个月或更长时间内形成不超过痕量的聚集HMW物质。
在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在4℃下在1周、2周、4周、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、26周、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、14个月、24个月或更长时间内形成不超过痕量的聚集HMW物质。在一个实施方案中，抗体的HMW物质量少于制剂中总蛋白质的10％(w/w)、9％(w/w)、8％(w/w)、7％(w/w)、6％(w/w)、5％(w/w)、4％(w/w)、3％(w/w)、2％(w/w)、1％(w/w)、0.5％(w/w)、0.4％(w/w)、0.3％(w/w)、0.2％(w/w)、0.1％(w/w)。在一个实施方案中，抗体的HMW物质量达0-0.05％(w/w)、0.05-0.1％(w/w)、0.1-0.5％(w/w)、0.5-1％(w/w)、1-1.5％(w/w)、1.5-2％(w/w)、2-2.5％(w/w)、2.5-3％(w/w)、3-3.5％(w/w)、3.5-4％(w/w)、4-4.5％(w/w)、4.5-5％(w/w)、5-5.5％(w/w)、5.5-6％(w/w)、6-6.5％(w/w)、6.5-7％(w/w)、7-7.5％(w/w)、7.5-8％(w/w)、8-8.5％(w/w)、8.5-9％(w/w)、9-9.5％(w/w)、9.5-10％(w/w)。在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在4℃下在12周内形成不超过痕量的聚集HMW物质，且在12周结束时抗体的痕量HMW物质少于制剂中总蛋白质的5％(w/w)、4％(w/w)、3％(w/w)、2％(w/w)、1％(w/w)、0.5％(w/w)、0.4％(w/w)、0.3％(w/w)、0.2％(w/w)、0.1％(w/w)。在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在4℃下在12周内形成不超过痕量的聚集HMW物质，且在12周结束时抗体的痕量HMW物质在制剂中总蛋白质的1-2％(w/w)范围内。在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在4℃下在12周内形成不超过痕量的聚集HMW物质，且在12周结束时抗体的痕量HMW物质在制剂中总蛋白质的1.3-1.6％(w/w)范围内。在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在4℃下在26周内形成不超过痕量的聚集HMW物质，且在26周结束时抗体的痕量HMW物质少于制剂中总蛋白质的5％(w/w)、4％(w/w)、3％(w/w)、2％(w/w)、1％(w/w)、0.5％(w/w)、0.4％(w/w)、0.3％(w/w)、0.2％(w/w)、0.1％(w/w)。在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在4℃下在26周内形成不超过痕量的聚集HMW物质，且在26周结束时抗体的痕量HMW物质在制剂中总蛋白质的1-2％(w/w)范围内。在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在4℃下在26周内形成不超过痕量的聚集HMW物质，且在26周结束时抗体的痕量HMW物质在制剂中总蛋白质的1.4-1.7％(w/w)范围内。在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在4℃下在14个月内形成不超过痕量的聚集HMW物质，且在14个月结束时抗体的痕量HMW物质少于制剂中总蛋白质的5％(w/w)、4％(w/w)、3％(w/w)、2％(w/w)、1％(w/w)、0.5％(w/w)、0.4％(w/w)、0.3％(w/w)、0.2％(w/w)、0.1％(w/w)。在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在4℃下在14个月内形成不超过痕量的聚集HMW物质，且在14个月结束时抗体的痕量HMW物质在制剂中总蛋白质的1-2％(w/w)范围内。在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在4℃下在14个月内形成不超过痕量的聚集HMW物质，且在14个月结束时抗体的痕量HMW物质在制剂中总蛋白质的1.3-1.7％(w/w)范围内。
在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在25℃下在1周、2周、4周、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、26周、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、14个月、24个月或更长时间内形成不超过痕量的聚集HMW物质。在一个实施方案中，抗体的HMW物质量少于制剂中总蛋白质的10％(w/w)、9％(w/w)、8％(w/w)、7％(w/w)、6％(w/w)、5％(w/w)、4％(w/w)、3％(w/w)、2％(w/w)、1％(w/w)、0.5％(w/w)、0.4％(w/w)、0.3％(w/w)、0.2％(w/w)、0.1％(w/w)。在一个实施方案中，抗体的HMW物质量达0-0.05％(w/w)、0.05-0.1％(w/w)、0.1-0.5％(w/w)、0.5-1％(w/w)、1-1.5％(w/w)、1.5-2％(w/w)、2-2.5％(w/w)、2.5-3％(w/w)、3-3.5％(w/w)、3.5-4％(w/w)、4-4.5％(w/w)、4.5-5％(w/w)、5-5.5％(w/w)、5.5-6％(w/w)、6-6.5％(w/w)、6.5-7％(w/w)、7-7.5％(w/w)、7.5-8％(w/w)、8-8.5％(w/w)、8.5-9％(w/w)、9-9.5％(w/w)、9.5-10％(w/w)。在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在25℃下在12周内形成不超过痕量的聚集HMW物质，且在12周结束时抗体的痕量HMW物质少于制剂中总蛋白质的5％(w/w)、4％(w/w)、3％(w/w)、2％(w/w)、1％(w/w)、0.5％(w/w)、0.4％(w/w)、0.3％(w/w)、0.2％(w/w)、0.1％(w/w)。在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在25℃下在12周内形成不超过痕量的聚集HMW物质，且在12周结束时抗体的痕量HMW物质在制剂中总蛋白质的1-2％(w/w)范围内。在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在25℃下在12周内形成不超过痕量的聚集HMW物质，且在12周结束时抗体的痕量HMW物质在制剂中总蛋白质的1.5-2％(w/w)范围内。在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在25℃下在26周内形成不超过痕量的聚集HMW物质，且在26周结束时抗体的痕量HMW物质少于制剂中总蛋白质的5％(w/w)、4％(w/w)、3％(w/w)、2％(w/w)、1％(w/w)、0.5％(w/w)、0.4％(w/w)、0.3％(w/w)、0.2％(w/w)、0.1％(w/w)。在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在25℃下在26周内形成不超过痕量的聚集HMW物质，且在26周结束时抗体的痕量HMW物质在制剂中总蛋白质的1-3％(w/w)范围内。在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在25℃下在26周内形成不超过痕量的聚集HMW物质，且在26周结束时抗体的痕量HMW物质在制剂中总蛋白质的1.6-2.2％(w/w)范围内。
在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在40℃下在1周、2周、4周、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、26周、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、14个月、24个月或更长时间内形成不超过痕量的聚集HMW物质。在一个实施方案中，抗体的HMW物质量少于制剂中总蛋白质的10％(w/w)、9％(w/w)、8％(w/w)、7％(w/w)、6％(w/w)、5％(w/w)、4％(w/w)、3％(w/w)、2％(w/w)、1％(w/w)、0.5％(w/w)、0.4％(w/w)、0.3％(w/w)、0.2％(w/w)、0.1％(w/w)。在一个实施方案中，抗体的HMW物质量达0-0.05％(w/w)、0.05-0.1％(w/w)、0.1-0.5％(w/w)、0.5-1％(w/w)、1-1.5％(w/w)、1.5-2％(w/w)、2-2.5％(w/w)、2.5-3％(w/w)、3-3.5％(w/w)、3.5-4％(w/w)、4-4.5％(w/w)、4.5-5％(w/w)、5-5.5％(w/w)、5.5-6％(w/w)、6-6.5％(w/w)、6.5-7％(w/w)、7-7.5％(w/w)、7.5-8％(w/w)、8-8.5％(w/w)、8.5-9％(w/w)、9-9.5％(w/w)、9.5-10％(w/w)。在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在40℃下在4周内形成不超过痕量的聚集HMW物质，且在4周结束时抗体的痕量HMW物质少于制剂中总蛋白质的5％(w/w)、4％(w/w)、3％(w/w)、2％(w/w)、1％(w/w)、0.5％(w/w)、0.4％(w/w)、0.3％(w/w)、0.2％(w/w)、0.1％(w/w)。在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在40℃下在4周内形成不超过痕量的聚集HMW物质，且在4周结束时抗体的痕量HMW物质在制剂中总蛋白质的1-3％(w/w)范围内。在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在40℃下在4周内形成不超过痕量的聚集HMW物质，且在4周结束时抗体的痕量HMW物质在制剂中总蛋白质的1.8-2.3％(w/w)范围内。
在具体的实施方案中，本文提供了包含与PD-1结合的抗体的药物制剂，其中所述制剂的pH为5.2，并且包含(i)10mM乙酸钠缓冲液，(ii)8.5％(w/v)蔗糖，和(iii)0.005％(w/v)聚山梨醇酯-80，且其中在4℃下储存14个月后，与PD-1结合的抗体的HMW物质少于药物制剂中总蛋白质的2％(w/w)。在另一具体实施方案中，本文提供了包含与PD-1结合的抗原结合片段的药物制剂，其中所述制剂的pH为5.2，并且包含(i)10mM乙酸钠缓冲液，(ii)8.5％(w/v)蔗糖，和(iii)0.005％(w/v)聚山梨醇酯-80，且其中在4℃下储存14个月后，与PD-1结合的抗体的HMW物质少于药物制剂中总蛋白质的2％(w/w)。
在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在5±3℃下在1周、2周、4周、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、26周、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、14个月、24个月或更长时间内形成不超过痕量的片段化(剪切)LMW物质。在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在25±5℃下在1周、2周、4周、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、26周、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、14个月、24个月或更长时间内形成不超过痕量的片段化(剪切)LMW物质。在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在40±5℃下在1周、2周、4周、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、26周、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、14个月、24个月或更长时间内形成不超过痕量的片段化(剪切)LMW物质。
在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在4℃下在1周、2周、4周、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、26周、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、14个月、24个月或更长时间内形成不超过痕量的片段化(剪切)LMW物质。在一个实施方案中，抗体的LMW物质量少于制剂中总蛋白质的10％(w/w)、9％(w/w)、8％(w/w)、7％(w/w)、6％(w/w)、5％(w/w)、4％(w/w)、3％(w/w)、2％(w/w)、1％(w/w)、0.5％(w/w)、0.4％(w/w)、0.3％(w/w)、0.2％(w/w)、0.1％(w/w)。在一个实施方案中，抗体的LMW物质量达0-0.05％(w/w)、0.05-0.1％(w/w)、0.1-0.5％(w/w)、0.5-1％(w/w)、1-1.5％(w/w)、1.5-2％(w/w)、2-2.5％(w/w)、2.5-3％(w/w)、3-3.5％(w/w)、3.5-4％(w/w)、4-4.5％(w/w)、4.5-5％(w/w)、5-5.5％(w/w)、5.5-6％(w/w)、6-6.5％(w/w)、6.5-7％(w/w)、7-7.5％(w/w)、7.5-8％(w/w)、8-8.5％(w/w)、8.5-9％(w/w)、9-9.5％(w/w)、9.5-10％(w/w)。在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在4℃下在12周内形成不超过痕量的片段化(剪切)LMW物质，且在12周结束时抗体的痕量LMW物质少于制剂中总蛋白质的5％(w/w)、4％(w/w)、3％(w/w)、2％(w/w)、1％(w/w)、0.5％(w/w)、0.4％(w/w)、0.3％(w/w)、0.2％(w/w)、0.1％(w/w)。在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在4℃下在12周内形成不超过痕量的片段化(剪切)LMW物质，且在12周结束时抗体的痕量LMW物质在制剂中总蛋白质的0-0.02％(w/w)范围内。在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在4℃下在12周内形成不超过痕量的片段化(剪切)LMW物质，且在12周结束时抗体的痕量LMW物质为制剂中总蛋白质的0.02％(w/w)。在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在4℃下在26周内形成不超过痕量的片段化(剪切)LMW物质，且在26周结束时抗体的痕量LMW物质少于制剂中总蛋白质的5％(w/w)、4％(w/w)、3％(w/w)、2％(w/w)、1％(w/w)、0.5％(w/w)、0.4％(w/w)、0.3％(w/w)、0.2％(w/w)、0.1％(w/w)。在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在4℃下在26周内形成不超过痕量的片段化(剪切)LMW物质，且在26周结束时抗体的痕量LMW物质在制剂中总蛋白质的0-0.02％(w/w)范围内。在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在4℃下在26周内形成不超过痕量的片段化(剪切)LMW物质，且在26周结束时抗体的痕量LMW物质为制剂中总蛋白质的0.02％(w/w)。
在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在25℃下在1周、2周、4周、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、26周、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、14个月、24个月或更长时间内形成不超过痕量的片段化(剪切)LMW物质。在一个实施方案中，抗体的LMW物质量少于制剂中总蛋白质的10％(w/w)、9％(w/w)、8％(w/w)、7％(w/w)、6％(w/w)、5％(w/w)、4％(w/w)、3％(w/w)、2％(w/w)、1％(w/w)、0.5％(w/w)、0.4％(w/w)、0.3％(w/w)、0.2％(w/w)、0.1％(w/w)。在一个实施方案中，抗体的LMW物质量达0-0.05％(w/w)、0.05-0.1％(w/w)、0.1-0.5％(w/w)、0.5-1％(w/w)、1-1.5％(w/w)、1.5-2％(w/w)、2-2.5％(w/w)、2.5-3％(w/w)、3-3.5％(w/w)、3.5-4％(w/w)、4-4.5％(w/w)、4.5-5％(w/w)、5-5.5％(w/w)、5.5-6％(w/w)、6-6.5％(w/w)、6.5-7％(w/w)、7-7.5％(w/w)、7.5-8％(w/w)、8-8.5％(w/w)、8.5-9％(w/w)、9-9.5％(w/w)、9.5-10％(w/w)。在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在25℃下在12周内形成不超过痕量的片段化(剪切)LMW物质，且在12周结束时抗体的痕量LMW物质少于制剂中总蛋白质的5％(w/w)、4％(w/w)、3％(w/w)、2％(w/w)、1％(w/w)、0.5％(w/w)、0.4％(w/w)、0.3％(w/w)、0.2％(w/w)、0.1％(w/w)。在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在25℃下在12周内形成不超过痕量的片段化(剪切)LMW物质，且在12周结束时抗体的痕量LMW物质在制剂中总蛋白质的1-2％(w/w)范围内。在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在25℃下在12周内形成不超过痕量的片段化(剪切)LMW物质，且在12周结束时抗体的痕量LMW物质在制剂中总蛋白质的1.4-1.8％(w/w)范围内。在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在25℃下在26周内形成不超过痕量的片段化(剪切)LMW物质，且在26周结束时抗体的痕量LMW物质少于制剂中总蛋白质的5％(w/w)、4％(w/w)、3％(w/w)、2％(w/w)、1％(w/w)、0.5％(w/w)、0.4％(w/w)、0.3％(w/w)、0.2％(w/w)、0.1％(w/w)。
