CN110607245A - 一种灵芝虫草胶囊及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及食品、保健和保健食品加工及应用领域，更具体地涉及到一种灵芝虫草胶囊及其制备方法。所述灵芝虫草胶囊的制备原料按重量份计，包括50～60份灵芝菌丝体和40～50份虫草菌丝体；所述虫草菌丝体为蝙蝠蛾拟青霉菌丝体和/或蝙蝠蛾被毛孢菌丝体。本发明提供一种灵芝虫草胶囊，通过灵芝菌丝体和虫草菌丝体的共同作用，可有效达到缓解人们疲劳、增加免疫力的作用；其中灵芝菌丝体和虫草菌丝体主要有效成分是多糖、腺苷和三萜类物质，本发明通过对灵芝菌丝体和虫草菌丝体的培养，以及所述灵芝虫草胶囊的制备方法的控制，可促进多糖和腺苷等有效成分的产量，防止制备过程中对有效成分的破坏。

Description

一种灵芝虫草胶囊及其制备方法

技术领域

本发明涉及食品、保健和保健食品加工及应用领域，更具体地，本发明涉及一种灵芝虫草胶囊及其制备方法。

背景技术

灵芝为担子菌纲，多孔菌科灵芝属真菌，是重要的食药用真菌。灵芝具有多种有效成分，如灵芝多糖、灵芝三萜、灵芝腺苷、微量元素、氨基酸和生物碱等，对抗病毒、抗肿瘤、抗氧化、神经衰弱、增强免疫力、降低高血压、延缓衰老等都具有良好的协同治疗作用。冬虫夏草简称虫草，是一种传统的名贵滋补中药材，虫草中含有虫草多糖、虫草腺苷、虫草酸、超氧化物歧化酶(SOD)等多种有效成分，有调节免疫系统功能、抗肿瘤、抗疲劳等多种功效。将灵芝和虫草用作保健品，如灵芝虫草胶囊中，有利于起到缓解人们疲劳、增强免疫力的作用。

随着资源的紧缺，通过培养灵芝菌丝体和虫草菌丝体代替灵芝和虫草是一个重要的途径，且尤其是发现天然虫草中重金属含量过多，但目前在灵芝菌丝体和虫草菌丝体的培养过程中，如何增加菌丝体的生长以及有效成分，如多糖和腺苷的产量，是一个重要问题，另外，在灵芝菌丝体和虫草菌丝体中提取有效成分的过程中，往往存在提取效率低，有效成分被破环等现象。

发明内容

为了解决上述问题，本发明第一个方面提供了一种灵芝虫草胶囊，所述灵芝虫草胶囊的制备原料按重量份计，包括50～60份灵芝菌丝体和40～50份虫草菌丝体；所述虫草菌丝体为蝙蝠蛾拟青霉菌丝体和/或蝙蝠蛾被毛孢菌丝体。

作为本发明一种优选的技术方案，所述灵芝菌丝体的制备方法包括以下步骤：

种子液培养：将灵芝菌接入种子培养基中，装液量为50～60mL/100mL，在28～30℃，150～200r/min培养6～7天，得到所述灵芝菌种子液；

发酵液培养：将所述灵芝菌种子液接入灵芝菌发酵培养基中，接种量为6～8％，装液量为300～350mL/500mL，在28～30℃，200～250r/min培养6～7天，得到所述灵芝菌丝体发酵液；

干燥：将所述灵芝菌丝体发酵液离心沉淀、冷冻干燥，得到所述灵芝菌丝体。

作为本发明一种优选的技术方案，所述灵芝菌发酵培养基的制备原料按重量百分数计，包括2～2.5％碳源、3～4％燕麦、0.01～0.2％无机盐和余量的水。

作为本发明一种优选的技术方案，所述虫草菌丝体的制备方法包括以下步骤：

种子液培养：将虫草菌接入种子培养基，装液量为40～50mL/100mL，在25～28℃，150～200r/min下培养3～4天，得到虫草菌种子液；

发酵液培养：将所述虫草菌种子液接入虫草菌发酵培养基中，接种量为5～8％，装液量为100～150mL/250mL，在25～28℃、400～500r/min下发酵5～6天，得到虫草菌丝体发酵液；

