CN110632044B - 一种基于aie荧光探针检测细菌抗药性的方法 - Google Patents

一种基于aie荧光探针检测细菌抗药性的方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及微量检测技术领域，具体涉及一种基于AIE荧光探针检测细菌抗药性的方法。包括如下步骤：将待测菌株用生理盐水配置至麦氏浊度为0.5的菌悬液；吸取6PD‑DPAN荧光探针和上述菌悬液稀释至MOPS缓冲液中，制得混合液；向无菌96孔板中的每个孔均加入上述的混合液，向除第一孔外的每个孔中均加入不同浓度的抗菌药物溶液，制得若干个待测样，检测并记录初始荧光强度值；将上述带有待测样的无菌96孔板进行孵育，每孵育一段时间，检测并记录待测样的荧光强度值。本发明的检测方法简单，易于实现，利用6PD‑DPAN荧光探针的聚集诱导发光特性和高光稳定性，可实时监测6PD‑DPAN荧光探针与菌株结合的动力学过程。

Description

一种基于AIE荧光探针检测细菌抗药性的方法
技术领域
本发明涉及微量检测技术领域，具体涉及一种基于AIE荧光探针检测细菌抗药性的方法。
背景技术
细菌药敏试验(AST)是提供临床病原菌对不同抗菌药物题外敏感程度信息的重要手段，对指导临床用药、监测治疗效果、发现耐药菌株以及新型抗菌药物的研发与筛选具有重要的价值。但传统的细菌药敏试验(AST)都是基于生长的药敏试验方法，依赖于微生物的生长，因此，需要24-48小时或者更长的时间来达到目测或者仪器能分辨的程度。而菌株很难正确和可重复性地确定生长重点，加上结果判断主观性强、无法测出MIC值(纸片扩散法)、适用药物及菌种有限等缺陷，无法为临床带来及时的结果反馈，影响危机重症患者精准用药的同时，也很大程度地影响了药敏测试的临床价值。
而为了避免这些问题，目前有报道过几种其他试验方法，包括荧光素霉标记噬菌体法、电化学检测法、实时PCR法和基于纳米颗粒的方法等，但这些方法同样存在缺点：仪器昂贵、成本高、操作复杂、灵敏度低、重复性高等，限制了上述方法的应用。因而，发展可快速、简便、准确的新型细菌药物敏感试验的快速检测方法，具有迫切而重要的临床价值。
发明内容
为了克服现有技术中存在的缺点和不足，本发明的目的在于提供一种基于AIE荧光探针检测细菌抗药性的方法，该方法简单，易于实现，利用实时动态跟踪方式，可以实时监测6PD-DPAN荧光探针与菌株结合的动力学过程，并通过6PD-DPAN荧光探针的聚集诱导发光特性，且光稳定性高，能实现通过荧光强度变化实时观测6PD-DPAN荧光探针对菌株的作用过程。
本发明的目的在于提供一种应用于基于AIE荧光探针检测细菌抗药性的方法的检测系统，该检测系统能实时动态跟踪、监测6PD-DPAN荧光探针与菌株结合的动力学过程，实现快速、准确的细菌药物检测，实用性高。
本发明的目的通过下述技术方案实现：一种基于AIE荧光探针检测细菌抗药性的方法，包括如下步骤：
步骤(1)：将待测菌株用质量分数为0.85％的生理盐水配置至麦氏浊度为0.5的菌悬液；
步骤(2)：吸取1mL的6PD-DPAN荧光探针和10μL步骤(1)的菌悬液稀释至10mL的MOPS缓冲液中，摇匀，制得混合液；
步骤(3)：向一次性无菌96孔板中的每个孔均加入50μL步骤(2)制得的混合液，然后再向一次性无菌96孔板中的第一孔加入50μL的MOPS缓冲液，制得对照样，并向除第一孔外的其余每个孔中均加入50μL不同浓度的抗菌药物溶液，制得若干个待测样，利用透明膜封板，检测并记录6PD-DPAN荧光探针与混合液中菌株结合后的初始荧光强度值；
步骤(4)：将上述带有待测样的一次性无菌96孔板置于恒温35℃的孵育设备中，每孵育15min，则将一次性无菌96孔板从孵育设备中取出并置于荧光检测设备中，检测并记录待测样的荧光强度值。