在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在40℃下在1周、2周、4周、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、26周、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、14个月、24个月或更长时间内形成不超过痕量的片段化(剪切)LMW物质。在一个实施方案中，抗体的LMW物质量少于制剂中总蛋白质的10％(w/w)、9％(w/w)、8％(w/w)、7％(w/w)、6％(w/w)、5％(w/w)、4％(w/w)、3％(w/w)、2％(w/w)、1％(w/w)、0.5％(w/w)、0.4％(w/w)、0.3％(w/w)、0.2％(w/w)、0.1％(w/w)。在一个实施方案中，抗体的LMW物质量达0-0.05％(w/w)、0.05-0.1％(w/w)、0.1-0.5％(w/w)、0.5-1％(w/w)、1-1.5％(w/w)、1.5-2％(w/w)、2-2.5％(w/w)、2.5-3％(w/w)、3-3.5％(w/w)、3.5-4％(w/w)、4-4.5％(w/w)、4.5-5％(w/w)、5-5.5％(w/w)、5.5-6％(w/w)、6-6.5％(w/w)、6.5-7％(w/w)、7-7.5％(w/w)、7.5-8％(w/w)、8-8.5％(w/w)、8.5-9％(w/w)、9-9.5％(w/w)、9.5-10％(w/w)。在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在40℃下在4周内形成不超过痕量的片段化(剪切)LMW物质，且在4周结束时抗体的痕量LMW物质少于制剂中总蛋白质的5％(w/w)、4％(w/w)、3％(w/w)、2％(w/w)、1％(w/w)、0.5％(w/w)、0.4％(w/w)、0.3％(w/w)、0.2％(w/w)、0.1％(w/w)。在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在40℃下在4周内形成不超过痕量的片段化(剪切)LMW物质，且在4周结束时抗体的痕量LMW物质在制剂中总蛋白质的3-5％(w/w)范围内。在一个实施方案中，本文提供的配制抗体在40℃下在4周内形成不超过痕量的片段化(剪切)LMW物质，且在4周结束时抗体的痕量LMW物质在制剂中总蛋白质的3.7-4.8％(w/w)范围内。
在一个实施方案中，本文提供的药物制剂保持稳定，并且亚可见颗粒的密度符合用于在5±3℃下经1周、2周、4周、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、26周、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、14个月、24个月或更长时间储存后静脉内施用的美国药典(USP)标准。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂保持稳定，并且亚可见颗粒的密度符合用于在25±5℃下经1周、2周、4周、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、26周、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、14个月、24个月或更长时间储存后静脉内施用的美国药典(USP)标准。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂保持稳定，并且亚可见颗粒的密度符合用于在40±5℃下经1周、2周、4周、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、26周、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、14个月、24个月或更长时间储存后静脉内施用的美国药典(USP)标准。
在一个实施方案中，本文提供的药物制剂亚可见颗粒的密度符合在4℃下经1周、2周、4周、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、26周、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、14个月、24个月或更长时间储存后静脉内施用的USP标准。在一个实施方案中，药物制剂≥2μm亚可见颗粒的密度低于约50,000个计数/ml、40,000个计数/ml、30,000个计数/ml、25,000个计数/ml、20,000个计数/ml、15,000个计数/ml、10,000个计数/ml、5,000个计数/ml、2,500个计数/ml、2,000个计数/ml、1,500个计数/ml或1,000个计数/ml。在一个实施方案中，药物制剂≥10μm亚可见颗粒的密度低于约6,000个计数/ml、5,000个计数/ml、4,000个计数/ml、3,000个计数/ml、2,000个计数/ml、1,000个计数/ml、900个计数/ml、800个计数/ml、700个计数/ml、600个计数/ml、500个计数/ml、400个计数/ml、300个计数/ml、200个计数/ml或100个计数/ml。在一个实施方案中，药物制剂≥25μm亚可见颗粒的密度低于约600个计数/ml、500个计数/ml、400个计数/ml、300个计数/ml、200个计数/ml、100个计数/ml或50个计数/ml。
在一个实施方案中，本文提供的药物制剂在4℃下储存12周后≥2μm亚可见颗粒的密度低于约25,000个计数/ml。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂在4℃下储存12周后≥2μm亚可见颗粒的密度低于约20,000个计数/ml。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂在4℃下储存12周后≥10μm亚可见颗粒的密度低于约1,000个计数/ml。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂在4℃下储存12周后≥10μm亚可见颗粒的密度低于约500个计数/ml。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂在4℃下储存12周后≥25μm亚可见颗粒的密度低于约200个计数/ml。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂在4℃下储存12周后≥25μm亚可见颗粒的密度低于约150个计数/ml。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂在4℃下储存12周后≥2μm亚可见颗粒的密度低于约20,000个计数/ml，且≥10μm亚可见颗粒的密度低于约500个计数/ml，且≥25μm亚可见颗粒的密度低于约150个计数/ml。
在一个实施方案中，本文提供的药物制剂在4℃下储存26周后≥2μm亚可见颗粒的密度低于约10,000个计数/ml。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂在4℃下储存26周后≥2μm亚可见颗粒的密度低于约8,000个计数/ml。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂在4℃下储存26周后≥10μm亚可见颗粒的密度低于约1,000个计数/ml。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂在4℃下储存26周后≥10μm亚可见颗粒的密度低于约500个计数/ml。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂在4℃下储存26周后≥25μm亚可见颗粒的密度低于约200个计数/ml。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂在4℃下储存26周后≥25μm亚可见颗粒的密度低于约150个计数/ml。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂在4℃下储存26周后≥2μm亚可见颗粒的密度低于约8,000个计数/ml，且≥10μm亚可见颗粒的密度低于约500个计数/ml，且≥25μm亚可见颗粒的密度低于约150个计数/ml。
在一个实施方案中，本文提供的药物制剂在25℃下储存12周后≥2μm亚可见颗粒的密度低于约30,000个计数/ml。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂在25℃下储存12周后≥2μm亚可见颗粒的密度低于约28,000个计数/ml。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂在25℃下储存12周后≥10μm亚可见颗粒的密度低于约5,000个计数/ml。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂在25℃下储存12周后≥10μm亚可见颗粒的密度低于约2,000个计数/ml。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂在25℃下储存12周后≥25μm亚可见颗粒的密度低于约2,000个计数/ml。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂在25℃下储存12周后≥25μm亚可见颗粒的密度低于约1,200个计数/ml。在一个实施方案中，本文提供的药物制剂在25℃下储存12周后≥2μm亚可见颗粒的密度低于约28,000个计数/ml，且≥10μm亚可见颗粒的密度低于约2,000个计数/ml，且≥25μm亚可见颗粒的密度低于约1,200个计数/ml。
在具体的实施方案中，本文提供了包含与PD-1结合的抗体的药物制剂，其中所述制剂的pH为5.2，并且包含(i)10mM乙酸钠缓冲液，(ii)8.5％(w/v)蔗糖，和(iii)0.005％(w/v)聚山梨醇酯-80，且其中在4℃下储存26周后，药物制剂≥2μm亚可见颗粒的密度低于约8,000个计数/ml，且≥10μm亚可见颗粒的密度低于约500个计数/ml，且≥25μm亚可见颗粒的密度低于约150个计数/ml。在另一具体实施方案中，本文提供了包含与PD-1结合的抗原结合片段的药物制剂，其中所述制剂的pH为5.2，并且包含(i)10mM乙酸钠缓冲液，(ii)8.5％(w/v)蔗糖，和(iii)0.005％(w/v)聚山梨醇酯-80，且其中在4℃下储存26周后，药物制剂≥2μm亚可见颗粒的密度低于约8,000个计数/ml，且≥10μm亚可见颗粒的密度低于约500个计数/ml，且≥25μm亚可见颗粒的密度低于约150个计数/ml。
4.6制备药物制剂的方法
在另一方面，还提供了制备本文公开的各种药物制剂的方法。
在某些实施方案中，制备本文公开的各种药物制剂的方法包括：(a)在培养基中培养细胞，其中所述细胞包含一种或多种多核苷酸，所述多核苷酸包含编码本文提供的抗体的重链、轻链或重链和轻链两者或其抗原结合片段的核苷酸序列；(b)收获所述培养基；并且(c)对所述培养基进行一系列纯化步骤。
本文使用的细胞可以是本领域普通技术人员在蛋白质产生(例如，抗体产生)中使用的任何类型的细胞。在某些实施方案中，所述细胞是CHO细胞。在其它实施方案中，所述细胞是HEK293细胞。本文使用的培养基可以是用于所用特定细胞(例如，CHO细胞)的任意合适的细胞培养基，包括任意合适的补充物。
在所述方法的某些实施方案中，纯化步骤包括：(i)亲和色谱；(ii)病毒灭活；(iii)离子交换色谱；(iv)病毒过滤；和(v)超滤/渗滤。
在一个实施方案中，亲和色谱是蛋白A亲和色谱。在另一实施方案中，病毒灭活步骤是低pH病毒灭活步骤。在又一实施方案中，离子交换色谱是阴离子交换色谱。在一个实施方案中，亲和色谱是蛋白A亲和色谱，且病毒灭活步骤是低pH病毒灭活步骤。在另一实施方案中，病毒灭活步骤是低pH病毒灭活步骤，且离子交换色谱是阴离子交换色谱。在又一实施方案中，亲和色谱是蛋白A亲和色谱，且离子交换色谱是阴离子交换色谱。在再一实施方案中，亲和色谱是蛋白A亲和色谱，病毒灭活步骤是低pH病毒灭活步骤，且离子交换色谱是阴离子交换色谱。因此，在所述方法的具体实施方案中，纯化步骤包括：(i)蛋白A亲和色谱；(ii)低pH病毒灭活步骤；(iii)阴离子交换色谱；(iv)病毒过滤步骤；和(v)超滤/渗滤。
在另一实施方案中，亲和色谱是蛋白G亲和色谱。在又一实施方案中，病毒灭活步骤可以是溶剂/去污剂灭活、巴氏灭菌或UV灭活或其组合。在再一实施方案中，阴离子交换色谱可使用任何市售的阴离子交换介质，如Q或DEAE。在又一实施方案中，阴离子交换色谱是多峰阴离子交换色谱。
在一些实施方案中，制备本文公开的各种药物制剂的方法进一步包括配制步骤。
因此，在一个实施方案中，制备本文公开的各种药物制剂的方法包括：(a)在培养基中培养细胞，其中所述细胞包含一种或多种多核苷酸，所述多核苷酸包含编码本文提供的抗体的重链、轻链或重链和轻链两者或其抗原结合片段的核苷酸序列；(b)收获所述培养基；并且(c)对所述培养基进行一系列纯化步骤，包括(i)蛋白A亲和色谱；(ii)低pH病毒灭活步骤；(iii)阴离子交换色谱；(iv)病毒过滤步骤；和(v)超滤/渗滤；以及(d)配制来自超滤/渗滤步骤的滞留物。
除另有定义外，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的相同的含义。虽然在本发明的实践或测试中可采用与本文所述的那些类似或等效的方法及物质，但本文描述了合适的方法及物质。
本文援引的所有申请、出版物、专利及其它参考文献、GenBank引用和ATCC引用均以引用的方式整体并入。在有冲突的情况下，以本说明书(包括定义)为准。
如本文所用，单数形式“一个/种”和“所述/该”包括复数指代项，除非上下文另有明确指示。因此，例如提到“肽序列”包括多个这类序列等。
如本文所用，在本文件通篇中，往往以范围格式给出数值。使用范围格式仅是为了方便和简洁，并不应被解释为对本发明的范围的硬性限制，除非上下文另有明确指示。因此，范围的使用明确地包括所有可能的子范围、该范围内的所有个别数值以及包括这类范围内的整数和值的分数或范围内的整数在内的所有数值或数值范围，除非上下文另有明确指示。在本专利文件通篇中，无论范围的宽度如何，以及在所有的上下文中，这种解释都适用。因此，例如提到范围90-100％包括91-99％、92-98％、93-95％、91-98％、91-97％、91-96％、91-95％、91-94％、91-93％，等等。提到范围90-100％还包括91％、92％、93％、94％、95％、95％、97％等，以及91.1％、91.2％、91.3％、91.4％、91.5％等，92.1％、92.2％、92.3％、92.4％、92.5％等，等等。
此外，提到范围1-3、3-5、5-10、10-20、20-30、30-40、40-50、50-60、60-70、70-80、80-90、90-100、100-110、110-120、120-130、130-140、140-150、150-160、160-170、170-180、180-190、190-200、200-225、225-250包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20等。在进一步的实例中，提到范围25-250、250-500、500-1,000、1,000-2,500、2,500-5,000、5,000-25,000、25,000-50,000包括在这类值内或涵盖这类值的任何数值或范围，例如25、26、27、28、29…250、251、252、253、254…500、501、502、503、504…等。
也如本文所用，在本文件通篇中公开了一系列范围。使用一系列范围包括上限和下限范围的组合以提供另一范围。在本专利文件通篇中，无论范围的宽度如何，以及在所有的上下文中，这种解释都适用。因此，例如提到一系列范围如5-10、10-20、20-30、30-40、40-50、50-75、75-100、100-150包括诸如5-20、5-30、5-40、5-50、5-75、5-100、5-150和10-30、10-40、10-50、10-75、10-100、10-150和20-40、20-50、20-75、20-100、20-150等等的范围。
为了简明起见，本文使用某些缩写。一个实例是代表氨基酸残基的单字母缩写。氨基酸及其相应的三个字母和单字母缩写如下：
丙氨酸 Ala (A)
精氨酸 Arg (R)
天冬酰胺 Asn (N)
天冬氨酸 Asp (D)
半胱氨酸 Cys (C)
谷氨酸 Glu (E)
谷氨酰胺 Gln (Q)
甘氨酸 Gly (G)
组氨酸 His (H)
异亮氨酸 Ile (I)
亮氨酸 Leu (L)
赖氨酸 Lys (K)
甲硫氨酸 Met (M)
苯丙氨酸 Phe (F)
脯氨酸 Pro (P)
丝氨酸 Ser (S)
苏氨酸 Thr (T)
色氨酸 Trp (W)
酪氨酸 Tyr (Y)
缬氨酸 Val (V)
本发明通常使用肯定措辞在本文中进行公开以描述诸多实施方案。本发明还具体包括其中完全或部分地排除特定主题的实施方案，如排除物质或材料、方法步骤和条件、方案、程序、测定或分析。因此，即使本发明在本文中通常不以本发明不包括的内容进行表述，本文也公开了未明确包括在本发明中的方面。
已经描述了本发明的许多实施方案。然而，将要理解的是，在不脱离本发明的实质和范围的情况下可以进行各种修改。因此，以下实施例旨在说明但不限制权利要求中所述的本发明的范围。
6.实施例
以说明的方式而非以限制的方式给出本部分(即，第5部分)中的实施例。
6.1实施例1：抗PD-1抗体的产生
6.1.1抗PD-1抗体的产生
初始通过小鼠免疫方法使用人PD-1胞外结构域(ECD)抗原或CHO-hPD-1转染细胞来产生亲本PD-1-IgG1 mAb。杂交瘤库的初始表征鉴定出命名为PD1Sub1的亚克隆，产生抗人PD-1、PD-L1非阻断性和PD-L2非阻断性抗体(数据未显示)，通过
Figure BDA0002285022320002402
测量对可溶性抗原的KD为约6nM。将来自PD1Sub1杂交瘤的小鼠VH和VL基因测序，并用于利用最近J区(分别为IgH J6和IgκJ2)向最同源的人VH和VL框架基因(分别为IgH1-f和Vκ4-1)的人γ1和κ恒定区当中进行人CDR移植。仅对于人种系HG1 VH和VL区，将小鼠CDR3区段置于人VH和VL框架种系基因(分别为IgH 1-f和Vκ4-1)当中。
产生在具有稳定AID(活化诱导的脱氨酶)的DeciduousTM构建体中表达CDR-移植或种系HG1抗体的稳定的HEK-293c18细胞系，用于SHM-XELTM亲和力成熟平台(AnaptysBio，SanDiego，CA)。在抗体可变结构域中原位产生遗传多样性产生表达亲本抗体的较高亲和力变体的细胞。使用单体或二聚hPD-1通过流式细胞术将这些分离。多轮亲和纯化及选择产生6个廊道(corridor)和45个克隆。对这些克隆的Sanger及深度测序连同另外的“经由电脑模拟SHM”事件导致将富集突变并入VH和VL CDR的各轮定点诱变。以生物化学方式、生物物理学方式进一步表征最高亲和力结合12种突变蛋白与PD-1的结合动力学以及与在CHO细胞的表面上表达的全长PD-1的结合。在两项测定中进行纯化抗体的功能表征：PD-L1竞争与细胞表面PD-1的结合以及在由活化人CD4+T细胞的再活化产生IL-2中的抑制活性。
基于这些方法，产生抗PD-1抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6，如表9中所示。
表9.抗PD-1抗体的表征
Figure BDA0002285022320002401
6.1.2人PBMC或人全血中的CD4+再活化测定
在37℃下PHA活化48小时，在分离自白细胞减少系统(LRS)的人PBMC上诱导PD-1表达。使用CD4分离试剂盒(Miltenyi Biotec，San Diego，CA)自PBMC纯化CD4+T细胞，并再涂铺于固定有抗CD3或抗CD3加上滴定的抗PD-1或hIgG1同种型对照抗体的96孔上面。在24和48小时收集上清液，用于IL-2、IFN-γ和IL-17细胞因子测定。所有六个抗PD-1克隆都显示类似的抑制EC50，对于IL-2为20-36nM，对于IFN-γ为34-58nM，以及对于IL-17为27-41nM不等，如表10中所示。
表10.PBMC再活化测定中6种先导抗体的T细胞减弱活性的比较
Figure BDA0002285022320002411
然后在人全血基质中评估特异性T细胞功能的抑制。将新鲜取出并肝素化的人血涂铺于固定有抗CD3或抗CD3加上滴定的抗PD-1或hIgG1同种型对照抗体的孔上面。测量在24和48小时收集的血浆的IL-2(24小时)和IFN-γ/IL-17(48小时)。与三个其它测试的抗体克隆相比，在特异性IL-2(EC50 4.0+0.9nM，n＝4)、IFN-γ(EC50 4.1+2.2nM，n＝2)和IL-17(EC50 3.6+1.2nM，n＝3)抑制中，PD1AB-6显示出2-3倍增加的效力。如表11中所示。
