CN110655919B - 一种铜离子荧光探针及其制备方法与应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种铜离子荧光探针，其分子式为C₇₃H₅₃N₅O₄，同时还提供了其制备方法，将N,N'‑(2‑胺基苯基)‑2,6‑二甲酰亚胺吡啶溶解于甲醇，滴加2‑羟基‑5‑(1,2,2‑三苯基乙烯基)‑苯甲醛的甲醇溶液，加浓硫酸，搅拌、洗涤、干燥后得到铜离子荧光探针，还提供了应用，用于识别铜离子。本发明的铜离子荧光探针合成方法简单，易于操作，反应步骤少，产率高的优点，铜离子荧光探针对铜离子的选择性强，具有专一性，而且不易受其他金属阳离子的干扰，并具有实时性，灵敏度高，能够瞬间检测到待检水溶液中铜离子，对检测生态环境中铜离子含量具有很大的实际意义，能够满足较低的铜离子浓度下检测和定量的要求。

Description

一种铜离子荧光探针及其制备方法与应用

技术领域

本发明属于荧光探针检测技术领域，具体涉及一种铜离子荧光探针及其制备方法与应用。

背景技术

近年来，金属离子的识别逐渐成为超分子化学的一个重要分支，如何在食品中分离检测及识别金属离子备受关注，在生命科学、食品科学以及环境科学研究中均占有重要地位。检测食品中金属离子一方面可评价食物的营养价值、有利于食品加工工艺的改进和食品质量的提高、对开发和生产强化食品具有指导意义。另一方面可了解食品污染情况，以便查清和控制污染源，为食品安全生产提供理论依据。金属离子中的钙、镁、锌、铜等离子是生命必需的元素，维持着蛋白质、核酸和酶等生物大分子的基本结构，协同完成催化或者调节功能，影响着生物体的正常新陈代谢,而有些金属离子如镉、汞和铅等是潜在的毒素，残留在环境及食物链中并通过呼吸、饮入等方式进入人体内，对人类安全构成严重威胁。

铜是继铁离子和锌离子后在人体内含量第三丰富的过渡金属离子，普遍存在于自然界中，也是人体必需的微量元素，会对中枢神经系统、心血管系统和造血功能等产生重要影响，且在酶的生理活动中也是必不可少的微量元素。人体内如果缺乏铜元素会导致代谢紊乱，摄入过量的铜会产生毒害作用，进而危害人体健康甚至导致死亡，例如:铜离子的异常代谢和过度累积与阿尔茨海默症、帕金森病和肌萎缩性侧索硬化症都有密切关系。此外，随着社会的发展，铜矿被过量的开采和冶炼，导致水环境、土壤和大气受到铜污染，并通过生物链的富集对人体健康造成严重的危害,如在工业生产中，铜及其化合物被广泛应用，有毒有害的工业废水流入水体后，铜的富集会造成严重的水环境污染，危害人体健康。因实现对生命体和环境中的铜离子的快速检测显得尤为重要.

目前，传统的铁离子检测方法主要有原子吸收光谱法，离子色谱法，气相色谱-质谱法(GC-MS)和电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)等。但这些方法大都较为复杂，费时且分析成本较高。近年来，荧光探针技术填补了这些不足，该方法简单快速、易于操作，且具备选择性好、灵敏度高等优点，受到了广泛的关注,已应用于生命科学、食品科学及环境探测等领域。尽管已经有识别铜离子的荧光探针的报道，但用于实际样品中的金属铜离子检测方面的研究报道较少，且很多探针的使用仍有一定的局限性，如探针合成复杂且需要在纯有机溶剂中使用、灵敏度较差等。设计合成简单且易于制备，并可在含水介质中使用的铜离子荧光探针一直是研究热点之一。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供了一种铜离子荧光探针及其制备方法与应用，该铜离子荧光探针未曾公开过，并且合成方法简单，易于操作，反应步骤少，产率高，该铜离子荧光探针对铜离子的选择性强，具有专一性，而且不易受其他金属阳离子的干扰，并具有实时性，灵敏度高，能够瞬间检测到待检水溶液中铜离子，对检测生态环境中铜离子含量具有很大的实际意义，铜离子的最低检测限为7.8×10^-7mol/L，并且定量分析的线性浓度最低值为2.0×10^-5mol/L，能够满足较低的铜离子浓度下检测和定量的要求。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种铜离子荧光探针，所述铜离子荧光探针的的分子式为：C₇₃H₅₃N₅O₄；所述铜离子荧光探针的结构式为：