本发明通过上述步骤对细菌药物浓度进行检测，方法简单，易于实现，快速、准确，利用实时动态跟踪方式，可以通过荧光强度变化实时监测6PD-DPAN荧光探针与菌株结合的动力学过程，克服了传统采用染料对细菌染色，并由于高密度染料染色时发生自我淬灭的问题；并通过6PD-DPAN荧光探针能与多种细菌结合引起聚集诱导发光的特征，对细菌具有敏感的荧光响应，其聚集态发光效率高，光稳定性高，荧光强度与细菌量呈正比例，通过荧光强度的变化呈现、检测菌株对抗菌药物的抗药性。
而本发明通过设置对照样，作为阳性对照样品，用以证明细菌在没有抗菌药物作用下的正常生长动力学。
而添加抗菌药物的情况下，细菌的增殖受药物抑制，6PD-DPAN荧光探针的荧光强度变弱；而在没有添加抗菌药物的情况下，细菌则呈指数生长，6PD-DPAN荧光探针发出较强的荧光反应，荧光强度较高；本发明采用的6PD-DPAN荧光探针对细菌的生长不造成影响，并通过荧光强度的变化，测试细菌对抗菌药物的敏感性，即耐药性(抗药性)。
本发明中，通过检测刚加入抗菌药物时，6PD-DPAN荧光探针与细菌结合的最初始荧光强度值，以及孵育结束后的最终荧光强度值，得到荧光强度的相对变化，具体采用以下方程计算荧光强度的相对变化值：
RCFRET＝(FRETmax/FRET0)-(FRET1/FRET0)；
其中，RCFRET：代表荧光强度的相对变化值；
FRETmax：6PD-DPAN荧光探针与混合液中菌株结合后的最大荧光强度值；
FRET0：6PD-DPAN荧光探针与混合液中菌株完全结合后的初始荧光强度值；
FRET1：加入抗菌药物后，每孵育15min后，6PD-DPAN荧光探针与混合液中菌株结合后的荧光强度值；每孵育15min后检测一次，得出不同时刻的多个荧光强度值FRET1。
而最终的荧光强度值越大，或是不同时刻的多个荧光强度值FRET1逐渐增大，则RCFRET值越小或逐渐减小，证明与6PD-DPAN荧光探针结合的菌株越多，其数量在增加，说明菌株的增殖不受抗菌药物所抑制，敏感性较低，呈耐药性。相反，若最终的荧光强度值或是不同时刻的多个荧光强度值FRET1均变化不明显、变化不大，证明菌株的增殖受到抗菌药物的抑制，说明该菌株对相应的抗菌药物敏感性较高，呈非耐药性。
优选的，所述步骤(3)中，所述6PD-DPAN荧光探针的分子式如下所示：
Figure BDA0002186658880000041
优选的，所述步骤(3)中，所述6PD-DPAN荧光探针的Stokes位移值为134nm，Zeta电位为35.9mV，粒径为81.55nm。
本发明采用的上述6PD-DPAN荧光探针，具有聚集诱导发光特性，并对细菌具有敏感的荧光响应，其聚集态发光效率高，且光稳定性高，荧光强度与细菌量成正比呈现，能实现通过荧光强度变化实时观测6PD-DPAN荧光探针对菌株的作用过程，灵敏度高，准确性高。
优选的，所述步骤(4)中，检测荧光强度值的具体步骤为：荧光检测设备调节为自动实时连续荧光检测模式，每孵育15min，则测试其荧光强度值；所述荧光检测设备的检测参数为：温度35℃恒温，激发波段为457-477nm，检测并记录波段为490-610nm的荧光强度值。
本发明的另一目的通过下述技术方案实现：一种应用于上述基于AIE荧光探针检测细菌抗药性的方法的检测系统，按照使用顺序包括依次连接的加样系统、孵育及检测系统、数据处理系统，所述加样系统、孵育及检测系统、数据处理系统均与电源电性连接；
所述孵育及检测系统包括用于孵育待测菌株的孵育设备、用于检测待测菌株中荧光强度值的荧光检测设备、用于将装有待测样的容器从所述孵育设备运输至所述荧光检测设备的机械手臂、用于驱动所述机械手臂的气缸、用于监测并调控温度的温度调控器以及用于控制所述孵育设备、荧光检测设备、机械手臂、温度调控器、数据处理系统运作的控制器。