表11.全血测定中4种先导分子的T细胞减弱活性的比较
6.1.3基于细胞的配体结合测定
为了评估配体竞争，实施细胞结合测定以评价鉴定的六个抗体克隆。简言之，将个别抗体克隆以100nM至100pM的半对数浓度与10nM DyL650-PD-L1预混合，之后在冰上持续45分钟添加到人PD-1-CHO细胞(2x 105个细胞)中。然后洗涤细胞，之后在BD FACSArrayTM上分析DyL650-PD-L1结合，并将每个浓度下的中值荧光强度相对于同种型对照抗体作图。如图1A-1B中所示，直到100nM，PD1AB-6以及包括亲本克隆PD1AB-1在内的其它五个克隆针对DyL650-PD-L1结合未显示出显著的竞争。相比之下，作为拮抗剂的MDX 4H1(AnaptysBio，San Diego，CA)以配体阻断、PD-1抗体剂量依赖性方式阻断标记的PD-L1结合，产生结合EC50为约5-10nM。
6.1.4表位作图
通过将与人PD-1胞外结构域复合的PD1AB-6Fab的晶体结构解析至分辨率来确定PD-1表位。相对于PD-1:PD-L1相互作用位点，PD-1:PD1AB-6Fab相互作用位点出现在PD-1的远侧(图2)，这与PD-L1和PD1AB-6不竞争PD-1结合的观察结果一致。PD1AB-6 Fab针对PD-1β折叠发生结合，且与由残基100-105组成的PD-1环形成实质性相互作用(图3)。PD-1上的R104与Fab CDR H1上的残基发生多极性相互作用。相邻残基G103也与Fab产生紧密极性相互作用。R104和G103均在小鼠PD-1中突变(分别突变成组氨酸和精氨酸)，从而为缺乏PD1AB-6与鼠PD-1的结合提供了结构原理。与PD-1相互作用的PD1AB-6 Fab区是CDR H1、H2、H3、L1和L2。表12中描述了PD-1:PD1AB-6 Fab相互作用的原子细节。描述了与PD-1表位相互作用的HC和LC残基。缩写如下：HB-氢键，HYD-疏水相互作用，ION-离子相互作用。
表12.PD1AB-6:PD-1相互作用的原子细节
<u>类型</u> <u>链</u> <u>位置</u> <u>链</u> <u>位置</u>
<u>HB</u> <u>PD-1</u> <u>ASN33.Nδ2</u> <u>H</u> <u>ALA71.O</u>
<u>HB</u> <u>PD-1</u> <u>THR51.Oγ1</u> <u>L</u> <u>SER50.O</u>
<u>HB</u> <u>PD-1</u> <u>SER57.Oγ</u> <u>H</u> <u>ASP69.Oδ2</u>
<u>HYD</u> <u>PD-1</u> <u>LEU100.Cδ1</u> <u>L</u> <u>PHE55.Cζ</u>
<u>HYD</u> <u>PD-1</u> <u>LEU100.Cδ1</u> <u>L</u> <u>LEU115.CD1</u>
<u>HB</u> <u>PD-1</u> <u>ASN102.Nδ2</u> <u>L</u> <u>TYR114.O</u>
<u>HB</u> <u>PD-1</u> <u>ASN102.Oδ1</u> <u>L</u> <u>SER117.N</u>
<u>HB</u> <u>PD-1</u> <u>ASN102.O</u> <u>H</u> <u>TYR50.Oη</u>
<u>HB</u> <u>PD-1</u> <u>GLY103.O</u> <u>H</u> <u>TYR126.Oη</u>
<u>HB</u> <u>PD-1</u> <u>ARG104.Nη2</u> <u>H</u> <u>LYS47.O</u>
<u>HB</u> <u>PD-1</u> <u>ARG104.Nη1</u> <u>H</u> <u>ASP48.O</u>
<u>HB</u> <u>PD-1</u> <u>ARG104.Nη2</u> <u>H</u> <u>ASP69.Oζ1</u>
<u>ION</u> <u>PD-1</u> <u>ARG104.Nη2</u> <u>H</u> <u>ASP69.Oζ1</u>
<u>HB</u> <u>PD-1</u> <u>ASP105.Oδ1</u> <u>H</u> <u>SER125.Oγ</u>
<u>HB</u> <u>PD-1</u> <u>HIS107.Nδ1</u> <u>L</u> <u>SER50.Oγ</u>
<u>HB</u> <u>PD-1</u> <u>SER109.Oγ</u> <u>L</u> <u>SER50.O</u>
6.1.5 PD1AB-6的变体的产生
产生PD1AB-6 IgG1抗体(PD1AB-6-IgG1)和Fc修饰的IgG4PE抗体(PD1AB-6-4PE)。PD1AB-6-4PE被设计成具有显著较低的Fc介导的效应功能。CH区γ4含有两个非标准氨基酸取代S228P和L235E(EU编号系统，Kabat和Wu 1991)。丝氨酸228(IgG4的铰链中的常见氨基酸类型)被改变为脯氨酸(IgG4中较少见的氨基酸类型，并且是IgG1中高度保守的氨基酸)。这一变化使在IgG4-亚类抗体的产生中常见的“半抗体”的水平显著降低。作为参与与Fcγ受体相互作用的关键氨基酸之一的亮氨酸235被改变为谷氨酸。L235E取代显著降低了γ4链与FcγR的相互作用，从而消除了ADCC和Fc-受体介导的对表达PD-1的正常细胞的消除。此外，固有缺乏通过γ4重链的补体结合使PD1AB-6-4PE分子缺少CDC功能。产生两种其它变体以最小化与C1q的结合亲和力，从而降低CDC(图4)。为了产生PD1AB-6-K3，在PD1AB-6-IgG1中用丙氨酸取代赖氨酸322。据报道K322A取代抑制利妥昔单抗(具有人IgG1 Fc的嵌合抗体)上的C1q结合(Idusogie等人，2000，J.Immunol.164(8):4178-84)。通过利用S228P取代将PD1AB-6-IgG1的Fc骨架转化为IgG4的Fc骨架而产生PD1AB-6-4P。丝氨酸228(IgG4的铰链中的常见氨基酸类型)被改变为脯氨酸(IgG4中较少见的氨基酸类型，并且是IgG1中高度保守的氨基酸)。这一变化使在IgG4-亚类抗体的产生中常见的半抗体的水平显著降低。据报道IgG4抗体具有减弱的ADCC和CDC功能(Overdijk等人，2012，J.Immunol.189(7):3430-38)。所有变化均在CH区中产生，在可变区中没有变化。PD1AB-6-IgG1的重链和轻链的氨基酸序列分别被标记为LC_PD1AB-6-IgG1和HC_PD1AB-6-IgG1(图4)。两种重链变体包括HC_PD1AB-6-IgG1-K322A和HC_PD1AB-6-IgG4P。轻链LC_PD1AB-6-IgG1与三条个别重链配对，分别产生PD1AB-6-IgG1、PD1AB-6-K3和PD1AB-6-4P。
6.1.6根据瞬时转染的细胞系开发和抗体制备
6.1.6.1重链和轻链的分子克隆
IgG LC表达载体pFUSE2ss-CLIg-hk和IgG HC表达载体pFUSEss-CHIg-hG1购自InvivoGen(San Diego，CA)。
将编码LC_PD1AB-6-IgG1的氨基酸序列(图4)转化成用于哺乳动物细胞中的蛋白质表达的密码子优化基因序列。将5’端的限制酶位点EcoRI和3’端的NheI添加到优化基因中。合成具有EcoRI和NheI位点的优化LC基因，从而产生插入片段。用EcoRI和NheI消化IgGLC表达载体pFUSE2ss-CLIg-hk，从而产生大约3.5kb的pFUSE2ss-CLIg-hk-EcoRI/NheI片段。将插入片段连接到pFUSE2ss-CLIg-hk-EcoRI/NheI片段当中，从而导致产生pJS-1，其是pFUSE2ss-CLIg-hk-LC_PD1AB-6-IgG1。
将编码HC_PD1AB-6-IgG1、HC_PD1AB-6-IgG1-K322A或HC_PD1AB-6-IgG4P的氨基酸序列(图4)转化成用于哺乳动物细胞中的蛋白质表达的密码子优化基因序列。添加5’端的限制酶位点EcoRI、从终止密码子(在pFUSEss-CHIg-hG1中的HC序列的3’端之后)到3’端的HpaI的恒定区。合成具有EcoRI和HpaI位点的优化基因，从而产生含有分别编码HC_PD1AB-6-IgG1、HC_PD1AB-6-IgG1-K322A和HC_PD1AB-6-IgG4P的基因的插入片段。用EcoRI和HpaI消化IgG HC表达载体pFUSEss-CHIg-hG1，从而产生大约3.4kb的pFUSEss-CHIg-hG1-EcoRI/HpaI片段。将插入片段连接到pFUSEss-CHIg-hG1-EcoRI/HpaI片段当中，从而导致产生pJS-2、pJS-3和pJS-12，它们分别是pFUSEss-CHIg-hG1-HC_PD1AB-6-IgG1、pFUSEss-CHIg-hG1-HC_PD1AB-6-IgG1-K322A和pFUSEss-CHIg-hG1-HC_PD1AB-6-IgG4P。
6.1.6.2蛋白质产生
在摇瓶中以实验室规模制备PD1AB-6-IgG1、PD1AB-6-K3和PD1AB-6-4P所有三种变体，用于体外和体内功效研究。使用来自Life Technologies(Carlsbad，CA)的FreeStyleTMMAX CHO表达系统以及Expi293TM表达系统，在50L生物反应器(50L搅拌罐和50L波袋)中制备用于非GLP毒理学研究和另外表征的PD1AB-6-4P和PD1AB-6-K3抗体。FreeStyleTM MAX CHO表达系统用于采用制造商的标准方案瞬时转染CHO-S细胞。Expi293TM表达系统用于采用制造商的标准方案瞬时转染Expi293细胞。轻链相对重链的3:2比率用于转染期间的每1L培养物为1mg的DNA混合物。在37℃下将细胞以50万个细胞/mL接种在50L生物反应器中，并过夜生长以达到100万个细胞/mL。然后采用制造商的标准方案转染细胞。转染后第一天，将1mM丁酸钠加上1％v/v进料培养基(Yeastolate，CHO CD EfficientFeedTM A，谷氨酰胺和葡萄糖)添加到生物反应器中，并使温度下降到32℃。将四十升细胞加上添加剂对50L搅拌罐进行接种，并将25L细胞加上添加剂对50L波生物反应器进行接种。每天监测细胞活力和效价，并且当细胞活力下降到50％以下时收获批料。Vi-CellTM仪器用于活力分析，并且配备有抗人IgG传感器的Octet RED用于使用纯化抗体进行效价分析以获得标准曲线。使用GE LifeSciences深度过滤和灭菌柱收获细胞和上清液，使用ULTA Prime GF 5μm胶囊进行深度过滤，接着使用ULTA Pure HC 0.6/0.2μm灭菌胶囊。采用错流过滤将澄清的上清液浓缩5-8倍，来自GE Life Science的50Kd截止值KvickTM Lab SCU用于TFF。表13中给出了在收获时对每种同种型获得的效价和最大细胞密度。
表13.分批进料生物反应器(50升)中的生产率
Figure BDA0002285022320002441
6.1.6.3蛋白质纯化
通过一系列下游纯化步骤对产生的物质进行纯化，包括蛋白A亲和色谱和低pH病毒灭活，接着是IEX相互作用(CaptoTM Adhere和CaptoTM SP ImpRes)色谱步骤。通过如下方式大量配制纯化抗体：针对(10mM琥珀酸盐pH 5.5，9％蔗糖，0.05％PS20)缓冲液进行缓冲液交换，通过0.2μm过滤器过滤，并进行等分。
用设计成捕获产物并移除过程相关杂质的MabSelect SuReTM进行蛋白A亲和色谱。在酸性条件下(pH 3.4±0.1持续45分钟)进行后续病毒灭活步骤，接着将灭活集合调节到pH 5.5±0.1。在病毒灭活后，将阴离子交换剂以流穿模式用于使用CaptoTM Adhere的中间精制步骤以移除杂质，如聚集体、DNA、宿主细胞蛋白质和内毒素。将产物集合调节到pH 6.5±0.1，并使电导率降低至2mS/cm，之后才进行下一个处理步骤。阳离子交换剂CaptoTM SPImpRes用作精制步骤，并以10mS/cm解析产物。然后将抗体在储备溶液(10mM琥珀酸盐、9％蔗糖、0.05％PS20，pH 5.5)中进行缓冲液交换并浓缩至20mg/mL。然后将产物集合通过0.2μm过滤器过滤并进行等分。
6.1.7基于细胞的PD-1结合测定
在表达人PD-1和食蟹猴PD-1的CHO细胞上(图5A-5B)以及在原代人PBMC(图6)和食蟹猴PBMC(图7)上评估PD1AB-6-IgG1结合。
将表达人PD-1和食蟹猴PD-1的CHO细胞在4℃下与各种浓度的未标记PD1AB-6-IgG1抗体一起温育30分钟，洗涤并在4℃下用抗人IgG Fc(eBioscience，San Diego，CA)染色30分钟。人IgG1 Fc用作阴性对照。PD1AB-6-IgG1以EC50＝0.4nM与在CHO细胞上表达的人PD-1结合，并以EC50＝0.8nM与在CHO细胞上表达的食蟹猴PD-1结合(图5A-5B)。
用1μg/mL板结合的抗CD3将人PBMC活化3天以诱导T细胞上的PD-1表达。将细胞在4℃下与各种浓度的未标记PD1AB-6-IgG1抗体一起温育30分钟，洗涤并在4℃下用抗人IgGFc(eBioscience，San Diego，CA)染色30分钟。人IgG1 Fc用作阴性对照。在CD4+T细胞上测定几何MFI。来自2个人健康供体中的1个的数据示于图6中。
用1μg/mL抗食蟹猴CD3/CD28将食蟹猴PBMC活化2天以诱导T细胞上的PD-1表达。将细胞在4℃下与各种浓度的未标记PD1AB-6-IgG1抗体一起温育30分钟，洗涤并在4℃下用抗人IgG Fc(eBioscience)染色30分钟。人IgG1 Fc用作阴性对照。在CD4+T细胞上测定几何MFI。来自2个食蟹猴供体中的1个的数据示于图7中。
6.1.8 Fc受体结合测定
为了确认变体产生的目标，即降低的FcγR介导的效应功能，通过两种方法来分析FcγR与PD1AB-6-K3和PD1AB-6-4P变体的结合。首先，采用Cisbio
Figure BDA0002285022320002451
检测，用置换FcγR测定来测试结合(图8A-8D)。将被工程改造以表达用铽(Tb)供体染料预标记的特异性FcγR(FcγRI、FcγRIIIa或FcγRIIb)的HEK293细胞与参考对照或PD1AB-6-IgG1、PD1AB-6-K3和PD1AB-6-4P抗体在10000nM至0.1pM不等的对数浓度下混合。然后添加第二人hIgG-d2(受体)以竞争受体结合。测量由Tb-d2接近产生的荧光共振能量转移(FRET)信号的检测结果，并且其与PD1AB-6变体结合的FcγR成反比。如图8A-8D中所示，PD1AB-6-K3变体显示出与NK细胞上负责ADCC活性的低亲和力受体FcγRIIIa(CD16)的降低的结合。与FcγRI(在粒细胞、树突细胞(DC)或单核细胞上表达)的结合类似于亲本PD1AB-6-IgG1分子。
其次，在基于FACS的结合测定中测试PD1AB-6-K3和PD1AB-6-4P变体两者(图9A-9C)。简言之，将表达FcγRI-CHO或FcγRIIIaV158-CHO的细胞系分离并洗涤，之后在冰上与PD1AB-6-K3和PD1AB-6-4P变体在不同浓度下混合1小时。将PD1AB-6变体结合的细胞在冰上用标记的PE缀合F(ab’)2山羊抗人二抗再检测1小时，洗涤并固定，之后通过FACS进行分析，并将每个浓度下的平均荧光强度作图。PD1AB-6-4P变体分别针对FcγRI和FcγRIIIa细胞系返回显著较高的结合EC50(>15X和>21X)(图9A-9C)。
6.1.9体外ADCC测定
在涉及来自健康供体的自然杀伤(NK)细胞和表达PD-1的靶细胞的共培养测定中评估PD1AB-6变体诱导ADCC的能力。将用PD1AB-6变体预处理的靶细胞(NCI-OCI-Ly3)与活化的NK细胞一起共培养4小时。上清液LDH浓度用于计算特异性裂解。使用Prism计算EC50(nM)。误差条代表三次实验重复。数据是4个个别健康供体中的2个代表。如图10A-10B中所示，PD1AB-6-IgG1的滴定诱导剂量依赖性ADCC，而PD1AB-6-K3显示出降低的ADCC活性。
6.1.10体外CDC测定
使用表达PD-1的CD20+NCI-OCI-Ly3细胞评估PD1AB-6变体诱导CDC的能力。将用抗体预处理的靶细胞(NCI-OCI-Ly3)在补充有5％兔补体的无血清培养基中培养4小时。通过FACS由7-AAD+细胞测定细胞裂解。数据代表3次独立实验：(i)PD1AB-6-IgG1和抗CD20 IgG1的CDC活性；(ii)PD1AB-6-IgG1和PD1AB-6-K3的CDC活性；(iii)PD1AB-6-4P和市售小鼠抗PD-1IgG1抗体的CDC活性。如图11中所示，PD1AB-6-K3始终不诱导CDC(n＝3)。亲本PD1AB-6-IgG1和PD1AB-6-4P也不诱导CDC。这不是由于靶细胞系对补体杀伤有抗性，因为抗CD20IgG1在5％兔补体存在下反复诱导对NCI-OCI-Ly3细胞的剂量依赖性CDC。
6.2实施例2：活性测定
6.2.1人T细胞活化测定
通过两种方法进行PD1AB-6变体对抑制T细胞效应功能的功能评估。在一个测定中，预活化外周血单核细胞以表达PD-1，并在可溶性PD1AB-6-K3存在下进行再刺激(图12)。用有丝分裂原PHA将来自健康供体的外周血单核细胞(PBMC)预活化48h以上调PD-1表达。然后使用抗CD3缀合的
Figure BDA0002285022320002461
(Life Technologies，Carlsbad，CA)在稀释的PD1AB-6变体存在下在100nM至0.1nM最终浓度范围内对这些细胞进行再刺激。在刺激后24h使用培养物上清液中的IL-2水平来度量T细胞活化。如图12中所示，PD1AB-6-K3及两个其它变体在此测定中显示出有效的T细胞抑制活性，其中EC50为5-25nM。
第二种测定用于直接离体测量PD1AB-6-K3抑制T细胞功能(图13)。这通过如下方式来进行：将新鲜人全血直接涂铺在用抗CD3+/-PD1AB-6-K3共包被的96孔板中，并测量IL-17和IFN-γ水平作为T细胞活化的读数。CTLA4Ig
Figure BDA0002285022320002462
用作这些测定中的阳性对照，并且人IgG Fc片段用作阴性对照。如图13中所示，总的来说，PD1AB-6-K3趋向功效好于PD1AB-6-4P。阴性对照hIgG Fc显示没有活性，其中EC50>100nM。
6.2.2食蟹猴交叉反应性测定
使用新鲜分离的食蟹猴PBMC，如所示用抗食蟹猴CD3、CD28和PD1AB-6变体活化，与人样品类似地进行用先导PD1AB-6-K3测定功能食蟹猴交叉反应性。CTLA4Ig用作这些测定中的阳性对照，且hIgG1 Fc用作阴性对照。48小时后取出培养物上清液，以采用食蟹猴IL-2MSD测定进行细胞因子测定。如表14中所示，这些测定表明PD1AB-6-K3使食蟹猴T细胞细胞因子分泌减弱至与阳性对照CTLA4Ig相当的水平，并且活性与在人测定中观察到的活性相当。
表14.食蟹猴PBMC测定中的PD1AB-6-K3活性
Figure BDA0002285022320002471
6.2.3体外作用机制
与诸如CD3和CD4的T细胞表面分子结合的若干抗体导致信号传导以及随后那些分子的表面表达下调。因为PD1AB-6抗体被设计成经由PD-1提供激动剂信号，所以在体外PD1AB-6处理之后评价PD-1表达受到关注。
6.2.3.1 PD1AB-6处理之后降低的PD-1表达
用1μg/mL板结合的抗CD3+0.25μg/mL板结合的抗CD28与各种浓度的可溶性对照IgG1或PD1AB-6-IgG1活化来自不同供体的人PBMC。4小时至72小时温育后，针对CD3、CD45RO和PD-1对细胞进行染色以评估T细胞上的PD-1表达。图14A-14C显示在48小时PD1AB-6-IgG1处理后PD-1在人CD3+T细胞上降低的表达。PD-1表达的分析显示PD1AB-6-IgG1处理导致T细胞的表面上的PD-1表达的下调(图14A-14B中来自一个供体的代表性直方图以及图14C中跨越三个供体和各种抗体浓度的在48小时的平均荧光强度的分析)。早在与PD1AB-6-IgG1一起温育4小时的时候就观察到PD-1下调。表面PD-1表达的下调可能是由于PD1AB-6经由PD-1诱导的信号传导，并且是通过与在T细胞受体信号传导的情况下观察到的类似的机制(SanJose等人，2000，Immunity 12(2):161-70)。
