CN110662752A - 用于临床管理由衰老细胞引起或介导的病症以及治疗癌症的Bcl家族拮抗剂磷杂环化合物 - Google Patents

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Abstract

本公开内容提供了基于新颖化学骨架的具有Bcl抑制活性的化合物。磷杂环化合物可包括被N‑芳基或N‑杂芳基取代的P‑苯基磷杂环部分。P‑苯基磷杂环部分可以在磷上任选地被硫代(＝S)代替氧代(＝O)取代。与磷连接的第二个杂原子可以与磷杂环的连接至磷的N‑取代氮原子成环状连接，以与它们连接的磷原子一起提供杂环。通过在母核连接部分的两个磷取代基之间引入这种环状约束，可以在化合物中促进有利的结合构象。所选择的化合物促进衰老细胞中的细胞凋亡，并且可以开发用于治疗衰老相关病症，例如骨关节炎，眼科疾病，肺疾病和动脉粥样硬化。所选择的化合物促进癌细胞中的细胞凋亡，并且可以开发为化学治疗剂。

Description

用于临床管理由衰老细胞引起或介导的病症以及治疗癌症的 Bcl家族拮抗剂磷杂环化合物
相关申请
本申请要求均在2018年4月30日提交的美国临时专利申请62/664,850(酰基苄胺)，62/664,891(磷酰胺)，62/664,860(磷杂环化合物)和62/664,863(酰基磷酰胺)的优先权权益，出于所有目的所有上述优先权申请均通过引用方式并入本文中。
技术领域
以下公开和要求保护的技术一般涉及衰老细胞领域及其在年龄相关病症中的作用。特别地，本公开内容提供了用于抑制Bcl蛋白活性的化学结构的新骨架。
发明内容
这里提供的发明创造了治疗衰老相关病症的新范例。下面的公开内容概述了选择性消除衰老细胞的策略，并提供了有效的化合物，药物组合物，开发策略和治疗方案，并描述了许多随之产生的益处。
已经基于新的化学骨架开发了新的Bcl抑制剂家族。该家族中的一些Bcl抑制剂是特别有效的senolytic药物(抗衰老药物)。使衰老细胞体外或体内与本公开的化合物和组合物接触，选择性地调节或消除这些细胞。抑制剂可用于对具有年龄相关病症的受试者的靶组织给药，从而选择性地消除组织中或组织周围的衰老细胞，并缓解所述病症的一种或多种症状或体征。来自该家族的所选化合物可以配制为化学治疗剂并销售。
在下面的描述、附图和所附权利要求中提出了本发明。
附图简要说明
图1A至1C描述了通常可用于制备磷杂环化合物(phospholidine)的合成方案。
图2A至2C描述了根据本公开内容的示例性化合物的合成。
图3A和3B是显示示例性磷杂环化合物抑制Bcl活性和去除衰老细胞的能力的数据表。
图4取自三维模型，其中本公开中描述的Bcl抑制剂匹配Bcl家族蛋白的晶体结构。注释可以用作读者的指导，用于开发落入上述通式内的其他化合物，其将保留Bcl抑制活性和抗衰老(senolytic)活性。
图5A、5B和5C分别显示了骨关节炎模型中衰老细胞标志物p16、IL-6和MMP13的表达。衰老表型可以通过senolytic药物来改善。
图6A显示有效的senolytic药物在骨关节炎模型中恢复对治疗小鼠的对称负重。图6B，6C和6D是显示这些小鼠中关节的组织病理学的图像。用药剂治疗有助于防止或逆转蛋白多糖层的破坏。
图7A和7B显示当玻璃体内施用senolytic药物时，小鼠氧诱导的视网膜病变(OIR)模型中新血管形成和血管闭塞的逆转。图7C和7D取自用于糖尿病性视网膜病的链脲佐菌素(STZ)模型。STZ诱导的血管渗漏通过玻璃体内施用senolytic药物而减弱。
图8显示去除衰老细胞有助于恢复用于香烟烟雾(CS)诱导的COPD(慢性阻塞性肺疾病)的小鼠模型中的氧饱和度(SPO2)。
图9显示取自动脉粥样硬化的小鼠模型的数据，其中缺乏LDL受体的近交小鼠喂食高脂肪饮食。右图片显示主动脉中斑块的染色。中间图片定量地显示，通过用senolytic药物处理，减少了被斑块覆盖的主动脉的表面积。
具体实施方式
衰老细胞的特征是细胞不再具有复制能力但仍保留在起源组织中，引起衰老相关的分泌表型(SASP)。本公开内容的前提是许多与年龄相关的病症由衰老细胞介导，并且可以临床上使用从病症或其周围的组织中选择性去除细胞来治疗这些病症。
以下描述和要求保护的技术代表了一类新的Bcl抑制剂的第一次描述，其可用于从靶组织中选择性地消除衰老细胞，以治疗年龄相关病症。
抑制Bcl蛋白活性
Bcl蛋白家族(TC#1.A.21)包括共用Bcl-2同源(BH)结构域的进化保守蛋白。Bcl蛋白在线粒体中上调或下调细胞凋亡(一种程序性细胞死亡形式)的能力最为显著。提供以下解释以帮助用户理解本公开化合物的一些科学基础。这些概念不是实施本发明所必需的，除了明确说明或要求之外，其不以任何方式限制本文所述化合物和方法的使用。
在本公开的上下文中，特别感兴趣的Bcl蛋白是下调细胞凋亡的蛋白。抗凋亡Bcl蛋白含有BH1和BH2结构域，其中一些含有另外的N末端BH4结构域(Bcl-2，Bcl x(L)和Bcl-w(Bcl-2L2)，抑制这些蛋白增加细胞凋亡的速率或对凋亡的易感性。因此，这种蛋白质的抑制剂可用于帮助消除表达蛋白质的细胞。
在2000年代中期，雅培公司(Abbott Laboratories)开发了一种新的Bcl-2、Bcl-xL和Bcl-w抑制剂，称为ABT-737(Navitoclax)。该化合物是BH3模拟小分子抑制剂(SMI)组的一部分，其靶向这些Bcl-2家族蛋白，但不靶向A1或Mcl-1。ABT-737优于以前的BCL-2抑制剂，因为它对Bcl-2，Bcl-xL和Bcl-w具有更高的亲和力。体外研究表明，B细胞恶性肿瘤患者的原代细胞对ABT-737敏感。在人类患者中，ABT 737对某些类型的癌细胞有效，但受到剂量限制性血小板减少症的影响。
US2016/0339019A1(Laberge等人)描述了使用MDM2抑制剂、Bcl抑制剂和Akt抑制剂治疗某些年龄相关病症。US20170266211A1(David等人)描述了特定Bcl抑制剂用于治疗年龄相关病症的用途。美国专利号8,691,184、9,096,625和9,403,856(Wang等人)描述了小分子库中的Bcl抑制剂。
现在已经发现，基于本文描述的新骨架的化合物匹配Bcl蛋白的活性位点，以提供强Bcl抑制和/或促进靶细胞的凋亡。这些化合物可以作为高效和特异性药物开发，以靶向衰老细胞和癌细胞，如以下部分所述。
磷杂环抑制剂化合物
本公开内容包括Bcl抑制剂磷杂环化合物，其具有基于母核N-取代的磷杂环连接部分的骨架，其可提供在Bcl蛋白的活性位点的有利的结合构象，并产生具有有效抑制活性和/或促进靶细胞凋亡的化合物。N-取代的磷杂环连接部分可以通过包含N-P(＝X)基团(其中X是O或S)的母核环状基团将N-芳基或N-杂芳基取代基与P-芳基或P-杂芳基取代基连接。
本公开的磷杂环化合物可包括被N-芳基或N-杂芳基取代的P-苯基磷杂环部分。P-苯基磷杂环部分可以在磷上任选地被硫代(＝S)代替氧代(＝O)取代。在母核磷杂环基团中，磷可以进一步与硫，氧或第二氮环原子连接。或者，磷可以与饱和碳原子连接。因此，磷杂环化合物可包括P-苯基氧氮磷杂环基(P-phenyl oxazaphospholidine group)，P-苯基硫氮磷杂环基(P-phenyl thiazaphospholidine group)或P-苯基二氮磷杂环基(P-phenylimidazaphospholidine group)。母核N-取代的磷杂环连接部分的磷原子是四面体并且可以是手性的。因此，本发明的磷杂环化合物可以作为立体异构体存在。
与磷连接的第二杂原子可以与磷杂环的连接至磷的N-取代氮原子成环状连接，以与它们连接的磷原子一起提供杂环。通过在母核连接部分的两个磷取代基之间引入这种环状约束，可以在化合物中促进有利的结合构象。
进一步取代P-苯基磷杂环部分的苯环以提供可以匹配Bcl蛋白活性位点的特定位置的取代基的所需构型。P-苯基磷杂环部分的氮被N-芳基或N-杂芳基取代，N-芳基或N-杂芳基本身进一步被取代以提供匹配Bcl蛋白活性位点的特定位置的取代基的所需构型。N-芳基或N-杂芳基可以是N-苯基，其中苯环进一步被取代。
该技术包括式(I)所述的化合物：
Figure BDA0002264526170000041
其中：
X1是O或S；
R1选自R21，SR21，OR21和NR21R22；
R3选自氢，烷基，取代的烷基，烷酰基，取代的烷酰基，烷氧基羰基和取代的烷氧基羰基；和/或R1和R3与它们连接的N和P原子一起形成5-，6-或7-元杂环，所述杂环任选被一个或多个R23取代；
R4选自氢，烷基，取代的烷基，硝基，烷基磺酰基，取代的烷基磺酰基，烷基亚磺酰基，取代的烷基亚磺酰基，氰基，烷基羰基，取代的烷基羰基，C(O)OH，C(O)NH2，卤素，SO2NH2，烷基氨基磺酰基，取代的烷基氨基磺酰基，烷基磺酰基氨基和取代的烷基磺酰基氨基，烷酰基，取代的烷酰基，烷基氨基羰基，取代的烷基氨基羰基，烷氧基羰基和取代的烷氧基羰基；
R21和R22独立地选自氢，烷基和取代的烷基；或R21和R22与它们连接的N原子一起形成5-或6-元杂环，所述杂环任选被一个或多个R23取代；
每个R23独立地选自烷基，取代的烷基，-CONH2，COOH，CONHR21，羟基，卤素，烷氧基和取代的烷氧基；
Z2选自-NR5R6，氢，烷基，取代的烷基，链烯基，取代的链烯基，烷氧基，取代的烷氧基，烷基硫烷基，取代的烷基硫烷基，炔基，取代的炔基，芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基，碳环，取代的碳环，杂环，取代的杂环，芳基烷氧基，取代的芳基烷氧基，芳氧基，取代的芳氧基，芳氧基烷氧基，取代的芳氧基烷氧基，芳基硫烷基，取代的芳基硫烷基，芳基硫烷基烷氧基，取代的芳基硫烷基烷氧基，环烷基烷氧基，取代的环烷基烷氧基，环烷氧基，取代的环烷氧基，卤素，羰基氧基，卤代烷氧基，卤代烷基，羟基和硝基；
Z3选自杂环，取代的杂环，-NR5R6，芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基，碳环和取代的碳环；
R5和R6独立地选自氢，烷基和取代的烷基；
R11和R12各自是一个或多个任选的取代基，其各自独立地选自：烷基，取代的烷基，烷氧基，取代的烷氧基，卤素，氰基，硝基，羧基，C(O)NH2，SO2NH2，磺酸酯，羟基，烷基磺酰基，取代的烷基磺酰基，烷基氨基磺酰基，取代的烷基氨基磺酰基，烷基磺酰基氨基，取代的烷基磺酰基氨基，烷氧基羰基，取代的烷氧基羰基和-NR5R6；和
R31选自H，R12和L3-Y3，其中L3是连接基，Y3选自芳基，取代的芳基，杂芳基和取代的杂芳基。
本公开内容包括具有成环状连接的R1和R3的磷杂环化合物，以提供杂环。式(I)的磷杂环化合物包括R1和R3，R1和R3与它们连接的N和P原子一起连接，以提供5-，6-或7-元杂环。除N和P原子外，该杂环还可包括O，S或第二N环原子。本发明包括R1为R21，SR21，OR21或NR21R22，其中R21和R3与它们连接的原子一起形成5-，6-或7-元杂环，所述杂环任选被一个或多个R23取代。例如，R1和R3可以成环状连接(-R1*R3-)，以在磷原子和相邻的氮原子之间提供-X2(CH2)p-连接基，其中p是2或3，X2是O，S或NH。任选地，杂环可以包括羰基作为环的一部分，并且杂环可以任选地被取代，例如被一个或多个R23基团取代。
因此，式(I)的磷杂环化合物可以进一步通过式(II)描述：
Figure BDA0002264526170000061
其中：
X2选自Z12，S，O和NR22；
Z11选自-C(＝O)-，-C(＝O)X3-和Z12；
每个Z12独立地是CR24R25；
X3是O或S；
n为0，1，2或3；和
每个R24和每个R25独立地选自氢，烷基和取代的烷基。
本公开包括X1为O。或者，X1可以为S。在式(II)中，Z11可以为Z12。有时，Z11可以是羰基(C＝O)或羰基氧基(-C(＝O)O-)。当Z11选自-C(＝O)X3-时，n为0，1或2。当Z12为-C(＝O)-或Z12，n为1，2或3。本公开包括X2为NH或NR22。R22可以是烷基或取代的烷基。任选地，R22是C1-6烷基，例如甲基。本公开包括X2为Z12。本公开包括X2为O。X2也可以是S。有时，环的每个Z12是CH2。任选地，环的一个或多个Z12基团可以被R24和/或R25取代基取代。
本公开内容包括式(I)或(II)的化合物，其中连接N和P原子的5-，6-或7-元杂环包括衍生自氨基酸残基的侧链取代基。例如，Z12基团的R24和R25之一可以是对应于氨基酸侧链的基团。对于每个Z12基团，R24和R25中的一个可以是氨基酸残基的侧链基团，例如丙氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，谷氨酰胺，谷氨酸，天冬氨酸，天冬酰胺，丝氨酸，苏氨酸，半胱氨酸，蛋氨酸，赖氨酸，精氨酸，鸟氨酸，苯丙氨酸，酪氨酸，色氨酸或组氨酸，或其取代形式。通常，杂环仅包括一个包含氨基酸衍生的侧链的Z12基团，剩余的Z12基团中R24和R25各自为氢。
因此，Z12可包括具有对应于L-氨基酸残基的手性的手性中心。或者，Z12可具有对应于D-氨基酸残基的手性。氨基酸合成子的某些部分(例如，α-氨基或主链羧酸基团)可以在掺入化合物的杂环中时被修饰或除去，同时仍然提供感兴趣的氨基酸衍生的侧链基团的保留或掺入。
磷杂环化合物的立体异构体包括手性磷立体中心。本公开的任何通式或结构可包括在磷杂环部分的四面体磷立体中心处的立体异构体。因此，式(II)的磷杂环化合物可以富含式(IIa)或(IIb)的立体异构体：
Figure BDA0002264526170000071
本发明包括光学纯的式(IIa)化合物。本发明包括光学纯的式(IIb)化合物。
在本公开的任何通式(例如，式(I)-(VIIb))的母核N-取代的磷杂环连接部分中，R3和R1可以通过-Z11-(Z12)n-X2成环状连接，如式(II)所示，其中R3和R1与它们连接的N和P原子一起提供含磷杂环。该环可以是5-或6-元并且任选地被一个或多个独立地选自以下的基团取代：烷基，取代的烷基，烷氧基，取代的烷氧基，卤素，氰基，硝基，羧基，C(O)NH2，SO2NH2，磺酸酯，羟基，烷基磺酰基，取代的烷基磺酰基，烷基氨基磺酰基，取代的烷基氨基磺酰基，烷基磺酰基氨基和取代的烷基磺酰基氨基，烷氧基羰基，取代的烷氧基羰基，烷基氨基，二烷基氨基，取代的烷基氨基和取代的二烷基氨基。
式(I)或(II)的磷杂环化合物可以通过式(IIIa)-(IIIh)之一进一步描述：
Figure BDA0002264526170000081
其中R24和R25独立地选自H，烷基和取代的烷基，并且r是1或2。有时r是1。或者r是2。本公开包括式(IIIa)至(IIIh)的化合物，其中X1是O。可选地，X1可以是S。
式(IIIa)的磷杂环化合物可以通过式(IIIa1)-(IIIa2)之一进一步描述：
Figure BDA0002264526170000091
其中R25a选自烷基和取代的烷基。
在本公开的任何通式(例如，式(I)-(VIIb))的母核磷杂环连接部分中，R4可以是硝基，烷基磺酰基或取代的烷基磺酰基。有时，R4是硝基。或者，R4可以是烷基磺酰基。任选地，R4是CH3SO2-。本公开包括其中R4可以是取代的烷基磺酰基的化合物和通式。任选地，R4是CF3SO2-。R4也可以是氰基。任选地，R4可以是烷基羰基，取代的烷基羰基，-C(O)OH或-C(O)NH2。
本公开内容包括R4为烷基氨基磺酰基或取代的烷基氨基磺酰基。还包括R4为烷氧基羰基或取代的烷氧基羰基。还包括R4为烷基磺酰基氨基或取代的烷基磺酰基氨基。或者，R4可以是烷基或取代的烷基。
在本公开的任何通式中，Z2可以是-NR5R6，其中R5和R6独立地选自氢，烷基和被一个或多个选自以下的基团取代的烷基：芳基硫烷基烷基，杂芳基硫烷基烷基，链烯基，烷氧基烷基，烷氧基羰基烷基，烷基，烷基磺酰基烷基，芳基，芳基烷基，芳基磺酰基烷基，芳氧基烷基，芳基亚磺酰基烷基(arylsulfinylalkyl)，芳基磺酰基烷基，杂芳基，杂芳基烷基，杂芳基磺酰基烷基，杂芳氧基烷基，杂芳基亚磺酰基烷基，杂芳基磺酰基烷基，羧基烷基，环烯基，环烯基烷基，环烷基，(环烷基)烷基，环烷基羰基，(杂环)硫烷基烷基，羟烷基，烷基氨基，二烷基氨基和杂环基(例如，哌啶基，哌嗪基或吗啉基)，其中所述一个或多个基团任选进一步被取代。该公开内容包括Z2为-NR5R6，其中R5为氢。R6可以是芳基硫烷基烷基，杂芳基硫烷基烷基，芳氧基烷基或杂芳氧基烷基，R6任选进一步被取代，例如被杂环或取代的杂环取代。杂环或取代的杂环可以是R6的烷基部分的取代基，并且在一些情况下是哌啶基，哌嗪基或吗啉基杂环。
在本公开的通式中，Z3可以是取代的杂环。Z3可以是进一步被取代的单环6元饱和杂环。该公开内容包括Z3是取代的哌啶基。任选地，Z3可以是取代的哌嗪基。Z3杂环基团可以被包括三个连接的环状基团(例如，三个芳基、杂芳基、碳环和/或杂环)的基团取代，所述环状基团通过任选的连接基彼此连接并且以线性方式连接至Z3的第一杂环。Z3可以是被三-(亚芳基和/或亚杂芳基)基团取代的哌啶基或哌嗪基。任选地，Z3可以是被三亚芳基、三亚杂芳基、芳基-杂芳基-芳基、杂芳基-杂芳基-芳基、芳基-杂芳基-杂芳基、芳基-环烷基-芳基或芳基-杂环-芳基取代的哌啶基或哌嗪基，其中所述基团的每个环任选进一步被取代。
或者，在本公开的通式中，Z3可以是取代的碳环。Z3可以是进一步被取代的单环6-元饱和碳环。Z3碳环基团可以被包括三个连接的环状基团(例如，三个芳基，杂芳基，碳环和/或杂环)的基团取代，所述环状基团通过任选的连接基彼此连接并且以线性方式连接至Z3的第一碳环。Z3可以是被三亚芳基，三亚杂芳基，芳基-杂芳基-芳基，杂芳基-杂芳基-芳基，芳基-杂芳基-杂芳基，芳基-环烷基-芳基或芳基-杂环-芳基取代的环己基，其中所述基团的每个环任选进一步被取代。
本公开内容包括具有Y3芳基或杂芳基的化合物，其能够与母核结构中的P-苯基磷杂环部分的苯基进行π堆积相互作用。π堆积(或π-π堆积)相互作用是指芳环之间有吸引力的非共价相互作用。本公开包括式(I)的化合物，其中R31是L3-Y3，其中L3是连接基，Y3是芳基、取代的芳基、杂芳基或取代的杂芳基。或者，能够具有相似的π堆积相互作用的Y3基团可以(通过L3)与Z2取代基连接。连接基L3可以提供与P-苯基磷杂环部分的苯环相邻的Y3基团的构型，使得两个芳族基团能够进行分子内π堆积相互作用。
因此，式(I)的磷杂环化合物可以通过式(IVa)或式(IVb)进一步描述：
Figure BDA0002264526170000101
Figure BDA0002264526170000111
其中：
Z4选自CH，CR13和N；
L2，L3，L4和L5各自独立地为连接基；
Y2选自烷基，取代的烷基，羟基，烷氧基，取代的烷氧基，-NR7R8，芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基，碳环，取代的碳环，杂环和取代的杂环；
Y3选自芳基，取代的芳基，杂芳基和取代的杂芳基；
Y4，Y5和Y6独立地选自芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基，碳环，取代的碳环，杂环和取代的杂环；
R7和R8独立地选自氢，烷基和取代的烷基，或R7和R8与它们所连接的氮一起形成5-，6-或7-元杂环或取代的5-，6-或7-元杂环；和
R13是一个或多个任选的取代基，取代基选自烷基，取代的烷基，烷氧基，取代的烷氧基，卤素，氰基，硝基，羧基，C(O)NH2，SO2NH2，磺酸酯，羟基，烷基磺酰基，取代的烷基磺酰基，烷基氨基磺酰基，取代的烷基氨基磺酰基，烷基磺酰基氨基，取代的烷基磺酰基氨基，烷氧基羰基，取代的烷氧基羰基，烷基氨基，二烷基氨基，取代的烷基氨基和取代的二烷基氨基。
本公开内容包括式(IVa)的化合物，其中Y3是取代或未取代的稠合双环杂芳基。在式(IVa)中，Y3可以是吡咯并-吡啶，其任选进一步被取代。本公开包括式(IVb)的化合物，其中L2是将Y2和Y3连接至氮N的三价连接基，并且Y3是取代或未取代的苯基。式(IVa)和(IVb)的化合物可包括选自OR和OP(＝O)(OR)2的Y2基团，其中每个R独立地为H，烷基或取代的烷基。每个R可以是C1-6烷基，例如乙基或叔丁基。任选地，Y2可以是NR7R8，其中R7和R8与它们所连接的氮一起可以形成5-或6-元杂环，所述杂环任选进一步被取代。当Y2是NR7R8时，5-或6-元杂环在碳上任选地被一个或多个R40取代，并且如果5-或6-元杂环含有第二个氮，则该第二个氮任选被R40*取代，以形成叔胺。每个R40*，如果存在，可以选自烷基，取代的烷基，-(CH2)m1OR和-(CH2)m2OP(＝O)(OR)2，其中m1和m2独立地是1至6的整数，并且每个R独立地为H，烷基或取代的烷基。R可以是C1-4烷基，例如乙基或叔丁基。每个R40，如果存在，独立地选自-OR，-N(R)2，-(CH2)m1OR，-(CH2)m3N(R)2，-(CH2)m2OP(＝O)(OR)2，-OP(＝O)(OH)2和-OP(＝O)(OR)2其中m1、m2和m3各自独立地为1至6的整数，并且每个R独立地为H，烷基或取代的烷基。R可以是C1-4烷基，例如乙基或叔丁基。
如上所述，Z3可以是取代的杂环，例如取代的哌啶基或取代的哌嗪基。Z3杂环基团可以被包括三个连接的环状基团(例如，三个芳基，杂芳基，碳环和/或杂环)的基团取代，所述环状基团通过任选的连接基彼此连接并以线性方式连接至Z3。本公开包括其中Z3取代基是三杂芳基、芳基-杂环-芳基、芳基-杂芳基-芳基、杂芳基-杂芳基-芳基或芳基-杂芳基-杂芳基的化合物，其中Z3取代基的每个环任选进一步被取代。因此，这种Z3取代的杂环的一个取代基可以被描述为式Y6-L5-Y5-L4-Y4-，其中Y4和Y5各自独立地是芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基，碳环，取代的碳环，杂环或取代的杂环，且L4和L5是任选的连接基。本公开包括L4和L5是单个共价键。该化合物可包括Y4和Y5基团，它们是与Z3的第一杂环基团顺序连接的单环芳族或非芳族5-，6-或7-元环。本公开包括末端Y6基团，其为苯基或取代的苯基。Y4基团可以通过1,2-或1,3-构型连接。
本公开还包括Y4为苯基或取代的苯基。任选地，Y4是1,3-亚苯基或取代的1,3-亚苯基。化合物可包括Y5为杂环或取代的杂环。任选地，Y5是杂环或取代的杂环。Y5可以是5元单环杂芳基，其任选进一步被取代。本公开包括Y5是吡咯，取代的吡咯，呋喃，取代的呋喃，噻吩或取代的噻吩。当Y5是5元单环杂芳基时，它可以与具有顺式构型(例如1,2-或2,3-构型)的相邻基团(例如，Y6-L5-和-L4-Y4)连接。因此，本公开内容包括Y5是任选取代的2,3-连接的吡咯。
式(IVa)和式(IVb)化合物可包括L3连接基为C1-6亚烷基或取代的C1-6亚烷基。在式(IVb)中，L2可以是三价连接基。L2可以是将Y2与氮(N)连接的C1-6烷基连接基或取代的C1-6烷基连接基，其还包括将Y3-L3与氮(N)连接的支化原子。支化原子可以是碳或氮原子。本公开内容包括其中L3和L2一起提供将Y2和Y3连接至氮(N)的支链连接基的化合物，其中支链连接基是取代的C1-12亚烷基，例如C1-6烷基连接基，其中一个或多个主链碳原子任选地被杂原子(例如，O，S或N)替代。
式(IVa)和式(IVb)的化合物可包括Y6基团和Y4，Y6基团独立地是苯基或取代的苯基，以及Y4选自苯基或取代的苯基，例如任选取代的1,3-连接的亚苯基。L4连接基可以是共价键。有时，L4连接基具有一个主链原子。本公开还包括L5连接基，其为共价键，C1-3烷基连接基，取代的C1-3烷基连接基，O，NR，NH，S，S(＝O)，SO2或C(＝O)。任选地，L5可以是单个共价键。
因此，式(IVb)的化合物可以通过式(V)进一步描述：
