CN110613719B - 一种喹啉化合物或药学上可接受的盐在制备晚期非小细胞肺癌伴脑转移的药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种喹啉化合物或药学上可接受的盐在制备抗非小细胞肺癌药物中的应用。所述喹啉化合物的结构如式Ⅰ所示；本发明所述喹啉化合物M1对于非小细胞肺癌细胞具有更低的IC₅₀值，对非小细胞肺癌细胞具有更好的抑制作用；同时，化合物M1更容易穿透脑屏障进入脑浆中，对于第四期非小细胞肺癌具有更好的疗效，可显著性的延长患者的无进展生存期，在临床上具有极大的应用前景，可针对第四期非小细胞肺癌，制备成为抗癌药物进行应用，延长患者的生存期。

Description

一种喹啉化合物或药学上可接受的盐在制备晚期非小细胞肺 癌伴脑转移的药物中的应用

技术领域

本发明涉及抗癌药物技术领域，更具体地，涉及一种喹啉化合物或药学上可接受的盐在制备晚期非小细胞肺癌伴脑转移的药物中的应用。

背景技术

肺癌(Lung cancer)一直是各项研究中重要的恶性肿瘤之一，全球每年有一百多万病人死于肺癌，是目前肿瘤导致死亡的主要病因之一。其中非小细胞肺癌(Non Small-Cell Lung Cancer，NSCLC)约占肺癌总数的80～85％，一直是临床医生以及各方研究者的关注热点，由于分子遗传学的进展，一些关键的驱动基因突变陆续在非小细胞肺癌中被鉴定，例如EGFR、KRAS、HER2、PIK3CA、BRAF突变和EML-ALK融合，ROS1基因重排等，而EGFR(Epidermal Growth Factor Receptor)突变在非小细胞肺癌的治疗中是一个极具吸引力的靶点，因为在罹患肺腺癌的东亚人种中，约30％-50％的患者携带EGFR突变。在非小细胞肺癌患者中，EGFR经常过度表达，其激活导致重要的下游信号通路激活，致使细胞过度增殖、存活以及血管的生成和转移，故临床上针对EGFR突变开发了众多疗效显著的小分子靶向药物，如吉非替尼(Geftinib，GEF)、Erlotinib(特罗凯，罗氏)以及埃克替尼(凯美纳，浙江贝达)。

但是目前应用的药物存在一定的耐药性问题，而且通过当非小细胞肺癌转移至脑部后，大多数的药物无法很好的穿过脑屏障，因此当非小细胞肺癌发展至第四期，即转移至脑部后，大多数的药物无法很好的发挥作用。

目前，仅有少数的药物针对癌细胞转移后具有作用，例如专利200880007473.7、201811503059.7、201080046094.6等中记载的化合物，但是目前具有这一作用的化合物或者药物极度缺乏，还有待于进一步的开发和研究。

发明内容

本发明的目的在于提供一种喹啉化合物或其药学上可接受的盐在制备抗非小细胞肺癌四期药物中的应用。本发明所述喹啉化合物对于非小细胞肺癌细胞具有很好的抑制作用，其IC50值为0.039μM，明显低于阳性对照Gefitinib；同时其还可很好的穿越脑屏障，其在脑浆中的浓度明显高于Gefitinib，相交于阳性对照，所述喹啉化合物对于四期非小细胞肺癌患者具有很好的效果。

本发明的上述目的是通过以下方案予以实现的：

一种喹啉化合物在制备抗非小细胞肺癌药物中的应用，所述喹啉化合物的结构如式I所示：

一种喹啉化合物药学上可接受的盐在制备治疗晚期非小细胞肺癌伴脑转移药物中的应用，所述喹啉化合物的结构如式I所示：

优选地，所述喹啉化合物或药学上可接受的盐在制备治疗晚期非小细胞肺癌伴脑转移药物中的应用。

优选地，所述喹啉化合物药学上可接受的盐为所述喹啉化合物与酸或碱反应制备得到。

优选地，所述酸为甲磺酸、马来酸、盐酸、磷酸、枸橼酸或氢溴酸等；所述碱为氢氧化钠、氢氧化钙、氢氧化钾、氢氧化锌或葡甲胺等。

优选地，所述喹啉化合物或其药学上可接受的盐与抗癌药物的混配应用。

本发明同时还保护一种抗癌药物，包含有如式I所示化合物或其药学上可接受的盐；

优选地，所述抗癌药物可添加常规辅料制备成为可临床接受的剂型。

优选地，所述抗癌药物的剂型为片剂、颗粒剂、胶囊或粉剂等。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明所述喹啉化合物M1对于非小细胞肺癌细胞具有更低的IC₅₀值，对非小细胞肺癌细胞具有更好的抑制作用；同时，化合物M1更容易穿透脑屏障进入脑浆中，对于第四期非小细胞肺癌具有更好的疗效，可显著性的延长患者的无进展生存期，在临床上具有极大的应用前景，可针对第四期非小细胞肺癌，制备成为抗癌药物进行应用，延长患者的生存期。