本发明还提供了制备上述的铜离子荧光探针的方法，该方法包括以下步骤：

步骤一、将N,N'-(2-胺基苯基)-2,6-二甲酰亚胺吡啶溶解于甲醇后，滴加2-羟基-5-(1,2,2-三苯基乙烯基)-苯甲醛的甲醇溶液，然后加入质量浓度为98.3％的浓硫酸，得到黄色沉淀物；

步骤二、将步骤一中得到的黄色沉淀物在室温的条件下搅拌4h后，用甲醇洗涤3次，再在温度为100℃的真空条件下干燥，得到铜离子荧光探针。

优选地，步骤一中所述2-羟基-5-(1,2,2-三苯基乙烯基)-苯甲醛的甲醇溶液中2-羟基-5-(1,2,2-三苯基乙烯基)-苯甲醛和甲醇的用量比为188mg：25mL。

优选地，步骤一中所述2-羟基-5-1,2,2-三苯基乙烯基)-苯甲醛的甲醇溶液的滴加速率为35～45滴/min。

优选地，步骤一中N,N'-(2-胺基苯基)-2,6-二甲酰亚胺吡啶、甲醇、2-羟基-5-(1,2,2-三苯基乙烯基)-苯甲醛的甲醇溶液和浓硫酸的用量比为78.1mg：25mL：25mL：15μL。

优选地，步骤一中搅拌的速率为1000r/min。

本发明还提供了上述的铜离子荧光探针的应用，所述铜离子荧光探针用于识别铜离子，识别铜离子的方法为：

将铜离子荧光探针溶解于空白储备液中，得到铜离子荧光探针储备液，向铜离子荧光探针储备液中滴加待检水溶液，得到混合液，进行荧光激发，铜离子荧光探针具有实时性，铜离子荧光探针能瞬间识别待检水溶液中的铜离子；所述空白储备液由四氢呋喃和2×10^-3mol/L的pH值为7.0的Tris-HCl缓冲液按体积比为4:1制成。

优选地，所述混合液中铜离子荧光探针浓度为1×10^-4mol/L。

优选地，荧光激发的波长为415nm，铜离子荧光探针识别到铜离子时的波长为598nm。

优选地，所述铜离子荧光探针识别铜离子的最低检测限为7.8×10^-7mol/L，铜离子的定量分析的线性浓度最低值为2.0×10^-5mol/L。

本发明与现有技术相比具有以下优点：

本发明的铜离子荧光探针合成方法简单，易于操作，反应步骤少，产率高的优点，铜离子荧光探针对铜离子的选择性强，具有专一性，而且不易受其他金属阳离子的干扰，并具有实时性，灵敏度高，能够瞬间检测到待检水溶液中铜离子，对检测生态环境中铜离子含量具有很大的实际意义，铜离子的最低检测限为7.8×10^-7mol/L，并且定量分析的线性浓度最低值为2.0×10^-5mol/L，能够满足较低的铜离子浓度下检测和定量的要求。

