CN110646391A - 一种被子植物花部器官的线粒体荧光标记方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了生物研究技术领域的一种被子植物花部器官的线粒体荧光标记方法，该标记方法如下：步骤一：将用于标记的荧光剂加入稀释液进行稀释；步骤二：将稀释后的荧光剂升温溶解，然后加入活性剂；步骤三：将植物花部器官制作成标本；步骤四：将荧光剂滴入在标本上；步骤五：通过显微镜观察状态,所述步骤一中稀释液为生理盐水，所述生理盐水与荧光剂的比例为100:1，所述荧光剂为健那绿染液，通过在对荧光剂中添加活性剂，提高荧光剂的表面活性，使其在滴入到实验标本上时可以快速的与线粒体中的细胞色素氧化酶进行氧化作用，提高荧光标记速度。
Description
技术领域
本发明涉及生物研究技术领域，具体为一种被子植物花部器官的线粒体荧光标记方法。
背景技术
被子植物是当今世界植物界中最进化、种类最多、分布最广、适应性最强的类群。现知全世界被子植物共有20多万种，占植物界总数的一半以上。我国已知的被子植物约2700多属，3万余种。被子植物与人类有着及为密切的关系，如我国的被子植物可提供食物的达2000余种；果树有300多种；花卉植物数不胜数；药用被子植物有10027种(含种以下分类单位)，占我国药用植物总数的90％，是药用种类最多的类群，绝大多数中药均来自于被子植物。
线粒体是一种存在于大多数细胞中的由两层膜包被的细胞器，是细胞中制造能量的结构，是细胞进行有氧呼吸的主要场所，被称为"powerhouse"。其直径在0.5到1.0微米左右。
除了溶组织内阿米巴、篮氏贾第鞭毛虫以及几种微孢子虫外，大多数真核细胞或多或少都拥有线粒体，但它们各自拥有的线粒体在大小、数量及外观等方面上都有所不同。
线粒体拥有自身的遗传物质和遗传体系，但其基因组大小有限，是一种半自主细胞器。除了为细胞供能外，线粒体还参与诸如细胞分化、细胞信息传递和细胞凋亡等过程，并拥有调控细胞生长和细胞周期的能力。
目前，对于线粒体进行研究时，需要通过荧光对线粒体的位置进行标记，从而可以通过显微镜突出的查看到线粒体的移动轨迹，但荧光在对线粒体标记之间，使用者需要将荧光剂注入到植物的花部器官中，然后等待荧光剂与线粒体接触，由于荧光剂的特性，不会被线粒体吸引，需要荧光剂自由的落到线粒体上，此步骤的等待时间较长，造成整个实验时间增加。
发明内容
本发明的目的在于提供一种被子植物花部器官的线粒体荧光标记方法，以解决上述背景技术中提出的荧光剂与线粒体反应时间缓慢造成实验过程过长的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种被子植物花部器官的线粒体荧光标记方法，该标记方法如下：
步骤一：将用于标记的荧光剂加入稀释液进行稀释；
步骤二：将稀释后的荧光剂升温溶解，然后加入活性剂；
步骤三：将植物花部器官制作成标本；
步骤四：将荧光剂滴入在标本上；
步骤五：通过显微镜观察状态。
优选的，所述步骤一中稀释液为生理盐水，所述生理盐水与荧光剂的比例为100:1，所述荧光剂为健那绿染液。
优选的，所述步骤二中荧光剂升温的温度为30-40℃。
优选的，所述步骤三中标本的制作方法为将分离的植物花部位置使用刀片倾斜向下切3-5mm的薄片，底部放置在实验皿内，然后加入细胞培养液，静止24h后即可。
优选的，所述步骤四具体的操作步骤为将稀释后的荧光剂通过滴管滴入到实验皿内的薄片上，静置10-15min即可。
优选的，所述步骤五中的观察方法为将显微镜调节到可以清晰的查看到线粒体的状态后，对同一位置的线粒体的荧光标记进行记录。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：通过该一种被子植物花部器官的线粒体荧光标记方法，目前，对于线粒体进行研究时，需要通过荧光对线粒体的位置进行标记，从而可以通过显微镜突出的查看到线粒体的移动轨迹，但荧光在对线粒体标记之间，使用者需要将荧光剂注入到植物的花部器官中，然后等待荧光剂与线粒体接触，由于荧光剂的特性，不会被线粒体吸引，需要荧光剂自由的落到线粒体上，此步骤的等待时间较长，造成整个实验时间增加，本申请文件中，通过在对荧光剂中添加活性剂，提高荧光剂的表面活性，使其在滴入到实验标本上时可以快速的与线粒体中的细胞色素氧化酶进行氧化作用，提高荧光标记速度。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明提供如下技术方案：一种被子植物花部器官的线粒体荧光标记方法，用于提荧光标记速度，减少实验时间。
实施例1
该标记方法如下：
步骤一：将用于标记的0.5g荧光剂加入50ml稀释液进行稀释；
步骤二：将稀释后的荧光剂升温溶解，然后加入活性剂；
步骤三：将植物花部器官制作成标本；
步骤四：将荧光剂滴入在标本上；
步骤五：通过显微镜观察状态。
其中，所述步骤一中稀释液为生理盐水，所述荧光剂为健那绿染液。
其中，所述步骤二中荧光剂升温的温度为30-40℃。
其中，所述步骤三中标本的制作方法为将分离的植物花部位置使用刀片倾斜向下切3mm的薄片，底部放置在实验皿内，然后加入细胞培养液，静止24h后即可。