附图说明

图1为化合物M1与EGFR L858R相互之间作用的示意图。

图2为非小细胞肺癌细胞经不同浓度的化合物M1或吉非替尼处理后的细胞活性图。

图3为化合物M1在脑浆和血液中的分布比例。

图4为化合物M1对非小细胞肺癌患者的中位无进展生存期的作用。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做出进一步地详细阐述，所述实施例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。

实施例1

喹啉化合物M1的结构如I所示：

其分子式为C₂₂H₂₂Cl F N₄O₄；分子量为460.89；名称为4-[3-[[4-[(3-Chloro-4-fluorophenyl)amino]-7-methoxy-6-quinazolinyl]oxy]propyl]-3-morpholinone。

以下实施例采用的M1由海纳孚生物科技有限公司提供。

1、作用机理模拟

通过计算机辅助药物设计，采用Molecular Operating Environment(2014版)，发现化合物M1与EGFR L858R存在强烈的相互作用，其示意图如图1所示。从图1中可知，化合物M1与EGFR激酶磷酸化区域的疏水区发生较强的相互作用，抑制EGFR的磷酸化，进一步抑制信号下游的信号转导；其中Cys797、Gly719、Ser720、Glu762氨基酸等与M1存在强烈的polar作用；与Glu762和Asp855发生较强acidic反应等。

实施例2测试化合物M1对非小细胞肺癌细胞的作用

测试化合物M1对非小细胞肺癌细胞的作用，具体的测试过程为：

1、精密称取待测化合物M1 10mg，加DMSO配置成为100mM储备液，以Gefitinib(99.8％，加拿大，TRC)为阳性对照，其配置过程同化合物M1。

2、细胞增殖：以人肺癌细胞PC9为测试对象

(1)复苏：将PC9其37℃水浴箱，手工慢摇恒温2～3min复苏，复苏后1000rpm离心4min，吸去上清加入10mL含15％胎牛血清RPM1640培养基，混匀后注入细胞培养瓶，5％CO₂温箱37℃培养；

(2)传代：对数增长期汇合度80％-90％的细胞可以传代，2mL PBS漂洗两次，加入0.25％胰酶1.0mL，于37℃孵箱孵育5min；加入3.5mL终止液，吹打细胞使其脱落并单个化，再移至15mL离心管，室温1000rpm离心4min，弃上清，加入完全培养基，混匀后分瓶培养，细胞隔日可以用PBS清洗后更换培养基。

3、测试过程

①种板：在96孔板中加入100μL(约1×10⁴)的细胞悬液，将培养板在培养箱预培养24小时(在37℃，5％CO₂的条件下)；

②给药：向培养板中加入100μL完全培养基以及分别含有不同浓度(10μM，1μM，0.1μM，0.01μM，0.001μM，0.0001μM)Gefitinib或化合物M1的RPM1640培养基；

③孵育：将培养板在培养箱继续培养72小时；

④测量：每孔加入10μL CCK-8溶液(尽量不要在孔中生成气泡)，将培养板在培养箱内孵育1小时，用酶标仪测定在450nm处的吸光度；

⑤注意：如果暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10μL 0.1M HCl溶液或者1％(W/V)SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下，在24小时内吸光度不会发生变化；

⑥结果计算：细胞的存活率：将各测试孔的OD值减去本底OD值(完全培养基加CCK-8，无细胞)，各重复孔的OD值取均数±SD。细胞的存活率以T/C％表示，T为加药细胞的OD值，C为对照细胞的OD值。

细胞存活率％＝(加药细胞OD/对照细胞OD)×100，求出T/C＝50％时的药物浓度(IC₅₀)或T/C＝10％时的药物浓度(IC₉₀)。

⑦采用Graphpad prism 6.0绘制细胞活性图，并计算药物的IC₅₀。采用Graphpadprism 6.0绘制细胞活性图，并计算药物的IC₅₀。

细胞活性图如图2所示，测得结果为化合物M1的IC₅₀为0.039μM，Gefitinib的IC₅₀为0.05μM；可见化合物M1的IC₅₀值显著低于Gefitinib，即化合物M1对于非小细胞肺癌细胞的抑制作用显著性地由于Gefitinib。

