CN110643664A - 一种利用酶膜反应器制备燕麦抗氧化肽的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开的属于生物活性肽技术领域，具体为一种利用酶膜反应器制备燕麦抗氧化肽的方法，该利用酶膜反应器制备燕麦抗氧化肽的方法步骤如下：步骤一：pH调节：向酶膜反应器中加入2500mL的蛋白溶液，将蛋白溶液置于温度50‑60℃水浴中预热处理30‑45分钟，处理后用0.5‑1mol/L氢氧化钠溶液调节pH至8.5；步骤二：上清液提取：向酶膜反应器中加入Alcalase，搅拌3分钟后，打开蠕动泵，运行15‑20分钟后，关闭蠕动泵，发明提高了蛋白肽的抗氧化活性，利用酸性pH提高DPPH自由基清除率，通过煮沸灭菌条件有利于清除DPPH自由基，对燕麦蛋白肽还原力有较大增加的综合效果。
Description
技术领域
本发明涉及生物活性肽技术领域，具体为一种利用酶膜反应器制备燕麦抗氧化肽的方法。
背景技术
生物活性肽是蛋白质中20个天然氨基酸以不同组成和排列方式构成的从二肽到复杂的线形和环行结构的不同肽类的总称，是源于蛋白质最复杂的多功能化合物，具有人体代谢和生理调节功能，食用安全性高，是当前国际食品界最热门的研究课题。随着生物科学技术的发展以及人们保健意识的加强，生物活性肽已成为目前制药和保健品行业的主要发展趋势。近些年来抗氧化剂在国内外得到了蓬勃的发展，用途也越来越广泛，不仅用于含脂肪食品的抗氧化防御，而且作为功能因子用于保健食品及化妆品等的开发，但是研究发现人工合成的抗氧化剂具有许多副作用，因此食源抗氧化肽的研究成为了各国的研究热点。
氧化作用是导致人体各种疾病产生的主要原因之一。例如，人体内的自由基可以攻击蛋白质、脂肪、核酸等大分子物质，导致细胞损伤和凋亡，并最终诱发一些疾病，如动脉粥样硬化、阿尔茨海默病、炎症性肠道疾病以及某些癌症。实际上，所有的细胞组分和一些特定组分都对活性氧较为敏感，这些活性氧包括轻基自由基、过氧自由基、超氧阴离子、过氧化亚硝酸阴离子等等。由于氧化作用而产生的蛋白质碳基化合物的持续积累被认为是人体衰老的一个主要原因。在正常生理状态下，人体内细胞、组织和器官的健康状况是通过抗氧化一氧化平衡体系来维持的。而在疾病状态下，人体内源抗氧化体系(酶和非酶物质)受到破坏，从而导致该平衡也受到破坏。一般而言，抗氧化肽是一种外源天然抗氧化剂。人体首先摄取食物，食物蛋白在胃肠道中水解成大量的生物活性肽，而这其中相当一部分都具有抗氧化活性。因此，人体通过摄取外源抗氧化肽可以弥补内源抗氧化体系的不足，从而维持人体正常生理功能，防治疾病、延缓衰老。
现有技术当中的燕麦抗氧化肽的制备容易导致Alcalase酶活的损失和蛋白肽的抗氧化活性较低，同时多肽的生产效率较低，其次，不利于提高DPPH自由基清除率，因此亟需研发一种利用酶膜反应器制备燕麦抗氧化肽的方法。
发明内容
本部分的目的在于概述本发明的实施方式的一些方面以及简要介绍一些较佳实施方式。在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。
鉴于上述和/或现有利用酶膜反应器制备燕麦抗氧化肽的方法中存在的问题，提出了本发明。
因此，本发明的目的是提供利用酶膜反应器制备燕麦抗氧化肽的方法，能够提高蛋白肽的抗氧化活性，利用酸性pH提高DPPH自由基清除率，煮沸灭菌条件有利于清除DPPH自由基，对燕麦蛋白肽还原力有较大增加。