干燥：将所述虫草菌丝体发酵液离心沉淀、冷冻干燥，得到所述虫草菌丝体。

作为本发明一种优选的技术方案，所述虫草菌发酵培养基的制备原料按重量百分数计，包括2～3％碳源、2～3％氮源、2～3％燕麦、0.1～0.3％无机盐和余量的水。

作为本发明一种优选的技术方案，所述碳源选自蔗糖、葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、甘油中的一种或多种。

作为本发明一种优选的技术方案，所述氮源选自蛋白胨、酵母浸出物、牛肉膏、酵母膏中的一种或多种。

作为本发明一种优选的技术方案，所述无机盐选自锌盐、钾盐、镁盐、钙盐中的一种或多种。

作为本发明一种优选的技术方案，所述灵芝虫草胶囊的制备原料还包括助剂，所述助剂占所述灵芝菌丝体的1～3wt％，所述助剂选自碳酸钙、环糊精、硫酸镁、微晶纤维素中的一种或多种。

本发明第二个方面提供了一种如上所述的灵芝虫草胶囊的制备方法，包括以下步骤：

(1)超临界二氧化碳萃取：将所述灵芝菌丝体和虫草菌丝体混合，在15～30MPa、35～40℃进行超临界二氧化碳萃取，得到酯溶萃取物和滤渣；

(2)水萃取：将步骤(1)所述滤渣和水混合，在50～70℃下搅拌1～3h，所述滤渣和水的重量比为1：(8～15)，过滤，将滤液在60～80℃减压蒸馏，得到水溶萃取物，和酯溶萃取物混合，得到浸膏；

(3)将步骤(2)所述浸膏在30～50MPa下均质、造粒、真空干燥，得到灵芝虫草颗粒，并封装到胶囊中，得到所述虫草胶囊。

本发明与现有技术相比具有以下有益效果：本发明提供一种灵芝虫草胶囊，通过灵芝菌丝体和虫草菌丝体的共同作用，可有效达到缓解人们疲劳、增加免疫力的作用；其中灵芝菌丝体和虫草菌丝体主要有效成分主要是多糖、腺苷、三萜类物质，本发明通过控制灵芝菌丝体和虫草菌丝体的培养过程，可促进菌丝体的生长，且促进多糖和腺苷产量的增加；另外，通过控制本发明所述灵芝菌丝体和虫草菌丝体中有效成分的萃取方法，可高效萃取出多糖、腺苷以及灵芝酸、虫草酸等有效成分，且防止对有效成分的破坏。

具体实施方式

参选以下本发明的优选实施方法的详述以及包括的实施例可更容易地理解本发明的内容。除非另有限定，本文使用的所有技术以及科学术语具有与本发明所属领域普通技术人员通常理解的相同的含义。当存在矛盾时，以本说明书中的定义为准。

如本文所用术语“由…制备”与“包含”同义。本文中所用的术语“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其任何其它变形，意在覆盖非排它性的包括。例如，包含所列要素的组合物、步骤、方法、制品或装置不必仅限于那些要素，而是可以包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法、制品或装置所固有的要素。

连接词“由…组成”排除任何未指出的要素、步骤或组分。如果用于权利要求中，此短语将使权利要求为封闭式，使其不包含除那些描述的材料以外的材料，但与其相关的常规杂质除外。当短语“由…组成”出现在权利要求主体的子句中而不是紧接在主题之后时，其仅限定在该子句中描述的要素；其它要素并不被排除在作为整体的所述权利要求之外。

当量、浓度、或者其它值或参数以范围、优选范围、或一系列上限优选值和下限优选值限定的范围表示时，这应当被理解为具体公开了由任何范围上限或优选值与任何范围下限或优选值的任一配对所形成的所有范围，而不论该范围是否单独公开了。例如，当公开了范围“1至5”时，所描述的范围应被解释为包括范围“1至4”、“1至3”、“1至2”、“1至2和4至5”、“1至3和5”等。当数值范围在本文中被描述时，除非另外说明，否则该范围意图包括其端值和在该范围内的所有整数和分数。