本发明通过采用上述检测系统，能实时动态跟踪、监测6PD-DPAN荧光探针与菌株结合的动力学过程，实现快速、准确的细菌药物检测，实用性高；其中，通过机械手臂将装有待测样的容器从孵育系统运输至荧光系统，使得能实时动态跟踪、监测6PD-DPAN荧光探针与菌株结合的动力学过程，提高检测的快速性和实时性。其中，所述机械手臂通过气缸驱动其操作，将装有待测样的容器从所述孵育设备运输至所述荧光检测设备进行荧光强度值检测；而温度调控器能及时监测孵育及检测系统中的温度变化，并传输至控制器，若温度出现过高或过低，控制器则发出温度调控指令至温度调控器进行温度调控，保证孵育及检测系统的温度维持于35℃恒温。
优选的，所述加样系统包括一次性无菌96孔板和若干个用于向所述一次性无菌96孔板定量添加样液的定量加样器；所述孵育设备为板条架。
本发明通过采用一次性无菌96孔板，能同时对多个菌株、不同浓度的菌株进行孵育，提高检测的快速性和高效性，而采用的定量加样器能根据实际加样的用量进行调控，准确添加用料，如步骤(3)中准确向一次性无菌96孔板中的每个孔均加入50μL的混合液、准确向一次性无菌96孔板中的第一孔中加入50μL的MOPS缓冲液、准确向一次性无菌96孔板中除第一孔外的其余每个孔中均加入50μL不同浓度的抗菌药物溶液，提高检测的准确性。而添加有样液的一次性无菌96孔板，可通过人工操作将其放置于板条架中进行孵育。
优选的，所述荧光检测设备包括用于发射检测光源的光源发射器、用于滤除所述光源发射器发射的激发光源中杂散光的激发光滤光片、用于滤除待测样发射的荧光光源中杂散光的荧光滤光片、用于检测荧光强度的检测器；所述机械手臂用于将添加有样液的一次性无菌96孔板从孵育设备中夹持并运输至光源发射器下方；所述光源发射器、检测器均与所述控制器电性连接。具体地，所述激发光滤光片设置于所述光源发射器的光源发射端，所述荧光滤光片设置于所述检测器的光源接收端。
优选的，所述数据处理系统包括数据处理单元和显示器，所述检测器的信号输出端通过信号放大器传输至所述数据处理单元，所述数据处理单元的信号输出端与所述显示器的信号输入端连接；所述信号放大器、数据处理单元、显示器均与所述控制器电性连接。
本发明设置的孵育及检测系统和数据处理系统，其工作过程为：板条架中放置有装载若干个待测样的一次性无菌96孔板，控制器发出指令至孵育及检测系统，控制机械手臂将一次性无菌96孔板运输至待测样放置板上，然后控制器调控检测条件，并发出激发光指令至光源发射器，启动光源发射器发射激光光源，激光光源经过激发光滤光片后进入含有6PD-DPAN荧光探针的待测样中，在激发光的照射下，6PD-DPAN荧光探针发出荧光光源，而发出的荧光光源则经过荧光滤光片滤除荧光光源中的杂散光，然后进入检测器中，检测器检测荧光光源的强度，并将荧光强度值信号输出，经过信号放大器输入至数据处理单元进行数据处理，经处理后的数据经由显示器显示出检测结果。整个检测过程方便快捷，检测灵敏度高，准确性高，能通过荧光强度变化可实时监测6PD-DPAN荧光探针与菌株结合的动力学过程、以及对菌株的作用过程。
本发明的有益效果在于：本发明基于AIE荧光探针检测细菌抗药性的方法，操作简单，易于实现，利用实时动态跟踪方式，可以通过荧光强度变化实时监测6PD-DPAN荧光探针与菌株结合的动力学过程，并通过6PD-DPAN荧光探针与多种细菌结合引起聚集诱导发光的特性，对细菌具有敏感的荧光响应，其聚集态发光效率高，光稳定性高，荧光强度与细菌量呈正比例，通过荧光强度的变化呈现、检测菌株对抗菌药物的抗药性。
本发明应用于基于AIE荧光探针检测细菌抗药性的方法的检测系统，能实时动态跟踪、监测6PD-DPAN荧光探针与菌株结合的动力学过程，实现快速、准确的细菌药物检测，实用性高。
附图说明
图1是本发明的检测步骤流程图；
图2是本发明所述检测系统的结构图；
图3是本发明的控制原理框架图；
图4是本发明实施例1中，6PD-DPAN荧光探针作用于大肠埃希菌株的荧光镜图；
