CN110646615A - 肝纤维化的生物学标志物、治疗靶点及其用途 - Google Patents

Abstract

肝纤维化的生物学标志物、治疗靶点及其用途。本发明中公开了LECT2作为肝纤维化肝硬化血清标志物的用途，抑制LECT2表达的试剂在制备药物中的应用，以及筛选药物的方法，为预防和治疗肝纤维化，提供了新的思路。

Description

肝纤维化的生物学标志物、治疗靶点及其用途

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体涉及一种肝纤维化的生物学标志物、治疗靶点及其用途。

背景技术

肝纤维化是慢性肝病患者中常见的肝损伤症状，表现为肝组织中细胞外基质如胶原蛋白和纤维连接蛋白过度沉积。肝纤维化最常见的致病条件包括慢性病毒性肝炎，酒精性肝病，非酒精性脂肪性肝炎(NASH)和自身免疫性肝炎。肝纤维化是各种慢性肝病共同的病理基础，如果没有有效的干预，肝纤维化会演变为肝硬化、肝癌。近年来研究发现，干预肝纤维化的进程可以使得肝纤维化得到有效逆转，因此早期发现肝纤维化对于预防肝硬化、肝癌极为重要。

目前，肝组织穿刺活检仍是诊断肝纤维化的标准方法，但是有创检查存在并发症多、取样局限、难以动态监测、病人抵触、受观察者水平影响等缺点。近年来，各种无创性肝纤维化诊断方法用于临床，显著提高了肝纤维化的诊断率。血清学指标的检测是是目前常用的肝纤维化诊断方法，肝纤维血清标志物分为直接标志物和间接标志物两种，直接标志物表现出细胞外基质改变情况，间接标志物体现了肝脏功能的变化。目前常用的肝纤维化血清标志物包括血小板计数、凝血因子、转氨酶、Ⅲ型前胶原、α-2巨球蛋白、透明质酸、载体蛋白A1、触珠蛋白、基质金属蛋白酶-1组织抑制剂等等。单一指标诊断纤维化作用有限，所以常常联合检测多项指标来判断肝纤维化，因此发现新的诊断标志物对肝纤维化诊断有重要意义。

白细胞来源的趋化因子2(LECT2)是一种16kDa的分泌蛋白，含有133个氨基酸和3个分子内二硫键(Ito等，2003)，最初被鉴定为中性粒细胞的趋化因子，可刺激软骨细胞和成骨细胞的生长(Yamagoe等，1996)。最近，积累的证据表明LECT2参与许多病理状况，如败血症(Lu等，2013)，糖尿病(Lan等，2014)，系统性淀粉样变性(Mereuta等，2014)，肝癌发生(Ong等，2011)，非酒精性脂肪肝病(NAFLD)(Yoo等，2017)，以及造血干细胞的扩张/活化(Lu等，2016)。然而，LECT2在肝纤维化发展中的作用暂未见报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种肝纤维化的生物学标志物、治疗靶点及其用途。

本发明所采取的技术方案是：

LECT2作为肝纤维化肝硬化血清标志物的用途。

检测血清LECT2蛋白水平的试剂在制备肝纤维化肝硬化进展诊断试剂中的应用。

进一步地，所述诊断试剂可用于肝硬化病人临床进展程度分级；进一步地，所述分级为Child-Pugh分级。

进一步地，血清LECT2蛋白水平与分级正相关。

试剂在制备药物中的用途，所述试剂用于抑制LECT2表达，所述药物用于下列用途中的至少一种：

1)促进Tie1/Tie2异源二聚体化；

2)解离Tie2/Tie2同源二聚体化；

3)促进Tie1磷酸化；

4)降低Tie2磷酸化。

进一步地，所述药物用于下列用途中的至少一种：

1)促进血管内皮细胞迁移和小管形成；

2)抑制肝血窦毛细血管化；

3)促进门脉血管新生；

4)抑制促肝纤维化因子表达；

5)治疗肝纤维化；

进一步地，所述促肝纤维化因子包括α-SMA、TGFβ1、ET1、IL33、FN1、IL11和COL4中的至少一种。

进一步地，抑制LECT2表达通过沉默LECT2实现；进一步地，所述沉默是通过shRNA、反义核酸、核酶、显性负突变、CRISPR-Cas9、CRISPR-Cpf1和锌指核酸酶至少之一实现的。