Figure BDA0002264526170000131
其中：
Y2选自OR”，OP(＝O)(OR”)2和NR7R8；
Z5选自NR19，NH，O和S；
Z7选自S和O；
L6和L7独立地为共价键，C1-6烷基连接基或取代的C1-6烷基连接基；
R13和R14以及每个R15独立地是一个或多个任选的取代基，取代基选自：烷基，取代的烷基(例如CF3)，烷氧基，取代的烷氧基(例如-OCF3)，卤素，氰基，硝基，羧基，C(O)NH2，SO2NH2，磺酸酯，羟基，烷基磺酰基，取代的烷基磺酰基，烷基氨基磺酰基，取代的烷基氨基磺酰基，烷基磺酰基氨基，取代的烷基磺酰基氨基，烷氧基羰基，取代的烷氧基羰基，烷基氨基，二烷基氨基，取代的烷基氨基和取代的二烷基氨基；
R16选自氢，卤素和R15；
R17和R18独立地选自氢，氰基，硝基，卤素，烷基，取代的烷基，环烷基，取代的环烷基，链烯基，取代的链烯基，环烯基，取代的环烯基，炔基，取代的炔基，芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基，杂环，取代的杂环，OR，SR，NRR'，COR，OCOR，CO2R，CONRR'，CONRSO2R'，-C1-3亚烷基CH(OH)CH2OH，SO2R和SO2NRR'；和
R19选自氢，烷基，取代的烷基，环烷基，取代的环烷基，链烯基，取代的链烯基，环烯基，取代的环烯基，炔基，取代的炔基，芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基，杂环，取代的杂环，OR，SR，NRR'，COR，OCOR，CO2R，CONRR'，CONRSO2R'，NRCOR，NRCONRR'，NRC(＝S)NRR'，NRSO2R和SO2NRR'；
每个R”独立地是H，烷基或取代的烷基(例如，C1-6烷基，如乙基或叔丁基)；
和
R和R'独立地选自氢，烷基，取代的烷基，环烷基，取代的环烷基，链烯基，取代的链烯基，环烯基，取代的环烯基，炔基，取代的炔基，芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基，杂环，取代的杂环，杂环-烷基-和取代的杂环-烷基-。
Z4可以通过共价键与相邻的Y4基团连接。本公开包括式(V)的化合物，其中Z4可以是CH或CR13。本公开包括式(V)的化合物，其中Z4可以是N。
本公开还包括Y5基团，其为吡咯或取代的吡咯。吡咯可以是2,3-连接的吡咯。因此，在式(V)中，Z5可以是NH或NR19。本公开内容包括L5是单个共价键，使得Y5(例如，2,3-连接的吡咯)直接连接至末端苯环。
式(V)化合物可包括L6和L7连接基独立地为通过手性中心连接的C1-6亚烷基或取代的C1-6亚烷基。本公开包括其中L6是共价键或C1-6烷基连接基(例如，C1-3亚烷基)的化合物，其中一个或多个主链碳原子任选地被杂原子(例如，O，S或N)替代。还包括其中L7是共价键或C1-6烷基连接基(例如，C1-3亚烷基)的化合物，其中一个或多个主链碳原子任选被杂原子(例如O，S或N)替代。
本公开内容包括式(V)的化合物，其中Y2是NR7R8并且R7和R8与它们所连接的氮一起可以形成5-或6-元杂环，杂环任选地进一步被一个或多个-OR、-N(R)2、-(CH2)m1OR、-(CH2)m3N(R)2、-(CH2)m2OP(＝O)(OR)2、-OP(＝O)(OH)2和-OP(＝O)(OR)2取代，其中m1，m2和m3各自独立地为1至6的整数，并且每个R独立地为H、烷基或取代的烷基。R可以是C1-4烷基，例如甲基，乙基或叔丁基。由R7和R8形成的5-或6-元杂环可以是6-元环，例如任选进一步被取代的吗啉基、哌啶基或哌嗪基。
式(V)化合物可进一步由式(VIa)描述：
Figure BDA0002264526170000151
其中：
Z6选自O，NR40*，CHR40，C(R40)2和CH2；
R40*选自烷基，取代的烷基，-(CH2)m1OR和-(CH2)m2OP(＝O)(OR)2，其中m1和m2独立地是1至6的整数，并且每个R独立地是H，烷基或取代的烷基(例如，C1-4烷基，如乙基或叔丁基)；
每个R40独立地选自-OR，-N(R)2，-C(O)OR，-(CH2)m1OR，-(CH2)m3N(R)2，-(CH2)m2OP(＝O)(OR)2，-OP(＝O)(OH)2和-OP(＝O)(OR)2，其中m1，m2和m3各自独立地为1至6的整数，并且每个R独立地为H，烷基或取代的烷基(例如，C1-4烷基，例如乙基或叔丁基)；
q1和q2独立地是1到6的整数，
或其立体异构体。
式(V)的化合物可以通过式(VIb)进一步描述：
Figure BDA0002264526170000161
其中Y2选自OH，OR，NH2，NHR，NR2，-OP(＝O)(OR)2和-OP(＝O)(OH)2，其中每个R独立地是C1-6烷基或取代的C1-6烷基；q1和q2独立地为1至6的整数。
式(I)，(IVa)，(IVb)，(V)，(VIa)和(VIb)中的任一个可具有如式(II)中所示的母核磷杂环连接部分。本公开包括这样的化合物，其中X1是O。任选地，X1是S。有时，该化合物是式(IIa)或(IIb)的立体异构体。
式(V)和(VIa)的化合物可包括在连接基L2的支化点具有手性中心的化合物的立体异构体。因此，式(V)和(VIa)的化合物可以通过式(VIIa)进一步描述：
Figure BDA0002264526170000171
其中：
X2选自Z12，S，O和NR22；
Z11选自-C(＝O)-，-C(＝O)X3-和Z12；
每个Z12独立地是CR24R25；
X3是O或S；
n为0，1，2或3；
每个R24和每个R25独立地选自氢，烷基和取代的烷基；
R4选自NO2，SO2CH3，SO2CF3和COR51；
Z4选自CH和N；
Z6选自O，CHC(O)R18和CH(CH2)pR18，其中p为0-6，并且每个R18独立地为-OR，-N(R)2，-OP(＝O)(OH)2，-OP(＝O)(OR)2，其中每个R独立地为H，烷基或取代的烷基(例如，C1-4烷基，如乙基或叔丁基)；
R14和R16独立地为氢或卤素；和
R17选自SO2R52，COR52，CO2R52，CONR51R52，CONR52SO2R51和SO2NR51R52；
R18和R19独立地选自氢，烷基和取代的烷基；
R51选自C1-6烷基和取代的C1-6烷基；和
R52选自氢，C1-6烷基和取代的C1-6烷基。
本公开内容包括如由表1的以下化合物1-18定义的式(VIIa)化合物。对于表1中的任何化合物，X1可以是O。或者，X1可以是S。
表1：式(VIIa)化合物
Figure BDA0002264526170000181
式(V)和(VIb)的化合物可包括在连接基L2的支化点具有手性中心的化合物的立体异构体。因此，式(V)和(VIb)的化合物可以通过式(VIIb)进一步描述：
Figure BDA0002264526170000182
其中：
Y2选自-OR52，-N(R52)2和-OP(＝O)(OR52)2；
R4选自NO2，SO2CH3，SO2CF3和COR51；
Z4选自CH和N；
R14和R16独立地为氢或卤素；和
R17选自SO2R52，COR52，CO2R52，CONR51R52，CONR52SO2R51和SO2NR51R52；
R18和R19独立地选自氢，烷基和取代的烷基；
R51选自C1-6烷基和取代的C1-6烷基；和
R52选自氢，C1-6烷基和取代的C1-6烷基。
本公开内容包括如由下表2的化合物19-36定义的式(VIIb)化合物。对于表2中的任何化合物，X1可以是O。或者，X1可以是S。
表2：式(VIIb)化合物
化合物 X<sup>2</sup> Z<sup>11</sup>-(Z<sup>12</sup>)<sub>n</sub> R<sup>4</sup> R<sup>14</sup> R<sup>16</sup> R<sup>17</sup> R<sup>18</sup> R<sup>19</sup> Z<sup>4</sup> Y<sup>2</sup>
19 O CH<sub>2</sub>CH<sub>2</sub> NO<sub>2</sub> F Cl SO<sub>2</sub>CH<sub>3</sub> CH<sub>3</sub> CH(CH<sub>3</sub>)<sub>2</sub> N N(CH<sub>3</sub>)<sub>2</sub>
20 O CH<sub>2</sub>CH<sub>2</sub> SO<sub>2</sub>CF<sub>3</sub> F Cl SO<sub>2</sub>CH<sub>3</sub> CH<sub>3</sub> CH(CH<sub>3</sub>)<sub>2</sub> N N(CH<sub>3</sub>)<sub>2</sub>
21 O CH<sub>2</sub>CH<sub>2</sub> SO<sub>2</sub>CF<sub>3</sub> F Cl CO<sub>2</sub>H CH<sub>3</sub> CH(CH<sub>3</sub>)<sub>2</sub> N N(CH<sub>3</sub>)<sub>2</sub>
22 O CH<sub>2</sub>CH<sub>2</sub> SO<sub>2</sub>CF<sub>3</sub> H Cl CO<sub>2</sub>H CH<sub>3</sub> CH(CH<sub>3</sub>)<sub>2</sub> N N(CH<sub>3</sub>)<sub>2</sub>
23 O CH<sub>2</sub>CH<sub>2</sub> SO<sub>2</sub>CH<sub>3</sub> F Cl CO<sub>2</sub>H CH<sub>3</sub> CH(CH<sub>3</sub>)<sub>2</sub> N N(CH<sub>3</sub>)<sub>2</sub>
24 O CH<sub>2</sub>CH<sub>2</sub> SO<sub>2</sub>CH<sub>3</sub> H Cl CO<sub>2</sub>H CH<sub>3</sub> CH(CH<sub>3</sub>)<sub>2</sub> N N(CH<sub>3</sub>)<sub>2</sub>
25 O CH<sub>2</sub>CH<sub>2</sub> SO<sub>2</sub>CH<sub>3</sub> F Cl SO<sub>2</sub>CH<sub>3</sub> CH<sub>3</sub> CH(CH<sub>3</sub>)<sub>2</sub> N N(CH<sub>3</sub>)<sub>2</sub>
26 O CH<sub>2</sub>CH<sub>2</sub> NO<sub>2</sub> F Cl CO<sub>2</sub>H CH<sub>3</sub> CH(CH<sub>3</sub>)<sub>2</sub> N N(CH<sub>3</sub>)<sub>2</sub>
27 O CH<sub>2</sub>CH<sub>2</sub> NO<sub>2</sub> H Cl CO<sub>2</sub>H CH<sub>3</sub> CH(CH<sub>3</sub>)<sub>2</sub> N N(CH<sub>3</sub>)<sub>2</sub>
28 O CH<sub>2</sub>CH<sub>2</sub> NO<sub>2</sub> F Cl SO<sub>2</sub>CH<sub>3</sub> CH<sub>3</sub> CH(CH<sub>3</sub>)<sub>2</sub> N OH
29 O CH<sub>2</sub>CH<sub>2</sub> SO<sub>2</sub>CF<sub>3</sub> F Cl SO<sub>2</sub>CH<sub>3</sub> CH<sub>3</sub> CH(CH<sub>3</sub>)<sub>2</sub> N OH
30 O CH<sub>2</sub>CH<sub>2</sub> SO<sub>2</sub>CF<sub>3</sub> F Cl CO<sub>2</sub>H CH<sub>3</sub> CH(CH<sub>3</sub>)<sub>2</sub> N OH
31 O CH<sub>2</sub>CH<sub>2</sub> SO<sub>2</sub>CF<sub>3</sub> H Cl CO<sub>2</sub>H CH<sub>3</sub> CH(CH<sub>3</sub>)<sub>2</sub> N OH
32 O CH<sub>2</sub>CH<sub>2</sub> SO<sub>2</sub>CH<sub>3</sub> F Cl CO<sub>2</sub>H CH<sub>3</sub> CH(CH<sub>3</sub>)<sub>2</sub> N OH
33 O CH<sub>2</sub>CH<sub>2</sub> SO<sub>2</sub>CH<sub>3</sub> H Cl CO<sub>2</sub>H CH<sub>3</sub> CH(CH<sub>3</sub>)<sub>2</sub> N OH
34 O CH<sub>2</sub>CH<sub>2</sub> SO<sub>2</sub>CH<sub>3</sub> F Cl SO<sub>2</sub>CH<sub>3</sub> CH<sub>3</sub> CH(CH<sub>3</sub>)<sub>2</sub> N OH
35 O CH<sub>2</sub>CH<sub>2</sub> NO<sub>2</sub> F Cl CO<sub>2</sub>H CH<sub>3</sub> CH(CH<sub>3</sub>)<sub>2</sub> N OH
36 O CH<sub>2</sub>CH<sub>2</sub> NO<sub>2</sub> H Cl CO<sub>2</sub>H CH<sub>3</sub> CH(CH<sub>3</sub>)<sub>2</sub> N OH
式(VIIa)化合物可进一步由式(VIIIa)描述：
Figure BDA0002264526170000201
其中：
R4选自NO2，SO2CH3，SO2CF3和COR51；
n是1或2；
Z6选自O，CHC(O)R18和CH(CH2)pR18，其中p为0-6，并且每个R18独立地为-OR，-N(R)2，-OP(＝O)(OH)2，和-OP(＝O)(OR)2，其中每个R独立地为H，烷基或取代的烷基(例如，C1-4烷基，如乙基或叔丁基)；
R14和R16独立地为氢或卤素；和
R17选自SO2R52，COR52，CO2R52，CONR51R52，CONR52SO2R51和SO2NR51R52；
R51选自C1-6烷基和取代的C1-6烷基；和
R52选自氢，C1-6烷基和取代的C1-6烷基。
本公开内容包括如由以下表3的化合物定义的式(VIIIa)化合物。
表3：式(VIIIa)化合物
化合物 R<sup>4</sup> R<sup>14</sup> R<sup>16</sup> R<sup>17</sup> n Z<sup>6</sup>
37 SO<sub>2</sub>CF<sub>3</sub> H Cl CO<sub>2</sub>H 1 CHOPO(OH)<sub>2</sub>
38 SO<sub>2</sub>CF<sub>3</sub> H Cl CO<sub>2</sub>H 1 CHCH<sub>2</sub>OPO(OH)<sub>2</sub>
39 SO<sub>2</sub>CF<sub>3</sub> H Cl CO<sub>2</sub>H 1 CHOH
40 SO<sub>2</sub>CF<sub>3</sub> H Cl CO<sub>2</sub>H 1 CHCH<sub>2</sub>OH
41 SO<sub>2</sub>CF<sub>3</sub> F Cl SO<sub>2</sub>CH<sub>3</sub> 1 CHC(O)OH
42 SO<sub>2</sub>CF<sub>3</sub> F Cl SO<sub>2</sub>CH<sub>3</sub> 2 CHOH
式(VIIb)化合物可进一步由式(VIIIb)描述：
Figure BDA0002264526170000211
其中：
Y2选自-OR52，-N(R52)2和-OP(＝O)(OR52)2；
R4选自NO2，SO2CH3，SO2CF3和COR51；
n是1或2；
R14和R16独立地为氢或卤素；
R17选自SO2R52，COR52，CO2R52，CONR51R52，CONR52SO2R51和SO2NR51R52；
R51选自C1-6烷基和取代的C1-6烷基；和
R52选自氢，C1-6烷基和取代的C1-6烷基。
本公开内容包括如由以下表4的化合物定义的式(VIIIb)化合物。
表4：式(VIIIb)化合物
化合物 R<sup>4</sup> R<sup>14</sup> R<sup>16</sup> R<sup>17</sup> n Y<sup>2</sup>
19 NO<sub>2</sub> F Cl SO<sub>2</sub>CH<sub>3</sub> 1 N(CH<sub>3</sub>)<sub>2</sub>
本公开包括具有R16的化合物，其中R16为氢，卤素，C1-6烷基，取代的C1-6烷基(例如CF3)或CN。在式(V)，(VIa)，(VIb)，(VIIa)，(VIIb)，(VIIIa)和(VIIIb)中，R16可以是卤素。任选地，R16可以是氯。本公开包括其中R16不是氢的化合物。本公开包括其中不存在R14的化合物。或者，在式(V)，(VIa)，(VIb)，(VIIa)，(VIIb)，(VIIIa)和(VIIIb)中，R14可以是一个卤素取代基。任选地，R14可以是氟。
本公开包括其中R17是SO2R52，CO2R52或COR52的化合物。或者，R17可以是CONR51R52，CONR52SO2R51或SO2NR51R52。R51是C1-6烷基或取代的C1-6烷基，且R52是氢，C1-6烷基或取代的C1-6烷基。另外，R18可以是氢。有时，R18是烷基。任选地，R18可以是取代的烷基。另外，R19可以是氢。有时，R19可以是烷基。任选地，R19可以是取代的烷基。
本公开包括式(VIIa)，(VIIb)，(VIIIa)和(VIIIb)的化合物，包括手性磷立体中心的立体异构体。因此，式(VIIa)-(VIIIb)中任一个的化合物可以在磷处具有以下手性的任一种：
Figure BDA0002264526170000221
式(I)，(IVa)，(IVb)，(V)，(VIa)，(VIb)，(VIIa)和(VIIb)中的任一个可具有如式(IIIa)中所示的母核磷杂环连接部分。本公开包括这样的化合物，其中X1是O。任选地，X1是S。本公开包括这样的化合物，其中r是1。或者，r是2。有时，该化合物是式(IIIa)的立体异构体。
式(I)，(IVa)，(IVb)，(V)，(VIa)，(VIb)，(VIIa)和(VIIb)中的任一个可具有如式(IIIb)中所示的母核磷杂环连接部分。本公开包括这样的化合物，其中X1是O。任选地，X1是S。有时，该化合物是式(IIIb)的立体异构体。
式(I)，(IVa)，(IVb)，(V)，(VIa)，(VIb)，(VIIa)和(VIIb)中的任一个可具有如式(IIIc)中所示的母核磷杂环连接部分。本公开包括这样的化合物，其中X1是O。任选地，X1是S。本公开包括这样的化合物，其中r是1。或者，r是2。有时，该化合物是式(IIIc)的立体异构体。
式(I)，(IVa)，(IVb)，(V)，(VIa)，(VIb)，(VIIa)和(VIIb)中的任一个可具有如式(IIId)中所示的母核磷杂环连接部分。本公开内容包括这样的化合物，其中X1是O。任选地，X1是S。有时，该化合物是式(IIId)的立体异构体。
式(I)，(IVa)，(IVb)，(V)，(VIa)，(VIb)，(VIIa)和(VIIb)中的任一个可具有如式(IIIe)中所示的母核磷杂环连接部分。本公开内容包括这样的化合物，其中X1是O。任选地，X1是S。有时，该化合物是式(IIIe)的立体异构体。
式(I)，(IVa)，(IVb)，(V)，(VIa)，(VIb)，(VIIa)和(VIIb)中的任一个可具有如式(IIIf)中所示的母核磷杂环连接部分。本公开包括这样的化合物，其中X1是O。任选地，X1是S。有时，该化合物是式(IIIf)的立体异构体。
式(I)，(IVa)，(IVb)，(V)，(VIa)，(VIb)，(VIIa)和(VIIb)中的任一个可具有如式(IIIg)中所示的母核磷杂环连接部分。本公开包括这样的化合物，其中X1是O。任选地，X1是S。本公开包括这样的化合物，其中r是1。或者，r是2。有时，该化合物是式(IIIg)的立体异构体。
式(I)，(IVa)，(IVb)，(V)，(VIa)，(VIb)，(VIIa)和(VIIb)中的任一个可具有如式(IIIh)中所示的母核磷杂环连接部分。本发明包括这样的化合物，其中X1是O。任选地，X1是S。本公开包括这样的化合物，其中r是1。或者，r是2。有时，该化合物是式(IIIh)的立体异构体。
本公开内容包括式(VIIa)或(VIIb)的化合物，其中连接N和P原子的5-，6-或7-元杂环包括衍生自氨基酸残基的侧链取代基。例如，Z12基团的R24和R25之一可以是对应于氨基酸侧链的基团。对于每个Z12基团，R24和R25中的一个可以是氨基酸残基的侧链基团，例如丙氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，谷氨酰胺，谷氨酸，天冬氨酸，天冬酰胺，丝氨酸，苏氨酸，半胱氨酸，蛋氨酸，赖氨酸，精氨酸，鸟氨酸，苯丙氨酸，酪氨酸，色氨酸或组氨酸，或其取代形式。通常，杂环仅包括一个包含氨基酸衍生的侧链的Z12基团，剩余的Z12基团中R24和R25各自为氢。因此，Z12可包括具有对应于L-氨基酸残基的手性的手性中心。或者，Z12可具有对应于D-氨基酸残基的手性。
对于本文所述的任何通式和结构，此类通式和结构还可包括盐形式，其中该结构提供酸性或碱性基团。本公开化合物的母核磷杂环连接部分可以是中性的。该化合物可以在化合物的其他位置包括带电荷的部分(例如碱性氨基)。在适用的情况下，为了简单起见，通常在结构中描绘基团的中性形式，但是也意味着包括各种盐形式。该化合物的盐可包括一价阳离子盐，例如钠盐或钾盐。这些通式和结构中描述的基团的其他互变异构排列是可能的，并且意图包括在本公开中。
评估化合物的抗衰老(senolytic)活性
可以在分子水平上以指示它们是根据本公开内容使用的候选药物的方式评估这些和其他化合物的能力。
例如，当治疗包括通过Bcl-2，Bcl-xL，Bcl-w或其他Bcl家族蛋白触发衰老细胞的凋亡时，可以测试化合物抑制一种或多种Bcl蛋白和它们各自的同源配体之间结合的能力。实施例1提供了用于确定与Bcl同种型结合的目的的均相测定(homogeneous assay)(不需要分离步骤的测定)的说明。可以在分子水平上筛选化合物与靶同种型相互作用从而引起抗衰老(senolysis)的能力。实施例2和3提供了为此目的设计的测定的说明。
或者或另外，可评估化合物特异性杀死衰老细胞的能力。使培养的细胞与化合物接触，测定细胞的细胞毒性或抑制程度。可以将化合物杀死或抑制衰老细胞的能力与化合物对在低密度下自由分裂的正常细胞和在高密度处于静止状态的正常细胞的作用进行比较。实施例2和3提供了通过使用人靶组织成纤维细胞IMR90细胞系和HUVEC细胞对杀死衰老细胞的示例性说明。类似的方案是已知的并且可以开发或优化用于测试细胞杀死或抑制其他衰老细胞和其他细胞类型(例如癌细胞)的能力。