单数形式包括复数讨论对象，除非上下文中另外清楚地指明。“任选的”或者“任意一种”是指其后描述的事项或事件可以发生或不发生，而且该描述包括事件发生的情形和事件不发生的情形。

说明书和权利要求书中的近似用语用来修饰数量，表示本发明并不限定于该具体数量，还包括与该数量接近的可接受的而不会导致相关基本功能的改变的修正的部分。相应的，用“大约”、“约”等修饰一个数值，意为本发明不限于该精确数值。在某些例子中，近似用语可能对应于测量数值的仪器的精度。在本申请说明书和权利要求书中，范围限定可以组合和/或互换，如果没有另外说明这些范围包括其间所含有的所有子范围。

此外，本发明要素或组分前的不定冠词“一种”和“一个”对要素或组分的数量要求(即出现次数)无限制性。因此“一个”或“一种”应被解读为包括一个或至少一个，并且单数形式的要素或组分也包括复数形式，除非所述数量明显旨指单数形式。

以下通过具体实施方式说明本发明，但不局限于以下给出的具体实施例。

本发明第一个方面提供了一种灵芝虫草胶囊，所述灵芝虫草胶囊的制备原料按重量份计，包括50～60份灵芝菌丝体和40～50份虫草菌丝体；所述虫草菌丝体为蝙蝠蛾拟青霉菌丝体和/或蝙蝠蛾被毛孢菌丝体。

在一种优选的实施方式中，本发明所述灵芝虫草胶囊的制备原料按重量份计，包括60份灵芝菌丝体和40份虫草菌丝体。

灵芝菌丝体

灵芝菌丝体是灵芝菌种经发酵培养、分离得到的菌丝体，通过发酵技术得到的灵芝菌丝体具有生产周期短、无污染等优点。灵芝菌丝体中含有多种有效成分，如灵芝多糖、灵芝腺苷、灵芝酸、微量元素、氨基酸和生物碱等，具有对抗病毒、抗肿瘤、抗氧化、神经衰弱、增强免疫力、降低高血压、延缓衰老、缓解疲劳等都具有良好的协同治疗作用。

灵芝多糖是灵芝菌丝体中主要的有效成分之一，灵芝多糖是一种大分子化合物，大多为异多糖，即除含有葡萄糖外，大多还含有少量阿拉伯糖、木糖、岩藻糖、鼠李糖、半乳糖、甘露糖等其他单糖。它能加速血液微循环，提高血液供氧功能，降低机体静止状态下的无效供氧量，消除体内自由基，提高机体细胞膜的封闭度，抗放射性，提高肝脏、骨髓、血液合成DNA、RNA蛋白质的能力。灵芝多糖还能刺激单核巨噬细胞系统，从而发挥其吞噬异物的能力，而且促进抗体的形成，从而达到增强机体免疫力、抵抗肿瘤的作用。

灵芝三萜是是在灵芝中发现的一类三萜类化合物，学名灵芝总三萜，是灵芝的主要有效成分之一，具有抗炎、镇痛、镇静、抗衰老、毒杀肿瘤细胞、抗缺氧和提高免疫力的作用。其中，灵芝酸是一种三萜类物质，灵芝酸作为灵芝菌丝体的有效成分，其基本构造为数个异戊烯首尾相连构成的，大部分为30个碳原子，部分为27个碳原子的萜类化合物，但灵芝酸受热不稳定。灵芝酸有四环三萜和五环三萜两类。灵芝酸具有强烈的药理活性，有止痛、镇静、解毒、保肝、毒杀肿瘤细胞、抑制细胞组织胺的释放、增进消化器官机能及降低血中胆固醇、三甘油脂、β脂蛋白的功能，从而能抑制血小板凝结。帮助血液流通。消除血栓。促进血液循环.调整血管压力，增加新陈代谢，使身体达到平衡健康的状况。

灵芝腺苷是核苷类化合物，是灵芝菌丝体的有效成分，能抑制血小板的过度聚集.降低血液的粘度，从而改善人体血液循环，对年老血稠或有瘀血倾向者具有良好的抗血凝的效果。能防止血栓病如脑血栓、心肌梗塞等的发生。灵芝腺苷衍生物有较强的降血液粘度的效果，能抑制体内血小板聚集，提高血红蛋白2,3-二磷酸甘油的含量，提高血液供氧能力和加速血液循环，提高血液、心、脑的供氧能力，是人体免疫调节剂和血小板聚集抑制剂。

