CN104137776B - 一种蓝莓组培苗液体生根方法及专用培养容器 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种蓝莓组培苗液体生根方法以及专用培养容器，生根方法包括以下步骤：配制溶液，制备含一定种类和浓度激素的液体培养基，将培养基分装于吸头盒中外盒中，放置支架，食用菌袋包裹后高压蒸汽灭菌，接种，生根培养；专用培养容器由吸头盒改造而来，包括：吸头盒和设置于吸头盒内的支架，支架上形成有若干支架孔，支架的高度、孔数、孔径与增殖新梢的长度、粗度相适应。本发明的有益之处在于：通过优化培养基配方、在吸头盒中放置支架，使得蓝莓组培苗瓶内生根率大幅度提高，增殖新梢生根数、根长等根系质量指标也得到提升,不仅解决了液体生根技术缺少有效固定支撑物的问题，而且避免了固体培养基琼脂凝固剂对组培苗的抑制。

Description

一种蓝莓组培苗液体生根方法及专用培养容器

技术领域

本发明涉及一种促进植物生根的方法，具体涉及一种利用液体培养基促进蓝莓组培苗生根的方法，属于植物栽培技术领域。

背景技术

蓝莓(blueberry)又称越橘，为杜鹃花科越橘属多年生灌木，是具有较高经济价值和广阔开发前景的新兴树种。果实蓝色，果实大小因品种而异，单果重0.5～2.5克。果肉细腻、种子小，甜酸可口，风味独特，是当今世界发展最快的第三代果树的代表品种之一。同时，蓝莓果实营养丰富可直接鲜食，并具有极强的药用价值和营养保健功能，在国内外极受欢迎，被国际粮农组织列为人类五大健康食品之一。

植物组织培养是指在无菌和人工控制的环境条件下，利用人工培养基，对植物的胚胎、器官、组织或细胞等进行操作和培养，使其按人们的意愿增殖、生长或再生的一门学科。植物组织培养技术是生物技术的主要组成部分，已渗透应用到育种学、植物生理学、细胞生物学及遗传学等多个领域，广泛应用于农业、林业，产生了巨大的经济和社会效益。

植物组织培养应用于无性繁殖，育苗速度快，适宜于优良品种的工厂化大规模繁殖，还可以实现苗木的脱毒培养。

组培苗生根是外植体通过腋芽萌发和不定芽发生再生形成完整植株的关键必备步骤。

液体生根技术是利用液体培养基进行生根培养，完成植株再生。液体培养基是固体培养基的对应词，培养基未加入凝固剂称为培养液。培养液中营养成分、激素可自由扩散，外植体培养过程中一直保持均匀分布，所以有利于组织细胞生长，提高培养效果。

液体生根技术应用于蓝莓增殖新梢生根缺少有效固定支撑物，故而很少见有这方面研究报道。2011年关丽霞和韩德伟，研究了蓝莓组培的浅层液体生根技术，生根效果良好，同时，简化了培养基配制、节约了成本80％，不用洗根，减少了伤苗伤根。同年，廉家盛将生物反应器应用于蓝莓品种‘美登’组培快繁体系建立。在其他研究中，也有采用蛭石、珍珠岩及滤纸代替琼脂凝固剂，进行液体培养。然而，这些琼脂替代物存在外植体易污染、接种难操作、易受伤、不能有效固定、不能工厂化应用等问题中的一个或多个。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种简便易行、成本低、且能够使蓝莓组培苗瓶内生根率、根系质量大幅度提高的蓝莓组培苗液体生根方法。

为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：

一种蓝莓组培苗液体生根方法，其特征在于，包括以下步骤：

(一)、配制溶液：配制B5培养基的大量元素母液、微量元素母液、有机物母液和铁盐母液4种试验母液，配制1mg/ml IBA、1mg/ml IAA、1mg/ml NAA 3种激素溶液；

(二)、制备培养基：称取蔗糖30g，放入1000ml容器中，加冷蒸馏水500ml，加热搅拌使蔗糖溶化，依次吸取50ml大量元素母液、5ml微量元素母液、5ml有机物母液和5ml铁盐母液加入到上述容器中，再分别添加0.5ml IBA、0.3ml IAA、0.1ml NAA3种激素溶液，搅拌均匀，加蒸馏水至1000ml，调pH至5.4，趁热将培养基分装于吸头盒外盒中，每盒装100ml，然后在吸头盒外盒中放置支架，最后用食用菌袋包裹，高压蒸汽灭菌；

(三)、接种：选取生长势强的2-3cm增殖新梢作为外植体，超净工作台内无菌操作，每盒接种10-30个外植体，封口膜封边；

(四)、生根培养：将接种有外植体的吸头盒外盒摆放于组培室培养架上培养，待根5条以上、平均根长1cm以上时，打开吸头盒外盒移栽入基质进行驯化。

前述的蓝莓组培苗液体生根方法，其特征在于，在步骤(三)中，前述增殖新梢包括：初代培养腋芽和继代培养的不定芽、丛生芽。

前述的蓝莓组培苗液体生根方法，其特征在于，在步骤(四)中，生根培养的条件为：

培养温度昼25℃、夜15℃，先暗培养1周，然后光培养，光照强度3000lx，光周期16h光照/8h黑暗。

本发明的有益之处在于：

1、对培养基的配方进行了优化，使得蓝莓组培苗生根率大幅度提高，增殖新梢生根数、根长等根系质量指标也得到提升。

2、在吸头盒外盒中放置支架，解决了液体生根技术缺少有效固定支撑物的问题，使得蓝莓组培苗瓶内生根率大幅度提高，增殖新梢生根数、根长等根系质量指标也得到提升；另外，因不使用琼脂凝固剂，故根系不易受伤、且降低了成本，方法简便易行。