可以在特定疾病的动物模型中进一步筛选体外有效地选择性杀死衰老细胞的候选Bcl抑制剂。以下实验部分的实施例4，5，6和7分别提供了骨关节炎，眼病，肺疾病和动脉粥样硬化的说明。
药物制剂
根据本公开内容使用的药剂的制备和配制可以包含标准技术，例如，在Remington：The Science and Practice of Pharmacy的当前版本中所述。制剂通常将优化用于施用于靶组织，例如通过局部施用，以增强活性剂进入靶senolytic细胞并提供最佳效果持续时间的方式，同时最小化副作用或暴露于不参与治疗病症的组织。
用于治疗衰老相关病症和其它疾病的药物制剂可以通过将Bcl抑制剂与药学上可接受的碱或载体以及根据需要的一种或多种药学上可接受的赋形剂混合来制备。取决于靶组织，配制药物组合物用于缓释或定时释放可能是合适的。口服定时释放制剂可包括异构体变体、粘合剂或包衣的混合物。可注射的定时释放制剂可包括活性剂与粘合剂、包囊剂或微粒的组合。对于诸如骨关节炎的关节疾病的治疗，药物组合物通常配制用于关节内给药。对于例如青光眼、糖尿病性视网膜病或年龄相关性黄斑变性(AMD)的眼病的治疗，该组合物可以配制用于玻璃体内或前房内给药。对于肺疾病的治疗，组合物可以配制成气雾剂，或用于气管内给药。
本公开提供了商业产品，其是包含单位剂量的一种或多种本公开中描述的药剂或组合物的试剂盒。此类试剂盒通常包含在一个或多个容器中的药物制剂。制剂可以作为一个或多个单位剂量(组合或分开)提供。所述试剂盒可以包含诸如注射器的装置，用于在有此需要的受试者的靶组织中或周围施用所述试剂或组合物。该产品还可以包含或附有信息包装说明书，其描述了药物在治疗衰老细胞相关病症中的用途和伴随的益处，以及任选地用于治疗递送组合物的器具或装置。
治疗设计
衰老细胞随着年龄而累积，这就是衰老细胞介导的病症在老年人中更频繁发生的原因。此外，对肺组织的不同类型的压力可以促进衰老细胞和它们表达的表型的出现。细胞应激源包括氧化应激，代谢应激，DNA损伤(例如，由于环境紫外线暴露或遗传病症)，致癌基因激活和端粒缩短(例如，由过度增殖引起)。受此类应激源影响的组织可能具有较高的衰老细胞发生率，这反过来可能导致在较早的年龄或更严重的形式呈现某些病症。对某些病症的遗传易感性表明，介导疾病的衰老细胞的积累可能直接或间接地受到遗传成分的影响，这可能导致早期表现。
衰老细胞范例的益处之一是成功去除衰老细胞可以为受试者提供长期治疗效果。衰老细胞基本上是非增殖性的，这意味着随后具有更多衰老细胞的组织的再增殖只能通过将组织中的非衰老细胞转化为衰老细胞来实现—这一过程比简单增殖需要相当长的时间。作为一般原则，使用足以从靶组织去除衰老细胞的senolytic药物的治疗期(单剂量，或给予的多个剂量，例如，每天，半周或每周给予，在几天、一周或几个月的时间段内给予)可以为受试者提供一段效力期(例如，两周，一个月，两个月或更长时间)，在此期间不施用senolytic药物，并且受试者经历缓解，减轻或逆转所治疗病症的一种或多种不良体征或症状。
为了用根据本发明的senolytic药物治疗特定的衰老相关病症，治疗方案将取决于衰老细胞的位置和疾病的病理生理学。
适合治疗的衰老相关病症
本公开的Bcl抑制剂可用于预防或治疗各种衰老相关病症。这些病症通常(尽管不一定)的特征是，与未受影响的组织中此类细胞的频率或此类表达水平相比，在病症部位中或周围存在过多的衰老细胞(例如表达p16和其他衰老标志物的细胞)，或过度表达p16和其他衰老标志物。目前感兴趣的非限制性实例包括骨关节炎，眼病和肺疾病的治疗，如以下部分所示。
骨关节炎的治疗
根据本公开内容，可以开发本公开中列出的任何Bcl抑制剂用于治疗骨关节炎。类似地，可以开发本公开中列出的Bcl抑制剂，用于选择性地消除有此需要的受试者的关节中或周围的衰老细胞，包括但不限于受骨关节炎影响的关节中或周围的衰老细胞。
骨关节炎退行性关节病的特征在于软骨在高机械应力，骨硬化和滑膜和关节囊增厚的部位的纤维化。肌纤维震颤是局部表面解体，涉及软骨表层的分裂。沿主要胶原束的轴线，早期分裂与软骨表面相切。软骨内的胶原蛋白变得杂乱无章，蛋白多糖从软骨表面消失。在关节中没有蛋白多糖的保护和润滑作用的情况下，胶原纤维变得易于降解，并且随后发生机械破坏。诱发骨关节炎的易感因素包括年龄增长，肥胖，既往关节损伤，关节过度使用，大腿肌肉无力和遗传。骨关节炎的症状包括在不活动或过度使用后疼痛或僵硬的关节，尤其是臀部，膝盖和腰部；休息后僵硬，但运动后消失；活动后或一天结束时疼痛加重。
根据本公开的化合物可用于减少或抑制关节中蛋白多糖层的损失或侵蚀，减少受影响关节中的炎症，以及促进，刺激，增强或诱导胶原蛋白(例如，2型胶原蛋白)的产生。该化合物可以引起关节中产生的炎性细胞因子(例如IL 6)的量或水平的降低，并且炎症减少。该化合物可用于治疗骨关节炎和/或诱导在受试者的关节中产生胶原蛋白，例如，2型胶原蛋白。化合物还可用于降低，抑制或减少金属蛋白酶13(MMP-13)的产生，其降解关节中的胶原蛋白，并用于恢复蛋白多糖层或抑制蛋白多糖层的损失和/或降解。由此用化合物治疗还可以降低、抑制或减少骨侵蚀的可能性，或减缓骨的侵蚀。该化合物可以直接施用于骨关节炎关节，例如，关节内、局部、透皮、皮内或皮下施用。该化合物还可以恢复，改善或抑制关节强度的恶化，并减少关节疼痛。
眼科疾病的治疗
本公开中列出的任何Bcl抑制剂可用于通过去除受试者眼内或周围的衰老细胞来预防或治疗有此需要的受试者的眼科病症，由此疾病的至少一种体征或症状的严重程度降低。这些病症包括眼后部疾病和眼前部疾病。类似地，可以开发本公开中列出的Bcl抑制剂，用于选择性地消除有此需要的受试者的眼组织中或周围的衰老细胞。
可根据本公开内容治疗的眼病包括老花眼，黄斑变性(包括湿性或干性AMD)，糖尿病性视网膜病和青光眼。
黄斑变性是神经变性病症，其可以表征为眼后部疾病，其导致视网膜中央部分(称为黄斑)中的感光细胞的损失。黄斑变性可以是干性或湿性的。干性形式比湿性更常见，约90％的年龄相关性黄斑变性(AMD)患者被诊断为干性形式。干性AMD与视网膜色素上皮(RPE)层的萎缩有关，这导致感光细胞的损失。对于湿性AMD，新血管可能在视网膜下方生长并渗漏血液和液体。脉络膜新生血管异常渗漏可导致视网膜细胞死亡，从而在中央视力中产生盲点。布鲁赫黄斑膜下面的渗出物或“玻璃疣”的形成可能是黄斑变性出现的体征。黄斑变性的症状包括例如直线的感知扭曲，黑暗，模糊区域和颜色感知变化。
另一种眼后部疾病是糖尿病性视网膜病(DR)。根据维基百科，DR的第一阶段是非增殖性的，并且通常没有实质性症状或体征。NPDR可通过眼底照相检测到，其中可以看到微动脉瘤(动脉壁中的微观充血凸起)。如果视力下降，可以进行荧光血管造影以观察眼睛后部。可以清楚地看到视网膜血管狭窄或阻塞，这称为视网膜缺血(缺乏血流)。在NPDR的任何阶段都可能发生其中血管将其内容物泄漏到黄斑区域的黄斑水肿。黄斑水肿的症状是视力模糊和双眼不一致的暗化或扭曲图像。光学相干断层扫描可以显示黄斑水肿的视网膜增厚(由于液体积聚)的区域。在DR的第二阶段，作为增殖性糖尿病性视网膜病变(PDR)的一部分，在眼后部形成异常的新血管(新血管形成)，其可能爆裂和出血(玻璃体出血)并使视力模糊。在眼底检查中，临床医生会看到棉花斑点，火焰状出血点(类似的病变也是由Clostridium novyi的α-毒素引起)和斑点免疫印迹出血。
用本发明的senolytic药物治疗眼后部疾病的益处可包括抑制或延迟病症的不利特征，例如异常新血管形成，致病性血管生成，血管闭塞，眼内出血，视网膜损伤和视力丧失。可以在眼睛中或眼睛周围施用senolytic药物，例如通过眼内，玻璃体内或球后注射。最佳地，在一些病理生理学中将存在逆转，例如功能性血管系统的恢复，功能性血管生成，视网膜再生或恢复，具有部分视力改善程度。
老花眼是一种与年龄相关的病症，其中当正常眼睛的调节速度和幅度随着年龄的增长而降低时，眼睛展现出对近处物体聚焦的能力逐渐减弱。晶状体的弹性丧失和睫状肌的收缩性丧失可导致老花眼。前晶状体囊和后晶状体囊的机械性质的年龄相关变化表明，由于组织成分的变化，后晶状体囊的机械强度随着年龄显著降低。晶状体囊的主要结构成分是基底膜IV型胶原，其被组织成三维分子网络。胶原蛋白IV，纤连蛋白和薄板(lamina)与人工晶状体的粘附可以抑制细胞迁移并且可以降低PCO的风险。
本公开内容提供的senolytic药物可以减缓IV型胶原网络的组织破坏，减少或抑制上皮细胞迁移，并且还可以延迟老花眼的发作或减少或减缓病症的进行性严重性。它们也可用于白内障手术后，以减少PCO发生的可能性。
青光眼和其他眼前部疾病也可以适合用本公开中提供的senolytic药物治疗。通常，清澈的液体流入和流出眼睛的前部(称为前房)。在患有开放性/广角性青光眼的个体中，透明液体排出太慢，导致眼内压力增加。如果不及时治疗，眼睛中的高压可能随后损伤视神经并导致完全失明。周边视觉的丧失是由视网膜中神经节细胞的死亡引起的。
治疗的可能益处包括眼内压降低，通过小梁网改善眼液的排出，以及导致视力丧失的抑制或延迟。senolytic药物可以在眼睛中或眼睛周围施用，例如，通过眼内或前房内注射或局部制剂。治疗的效果可以通过自动视野检查，前房角镜检查，成像技术，扫描激光断层扫描，HRT3，激光偏振测量，GDX，眼睛相干断层扫描，眼底镜检查和测定中央角膜厚度的测厚仪测量来监测。
肺部疾病的治疗
根据本公开内容，可以开发本公开中列出的任何Bcl抑制剂用于治疗肺疾病。类似地，可以开发本公开中列出的Bcl抑制剂，用于选择性地消除有此需要的受试者的肺内或肺周围的衰老细胞。可以治疗的肺疾病包括特发性肺纤维化(IPF)，慢性阻塞性肺疾病(COPD)，哮喘，囊性纤维化，支气管扩张和肺气肿。
COPD是由肺组织破裂，肺气肿和小气道功能障碍，阻塞性细支气管炎引起的持续不良气流所定义的肺疾病。COPD的主要症状包括呼吸短促，喘息，胸闷，慢性咳嗽和痰液过量产生。来自香烟烟雾激活的中性粒细胞和巨噬细胞的弹性蛋白酶可以分解肺泡结构的细胞外基质，导致空气空间增大和呼吸能力丧失。COPD可能由例如烟草烟雾，香烟烟雾，雪茄烟雾，二手烟雾，烟斗烟雾，职业暴露，暴露于灰尘、烟雾、烟气和污染等因素引起，这些发生历经数十年，从而将老龄化视为发展慢性阻塞性肺疾病的风险因素。
引起肺损伤的过程包括例如由烟草烟雾中的高浓度自由基产生的氧化应激，由于对气道中的刺激物的炎性反应导致的细胞因子释放，以及烟草对抗蛋白酶酶的损害，以及自由基，使蛋白酶损害肺部。遗传易感性也可能导致疾病。在约1％的COPD患者中，该疾病是由遗传性疾病引起的，该遗传性疾病导致肝脏中α-1-抗胰蛋白酶的低水平产生。α-1-抗胰蛋白酶通常分泌到血液中以帮助保护肺部。
肺纤维化是一种慢性和进行性肺疾病，其特征在于肺的硬化和瘢痕形成，其可导致呼吸衰竭，肺癌和心力衰竭。纤维化与上皮的修复有关。成纤维细胞被激活，细胞外基质蛋白的产生增加，并且向收缩的肌成纤维细胞的转分化有助于伤口收缩。临时基质堵塞受损上皮并为上皮细胞迁移提供骨架，涉及上皮-间质转化(EMT)。与上皮损伤相关的失血诱导血小板活化，生长因子的产生和急性炎症反应。通常，上皮屏障愈合并且炎症反应消退。然而，在纤维化疾病中，成纤维细胞反应继续，导致伤口无法愈合。成纤维细胞灶的形成是该疾病的特征，反映了正在进行的纤维发生的位置。
具有发展肺纤维化风险的受试者包括例如暴露于环境或职业污染物的那些受试者，例如石棉沉滞症和矽肺疾病；那些抽烟的受试者；那些患有结缔组织疾病的受试者，如RA，SLE，硬皮病，结节病或Wegener肉芽肿病；那些感染的受试者；那些服用某些药物的受试者，包括例如胺碘酮，博来霉素，busufan，甲氨蝶呤和呋喃妥因；那些接受放射治疗的受试者；那些家庭成员患有肺纤维化的受试者。
可以通过使用根据此病症的化合物治疗的其他肺部病症包括肺气肿，哮喘，支气管扩张和囊性纤维化。烟草烟雾，职业暴露于灰尘、烟雾或烟气，感染或导致炎症的污染物也会加剧肺部疾病。
肺部疾病的症状可包括呼吸短促，喘息，胸闷，由于肺部粘液过多而导致早晨首先清除喉咙，可产生清的、白色、黄色或绿色的痰液的慢性咳嗽，紫绀，频繁呼吸道感染，缺乏能量和意外减肥。肺纤维化的症状可能包括呼吸短促，特别是在运动时；猛烈地干咳；快速浅呼吸；逐渐的，无意识的减肥；疲劳；疼痛的关节和肌肉；和手指或脚趾的杵状指。
通过例如测量呼气储备容积(ERV)，用力肺活量(FVC)，用力呼气量(FEV)，总肺容量(TLC)，肺活量(VC)，余气量(RV)和功能残气量(FRC)，可以确定治疗前、治疗期间和治疗后的肺功能。可以使用一氧化碳的扩散能力(DLCO)测量肺泡毛细血管膜上的气体交换。运动能力可以作为代替来衡量。还可以测量外周毛细血管氧饱和度(SpO2)：正常氧水平通常在95％和100％之间。SpO2水平低于90％表明受试者患有低氧血症。低于80％的值被认为是关键的，需要干预以维持大脑和心脏功能并避免心脏或呼吸停止。
治疗的益处可包括抑制任何这些作用的进展或逆转。所述senolytic药物的施用可以是全身性的，或局部在肺部中或肺部周围的部位：例如，通过作为气雾剂或粉末吸入，或通过插管施用。最佳地，该药物将改善SpO2水平和运动能力。
动脉粥样硬化的治疗
所述senolytic化合物可用于治疗动脉粥样硬化：例如，通过抑制受试者中动脉粥样硬化斑块的形成，扩大或进展。该senolytic化合物还可用于增强存在于受试者的一个或多个血管中的动脉粥样硬化斑块的稳定性，从而抑制它们破裂和闭塞血管。
动脉粥样硬化的特征在于斑块状内膜斑，动脉粥样硬化，其侵入中型和大型动脉的腔；斑块含有脂质，炎症细胞，平滑肌细胞和结缔组织。动脉粥样硬化可影响大型和中型动脉，包括冠状动脉，颈动脉和脑动脉，主动脉及其分支，以及四肢的主要动脉。
动脉粥样硬化可导致动脉壁增厚。当斑块生长或破裂减少或阻碍血液流动时，会出现症状；症状可能因受影响的动脉而异。动脉粥样硬化斑块可以是稳定的或不稳定的。稳定的斑块消退，保持静止或缓慢生长，有时持续数十年，直到它们可引起狭窄或闭塞。不稳定斑块容易发生自发性糜烂，裂隙或破裂，在引起血流动力学显著性狭窄之前很久就会引起急性血栓形成，闭塞和梗塞。临床事件可能由不稳定的斑块引起，斑块在血管造影中看起来不严重；因此，斑块稳定可以是降低发病率和死亡率的一种方法。斑块破裂或糜烂可导致严重的心血管事件，如急性冠状动脉综合征和中风。破坏的斑块可以具有更高含量的脂质，巨噬细胞，并且具有比完整斑块更薄的纤维帽。
动脉粥样硬化和其他心血管疾病的诊断可以基于症状，例如心绞痛，胸部压力，手臂或腿部麻木或虚弱，说话困难或言语不清，面部下垂的肌肉，腿部疼痛，高血压，肾衰竭和/或勃起功能障碍，病史和/或患者的身体检查。可以通过血管造影，超声波检查或其他成像测试来确认诊断。患有心血管疾病风险的受试者包括具有任何一种或多种诱发因素的受试者，例如心血管疾病的家族史和具有其他风险因素的那些，例如，诱发因素，包括高血压，血脂异常，高胆固醇，糖尿病，肥胖和吸烟，久坐的生活方式和高血压。例如，可以通过血管造影术，心电图或压力测试来评估该病症。
用senolytic药物治疗的潜在益处包括减轻或停止病症的一种或多种体征或症状的进展，例如斑块的频率，斑块所覆盖的血管的表面积，心绞痛和运动耐量降低。
示例性的磷杂环
以上给出的通式中包括以下示例性化合物，其可以筛选并开发用于作为本公开的一部分描述的各种用途。
Figure BDA0002264526170000321
3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)-5-氟苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-(4-(((R)-4-(二甲基氨基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-硝基苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷2-氧化物
Figure BDA0002264526170000322
5-(4-氯苯基)-1-异丙基-2-甲基-4-(3-(4-(4-((R)-2-氧代-2-(4-(((R)-1-(苯基硫基)-4-(4-(磷酰氧基)哌啶-1-基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯-3-羧酸
Figure BDA0002264526170000331
5-(4-氯苯基)-1-异丙基-2-甲基-4-(3-(4-(4-((S)-2-氧代-2-(4-(((R)-1-(苯基硫基)-4-(4-(磷酰氧基)哌啶-1-基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯-3-羧酸
Figure BDA0002264526170000332
5-(4-氯苯基)-1-异丙基-2-甲基-4-(3-(4-(4-((R)-2-氧代-2-(4-(((R)-1-(苯基硫基)-4-(4-((磷酰氧基)甲基)哌啶-1-基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯-3-羧酸
Figure BDA0002264526170000333
5-(4-氯苯基)-1-异丙基-2-甲基-4-(3-(4-(4-((S)-2-氧代-2-(4-(((R)-1-(苯基硫基)-4-(4-((磷酰氧基)甲基)哌啶-1-基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯-3-羧酸
Figure BDA0002264526170000341
5-(4-氯苯基)-4-(3-(4-(4-((S)-2-(4-(((R)-4-(二甲基氨基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1-异丙基-2-甲基-1H-吡咯-3-羧酸
Figure BDA0002264526170000342
1-((R)-3-((4-((S)-3-(4-(4-(3-(4-羧基-2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-2-基)-2-((三氟甲基)磺酰基)苯基)氨基)-4-(苯基硫基)丁基)哌啶-4-羧酸
5-(4-氯苯基)-1-异丙基-2-甲基-4-(3-(4-(4-((S)-2-(4-(((R)-4-吗啉代-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯-3-羧酸
Figure BDA0002264526170000351
5-(4-氯苯基)-1-异丙基-2-甲基-4-(3-(4-(4-((R)-2-(4-(((R)-4-吗啉代-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯-3-羧酸
Figure BDA0002264526170000352
5-(4-氯苯基)-4-(3-(4-(4-((R)-2-(4-(((R)-4-(二甲基氨基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1-异丙基-2-甲基-1H-吡咯-3-羧酸
Figure BDA0002264526170000353
(R)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)-5-氟苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-(4-(((R)-4-吗啉代-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-硝基苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷2-氧化物
(S)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)-5-氟苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-(4-(((R)-4-吗啉代-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-硝基苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷2-氧化物
(R)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)-5-氟苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-(4-(((R)-4-(4-(羟基甲基)哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-硝基苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷2-氧化物
Figure BDA0002264526170000363
(S)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)-5-氟苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-(4-(((R)-4-(4-(羟基甲基)哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-硝基苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷2-氧化物
Figure BDA0002264526170000371
(R)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)-5-氟苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-(4-(((R)-4-(4-羟基哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-硝基苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷2-氧化物
Figure BDA0002264526170000372
(S)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)-5-氟苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-(4-(((R)-4-(4-羟基哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-硝基苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷2-氧化物
Figure BDA0002264526170000373
(R)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-(4-(((R)-4-(二甲基氨基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷2-氧化物
(R)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-(4-(((R)-4-(4-(羟基甲基)哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷2-氧化物
Figure BDA0002264526170000382
(S)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-(4-(((R)-4-(二甲基氨基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷2-氧化物