6.3实施例3：PD1AB-6变体的物理化学表征
表15中提供了PD1AB-6-K3和PD1AB-6-4P变体基于氨基酸序列的理论分子量、等电点和消光系数。分子量仅代表抗体的氨基酸部分，并且不包括与糖基化和化学修饰相关的质量。
表15.PD1AB-6-K3和PD1AB-6-4P的理论物理化学性质
性质 PD1AB-6-K3 PD1AB-6-4P
氨基酸的数量 1346 1340
分子量，kD 147810.1 147581.6
等电点 7.6 6.7
消光系数，mL/mg/cm 1.58 1.58
6.3.1 UV光谱
用显示典型蛋白质吸收光谱的NanoDropTM 2000c UV-Vis分光光度计(ThermoScientific)测量PD-1抗体变体的UV光谱。
6.3.2蛋白质浓度
通过A280测量的浓度：使用NanoDropTM 2000c UV-Vis分光光度计，通过在280nm波长下的吸光度(A280)测量抗体的蛋白质浓度。1.58mL/mg/cm的值用于摩尔消光系数。
通过BCA测量的浓度：还采用标准方案用来自Thermo Scientific的BCA蛋白质测定试剂盒(目录号23250)测量抗体的蛋白质浓度。BSA在0.1-1mg/ml范围内用作标准蛋白质。通过A280测量的浓度与通过BCA测定测量的浓度非常一致。
6.3.3通过SDS-PAGE进行表征
对在HEK 293细胞中表达的PD1AB-6-K3和PD1AB-6-4P药物物质材料进行标准还原和非还原SDS-PAGE凝胶电泳及毛细管电泳，并用于非GLP毒理学研究。另外，对在CHO细胞中表达的PD1AB-6-K3和PD1AB-6-4P材料进行还原和非还原SDS-PAGE凝胶电泳及毛细管电泳。对于两种变体均未观察到显著的聚集或片段化。发现重链和轻链都是完整的。对于在HEK293和CHO细胞中表达的材料没有观察到显著差异(数据未显示)。
6.3.4通过尺寸排阻色谱进行表征
SEC用于在非GLP毒理学药物物质的整个产生过程中以及在配制和稳定性测试期间定量两种变体的单体、高分子量物质(HMWS或聚集体)和低分子量物质(片段的LMWS)的分数。采用EBD SEC平台方法。使用直列多角度光散射检测器确认峰的身份。表16中列出了在HEK 293细胞中表达并用于非GLP毒理学研究的PD1AB-6-K3和PD1AB-6-4P药物物质材料的SEC结果。还列出了在CHO细胞中表达的两种变体的结果用于比较。表16中给出的数据显示，在非GLP毒理学研究中使用的PD1AB-6-K3的HMWS百分比为2.5％。在任何MAb中都没有检测到LMWS。初始SEC曲线在HEK中表达的PD1AB-6-K3与PD1AB-6-4P之间没有显著差异。在CHO细胞中表达的材料中观察到HMWS略有增加是由于在最终制剂期间处理材料的原因。
表16.PD1AB-6MAb变体的SEC-HPLC曲线
*ND＝未检测到
6.3.5质谱法
测量来自还原抗体的完整重链和轻链的质谱。用PNGase处理抗体，然后在室温下与20mM TCEP一起温育120分钟进行还原。使用
Figure BDA0002285022320002491
去污剂移除旋转柱(Detergent Removal Spin Columns)从样品中移除聚山梨醇酯20，并使用Agilent4200ESI-TOF在LC/MS上运行样品。两种变体的质量示于表17中。
表17.PD1AB-6变体的测定分子量
同种型 PD1AB-6-4P PD1AB-6-K3
批料ID PD1AB-6-4P_001 PD1AB-6-K3_001
HC分子量，Da 49484.38 49598.7
LC分子量，Da 24182.31 24182.42
总分子量，Da 147333.38 147562.24
6.3.6等电聚焦
对于在HEK 293细胞中表达并用于非GLP毒理学研究的PD1AB-6-K3和PD1AB-6-4P药物物质材料采用基于标准凝胶的方法进行等电聚焦(IEF)以确定等电点(pI)。另外，对在CHO细胞中表达的材料进行IEF。对在HEK293和CHO中表达的PD1AB-6-K3测得的pI分别为7.8和7.8(数据未显示)。结果表明可在pH≤6.3下配制PD1AB-6-K3。
对于比较，对在HEK 293和CHO中表达的PD1AB-6-4P测得的pI分别为7.5和7.6(数据未显示)。
6.3.7
Figure BDA0002285022320002493
结合分析
采用捕获方法在
Figure BDA0002285022320002494
T200上分析纯化的PD1AB-6变体抗体与人PD1抗原的结合。将Fc特异性抗人IgG固定在Fc2上，并将Fc1保留空白作为参考通道。在抗人IgG上捕获纯化PD1抗体，并使用从100nM到200pM的两倍稀释系列使内部产生的人PD1抗原(PD1_002)流经两个通道以确定结合的动力学。使用的PD-1是在大肠杆菌中作为包涵体表达并重折叠的人PD-1(残基32-160)的胞外结构域。使用3M氯化镁在各抗原浓度之间使表面再生。PD1AB-6-IgG1、PD1AB-6-4P和PD1AB-6-K3的结合动力学的实例以及kon、koff和KD的值示于图15A-15C中。所有三种变体具有类似的与PD-1抗原的缔合及解离速率，其中相当的KD值为19-22nM。
6.3.8差示扫描量热法(DSC)
进行差示扫描量热法以使用NanoDSC(TA Instruments，New Castle，DE)在10mM琥珀酸盐缓冲液(pH 5.5)、9％蔗糖、0.05％聚山梨醇酯20中在2mg/mL的抗体浓度下测定在HEK 293和CHO细胞中表达的PD1AB-6-K3和PD1AB-6-4P的熔点(图16)。在含有25mM NaCl的25mM乙酸盐缓冲液(pH 6.0)中测试在CHO中表达的野生型IgG1用于比较。对于所有PD1AB-6变体观察到三个熔解转变。变体的Fab Tm在76-79℃范围内。PD1AB-6-K3的Fab Tm为79℃，表明热稳定性高，并且类似于野生型(表18)。在HEK 293与CHO细胞中表达的PD1AB-6-K3的Tm之间没有显著差异。
表18.通过差示扫描量热法测量的PD1AB-6MAb的转变温度
Figure BDA0002285022320002501
*NA＝不可用(未进行测试)
6.3.9内毒素
使用基于LAL的Charles River测量内毒素。使用的所有抗体的内毒素水平<0.05EU/mg。具体地，用于非GLP食蟹猴毒性研究的抗体的内毒素水平为0.03EU/mg。
6.3.10溶解度
通过超滤测定在CHO细胞中以及在ProBioGen AG(Berlin，Germany)表达的PD1AB-6-K3和PD1AB-6-4P的近似溶解度。使用50KD PES膜通过离心浓缩在10mM琥珀酸盐缓冲液(pH 5.5-6.0)、9％蔗糖中的MAb样品。在CHO细胞中表达的样品的表观溶解度≥270mg/mL。在ProBioGen表达的样品的表观溶解度≥170mg/mL。这些结果表明PD1AB-6-K3溶解度适合皮下(SC)制剂。
6.3.11粘度/可注射性
在高蛋白质浓度下粘度增加对旨在用于SC施用的药物产品来说是潜在的问题。一般地，接受的产品粘度最大值为20cP。采用基于VROC(RheoSense，San Ramos，CA)微流体芯片的方法测定在CHO细胞中表达的PD1AB-6-K3和PD1AB-6-4P样品的粘度。在10mM琥珀酸盐缓冲液(pH 5.5-6.0)、9％蔗糖中在175mg/mL的MAb浓度下测量样品粘度。PD1AB-6-K3的粘度为15-17cP。这些结果表明PD1AB-6-K3适合采用1mL体积、6mL/分钟流速、1mL注射器和27g1/2”针头在高达175mg/mL浓度下的标准SC递送条件进行施用。
对于比较，PD1AB-6-4P在相同浓度下的粘度为20-22cP。
6.3.12克分子渗透压浓度
通过冰点降低方法测定在ProBioGen在CHO细胞中表达并在高蛋白质浓度下配制的PD1AB-6-K3和PD1AB-6-4P样品的克分子渗透压浓度(osmolality)。测试的制剂在10mM琥珀酸盐缓冲液(pH 5.5)、9％蔗糖中含有100mg/mL或175mg/mL蛋白质。PD1AB-6-K3的克分子渗透压浓度对于100mg/mL制剂为379mOsm/kg，对于175mg/mL制剂为388mOsm/kg。结果表明可按高浓度配制PD1AB-6-K3，其具有SC施用可接受的克分子渗透压浓度。作为比较，PD1AB-6-4P的克分子渗透压浓度对于100mg/mL制剂为387mOsm/kg，对于175mg/mL制剂为396mOsm/kg。
6.4实施例4：预制剂和初步稳定性研究
6.4.1初步稳定性和预制剂概述
对PD1AB-6-K3和PD1AB-6-4P进行热及物理应力(搅动和冷冻/解冻)研究以评估和比较长期储存和处理可能性。
对PD1AB-6-4P(HEK 293)在琥珀酸盐缓冲液(pH 5.0、5.5、6.0或6.5)中的制剂进行初始热应力测试。稍后，对PD1AB-6-K3(CHO)和PD1AB-6-4P(CHO)在4种不同的缓冲液(相同pH范围)中的制剂进行更广泛的热应力测试。测试的缓冲液是乙酸盐(pH 5.0、5.5或6.0)、组氨酸(pH 5.0、5.5、6.0或6.5)、琥珀酸盐(pH 5.0、5.5、6.0或6.5)和柠檬酸盐(pH5.0、5.5、6.0或6.5)。所有制剂均含有20mg/mL抗体、10mM缓冲液、9％蔗糖和0.05％聚山梨醇酯20。为了制备这些制剂，将PD1AB-6-K3和PD1AB-6-4P浓缩，并通过超滤在含有9％蔗糖(pH 6.0)的四个缓冲液中的每一个中进行缓冲液交换，接着添加聚山梨醇酯20，并使用HCl和/或NaOH将pH调节到所需的最终制剂pH。
在所有研究中，将0.25-0.35mL配制抗体灌装到2cc USP 1型硼硅酸盐玻璃小瓶中，用涂有FluroTecTM的塞子塞住并密封。在不同的时间点通过SEC测定样品的聚集，通过在360nm波长下的吸光度(A360)测定浊度，通过视觉观察测定可见颗粒，通过光学显微镜测定亚可见颗粒物，并且通过动态光散射测定亚微米颗粒物。
6.4.2热应力
在热应力研究中，将小瓶保持在40℃下，对照保持在5℃下。基于SEC数据，计算并比较40℃和5℃下的单体降解速率。将在40℃下储存长达8周的PD1AB-6-K3的降解速率在图17中作图，显示最佳pH范围是5.5-6.5。亚微米粒度和浊度的测量通常确认了SEC结果(图18和19)。所有制剂在5℃下在12周内保持稳定(图20)。对于PD1AB-6-K3的20mg/mL制剂，琥珀酸盐缓冲液(pH 5.5)在5℃下提供>1年的预期储存稳定性。
6.4.3冷冻/解冻
在初始冷冻/解冻研究中，使在HEK 293和CHO细胞中表达并以10-20mg/mL在10mM琥珀酸盐或组氨酸缓冲液(pH 5.5-6.0)、9％蔗糖和0.005-0.05％聚山梨醇酯20中配制的PD1AB-6-K3和PD1AB-6-4P药物物质的样品在-80℃/5℃下进行两个或三个每日冷冻/解冻循环。研究显示变体的聚集状态没有变化(表19)。
表19.在-80℃/5℃下进行每日冷冻/解冻循环之前和之后在不同缓冲液中配制的PD1AB-6-K3和PD1AB-6-4P的单体含量
Figure BDA0002285022320002511
Figure BDA0002285022320002521
对含有100mg/mL和170mg/mL在ProBioGen在CHO细胞中表达的PD1AB-6-K3和PD1AB-6-4P药物物质的样品进行另外的冷冻/解冻研究。在10mM琥珀酸盐缓冲液(pH 5.5)、9％蔗糖、0.05％聚山梨醇酯20中配制这些样品。样品在-80℃/5℃下进行3个每日冷冻/解冻循环。两种变体显示在反复冷冻和解冻循环后聚集状态没有变化(表19)。这些数据表明含有高达170mg/mL PD1AB-6-K3的冷冻液体制剂对于GLP毒理学和FIH研究是可行的。
6.4.4搅动
在这项研究中，通过在5℃下连续涡旋长达7天来搅动含有20mg/mL抗体、10mM琥珀酸盐缓冲液(pH 5.5-6.0)、9％蔗糖和0.005-0.05％聚山梨醇酯20的样品。在任何样品中都没有观察到显著的降解和/或片段化。这些结果表明使用大量对于SC施用可接受的表面活性剂可成功地配制PD1AB-6-K3。
6.4.5克分子渗透压浓度
测定在不同制剂中配制的PD1AB-6-K3的克分子渗透压浓度。制剂A在10mM乙酸盐缓冲液(pH 5.2)、8.5％(w/v)蔗糖和0.005％(w/v)聚山梨醇酯-80中含有125mg/mL PD1AB-6-K3。制剂B在10mM乙酸盐缓冲液(pH5.2)、9％(w/v)蔗糖和0.005％(w/v)聚山梨醇酯-80中含有125mg/mL PD1AB-6-K3。PD1AB-6-K3的克分子渗透压浓度对于制剂A为345mOsm/kg，对于制剂B为399mOsm/kg。因此，将PD1AB-6-K3配制为制剂A(在10mM乙酸盐缓冲液(pH 5.2)、8.5％(w/v)蔗糖和0.005％(w/v)聚山梨醇酯-80中的125mg/mL PD1AB-6-K3)。
5.5实施例5：药物物质和药物产品的制备方法
以在含有8.5％(w/v)蔗糖和0.005％(w/v)聚山梨醇酯80的10mM乙酸钠缓冲液(pH5.2)中125mg/mL PD1AB-6-K3的浓度大量配制药物物质。图21A中提供了上游细胞培养和收获步骤的流程图，且图21B中提供了下游纯化步骤的流程图。
制备方法以1个主细胞库(MCB)小瓶的解冻开始。将MCB小瓶的内容物分散在生长培养基中并离心。弃去上清液，并将细胞转移到250-mL摇瓶中。细胞在摇瓶中经3次亚培养繁殖。监测并控制温度、CO2和搅动。在每次亚培养时测量细胞计数和活力。当细胞达到目标细胞密度时，使用细胞悬浮液接种50-L细胞培养袋用于进一步扩增。
将来自摇瓶的合并细胞悬浮液转移到含有生长培养基的50-L细胞培养袋中。监测温度、摇摆角度和气体流量；每天测量细胞计数和活力。当细胞达到目标细胞密度时，使用细胞悬浮液接种250-L一次性生物反应器。
将细胞悬浮液转移到含有生长培养基的250-L一次性生物反应器中。以分批进料方式操作生物反应器，使用自动控制系统监测和控制温度、pH、搅动和溶解氧浓度。每天测量细胞计数和活力。从第3天到收获前一天每天进给细胞培养物，根据需要添加葡萄糖和消泡剂溶液。如果细胞活力降至≤60％，则开始进行收获，或者在第14天开始进行收获，以较早时间为准。
收获250-L生物反应器，并通过深度过滤和0.2μm膜过滤移除细胞和碎片。用20mM磷酸钠和150mM氯化钠缓冲液(pH 7.0)冲洗过滤器以确保收获最大量产物。将大量收获物等分到200-L收获袋当中(0.2μm膜过滤)，取样用于产品浓度和内毒素测试，并转移用于下游处理以自未处理的批量纯化PD1AB-6-K3药物物质。
自上游收获物纯化大量PD1AB-6-K3药物物质包括一系列步骤，包括蛋白A亲和力(MabSelect SuReTM)色谱和低pH病毒灭活，接着是多峰阴离子交换色谱(CaptoTMadhere)。
首先，将以分批模式操作的MabSelect SuReTM树脂柱用基于20mM磷酸钠/150mM氯化钠的缓冲液(pH 7.0)平衡，然后加载澄清的收获物。加载(最多30g/L树脂)后，将柱首先用3个柱体积(CV)的基于20mM磷酸钠/150mM氯化钠的缓冲液(pH 7.0)洗涤，接着用5个CV的基于100mM柠檬酸钠的缓冲液(pH 6.2)洗涤。用基于100mM柠檬酸钠的缓冲液(pH 3.75)将产物从柱上洗脱，并过滤以进行进一步处理。
接下来，在搅拌下将基于500mM柠檬酸的缓冲液添加到合并的MabSelect SuReTM洗脱液中，直至达到pH为3.7±0.1。在环境温度下进行低pH保持步骤。在55至65分钟的目标病毒灭活保持期之后，通过添加基于500mM Tris的缓冲液将材料的pH调节到pH 5.0±0.2。将病毒灭活的材料深度过滤以进一步移除过程相关杂质(最大过滤体积250L/m2)。在进一步处理之前，使滤液通过0.2/0.1μm过滤器。
然后，添加基于0.1M柠檬酸钠、1M氯化钠的缓冲液(pH 5.0)以将滤液调节到最终盐浓度为0.1M氯化钠，之后通过多峰阴离子交换色谱进行纯化。将以流穿模式操作的CaptoTMadhere多峰阴离子交换色谱柱用基于100mM柠檬酸钠/100mM氯化钠的缓冲液(pH5.0)平衡。在加载期间收集流穿产物。在加载(最多50g/L树脂)后，用2个CV的基于100mM柠檬酸钠/100mM氯化钠的缓冲液(pH 5.0)将剩余产物从柱上洗脱。将洗脱产物级分与流穿产物级分合并。使合并的总产物通过0.2/0.1μm过滤器。
然后对纯化的药物物质进行纳米过滤，包括0.2/0.1μm预过滤器和两个1m2PlanovaTM 20N过滤器。在病毒过滤结束时(最大载量160L/m2；最大压力98kPa)，用基于100mM柠檬酸钠、100mM氯化钠的缓冲液(pH 5.0)冲洗过滤器系列。
将病毒滤液浓缩，并使用30kDa切向流过滤(TFF)盒式过滤器通过超滤和渗滤(UF/DF)进行配制。针对含有8.5％(w/v)蔗糖的10mM乙酸钠缓冲液(pH 4.8)对病毒滤液进行渗滤(≥7倍)。通过超滤将DF保留物浓缩至150g/L，并用渗滤缓冲液进一步稀释到113-138g/L。
然后使用含有8.5％蔗糖和2％聚山梨醇酯80的10mM乙酸钠缓冲液(pH 4.8)将UF/DF保留物配制成含有8.5％(w/v)蔗糖和0.005％(w/v)聚山梨醇酯80且PD1AB-6-K3浓度为125g/L的10mM乙酸钠缓冲液(pH 5.2)。
将配制的大量溶液通过0.2μm灭菌级过滤器进行过滤并等分到无菌培养基瓶当中。将配制的大量药物物质(FBDS)在-70℃±10℃下冷冻储存，之后才进行装运和灌装/精制以制成药物产品。
通过将FBDS灌装/精制到4-mL USP I型(或当地同等的)玻璃小瓶当中来制备PD1AB-6-K3注射剂。将每个小瓶用13mm丁基橡胶塞塞住并密封。PD1AB-6-K3注射剂由125mg/mL PD1AB-6-K3在含有8.5％(w/v)蔗糖和0.005％(w/v)聚山梨醇酯-80的10mM乙酸钠缓冲液(pH 5.2)中组成。将小瓶灌装至目标灌装重量为1.49g(相当于1.4mL)以确保可从每个一次性小瓶中取出1.2mL PD1AB-6-K3。
在制备药物产品期间不添加赋形剂。由于在制备药物产品期间对药物物质的操作最少，因此药物物质和药物产品共有类似的物理化学及生物学性质(数据未显示)。
5.6实施例6：药物物质的批量分析和稳定性研究
对PD1AB-6-K3药物物质的两个不同批次(批次A：GLP毒性和批次B：1期GMP)进行各种储存条件下的稳定性测试，储存条件包括长期(-70℃±10℃)、加速(-20℃±5℃)、应激(5℃±3℃)及其它条件(25℃/60％RH)。
批次A药物物质的样品已储存长达6个月，且批次B的样品已储存长达3个月。在-70℃、-20℃和5℃下储存的PD1AB-6-K3药物物质的所有稳定性结果(表20-22和24-26)均符合验收标准，并且在储存后显示没有显著变化。考虑到储存条件，25℃/60％RH样品得到的结果(表23和27)并不意外。通过SDS-PAGE(非还原)测量的单体含量降低，且低分子量物质增加；通过CIEX测量的带电变体显示主峰减少，并且酸性和碱性变体增加。基于可得到的稳定性数据，当PD1AB-6-K3药物物质在建议的-70℃±10℃储存条件下储存时，其保质期已达至少12个月。
表20.在-70℃±10℃下储存的PD1AB-6-K3药物物质(125mg/mL)批次A的稳定性数据
表21.在-20℃±5℃下储存的PD1AB-6-K3药物物质(125mg/mL)批次A的稳定性数据
Figure BDA0002285022320002562
表22.在5℃±3℃下储存的PD1AB-6-K3药物物质(125mg/mL)批次A的稳定性数据
Figure BDA0002285022320002563
Figure BDA0002285022320002571
表23.在25℃/60％RH下储存的PD1AB-6-K3药物物质(125mg/mL)批次A的稳定性数据
Figure BDA0002285022320002572
Figure BDA0002285022320002581
表24.在-70℃±10℃下储存的PD1AB-6-K3药物物质(125mg/mL)批次B的稳定性数据