为解决上述技术问题，根据本发明的一个方面，本发明提供了如下技术方案：
一种利用酶膜反应器制备燕麦抗氧化肽的方法，该利用酶膜反应器制备燕麦抗氧化肽的方法步骤如下：
步骤一：pH调节：向酶膜反应器中加入2500mL的蛋白溶液，将蛋白溶液置于温度50-60℃水浴中预热处理30-45分钟，处理后用0.5-1mol/L氢氧化钠溶液调节pH至8.5；
步骤二：上清液提取：向酶膜反应器中加入Alcalase，搅拌3分钟后，打开蠕动泵，运行15-20分钟后，关闭蠕动泵，然后在50-60℃恒温水浴振荡器中酶解2-3小时，沸水中灭酶或者采用高压蒸汽灭菌，取出迅速冷却；
步骤三：离心干燥：将步骤二完成后，用反应釜离心30-45分钟，取上清液冷冻干燥，即可制得。
作为本发明所述的利用酶膜反应器制备燕麦抗氧化肽的方法的一种优选方案，其中：所述蠕动泵运行期间需要不断向酶膜反应器系中加入lmol/L NaOH和恒温去离子水，维持酶膜反应器pH值和体积恒定。
作为本发明所述的利用酶膜反应器制备燕麦抗氧化肽的方法的一种优选方案，其中：所述Alcalase为酶底比3％的Alcalase 2.4L。
作为本发明所述的利用酶膜反应器制备燕麦抗氧化肽的方法的一种优选方案，其中：所述反应釜的转速为3500-4000r/min。
作为本发明所述的利用酶膜反应器制备燕麦抗氧化肽的方法的一种优选方案，其中：所述蠕动泵为BT300-2J蠕动泵。
作为本发明所述的利用酶膜反应器制备燕麦抗氧化肽的方法的一种优选方案，其中：所述恒温水浴振荡器为多用途水浴恒温振荡器。
作为本发明所述的利用酶膜反应器制备燕麦抗氧化肽的方法的一种优选方案，其中：所述高压蒸汽灭菌采用的是将高压灭菌锅加热到121℃，气压为0.1MPa，加热时间为15-30分钟，取出迅速冷却。
作为本发明所述的利用酶膜反应器制备燕麦抗氧化肽的方法的一种优选方案，其中：所述沸水中灭酶利用100℃水浴中恒温10-20分钟。
与现有技术相比：提高蛋白肽的抗氧化活性，利用酸性pH提高DPPH自由基清除率，煮沸灭菌条件有利于清除DPPH自由基，对燕麦蛋白肽还原力有较大增加。
具体实施方式
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面本发明的具体实施方式做详细的说明。
在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但是本发明还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似推广，因此本发明不受下面公开的具体实施方式的限制。
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明的实施方式作进一步地详细描述。
实施方式1
本发明提供一种利用酶膜反应器制备燕麦抗氧化肽的方法，该利用酶膜反应器制备燕麦抗氧化肽的方法：
该利用酶膜反应器制备燕麦抗氧化肽的方法步骤如下：
步骤一：pH调节：向酶膜反应器中加入2500mL的蛋白溶液，将蛋白溶液置于温度50℃水浴中预热处理45分钟，处理后用0.5mol/L氢氧化钠溶液调节pH至8.5；
步骤二：上清液提取：向酶膜反应器中加入酶底比3％的Alcalase 2.4L，搅拌3分钟后，打开蠕动泵，运行20分钟后，所述蠕动泵运行期间需要不断向酶膜反应器系中加入lmol/L NaOH和恒温去离子水，维持酶膜反应器pH值和体积恒定，然后关闭蠕动泵，然后在50℃恒温水浴振荡器中酶解3小时，沸水中灭酶利用100℃水浴中恒温10-20分钟或者采用高压蒸汽灭菌，将高压灭菌锅加热到121℃，气压为0.1MPa，加热时间为15分钟，取出迅速冷却；