优选地，本发明所述灵芝菌丝体的制备方法包括以下步骤：

种子液培养：将灵芝菌接入种子培养基中，装液量为50～60mL/100mL，在28～30℃，150～200r/min培养6～7天，得到所述灵芝菌种子液；

发酵液培养：将所述灵芝菌种子液接入灵芝菌发酵培养基中，接种量为6～8％，装液量为300～350mL/500mL，在28～30℃，200～250r/min培养6～7天，得到所述灵芝菌丝体发酵液；

干燥：将所述灵芝菌丝体发酵液离心沉淀、冷冻干燥，得到所述灵芝菌丝体。

本发明所述灵芝菌种子培养基是本领域技术人员熟知的种子培养基，可列举的有，YEPD培养基(酵母浸出粉胨葡萄糖培养基)、PDA培养基(马铃薯葡萄糖琼脂PDA培养基)，在一种实施方式中，本发明所述灵芝菌种子培养基为YEPD培养基，所述YEPD培养基的制备方法包括以下步骤：10g酵母膏、20g蛋白胨加入900mL水中，在高压115℃下灭菌15min，并加入100mL 20g葡萄糖，得到YEPD培养液。

接种量是指移入种子液的体积和接种后培养液体积的比例。申请人发现，接种量的大小决定于生产菌种在发酵罐中生长繁殖的速度，采用较大的接种量可以缩短发酵罐中菌丝繁殖达到高峰的时间，使产物的形成提前到来，并可减少杂菌的生长机会。但接种量过大或者过小，均会影响发酵。过大会引起溶氧不足，影响产物合成；而且会过多移入代谢废物，也不经济；过小会延长培养时间，降低生产率。

装液量是发酵培养基的体积和发酵容器的体积比，本申请人发现，装样量的多少直接影响溶氧水平，从而影响菌丝体的生长。

所述冷冻干燥为将所述离心沉淀得到的湿菌丝体预冻至-45℃～-50℃，保温2～3h，在真空度为20～40Pa将菌丝体在2～3h升温至0℃，保温2～3h，升温至20～30℃维持6～8小时，得到所述菌丝体。

更优选地，本发明所述灵芝菌丝体的制备方法包括以下步骤：

种子液培养：将灵芝菌接入种子培养基中，装液量为55mL/100mL，在29℃，150～200r/min培养6天，得到所述灵芝菌种子液；

发酵液培养：将所述灵芝菌种子液接入灵芝菌发酵培养基中，接种量为7％，装液量为300mL/500mL，在30℃，250r/min培养6天，得到所述灵芝菌丝体发酵液；

干燥：将所述灵芝菌丝体发酵液离心沉淀、冷冻干燥，得到所述灵芝菌丝体。

进一步优选地，本发明所述冷冻干燥为将所述离心沉淀得到的湿菌丝体预冻至-45℃～-50℃，保温2～3h，在真空度为20～40Pa将菌丝体在2～3h升温至0℃，保温2～3h，升温至20～30℃维持6～8小时，得到所述菌丝体。

更进一步优选地，本发明所述灵芝菌发酵培养基的制备原料按重量百分数计，包括2～2.5％碳源、3～4％燕麦、0.01～0.2％无机盐和余量的水。

燕麦含有丰富的脂肪酸，如单不饱和脂肪酸、亚油酸和亚麻酸，其中亚油酸是人体最重要的必需脂肪酸，在人体内具有重要的生理功能，可降低胆固醇在心血管中的积累。燕麦中还含有丰富的蛋白质，燕麦淀粉、维生素，如维生素B1、B2、维生素E等和矿物质，如钙、铁、磷、镁、锌、铜、硒等。另外，燕麦中含有酚类物质、植酸、甾醇和维生素E等多种抗氧化的活性成分，其中含量最多的是阿魏酸、对香豆酸和儿茶酚等酚类物质，具有清除自由基、降低血清胆固醇和抑制低密度脂蛋白氧化等功能。