图5是本发明实施例1中，6PD-DPAN荧光探针作用于大肠埃希菌株(对照样品A)的荧光强度变化曲线图；
图6是本发明实施例1中，6PD-DPAN荧光探针作用于大肠埃希菌株时，通过荧光强度测得抗菌药物浓度与大肠埃希菌株菌量的关系图；
图7是本发明实施例2中，6PD-DPAN荧光探针作用于肺炎克雷伯菌株的荧光镜图；
图8是本发明实施例3中，6PD-DPAN荧光探针作用于金黄色葡萄球菌株的荧光镜图。
附图标记为：1—加样系统、11—一次性无菌96孔板、12—定量加样器、2—孵育及检测系统、21—孵育设备、22—荧光检测设备、221—光源发射器、222—激发光滤光片、223—荧光滤光片、224—检测器、23—机械手臂、24—气缸、25—温度调控器、26—控制器、3—数据处理系统、31—信号放大器、32—数据处理单元、33—显示器。
具体实施方式
为了便于本领域技术人员的理解，下面结合实施例及附图1～8对本发明作进一步的说明，实施方式提及的内容并非对本发明的限定。
实施例1
见图1、4，一种基于AIE荧光探针检测细菌抗药性的方法，包括如下步骤：
步骤(1)：将大肠埃希菌株用生理盐水配置至麦氏浊度为0.5的菌悬液；
步骤(2)：吸取1mL的6PD-DPAN荧光探针和10μL步骤(1)的菌悬液稀释至10mL的MOPS缓冲液中，摇匀，制得混合液；
步骤(3)：向一次性无菌96孔板11中的每个孔均加入50μL步骤(2)制得的混合液，然后再向一次性无菌96孔板11中的第一孔中加入50μL的MOPS缓冲液，制得对照样，并向除第一孔外的其余每个孔中均加入50μL不同浓度的抗菌药物溶液，制得若干个待测样，利用透明膜封板，检测并记录6PD-DPAN荧光探针与混合液中菌株结合后的初始荧光强度值FRET0；
步骤(4)：将上述带有待测样的一次性无菌96孔板11置于恒温35℃的孵育设备21中，每孵育15min，则将一次性无菌96孔板11从孵育设备21中取出并置于荧光检测设备22中，检测并记录待测样每个时刻的荧光强度值FRET1以及最终的荧光强度值，并计算荧光强度变化值。
所述步骤(3)中，所述6PD-DPAN荧光探针的分子式如下所示：
Figure BDA0002186658880000081
所述步骤(3)中，所述6PD-DPAN荧光探针的Stokes位移值为134nm，Zeta电位为35.9mV，粒径为81.55nm。
所述步骤(3)中，对于大肠埃希菌株的抗菌药物溶液，可采用如下浓度的抗菌药物，按照相应抗菌药物及相应的浓度加入至一次性无菌96孔板11中：
Figure BDA0002186658880000082
Figure BDA0002186658880000091
Figure BDA0002186658880000101
所述步骤(4)中，检测荧光强度值的具体步骤为：荧光检测设备22调节为自动实时连续荧光检测模式，每孵育15min，则测试其荧光强度值；所述荧光检测设备22的检测参数为：温度35℃恒温，激发波段为457-477nm，检测并记录波段为490-610nm的荧光强度值。
如图4，为未添加抗菌药物情况下，6PD-DPAN荧光探针与大肠埃希菌株结合后的荧光电镜图，反映6PD-DPAN荧光探针能与大肠埃希菌株结合，起到荧光反应。
如图5，为未添加抗菌药物情况下，大肠埃希菌株在37℃下生长4h，采用荧光检测方法检测菌株量对应的荧光强度变化曲线图，即为对照样品A的荧光强度变化曲线图，表明6PD-DPAN荧光探针并不影响大肠埃希菌株的生长，且能与大肠埃希菌株结合，利用6PD-DPAN荧光探针的聚集诱导发光特征，检测荧光强度，反映大肠埃希菌株的生长变化；并反映了随着大肠埃希菌株的生长、增殖，其菌量增长，荧光强度也相对增长，即荧光强度与菌株量呈正比关系，以表明本发明的荧光探针法能实时动态跟踪、检测6PD-DPAN荧光探针与菌株结合的动力学过程，能实现快速、准确的细菌药物检测。