Figure BDA0002264526170000383
(S)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-(4-(((R)-4-吗啉代-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷2-氧化物
Figure BDA0002264526170000391
(R)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-(4-(((R)-4-(4-羟基哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷2-氧化物
Figure BDA0002264526170000392
1-((R)-3-((4-((R)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-2-基)-2-((三氟甲基)磺酰基)苯基)氨基)-4-(苯基硫基)丁基)哌啶-4-羧酸
Figure BDA0002264526170000393
(S)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-(4-(((R)-4-(4-羟基哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷2-氧化物
Figure BDA0002264526170000401
1-((R)-3-((4-((R)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)-5-氟苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-2-基)-2-硝基苯基)氨基)-4-(苯基硫基)丁基)哌啶-4-基二氢磷酸酯
Figure BDA0002264526170000402
(R)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-(4-(((R)-4-吗啉代-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷2-氧化物
Figure BDA0002264526170000403
1-((R)-3-((4-((R)-3-(4-(4-(3-(4-羧基-2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-2-基)-2-((三氟甲基)磺酰基)苯基)氨基)-4-(苯基硫基)丁基)哌啶-4-羧酸
(R)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)-5-氟苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-(4-(((R)-4-(4-羟基哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷2-氧化物
Figure BDA0002264526170000412
(S)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-(4-(((R)-4-(4-(羟基甲基)哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷2-氧化物
Figure BDA0002264526170000413
1-((R)-3-((4-((R)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)-5-氟苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-2-基)-2-((三氟甲基)磺酰基)苯基)氨基)-4-(苯基硫基)丁基)哌啶-4-羧酸
Figure BDA0002264526170000421
(S)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)-5-氟苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-(4-(((R)-4-吗啉代-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷2-氧化物
Figure BDA0002264526170000422
(R)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)-5-氟苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-(4-(((R)-4-吗啉代-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷2-氧化物
Figure BDA0002264526170000423
(R)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)-5-氟苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-(4-(((R)-4-(4-(羟基甲基)哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷2-氧化物
Figure BDA0002264526170000431
(S)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)-5-氟苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-(4-(((R)-4-(4-羟基哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷2-氧化物
1-((R)-3-((4-((S)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)-5-氟苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-2-基)-2-硝基苯基)氨基)-4-(苯基硫基)丁基)哌啶-4-基二氢磷酸酯
Figure BDA0002264526170000433
(R)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)-5-氟苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-(4-(((R)-4-(二甲基氨基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷2-氧化物
Figure BDA0002264526170000441
(S)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)-5-氟苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-(4-(((R)-4-(二甲基氨基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷2-氧化物
Figure BDA0002264526170000442
(R)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)-5-氟苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-(4-(((R)-4-(二甲基氨基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-硝基苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷2-氧化物
Figure BDA0002264526170000443
(S)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)-5-氟苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-(4-(((R)-4-(二甲基氨基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-硝基苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷2-氧化物
Figure BDA0002264526170000451
5-(4-氯苯基)-4-(3-(4-(4-(2-(4-(((R)-4-(4-羟基哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1-异丙基-2-甲基-1H-吡咯-3-羧酸
5-(4-氯苯基)-4-(3-(4-(4-((5S)-2-(4-(((R)-4-(二甲基氨基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-硝基苯基)-5-甲基-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1-异丙基-2-甲基-1H-吡咯-3-羧酸
Figure BDA0002264526170000453
3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)-5-氟苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-(4-(((R)-4-(二甲基氨基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-硝基苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环己烷2-氧化物
Figure BDA0002264526170000461
5-(4-氯苯基)-4-(3-(4-(4-(2-(4-(((R)-4-(4-羟基哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-硝基苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1-异丙基-2-甲基-1H-吡咯-3-羧酸
Figure BDA0002264526170000462
5-(4-氯苯基)-4-(3-(4-(4-((5R)-2-(4-(((R)-4-(二甲基氨基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-硝基苯基)-5-甲基-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1-异丙基-2-甲基-1H-吡咯-3-羧酸
Figure BDA0002264526170000463
5-(4-氯苯基)-4-(3-(4-(4-(2-(4-(((R)-4-(4-羟基哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-(甲基磺酰基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1-异丙基-2-甲基-1H-吡咯-3-羧酸
Figure BDA0002264526170000471
5-(4-氯苯基)-1-异丙基-2-甲基-4-(3-(4-(4-(2-(3-硝基-4-(((R)-1-(苯基硫基)-4-(4-(磷酰氧基)哌啶-1-基)丁-2-基)氨基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯-3-羧酸
Figure BDA0002264526170000472
1-((R)-3-((4-((R)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)-5-氟苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-2-基)-2-硝基苯基)氨基)-4-(苯基硫基)丁基)哌啶-4-羧酸
Figure BDA0002264526170000473
1-((R)-3-((4-((S)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)-5-氟苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-2-基)-2-硝基苯基)氨基)-4-(苯基硫基)丁基)哌啶-4-羧酸
Figure BDA0002264526170000481
5-(4-氯苯基)-4-(3-(4-(4-((R)-2-(4-(((R)-4-(4-羟基哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1-异丙基-2-甲基-1H-吡咯-3-羧酸
Figure BDA0002264526170000482
5-(4-氯苯基)-4-(3-(4-(4-((S)-2-(4-(((R)-4-(4-羟基哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1-异丙基-2-甲基-1H-吡咯-3-羧酸
5-(4-氯苯基)-4-(3-(4-(4-((R)-2-(4-(((R)-4-(4-(羟基甲基)哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1-异丙基-2-甲基-1H-吡咯-3-羧酸
Figure BDA0002264526170000491
5-(4-氯苯基)-4-(3-(4-(4-((S)-2-(4-(((R)-4-(4-(羟基甲基)哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1-异丙基-2-甲基-1H-吡咯-3-羧酸
Figure BDA0002264526170000492
(R)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-(4-(((R)-4-吗啉代-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-硝基苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷2-氧化物
Figure BDA0002264526170000493
(S)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-(4-(((R)-4-吗啉代-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-硝基苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷2-氧化物
Figure BDA0002264526170000501
1-((R)-3-((4-((R)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-2-基)-2-硝基苯基)氨基)-4-(苯基硫基)丁基)哌啶-4-羧酸
Figure BDA0002264526170000502
1-((R)-3-((4-((S)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-2-基)-2-((三氟甲基)磺酰基)苯基)氨基)-4-(苯基硫基)丁基)哌啶-4-羧酸
Figure BDA0002264526170000503
1-((S)-3-((4-((R)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-2-基)-2-硝基苯基)氨基)-4-(苯基硫基)丁基)哌啶-4-羧酸
(R)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-(4-(((R)-4-(4-(羟基甲基)哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-硝基苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷2-氧化物
Figure BDA0002264526170000512
(S)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-(4-(((R)-4-(二甲基氨基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-硝基苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷2-氧化物
Figure BDA0002264526170000513
(R)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-(4-(((R)-4-(二甲基氨基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-硝基苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷2-氧化物
Figure BDA0002264526170000521
(S)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-(4-(((R)-4-(4-(羟基甲基)哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-硝基苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷2-氧化物
Figure BDA0002264526170000522
1-((R)-3-((4-((S)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-2-基)-2-((三氟甲基)磺酰基)苯基)氨基)-4-(苯基硫基)丁基)哌啶-4-羧酸
Figure BDA0002264526170000523
(S)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)-5-氟苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-(4-(((R)-4-(4-(羟基甲基)哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷2-氧化物
Figure BDA0002264526170000531
(R)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-(4-(((R)-4-(4-羟基哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-硝基苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷2-氧化物
(S)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-(4-(((R)-4-(4-羟基哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-硝基苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷2-氧化物
Figure BDA0002264526170000533
5-(4-氯苯基)-4-(3-(4-(4-((R)-2-(4-(((R)-4-(二甲基氨基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-硝基苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1-异丙基-2-甲基-1H-吡咯-3-羧酸
5-(4-氯苯基)-4-(3-(4-(4-((S)-2-(4-(((R)-4-(4-羟基哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-硝基苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1-异丙基-2-甲基-1H-吡咯-3-羧酸
5-(4-氯苯基)-4-(3-(4-(4-((R)-2-(4-(((R)-4-(4-(羟基甲基)哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-硝基苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1-异丙基-2-甲基-1H-吡咯-3-羧酸
Figure BDA0002264526170000543
5-(4-氯苯基)-4-(3-(4-(4-((S)-2-(4-(((R)-4-(4-(羟基甲基)哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-硝基苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1-异丙基-2-甲基-1H-吡咯-3-羧酸
Figure BDA0002264526170000551
5-(4-氯苯基)-4-(3-(4-(4-((S)-2-(4-(((R)-4-(二甲基氨基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-硝基苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1-异丙基-2-甲基-1H-吡咯-3-羧酸
Figure BDA0002264526170000552
5-(4-氯苯基)-1-异丙基-2-甲基-4-(3-(4-(4-((R)-2-(3-硝基-4-(((R)-1-(苯基硫基)-4-(4-(磷酰氧基)哌啶-1-基)丁-2-基)氨基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯-3-羧酸
Figure BDA0002264526170000553
5-(4-氯苯基)-1-异丙基-2-甲基-4-(3-(4-(4-((R)-2-(4-(((R)-4-吗啉代-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-硝基苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯-3-羧酸
Figure BDA0002264526170000561
5-(4-氯苯基)-1-异丙基-2-甲基-4-(3-(4-(4-((S)-2-(4-(((R)-4-吗啉代-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-硝基苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯-3-羧酸
Figure BDA0002264526170000562