更进一步优选地，本发明所述灵芝菌发酵培养基的制备原料按重量百分数计，包括碳源2％、燕麦3％、0.1％无机盐和余量的水。

更进一步优选地，本发明所述碳源选自蔗糖、葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、甘油中的一种或多种；进一步地，本发明所述碳源为葡萄糖。

更进一步优选地，本发明所述无机盐选自锌盐、钾盐、镁盐、钙盐中的一种或多种；进一步地，本发明所述无机盐为硫酸镁、磷酸一氢钾和磷酸二氢钾，重量比为(2～3)：(2～3)：(2～3)；进一步地，本发明所述硫酸镁、磷酸一氢钾和磷酸二氢钾的重量比为1：1：1。

申请人发现，通过控制灵芝菌发酵培养基的制备原料，可促进灵芝菌丝体的生长，以及灵芝多糖和灵芝腺苷的生成。这可能是因为，通过控制灵芝菌发酵培养基和发酵液培养的条件，可控制生成的灵芝菌丝体的大小，随着时间的推移，灵芝菌丝体的直径逐渐增加，当灵芝菌丝体的直径较小时，灵芝菌倾向于向外增长，此时灵芝多糖含量缓慢增加，当灵芝菌丝体的直径适中时，此时生成的灵芝菌丝体较蓬松，有利于灵芝多糖的产生，而随着灵芝菌丝体逐渐增长，直径较大时，此时内部结构较为紧密，不利于灵芝多糖的产生，故为了提高灵芝多糖的产量，应控制灵芝菌丝体在合适大小。经申请人研究发现，碳源和无机盐的增加有利于控制灵芝多糖的合成，且碳源作为灵芝菌丝体的能源，有利于促进灵芝菌丝体的生长，通过控制碳源的量，可以调控灵芝菌丝体的大小，而氮源则不利于灵芝多糖的产生，这可能是因为氮源，如蛋白胨、酵母膏等的复杂成分，影响灵芝菌糖酵解的途径，因为灵芝菌丝体的培养过程只需要少量氮源，故申请人在灵芝菌种子液中添加了燕麦，其中，燕麦含有丰富的蛋白质和氨基酸，如赖氨酸、色氨酸等，来提供灵芝菌丝体发酵过程中的氮源，且燕麦中含有维生素B等，也可用于灵芝菌的培养，而不需要增加额外的维生素。

在一种优选的实施方式中，本发明所述灵芝菌发酵培养基的制备原料按重量百分数计，还包括0.5～1％艾叶。

艾叶是艾草的叶子，艾叶中的主要有效成分包括挥发油、黄酮类、鞣质类和多糖等，其中挥发油主要包括单萜类、倍半萜类及其衍生物，具有广谱的抗菌、抗氧化能力，平喘、镇咳和祛痰作用，还有抗疲劳作用。艾叶中还含有大量的黄酮类化合物，其中总黄酮具有丰富的生物活性，如抗肿瘤、抗心血管疾病、抗凝血、抗氧化、抗衰老等，艾蒿中木犀草素、槲皮素、柚皮素、芹菜种黄酮类化合物有抑制肝癌细胞增殖的作用。艾叶通过溶解抗纤维蛋白和毛细管通透性的降低，起到止血和抗凝血作用。多糖类所含的多糖类物质具有较强的抗肿瘤、增强机体免疫力、抗氧化作用。艾草中还含有鞣酸、有机酸类、微量元素、生物碱、蛋白质、纤维素及叶绿素等成分。

在一种更优选的实施方式中，本发明所述灵芝菌发酵培养基的制备原料按重量百分数计，还包括0.6％艾叶。

另外，申请人意外发现，当添加燕麦时，可促进产生多糖，这可能是因为燕麦中除含有蛋白质和氨基酸外，含有丰富的脂肪酸，如亚油酸、亚麻酸等，以及酚类物质、植酸、甾醇等物质，对灵芝菌糖酵解过程产生有益效果，从而增加多糖的产量。但是申请人发现，灵芝菌丝体产生的多糖较多时，不利于腺苷的产生，故申请人添加了适量的艾草，发现可进一步增加多糖产量，且腺苷的产生不会减少甚至略有增加，这可能是因为艾草中含有的挥发油、黄酮类、有机酸、生物碱等成分和燕麦中的成分一起，在调节多糖的产生途径时，也会促进腺苷的生成。