Figure BDA0002285022320002582
Figure BDA0002285022320002591
表25.在-20℃±5℃下储存的PD1AB-6-K3药物物质(125mg/mL)批次B的稳定性数据
Figure BDA0002285022320002592
Figure BDA0002285022320002601
表26.在5℃±3℃下储存的PD1AB-6-K3药物物质(125mg/mL)批次B的稳定性数据
表27.在25℃/60％RH下储存的PD1AB-6-K3药物物质(125mg/mL)批次B的稳定性数据
Figure BDA0002285022320002603
Figure BDA0002285022320002611
5.7实施例7：药物产品的批量分析和稳定性研究
对PD1AB-6-K3药物产品的两个不同批次(批次A和批次B)进行各种储存条件下的稳定性测试，储存条件包括长期(5℃±3℃，直立和倒置)、加速(25℃/60％RH，直立和倒置)及其它条件(-20℃，直立)。
将PD1AB-6-K3注射剂开发的样品批次A(以用于毒理学研究的药物物质制成)在-20℃(直立)、5℃(直立和倒置)和25℃/60％RH(直立和倒置)下储存长达3个月。结果示于表28-32中。所有测试结果均符合验收标准，并且在这些储存条件下没有观察到明显的趋势。
将PD1AB-6-K3临床注射剂的样品批次B在5℃(直立和倒置)和25℃/60％RH(直立和倒置)下储存长达1个月。结果示于表33-36中。所有测试结果均符合验收标准，并且在这些储存条件下没有观察到明显的趋势。
基于3个月的可得到的稳定性数据，当PD1AB-6-K3注射剂在建议的5℃储存条件下储存时，其保质期达至少6个月。
表28.在5℃±3℃下直立储存的PD1AB-6-K3药物产品(125mg/mL)批次A的稳定性数据
Figure BDA0002285022320002621
Figure BDA0002285022320002631
表29.在5℃±3℃下倒置储存的PD1AB-6-K3药物产品(125mg/mL)批次A的稳定性数据
Figure BDA0002285022320002632
Figure BDA0002285022320002641
表30.在25℃±2℃/60±5％RH下直立储存的PD1AB-6-K3药物产品(125mg/mL)批次A的稳定性数据
Figure BDA0002285022320002642
表31.在25℃±2℃/60±5％RH下倒置储存的PD1AB-6-K3药物产品(125mg/mL)批次A的稳定性数据
Figure BDA0002285022320002652
Figure BDA0002285022320002661
表32.在-20℃±5℃下储存的PD1AB-6-K3药物产品(125mg/mL)批次A的稳定性数据
Figure BDA0002285022320002662
Figure BDA0002285022320002671
表33.在5℃±3℃下直立储存的PD1AB-6-K3药物产品(125mg/mL)批次B的稳定性数据
Figure BDA0002285022320002672
Figure BDA0002285022320002681
表34.在5℃±3℃下倒置储存的PD1AB-6-K3药物产品(125mg/mL)批次B的稳定性数据
Figure BDA0002285022320002682
Figure BDA0002285022320002691
表35.在25℃±2℃/60±5％RH下直立储存的PD1AB-6-K3药物产品(125mg/mL)批次B的稳定性数据
Figure BDA0002285022320002692
Figure BDA0002285022320002701
表36.在25℃±2℃/60±5％RH下倒置储存的PD1AB-6-K3药物产品(125mg/mL)批次B的稳定性数据
Figure BDA0002285022320002702
5.8实施例8：制剂液体稳定性研究
为了测试平台单克隆抗体制剂的稳固性，进行双臂(2×2)全因子分析以模拟pH和表面活性剂浓度(例如，PS-80)对含有10mM乙酸钠、9％(w/v)蔗糖和125mg/ml PD1AB-6-K3抗体的制剂样品的影响和双向相互作用。
使具有不同pH和表面活性剂含量的制剂样品经受各种应力条件，包括4℃、25℃、40℃的温度应力；连续冷冻-解冻循环(F/T循环)；和/或搅动。然后采用SEC、毛细管电泳(CE)、流动成像显微镜检查(MFI)、阳离子交换色谱(CEX)、液相色谱(LC)和
Figure BDA0002285022320002711
测定检查制剂在各种应力条件下的稳定性。另外，在稳定性研究期间监测制剂样品的pH、渗透压和粘度。在整个研究过程中进行制剂样品的浊度和/或其它不规则性方面的视觉检查。
5.8.1储存温度对候选制剂中的抗体的聚集和剪切(片段化)的影响。
检查储存温度对候选制剂中的抗体分子的聚集和剪切(片段化)的影响。测试了7个候选制剂(F-1至F-7)。如下表37中所示，候选制剂均含有125mg/mL PD1AB-6-K3抗体、10mM乙酸钠和9％(w/v)蔗糖，并且各自含有pH和表面活性剂(PS-80)含量的不同组合。特别地，测试了从0.005％(w/v)至0.015％(w/v)不等的表面活性剂含量，并且测试了从pH 5.2至pH 5.8不等的pH。
表37：候选制剂。
制剂 抗体(mg/ml) 乙酸钠(mM) 蔗糖(w/v) PS-80(w/v) pH
F-1 125 10 9％ 0.005％ 5.2
F-2 125 10 9％ 0.015％ 5.2
F-3 125 10 9％ 0.005％ 5.5
F-4 125 10 9％ 0.01％ 5.5
F-5 125 10 9％ 0.01％ 5.6
F-6 125 10 9％ 0.005％ 5.8
F-7 125 10 9％ 0.015％ 5.8
将每个候选制剂的样品保持在4℃、25℃和40℃下。然后通过SEC在不同时间点分析样品以定量候选制剂中抗体的单体、HMW物质(聚集体)和LMW物质(片段或段片)的分数。
对于SEC分析，采用EBD SEC平台方法。使用直列多角度光散射检测器确认峰的身份。特别地，遵循以下方案：
柱：TSK G3000SWxl，7.8mm ID x 30cm，5μM(Tosoh Bioscience)
流动相：100mM磷酸钾、250mM氯化钾，pH 6.8
流速：0.5mL/分钟。
检测：215和280nm
持续时间：30分钟。
柱温：环境温度
载量：净≥20μg
图23A显示候选制剂F-1、F-3和F-6在4℃下储存12周后的SEC结果。将候选制剂的峰与在-80℃下储存的标准对照的峰进行比较。图23B-23D显示在4℃储存长达14个月后候选制剂F-1、F-2、F-4、F-6和F-7中的抗体的HMW物质的分数的定量。
如图23A中所示，在4℃下储存12周后，HMW和LMW物质的量略有增加。特别地，LMW物质增加约0.02％。在图23B中对HMW物质的定量作图。
如图23B-23D中所示，在4℃下储存12周后，候选制剂的HMW分数在约1.3％与约1.6％之间变化；在4℃下储存26周后，候选制剂的HMW分数在约1.4％与约1.7％之间变化；并且在4℃下储存14个月后，候选制剂的HMW分数在约1.3％与约1.7％之间变化。因此，在4℃下长时间储存并未导致抗体的HMW分数显著变化。进一步地，与具有较高pH的制剂相比，具有较低pH的制剂倾向于具有较少的HMW物质(在时间0时也存在这种趋势)。没有观察到PS-80含量对HMW物质形成的明显影响。
图24A显示候选制剂F-1、F-3和F-6在25℃下储存12周后的SEC结果。将候选制剂的峰与在-80℃下储存的标准对照的峰进行比较。图24B-24C显示在25℃下储存长达26周后的候选制剂F-1、F-2、F-4、F-6和F-7中的抗体的HMW物质的分数的定量。
如图24A中所示，在25℃下储存12周后，HMW和LWM物质的量均增加。LMW物质从0.59％(-80℃对照)增长到约1.42％(pH 5.2)、约1.53(pH5.5)和约1.77(pH 5.8)。在图24B中对HMW物质的定量作图。
如图24B和图24C中所示，在25℃下储存12周后，候选制剂的HMW分数在约1.5％与约2％之间变化；并且在4℃下储存26周后，候选制剂的HMW分数在约1.6％与约2.2％之间变化。因此，在25℃下长时间储存确实导致形成更多抗体的HMW物质。再次地，与具有较高pH的制剂相比，具有较低pH的制剂倾向于具有较少的HMW和LMW物质。没有观察到PS-80含量对HMW物质形成的明显影响。
图25A显示候选制剂F-1、F-3和F-6在40℃下储存4周后的SEC结果。将候选制剂的峰与在-80℃下储存的标准对照的峰进行比较。图25B和图25C分别显示在40℃下储存4周后的候选制剂F-1、F-2、F-4、F-6和F-7中的抗体的HMW和LMW分数的定量。
如图25A中所示，在40℃下储存4周后，候选制剂样品中的HMW分数和LMW分数均有增加。HMW和LMW分数的定量分别示于图25B和图25C中。如所示，在40℃下储存4周后，候选制剂的HMW分数在约1.8％与约2.3％之间变化，且候选制剂的LMW分数在约3.75％与约4.75％之间变化。再次地，与具有较高pH的制剂相比，具有较低pH的制剂倾向于具有较少的HMW和LMW物质。没有观察到PS-80含量对HMW和LMW物质形成的明显影响。最后，在本实验中观察到的剪切模式对于在40℃下储存的其它IgG1单克隆抗体是典型的，这有可能代表抗体在铰链区域中的切割。在本实验中，剪切的观察可能在一定程度上被峰加宽模所遮蔽。
接下来，除了SEC分析之外采用毛细管电泳-十二烷基硫酸钠(CE-SDS)方法监测LMW物质。简言之，这种非还原CE-SDS方法基于在碘乙酰胺(IAM)存在下的变性条件下蛋白质物质的流体动力学尺寸的差别来分离蛋白质物质。在电泳之前使蛋白质物质结合于阴离子去污剂SDS。将所得带负电的SDS-蛋白质复合物电动注射到填充有SDS凝胶缓冲剂的裸融二氧化硅毛细管当中。跨越毛细管施加电压，在此电压下SDS包被蛋白质通过它们在亲水性聚合物凝胶溶液中的迁移差异而被分离。蛋白质在其从毛细管的注射端经过窗口时被光电二极管阵列(PDA)检测器检测，并通过UV检测进行可视化。
图26显示候选制剂在5℃、25℃或40℃下储存4周后如通过CE-SDS测定鉴定的候选制剂F-1、F-2、F-4至F-7中的LMW分数的定量。将候选制剂中LMW分数的定量与在-80℃下储存的对照制剂的定量进行比较。
如图26中所示，与CES分析结果一致，在5℃下储存4周并未导致候选制剂中的抗体的显著剪切；在25℃下储存4周略微增加了抗体的LMW片段的量；并且在40℃下储存4周明显增加了LMW片段的量。进一步地，如在40℃下储存的组中更突出显示的那样，与具有较高pH值的制剂相比，较低pH制剂倾向于更耐受温度诱导的抗体剪切(片段化)。
值得注意的是，对于至少一些实验组来说，如通过CE-SDS测定定量的LMW物质的百分比略高于通过SEC测定定量的百分比。这种差异可能是由于CE-SDS测定的样品制备过程所致，其有可能在所述过程期间诱导了进一步的抗体剪切。更合理的比较应该是将候选制剂的CE-SDS结果与对照制剂的CE-SDS结果进行比较，如图26中所示。
图27显示候选制剂在4℃下储存26周后，候选制剂F-1、F-2、F-4至F-7的CE-SDS分析的结果。图中所示为代表抗体的HMW、单体和LMW级分的峰，以及示例性定量结果。表38中汇总了所有候选制剂中的所有级分的定量。包括在时间零(温度处理前)时候选制剂F-1的定量作为对照。
表38：CE-SDS的定量(4℃、26周数据)。
制剂 PS-80(w/v)(％) pH 单体(％) LMW(％) HMW(％)
F-1(T0) 0.005 5.2 91.97 1.94 6.1
F-1 0.005 5.2 92.18 3.19 4.63
F-2 0.015 5.2 92.24 3.28 4.48
F-4 0.01 5.5 90.92 2.83 6.25
F-5 0.01 5.6 91.64 3.06 5.3
F-6 0.005 5.8 91.77 3.11 5.12
F-7 0.015 5.8 93.68 1.74 4.58
如上述结果所示，与F-1(T0)样品相比，在4℃下储存26周并未显著增加任何候选制剂中的HMW或LMW分数，表明在pH 5.2与pH 5.8之间的测试pH范围内以及0.005％(w/v)与0.015％(w/v)之间的PS-80含量的测试范围内在4℃下储存期间，抗体以单体形式保持稳定。再次地，与SEC测定相比，在CE-SDS测定中观察到的LMW和HMW百分比的增加可能是由于在CE-SDS测定的样品制备过程期间引入的人为因素所致。
5.8.2储存温度对候选制剂的亚可见颗粒密度的影响。
检查储存温度对候选制剂中的亚可见颗粒密度的影响。特别地，进行流动成像显微镜检查以确定液体制剂的单位体积中的亚可见颗粒的数量。使用5200型蛋白质简单微流动成像系统(MFITM，San Jose，CA)，使用来自Thermo Fisher的颗粒计数标准物和来自DukeScientific的10μm粒度标准物进行实验。将样品用Milli-Q水稀释10X(100μL候选制剂稀释到900μL Milli-Q水当中)，并加载至5x 0.2μL吸啜管。每个实验重复3至5次，获得结果的平均值。
图28A和图28B显示候选制剂分别在4℃和25℃下储存12周后如通过流动成像显微镜检查测定的候选制剂F-1、F-2、F-4至F-7中的亚可见颗粒密度。将粒度范围≥2μm、≥10μm和≥25μm的亚可见颗粒计数。由于样品体积有限(100μl按1:10稀释于milli-Q水中)，因此在分析中观察到一定程度的误差。这些特征中的误差条指示三次200μl测量的标准偏差。
如这些图中所示，在≥10μm和≥25μm粒度范围内的亚可见颗粒密度远低于静脉内施用分别不超过每毫升(ml)6,000和600个计数的USP标准。对于在≥2μm粒度范围内的亚可见颗粒，通常在具有较低pH的候选制剂中有较少的颗粒(与较高pH相比)。
图29显示候选制剂在4℃下储存26周后如通过流动成像显微镜检查测定的候选制剂F-1、F-2、F-4至F-7中的亚可见颗粒密度。将≥10μm和≥25的粒度范围内的亚可见颗粒计数。由于样品体积有限，没有包括重复实验。每个条显示来自单次测量的颗粒计数。
如图29中所示，延长4℃储存超过第十二周并未导致候选制剂中有显著更多的亚可见颗粒，至少直到第26周结束时如此。特别地，在第二十六周结束时，在≥10μm或≥25μm粒度范围内的亚可见颗粒仍远低于静脉内施用的USP标准。
5.8.3储存温度对候选制剂中的抗体的电荷同种型分布的影响。
采用阳离子交换色谱(CEX)评估候选制剂F-1、F-2、F-4至F-7中的抗体电荷同种型分布。以下方案用于CEX分析：
柱：ProPac WCX-10，生物分析4×250mm
流动相A：1.2mM Tris、0.75mM咪唑、5.8mM哌嗪，pH 5.5(0.5X)
流动相B：1.2mM Tris、0.75mM咪唑、5.8mM哌嗪，pH 9.5(0.5X)
流速：1.0mL/分钟
检测：215和280nm
持续时间：50分钟
柱温：30℃
载量：净≥20μg
梯度：
Figure BDA0002285022320002751
如图30A中所示，在时间零(T0，即在4℃或25℃下储存候选制剂之前)时，抗体主要以一种形式(主要物质)存在。另外，相对少量的抗体作为酸物质或碱性物质存在。进一步地，根据图30B中所示的定量，主要物质占T0时的制剂中的总抗体的约76.5％(w/w)，酸性物质占T0时的制剂中的总抗体的约14.6％(w/w)，且碱性物质占T0时的制剂中的总抗体的约8.9％(w/w)。
如图30B和图30C中所示，与T0样品相比，在4℃下储存12周的制剂样品中的电荷物质的分布没有显著变化。另一方面，在25℃下储存12周后，一些主要物质转变成酸性物质。进一步地，与具有较高pH的候选制剂相比，具有较低pH的候选制剂倾向于更耐化学修饰。在本实验中没有观察到候选制剂的PS-80含量对抗体的化学修饰的明显影响。
还对在4℃下储存26周的样品进行了CEX分析。如图31中所示，在4℃下储存12周与26周之间没有观察到主要物质的百分比有明显差异。
5.8.4储存温度对候选制剂中的抗体的化学稳定性的影响。
采用RP-HPLC评估候选制剂F-1、F-2、F-4至F-7中的抗体稳定性。特别地，如下所述将配制抗体还原。将抗体在50mM Tris-HCl(pH 8.0)中稀释至1mg/ml，最终浓度4M盐酸胍。添加1.0M二硫苏糖醇(DTT，Sigma)溶液以得到100mM的最终浓度，并将反应混合物在55℃下放置30分钟。将蛋白质溶液冷却到室温。PNGaseF也用于通过在37℃下温育4小时来移除聚糖，酶与抗体的比率为1单位:20mg。
在Agilent 1200HPLC系统上进行RP-HPLC。流动相包括含0.11％三氟乙酸(Thermo)的水作为溶剂A，和含0.09％三氟乙酸的乙腈(Burdick&Jackson)作为溶剂B。Agilent PLRP-S柱4.6×150mm，3mm粒度，
Figure BDA0002285022320002753
孔径柱用于用Agilent 6210 MSD TOF质谱仪的RP-HPLC飞行时间(TOF)质谱(MS)分析。通过215nm的UV检测分析柱洗脱液，然后在线导入TOF质谱仪。初始流动相是25％溶剂B持续5分钟，然后从25至35溶剂B每分钟施加2.5％溶剂B的两级梯度，接着是从35至45％溶剂B每分钟0.625％溶剂B的第二梯度。在75℃下以0.3ml/分钟的流速进行分离。
Figure BDA0002285022320002761
如图32中所示，与在-80C下储存的对照制剂相比，在4℃下储存12周之后，候选制剂没有显示出可检测的变化。在25℃下储存12周之后，候选制剂没有显示出显著变化。在任一温度下均未观察到新峰。进一步地，在两种温度下，不同候选制剂的性能彼此非常相似。
5.8.5储存温度对候选制剂中的抗体的结合活性的影响。
采用捕获方法在
Figure BDA0002285022320002762
T200上分析制剂样品中的抗体的与人PD1抗原结合的结合亲和力。特别地，将蛋白A或抗人IgG固定在表面上。通过以10μl/分钟流速流经表面60秒来捕获制剂样品中的PD1抗体。使内部产生的人PD1抗原在从0.3至200nM不等的浓度下以30μl/分钟流速流经表面300秒以确定结合的动力学。通过使洗脱溶液以30μl/分钟流速流经表面600秒来确定解离。通过使3M氯化镁以30μl/分钟流速流经表面60秒在各抗原浓度之间再生表面。对1:1模型进行拟合。
图33A左图显示候选制剂在40℃下储存4周后如通过
Figure BDA0002285022320002763
测定确定的候选制剂F-4(pH 5.5，0.01％PS-80)中的抗体与人PD1抗原之间的代表性缔合/解离速率。右图显示相同制剂在T0时的结果。
进一步地，如通过
Figure BDA0002285022320002764
测定所确定，缔合速率(Ka)从1.64×105至1.73×105不等(标准偏差＝1.13％)；解离速率(Kd)从4.37×10-3至4.55×10-3不等(标准偏差＝0.92％)；且平衡解离常数KD从25.4至27.2nM不等(标准偏差＝1.37％)。
图33B显示候选抗体制剂F-1、F-2、F-4至F7在T0时或在候选制剂已在25℃下储存4周或40℃下储存4周或4℃下储存12周或25℃下储存12周后的KD(nM)值的定量结果。在不同的储存条件下或在不同的候选制剂间没有观察到抗体结合活性的显著差异。
5.8.6搅动对候选制剂中的抗体的聚集和亚可见颗粒形成的影响。
利用SEC和MFI检查搅动对候选制剂的液体稳定性的影响。特别地，将0.9ml具有125mg/ml抗体、10mM乙酸钠(pH 5.2)、8.5％(w/v)蔗糖、0.001％(w/v)或0.015％(w/v)PS-80的候选制剂在2ml小瓶中在台式涡旋器上在4℃下摇动长达24小时。搅动2、8和24小时之后，通过SEC和/或MFI分析候选制剂的等分试样。在图34A和图34B中将结果作图。
如图34A和图34B中所示，对于含有0.015％PS-80的制剂样品观察到HMW分数和≥2μm粒度范围内的颗粒的密度均增加。对于含有0.001％PS-80的制剂样品没有观察到明显的变化。进一步地，在搅动后观察到显著的起泡，特别是0.015％PS-80样品。
5.8.7冷冻-解冻循环对候选制剂中的抗体的聚集和亚可见颗粒形成的影响。