5-(4-氯苯基)-1-异丙基-2-甲基-4-(3-(4-(4-((R)-2-(3-硝基-4-(((R)-1-(苯基硫基)-4-(4-((磷酰氧基)甲基)哌啶-1-基)丁-2-基)氨基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯-3-羧酸
Figure BDA0002264526170000563
5-(4-氯苯基)-4-(3-(4-(4-((R)-2-(4-(((R)-4-(4-羟基哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-硝基苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1-异丙基-2-甲基-1H-吡咯-3-羧酸
Figure BDA0002264526170000571
5-(4-氯苯基)-1-异丙基-2-甲基-4-(3-(4-(4-((S)-2-(3-硝基-4-(((R)-1-(苯基硫基)-4-(4-(磷酰氧基)哌啶-1-基)丁-2-基)氨基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯-3-羧酸
5-(4-氯苯基)-1-异丙基-2-甲基-4-(3-(4-(4-((S)-2-(3-硝基-4-(((R)-1-(苯基硫基)-4-(4-((磷酰氧基)甲基)哌啶-1-基)丁-2-基)氨基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯-3-羧酸
Figure BDA0002264526170000573
1-((R)-3-((4-((S)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-2-基)-2-((三氟甲基)磺酰基)苯基)氨基)-4-(苯基硫基)丁基)哌啶-4-基二氢磷酸酯
Figure BDA0002264526170000581
1-((R)-3-((4-((R)-3-(4-(4-(3-(4-羧基-2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-2-基)-2-硝基苯基)氨基)-4-(苯基硫基)丁基)哌啶-4-羧酸
Figure BDA0002264526170000582
1-((S)-3-((4-((R)-3-(4-(4-(3-(4-羧基-2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-2-基)-2-硝基苯基)氨基)-4-(苯基硫基)丁基)哌啶-4-羧酸
Figure BDA0002264526170000583
1-((R)-3-((4-((R)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-2-基)-2-((三氟甲基)磺酰基)苯基)氨基)-4-(苯基硫基)丁基)哌啶-4-基二氢磷酸酯
Figure BDA0002264526170000591
(1-((R)-3-((4-((R)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-2-基)-2-((三氟甲基)磺酰基)苯基)氨基)-4-(苯基硫基)丁基)哌啶-4-基)甲基二氢磷酸酯
Figure BDA0002264526170000592
(1-((R)-3-((4-((S)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-2-基)-2-((三氟甲基)磺酰基)苯基)氨基)-4-(苯基硫基)丁基)哌啶-4-基)甲基二氢磷酸酯
Figure BDA0002264526170000593
(S)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)-5-氟苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-(4-(((R)-4-(二甲基氨基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-硝基苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环己烷2-氧化物
Figure BDA0002264526170000601
(R)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)-5-氟苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-(4-(((R)-4-(二甲基氨基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-硝基苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环己烷2-氧化物
Figure BDA0002264526170000602
(S)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)-5-氟苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-(4-(((R)-4-(4-(羟基甲基)哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-硝基苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环己烷2-氧化物
Figure BDA0002264526170000603
(R)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)-5-氟苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-(4-(((R)-4-(4-(羟基甲基)哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-硝基苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环己烷2-氧化物
(S)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)-5-氟苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-(4-(((R)-4-(4-羟基哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-硝基苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环己烷2-氧化物
Figure BDA0002264526170000612
(R)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)-5-氟苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-(4-(((R)-4-(4-羟基哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-硝基苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环己烷2-氧化物
Figure BDA0002264526170000613
5-(4-氯苯基)-4-(3-(4-(4-((R)-2-(4-(((R)-4-(4-(羟基甲基)哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-(甲基磺酰基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1-异丙基-2-甲基-1H-吡咯-3-羧酸
Figure BDA0002264526170000621
(R)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)-5-氟苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-(4-(((R)-4-(二甲基氨基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环己烷2-氧化物
(S)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)-5-氟苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-(4-(((R)-4-(4-羟基哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环己烷2-氧化物
Figure BDA0002264526170000623
(S)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)-5-氟苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-(4-(((R)-4-(二甲基氨基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环己烷2-氧化物
(R)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)-5-氟苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-(4-(((R)-4-(4-羟基哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环己烷2-氧化物
Figure BDA0002264526170000632
(R)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)-5-氟苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-(4-(((R)-4-(4-(羟基甲基)哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环己烷2-氧化物
Figure BDA0002264526170000633
(S)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)-5-氟苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-(4-(((R)-4-(4-(羟基甲基)哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环己烷2-氧化物
Figure BDA0002264526170000641
5-(4-氯苯基)-4-(3-(4-(4-((S)-2-(4-(((R)-4-(4-(羟基甲基)哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-(甲基磺酰基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1-异丙基-2-甲基-1H-吡咯-3-羧酸
Figure BDA0002264526170000642
5-(4-氯苯基)-4-(3-(4-(4-((R)-2-(4-(((R)-4-(4-羟基哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-(甲基磺酰基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1-异丙基-2-甲基-1H-吡咯-3-羧酸
Figure BDA0002264526170000643
5-(4-氯苯基)-4-(3-(4-(4-((S)-2-(4-(((R)-4-(4-羟基哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-(甲基磺酰基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1-异丙基-2-甲基-1H-吡咯-3-羧酸
Figure BDA0002264526170000651
5-(4-氯苯基)-4-(3-(4-(4-((S)-2-(4-(((R)-4-(4-((二乙氧基磷酰基)甲基)哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1-异丙基-2-甲基-1H-吡咯-3-羧酸
Figure BDA0002264526170000652
5-(4-氯苯基)-4-(3-(4-(4-((R)-2-(4-(((R)-4-(4-((二乙氧基磷酰基)甲基)哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1-异丙基-2-甲基-1H-吡咯-3-羧酸
Figure BDA0002264526170000653
5-(4-氯苯基)-4-(3-(4-(4-((R)-2-(4-(((R)-4-(4-羟基哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环己烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1-异丙基-2-甲基-1H-吡咯-3-羧酸
Figure BDA0002264526170000661
5-(4-氯苯基)-4-(3-(4-(4-((S)-2-(4-(((R)-4-(4-羟基哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环己烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1-异丙基-2-甲基-1H-吡咯-3-羧酸
Figure BDA0002264526170000662
5-(4-氯苯基)-4-(3-(4-(4-((S)-2-(4-(((R)-4-(4-(羟基甲基)哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环己烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1-异丙基-2-甲基-1H-吡咯-3-羧酸
5-(4-氯苯基)-4-(3-(4-(4-((R)-2-(4-(((R)-4-(4-(羟基甲基)哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环己烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1-异丙基-2-甲基-1H-吡咯-3-羧酸
Figure BDA0002264526170000671
5-(4-氯苯基)-1-异丙基-2-甲基-4-(3-(4-(4-((S)-2-氧代-2-(4-(((R)-1-(苯基硫基)-4-(4-(磷酰氧基)哌啶-1-基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环己烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯-3-羧酸
Figure BDA0002264526170000672
5-(4-氯苯基)-1-异丙基-2-甲基-4-(3-(4-(4-((S)-2-氧代-2-(4-(((R)-1-(苯基硫基)-4-(4-((磷酰氧基)甲基)哌啶-1-基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环己烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯-3-羧酸
Figure BDA0002264526170000673
5-(4-氯苯基)-1-异丙基-2-甲基-4-(3-(4-(4-((R)-2-氧代-2-(4-(((R)-1-(苯基硫基)-4-(4-((磷酰氧基)甲基)哌啶-1-基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环己烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯-3-羧酸
Figure BDA0002264526170000681
5-(4-氯苯基)-1-异丙基-2-甲基-4-(3-(4-(4-((R)-2-氧代-2-(4-(((R)-1-(苯基硫基)-4-(4-(磷酰氧基)哌啶-1-基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环己烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯-3-羧酸
Figure BDA0002264526170000682
5-(4-氯苯基)-1-ethyl-4-(3-(4-(4-((R)-2-(4-(((R)-4-(4-羟基哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-甲基-1H-吡咯-3-羧酸
Figure BDA0002264526170000683
5-(4-氯苯基)-4-(3-(4-(4-((S)-2-(4-(((R)-4-(4-羟基哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1,2-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸
Figure BDA0002264526170000691
5-(4-氯苯基)-1-ethyl-4-(3-(4-(4-((S)-2-(4-(((R)-4-(4-羟基哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-甲基-1H-吡咯-3-羧酸
5-(4-氯苯基)-4-(3-(4-(4-((R)-2-(4-(((R)-4-(4-羟基哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1,2-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸
Figure BDA0002264526170000693
5-(4-氯苯基)-1-异丙基-2-甲基-4-(3-(4-(4-((S)-2-氧代-2-(4-(((R)-1-(苯基硫基)-4-(4-(磷酰基甲基)哌啶-1-基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯-3-羧酸
Figure BDA0002264526170000701
5-(4-氯苯基)-1-异丙基-2-甲基-4-(3-(4-(4-((R)-2-氧代-2-(4-(((R)-1-(苯基硫基)-4-(4-(磷酰基甲基)哌啶-1-基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯-3-羧酸
Figure BDA0002264526170000702
(3-((1-((R)-3-((4-((S)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)-5-氟苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-2-基)-2-((三氟甲基)磺酰基)苯基)氨基)-4-(苯基硫基)丁基)哌啶-4-羰基)氧基)丙基)膦酸
Figure BDA0002264526170000703
5-(4-氯苯基)-1-异丙基-2-甲基-4-(3-(4-(4-((S)-2-(3-(甲基磺酰基)-4-(((R)-1-(苯基硫基)-4-(4-(磷酰氧基)哌啶-1-基)丁-2-基)氨基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯-3-羧酸
Figure BDA0002264526170000711
5-(4-氯苯基)-1-异丙基-2-甲基-4-(3-(4-(4-((R)-2-(3-(甲基磺酰基)-4-(((R)-1-(苯基硫基)-4-(4-(磷酰氧基)哌啶-1-基)丁-2-基)氨基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯-3-羧酸
Figure BDA0002264526170000712
5-(4-氯苯基)-1-异丙基-2-甲基-4-(3-(4-(4-((S)-2-(3-(甲基磺酰基)-4-(((R)-1-(苯基硫基)-4-(4-((磷酰氧基)甲基)哌啶-1-基)丁-2-基)氨基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯-3-羧酸
5-(4-氯苯基)-1-异丙基-2-甲基-4-(3-(4-(4-((R)-2-(3-(甲基磺酰基)-4-(((R)-1-(苯基硫基)-4-(4-((磷酰氧基)甲基)哌啶-1-基)丁-2-基)氨基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯-3-羧酸
定义
通常认为“衰老细胞”源自通常复制的细胞类型由于衰老或导致细胞状态改变的其他事件而不能再复制。根据上下文，衰老细胞可以被鉴定为表达p16，或至少一种选自p16、衰老相关的β-半乳糖苷酶和脂褐素的标志物；有时这些标志物中的两种或更多种，以及衰老相关分泌谱(SASP)的其他标志物，例如但不限于白细胞介素6，以及炎性、血管生成和细胞外基质修饰蛋白。除非另有说明，否则权利要求中提到的衰老细胞不包括癌细胞。
“与衰老相关的”，“衰老相关的”或“与年龄相关的”疾病，紊乱或病症是呈现出对受试者不利的一种或多种症状或体征的生理病症。如果“至少部分地由衰老细胞引起或介导”，则该病症是“衰老相关的”。这意味着受影响组织中或周围的SASP的至少一个组分在病症的病理生理学中起作用，使得消除受影响组织中的至少一些衰老细胞，导致显著缓解或减轻不良症状或体征，对患者有利。使用根据本公开的方法和产品可能潜在地治疗或管理的衰老相关病症包括本公开中提及的和本讨论中提及的先前公开内容中涉及的病症。除非另有明确说明，否则该术语不包括癌症。
蛋白质功能或Bcl功能的抑制剂是在很大程度上防止已经在靶细胞中表达的靶蛋白质执行蛋白质或Bcl家族成员通常在靶细胞中执行的酶促、结合或调节功能的化合物。这导致靶细胞的消除或使细胞更容易受到另一种化合物或事件的毒性的影响。如果化合物在根据以下实施例1的测定中测试时具有小于1000nM(1.0μM)的IC50，则该化合物被认为是本公开内容中的“Bcl抑制剂”或“抑制Bcl活性”的化合物。取决于上下文，通常优选小于100nM或10nM，或在100nM和1nM之间的活性。
术语“Bcl”或“Bcl蛋白”是指Bcl蛋白家族，例如Bcl-2，Bcl-xL和Bcl-w。本公开的Bcl抑制剂将能够抑制Bcl-2，Bcl-xL和Bcl-w中的至少一种。通常但不是必须的，这些Bcl蛋白之一的抑制剂在某种程度上会抑制另外两种。可以测试本公开中提供的化合物的任何Bcl家族成员的活性，以鉴定可能对Bcl-2，Bcl-xL或Bcl-w具有抑制活性和具有特异性的化合物。这种抑制剂将具有来自该清单的靶标Bcl的IC50，其比清单中其他两个Bcl家族成员的IC50至少高10倍。