如图6，本实施例选用上表中第2项的抗菌药物氨苄西林以及第5项的抗菌药物头孢吡肟为例，进行大肠埃希菌株的耐药性(抗药性)测试，而实验得知荧光强度与菌株量呈正比关系，因而由测得的荧光强度值则直接反映菌株量，故通过荧光强度值的变化，直观地呈现菌株对于抗菌药物的耐药性。对于图6所示，氨苄西林药物浓度提升至32μg/ml，大肠埃希菌的菌量变化不大，证明大肠埃希菌对氨苄西林耐药；而头孢吡肟在1μg/ml时，大肠埃希菌的菌量已经接近0，证明大肠埃希菌对头孢吡肟是敏感的，该结果与孵育18小时的结果符合。
而对于本实施例大肠埃希菌株对其他不同浓度的不同抗菌药物的抗药性，同样按照上述的方法进行检测荧光强度，根据荧光强度的变化值来反映抗药性，在此不再赘述。
实施例2
见图1、5，一种基于AIE荧光探针检测细菌抗药性的方法，包括如下步骤：
步骤(1)：将肺炎克雷伯菌株用生理盐水配置至麦氏浊度为0.5的菌悬液；
步骤(2)：吸取1mL的6PD-DPAN荧光探针和10μL步骤(1)的菌悬液稀释至10mL的MOPS缓冲液中，摇匀，制得混合液；
步骤(3)：向一次性无菌96孔板11中的每个孔均加入50μL步骤(2)制得的混合液，然后再向一次性无菌96孔板11中的第一孔中加入50μL的MOPS缓冲液，制得对照样，并向除第一孔外的其余每个孔中均加入50μL不同浓度的抗菌药物溶液，制得若干个待测样，利用透明膜封板，检测并记录6PD-DPAN荧光探针与混合液中菌株结合后的初始荧光强度值FRET0；
步骤(4)：将上述带有待测样的一次性无菌96孔板11置于恒温35℃的孵育设备21中，每孵育15min，则将一次性无菌96孔板11从孵育设备21中取出并置于荧光检测设备22中，检测并记录待测样每个时刻的荧光强度值FRET1以及最终的荧光强度值，并计算荧光强度变化值。
所述步骤(1)中，生理盐水的质量分数为0.85％。
所述步骤(3)中，所述6PD-DPAN荧光探针的分子式如下所示：
Figure BDA0002186658880000121
所述步骤(3)中，所述6PD-DPAN荧光探针的Stokes位移值为134nm，Zeta电位为35.9mV，粒径为81.55nm。
所述步骤(3)中，在制备待测样的同时，在一次性无菌96孔板11中制备对照样品A和对照样品B，所述对照样品A为含有1mL的6PD-DPAN荧光探针和100μL混合液，所述对照样品B为仅含有10mL的MOPS缓冲液，然后均利用透明膜封板。
所述步骤(3)中，对于肺炎克雷伯菌株的抗菌药物溶液，可采用如下浓度的抗菌药物，按照相应抗菌药物及相应的浓度加入至一次性无菌96孔板11中：
Figure BDA0002186658880000122
Figure BDA0002186658880000131
所述步骤(4)中，检测荧光强度值的具体步骤为：荧光检测设备22调节为自动实时连续荧光检测模式，每孵育15min，则测试其荧光强度值；所述荧光检测设备22的检测参数为：温度35℃恒温，激发波段为457-477nm，检测并记录波段为490-610nm的荧光强度值。
如图7，为未添加抗菌药物情况下，6PD-DPAN荧光探针与肺炎克雷伯菌株结合后的荧光电镜图，反映6PD-DPAN荧光探针能与肺炎克雷伯菌株结合，起到荧光反应。
而对于本实施例肺炎克雷伯菌株对其他不同浓度的不同抗菌药物的抗药性，同样按照实施例1的方法进行检测荧光强度，根据荧光强度的变化值来反映抗药性，在此不再一一列举赘述。
实施例3
见图1、6，一种基于AIE荧光探针检测细菌抗药性的方法，包括如下步骤：
步骤(1)：将金黄色葡萄球菌株用生理盐水配置至麦氏浊度为0.5的菌悬液；
步骤(2)：吸取1mL的6PD-DPAN荧光探针和10μL步骤(1)的菌悬液稀释至10mL的MOPS缓冲液中，摇匀，制得混合液；