试剂在制备药物中的用途，所述试剂用于促进LECT2表达，所述药物用于下列用途中的至少一种：

1)解离Tie1/Tie2异源二聚体化；

2)促进Tie2/Tie2同源二聚体化；

3)降低Tie1磷酸化；

4)促进Tie2磷酸化；

5)上调PPARγ表达；

6)激活PPAR信号通路。

一种筛选药物的方法，所述药物用于治疗肝纤维化，包括：将候选药物给药肝纤维化动物模型，检测给药前后LECT2的表达量，其中，给药后LECT2的表达量低于给药前LECT2的表达量是候选药物为目标药物的指示。

一种筛选药物的方法，所述药物用于治疗肝纤维化，包括：将候选药物给药肝纤维化动物模型，检测给药之后LECT2与Tie1的结合情况，其中，给药后LECT2与Tie1的结合被阻断是候选药物为目标药物的指示。

本发明的有益效果是：

本发明中公开了LECT2在肝纤维化中的功能及作用机制，具体地，在与Tie1结合后，LECT2中断Tie1/Tie2异二聚化，促进Tie2/Tie2同源二聚化，促进Tie2磷酸化，激活PPAR信号传导，并抑制血管内皮细胞的迁移和血管形成。体内研究表明，LECT2过表达抑制门静脉血管生成，促进血窦毛细血管化并恶化纤维化，而这些变化在Lect2-KO小鼠中被逆转。腺相关病毒载体血清型9(AAV9)-LECT2shRNA处理显著减弱纤维化。LECT2的上调与晚期人肝纤维化分期相关。

本发明中公开了靶向LECT2/Tie1信号传导可以作为肝纤维化的潜在治疗靶标，并且血清LECT2水平可作为诊断肝纤维化的潜在生物标志物。

附图说明

图1LECT2在肝硬化患者中的临床意义；

图2LECT2促进肝纤维化；

图3LECT2调节肝纤维发生；

图4BDL-、DDC-、和MCD-诱导肝纤维化模型中LECT2表达情况；

图5LECT2调节肝纤维化因子水平；

图6CCl4肝纤维化模型中LECT2抑制血管内皮细胞功能和血管新生、促进肝血窦毛细血管化；

图7其他模型中LECT2抑制血管内皮细胞功能和血管新生、促进肝血窦毛细血管化；

图8扫描电镜结果；

图9LECT2与Tie1直接结合；

图10LECT2解离Tie1/Tie2异源二聚体促进Tie2/Tie2同源二聚体；

图11Tie1是LECT2调控血管内皮细胞功能和肝纤维化所必需的；

图12LECT2通过Tie1调节血管内皮细胞功能和肝纤维化；

图13LECT2激活PPAR信号通路；

图14MMP受LECT2调节；

图15AAV9-LECT2-shRNA减少肝纤维化；

图16AAV9-LECT2-shRNA处理小鼠肝的LECT2表达。

具体实施方式

下面进一步列举实施例以详细说明本发明。同样应理解，以下实施例只用于对本发明进行进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，本领域技术人员根据本发明阐述的原理做出的一些非本质的改进和调整均属于本发明的保护范围。下述示例具体的工艺参数等也仅是合适范围中的一个示例，即本领域技术人员可以通过本文的说明做合适范围内的选择，而并非要限定于下文示例的具体数据。