如果化合物，组合物或药剂消除衰老细胞，消除优选相同组织类型的复制细胞，或缺乏SASP标志物的静止细胞，则通常将其称为“抗衰老的”(senolytic)。或者或另外，如果化合物或组合减少作为衰老相关分泌表型的一部分的病理可溶性因子或介质(其在病症的初始表现或持续病理学中起作用，或抑制其作用)的释放，则化合物或组合可被有效使用。在这方面，术语“抗衰老”(senolytic)是指功能性抑制，使得主要通过抑制而不是消除衰老细胞起作用的化合物(衰老细胞抑制剂)可以以类似的方式使用，具有随之产生的益处。当在根据以下实施例2的测定中测试时，本发明中的模型senolytic组合物和药物具有小于1μM的EC50。小于0.1μM或在1μM至0.1μM之间的活性可能是优选的。取决于上下文，选择性指数(SI)(衰老细胞的EC50与相同组织类型的非衰老细胞相比)可以优于1，2，5或10。
从混合细胞群或组织中选择性去除或“消除”衰老细胞不需要去除所有具有衰老表型的细胞：仅在治疗后保留的组织中最初的衰老细胞的比例基本上是高于在治疗后留下的组织中最初的非衰老细胞的比例。
根据本公开内容的病症的成功“治疗”可以具有对受治疗者有益的任何效果。这包括降低病症的严重程度，持续时间或进展，或由此产生的任何不良体征或症状。治疗也可能是不成功的，导致病症的典型体征和症状没有改善。治疗的同时目标是最小化对靶组织或治疗对象中其他地方的不良反应。在某些情况下，senolytic药物也可用于预防或抑制受试者易感的病症的表现，例如，由于病史导致的遗传易感性。
“治疗有效量”是本公开化合物用于以下的量：(i)治疗特定疾病，病症或紊乱，(ii)减弱，改善或消除特定疾病，病症或紊乱的一种或多种症状，(iii)预防或延迟本文所述特定疾病，病症或紊乱的一种或多种症状的发作，(iv)预防或延迟特定疾病，病症或紊乱的进展，或(v)至少部分逆转治疗前疾病引起的损害。
化合物的“磷酸化”形式是带有一个或多个磷酸酯基团的化合物，所述磷酸酯基团通过氧原子与母核结构共价结合，所述氧原子在磷酸化之前通常但不一定存在于分子上。例如，一个或多个-OH或COOH基团可以被磷酸酯基团取代了氢，所述磷酸酯基团是-OPO3H2或CnPO3H2(其中n是1-4)。在一些磷酸化形式中，磷酸酯基团可以在体内除去(例如，通过酶解)，在这种情况下，磷酸化形式可以是非磷酸化形式的前药。非磷酸化形式没有这种磷酸酯基团。去磷酸化形式是在除去至少一个磷酸基团后磷酸化分子的衍生物。
根据本公开的“小分子”Bcl抑制剂具有小于20000道尔顿的分子量，并且通常小于10000，5000或2000道尔顿。小分子抑制剂不是抗体分子或寡母核苷酸，通常具有不超过五个氢键供体(氮-氢和氧-氢键的总数)，并且不超过10个氢键受体(所有氮或氧原子)。
“前药”是指活性剂的衍生物，其需要在体内转化以释放活性剂。转化可以是酶促转化。有时，转化是环化转化，或酶促转化和环化转化的组合。前药经常(尽管不是必需的)在药理学上无活性，直到转化为活性剂。
“前体部分(Promoiety)”是指保护基团的一种形式，当其用于掩蔽活性剂内的官能团时，将活性剂转化为前药。通常，前体部分将通过在体内通过酶促或非酶促方式裂解的键与药物连接。示例性的前体部分基团包括能够与化合物的羟基或硫醇官能团形成酯或硫酯基团的酰基，和能够与化合物的羟基或硫醇官能团形成醚或硫醚基团的取代烷基，该基团如上所述，可以在体内裂解。
除非另有说明或要求，否则本公开中提及的每种化合物结构包括具有相同结构的共轭酸和碱，这些化合物的结晶和无定形形式，药学上可接受的盐和前药。这包括例如互变异构体，多晶型物，溶剂化物，水合物，未溶剂化的多晶型物(包括无水物)。
除非另有说明或暗示，否则当用于修饰特定基团或基团时，术语“取代的”是指特定基团或基团的一个或多个氢原子各自独立地被相同或不同的非氢取代基取代。除非另有说明，否则取代基的命名是通过命名官能团的末端部分，然后是朝向连接点的相邻官能团命名。例如，取代基“芳基烷氧基羰基”是指基团(芳基)-(烷基)-O-C(O)-。
“连接基”是共价连接两个或多个化学结构的部分，并且在两个结构之间具有长度为100个原子或更短的主链。连接基可以是可裂解的或不可裂解的。连接基通常具有1至20个之间或1至100个之间原子长度的主链，呈直链或支链形式。骨架原子之间的键可以是饱和的或不饱和的。连接基骨架可包括环状基团，例如，任选取代的芳基，杂芳基，杂环或环烷基。
对于具有一个或多个手性中心的本公开的任何Bcl抑制剂化合物，如果未明确指出绝对立体化学，则每个手性中心可独立地为R-构型或S-构型或其外消旋混合物。除非明确提及特定的立体异构体，否则该化合物可以是所示结构的任何立体异构体，作为替代形式或作为混合物。
除非另有说明或要求，否则说明书中使用的其他术语具有其通常含义。
以引用方式并入
出于所有目的，在美国和其他有效的司法管辖区域中，本公开中引用的每个出版物和专利文献在此通过引用整体并入本文用于所有目的，如同每个这样的出版物或文件被具体地和单独地指出通过引用并入本文。
US 2016/0339019 A1(Laberge等人)和US 20170266211 A1(David等人)在此并入本文用于所有目的，包括但不限于能够消除或降低衰老细胞的活性和治疗特定的衰老相关病症(包括但不限于本公开中提到的那些)的化合物的鉴定，配制和用途。授权前专利出版物US 2018/0000816 A1(David等人)和EP3441069 A1(Hopkins等人)在此并入本文用于所有目的，包括但不限于能够消除或减少衰老细胞的活性和治疗各种眼科疾病的化合物的鉴定，配制和用途。
实施例
实施例1：测定Bcl抑制
候选化合物抑制Bcl-2和Bcl-xL活性的能力可以在分子水平上通过直接结合测定。该试验使用基于氧通道的均相测定技术，其由PerkinElmer Inc.,Waltham,Massachusetts销售：参见Eglin等，Current Chemical Genomics，2008，1，2-10。将测试化合物与靶Bcl蛋白和用生物素标记的代表相应同源配体的肽组合。然后将混合物与携带发光供体珠和发光受体珠的链霉抗生物素蛋白组合，如果化合物抑制肽与Bcl蛋白结合，则其成比例地减少发光。
Bcl-2，Bcl-xL和Bcl-w可从密苏里州圣路易斯的Sigma-Aldrich公司获得。生物素化的BIM肽(Bcl-2的配体)和BAD肽(Bcl-xL的配体)描述于US 2016/0038503 A1中。链霉抗生物素蛋白供体珠和Anti-
Figure BDA0002264526170000752
受体珠可从PerkinElmer获得。
为了进行试验，在DMSO中制备1：4稀释系列的化合物，然后在测定缓冲液中以1：100稀释。在96孔PCR板中，按顺序组合以下物质：10μL肽(120nM BIM或60nM BIM)，10μL测试化合物和10μLBcl蛋白(0.8nM Bcl-2/W或0.4nM Bcl-xL))。将测定板在黑暗中在室温下孵育24小时。第二天，合并供体珠和受体珠，并向每个孔中加入5μL。在黑暗中孵育30分钟后，使用读板器测量发光，并测定每种测试化合物的亲和力或抑制程度。
实施例2：测定成纤维细胞中的抗衰老(senolytic)活性
人成纤维细胞IMR90细胞可以从美国典型培养物保藏中心(ATCC)获得，其保藏名称为CCL-186。在含有FBS和Pen/Strep的DMEM中，在3％O2，10％CO2和～95％湿度的气氛中将细胞维持在<75％汇合。将细胞分成组：照射的细胞(在使用前照射后培养14天)和静止细胞(在使用前以高密度培养4天)。
在第0天，如下制备经照射的细胞。洗涤IMR90细胞，以50000个细胞/mL的密度置于T175烧瓶中，并以10-15Gy照射。照射后，将细胞以100μL接种在96孔板中。在第1，3，6，10和13天，吸出每个孔中的培养基并用新鲜培养基替换。
在第10天，如下制备静止健康细胞。洗涤IMR90细胞，与3mL含TrypLE胰蛋白酶的试剂(Thermofisher Scientific，Waltham，Massachusetts)混合并培养5分钟直至细胞变圆(rounded up)并开始从板上脱离。将细胞分散，计数并在培养基中以50000个细胞/mL的浓度制备。将100μL细胞接种在96孔板的每个孔中。培养基在第13天更换。
在第14天，将测试抑制剂化合物与细胞如下组合。在96孔PCR板中以200倍最终所需浓度制备每种测试化合物的DMSO稀释系列。在即将使用之前，将DMSO储液以1：200稀释到预热的完全培养基中。从每个孔中的细胞中吸出培养基，并加入100μL/孔的含有化合物的培养基。
将用于测试的候选senolytic药物与细胞一起培养6天，在第17天用新鲜培养基和相同化合物浓度替换培养基。将Bcl-2抑制剂与细胞一起培养3天。该测定系统使用热稳定荧光素酶的特性来使反应条件产生稳定的发光信号，同时抑制细胞裂解过程中释放的内源性ATP酶。在培养期结束时，向每个孔中加入100μL
Figure BDA0002264526170000761
试剂(Promega Corp.,Madison,Wisconsin)。将细胞板在定轨振荡器上放置30秒，并测量发光。
实施例3：测定HUVEC细胞和其他衰老细胞中的抗衰老(senolytic)活性
将来自单个批次的人脐静脉(HUVEC)细胞在补充有来自ATCC的内皮细胞生长试剂盒TM-VEGF的血管细胞基础培养基中扩增至约8次群体倍增，然后冷冻保存。在测定开始前9天，将衰老群体的细胞解冻并以约27000/cm2接种。将所有细胞在含有5％CO2和3％O2的潮湿培养箱中培养，并且每48小时更换培养基。接种后两天，从X射线源发射12Gy辐射，照射细胞。在测定开始前三天，将非衰老群体的细胞解冻并接种衰老群体。在测定前一天，将所有细胞用胰蛋白酶消化并接种到384孔板，5000/孔衰老细胞和10000/孔非衰老细胞在单独的板中，最终体积为55μL/孔。在每个板中，中心308孔含有细胞，外周的孔充满70μL/孔去离子水。
在测定当天，将化合物从10mM储液稀释到培养基中以提供最高浓度的工作储液，然后将其等分试样在培养基中进一步稀释以提供剩余的两种工作储液。为了开始测定，将5μL工作储液添加到细胞板中。最终测试浓度为20，2和0.2μM。在每个板中，以单一浓度一式三份测定100种测试化合物，同时测定阳性对照的3个孔和5个未处理(DMSO)对照。加入化合物后，将板放回培养箱中三天。
通过使用CellTiter-GloTM试剂(Promega)测定总ATP浓度间接评估细胞存活。用EnSpireTM读板仪(Perkin Elmer)定量所得的发光。将每种浓度的化合物的相对细胞活力计算为相对于相同板的未处理对照的百分比。
对于潜在先导化合物的后续剂量反应，如上所述制备衰老细胞和非衰老细胞的384孔板。将化合物制备为10-点在DMSO中的1：3稀释系列，然后在培养基中稀释至12X。然后将5微升该工作储液加入到细胞板中。孵育三天后，如上所述计算相对于DMSO对照的细胞存活率。所有测定均一式四份进行。
其他细胞系和原代细胞培养物可用作IMR90成纤维细胞或HUVEC细胞的替代物，其在体内与预期的靶组织匹配。一个实例是使用培养的人视网膜微血管内皮细胞(HRMEC)筛选用于治疗眼病的化合物。根据所选细胞系的已知方案培养细胞，并以类似方式照射以使它们衰老。
实施例4：在骨关节炎模型中的senolytic药物的功效
该实施例说明了在用于治疗骨关节炎的小鼠模型中MDM2抑制剂的测试。它可以作必要的修改后适用于测试和开发用于临床治疗的Bcl抑制剂。
该模型如下实施。对C57BL/6J小鼠进行手术以切断一个后肢的前交叉韧带，以在该肢体的关节中诱发骨关节炎。在手术后第3周和第4周，小鼠(n＝7)通过用每个手术膝盖5.8μg Nutlin-3A进行处理，隔日一次(q.o.d.)关节内注射2周。在手术后4周结束时，监测小鼠的关节是否存在衰老细胞，评估功能，监测炎症标志物，并进行组织学评估。
在所进行的研究中包括两个对照组小鼠：一组包括经历假手术(即除了切割ACL之外的随后的外科手术)和平行于GCV(更昔洛韦)治疗组的关节内注射溶媒(vehicle)的C57BL/6J或3MR小鼠(n＝3)；一组包括经过ACL手术并接受平行于GCV治疗组的关节内注射溶媒的C57BL/6J或3MR小鼠(n＝5)。分析来自Nutlin-3A处理小鼠的小鼠的手术关节的RNA的SASP因子(mmp3，IL6)和衰老标志物(p16)的表达。进行qRT-PCR以检测mRNA水平。
图5A，5B和5C分别显示组织中p16，IL6和MMP13的表达。OA诱导手术与这些标志物的表达增加有关。用Nutlin-3A治疗使表达降低至对照水平以下。用Nutlin-3A治疗可清除关节中的衰老细胞。
通过负重测试在手术后4周评估肢体的功能，以确定小鼠偏向使用哪条腿。在进行测定之前，允许小鼠在至少三种情况下适应腔室。在室内操纵小鼠，在每个标尺上用一只后爪站立。在三秒钟内测量放置在每个后肢上的重量。在每个时间点对每只动物进行至少三次单独测定。结果表示为放置在手术肢体上的重量与对侧未手术肢体相比的百分比。
图6A显示功能研究的结果。接受骨关节炎诱导手术的未经处理的小鼠偏爱使用未手术的后肢多于手术的后肢(Δ)。然而，用Nutlin-3A清除衰老细胞会在经历过手术的小鼠中消除这种效应(▽)。
图6B，6C和6D显示来自这些实验的关节组织的组织病理学。ACL手术引起的骨关节炎导致蛋白多糖层被破坏。使用Nutlin-3A清除衰老细胞完全消除了这种效应。
实施例5：senolytic药物在糖尿病性视网膜病变模型中的功效
该实施例说明了在小鼠模型中测试Bcl抑制剂治疗眼后部疾病，特别是糖尿病性视网膜病。可以作必要的修改后适用于测试用于临床治疗的senolytic药物。
在小鼠氧诱导的视网膜病变(OIR)模型中研究了模型化合物UBX1967(Bcl-xL抑制剂)的功效(Scott和Fruttiger，Eye(2010)24，416-421，Oubaha等，2016)。从出生后第7天(P7)到P12，将C57Bl/6小鼠幼崽及其CD1养育母亲暴露于高氧环境(75％O2)。在P12，动物玻璃体内注射1μl在1％DMSO、10％吐温-80、20％PEG-400中配制的测试化合物(200，20或2uM)，并返回室内空气至P17。在P17将眼睛摘出并解剖视网膜用于血管染色或qRT-PCR。为了确定无血管或新生血管区域，将视网膜平放，并用在1mM CaCl2中1：100稀释的同工凝集素B4(IB4)染色。为了定量测量衰老标志物(例如，Cdkn2a，Cdkn1a，Il6，Vegfa)，进行qPCR。分离RNA并通过逆转录产生cDNA，其用于所选转录物的qRT-PCR。
图7A和7B显示玻璃体内ITT)施用UBX1967导致在所有剂量水平下新血管形成和血管闭塞程度的统计学显著改善。
还在链脲佐菌素(STZ)模型中研究了UBX1967的功效。对6至7周的C57BL/6J小鼠进行加权并测量它们的基线血糖(Accu-ChekTM，Roche)。小鼠腹膜内注射STZ(Sigma-Alderich,St.Louis,MO)，连续5天，55mg/Kg。年龄匹配的对照仅注射缓冲液。在最后一次STZ注射后一周再次测量血糖，如果他们的非禁食血糖高于17mM(300mg/L)，则认为小鼠是糖尿病。在STZ施用后8周和9周，STZ治疗的糖尿病C57BL/6J小鼠玻璃体内注射1μl UBX1967(2μM或20μM，在0.015％聚山梨醇酯-80，0.2％磷酸钠，0.75％氯化钠，pH7.2中配制成悬浮液)。在STZ治疗后10周进行视网膜伊文思蓝渗透测定。
图7C和7D显示了该试验方案的结果。玻璃体内(IVT)施用UBX1967后视网膜和脉络膜血管渗漏在两种剂量水平下血管通透性均得到改善。
视网膜神经节细胞损伤的其他模型可用于与青光眼有关的测试中，其中认为增加的眼内压(IOP)引起视网膜神经节细胞损失和视神经损伤。在临床前物种中，增加的前房压可导致视网膜神经元损失，如几个已建立的模型所报道，包括磁性微珠闭塞(Ito等，VisExp.2016(109)：53731)和其他青光眼模型(Almasieh和Levin，Annu Rev Vis Sci.2017)。另外，已经证明缺血再灌注引起视网膜损伤，这可能导致细胞衰老。在这些模型中存在视网膜衰老可用于监测玻璃体内注射测试化合物后的senolysis的影响。
实施例6：senolytic药物在肺疾病模型中的功效
该实施例说明了用于治疗肺疾病的小鼠模型中抑制剂的测试：具体地，特发性肺纤维化(IPF)的模型。它可以作必要的修改后适用于测试和开发用于临床治疗的Bcl抑制剂。
作为慢性阻塞性肺疾病(COPD)的模型，小鼠暴露于香烟烟雾中。
通过衰老细胞清除，肺功能和组织病理学评估senolytic药物对小鼠暴露于烟雾的作用。
在该研究中使用的小鼠包括3MR品系，描述于US 2017/0027139A1和Demaria等人，Dev Cell.2014年12月22日；31(6):722–733。3MR小鼠具有编码胸苷激酶的转基因，其将前药更昔洛韦(GCV)转化为对细胞致死的化合物。将转基因中的酶置于p16启动子的控制下，使其在衰老细胞中特异性表达。用GCV处理小鼠消除了衰老细胞。
在该研究中使用的其他小鼠包括INK-ATTAC品系，描述于US 2015/0296755 A1和Baker等人，Nature 2011 Nov 2；479(7372)：232-236。INK-ATTAC小鼠具有在p16启动子控制下编码可转换半胱天冬酶8的转基因。通过用转换化合物AP20187处理小鼠可以激活半胱天冬酶8，于是半胱天冬酶8直接诱导衰老细胞中的细胞凋亡，从小鼠中消除它们。
为了进行实验，将6周龄的3MR(n＝35)或INK-ATTAC(n＝35)小鼠长期暴露于由Teague TE-10系统产生的香烟烟雾中，该系统是在腔室中产生侧流和主流香烟烟雾的组合的自动控制吸烟的机器，其被输送到收集和混合室，在其中不同量的空气与烟雾混合物混合。COPD方案改编自约翰霍普金斯大学的COPD核心设施(Rangasamy等，2004,J.Clin.Invest.114:1248-1259；Yao等，2012,J.Clin.Invest.122:2032-2045)。
小鼠每天接受总共6小时的香烟烟雾暴露，每周5天，持续6个月。每支点燃的香烟(3R4F研究香烟，每根香烟含有10.9毫克总颗粒物质(TPM)，9.4毫克焦油和0.726毫克尼古丁，以及11.9毫克一氧化碳[肯塔基大学，列克星敦，肯塔基州])抽吸2秒，每分钟一次，总共8次抽吸，流速为1.05升/分钟，提供35立方厘米的标准抽吸。通过一次闷烧2支香烟，调整烟机以产生侧流烟(89％)和主流烟(11％)的混合物。监测烟室气氛中的总悬浮颗粒(80-120mg/m3)和一氧化碳(350ppm)。
从第7天开始，(10)INK-ATTAC和(10)3MR小鼠分别用AP20187(每周3次)或更昔洛韦(连续5天治疗，然后停药16天，重复直至实验结束)治疗。相同数量的小鼠接收相应的溶媒。将剩余的30只小鼠(15只INK-ATTAC和15只3MR)均匀地分开，每个基因修饰的品系中的5只放入三个不同的处理组中。一组(n＝10)接受Nutlin-3A(25mg/kg溶于PBS中的10％DMSO/3％Tween-20TM，连续14天处理，然后停药14天，重复直至实验结束)。一组(n＝10)接受ABT-263(Navitoclax)(100mg/kg溶于15％DMSO/5％Tween-20，连续7天处理，然后停药14天，重复直至实验结束)，而最后一组(n＝10)仅接受用于ABT-263的溶媒(15％DMSO/5％吐温-20)并执行与ABT-263相同的治疗方案。另外70只没有接触香烟烟雾的动物被用作实验的对照。
在暴露两个月的香烟烟雾(CS)后，通过使用MouseSTAT PhysioSuiteTM脉搏血氧计(Kent Scientific)监测氧饱和度来评估肺功能。用异氟烷(1.5％)麻醉动物并施加脚趾夹。监测小鼠30秒并计算该持续时间内的平均外周毛细血管氧饱和度(SpO2)测量值。
图8显示了结果。与未处理的对照相比，通过AP2018，更昔洛韦，ABT-263(Navitoclax)或Nutlin-3A清除衰老细胞导致在两个月香烟烟雾暴露后的小鼠中SpO2水平的统计学显著增加。
实施例7：全身给药时，senolytic药物在动脉粥样硬化中的功效
该实施例说明了在用于治疗动脉粥样硬化的小鼠模型中测试MDM2抑制剂。测试化合物全身给药而不是局部给药。该模型在小鼠的LDLR-/-品系中完成，其缺乏低密度脂蛋白的受体。这里描述的实验可以作必要的修改后适用于测试和开发用于临床治疗的其他类型的抑制剂。
从第0周开始并在整个研究期间，给两组LDLR-/-小鼠(10周)喂食具有42％卡路里的脂肪的高脂肪饮食(HFD)(Harlan Teklad TD.88137)。两组LDLR-/-小鼠(10周)喂食正常食物(-HFD)。从第0-2周开始，一组HFD小鼠和-HFD小鼠用Nutlin-3A(25mg/kg，腹膜内)处理。一个治疗周期是14天治疗，14天停药。将溶媒施用于一组HFD小鼠和一组-HFD小鼠。在第4周(时间点1)，处死一组小鼠并评估斑块中衰老细胞的存在。对于一些剩余的小鼠，从第4-6周重复Nutlin-3A和溶媒给药。在第8周(时间点2)，处死小鼠并评估斑块中衰老细胞的存在。剩余的小鼠从第8-10周用Nutlin-3A或溶媒处理。在第12周(时间点3)，处死小鼠并评估斑块的水平和斑块中衰老细胞的数量。
与喂食-HFD的小鼠(每组n＝3)相比，在喂食HFD并在时间点1用Nutlin-3A或溶媒处理的LDLR-/-小鼠中测量血浆脂质水平。下午三点左右(mid-afternoon)收集血浆并分析循环脂质和脂蛋白。
在时间点1结束时，处死喂食HFD并用Nutlin-3A或溶媒处理的LDLR-/-小鼠(n＝3，所有组)，解剖主动脉弓用于RT-PCR分析SASP因子和衰老细胞标志物。将值标准化为GAPDH，并表示为相对于正常饮食的年龄匹配的溶媒处理的LDLR-/-小鼠的倍数变化。数据显示，经过一个治疗周期，喂食HFD的LDLR-/-小鼠中Nutlin-3A对衰老细胞的清除降低了几种SASP因子和衰老细胞标志物MMP3，MMP13，PAI1，p21，IGFBP2，IL-1A和IL-1B的表达。
在时间点2结束时，处死喂食HFD并用Nutlin-3A或溶媒处理的LDLR-/-小鼠(所有组n＝3)，解剖主动脉弓用于RT-PCR分析SASP因子和衰老细胞标志物。将值标准化为GAPDH，并表示为相对于正常饮食的年龄匹配的溶媒处理的LDLR-/-小鼠的倍数变化。数据显示在HFD小鼠的主动脉弓中表达一些SASP因子和衰老细胞标志物。在喂食HFD的LDLR-/-小鼠中具有Nutlin-3A的多个治疗周期的衰老细胞的清除减少了大多数标志物的表达。
在时间点3结束时，处死喂食HFD并用Nutlin-3A或溶媒处理的LDLR-/-小鼠(所有组n＝3)，解剖主动脉并用苏丹IV染色以检测脂质的存在。通过MRI分析小鼠的身体组成，并通过HemavetTM计数循环血细胞。
图9显示了结果。用Nutlin-3A治疗使降主动脉中斑块覆盖的表面积减少约45％。血小板和淋巴细胞计数在Nutlin-3A和溶媒处理的小鼠之间是相等的。用高脂肪饮食喂养的小鼠用Nutlin-3A治疗也减少了体重和体脂成分。
实施例8：在体外和体内测定癌细胞的细胞毒性
可以在白细胞介素-3(IL-3)依赖性前淋巴细胞FL5.12鼠细胞系中评估化合物的细胞活性。IL-3撤退通过上调促凋亡因子Bim和Puma来诱导FL5.12细胞凋亡。Bcl-2(FL5.12-Bcl-2)或Bcl-xL(FL5.12-Bcl-xL)的过表达通过隔离(sequester)Bim和Puma保护免受IL-3撤退(IL-3withdrawal)的影响。化合物逆转了过表达Bcl-2或Bcl-xL所提供的保护作用。化合物在IL-3存在下无法有效引发细胞死亡，其中FL5.12细胞不受促凋亡刺激。在半胱天冬酶抑制剂ZVAD存在下，化合物在IL-3撤退下杀死FL5.12-Bcl-2或FL5.12-Bcl-xL细胞的能力可以减弱，表明细胞杀伤是半胱天冬酶依赖性的。