步骤(3)：向一次性无菌96孔板11中的每个孔均加入50μL步骤(2)制得的混合液，然后再向一次性无菌96孔板11中的第一孔中加入50μL的MOPS缓冲液，制得对照样，并向除第一孔外的其余每个孔中均加入50μL不同浓度的抗菌药物溶液，制得若干个待测样，利用透明膜封板，检测并记录6PD-DPAN荧光探针与混合液中菌株结合后的初始荧光强度值FRET0；
步骤(4)：将上述带有待测样的一次性无菌96孔板11置于恒温35℃的孵育设备21中，每孵育15min，则将一次性无菌96孔板11从孵育设备21中取出并置于荧光检测设备22中，检测并记录待测样每个时刻的荧光强度值FRET1以及最终的荧光强度值，并计算荧光强度变化值。
所述步骤(3)中，所述6PD-DPAN荧光探针的分子式如下所示：
Figure BDA0002186658880000151
所述步骤(3)中，所述6PD-DPAN荧光探针的Stokes位移值为134nm，Zeta电位为35.9mV，粒径为81.55nm。
所述步骤(3)中，对于金黄色葡萄球菌株的抗菌药物溶液，可采用如下浓度的抗生素药物，按照相应抗生素药物及相应的浓度加入至一次性无菌96孔板11中：
Figure BDA0002186658880000152
Figure BDA0002186658880000161
所述步骤(4)中，检测荧光强度值的具体步骤为：荧光检测设备22调节为自动实时连续荧光检测模式，每孵育15min，则测试其荧光强度值；所述荧光检测设备22的检测参数为：温度35℃恒温，激发波段为457-477nm，检测并记录波段为490-610nm的荧光强度值。
如图8，为未添加抗菌药物情况下，6PD-DPAN荧光探针与金黄色葡萄球菌株结合后的荧光电镜图，反映6PD-DPAN荧光探针能与金黄色葡萄球菌株结合，起到荧光反应。
而对于本实施例金黄色葡萄球菌株对其他不同浓度的不同抗菌药物的抗药性，同样按照实施例1的方法进行检测荧光强度，根据荧光强度的变化值来反映抗药性，在此不再一一列举赘述。
实施例4
见图2-3，一种应用于上述基于AIE荧光探针检测细菌抗药性的方法的检测系统，按照使用顺序包括依次连接的加样系统1、孵育及检测系统2、数据处理系统3，所述加样系统1、孵育及检测系统2、数据处理系统3均与电源电性连接；
所述孵育及检测系统2包括用于孵育待测菌株的孵育设备21、用于检测待测菌株中荧光强度值的荧光检测设备22、用于将装有待测样的容器从所述孵育设备21运输至所述荧光检测设备22的机械手臂23、用于驱动所述机械手臂23的气缸24、用于监测并调控温度的温度调控器25以及用于控制所述孵育设备21、荧光检测设备22、机械手臂23、温度调控器25、数据处理系统3运作的控制器26。
所述加样系统1包括一次性无菌96孔板11和若干个用于向所述一次性无菌96孔板11定量添加样液的定量加样器12；所述孵育设备21为板条架。
所述荧光检测设备22包括用于发射检测光源的光源发射器221、用于滤除所述光源发射器221发射的激发光源中杂散光的激发光滤光片222、用于滤除待测样发射的荧光光源中杂散光的荧光滤光片223、用于检测荧光强度的检测器24；所述机械手臂23用于将添加有样液的一次性无菌96孔板11从孵育设备21中夹持并运输至光源发射器221下方；所述光源发射器221、检测器24均与所述控制器26电性连接。
所述数据处理系统3包括数据处理单元32和显示器33，所述检测器24的信号输出端通过信号放大器31传输至所述数据处理单元32，所述数据处理单元32的信号输出端与所述显示器33的信号输入端连接；所述信号放大器31、数据处理单元32、显示器33均与所述控制器26电性连接。
上述实施例为本发明较佳的实现方案，除此之外，本发明还可以其它方式实现，在不脱离本发明构思的前提下任何显而易见的替换均在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种基于AIE荧光探针检测细菌抗药性的方法，其特征在于：包括如下步骤：