附图说明

图1是本发明的用于蓝莓组培苗液体生根的专用培养容器的一个具体实施例的结构示意图。

图中附图标记的含义：1-吸头盒外盒，2-支架，21-支架孔。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明作具体的介绍。

实施本发明的蓝莓组培苗液体生根的方法时，需要使用专门的培养容器与其配套，参照图1，该专用的培养容器由吸头盒改造而来，具体包括两大部分：吸头盒外盒1和支架2，支架2上设计有若干支架孔21。使用时，将支架2设置于吸头盒外盒1内即可，支架2的高度、孔数、孔径与增殖新梢的长度、粗度相适应。

下面介绍蓝莓组培苗液体生根方法，该方法包括以下步骤：

一、配制溶液

1、配制B5培养基的大量元素母液、微量元素母液、有机物母液和铁盐母液4种试验母液，配方和配制方法按照《NUTRIENT REQUIREMENTS OF SUSPENSION CULTURES OFSOYBEAN ROOT CELLS》(Experimental Cell Research 50,151-158(1968))中的记载配制。

2、配制1mg/ml IBA、1mg/ml IAA、1mg/ml NAA3种激素溶液。

二、制备培养基

1、称取蔗糖30g，放入1000ml搪瓷杯中，加冷蒸馏水500ml，加热搅拌使蔗糖溶化。

2、依次吸取50ml大量元素母液、5ml微量元素母液、5ml有机物母液和5ml铁盐母液加入到上述搪瓷杯中。

3、分别添加0.5ml IBA、0.3ml IAA、0.1ml NAA3种激素溶液到上述搪瓷杯中，搅拌均匀，加蒸馏水至1000ml，此时培养基中IBA、IAA、NAA3种激素的浓度分别是0.5mg/L、0.3mg/L、0.1mg/L，最后调培养基的pH至5.4。

具体研究中，不同蓝莓品种其培养基中IBA、IAA、NAA 3种激素的浓度可分别在0.3-0.7mg/L、0.2-0.4mg/L、0.06-0.14mg/L范围内适当调整。

4、趁热将培养基分装于吸头盒外盒中，每盒装100ml，然后在吸头盒外盒中放置支架，最后用食用菌袋包裹，高压蒸汽灭菌。

吸头盒外盒：长120mm×宽85mm×高80mm；

支架：长115mm×宽80mm×高25mm，28孔，孔径8mm。

三、接种

选取生长势强的2-3cm增殖新梢作为外植体，超净工作台内无菌操作，每盒接种10-28个外植体，封口膜封边。

增殖新梢既可以是初代培养腋芽，也可以是继代培养的不定芽、丛生芽。

四、生根培养

将接种有外植体的吸头盒外盒摆放于组培室培养架上培养，培养的条件为：培养温度昼25□、夜15□，先暗培养1周，然后光培养，光照强度3000lx，光周期16h光照/8h黑暗。

待根5条以上、平均根长1cm以上时(大约30天左右)，打开吸头盒外盒移栽入基质进行驯化。依据季节，驯化选择在温室或露地进行。

将本发明的方法与使用固体培养基的方法进行比较，实施效果见表1。

表1实施效果比较表

由此可见，采用本发明的方法培养蓝莓组培苗生根，不仅解决了液体生根技术缺少有效固定支撑物的问题，而且避免了固体培养基琼脂凝固剂对组培苗的抑制，因此生根率大幅度提高，同时，增殖新梢生根数、根长等根系质量指标也得到了提升。

另外，因培养基中不再使用琼脂凝固剂，所以不仅降低了成本，而且保证了根系不易受伤，方法简便易行。

需要说明的是，上述实施例不以任何形式限制本发明，凡采用等同替换或等效变换的方式所获得的技术方案，均落在本发明的保护范围内。

Claims (1)

1.蓝莓组培苗液体生根方法，其特征在于，包括以下步骤：

(一)、配制溶液：配制B5培养基的大量元素母液、微量元素母液、有机物母液和铁盐母液4种试验母液，配制1mg/ml IBA、1mg/ml IAA、1mg/ml NAA 3种激素溶液；

(二)、制备培养基：称取蔗糖30g，放入1000ml容器中，加冷蒸馏水500ml，加热搅拌使蔗糖溶化，依次吸取50ml大量元素母液、5ml微量元素母液、5ml有机物母液和5ml铁盐母液加入到上述容器中，再分别添加0.5ml IBA、0.3ml IAA、0.1ml NAA 3种激素溶液，搅拌均匀，加蒸馏水至1000ml，调pH至5.4，趁热将培养基分装于吸头盒外盒中，每盒装100ml，然后在吸头盒外盒中放置支架，最后用食用菌袋包裹，高压蒸汽灭菌；

(三)、接种：选取生长势强的2-3cm增殖新梢作为外植体，超净工作台内无菌操作，每盒接种10-30个外植体，封口膜封边，所述增殖新梢包括：初代培养腋芽和继代培养的不定芽、丛生芽；

(四)、生根培养：将接种有外植体的吸头盒外盒摆放于组培室培养架上培养，培养温度昼25℃、夜15℃，先暗培养1周，然后光培养，光照强度3000lx，光周期16h光照/8h黑暗，待根5条以上、平均根长1cm以上时，打开吸头盒外盒移栽入基质进行驯化。