其中，所述步骤四具体的操作步骤为将稀释后的荧光剂通过滴管滴入到实验皿内的薄片上，静置10-15min即可。
其中，所述步骤五中的观察方法为将显微镜调节到可以清晰的查看到线粒体的状态后，对同一位置的线粒体的荧光标记进行记录。
实施例2
该标记方法如下：
步骤一：将用于标记的0.5g荧光剂加入50ml稀释液进行稀释；
步骤二：将稀释后的荧光剂升温溶解，然后加入活性剂；
步骤三：将植物花部器官制作成标本；
步骤四：将荧光剂滴入在标本上；
步骤五：通过显微镜观察状态。
其中，所述步骤一中稀释液为生理盐水，所述荧光剂为健那绿染液。
其中，所述步骤二中荧光剂升温的温度为30-40℃。
其中，所述步骤三中标本的制作方法为将分离的植物花部位置使用刀片倾斜向下切4mm的薄片，底部放置在实验皿内，然后加入细胞培养液，静止24h后即可。
其中，所述步骤四具体的操作步骤为将稀释后的荧光剂通过滴管滴入到实验皿内的薄片上，静置10-15min即可。
其中，所述步骤五中的观察方法为将显微镜调节到可以清晰的查看到线粒体的状态后，对同一位置的线粒体的荧光标记进行记录。
实施例3
该标记方法如下：
步骤一：将用于标记的0.5g荧光剂加入50ml稀释液进行稀释；
步骤二：将稀释后的荧光剂升温溶解，然后加入活性剂；
步骤三：将植物花部器官制作成标本；
步骤四：将荧光剂滴入在标本上；
步骤五：通过显微镜观察状态。
其中，所述步骤一中稀释液为生理盐水，所述荧光剂为健那绿染液。
其中，所述步骤二中荧光剂升温的温度为30-40℃。
其中，所述步骤三中标本的制作方法为将分离的植物花部位置使用刀片倾斜向下切5mm的薄片，底部放置在实验皿内，然后加入细胞培养液，静止24h后即可。
其中，所述步骤四具体的操作步骤为将稀释后的荧光剂通过滴管滴入到实验皿内的薄片上，静置10-15min即可。
其中，所述步骤五中的观察方法为将显微镜调节到可以清晰的查看到线粒体的状态后，对同一位置的线粒体的荧光标记进行记录。
实施例4
该标记方法如下：
步骤一：将用于标记的0.5g荧光剂加入50ml稀释液进行稀释；
步骤二：将稀释后的荧光剂升温溶解，然后加入活性剂；
步骤三：将植物花部器官制作成标本；
步骤四：将荧光剂滴入在标本上；
步骤五：通过显微镜观察状态。
其中，所述步骤一中稀释液为生理盐水，所述荧光剂为健那绿染液。
其中，所述步骤二中荧光剂升温的温度为30-40℃。
其中，所述步骤三中标本的制作方法为将分离的植物花部位置使用刀片倾斜向下切5mm的薄片，底部放置在实验皿内，然后加入细胞培养液，静止20h后即可。
其中，所述步骤四具体的操作步骤为将稀释后的荧光剂通过滴管滴入到实验皿内的薄片上，静置10-15min即可。
其中，所述步骤五中的观察方法为将显微镜调节到可以清晰的查看到线粒体的状态后，对同一位置的线粒体的荧光标记进行记录。
将以上实施例中，通过显微镜清晰的查看到荧光剂对线粒体标记后产生的线路及移动方向进行记录，并对每组的标记状态进行记录，结果如下表：
相对于现有的标记方法，本申请文件中的标记方法可以有效地提高对线粒体的标记速度，减少实验时间。
虽然在上文中已经参考了一些实施例对本发明进行描述，然而在不脱离本发明的范围的情况下，可以对其进行各种改进并且可以用等效无替换其中的部件。尤其是，只要不存在结构冲突，本发明所披露的各个实施例中的各项特征均可通过任意方式相互结合起来使用，在本说明书中未对这些组合的情况进行穷举的描述仅仅是处于省略篇幅和节约资源的考虑。因此，本发明并不局限于文中公开的特定实施例，而且包括落入权利要求的范围内的所有技术方案。
Claims (6)
1.一种被子植物花部器官的线粒体荧光标记方法，其特征在于：该标记方法如下：
步骤一：将用于标记的荧光剂加入稀释液进行稀释；
步骤二：将稀释后的荧光剂升温溶解，然后加入活性剂；
步骤三：将植物花部器官制作成标本；
步骤四：将荧光剂滴入在标本上；
步骤五：通过显微镜观察状态。
2.根据权利要求1所述的一种被子植物花部器官的线粒体荧光标记方法，其特征在于：所述步骤一中稀释液为生理盐水，所述生理盐水与荧光剂的比例为100:1，所述荧光剂为健那绿染液。
3.根据权利要求1所述的一种被子植物花部器官的线粒体荧光标记方法，其特征在于：所述步骤二中荧光剂升温的温度为30-40℃。
4.根据权利要求1所述的一种被子植物花部器官的线粒体荧光标记方法，其特征在于：所述步骤三中标本的制作方法为将分离的植物花部位置使用刀片倾斜向下切3-5mm的薄片，底部放置在实验皿内，然后加入细胞培养液，静止24h后即可。
5.根据权利要求1所述的一种被子植物花部器官的线粒体荧光标记方法，其特征在于：所述步骤四具体的操作步骤为将稀释后的荧光剂通过滴管滴入到实验皿内的薄片上，静置10-15min即可。
6.根据权利要求1所述的一种被子植物花部器官的线粒体荧光标记方法，其特征在于：所述步骤五中的观察方法为将显微镜调节到可以清晰的查看到线粒体的状态后，对同一位置的线粒体的荧光标记进行记录。
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