利用SEC和MFI检查反复冷冻-解冻循环对候选制剂的液体稳定性的影响。特别地，将每种候选制剂F1、F-2和F4-F7的200μL等分试样放入费希尔螺旋盖管中，并在-80℃冰箱中放置过夜使之冷冻。将冷冻样品在室温下解冻，直到完全解冻。进行多达5个冷冻-解冻循环。在图35A-35C中将结果作图。
如图35A中所示，对于任何候选制剂在3或5个冷冻-解冻循环后未观察到单体抗体分数的显著差异。如图35B和图35C中所示，≥10μm和≥25μm粒度范围内的亚可见颗粒的密度仍远低于静脉内施用的USP标准。
5.8.7视觉观察、pH、克分子渗透压浓度和粘度。
另外，在稳定性研究期间监测制剂样品的pH、克分子渗透压浓度和粘度。在整个研究过程中对制剂样品的浊度和/或其它不规则性进行视觉检查。数据汇总于下表39-42中。如所示，在4℃或25℃下储存三个月后未检测到可见颗粒。所有候选制剂的粘度低于4cP。pH值保持稳定并接近目标。在制剂中使用9％(w/v)蔗糖的克分子渗透压浓度略高。用8.5％(w/v)蔗糖配制将克分子渗透压浓度降至约345mOsm。
表39：视觉观察
Figure BDA0002285022320002771
表40：粘度
Figure BDA0002285022320002772
Figure BDA0002285022320002781
表41：pH
Figure BDA0002285022320002782
表42：克分子渗透压浓度
Figure BDA0002285022320002783
7.序列表
本说明书与序列表的计算机可读形式(CRF)副本一起提交。创建于2018年3月27日且大小为50,916字节的名称为10624-386-228_SEQLIST.txt的CRF与序列表的纸质副本相同，并且以引用的方式整体并入本文。
序列表
<110> 细胞基因公司(Celgene Corporation)
西格诺药品有限公司(Signal Pharmaceuticals, LLC)
<120> 包含PD-1结合蛋白的制剂及其制备方法
<130> 10624-386-228
<140> TBA
<141> 2018-03-28
<150> US 62/478,524
<151> 2017-03-29
<160> 44
<170> FastSEQ for Windows Version 4.0
<210> 1
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗体PD1AB-1、PD1AB-3和PD1AB-6的VL CDR1
<400> 1
Lys Ser Gly Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Gln Lys Asn Phe Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 2
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5和PD1AB-6的VL CDR2
<400> 2
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 3
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5和PD1AB-6的VL CDR3
<400> 3
His Gln Tyr Leu Tyr Ser Trp Thr
1 5
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<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5和PD1AB-6的VH CDR1
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Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr Tyr Met His
1 5 10
<210> 5
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5和PD1AB-6的VH CDR2
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Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asp Arg Lys
1 5 10
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<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5和PD1AB-6的VH CDR3
<400> 6
Ser Gly Pro Val Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ser Tyr Val Met Asp Tyr
1 5 10 15
<210> 7
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗体PD1AB-2、PD1AB-4和PD1AB-5的VL CDR1
<400> 7
Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗体PD1AB-1和PD1AB-6的VL结构域
<400> 8
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Gly Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Gln Lys Asn Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln
85 90 95
Tyr Leu Tyr Ser Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg
<210> 9
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗体PD1AB-2、PD1AB-4和PD1AB-5的VL结构域
<400> 9
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln
85 90 95
Tyr Leu Tyr Ser Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg
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<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗体PD1AB-3的VL结构域
<400> 10
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Gly Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Gln Lys Asn Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Asn Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln
85 90 95
Tyr Leu Tyr Ser Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg
<210> 11
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗体PD1AB-1和PD1AB-2的VH结构域
<400> 11
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Gln Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asp Arg Lys Tyr Asp Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Gly Pro Val Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ser Tyr Val Met Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
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<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗体PD1AB-3和PD1AB-4的VH结构域
<400> 12
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Gln Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asp Arg Lys Tyr Asp Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Gly Pro Val Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ser Tyr Val Met Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗体PD1AB-5和PD1AB-6的VH结构域
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Tyr Met His Trp Val Gln Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asp Arg Lys Tyr Asp Pro Lys Phe
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65 70 75 80
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85 90 95
Ala Arg Ser Gly Pro Val Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ser Tyr Val Met Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 14
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5和PD1AB-6的VL FR1
<400> 14
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys
20
<210> 15
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5和PD1AB-6的VL FR2
<400> 15
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 16
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-4、PD1AB-5和PD1AB-6的VL FR3
<400> 16
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 17
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5和PD1AB-6的VL FR4
<400> 17
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
1 5 10
<210> 18
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗体PD1AB-3的VL FR3
<400> 18
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Asn Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 19
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗体PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3和PD1AB-4的VH FR1
<400> 19
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser
20 25
<210> 20
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5和PD1AB-6的VH FR2
<400> 20
Trp Val Gln Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met Gly
1 5 10
<210> 21
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-5和PD1AB-6的VH FR3
<400> 21
Tyr Asp Pro Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser
1 5 10 15
Thr Asp Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr
20 25 30
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
35
<210> 22
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5和PD1AB-6的VH FR4
<400> 22
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 23
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗体PD1AB-3和PD1AB-4的VH FR3
<400> 23
Tyr Asp Pro Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser
1 5 10 15
Thr Asn Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr
20 25 30
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
35
<210> 24
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗体PD1AB-5和PD1AB-6的VH FR1
<400> 24
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser
20 25
<210> 25
<211> 341
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗体PD1AB-1和PD1AB-6的VL
<400> 25
gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60
atcaactgca agtccggtca aagtgtttta tacagttcaa atcagaagaa cttcttggcc 120
tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct aagctgctca tttactgggc atccactagg 180
gaatctgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240
atcagcagcc tgcaagctga agatgtggca gtttattact gtcatcaata cctctactcg 300
tggacgtttg gccaggggac caagctggag atcaaacgga c 341
<210> 26
<211> 341
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗体PD1AB-2、PD1AB-4和PD1AB-5的VL
<400> 26
gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60
atcaactgca agtccagcca gagtgtttta tacagctcca acaataagaa ctacttagct 120
tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct aagctgctca tttactgggc atctacccgg 180
gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240
atcagcagcc tgcaagctga agatgtggca gtttattact gtcatcaata cctctactcg 300
tggacgtttg gccaggggac caagctggag atcaaacgga c 341
<210> 27
<211> 341
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗体PD1AB-3的VL
<400> 27
gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60
atcaactgca agtccggtca aagtgtttta tacagttcaa atcagaagaa cttcttggcc 120
tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct aagctgctca tttactgggc atccactagg 180
gaatctgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240
atcagcaacc tgcaagctga agatgtggca gtttattact gtcatcaata cctctactcg 300
tggacgtttg gccaggggac caagctggag atcaaacgga c 341
<210> 28
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗体PD1AB-1和PD1AB-2的VH
<400> 28
gaggtccagc tggtacagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggctac agtgaaaatc 60
tcctgcaagg tttctggatt caacattaaa gacacgtata tgcactgggt gcaacaggcc 120
cctggaaaag ggcttgagtg gatgggaagg attgatcctg cgaatggtga taggaaatat 180
gacccgaagt tccagggcag agtcaccata accgcggaca cgtctacaga cacagcctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc tagatcaggc 300
cctgtttatt actacggtag tagctacgtt atggactact ggggtcaagg aaccacagtc 360
accgtctcct ca 372
<210> 29
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗体PD1AB-3和PD1AB-4的VH
<400> 29
gaggtccagc tggtacagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggctac agtgaaaatc 60