下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细说明。

附图说明

图1是本发明的铜离子荧光探针的核磁共振氢谱图。

图2是本发明的铜离子荧光探针在不同含水量的四氢呋喃中的荧光强度变化曲线(波长598nm)。

图3是本发明的铜离子荧光探针在不同pH值的空白储备液中的荧光强度图(波长598nm)。

图4是本发明的铜离子荧光探针检测不同金属阳离子的荧光强度图。

图5是本发明铜离子荧光探针在识别铜离子时的抗干扰性图。

图6为本发明不同pH条件对铜离子荧光探针检测Cu²⁺的影响图。

图7为本发明的铜离子荧光探针固体荧光光谱图。

图8为本发明的铜离子荧光探针四氢呋喃溶液的荧光光谱图。

图9为本发明的铜离子荧光探针与Cu²⁺相互作用的时间图。

具体实施方式

实施例1

本实施例的铜离子荧光探针的分子式为：C₇₃H₅₃N₅O₄；所述铜离子荧光探针的结构式为：

本实施例还提供了制备上述的铜离子荧光探针的方法，该方法包括以下步骤：

步骤一、将78.1mg的N,N'-(2-胺基苯基)-2,6-二甲酰亚胺吡啶溶解于25mL的甲醇后，以35～45滴/min的滴加速率滴加25mL的2-羟基-5-(1,2,2-三苯基乙烯基)-苯甲醛的甲醇溶液，然后加入15μL的质量浓度为98.3％的浓硫酸，得到黄色沉淀物；所述2-羟基-5-(1,2,2-三苯基乙烯基)-苯甲醛的甲醇溶液中2-羟基-5-(1,2,2-三苯基乙烯基)-苯甲醛和甲醇的用量比为188mg：25mL；

步骤二、将步骤一中得到的黄色沉淀物在室温的条件下以1000r/min的速率搅拌4h后，用甲醇洗涤3次，再在温度为100℃的真空条件下干燥，得到铜离子荧光探针。

本实施例制备的铜离子荧光探针的产率为60％。

对制备的铜离子荧光探针进行结构检测，采用核磁共振仪对其进行表征，其核磁共振氢谱图如图1所示，经核磁共振氢谱图分析可知，铜离子荧光探针为C₇₃H₅₃N₅O₄，结构确如上所述。

实施例2

本实施例提供了实施例1制备的铜离子荧光探针的应用，所述铜离子荧光探针用于识别铜离子，识别铜离子的方法为：

将实施例1制备的铜离子荧光探针溶解于空白储备液中，得到铜离子荧光探针浓度为1×10^-3mol/L的铜离子荧光探针储备液，向铜离子荧光探针储备液中滴加待检水溶液，得到铜离子荧光探针浓度为1×10^-4mol/L的混合液，在波长为415nm的条件下进行荧光激发，识别待检水溶液中的铜离子；

所述空白储备液由四氢呋喃和2×10^-3mol/L的pH值为7.0的Tris-HCl缓冲液(摩尔浓度比为1:1的三羟甲基氨基甲烷和盐酸混合物)按体积比为4:1制成；

所述Tris-HCl缓冲液的配制方法为：称取三羟甲基氨基甲烷121.2mg溶于超纯水中，用0.1mol/L的HCl溶液和0.1mol/L的NaOH溶液调节其pH为7.0，得到浓度为2×10^-3mol/L的pH为7.0的Tris-HCl缓冲液。