在一种进一步优选的实施方式中，本发明所述灵芝菌发酵培养基的制备方法包括以下步骤：

将燕麦粉碎，加入除燕麦外所述灵芝菌发酵培养基的其他原料，混合，得到所述灵芝菌发酵培养基。

在一种更进一步优选的实施方式中，本发明所述灵芝菌发酵培养基的制备方法包括以下步骤：

将燕麦和艾叶分别粉碎，加入除燕麦和艾叶外所述灵芝菌发酵培养基的其他原料，混合，得到所述灵芝菌发酵培养基。

申请人发现，通过控制发酵液培养中的温度、搅拌速度和时间，也会促进所述灵芝菌丝体的生长，以及多糖和腺苷的产量，这可能是因为灵芝菌是中温菌，控制发酵温度在28～30℃有利于灵芝菌的生长，而通过控制200～250r/min以及时间，可控制生成灵芝菌丝体的大小适中，内部较蓬松，从而提高多糖和腺苷产量。

虫草菌丝体

本发明所述虫草菌丝体为蝙蝠蛾拟青霉菌丝体和/或蝙蝠蛾被毛孢菌丝体，具有和冬虫夏草相似的有效成分和功效，虫草菌丝体的有效成分主要是虫草多糖、虫草腺苷、虫草酸、超氧化物歧化酶(SOD)等多种有效成分，有调节免疫系统功能、抗肿瘤、抗疲劳等多种功效。虫草多糖是虫草菌丝体的主要活性成分之一，可促进T淋巴细胞、巨噬细胞、白细胞的增殖与分化，产生各种免疫活性因子，促进骨髓干细胞、生殖细胞的增殖与分化，促进心、脑细胞的新陈代谢与血液循环。虫草多糖的药理试验证明：虫草多糖具有抗肿瘤、抗传染病的功效、增强性功能、补肾壮阳、益精气、防止衰老、延年益寿；对老年人慢性支气管炎、肺源性心脏病有显著的功效。能提高肝脏的解毒能力。降血糖、降血脂，贫血的患者用于补血，增强脾脏的营养性血，虫草多糖、生物活性强，适应性广，还具耐缺氧、镇痛、镇静的作用。虫草腺苷具有舒张血管，降低血压，心率，刺激肾上腺素，甾体激素分泌，抑制血小板聚集，镇静、抗惊厥等多种生理活性，同时可双向调节心律。虫草酸能显著减低颅内压，促进机体新陈代谢，减轻脑出血和脑血栓病症。

在一种实施方式中，本发明所述虫草菌丝体为蝙蝠蛾拟青霉菌丝体。

在一种实施方式中，本发明所述虫草菌为蝙蝠蛾拟青霉菌。

蝙蝠蛾拟青霉菌丝体是蝙蝠蛾拟青霉菌培养得到的菌丝体。其中蝙蝠蛾拟青霉菌是从冬虫夏草中分离出的菌种，其发酵菌丝体与冬虫夏草有着基本相似的化学成分和药理作用，其中蝙蝠蛾拟青霉菌丝体中主要含虫草多糖、腺苷、虫草素、虫草酸、超氧化物歧化酶、多种甾醇类物质、无机元素等多种有效成分和微量元素，具有镇痛、抗炎、抗肿瘤、免疫调节、降糖和缓解疲劳等作用。

优选地，本发明所述虫草菌丝体的制备方法包括以下步骤：

种子液培养：将虫草菌接入种子培养基，装液量为40～50mL/100mL，在25～28℃，150～200r/min下培养3～4天，得到虫草菌种子液；

发酵液培养：将所述虫草菌种子液接入虫草菌发酵培养基中，接种量为5～8％，装液量为100～150mL/250mL，在25～28℃、400～500r/min下发酵5～6天，得到虫草菌丝体发酵液；