可以进行免疫共沉淀研究以确定BH3模拟物诱导的细胞毒性是否可归因于细胞内Bcl-2家族蛋白质-蛋白质相互作用的破坏。化合物诱导FL5.12-Bcl-xL细胞中Bim：Bcl-xL相互作用的剂量依赖性降低。对于FL5.12-Bcl-2细胞中Bim：Bcl-2复合物的破坏也观察到类似的结果，表明化合物通过减弱Bcl-xL和Bcl-2隔离诸如Bim之类的促凋亡因子的能力来恢复IL-3依赖性细胞死亡。
可以使用其他建立的细胞系在类似的测定中测试本公开中列出的化合物特异性杀死癌细胞的能力的测试。这些包括HeLa细胞，OVCAR-3，LNCaP和可从Millipore Sigma,Burlington MA,U.S.A获得的任何认证的癌细胞系。如果化合物对细胞致死的浓度比相同组织类型的非癌细胞低至少5倍，优选低25或100倍，则化合物特异性地杀死癌细胞。对照细胞具有与待测癌细胞系类似的形态特征和细胞表面标志物，但没有癌症体征。
在体内，在从敏感的SCLC(H889)和血液学(RS4；11)细胞系或根据用户特别感兴趣的癌症类型使用其他形成肿瘤的癌细胞系建立的侧异种移植模型(flank xenograftmodel)中评估化合物。当口服或静脉内给药时，化合物诱导快速和完全的肿瘤反应(CR)，其在携带H889(SCLC)或RS4；11(ALL)肿瘤的所有动物中在治疗结束后持续数周。携带H146SCLC肿瘤的小鼠的类似治疗可以在动物中诱导快速的消退。
实施例9：磷杂环化合物的合成
图1A，1B和1C显示了可用于制备酰基磷酰胺的一般合成方案
图2A，2B和2C显示用于合成乙基N-(4-(4-((4'-氯-[1,1'-联苯基]-2-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酰基)-P-(4-(((R)-4-吗啉代-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-硝基苯基)磷酰胺的方法。步骤如下：
二甲基(4-氟-3-硝基苯基)膦酸酯的合成
Figure BDA0002264526170000841
向4-碘-2-硝基-氟苯(4.55g，17.0mmol)在无水二氧六环(40mL)中的溶液中加入亚磷酸二甲酯(1.88g，17mmol)和三乙胺(2.59mL，18.7mmol)。然后在氮气氛下加入Xantphos(492mg，0.85mmol)和Pd2(dba)3(394mg，0.43mmol)，并将混合物在室温下搅拌2.5小时。将混合物在水(100mL)和1M盐酸水溶液(20mL)中稀释，并用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水(40mL)洗涤，经MgSO4干燥，过滤并在真空下浓缩。通过二氧化硅快速色谱法(Reveleris，50-100％乙酸乙酯的己烷溶液)纯化粗残余物，得到(4-氟-3-硝基苯基)膦酸二甲酯，为浅黄色固体(3.09g，73％收率)。LCMS(ESI)M+H＝250.1
叔丁基(R)-(4-(二甲基氨基)-1-(苯硫基)丁-2-基)氨基甲酸酯的合成
Figure BDA0002264526170000842
向叔丁基N-[(2R)-4-氧代-1-(苯基硫基)丁-2-基]氨基甲酸酯(1g，3.39mmol)在THF(10mL)和二甲胺(0.95mL的33％在乙醇中的溶液，5.1mmol)的混合物中的溶液加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.44g，6.78mmol)。将混合物在室温下搅拌30分钟。将混合物在饱和氯化铵水溶液(10mL)，水(5mL)，盐水(50mL)和乙酸乙酯(50mL)中稀释。分离各层，通过加入饱和碳酸钠水溶液将水相pH调节至约10，并用乙酸乙酯(2×60mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水(30mL)洗涤，经MgSO4干燥，过滤并在真空下浓缩。通过二氧化硅快速色谱法(Reveleris，20g硅胶柱，0-30％甲醇的DCM溶液)纯化粗残余物，得到叔丁基(R)-(4-(二甲基氨基)-1-(苯硫基)丁-2-基)氨基甲酸酯，为无色油状物(921mg，收率84％)。LCMS(ESI)M+H＝325.2
乙基2-(3-溴-5-氟亚苄基)-3-氧代丁酸酯(E和Z的混合物)的合成
向3-溴-5-氟苯甲醛(40.8g，201mmol)在甲苯(80mL)和冰醋酸(4mL)中的溶液中加入乙酰乙酸乙酯(28.5mL，225mmol)和哌啶(1.2mL)。将混合物加热至回流2.5小时，用Dean-Stark装置收集释放的水。将混合物在甲苯(100mL)，EtOAc(200mL)和己烷(100mL)的混合物中稀释。将得到的溶液用1M HCl水溶液(100mL)，水(100mL)，饱和NaHCO3水溶液(50mL)和盐水(50mL)洗涤。将有机层用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。将粗残余物用热己烷(100mL)处理，冷却至室温并进一步在冰/丙酮浴中冷却。过滤收集固体物质，用冰冷的己烷洗涤，真空干燥，得到乙基2-(3-溴-5-氟亚苄基)-3-氧代丁酸酯，为黄色固体(38.18g，60.3％收率)。将滤液浓缩至80mL并通过过滤收集分离的物质，并通过二氧化硅快速色谱法(Reveleris，40g柱，0-100％DCM的己烷溶液)纯化，得到另外的期望产物，为黄色固体(8.8g，13.9％收率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝315.0/317.0[M+Na]+＝337.0/339.0
乙基2-乙酰基-3-(3-溴-5-氟苯基)-4-(4-氯苯基)-4-氧代丁酸酯的合成
Figure BDA0002264526170000861
向乙基2-(3-溴-5-氟亚苄基)-3-氧代丁酸酯(46.8g，148.5mmol)和4-氯苯甲醛(21.4g，152.2mmol)在乙醇(240mL)中的溶液中加入三乙胺(31mL，222mmol)。将氮气鼓泡通过混合物5分钟，然后加入3-苄基-5-(2-羟乙基)-4-甲基噻唑鎓氯化物(6g，22mmol)。在氮气氛下将混合物加热至70℃并保持2小时。真空除去溶剂，将残留的粗产物溶于EtOAc(700mL)中，用1M HCl水溶液(130mL)，水(2×150mL)和盐水(2×20mL)洗涤。有机萃取液用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩，得到乙基2-乙酰基-3-(3-溴-5-氟苯基)-4-(4-氯苯基)-4-氧代丁酸酯，为橙色胶状物(73.1g))无需纯化即可使用。LCMS(ESI)[M+Na]+＝477.0/479.0
乙基4-(3-溴-5-氟苯基)-5-(4-氯苯基)-1-异丙基-2-甲基-吡咯-3-甲酸酯的合成
Figure BDA0002264526170000862
在15分钟内向乙基2-乙酰基-3-(3-溴-5-氟苯基)-4-(4-氯苯基)-4-氧代丁酸酯(73.1g)在冰醋酸(140mL)中的溶液中滴加异丙胺(85mL)，同时向混合物中鼓入氮气。将混合物在室温下搅拌10分钟，然后在氮气氛下加热至130℃并保持2小时。将混合物用EtOAc(600mL)稀释，并用水(500mL)和盐水(50mL)处理。加入1M HCl水溶液直至达到pH～1。分离有机层，用水(4×500mL)，饱和NaHCO3水溶液(100mL)和盐水(50mL)洗涤有机层，经MgSO4干燥，过滤并在真空下浓缩。将粗残余物用热甲醇(250mL)处理，将得到的溶液冷却至室温，然后在冰-丙酮浴中进一步冷却。过滤收集沉淀的固体，用冷甲醇洗涤并真空干燥，得到乙基4-(3-溴-5-氟苯基)-5-(4-氯苯基)-1-异丙基-2-甲基-吡咯-3-甲酸酯，为浅黄色固体(44.4g，2步收率62％)。LCMS(ESI)单主峰，电离弱(poor ionization)
3-(3-溴-5-氟苯基)-2-(4-氯苯基)-5-甲基-1-(丙-2-基)-1H-吡咯的合成
向三氟乙酸(190mL)中加入乙基4-(3-溴-5-氟苯基)-5-(4-氯苯基)-1-异丙基-2-甲基-吡咯-3-甲酸酯(44.3g，92.5mmol)。将混合物加热至回流2小时。将混合物倒入冰水(800mL)中并用EtOAc(800mL)萃取。将合并的有机萃取液用水(4×500mL)和饱和Na2CO3水溶液洗涤直至pH>9。然后将有机层用盐水(50mL)洗涤，经MgSO4干燥，过滤并在真空下浓缩，得到3-(3-溴-5-氟苯基)-2-(4-氯苯基)-5-甲基-1-(丙-2-基)-1H-吡咯，为浅黄色固体(36.1g，96％收率)，其无需纯化而直接使用。LCMS(ESI)[M+H]+＝406.1/408.1
1-[3-[2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-吡咯-3-基]-5-氟-苯基]-4-(4-硝基苯基)哌嗪的合成
Figure BDA0002264526170000872
在氮气氛下向3-(3-溴-5-氟苯基)-2-(4-氯苯基)-5-甲基-1-(丙-2-基)-1H-吡咯(24g，59.0mmol)在无水DMSO(200mL)中的溶液中加入4-硝基苯基哌嗪(33g，159mmol)和DMPAO(11.6g，60mmol)。将混合物加热并超声处理以辅助溶解，并将氮气鼓泡通过溶液几分钟。然后加入碳酸钾(32.44g，234.7mmol)和碘化亚铜(I)(2.88g，15.1mmol)并继续氮气鼓泡另外5分钟。在氮气下将混合物加热至120℃并保持6小时。将混合物用DCM(800mL)，水(1.5L)和饱和NH4Cl水溶液(400mL)处理。分离有机层，水层用DCM(2×200mL)萃取。将合并的有机萃取物用水(5×500mL)，饱和NaHCO3水溶液(200mL)，水(200mL)和盐水(50mL)洗涤，经MgSO4干燥，过滤并在真空下浓缩。
将粗残余物溶于DCM(最小量)并用MeOH(过量)处理。将混合物加热至70℃直至体积减少约一半。将悬浮液冷却至0℃，过滤收集固体，用冷MeOH洗涤，真空干燥，得到1-[3-[2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-吡咯-3-基]-5-氟-苯基]-4-(4-硝基苯基)哌嗪，为黄色固体(19.2g，61％收率)。观察到另外的固体在滤液中沉淀并通过过滤收集，用冷MeOH洗涤并在真空下干燥，得到另外的期望产物，为黄色固体(1.28g，4％收率)。LCMS(ESI)单主峰，电离弱
1-[3-[2-(4-氯苯基)-4-碘-1-异丙基-5-甲基-吡咯-3-基]-5-氟-苯基]-4-(4-硝基苯基)哌嗪的合成
Figure BDA0002264526170000881
在0℃，向1-[3-[2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-吡咯-3-基]-5-氟-苯基]-4-(4-硝基苯基)哌嗪(20.4g,38.3mmol)在DMF(250mL)中的溶液中加入N-碘代琥珀酰亚胺(10.45g，46.4mmol)在DMF(50mL)中的溶液。将混合物在室温下搅拌2.5小时。将混合物在冰/水(1.3L)中稀释。过滤收集沉淀的固体，用水洗涤，然后溶解在DCM中。将所得溶液用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。将粗残余物用MeOH研磨，过滤收集固体，真空干燥，得到1-[3-[2-(4-氯苯基)-4-碘-1-异丙基-5-甲基-吡咯-3-基]-5-氟-苯基]-4-(4-硝基苯基)哌嗪，为黄色固体(23.0g，91％收率)，其不经纯化而使用。LCMS(ESI)单主峰，电离弱
1-[3-[2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-甲磺酰基-吡咯-3-基]-5-氟-苯基]-4-(4-硝基苯基)哌嗪的合成
在氮气氛下，向1-[3-[2-(4-氯苯基)-4-碘-1-异丙基-5-甲基-吡咯-3-基]-5-氟-苯基]-4-(4-硝基苯基)哌嗪(13.35g，18.23mmol)在无水DMSO(120mL)中的溶液中加入脯氨酸钠盐(3.1g，22.3mmol)和甲烷亚磺酸钠盐(20.2g，198mmol)。然后加入碘化亚铜(I)(3.52g，18.5mmol)，将混合物加热至105℃，保持19小时。将混合物用EtOAc(1.5L)，水(500mL)和饱和NH4Cl水溶液(300mL)稀释。分离有机层，水层用EtOAc(500mL)萃取。将合并的有机萃取物用水(2×500mL)，饱和NaHCO3水溶液(200mL)，水(200mL)和盐水(200mL)洗涤，经MgSO4干燥，过滤并在真空下浓缩。
通过二氧化硅快速色谱法(0-60％EtOAc的己烷溶液)纯化粗残余物。合并所需的含产物的级分并浓缩，并通过从EtOAc/己烷中重结晶进一步纯化，得到1-[3-[2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-甲基磺酰基-吡咯-3-基]-5-氟-苯基]-4-(4-硝基苯基)哌嗪，为橙色固体(9.18g，41％)。通过重复二氧化硅色谱法和从EtOAc/己烷中重结晶得到另外的期望产物(2.7g，12％)。LCMS(ESI)[M+H]+＝611.2
4-(4-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)-5-氟苯基)哌嗪-1-基)苯胺的合成
Figure BDA0002264526170000891
在氮气氛下，向1-[3-[2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-甲基磺酰基-吡咯-3-基]-5-氟-苯基]-4-(4-硝基苯基)哌嗪(2.34g，3.82mmol)在乙醇(50mL)中的溶液中加入浓盐酸(4mL)和二氯化锡(II)二水合物(4.32g，19.1mmol)。将混合物加热至回流5小时。将混合物浓缩至1/3体积，并在乙酸乙酯(200mL)和饱和碳酸氢钠水溶液(200mL)之间分配。分离各层，水层用乙酸乙酯(2×100mL)洗涤。将合并的有机萃取液用水(3×80mL)和盐水(50mL)洗涤，经MgSO4干燥，过滤并在真空下浓缩，得到4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1)-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)-5-氟苯基)哌嗪-1-基)苯胺，为棕褐色泡沫固体(2.30g，>100％)，无需纯化而直接使用。LCMS(ESI)M+H＝581.2
3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)-5-氟苯基)哌嗪-1-基)苯基)恶唑烷-2-酮的合成
Figure BDA0002264526170000901
在氮气氛下，向4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)-5-氟苯基)哌嗪-1-基)苯胺(581mg，1.0mmol)在无水乙腈(20mL)中的溶液中加入碳酸钾(691mg，5.0mmol，细粉末)。然后加入2-溴乙基氯甲酸酯(281mg，1.5mmol)在无水乙腈(5mL)中的溶液，将得到的混合物加热回流18小时。将混合物用盐水(50mL)和水(50mL)稀释，并用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将合并的有机萃取液用水(50mL)洗涤，然后用盐水(20mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。通过二氧化硅快速色谱法(Revelaris，20g硅胶柱，40-100％乙酸乙酯的DCM溶液)纯化粗残余物，得到3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)-5-氟苯基)哌嗪-1-基)苯基)恶唑烷-2-酮，为灰白色固体(365mg，58％收率)。LCMS(ESI)M+H＝651.2，M+Na＝673.2
2-((4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)-5-氟苯基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)乙-1-醇的合成
Figure BDA0002264526170000902
向3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)-5-氟苯基)哌嗪-1-基)苯基)恶唑烷-2-酮(365mg)在乙醇(50mL)中的溶液中加入氢氧化钾(1.5g，27mmol)在水(5mL)中的溶液。将混合物加热至回流1小时。将混合物真空浓缩，并将残余物在乙酸乙酯(50mL)和水(100mL)之间分配。分离各层，水层用乙酸乙酯(50mL)洗涤。将合并的有机萃取物用盐水(30mL)洗涤，经MgSO4干燥，过滤并在真空下浓缩，得到2-((4-(4-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)-5-氟苯基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)乙-1-醇，为棕褐色泡沫(391mg，63％收率)。LCMS(ESI)M+H＝625.3，M+Na＝647.2
3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)-5-氟苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-(4-氟-3-硝基苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷2-氧化物的合成
第一步
在氮气氛下，向(4-氟-3-硝基苯基)膦酸(在使用前已通过与甲苯共蒸发并在高真空下干燥进行预干燥，1.33g，6.0mmol)在无水DCM(15mL)中的悬浮液中加入草酰氯(2mL，24mmol)和DMF(2滴)。在气体逸出消退后，将混合物加热至40℃保持45分钟，冷却并在真空下浓缩。将所得残余物与甲苯共蒸发以除去过量的草酰氯。然后将粗残余物重新溶解在无水DCM(15mL)中并再次用草酰氯(1.5mL)和DMF(2滴)处理并在氮气下加热回流30分钟。将混合物真空浓缩，将残余物与甲苯共蒸发，得到粗制中间体，为橙色油状物，将其直接用于下一步骤。
第二步
在氮气氛下，向2-((4-(4-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)-5-氟苯基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)乙-1-醇(2.5g，4.0mmol)在无水DCM(15mL)和无水吡啶(3.23mL，40mmol)中的溶液中加入在无水DCM(15mL)中的来自上一步骤的粗残余物，并在冰/水浴中冷却。将所得混合物搅拌30分钟，然后温热至室温并再搅拌30分钟。将混合物在DCM(50mL)中稀释，并用饱和NaHCO3水溶液(50mL)处理。分离各层，水层用DCM(2×50mL)洗涤。将合并的有机萃取液用水(100mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。
通过二氧化硅快速色谱法(Reveleris，70-100％DCM的己烷溶液，然后0-100％EtOAc的DCM溶液)纯化粗残余物，得到3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)-5-氟苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-(4-氟-3-硝基苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷2-氧化物，为橙色泡沫固体(2.23g，69％收率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝810.1
3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)-5-氟苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-(4-(((R)-4-(二甲基氨基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-硝基苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷2-氧化物的合成
Figure BDA0002264526170000921
向叔丁基(R)-(4-(二甲基氨基)-1-(苯硫基)丁-2-基)氨基甲酸酯(120mg，0.370mmol)在乙酸乙酯(3mL)中的溶液中加入浓盐酸水溶液(3毫升)。将混合物在室温下搅拌2小时。然后将混合物浓缩至干，并将所得残余物在氮气氛下溶于无水DMF(10mL)中。加入N,N-二异丙基乙胺(485mg，3.75mmol)，然后加入3-(4-(3-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)-5-氟苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-(4-氟-3-硝基苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷2-氧化物(200mg，0.25mmol)，并将所得混合物在室温下搅拌4小时。将混合物在盐水(50mL)和水(50mL)中稀释，并用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将合并的有机萃取液用水(50mL)和盐水(20mL)洗涤，经MgSO4干燥，过滤并在真空下浓缩。
通过二氧化硅快速色谱法(Reveleris，20g SiO2柱，0-10％甲醇的DCM溶液)纯化粗残余物，得到3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)-5-氟苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-(4-(((R)-4-(二甲基氨基)-1-(苯硫基)丁-2-基)氨基)-3-硝基苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-2-氧化物，为非对映异构体的混合物，为黄色泡沫状物(157mg，收率62％)。LCMS(ESI)M+H＝1014.2，M+2H/2＝507.8
实施例10：氧氮磷杂环化合物的生物化学和细胞活性
根据实施例1中描述的方法，在体外测定中评估所选化合物对配体与Bcl-2结合的抑制。还根据分别在实施例3和2中描述的方法评估了化合物在HRMEC细胞系和IMR90成纤维细胞中的衰老细胞杀伤活性。
图3A和3B显示Bcl结合测定和细胞培养测定的结果。
图4是描绘三维模型的图，其中本公开中描述的Bcl抑制剂匹配Bcl家族蛋白的晶体结构。附图中的注释可以用作读者的指导，用于开发落入上述通式中的其他化合物，其将保留Bcl抑制活性和抗衰老(senolytic)活性。与Bcl或其结合配体密切相互作用的区对变异的耐受性较差。与溶剂相互作用的区对Bcl抑制方面的变化更耐受，并且可以被修饰以调节分子的其他性质，例如溶解度和检测。