(1)空白储备液中四氢呋喃和2×10^-3mol/L的pH值为7.0的Tris-HCl缓冲液的体积比优化：

先将铜离子荧光探针分别溶解于10个不同配比的四氢呋喃和2×10^-3mol/L的pH值为7.0的Tris-HCl缓冲液的混合液定容，得到10个铜离子荧光探针浓度为1×10^-4mol/L的终溶液，依次命名为终溶液a～终溶液g；所述终溶液a～终溶液j中四氢呋喃和Tris-HCl缓冲液(Tris-HCl缓冲液视为水溶液)的体积比依次为：10/0、9/1、4/1、7/3、3/2、5/5、2/3、3/7、1/4和1/9，即终溶液a～终溶液j的含水量依次为：0％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％和90％，摇匀后在室温下进行荧光测试，测试结果如图2所示，图2是本实施例的铜离子荧光探针在不同含水量的四氢呋喃中的荧光强度变化曲线(波长598nm)，由图可知，在四氢呋喃中加入水溶液(2×10^-3mol/L的pH值为7.0的Tris-HCl缓冲液)后，铜离子荧光探针的荧光受水的影响很大，并随着水量的增加荧光强度不断增加，含水量在10％～50％之间时，含有铜离子荧光探针的四氢呋喃水溶液(即终溶液b～终溶液f)的荧光强度基本保持稳定；含水量达到60％时，含有铜离子荧光探针的四氢呋喃水溶液(即终溶液g)变浑浊，且有少量悬浮物生成，其荧光强度开始下降但幅度不明显；含水量在70％～90％之间时，含有铜离子荧光探针的四氢呋喃水溶液(即终溶液h～终溶液f)越来越浑浊且悬浮物越来越多，荧光强度随含水量的增加而升高，说明该探针是一种具有聚集诱导发光性质的席夫碱铜离子荧光探针，考虑到水对铜离子荧光探针的影响，最后选择体积比为4:1的四氢呋喃和水溶液(2×10^-3mol/L的pH值为7.0的Tris-HCl缓冲液)作为空白储备液。

(2)铜离子荧光探针的在不同pH值的终溶液的稳定性：

图3是本实施例的的铜离子荧光探针在不同pH值的终溶液中的荧光强度图(波长598nm)，由图可知，在体积比为4:1的四氢呋喃和水溶液(2×10^-3mol/L的pH值为7.0的Tris-HCl缓冲液)中，调节终溶液的pH变化范围从2到11，铜离子荧光探针的荧光强度基本保持不变，表明该铜离子荧光探针在较宽的酸碱度范围内能保持稳定的结构，有着很好的稳定性，为探针在不同酸碱度的实际样品中的检测提供了前提。

(3)铜离子荧光探针对铜离子的选择性：

用移液枪准确移取4mL空白储备液于10mL容量瓶中，再加入500μL的铜离子荧光探针浓度为1×10^-3mol/L的铜离子荧光探针储备液和500μL的单金属阳离子浓度为1×10^{- 2}mol/L的单金属阳离子储备液，得到17个混合液；所述单金属阳离子储备液中分别含有的金属阳离子为：Cu²⁺、Ca²⁺、Fe³⁺、Mg²⁺、Ag⁺、Ba²⁺、Cr³⁺、Zn²⁺、Na⁺、Co²⁺、Hg⁺、Ni²⁺、Pb²⁺、Cd²⁺、Al³⁺、K⁺和Li⁺；所述单金属阳离子储备液为金属阳离子硝酸盐溶液；

震荡各混合液混合均匀后静置20min，在室温进行荧光光谱测定，激发波长415nm；

对照溶液：将实施例1制备的铜离子荧光探针溶解于空白储备液中，配制成铜离子荧光探针浓度为1×10^-4mol/L的荧光试剂，作为对照溶液。

将对照溶液和17个混合液均在波长为415nm的条件下进行荧光激发，如图4所示，图中曲线a为铜离子荧光探针检测铜离子，曲线b为铜离子荧光探针检测Fe³⁺，其他曲线分别代表：为铜离子荧光探针(对照)、铜离子荧光探针检测Ca²⁺、铜离子荧光探针检测Mg²⁺、铜离子荧光探针检测Ag⁺、铜离子荧光探针检测Ba²⁺、铜离子荧光探针检测Cr³⁺、铜离子荧光探针检测Zn²⁺、铜离子荧光探针检测Na⁺、铜离子荧光探针检测Co²⁺、铜离子荧光探针检测Hg⁺、铜离子荧光探针检测Ni²⁺、铜离子荧光探针检测Pb²⁺、铜离子荧光探针检测Cd²⁺、铜离子荧光探针检测Al³⁺、铜离子荧光探针检测K⁺和铜离子荧光探针检测Li⁺；铜离子荧光探针在598nm处发射荧光，由图可知，Cu²⁺导致了铜离子荧光探针在598nm处的荧光强度显著降低，而其它金属阳离子均对探针的荧光光谱影响很小，说明探针对铜离子具有很好的选择性，能用于识别铜离子。