干燥：将所述虫草菌丝体发酵液离心沉淀、冷冻干燥，得到所述虫草菌丝体。

更优选地，本发明所述虫草菌丝体的制备方法包括以下步骤：

种子液培养：将虫草菌接入种子培养基，装液量为50mL/100mL，在26℃，200r/min下培养4天，得到虫草菌种子液；

发酵液培养：将所述虫草菌种子液接入虫草菌发酵培养基中，接种量为8％，装液量为150mL/250mL，在28℃、400r/min下发酵5天，得到虫草菌丝体发酵液；

干燥：将所述虫草菌丝体发酵液离心沉淀、冷冻干燥，得到所述虫草菌丝体。

本发明所述虫草菌种子培养基是本领域技术人员熟知的种子培养基，可列举的有，YEPD培养基(酵母浸出粉胨葡萄糖培养基)、PDA培养基(马铃薯葡萄糖琼脂PDA培养基)，在一种实施方式中，本发明所述虫草菌种子培养基为YEPD培养基，所述YEPD培养基的制备方法包括以下步骤：10g酵母膏、20g蛋白胨加入900mL水中，在高压115℃下灭菌15min，并加入100mL 20g葡萄糖，得到YEPD培养液。

进一步优选地，本发明所述虫草菌发酵培养基的制备原料按重量百分数计，包括2～3％碳源、2～3％氮源、2～3％燕麦、0.1～0.3％无机盐和余量的水。

更进一步优选地，本发明所述虫草菌发酵培养基的制备原料按重量百分数计，包括2％碳源、3％氮源、2％燕麦、0.2％无机盐和余量的水。

在一种优选的实施方式中，本发明所述碳源选自蔗糖、葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、甘油中的一种或多种；进一步地，本发明所述碳源为葡萄糖。

在一种更优选的实施方式中，本发明所述氮源选自蛋白胨、酵母浸出物、牛肉膏、酵母膏中的一种或多种；进一步地，本发明所述氮源为蛋白胨和酵母浸出物，重量比为(2～3)：(2～3)；进一步地，本发明所述蛋白胨和酵母浸出物的重量比为1：1；进一步地，本发明所述蛋白胨选自大豆蛋白胨、胰蛋白胨、牛骨蛋白胨、酵母蛋白胨的一种或多种；进一步地，本发明所述蛋白胨为大豆蛋白胨，牌号为FP410，购自安琪酵母股份有限公司；进一步地，本发明所述酵母浸出物的牌号为FM888，购自安琪酵母股份有限公司。

蛋白胨，是将肉、酪素或明胶用酸或蛋白酶水解后干燥而成的外观呈淡黄色的粉剂，具有肉香的特殊气息。蛋白质经酸、碱或蛋白酶分解后也可形成蛋白胨。蛋白胨富含有机氮化合物，也含有一些维生素和糖类。它可以作为微生物培养基的主要原料，在抗生素、医药工业、发酵工业、生化制品及微生物学科研等领域中的用量均很大，可以用来治疗消化道疾病，也能为微生物提供C源、N源、生长因子等营养物质。

酵母浸出物是以高蛋白面包酵母或啤酒酵母为原料，经自溶、酶解、浓缩、干燥等工艺制成的一种富含蛋白质、氨基酸、肽、多肽、核酸、维生素及微量元素等营养成分的培养基原料。

在一种进一步优选的实施方式中，本发明所述无机盐选自锌盐、钾盐、镁盐、钙盐中的一种或多种；进一步地，本发明所述无机盐为硫酸镁、磷酸一氢钾和磷酸二氢钾，重量比为(2～3)：(2～3)：(2～3)；进一步地，本发明所述硫酸镁、磷酸一氢钾和磷酸二氢钾的重量比为1：1：1。

申请人发现，通过控制虫草菌发酵培养中的虫草菌发酵培养基的原料以及培养条件，可促进虫草菌丝体的生长，以及多糖和腺苷含量。这可能是因为，通过控制发酵培养的温度、装液量，以及发酵培养基中的碳源和氮源，在给虫草菌提供充足营养和合适发酵条件的情况下，可促进虫草菌丝体的生长，另外，燕麦中含有的燕麦淀粉和蛋白质等，也可以作为碳源和氮源，为虫草菌提供能量。且通过控制搅拌速度等，可以控制生成的虫草菌丝体的大小，且燕麦中丰富的脂肪酸，如亚油酸、亚麻酸等，还含有酚类物质、植酸、甾醇等物质，也会促进虫草菌产生多糖的过程，但由于虫草菌的生长过程中需要较多的氮源，而氮源对多糖的产生带来不利影响，这可能是因为氮源有利于虫草菌的生长，生成较大较紧密的虫草菌丝体，且氮源，如蛋白胨，酵母膏等的复杂结构，影响灵芝菌糖酵解的途径，从而抑制多糖的分解。