本公开中呈现的若干假设提供了一个前提，读者可以通过该前提理解本发明的各个方面。这个前提是为读者的知识丰富提供的。本发明的实践不需要详细理解或应用该假设。除非另有说明，否则本公开中呈现的假设的特征不限制要求保护的发明的应用或实践。
例如，除了明确需要消除衰老细胞的情况外，化合物可用于治疗所述病症，而不管它们对衰老细胞的影响如何。尽管本公开中提到的许多与衰老相关的病症主要发生在老年患者中，但是它们介导的衰老细胞的发生和病理生理学可以由其他事件引起，例如辐射，其他类型的组织损伤，其他类型的疾病，和遗传异常。除非另有明确说明或要求，否则本发明可以施用于具有所示病症的任何年龄的患者。
还提供了关于本公开化合物的作用机理的讨论，以用于读者的知识丰富，并且不暗示任何限制。除非另有说明，否则化合物可用于去除衰老或癌细胞或用于治疗如下请求保护的疾病，无论它们如何在靶细胞内或在治疗的受试者体内操作。
尽管本公开中提及的化合物和组合物在消除衰老细胞和治疗衰老相关病症和癌症的背景下进行了说明，但本文所述的新颖化合物及其衍生物可以用于任何目的，包括但不能仅限于实验室使用，衰老相关疾病的治疗，依法投毒(poisoning of in-laws)以及诊断目的。
尽管已经参考具体实例和说明描述了本发明，但是作为常规开发和优化的问题，并且在本领域普通技术人员的能力范围内可以进行更改和等同替换以适应特定情况或预期的用途，从而在不背离所要求保护的范围及其等同物的范围的前提下，获得本发明的益处。

Claims (45)

1.式(I)的化合物：
Figure FDA0002264526160000011
其中：
X1是O或S；
R1和R3与它们连接的N和P原子一起形成5-、6-或7-元杂环，任选被一个或多个R23取代；
R4选自氢，烷基，取代的烷基，硝基，烷基磺酰基(例如，CH3SO2-)，取代的烷基磺酰基(例如，CF3SO2-)，烷基亚磺酰基，取代的烷基亚磺酰基，氰基，C(O)OH，C(O)NH2，卤素，SO2NH2，烷基氨基磺酰基，取代的烷基氨基磺酰基，烷基磺酰基氨基和取代的烷基磺酰基氨基，烷酰基，取代的烷酰基，烷基氨基羰基，取代的烷基氨基羰基，烷氧基羰基和取代的烷氧基羰基；
R22选自氢，烷基和取代的烷基；
每个R23独立地选自烷基，取代的烷基，-CONH2，COOH，CONHR22，羟基，卤素，烷氧基和取代的烷氧基；
Z2选自-NR5R6，氢，烷基，取代的烷基，链烯基，取代的链烯基，烷氧基，取代的烷氧基，烷基硫烷基，取代的烷基硫烷基，炔基，取代的炔基，芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基，碳环，取代的碳环，杂环，取代的杂环，芳基烷氧基，取代的芳基烷氧基，芳氧基，取代的芳氧基，芳氧基烷氧基，取代的芳氧基烷氧基，芳基硫烷基，取代的芳基硫烷基，芳基硫烷基烷氧基，取代的芳基硫烷基烷氧基，环烷基烷氧基，取代的环烷基烷氧基，环烷氧基，取代的环烷氧基，卤素，羰基氧基，卤代烷氧基，卤代烷基，羟基和硝基；
Z3选自杂环，取代的杂环，-NR5R6，芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基，碳环和取代的碳环；
R5和R6独立地选自氢，烷基和取代的烷基；
R11和R12各自是一个或多个任选的取代基，其各自独立地选自：烷基，取代的烷基，烷氧基，取代的烷氧基，卤素，氰基，硝基，羧基，C(O)NH2，SO2NH2，磺酸酯，羟基，烷基磺酰基，取代的烷基磺酰基24基，烷基氨基磺酰基，取代的烷基氨基磺酰基，烷基磺酰基氨基，取代的烷基磺酰基氨基，烷氧基羰基，取代的烷氧基羰基和-NR5R6；和
R31选自H，R12和L3-Y3，其中L3是连接基，Y3选自芳基，取代的芳基，杂芳基和取代的杂芳基。
2.如权利要求1所述的化合物，其中所述化合物具有式(II)：
Figure FDA0002264526160000021
其中：
X2选自Z12，S，O和NR22；
Z11选自C(＝O)，-C(＝O)X3-和Z12；
每个Z12独立地是CR24R25；
X3是O或S；
n为0，1，2或3；和
每个R24和每个R25独立地选自氢，烷基和取代的烷基。
3.如权利要求2所述的化合物，其中X2是O且Z11是Z12。
4.如权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中所述化合物富含式(IIa)或式(IIb)的立体异构体：
Figure FDA0002264526160000022
5.如权利要求1至4中任一项所述的化合物，其中：
Z2是-NR5R6，其中R5和R6独立地选自氢，烷基和被一个或多个基团取代的烷基，所述基团选自：芳基硫烷基烷基，杂芳基硫烷基烷基，链烯基，烷氧基烷基，烷氧基羰基烷基，烷基，烷基磺酰基烷基，芳基，芳基烷基，芳基磺酰基烷基，芳基氧基烷基，芳基亚磺酰基烷基，芳基磺酰基烷基，杂芳基，杂芳基烷基，杂芳基磺酰基烷基，杂芳基氧基烷基，杂芳基亚磺酰基烷基，杂芳基磺酰基烷基，羧基烷基，环烯基，环烯基烷基，环烷基，(环烷基)烷基，环烷基羰基，(杂环)硫烷基烷基，羟烷基，烷基氨基，二烷基氨基和杂环基(例如，哌啶基，哌嗪基或吗啉基)，其中所述一个或多个基团任选进一步被取代；和
Z3是取代的杂环。
6.如权利要求1至5中任一项所述的化合物，其中所述化合物具有式(IVa)或式(IVb)：
Figure FDA0002264526160000031
其中：
Z4选自CH，CR13和N；
L2，L3，L4和L5各自独立地为连接基；
Y2选自烷基，取代的烷基，羟基，烷氧基，取代的烷氧基，-NR7R8，芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基，碳环，取代的碳环，杂环和取代的杂环；
Y3选自芳基，取代的芳基，杂芳基和取代的杂芳基；
Y4，Y5和Y6独立地选自芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基，碳环，取代的碳环，杂环和取代的杂环；
R7和R8独立地选自氢，烷基和取代的烷基，或R7和R8与它们所连接的氮一起形成5-、6-或7-元杂环或取代的5-、6-或7-元杂环；和
R13是一个或多个任选的取代基，所述取代基选自烷基，取代的烷基，烷氧基，取代的烷氧基，卤素，氰基，硝基，羧基，C(O)NH2，SO2NH2，磺酸酯，羟基，烷基磺酰基，取代的烷基磺酰基，烷基氨基磺酰基，取代的烷基氨基磺酰基，烷基磺酰基氨基，取代的烷基磺酰基氨基，烷氧基羰基，取代的烷氧基羰基，烷基氨基，二烷基氨基，取代的烷基氨基和取代的二烷基氨基。
7.如权利要求6所述的化合物，其中所述化合物选自：
i)式(IVa)化合物，其中Y3是取代或未取代的稠合双环杂芳基(例如吡咯并吡啶)；和
ii)式(IVb)化合物，其中Y3是取代或未取代的苯基。
8.如权利要求6或7所述的化合物，其中：
Y2选自OR，OP(＝O)(OR)2和NR7R8，其中每个R独立地为H，烷基或取代的烷基；
Y4和Y6独立地选自苯基和取代的苯基；
Y5选自杂芳基和取代的杂芳基；
L4和L5是可选的连接基；
R7和R8独立地选自氢，烷基和取代的烷基，或R7和R8与它们所连接的氮一起形成5-或6-元杂环，其中：
i)所述5-或6-元杂环在碳上任选地被一个或多个R40取代；和
ii)如果所述5-或6-元杂环含有第二个氮，则该第二个氮任选被R40*取代形成叔胺；
R40*选自烷基，取代的烷基，-(CH2)m1OR和-(CH2)m2OP(＝O)(OR)2，其中m1和m2独立地是1至6的整数，并且每个R独立地是H，烷基或取代的烷基；和
每个R40独立地选自-OR，-N(R)2，-(CH2)m1OR，-(CH2)m3N(R)2，-(CH2)m2OP(＝O)(OR)2，-OP(＝O)(OH)2和-OP(＝O)(OR)2，其中m1，m2和m3各自独立地为1至6的整数，并且每个R独立地为H，烷基或取代的烷基。
9.如权利要求6至8中任一项所述的化合物，其中所述化合物具有式(V)：
Figure FDA0002264526160000051
其中：
Y2选自OR”，OP(＝O)(OR”)2和NR7R8；
Z5选自NR19，NH，O和S；
Z7选自S和O；
L6和L7独立地为共价键，C1-6烷基连接基或取代的C1-6烷基连接基；
R13和R14和每个R15独立地是一个或多个任选的取代基，所述取代基选自烷基，取代的烷基，烷氧基，取代的烷氧基，卤素，氰基，硝基，羧基，C(O)NH2，SO2NH2，磺酸酯，羟基，烷基磺酰基，取代的烷基磺酰基，烷基氨基磺酰基，取代的烷基氨基磺酰基，烷基磺酰基氨基，取代的烷基磺酰基氨基，烷氧基羰基，取代的烷氧基羰基，烷基氨基，二烷基氨基，取代的烷基氨基和取代的二烷基氨基；
R16选自氢，卤素和R15；
R17和R18独立地选自氢，氰基，硝基，卤素，烷基，取代的烷基，环烷基，取代的环烷基，链烯基，取代的链烯基，环烯基，取代的环烯基，炔基，取代的炔基，芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基，杂环，取代的杂环，OR，SR，NRR'，COR，OCOR，CO2R，CONRR'，CONRSO2R'，-C1-3亚烷基CH(OH)CH2OH，SO2R和SO2NRR'；和
R19选自氢，烷基，取代的烷基，环烷基，取代的环烷基，链烯基，取代的链烯基，环烯基，取代的环烯基，炔基，取代的炔基，芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基，杂环，取代的杂环，OR，SR，NRR'，COR，OCOR，CO2R，CONRR'，CONRSO2R'，NRCOR，NRCONRR'，NRC(＝S)NRR'，NRSO2R和SO2NRR'；
每个R”独立地为H，烷基或取代的烷基；和
R和R'独立地选自氢，烷基，取代的烷基，环烷基，取代的环烷基，链烯基，取代的链烯基，环烯基，取代的环烯基，炔基，取代的炔基，芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基，杂环，取代的杂环，杂环-烷基-和取代的杂环-烷基-。
10.如权利要求6至9中任一项所述的化合物，其中所述化合物具有式(VIa)：
Figure FDA0002264526160000061
其中：
Z6选自O，NR40*，CHR40，C(R40)2和CH2；
R40*选自烷基，取代的烷基，-(CH2)m1OR和-(CH2)m2OP(＝O)(OR)2，其中m1和m2独立地是1至6的整数，并且每个R独立地是H，烷基或取代的烷基；
每个R40独立地选自-OR，-N(R)2，-C(O)OR，-(CH2)m1OR，-(CH2)m3N(R)2，-(CH2)m2OP(＝O)(OR)2，-OP(＝O)(OH)2和-OP(＝O)(OR)2，其中m1，m2和m3各自独立地为1至6的整数，并且每个R独立地为H，烷基或取代的烷基；和
q1和q2独立地为1至6的整数。
11.如权利要求6至9中任一项所述的化合物，其中所述化合物具有式(VIb)：
其中Y2选自OH，OR，NH2，NHR，NR2，-OP(＝O)(OR)2和-OP(＝O)(OH)2，其中每个R独立地是C1-6烷基或取代的C1-6烷基；和
q1和q2独立地为1至6的整数。
12.如权利要求10所述的化合物，其中所述化合物具有式(VIIa)：
Figure FDA0002264526160000081
其中：
X2选自Z12，S，O和NR22；
Z11选自C(＝O)，-C(＝O)X3-和Z12；
每个Z12独立地是CR24R25；
X3是O或S；
n为0，1，2或3；
每个R24和每个R25独立地选自氢，烷基和取代的烷基；
R4选自NO2，SO2CH3，SO2CF3和COR51；
Z4选自CH和N；
Z6选自O，CHC(O)R18和CH(CH2)pR18，其中p为0-6，并且每个R18独立地为-OR，-N(R)2，-OP(＝O)(OH)2，和-OP(＝O)(OR)2，其中每个R独立地为H，烷基或取代的烷基(例如，C1-4烷基，如乙基或叔丁基)；
R14和R16独立地为氢或卤素；和
R17选自SO2R52，COR52，CO2R52，CONR51R52，CONR52SO2R51和SO2NR51R52；
R18和R19独立地选自氢，烷基和取代的烷基；
R51选自C1-6烷基和取代的C1-6烷基；和
R52选自氢，C1-6烷基和取代的C1-6烷基。
13.如权利要求12所述的化合物，其中所述化合物具有式(VIIa)且选自下表的化合物1-18中之一：
Figure FDA0002264526160000091
14.如权利要求11所述的化合物，其中所述化合物具有式(VIIb)：
Figure FDA0002264526160000092
其中：
X2选自Z12，S，O和NR22；
Z11选自-C(＝O)-，-C(＝O)X3-和Z12；
每个Z12独立地是CR24R25；
X3是O或S；
n为0，1，2或3；
每个R24和每个R25独立地选自氢，烷基和取代的烷基；
Y2选自-OR52，-N(R52)2和-OP(＝O)(OR52)2；
R4选自NO2，SO2CH3，SO2CF3和COR51；
Z4选自CH和N；
R14和R16独立地为氢或卤素；和
R17选自SO2R52，COR52，CO2R52，CONR51R52，CONR52SO2R51和SO2NR51R52；
R18和R19独立地选自氢，烷基和取代的烷基；
R51选自C1-6烷基和取代的C1-6烷基；和
R52选自氢，C1-6烷基和取代的C1-6烷基。
15.如权利要求14所述的化合物，其中所述化合物具有式(VIIb)并且选自下表的化合物19-36中之一：
Figure FDA0002264526160000101
Figure FDA0002264526160000111
16.如权利要求1-15中任一项所述的化合物，其中X1为O。
17.如权利要求1-15中任一项所述的化合物，其中X1为S。
18.如权利要求1-17中任一项所述的化合物，其中R3和R21与它们连接的原子一起形成5-、6-或7-元氧氮磷杂环。
19.如权利要求6-18中任一项所述的化合物，其中所述化合物具有式(II)，其中X2为O。
20.如权利要求6-17中任一项所述的化合物，其中所述化合物具有式(II)，其中X2为S。
21.如权利要求6-17中任一项所述的化合物，其中所述化合物具有式(II)，其中X2为NH或NR22，其中R22选自烷基和取代的烷基。
22.如权利要求6-21中任一项所述的化合物，其中所述化合物具有式(II)，其中Z11为Z12。
23.如权利要求6-21中任一项所述的化合物，其中所述化合物具有式(II)，其中n为1。
24.如权利要求6-21中任一项所述的化合物，其中所述化合物具有式(II)，其中n为2。
25.如权利要求12所述的化合物，其中所述化合物具有式(VIIIa)：
Figure FDA0002264526160000121
其中：
R4选自NO2，SO2CH3，SO2CF3和COR51；
n是1或2；
Z6选自O，CHC(O)R18和CH(CH2)pR18，其中p为0-6，并且每个R18独立地为-OR，-N(R)2，-OP(＝O)(OH)2，和-OP(＝O)(OR)2，其中每个R独立地为H，烷基或取代的烷基(例如，C1-4烷基，如乙基或叔丁基)；
R14和R16独立地为氢或卤素；和
R17选自SO2R52，COR52，CO2R52，CONR51R52，CONR52SO2R51和SO2NR51R52；
R51选自C1-6烷基和取代的C1-6烷基；和
R52选自氢，C1-6烷基和取代的C1-6烷基。
26.如权利要求14所述的化合物，其中所述化合物具有式(VIIIb)：
Figure FDA0002264526160000131
其中：
Y2选自-OR52，-N(R52)2和-OP(＝O)(OR52)2；
R4选自NO2，SO2CH3，SO2CF3和COR51；
n是1或2；
R14和R16独立地为氢或卤素；和
R17选自SO2R52，COR52，CO2R52，CONR51R52，CONR52SO2R51和SO2NR51R52；
R51选自C1-6烷基和取代的C1-6烷基；和
R52选自氢，C1-6烷基和取代的C1-6烷基。
27.如前述权利要求中任一项所述的化合物，选自以下：
Figure FDA0002264526160000132
5-(4-氯苯基)-1-异丙基-2-甲基-4-(3-(4-(4-((R)-2-氧代-2-(4-(((R)-1-(苯基硫基)-4-(4-(磷酰氧基)哌啶-1-基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯-3-羧酸，
Figure FDA0002264526160000141
5-(4-氯苯基)-1-异丙基-2-甲基-4-(3-(4-(4-((S)-2-氧代-2-(4-(((R)-1-(苯基硫基)-4-(4-(磷酰氧基)哌啶-1-基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯-3-羧酸，
Figure FDA0002264526160000142
(S)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)-5-氟苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-(4-(((R)-4-(二甲基氨基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-硝基苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷2-氧化物，
Figure FDA0002264526160000143
5-(4-氯苯基)-1-异丙基-2-甲基-4-(3-(4-(4-((R)-2-氧代-2-(4-(((R)-1-(苯基硫基)-4-(4-((磷酰氧基)甲基)哌啶-1-基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯-3-羧酸，
Figure FDA0002264526160000151
5-(4-氯苯基)-1-异丙基-2-甲基-4-(3-(4-(4-((S)-2-氧代-2-(4-(((R)-1-(苯基硫基)-4-(4-((磷酰氧基)甲基)哌啶-1-基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯-3-羧酸，
Figure FDA0002264526160000152
5-(4-氯苯基)-4-(3-(4-(4-((R)-2-(4-(((R)-4-(4-羟基哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1-异丙基-2-甲基-1H-吡咯-3-羧酸，
Figure FDA0002264526160000153
5-(4-氯苯基)-4-(3-(4-(4-((S)-2-(4-(((R)-4-(4-羟基哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1-异丙基-2-甲基-1H-吡咯-3-羧酸，
5-(4-氯苯基)-4-(3-(4-(4-((R)-2-(4-(((R)-4-(4-(羟基甲基)哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1-异丙基-2-甲基-1H-吡咯-3-羧酸，
5-(4-氯苯基)-4-(3-(4-(4-((S)-2-(4-(((R)-4-(4-(羟基甲基)哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-1-异丙基-2-甲基-1H-吡咯-3-羧酸，
1-((R)-3-((4-((S)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-氧代-1,3,2-氧氮磷杂环戊烷-2-基)-2-((三氟甲基)磺酰基)苯基)氨基)-4-(苯基硫基)丁基)哌啶-4-羧酸，和
Figure FDA0002264526160000171
(R)-3-(4-(4-(3-(2-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-甲基-4-(甲基磺酰基)-1H-吡咯-3-基)-5-氟苯基)哌嗪-1-基)苯基)-2-(4-(((R)-4-(4-羟基哌啶-1-基)-1-(苯基硫基)丁-2-基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯基)-1,3,2-氧氮磷杂环己烷2-氧化物。
28.如前述权利要求中任一项所述的化合物的磷酸化形式。
29.如权利要求1至28中任一项所述的化合物，与非衰老细胞相比，其特异性杀死衰老细胞，所述衰老细胞被定义为表达p16的非癌细胞。
30.如权利要求1至28中任一项所述的化合物，与相同组织类型的非癌细胞相比，其特异性杀死癌细胞。
31.如权利要求1至28中任一项所述的化合物，其对经照射的IMR90细胞的EC50小于0.1μM。
32.如权利要求1至28中任一项所述的化合物，其对于经照射的IMR90细胞的EC50比汇合的IMR90细胞或增殖的IRM90细胞低至少3倍。
33.如权利要求1至28中任一项所述的化合物，其对FL5.12细胞的EC50小于0.1μM。
34.一种药物组合物，其包含在药学上相容的赋形剂中的如权利要求1至33中任一项所述的化合物。
35.一种从混合细胞群或组织中选择性地去除衰老细胞和/或癌细胞的方法，其包括使细胞、细胞群或组织与如权利要求1-34中任一项所述的化合物或组合物接触。
36.一种治疗受试者组织中衰老相关病症的方法(其中衰老相关病症表征为至少部分地由衰老细胞引起或介导，或者表征为在所述组织中或其周围比未受影响的组织具有过多的衰老细胞)，该方法包括：
向有需要的受试者的组织施用一定量的如权利要求1-34中任一项所述的化合物或组合物，以有效地从所述组织中选择性地去除衰老细胞，从而至少改善所述受试者中衰老相关病症的体征或症状。
37.一种药物组合物的单位剂量，其包含：
一定量的抑制Bcl功能的化合物，其被配置用于治疗由衰老细胞至少部分地引起或介导的衰老相关病症，
其中所述化合物是如权利要求1-33中任一项所述的化合物，
其中所述组合物含有所述化合物的制剂，所述制剂被配置用于施用于表现出衰老相关病症的受试者的靶组织，
其中在所述单位剂量中的所述制剂和所述化合物的量配置所述单位剂量以有效地选择性去除所述受试者组织中或其周围的衰老细胞，从而降低所述病症的一种或多种体征或症状的严重程度，而不引起当作为单位剂量施用于所述组织时对所述受试者的不良反应。
38.如权利要求1至33中任一项所述的化合物或如权利要求34所述的药物组合物，其用于从组织或混合细胞群中选择性地消除衰老细胞或用于治疗衰老相关病症。
39.如权利要求1至33中任一项所述的化合物在制备用于治疗衰老相关病症的药物中的用途。
40.如权利要求36至39中任一项所述的方法、产品或用途，其中所述病症是骨关节炎。
41.如权利要求36至39中任一项所述的方法、产品或用途，其中所述病症是眼科病症。
42.如权利要求36至39中任一项所述的方法、产品或用途，其中所述病症是肺疾病。
43.如权利要求36至39中任一项所述的方法、产品或用途，其中所述病症是动脉粥样硬化。
44.一种治疗癌症的方法，其包括向有此需要的受试者的组织施用有效地选择性从所述组织中除去癌细胞的量的如权利要求1-34中任一项所述的化合物或组合物。
45.如权利要求1至33中任一项所述的化合物或如权利要求34所述的药物组合物，其用于从组织或混合细胞群中选择性地消除癌细胞或用于治疗癌症。
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