实施例3

本实施例为实施例1制备的铜离子荧光探针的用于识别铜离子时的抗干扰性试验：

用移液枪准确移取4mL空白储备液于10mL容量瓶中，再向其中加入500μL的铜离子荧光探针浓度为1×10^-3mol/L的探针储备液和500μL的单金属阳离子浓度为1×10^-2mol/L的单金属阳离子储备液，得到混合液；所述混合液中铜离子荧光探针浓度为1×10^-4mol/L、单金属阳离子浓度为1×10^-3mol/L；所述单金属阳离子依次为Cu²⁺、Ca²⁺、Fe³⁺、Mg²⁺、Ag⁺、Ba^{2 +}、Cr³⁺、Zn²⁺、Na⁺、Co²⁺、Hg⁺、Ni²⁺、Pb²⁺、Cd²⁺、Al³⁺、K⁺和Li⁺；所得的混合液依次命名为混合液A～混合液Q(对应图5中的A～Q)；所述空白储备液同实施例2；所述单金属阳离子储备液为金属阳离子硝酸盐溶液；

用移液枪准确移取3.5mL空白储备液于10mL容量瓶中，再向其中加入500μL的铜离子荧光探针浓度为1×10^-3mol/L的探针储备液、500μL的Cu²⁺浓度为1×10^-2mol/L的Cu²⁺储备液、500μL的其他单金属阳离子浓度为1×10^-2mol/L的单金属阳离子储备液，得到混合液；所述混合液中铜离子荧光探针浓度为1×10^-4mol/L、Cu²⁺和单金属阳离子浓度均为1×10^{- 3}mol/L；所述其他单金属阳离子依次为Ca²⁺、Fe³⁺、Mg²⁺、Ag⁺、Ba²⁺、Cr³⁺、Zn²⁺、Na⁺、Co²⁺、Hg⁺、Ni^{2 +}、Pb²⁺、Cd²⁺、Al³⁺、K⁺和Li⁺；所得的混合液依次命名为混合液b～混合液q(对应图5中的b～q)；所述空白储备液同实施例2；所述单金属阳离子储备液为金属阳离子硝酸盐溶液；

将混合液A～混合液Q、混合液b～混合液q震荡待其充分混合均匀后静置20min，以415为激发波长，在室温进行荧光光谱测定；

测试结果如图5所示，只有铜离子使铜离子荧光探针在598nm处荧光下降，铜离子荧光探针只检测铜离子，不受其他阳离子(Ca²⁺、Fe³⁺、Mg²⁺、Ag⁺、Ba²⁺、Cr³⁺、Zn²⁺、Na⁺、Co²⁺、Hg⁺、Ni²⁺、Pb²⁺、Cd²⁺、Al³⁺、K⁺和Li⁺)的影响，具有抗干扰性。

实施例4

本实施例为实施例1制备的铜离子荧光探针的用于识别铜离子时的铜离子浓度对荧光强度的影响：

将实施例1制备的铜离子荧光探针溶解于空白储备液中，配制成铜离子荧光探针浓度为1×10^-3mol/L的铜离子荧光探针储备液，分别向铜离子荧光探针储备液中加入浓度为2×10^-4mol/L～1.4×10^-2mol/L的共23个铜离子储备液，得到23个混合溶液；所述空白储备液同实施例2中的空白储备液；所述23个混合溶液中的铜离子荧光探针浓度均为1×10^{- 4}mol/L，铜离子浓度为2×10^-5mol/L～1.4×10^-3mol/L，将各混合溶液在波长为415nm的条件下进行荧光激发，随着铜离子浓度的增加，铜离子荧光探针在598nm处的荧光强度逐渐降低，铜离子荧光探针识别铜离子的最低检测限为7.8×10^-7mol/L。