tcctgcaagg tttctggatt caacattaaa gacacgtata tgcactgggt gcaacaggcc 120
cctggaaaag ggcttgagtg gatgggaagg attgatcctg cgaatggtga taggaaatat 180
gacccgaagt tccagggcag agtcaccata accgcggaca cgtctacaaa cacagcctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc tagatcaggc 300
cctgtttatt actacggtag tagctacgtt atggactact ggggtcaagg aaccacagtc 360
accgtctcct ca 372
<210> 30
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗体PD1AB-5和PD1AB-6的VH
<400> 30
gaggtccagc tggtacagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggctac agtgaaaatc 60
tcctgcaagg cttctggatt caacattaaa gacacgtata tgcactgggt gcaacaggcc 120
cctggaaaag ggcttgagtg gatgggaagg attgatcctg cgaatggtga taggaaatat 180
gacccgaagt tccagggcag agtcaccata accgcggaca cgtctacaga cacagcctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc tagatcaggc 300
cctgtttatt actacggtag tagctacgtt atggactact ggggtcaagg aaccacagtc 360
accgtctcct ca 372
<210> 31
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗体PD1AB-6-IgG1的轻链
<400> 31
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Gly Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Gln Lys Asn Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln
85 90 95
Tyr Leu Tyr Ser Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 32
<211> 454
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗体PD1AB-6-IgG1的重链
<400> 32
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Gln Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asp Arg Lys Tyr Asp Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Gly Pro Val Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ser Tyr Val Met Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
130 135 140
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
195 200 205
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro
210 215 220
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
225 230 235 240
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
245 250 255
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
260 265 270
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
275 280 285
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
290 295 300
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
305 310 315 320
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
325 330 335
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
340 345 350
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
355 360 365
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
370 375 380
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
385 390 395 400
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
405 410 415
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
420 425 430
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
435 440 445
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450
<210> 33
<211> 454
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗体PD1AB-6-K3的重链
<400> 33
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Gln Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asp Arg Lys Tyr Asp Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Gly Pro Val Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ser Tyr Val Met Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
130 135 140
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
195 200 205
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro
210 215 220
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
225 230 235 240
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
245 250 255
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
260 265 270
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
275 280 285
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
290 295 300
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
305 310 315 320
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Ala Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
325 330 335
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
340 345 350
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
355 360 365
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
370 375 380
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
385 390 395 400
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
405 410 415
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
420 425 430
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
435 440 445
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450
<210> 34
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗体PD1AB-6-4P的重链
<400> 34
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Gln Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asp Arg Lys Tyr Asp Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Gly Pro Val Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ser Tyr Val Met Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu
130 135 140
Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn
195 200 205
Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser
210 215 220
Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 35
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗体PD1AB-6-4PE的重链
<400> 35
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Gln Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asp Arg Lys Tyr Asp Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Gly Pro Val Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ser Tyr Val Met Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu
130 135 140
Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn
195 200 205
Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser
210 215 220
Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 36
<211> 330
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<223> 人IgG1的Fc区
<400> 36
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 37
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有 K322A取代的人IgG1的Fc区，也称为IgG1-K322A Fc区
<400> 37
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Ala Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 38
<211> 327
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<223> 人IgG4的Fc区
<400> 38
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 39
<211> 327
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有S228P取代的人IgG4的Fc区，也称为IgG4P Fc区
<400> 39
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 40
<211> 327
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有S228P和L235E取代的人IgG4的Fc区，也称为IgG4PE Fc区
<400> 40
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 41
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗体PD1AB-6-IgG1的轻链的恒定区
<400> 41
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
1 5 10 15
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
20 25 30
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
35 40 45
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
50 55 60
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
65 70 75 80
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
85 90 95
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 42
<211> 198
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<223> 人PD-1
<400> 42
Met Gln Ile Pro Gln Ala Pro Trp Pro Val Val Trp Ala Val Leu Gln
1 5 10 15
Leu Gly Trp Arg Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp
20 25 30
Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp
35 40 45
Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val
50 55 60
Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala
65 70 75 80
Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg
85 90 95
Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg
100 105 110
Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu
115 120 125
Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val
130 135 140
Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro
145 150 155 160
Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu Val Val Gly Val Val Gly Gly
165 170 175
Leu Leu Gly Ser Leu Val Leu Leu Val Trp Val Leu Ala Val Ile Cys
180 185 190
Ser Arg Ala Ala Arg Gly
195
<210> 43
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 编码用于抗PD-1抗体结合的表位的人PD-1的氨基酸100-109
<400> 43
Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser
1 5 10
<210> 44
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 编码用于抗PD-1抗体结合的表位的人PD-1的氨基酸100-105
<400> 44
Leu Pro Asn Gly Arg Asp
1 5

Claims (101)

1.一种包含抗体或其抗原结合片段的药物制剂，所述抗体或其抗原结合片段
(a)与由包含具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的轻链可变区和具有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的重链可变区的抗体识别的人PD-1的表位结合；或者
(b)同包含具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的轻链可变区和具有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的重链可变区的抗体竞争与人PD-1的结合。
2.一种包含与PD-1结合的抗体或其抗原结合片段的药物制剂，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含如表1中所示的抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者的VL互补决定区1(CDR1)、VL CDR2和VLCDR3；和/或