实施例3化合物M1在昆明小鼠的脑中分布特征

由于非小细胞肺癌发展至第四期后，癌细胞转移至脑部，因此药物需要穿过脑屏障，进入脑部，才能够发挥治疗作用。

为评价化合物M1对于第四期非小细胞肺癌的作用，化合物M1是否能够穿过脑屏障，进入脑部，以及化合物M1是否更容易穿透血脑屏障，通过测试化合物M1在脑部中的浓度来进行评价。

试验过程：4-6周龄昆明(KM)小鼠体重为20g(±2g)，实验前保持12h的光照；100只小鼠，随机分组，每个时间点5只；Gefitinib及化合物M1给药剂量均为50mg/kg，口服给药，分别在给药30min、1h、1.5h、2h、4h、6h、8h、12h、24h后，同一时间分别检测血浆和血脑屏障中吉非替尼和化合物M1的含量，其检测结果如表1所示。

表1血浆和血脑屏障中吉非替尼和化合物M1的含量

为探究化合物M1在生物体内的分布情况，因此采用口服给药的方式，从表1中可知，吉非替尼和化合物M1在脑部中的比例，给药4h前，二者的比例接近或相当，给药6h后，化合物M1在脑部中的比例明显高于吉非替尼，由此可见，化合物M1能够穿透血脑屏障，而且比吉非替尼更容易穿透血脑屏障，进入脑部，由此可说明，非小细胞肺癌发展至第四期后，当癌细胞转移至脑部时，化合物M1比吉非替尼的治疗效果更佳。

从给药至给药24h期间，通过计算AUC脑/AUC血浆的比值可作为其透过血脑屏障能力强弱的依据，检测结果如图3所示。从图中可知，化合物M1在脑中的比例显著高于Gefitinib；由于NSCLC患者(非小细胞肺癌患者)非常容易发生脑转移，严重缩短患者的生存期及无进展生存期(Progression-free survival，PFS)；而化合物M1相较于Gefitinib更容易进入血脑屏障，当非小细胞肺癌细胞转移至脑部后，化合物M1相较于Gefitinib具有更好的疗效，可针对第四期非小细胞肺癌，制备成为抗癌药物进行应用，延长患者的无进展生存期。

实施例4测试化合物M1对于非小细胞肺癌患者的中位无进展生存期的影响

本实验经过中山大学肿瘤防治中心伦理委员会审批通过，并已在ClinicalTrials.gov注册(NCT01994057)。

非小细胞肺癌患者(NSCLC患者)的选择，纳入排除标准为：

(1)纳入标准：

①组织学和细胞学确诊的Ⅲ期或Ⅳ期NSCLC患者；

②年龄18～75周岁；

③ECOG PS评分0～2分；

④运用Sanger测序法和ARMS-PCR检测肺癌原发灶和淋巴结转移灶后，鉴定的携带EGFR敏感型突变的NSCLC患者。

(2)排除标准：

①同时罹患其他恶性肿瘤的患者；

②患有不可控制的全身性疾病；

③活动性间质性肺疾病的患者；

④由于肝硬化或肝炎导致的严重肝功能不全患者(Child-Pugh分级标准C级，指标记分总和10-15分)。

结果如图4所示，以浓度的均数9ng/mL为分界，将NSCLC病人分为M1血浆高浓度组(C_M1≧9ng/mL)与M1血浆低浓度组(C_M1<9ng/mL)，两组的中位无进展生存期分别为25和16个月(P＝0.0138)，具有显著的差别(如图4所示)，效果存在明显的浓度依赖性。

最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，对于本领域的普通技术人员来说，在上述说明及思路的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动，这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。

Claims (3)

1.一种喹啉化合物或其药学上可接受的盐作为唯一活性成分在制备治疗晚期非小细胞肺癌伴脑转移的药物中的应用，其特征在于，所述喹啉化合物的结构如式Ⅰ所示：

2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述喹啉化合物药学上可接受的盐为所述喹啉化合物与酸或碱反应制备得到。

3.根据权利要求2所述应用，其特征在于，所述酸为甲磺酸、马来酸、盐酸、磷酸、枸橼酸或氢溴酸；所述碱为氢氧化钠、氢氧化钙、氢氧化钾、氢氧化锌或葡甲胺。

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