将上述23个混合溶液分别测定铜离子荧光探针在598nm处的荧光强度，以混合溶液中的铜离子浓度为横坐标，铜离子荧光探针在598nm处的荧光强度为纵坐标，建立线性回归方程，得出混合溶液中的铜离子浓度在2.0×10^-5mol/L～1.2×10^-4mol/L范围内，荧光强度与铜离子浓度呈线性相关，线性关系方程为y＝416.87166-2.05941×10⁶x，相关系数R²＝0.99122，故铜离子的定量分析的线性浓度最低值为2.0×10^-5mol/L。

实施例5

本实施例为不同pH条件对铜离子荧光探针检测Cu²⁺的影响：

将实施例1制备得到的铜离子荧光探针溶解于空白储备液中，得到铜离子荧光探针浓度为1×10^-3mol/L的铜离子荧光探针储备液，加入浓度为1×10^-2mol/L铜离子硝酸盐溶液，并调节pH变化范围为2～11(即pH＝2、3、4、5、6、7、8、9、10)，得到10个不同pH值的混合液；所述混合液中铜离子荧光探针浓度为1×10^-4mol/L，铜离子浓度为1×10^-3mol/L；所述空白储备液同实施例2中的空白储备液；

铜离子荧光探针空白对照：将铜离子荧光探针溶解于空白储备液中，得到铜离子荧光探针浓度为1×10^-3mol/L的铜离子荧光探针储备液，调节pH变化范围为2～11(即pH＝2、3、4、5、6、7、8、9、10)，得到不同pH值的对照液；所述对照液中铜离子荧光探针浓度为1×10^-4mol/L，以415nm为激发波长，在室温进行荧光光谱测定10个不同pH值的混合液在598nm处的荧光强度，如图6所示，图中α散点线为10个不同pH值的混合液的荧光强度，β散点线为为10个pH值的对照液，说明pH值为2.00～11.00之间，铜离子荧光探针仍能有效地检测Cu²⁺且对其影响不大，说明铜离子荧光探针在较宽的酸碱环境中均可有效检测Cu²⁺。

实施例6

本实施例为铜离子荧光探针的荧光量子产率测试：

用固体测试实施例1制备的铜离子荧光探针固体的的荧光光谱和量子产率，然后用四氢呋喃溶解后，测试铜离子荧光探针四氢呋喃溶液的荧光光谱和量子产率，激发波长为415nm，图7为铜离子荧光探针固体荧光光谱图，图8为铜离子荧光探针四氢呋喃溶液的荧光光谱图。铜离子荧光探针固体的量子产率为18.08％，而铜离子荧光探针四氢呋喃溶液的量子产率为9.45％，说明铜离子荧光探针具有聚集诱导发光性质。

实施例7

本实施例为实施例1制备的铜离子荧光探针与Cu²⁺相互作用的时间测试：

将实施例1制备得到的铜离子荧光探针溶解于空白储备液中，得到铜离子荧光探针浓度为1×10^-3mol/L的铜离子荧光探针储备液，用移液枪分别取500μL的铜离子荧光探针储备液和浓度为1×10^-2mol/L的铜离子储备液，分别用空白储备液定容至5mL，分别得到混合溶液c和混合液d；所述空白储备液同实施例2中的空白储备液；