实施例1LECT2表达水平与肝纤维化严重程度正相关

我们首先使用免疫组织化学分析检测人正常和纤维化肝脏样品中LECT2的表达。在正常肝脏中，在中央静脉周围的肝细胞中观察到低水平的LECT2，而在纤维化肝脏中，在门静脉血管周围的区域和损伤边界中观察到显著更强的LECT2表达(图1A)。纤维化肝脏样品显示出比正常肝脏高得多的LECT2mRNA水平(图1B)。与健康对照相比，患有肝纤维化的患者显示出显著更高水平的血清LECT2(图1C)。值得注意的是，血清LECT2升高的程度比丙氨酸氨基转移酶(ALT)更显著(约6倍)(约3倍)(图1D)。通过使用Spearman相关分析，我们观察到152名患者中血清ALT和LECT2水平之间的显著相关性(r＝0.2681，p<0.0008，图1E)。

我们接下来评估了血清中的LECT2水平是否可以用作各种病因造成的肝纤维化的诊断生物标志物。152名患者的队列包括乙型肝炎相关性肝硬化(n＝90)，隐源性肝硬化(n＝17)，酒精性肝硬化(n＝16)，乙型肝炎加酒精性肝硬化(n＝16)，自身免疫性肝炎相关性肝硬化(n＝6)，原发性胆汁性肝硬化(n＝3)，丙型肝炎相关性肝硬化(n＝2)和丙型肝炎加血吸虫病相关性肝硬化(n＝2)。与正常受试者相比，在所有这些患者中均观察到血清LECT2水平的显著增加(图1F)。

当肝脏受到损伤时，可以清楚地观察到血清ALT水平升高，但是当肝脏进入稳定的肝硬化阶段时很少观察到血清ALT水平升高。我们接下来研究了血清ALT水平正常的肝硬化患者中是否能观察到血清LECT2水平升高。将152例肝硬化患者的血清样本根据其血清ALT水平分为两组：正常(n＝124)和异常(n＝28)。结果显示124名血清ALT正常的患者血清LECT2水平显著升高(图1G，H)。通过免疫组织化学染色，我们发现晚期肝硬化的肝脏组织中LECT2表达水平显著高于初期肝硬化，并且含有更多的LECT2+细胞(基于Child-Pugh分类)(图1I，J)。与血清ALT水平和AST/ALT比率不同，后者对晚期肝硬化几乎没有指示价值(图1K，L)，更高的血清LECT2水平与更晚期的肝硬化显著相关(图1M)。我们的结果表明，血清LECT2水平有作为肝硬化生物标志物的潜力。

实施例2LECT2促进肝纤维化

为了探究LECT2是否在肝纤维发生中起关键作用，我们使用CCl4诱导的肝纤维化小鼠模型。与来自正常人肝脏的数据一致，正常小鼠肝脏表达低水平的LECT2，主要在门静脉血管和中央静脉周围。在CCl4诱导的纤维化小鼠肝脏中观察到LECT2的显著增加的表达，其中LECT2主要见于门静脉区域和肝损伤边界周围(图2A，B)。值得注意的是，与血清ALT水平(6～7倍对2～3倍)相比，血清LECT2水平的增加程度更显著(图2C，D)。

为了测试LECT2是否调节肝纤维发生，用过表达LECT2cDNA的慢病毒载体(Lenti-LECT2)(通过尾静脉)注射小鼠，并且用空白慢病毒载体(Lenti-V)注射的小鼠用作对照。在Lenti-LECT2感染的小鼠肝脏和其中衍生的血清样品中证实了LECT2的过表达(图3A、B)。通过天狼星红染色结果所示，LECT2的过表达导致更严重的肝纤维化(图3C)。我们进一步使用Lect2敲除(Lect2-KO)的小鼠，通过天狼星红染色测量，Lect2-KO小鼠表现出显著减弱的纤维化(图3D)。使用Lenti-LECT2在Lect2-KO小鼠中重新表达LECT2(图3E)导致肝纤维化恶化(图3F)。