步骤三：离心干燥：将步骤二完成后，用反应釜离心45分钟，所述反应釜的转速为3500r/min，取上清液冷冻干燥，即可制得。
其中，所述蠕动泵为BT300-2J蠕动泵。
其中，所述恒温水浴振荡器为多用途水浴恒温振荡器。
实施方式2
本发明提供一种利用酶膜反应器制备燕麦抗氧化肽的方法，该利用酶膜反应器制备燕麦抗氧化肽的方法：
该利用酶膜反应器制备燕麦抗氧化肽的方法步骤如下：
步骤一：pH调节：向酶膜反应器中加入2500mL的蛋白溶液，将蛋白溶液置于温度60℃水浴中预热处理30分钟，处理后用1mol/L氢氧化钠溶液调节pH至8.5；
步骤二：上清液提取：向酶膜反应器中加入酶底比3％的Alcalase 2.4L，搅拌3分钟后，打开蠕动泵，运行15分钟后，所述蠕动泵运行期间需要不断向酶膜反应器系中加入lmol/L NaOH和恒温去离子水，维持酶膜反应器pH值和体积恒定，然后关闭蠕动泵，然后在60℃恒温水浴振荡器中酶解2小时，沸水中灭酶利用100℃水浴中恒温20分钟或者采用高压蒸汽灭菌，将高压灭菌锅加热到121℃，气压为0.1MPa，加热时间为30分钟，取出迅速冷却；
步骤三：离心干燥：将步骤二完成后，用反应釜离心30分钟，所述反应釜的转速为4000r/min，取上清液冷冻干燥，即可制得。
其中，所述蠕动泵为BT300-2J蠕动泵。
其中，所述恒温水浴振荡器为多用途水浴恒温振荡器。
实施方式3
本发明提供一种利用酶膜反应器制备燕麦抗氧化肽的方法，该利用酶膜反应器制备燕麦抗氧化肽的方法：
该利用酶膜反应器制备燕麦抗氧化肽的方法步骤如下：
步骤一：pH调节：向酶膜反应器中加入2500mL的蛋白溶液，将蛋白溶液置于温度55℃水浴中预热处理37分钟，处理后用0.75mol/L氢氧化钠溶液调节pH至8.5；
步骤二：上清液提取：向酶膜反应器中加入酶底比3％的Alcalase 2.4L，搅拌3分钟后，打开蠕动泵，运行17.5分钟后，所述蠕动泵运行期间需要不断向酶膜反应器系中加入lmol/L NaOH和恒温去离子水，维持酶膜反应器pH值和体积恒定，然后关闭蠕动泵，然后在55℃恒温水浴振荡器中酶解2.5小时，沸水中灭酶利用100℃水浴中恒温15分钟或者采用高压蒸汽灭菌，将高压灭菌锅加热到121℃，气压为0.1MPa，加热时间为20分钟，取出迅速冷却；
步骤三：离心干燥：将步骤二完成后，用反应釜离心37分钟，所述反应釜的转速为3700r/min，取上清液冷冻干燥，即可制得。
其中，所述蠕动泵为BT300-2J蠕动泵。
其中，所述恒温水浴振荡器为多用途水浴恒温振荡器。
实施方式4
本发明提供一种利用酶膜反应器制备燕麦抗氧化肽的方法，该利用酶膜反应器制备燕麦抗氧化肽的方法：
该利用酶膜反应器制备燕麦抗氧化肽的方法步骤如下：
步骤一：pH调节：向酶膜反应器中加入2500mL的蛋白溶液，将蛋白溶液置于温度55℃水浴中预热处理37分钟，处理后用0.65mol/L氢氧化钠溶液调节pH至8.5；
步骤二：上清液提取：向酶膜反应器中加入酶底比3％的Alcalase 2.4L，搅拌3分钟后，打开蠕动泵，运行19分钟后，所述蠕动泵运行期间需要不断向酶膜反应器系中加入lmol/L NaOH和恒温去离子水，维持酶膜反应器pH值和体积恒定，然后关闭蠕动泵，然后在50℃恒温水浴振荡器中酶解2小时，沸水中灭酶利用100℃水浴中恒温20分钟或者采用高压蒸汽灭菌，将高压灭菌锅加热到121℃，气压为0.1MPa，加热时间为23分钟，取出迅速冷却；