立即开始检测混合溶液c和混合液d在波长为598nm处荧光强度的变化，然后每隔5min测一次荧光，直至荧光强度无明显变化，图9为铜离子荧光探针与Cu²⁺相互作用的时间图，图中c散点图为混合液c(即体系中有探针无铜离子)作为对照，图中d散点图为混合液d(即体系中有探针和铜离子)，铜离子荧光探针对铜离子的响应很快，几乎是瞬间的，具有较好的灵敏度和实时性，故对检测生态环境中铜离子含量具有很大的实际意义。

实施例8

本实施例为实施例1制备的铜离子荧光探针的应用，用于水样中Cu²⁺的检测：

采集自来水(实验室)、湖水(贵州医科大学人工湖)，过滤后，将铜离子荧光探针溶解于空白储备液(同实施例2中的空白储备液)中，得到铜离子荧光探针储备液，向铜离子荧光探针储备液中分别滴加过滤后的自来水和过滤后的湖水，得到混合液1和混合液2，混合液1和混合液2中的铜离子荧光探针浓度为1×10^-4mol/L，将混合液1和混合液2混匀放置20min后，以415nm为激发波长，进行荧光测试，测试在598nm的荧光强度，计算混合液1和混合液2中的Cu²⁺浓度，同时做加标回收率实验，重复测定3次，结果见表1，由表1可知，该探针可用于水样中Cu²⁺检测，回收率和RSD均达到要求，有望用于生命体系中Cu²⁺的选择性准确检测。

表1水样中Cu²⁺的检测

以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何限制。凡是根据发明技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效变化，均仍属于本发明技术方案的保护范围内。

Claims (7)

1.一种铜离子荧光探针，其特征在于，所述铜离子荧光探针的分子式为：C₇₃H₅₃N₅O₄；所述铜离子荧光探针的结构式为：

2.一种制备如权利要求1所述的铜离子荧光探针的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

步骤一、将N,N'-(2-胺基苯基)-2,6-二甲酰亚胺吡啶溶解于甲醇后，滴加2-羟基-5-(1,2,2-三苯基乙烯基)-苯甲醛的甲醇溶液，然后加入质量浓度为98.3％的浓硫酸，得到黄色沉淀物；

步骤二、将步骤一中得到的黄色沉淀物在室温的条件下搅拌4h后，用甲醇洗涤3次，再在温度为100℃的真空条件下干燥，得到铜离子荧光探针。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤一中所述2-羟基-5-(1,2,2-三苯基乙烯基)-苯甲醛的甲醇溶液中2-羟基-5-(1,2,2-三苯基乙烯基)-苯甲醛和甲醇的用量比为188mg：25mL。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤一中所述2-羟基-5-(1,2,2-三苯基乙烯基)-苯甲醛的甲醇溶液的滴加速率为35～45滴/min。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤一中N,N'-(2-胺基苯基)-2,6-二甲酰亚胺吡啶、甲醇、2-羟基-5-(1,2,2-三苯基乙烯基)-苯甲醛的甲醇溶液和浓硫酸的用量比为78.1mg：25mL：25mL：15μL。

6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤一中搅拌的速率为1000r/min。

7.一种如权利要求1所述的铜离子荧光探针的应用，其特征在于，所述铜离子荧光探针用于识别铜离子，识别铜离子的方法为：

将铜离子荧光探针溶解于空白储备液中，得到铜离子荧光探针储备液，向铜离子荧光探针储备液中滴加待检水溶液，得到混合液，进行荧光激发，铜离子荧光探针具有实时性，铜离子荧光探针能瞬间识别待检水溶液中的铜离子；所述空白储备液由四氢呋喃和2×10^{- 3}mol/L的pH值为7.0的Tris-HCl缓冲液按体积比为4:1制成；所述混合液中铜离子荧光探针浓度为1×10^-4mol/L；荧光激发的波长为415nm，铜离子荧光探针识别到铜离子时的波长为598nm；所述铜离子荧光探针识别铜离子的最低检测限为7.8×10^-7mol/L，铜离子的定量分析的线性浓度最低值为2.0×10^-5mol/L。

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