步骤（1）：将待测菌株用生理盐水配置至麦氏浊度为0.5的菌悬液；
步骤（2）：吸取1mL的6PD-DPAN荧光探针和10μL步骤（1）的菌悬液稀释至10mL的MOPS缓冲液中，摇匀，制得混合液；
步骤（3）：向一次性无菌96孔板中的每个孔均加入50μL步骤（2）制得的混合液，然后再向一次性无菌96孔板中的第一孔中加入50μL的MOPS缓冲液，制得对照样，并向除第一孔外的其余每个孔中均加入50μL不同浓度的抗菌药物溶液，制得若干个待测样，利用透明膜封板，检测并记录6PD-DPAN荧光探针与混合液中菌株结合后的初始荧光强度值；
步骤（4）：将上述带有待测样的一次性无菌96孔板置于恒温35℃的孵育设备中孵育，每孵育15min，则将一次性无菌96孔板从孵育设备中取出并置于荧光检测设备中，检测并记录待测样的荧光强度值；
所述步骤（3）中，所述6PD-DPAN荧光探针的分子式如下所示：
Figure 238156DEST_PATH_IMAGE001
。
2.根据权利要求1所述的一种基于AIE荧光探针检测细菌抗药性的方法，其特征在于：所述步骤（1）中，生理盐水的质量分数为0.85%。
3.根据权利要求1所述的一种基于AIE荧光探针检测细菌抗药性的方法，其特征在于：所述步骤（3）中，所述6PD-DPAN荧光探针的Stokes位移值为134nm，Zeta电位为35.9mV，粒径为81.55nm。
4.根据权利要求1所述的一种基于AIE荧光探针检测细菌抗药性的方法，其特征在于：所述步骤（4）中，检测荧光强度值的具体步骤为：荧光检测设备调节为自动实时连续荧光检测模式，每孵育15min，则测试其荧光强度值。
5.根据权利要求4所述的一种基于AIE荧光探针检测细菌抗药性的方法，其特征在于：所述荧光检测设备的检测参数为：温度35℃恒温，激发波段为457-477nm，检测并记录波段为490-610nm的荧光强度值。
6.一种应用于权利要求1-5任一项所述基于AIE荧光探针检测细菌抗药性的方法的检测系统，其特征在于：按照使用顺序包括依次连接的加样系统、孵育及检测系统、数据处理系统，所述加样系统、孵育及检测系统、数据处理系统均与电源电性连接；
所述孵育及检测系统包括用于孵育待测菌株的孵育设备、用于检测待测菌株中荧光强度值的荧光检测设备、用于将装有待测样的容器从所述孵育设备运输至所述荧光检测设备的机械手臂、用于驱动所述机械手臂的气缸、用于监测并调控温度的温度调控器以及用于控制所述孵育设备、荧光检测设备、机械手臂、温度调控器、数据处理系统运作的控制器。
7.根据权利要求6所述的一种应用于基于AIE荧光探针检测细菌抗药性的方法的检测系统，其特征在于：所述加样系统包括一次性无菌96孔板和若干个用于向所述一次性无菌96孔板定量添加样液的定量加样器；所述孵育设备为板条架。
8.根据权利要求7所述的一种应用于基于AIE荧光探针检测细菌抗药性的方法的检测系统，其特征在于：所述荧光检测设备包括用于发射检测光源的光源发射器、用于滤除所述光源发射器发射的激发光源中杂散光的激发光滤光片、用于滤除待测样发射的荧光光源中杂散光的荧光滤光片、用于检测荧光强度的检测器；所述机械手臂用于将添加有样液的一次性无菌96孔板从孵育设备中夹持并运输至光源发射器下方；所述光源发射器、检测器均与所述控制器电性连接。
9.根据权利要求8所述的一种应用于基于AIE荧光探针检测细菌抗药性的方法的检测系统，其特征在于：所述数据处理系统包括数据处理单元和显示器，所述检测器的信号输出端通过信号放大器传输至所述数据处理单元，所述数据处理单元的信号输出端与所述显示器的信号输入端连接；所述信号放大器、数据处理单元、显示器均与所述控制器电性连接。
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