(b)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含如表2中所示的抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者的VH互补决定区1(CDR1)、VH CDR2和VHCDR3。
3.如权利要求2所述的药物制剂，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区进一步包含如表3中所示的抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者的VL框架1(FR1)、VL FR2、VL FR3和VLFR4；和/或
(b)重链可变区(VH)，所述重链可变区进一步包含如表4中所示的抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者的VH框架1(FR1)、VH FR2、VH FR3和VHFR4。
4.如权利要求2所述的药物制剂，其中所述VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3分别包含SEQID NO:1、2和3的氨基酸序列，且所述VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3分别包含SEQ ID NO:4、5和6的氨基酸序列。
5.如权利要求2所述的药物制剂，其中所述VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3分别包含SEQID NO:7、2和3的氨基酸序列，且所述VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3分别包含SEQ ID NO:4、5和6的氨基酸序列。
6.如权利要求2所述的药物制剂，其中所述抗体或其抗原结合片段包含VL，所述VL包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列。
7.如权利要求2所述的药物制剂，其中所述抗体或其抗原结合片段包含VL，所述VL包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列。
8.如权利要求2所述的药物制剂，其中所述抗体或其抗原结合片段包含VL，所述VL包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列。
9.如权利要求2所述的药物制剂，其中所述抗体或其抗原结合片段包含VH，所述VH包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列。
10.如权利要求2所述的药物制剂，其中所述抗体或其抗原结合片段包含VH，所述VH包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列。
11.如权利要求2所述的药物制剂，其中所述抗体或其抗原结合片段包含VH，所述VH包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列。
12.如权利要求2所述的药物制剂，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的VL；和
(b)包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VH。
13.如权利要求2所述的药物制剂，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的VL；和
(b)包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VH。
14.如权利要求2所述的药物制剂，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的VL；和
(b)包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VH。
15.如权利要求2所述的药物制剂，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的VL；和
(b)包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的VH。
16.如权利要求2所述的药物制剂，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的VL；和
(b)包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的VH。
17.如权利要求2所述的药物制剂，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的VL；和
(b)包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的VH。
18.如权利要求2所述的药物制剂，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的VL；和
(b)包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的VH。
19.如权利要求2所述的药物制剂，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的VL；和
(b)包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的VH。
20.如权利要求2所述的药物制剂，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的VL；和
(b)包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的VH。
21.如权利要求1-20中任一项所述的药物制剂，其中所述抗体或其抗原结合片段包含人IgG1 Fc区或其突变体。
22.如权利要求1-20中任一项所述的药物制剂，其中所述抗体或其抗原结合片段包含人IgG1-K322A Fc区。
23.如权利要求1-20中任一项所述的药物制剂，其中所述抗体或其抗原结合片段包含人IgG4 Fc区或其突变体。
24.如权利要求1-20中任一项所述的药物制剂，其中所述抗体或其抗原结合片段包含人IgG4P Fc区。
25.如权利要求1-20中任一项所述的药物制剂，其中所述抗体或其抗原结合片段包含人IgG4PE Fc区。
26.如权利要求1-20中任一项所述的药物制剂，其中所述抗体或其抗原结合片段包含重链Fc区，所述重链Fc区包含选自SEQ ID NO:36-40的氨基酸序列。
27.如权利要求26所述的药物制剂，其中所述抗体或其抗原结合片段进一步包含轻链恒定区，所述轻链恒定区包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列。
28.如权利要求1-20中任一项所述的药物制剂，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的轻链恒定区；和
(b)包含选自SEQ ID NO:36-40的氨基酸序列的重链Fc区。
29.如权利要求1-28中任一项所述的药物制剂，其中所述抗体或其抗原结合片段包含轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列。
30.如权利要求1-28中任一项所述的药物制剂，其中所述抗体或其抗原结合片段包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列。
31.如权利要求1-28中任一项所述的药物制剂，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的轻链；和
(b)包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的重链。
32.如权利要求1-28中任一项所述的药物制剂，其中所述抗体或其抗原结合片段包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列。
33.如权利要求1-28中任一项所述的药物制剂，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的轻链；和
(b)包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的重链。
34.如权利要求1-28中任一项所述的药物制剂，其中所述抗体或其抗原结合片段包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列。
35.如权利要求1-28中任一项所述的药物制剂，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的轻链；和
(b)包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的重链。
36.如权利要求1-28中任一项所述的药物制剂，其中所述抗体或其抗原结合片段包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列。
37.如权利要求1-28中任一项所述的药物制剂，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的轻链；和
(b)包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的重链。
38.如权利要求1-37中任一项所述的药物制剂，其中当结合于PD-1时，所述抗体或抗原结合片段与SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的残基100-109中的至少一个结合。
39.如权利要求38所述的药物制剂，其中当结合于PD-1时，所述抗体或抗原结合片段与SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的残基100-105中的至少一个结合。
40.如权利要求1-37中任一项所述的药物制剂，其中当结合于PD-1时，所述抗体或抗原结合片段与至少一个选自SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的N33、T51、S57、L100、N102、G103、R104、D105、H107和S109的残基结合。
41.如权利要求40所述的药物制剂，其中当结合于PD-1时，所述抗体或抗原结合片段与SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的N33结合。
42.如权利要求40所述的药物制剂，其中当结合于PD-1时，所述抗体或抗原结合片段与SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的T51结合。
43.如权利要求40所述的药物制剂，其中当结合于PD-1时，所述抗体或抗原结合片段与SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的S57结合。
44.如权利要求40所述的药物制剂，其中当结合于PD-1时，所述抗体或抗原结合片段与SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的L100结合。
45.如权利要求40所述的药物制剂，其中当结合于PD-1时，所述抗体或抗原结合片段与SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的N102结合。
46.如权利要求40所述的药物制剂，其中当结合于PD-1时，所述抗体或抗原结合片段与SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的G103结合。
47.如权利要求40所述的药物制剂，其中当结合于PD-1时，所述抗体或抗原结合片段与SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的R104结合。
48.如权利要求40所述的药物制剂，其中当结合于PD-1时，所述抗体或抗原结合片段与SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的D105结合。
49.如权利要求40所述的药物制剂，其中当结合于PD-1时，所述抗体或抗原结合片段与SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的H107结合。
50.如权利要求40所述的药物制剂，其中当结合于PD-1时，所述抗体或抗原结合片段与SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的S109结合。
51.如权利要求40所述的药物制剂，其中当结合于PD-1时，所述抗体或抗原结合片段与SEQ ID NO:42的氨基酸序列内的G103和R104结合。
52.如权利要求1-51中任一项所述的药物制剂，其中所述抗体或其抗原结合片段：
(a)减弱T细胞活性；和/或
(b)下调T细胞的表面上的PD-1表达。
53.如权利要求1-52中任一项所述的药物制剂，其中所述抗体或其抗原结合片段与人PD-1和/或猴PD-1但不与啮齿动物PD-1特异性结合。
54.如权利要求1-53中任一项所述的药物制剂，其中所述抗体或其抗原结合片段具有减弱的ADCC活性和/或减弱的CDC活性。
55.如权利要求52所述的药物制剂，其中所述T细胞活性的减弱发生在人PBMC或全血样品中。
56.如权利要求52或55所述的药物制剂，其中通过细胞因子产生的抑制来度量所述T细胞活性的减弱。
57.如权利要求56所述的药物制剂，其中被所述抗体或其抗原结合片段抑制的细胞因子包括IL-1、IL-2、IL-6、IL-12、IL-17、IL-22、IL-23、GM-CSF、TNF-α和/或IFN-γ。
58.如权利要求52所述的药物制剂，其中所述T细胞的表面上的PD-1表达的下调：
(a)早在用所述抗体或其抗原结合片段处理后4小时发生；和/或
(b)与细胞因子抑制同时或先于细胞因子抑制。
59.如权利要求53所述的药物制剂，其中与纯化的人PD-1结合的KD为约100pM至约10nM，且与在细胞表面上表达的人PD-1和在细胞表面上表达的猴PD-1结合的KD为约100pM至约10nM。
60.如权利要求56所述的药物制剂，其中减弱T细胞活性的EC50为约1pM至约10pM、约10pM至约100pM、约100pM至约1nM、约1nM至约10nM或约10nM至约100nM。
61.如权利要求56所述的药物制剂，其中T细胞活性的最大减弱百分比为至少约10％、20％、30％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。
62.如权利要求52或58所述的药物制剂，其中PD-1表达的最大下调百分比为至少约10％、20％、30％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。
63.如权利要求1-62中任一项所述的药物制剂，其中所述抗体是单克隆抗体。
64.如权利要求1-63中任一项所述的药物制剂，其中所述抗体是人源化抗体、人抗体或嵌合抗体。
65.如权利要求64所述的药物制剂，其中所述人源化抗体是去免疫化抗体或复合人抗体。
66.如权利要求1-65中任一项所述的药物制剂，其中所述抗体或其抗原结合片段是Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、scFv、dsFv、双抗体、三抗体、四抗体或由抗体片段形成的多特异性抗体。
67.如权利要求1-66中任一项所述的药物制剂，其中所述抗体或其抗原结合片段与剂缀合。
68.如权利要求67所述的药物制剂，其中所述剂选自放射性同位素、金属螯合剂、酶、荧光化合物、生物发光化合物和化学发光化合物。
69.如权利要求1-68中任一项所述的药物制剂，其进一步包含缓冲系统。
70.如权利要求69所述的药物制剂，其中所述缓冲系统选自乙酸盐缓冲液、琥珀酸盐缓冲液、组氨酸缓冲液和柠檬酸盐缓冲液。
71.如权利要求70所述的药物制剂，其中所述缓冲系统是乙酸盐缓冲液。
72.如权利要求70所述的药物制剂，其中所述缓冲系统是琥珀酸盐缓冲液。
73.如权利要求70所述的药物制剂，其中所述缓冲系统是组氨酸缓冲液。
74.如权利要求70所述的药物制剂，其中所述缓冲系统是柠檬酸盐缓冲液。
75.如权利要求1-69中任一项所述的药物制剂，其中所述缓冲系统的浓度在0.1mM至1M的范围内。
76.如权利要求75所述的药物制剂，其中所述缓冲系统的浓度在1mM至100mM的范围内。
77.如权利要求76所述的药物制剂，其中所述缓冲系统的浓度为10mM。
78.如权利要求1-77中任一项所述的药物制剂，其中所述缓冲系统的pH在pH 4-6.5的范围内。
79.如权利要求78所述的药物制剂，其中所述缓冲系统的pH在pH4.7-5.7的范围内。
80.如权利要求79所述的药物制剂，其中所述缓冲系统的pH为pH 5.2。
81.如权利要求1-80中任一项所述的药物制剂，其进一步包含多元醇。
82.如权利要求81所述的药物制剂，其中所述多元醇选自糖、糖醇和糖酸。
83.如权利要求82所述的药物制剂，其中所述多元醇是糖。
84.如权利要求83所述的药物制剂，其中所述糖是蔗糖。
85.如权利要求84所述的药物制剂，其中所述蔗糖的浓度在5-10％(w/v)的范围内。
86.如权利要求85所述的药物制剂，其中所述蔗糖的浓度为8.5％(w/v)。
87.如权利要求1-86中任一项所述的药物制剂，其进一步包含表面活性剂。
88.如权利要求87所述的药物制剂，其中所述表面活性剂是聚山梨醇酯-20。
89.如权利要求87所述的药物制剂，其中所述表面活性剂是聚山梨醇酯-80。
90.如权利要求89所述的药物制剂，其中所述聚山梨醇酯-80的浓度在0.001-0.1％(w/v)的范围内。
91.如权利要求90所述的药物制剂，其中所述聚山梨醇酯-80的浓度为0.005％(w/v)。
92.一种药物制剂，其包含与PD-1结合的抗体或其抗原结合片段、10mM乙酸钠缓冲液(pH 5.2)、8.5％(w/v)蔗糖和0.005％(w/v)聚山梨醇酯-80。
93.如权利要求92所述的药物制剂，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含如表1中所示的抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者的VL互补决定区1(CDR1)、VL CDR2和VLCDR3；和/或
(b)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含如表2中所示的抗体PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中的任一者的VH互补决定区1(CDR1)、VH CDR2和VHCDR3。
94.如权利要求1-93中任一项所述的药物制剂，其中当在-70℃±10℃下储存时，所述药物制剂稳定至少12个月。
95.如权利要求1-93中任一项所述的药物制剂，其中当在5℃±3℃下储存时，所述药物制剂稳定至少6个月。
96.一种制备如权利要求1-95中任一项所述的药物制剂的方法，所述方法包括：
(a)在培养基中培养细胞，其中所述细胞包含一种或多种多核苷酸，所述多核苷酸包含编码所述抗体的重链、轻链或重链和轻链两者或其抗原结合片段的核苷酸序列；
(b)收获所述培养基；
(c)对所述培养基进行一系列纯化步骤。
97.如权利要求96所述的方法，其中所述纯化步骤包括：
(a)亲和色谱；
(b)病毒灭活；
(c)离子交换色谱；
(d)病毒过滤；和
(e)超滤/渗滤。
98.如权利要求97所述的方法，其中所述亲和色谱是蛋白A亲和色谱。
99.如权利要求97所述的方法，其中所述离子交换色谱是阴离子交换色谱。
100.如权利要求97所述的方法，其中所述病毒灭活步骤是低pH病毒灭活步骤。
101.如权利要求96-100中任一项所述的方法，其进一步包括配制步骤。
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