我们构建多种肝纤维化小鼠模型，包括BDL-、DDC-、和MCD-诱导肝纤维化模型，在所有模型中LECT2都升高(图4A～F)，Lect2基因敲除小鼠肝纤维化都减弱(图4G～I)。

肝纤维化因子α-SMA,TGFβ1,ET1,IL33,FN1,IL11和COL4，在LECT2过表达小鼠肝纤维化模型都升高，在LECT2基因敲除的小鼠肝纤维化模型中则降低(图5A、B)，使用Lenti-LECT2在Lect2-KO小鼠中重新表达LECT2后肝纤维化因子表达升高(图5C)。与对照小鼠相比，其他方法诱导(BDL-、DDC-、和MCD-)的肝纤维化Lect2-KO小鼠中纤维化因子的mRNA表达普遍减少(图5D～F)。

为了证实LECT2调节血管内皮细胞分泌这些纤维化因子，将永生化血管内皮细胞系EA.hy926用于我们的体外研究。用rLECT2处理EA.hy926细胞中TGFβ1，FN1，ET1，IL33，IL11和COL4的mRNA水平提高，但eNOS的mRNA水平降低(图5G)。相反，使用siRNA敲低LECT2(图5H)逆转了这些作用(图5I)。

实施例3LECT2抑制血管内皮细胞功能和血管新生

LECT2抑制血管内皮细胞迁移和血管形成(图6A～F)，在CCl4肝纤维化模型，LECT2过表达抑制门脉血管数量(图6G、H)。LECT2基因敲除小鼠增加门脉血管数量(图6J、K)。在其他模型也是如此(图7A～I)。

实施例4LECT2促进肝血窦毛细血管化

在CCl4肝纤维化模型，LECT2过表达增加肝血窦毛细血管化(图6G、I).LECT2基因敲除小鼠减少肝血窦毛细血管化(图6J、L)，在其他模型也是如此(图7A～I)，扫描电镜也证实了这一点(图8)。

实施例5LECT2与Tie1直接结合

在分离的血管内皮细胞中观察到Tie1的大量表达，但在肝细胞、巨噬细胞和肝星状细胞中未观察到(图9A、B)。为了阐明LECT2和Tie1之间的相互作用，我们通过进行免疫荧光(IF)染色发现LECT2与Tie1在人和小鼠的肝硬化肝脏的门静脉血管中共定位(图9C)。为了证实这些初步发现，我们采用了各种与Flag标记的Tie1截短蛋白和与Myc标记的LECT2的截短蛋白(图9D)。通过共免疫沉淀(Co-IP)实验，在293T细胞中证实了外源表达的Myc标记的LECT2和Flag标记的Tie1之间的相互作用(图9E)，并且在EA.hy926中证实了内源表达的LECT2和Tie1之间的相互作用(图9F)。还检测到重组蛋白rLECT2和内源Tie1之间的相互作用(图9G)。LECT2未与Tie2共免疫沉淀(图9H)。

为了研究LECT2与Tie1的哪个结构域结合，将各种Tie1截短蛋白与LECT2cDNA一起转染到293T细胞中，使用Co-IP实验，我们首先证明LECT2与Tie1的细胞外结构域的N末端共免疫沉淀(图9I)。我们进一步发现LECT2与Tie1的Ig3结构域共免疫沉淀(图9J)。为了研究LECT2是否直接与Tie1结合，我们用N末端麦芽糖结合蛋白(MBP)标签纯化了人Tie1蛋白的Ig3结构域，使用rLECT2和MBP-Tie1-Ig3的纯化蛋白质，我们进行MBP珠子Pull-Down测定，发现rLECT2与MBP-Tie1-Ig3结合，但不与MBP结合(图9K)，表明LECT2可以与Tie1的Ig3区段直接结合。