步骤三：离心干燥：将步骤二完成后，用反应釜离心32分钟，所述反应釜的转速为3900r/min，取上清液冷冻干燥，即可制得。
其中，所述蠕动泵为BT300-2J蠕动泵。
其中，所述恒温水浴振荡器为多用途水浴恒温振荡器。
将上述四个实施方式所制得的制备燕麦抗氧化肽分别编号为1、2、3和4，再取市面上常规的燕麦抗氧化肽编号为5，将五种燕麦抗氧化肽的作用效果进行对比，具体参见下表：
综合以上实施方式，该利用酶膜反应器制备燕麦抗氧化肽的方法能够有效的提高蛋白肽的抗氧化活性，利用酸性pH提高DPPH自由基清除率，通过煮沸灭菌条件有利于清除DPPH自由基，对燕麦蛋白肽还原力有较大增加的综合效果。
虽然在上文中已经参考实施方式对本发明进行了描述，然而在不脱离本发明的范围的情况下，可以对其进行各种改进并且可以用等效物替换其中的部件。尤其是，只要不存在结构冲突，本发明所披露的实施方式中的各项特征均可通过任意方式相互结合起来使用，在本说明书中未对这些组合的情况进行穷举性的描述仅仅是出于省略篇幅和节约资源的考虑。因此，本发明并不局限于文中公开的特定实施方式，而是包括落入权利要求的范围内的所有技术方案。
Claims (8)
1.一种利用酶膜反应器制备燕麦抗氧化肽的方法，其特征在于：该利用酶膜反应器制备燕麦抗氧化肽的方法步骤如下：
步骤一：pH调节：向酶膜反应器中加入2500mL的蛋白溶液，将蛋白溶液置于温度50-60℃水浴中预热处理30-45分钟，处理后用0.5-1mol/L氢氧化钠溶液调节pH至8.5；
步骤二：上清液提取：向酶膜反应器中加入Alcalase，搅拌3分钟后，打开蠕动泵，运行15-20分钟后，关闭蠕动泵，然后在50-60℃恒温水浴振荡器中酶解2-3小时，沸水中灭酶或者采用高压蒸汽灭菌，取出迅速冷却；
步骤三：离心干燥：将步骤二完成后，用反应釜离心30-45分钟，取上清液冷冻干燥，即可制得。
2.根据权利要求1所述的一种利用酶膜反应器制备燕麦抗氧化肽的方法，其特征在于：所述蠕动泵运行期间需要不断向酶膜反应器系中加入lmol/L NaOH和恒温去离子水，维持酶膜反应器pH值和体积恒定。
3.根据权利要求1所述的一种利用酶膜反应器制备燕麦抗氧化肽的方法，其特征在于：所述Alcalase为酶底比3％的Alcalase 2.4L。
4.根据权利要求1所述的一种利用酶膜反应器制备燕麦抗氧化肽的方法，其特征在于：所述反应釜的转速为3500-4000r/min。
5.根据权利要求1所述的一种利用酶膜反应器制备燕麦抗氧化肽的方法，其特征在于：所述蠕动泵为BT300-2J蠕动泵。
6.根据权利要求1所述的一种利用酶膜反应器制备燕麦抗氧化肽的方法，其特征在于：所述恒温水浴振荡器为多用途水浴恒温振荡器。
7.根据权利要求1所述的一种利用酶膜反应器制备燕麦抗氧化肽的方法，其特征在于：所述高压蒸汽灭菌采用的是将高压灭菌锅加热到121℃，气压为0.1MPa，加热时间为15-30分钟，取出迅速冷却。
8.根据权利要求1所述的一种利用酶膜反应器制备燕麦抗氧化肽的方法，其特征在于：所述沸水中灭酶利用100℃水浴中恒温10-20分钟。
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