为了测量LECT2和Tie1之间的结合亲和力，我们采用表面等离子体共振(SPR)测定并获得这两种蛋白质的K_d值为0.52μM(图9L)。

实施例6LECT2解离Tie1/Tie2异源二聚体促进Tie2/Tie2同源二聚体

Tie1/Tie2异源二聚化对其下游信号传递至关重要(Saharinen等，2005；Seegar等，2010)。我们接下来研究了LECT2/Tie1相互作用是否影响Tie1/Tie2关联。使用co-IP测定，我们发现rLECT2抑制Tie1/Tie2结合(图10A)。使用NanoBiT^TM蛋白质：蛋白质相互作用系统将大BiT(LgBiT)和小BiT(SmBiT)亚基与Tie1或Tie2融合(图10B)。首先，使用LECT2-siRNA敲除293T细胞中的内源性LECT2(图11A)，然后用Tie1/LgBiT和Tie2/SmBiT转染细胞用于Tie1-Tie2相互作用测量。我们发现rLECT2以剂量依赖性方式降低了发光信号(图10C)。然后我们使用相同的NanoBiT^TM系统评估Tie1/Tie1和Tie2/Tie2相互作用(图11B)，发现rLECT2降低Tie1/Tie2异源二聚体并增加Tie2/Tie2同源二聚体，而Tie1/Tie1同源二聚体不受rLECT2的影响(图10D)。此外，rLECT2蛋白和LECT2的过表达均促进Tie2和MAPK p38的磷酸化，但抑制Tie1的磷酸化(图10E，图11C)。敲除LECT2降低了Tie2和MAPK p38的磷酸化，但增加了Tie1的磷酸化(图10F，图11D)。LECT2对Tie2的磷酸化是剂量和时间依赖性的(图10E，图11E)。通过rLECT2，Lenti-LECT2和LECT2siRNA对LECT2的调节也改变了总Tie2水平(图10E、F，图11C-E)，表明Tie2蛋白在Tie2/Tie2同二聚体中可能比Tie1/Tie2异二聚体更稳定。为了验证该假设，用MG-132(蛋白酶体抑制剂)或CHX(蛋白质合成抑制剂)预处理EA.hy926细胞，然后用rLECT2处理。我们发现在MG-132预处理的EA.hy926细胞中rLECT2没有增加Tie2(图11F)，但是在用CHX预处理的EAhy.926细胞中抑制了Tie2的降解(图11G，H)。

实施例7Tie1是LECT2调控血管内皮细胞功能和肝纤维化所必需的

为了研究LECT2是否需要Tie1来调节血管内皮细胞的迁移和小管形成，我们使用慢病毒Tie1-shRNA产生了两个稳定的Tie1敲低细胞系(EA.hy926/Tie1-shRNA1和EA.hy926/Tie1-shRNA2)(图11I)。我们发现rLECT2仅抑制EA.hy926/Ctrl-shRNA细胞的迁移和小管形成，但在Tie1敲低细胞中则不抑制(图10G，H)。rLECT2显著改变了EA.hy926/Ctrl-shRNA细胞中纤维化因子的表达，但在Tie1敲低细胞中没有(图11J)。我们在Tie1敲低EA.hy926细胞中重新表达Tie1-WT，Tie1的激酶死亡突变体(Tie1-K870R)和不与LECT2结合的Tie1突变体Tie1-δIg3(图11K)。我们发现rLECT2显著抑制EA.hy926/Tie1-WT细胞的迁移和小管形成，但在EA.hy926/Tie1-K870R和EA.hy926/Tie1-δIg3细胞(图10I，J)中不抑制。我们使用慢病毒Tie2-shRNA敲低Tie2以产生EA.hy926/Tie2-shRNA1和EA.hy926/Tie2-shRNA2细胞(图11L)。我们发现rLECT2可以显著抑制EA.hy926/Ctrl-shRNA细胞的迁移和小管形成，但在Tie2敲低细胞中不抑制(图11M，N)。

为了研究Tie1是否是LECT2体内调节肝纤维化和血管生成/窦状毛细血管化中必需的，通过尾静脉向C57BL/6小鼠注射腺病毒Tie1-shRNA来敲除内源性Tie1(图10K)。Tie1敲低使肝纤维化恶化，抑制门静脉血管生成但增加肝窦毛细血管化(图10L-O)。在具有CCl4诱导的肝纤维化和Tie1敲低的小鼠中，LECT2的过表达既不影响纤维化水平(图10P)，也不影响肝窦的门静脉血管生成和毛细血管化水平(图10Q-S)。纤维化因子的表达水平也没有改变(图11O)。

据报道LECT2与Met(Chen等人，2014)，VEGFR2(Chen等人，2016)和CD209a(Lu等人，2013)结合。然而，在我们的研究中，VEGFR2的敲低(图11P)不影响rLECT2对EA.hy926细胞的迁移和小管形成的抑制作用(图11Q，R)。当EA.hy926细胞中Met和VEGFR2的磷酸化被Golvatinib(Met和VEGFR2的抑制剂)或Vandetanib(VEGFR2的抑制剂)抑制时(图11S-W)，或当CD209a被敲低时，获得了类似的结果(图11X-Z)。

在我们的体内CCl4诱导的肝纤维化模型中，敲低内源性VEGFR2(使用腺病毒VEGFR2-shRNA)(图12A)，随后LECT2过表达导致肝纤维化恶化(图12B)，纤维化因子增加(图12C)，门静脉减少血管生成和肝窦毛细血管化增加(图12D-F)。在Lect2-KO小鼠中，其抑制剂索拉非尼和贝伐单抗对VEGF/VEGFR的抑制减弱了肝纤维化(图12G)。这些结果表明LECT2和VEGF/VEGFR彼此独立。当内源性CD209a被腺病毒CD209a-shRNA敲低时(图12H)，LECT2过表达仍能使肝纤维化恶化(图12I)，上调纤维化因子的表达水平(图12J)，抑制门静脉血管生成并增加肝窦毛细管化(图12K-M)。

以上结果证明LECT2通过Tie1而不是Met，VEGFR2或CD209a调节ECs功能和肝纤维化。

实施例8LECT2激活PPAR信号通路

Lect2-KO基因敲除小鼠与对照小鼠CCl4肝纤维化模型转录组测序显示689个基因变化，PPAR通路富集(图13A)。

我们观察到用rLECT2处理EA.hy926细胞和原代LSEC导致PPARγ显著上调，但PPARα和PPARβ没有显著上调(图13B，C)。为了探讨LECT2是否通过Tie1上调PPARγ，我们将Tie1-WT或Tie1-δIg3在Tie1敲低的EAhy926细胞中重新表达，发现rLECT2不能增加EA.hy926/Tie1-δIg3细胞中PPARγ的表达，而LECT2显著增加EA.hy926/Tie1-WT细胞中PPARγ的表达(图14A)。此外，我们发现GW9662(一种特异性PPARγ抑制剂)对PPARγ的抑制作用逆转了rLECT2对EAhy.926细胞的迁移和小管形成(图13E，F)和纤维化因子(图14B)产生的影响。

为了探究MMP是否受LECT2调节，我们分析了RNAseq数据，发现与来自WT小鼠的纤维化肝组织相比，来自Lect2-KO小鼠的纤维化肝组织中MMP2，MMP7，MMP12和MMP13显著上调(图14A)。我们进一步发现rLECT2降低了MMP2，MMP7，MMP12和MMP13的表达，这些作用可以通过PPARγ抑制剂GW9662抑制(图13G，H)。在纤维化肝脏中也观察到MMP的下调(图14C)。据报道，MMP7通过降解VE-钙粘蛋白促进细胞迁移(Ichikawa等，2006)。我们发现通过rLECT2处理EA.hy926细胞和原代LSEC导致VE-钙粘蛋白的表达增加，并且这可以通过PPARγ抑制剂GW9662和MAPK p38抑制剂SB203580逆转(图13I，J)。由以上内容可知，LECT2-Tie1是通过MAPK/PPAR/MMP/VE-钙粘蛋白促进肝纤维化的重要信号通路。

实施例9抑制LECT2可治疗肝纤维化

将AAV9-LECT2shRNA或对照AAV9-Ctrl shRNA注射到C57BL/6小鼠中，然后每周注射CCl4两次，持续3周(实验设计如图15A所示)。在用AAV9-LECT2shRNA处理的小鼠(图16A-D)中观察到LECT2的肝表达显著降低，同时肝纤维化减轻(图15B)和纤维化因子的mRNA表达的显著降低(图15C)。与对照小鼠相比，在AAV9-LECT2shRNA感染的小鼠中也观察到门静脉血管生成增加和血窦毛细血管化减少(图15D-F)。此外，在AAV9-LECT2shRNA中观察到LSEC中开放性窗孔的频率增加，但对照小鼠未观察到(图15G，H)。

我们进一步研究了AAV9-LECT2shRNA是否可以阻止已建立的纤维化的进一步发展。该实验的设计如图15I所示。用AAV9-LECT2shRNA处理小鼠显著降低LECT2的肝表达(图16E-H)，减弱肝纤维化(图15J)，并降低纤维化因子的mRNA水平(图15K)。与对照小鼠相比，在AAV9-LECT2shRNA处理的小鼠中观察到门静脉血管生成增加和血窦毛细血管化减少(图15L-N)。

以上结果表明抑制LECT2在肝纤维化的治疗中具有潜在价值。

Claims (10)

1.LECT2作为肝纤维化肝硬化血清标志物的用途。

2.检测血清LECT2蛋白水平的试剂在制备肝纤维化肝硬化进展诊断试剂中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述诊断试剂可用于肝硬化病人临床进展程度分级；进一步地，所述分级为Child-Pugh分级。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：血清LECT2蛋白水平与分级正相关。

5.试剂在制备药物中的用途，所述试剂用于抑制LECT2表达，所述药物用于下列用途中的至少一种：

1)促进Tie1/Tie2异源二聚体化；

2)解离Tie2/Tie2同源二聚体化；

3)促进Tie1磷酸化；

4)降低Tie2磷酸化。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述药物用于下列用途中的至少一种：

1)促进血管内皮细胞迁移和小管形成；

2)抑制肝血窦毛细血管化；

3)促进门脉血管新生；

4)抑制促肝纤维化因子表达；

5)治疗肝纤维化；

进一步地，所述促肝纤维化因子包括α-SMA、TGFβ1、ET1、IL33、FN1、IL11和COL4中的至少一种。

7.根据权利要求5所述的用途，其特征在于：抑制LECT2表达通过沉默LECT2实现；进一步地，所述沉默是通过shRNA、反义核酸、核酶、显性负突变、CRISPR-Cas9、CRISPR-Cpf1和锌指核酸酶至少之一实现的。

8.试剂在制备药物中的用途，所述试剂用于促进LECT2表达，所述药物用于下列用途中的至少一种：

1)解离Tie1/Tie2异源二聚体化；

2)促进Tie2/Tie2同源二聚体化；

3)降低Tie1磷酸化；

4)促进Tie2磷酸化；

5)上调PPARγ表达；

6)激活PPAR信号通路。

9.一种筛选药物的方法，所述药物用于治疗肝纤维化，其特征在于：将候选药物给药肝纤维化动物模型，检测给药前后LECT2的表达量，其中，给药后LECT2的表达量低于给药前LECT2的表达量是候选药物为目标药物的指示。

10.一种筛选药物的方法，所述药物用于治疗肝纤维化，其特征在于：将候选药物给药肝纤维化动物模型，检测给药之后LECT2与Tie1的结合情况，其中，给药后LECT2与Tie1的结合被阻断是候选药物为目标药物的指示。

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