在一种更进一步优选的实施方式中，本发明所述虫草菌发酵培养基的制备原料按重量百分数计，还包括0.1～0.5％薄荷叶。

薄荷为唇形科植物，薄荷叶含挥发油，挥发油的主要成分为薄荷醇，薄荷叶中还含有薄荷酮、乙酸薄荷脂、莰烯、柠檬烯、异薄荷酮、蒎烯、薄荷烯酮及少量鞣质、迷迭香酸。

在一种更进一步优选的实施方式中，本发明所述虫草菌发酵培养基的制备原料按重量百分数计，还包括0.3％薄荷叶。

申请人意外发现，通过在本发明所述虫草菌发酵培养基中添加适量的薄荷叶，在不影响虫草菌生长的情况下，增加多糖的产量，这可能是因为薄荷中含有薄荷醇、薄荷酮、乙酸薄荷脂、柠檬烯等多种成分和燕麦共同作用，和氮源对多糖的抑制作用达到平衡，有利于多糖的产生，结合搅拌速度等条件，促进适中大小的虫草菌的生长，从而更进一步促进多糖的产生，而又由于氮源的抑制作用，使得生成的多糖不会对糖苷的产生造成影响。

在一种更进一步优选的实施方式中，本发明所述虫草菌发酵培养基的制备方法包括以下步骤：

将所述燕麦粉碎后，加入除燕麦外虫草菌发酵液培养基其他制备原料，混合，得到所述虫草菌发酵培养基。

在一种更进一步优选的实施方式中，本发明所述虫草菌发酵培养基的制备方法包括以下步骤：

将所述燕麦和薄荷叶分别粉碎后，加入除燕麦和薄荷外虫草菌发酵液培养基其他制备原料，混合，得到所述虫草菌发酵培养基。

助剂

在一种实施方式中，本发明所述灵芝虫草胶囊的制备原料还包括助剂，所述助剂占所述灵芝菌丝体的1～3wt％，所述助剂选自碳酸钙、海藻糖、环糊精、硫酸镁、微晶纤维素中的一种或多种。

优选地，本发明所述助剂占所述灵芝菌丝体的2wt％。

更优选地，本发明所述助剂为碳酸钙和海藻糖，重量比为(1～2)：(2～3)。

进一步优选地，本发明所述碳酸钙和海藻糖的重量比为2：3。

申请人发现，通过在本发明提供的灵芝虫草胶囊的制备原料添加虫草菌丝体和灵芝菌丝体共同作用，可进一步促进本发明所述灵芝虫草胶囊缓解疲劳和增强免疫力的作用，这可能是灵芝菌丝体和虫草菌丝体中的有效成分，如多糖和腺苷等协同作用的结果。

本发明第二个方面提供一种如上所述的灵芝虫草胶囊的制备方法，包括以下步骤：

(1)超临界二氧化碳萃取：将所述灵芝菌丝体和虫草菌丝体混合，在15～30MPa、35～40℃进行超临界二氧化碳萃取，得到酯溶萃取物和滤渣；

(2)水萃取：将步骤(1)所述滤渣和水混合，在50～70℃下搅拌1～3h，所述滤渣和水的重量比为1：(8～15)，过滤，将滤液在60～80℃减压蒸馏，得到水溶萃取物，和酯溶萃取物混合，得到浸膏；

(3)将步骤(2)所述浸膏在30～50MPa下均质、造粒、真空干燥，得到灵芝虫草颗粒，并封装到胶囊中，得到所述虫草胶囊。

在一种优选的实施方式中，本发明步骤(2)水萃取中，所述滤渣和水的重量比为1：10。

灵芝菌丝体和虫草菌丝体中的有效成分主要是多糖和腺苷，其中腺苷受热不稳定，而多糖在高温下也可能发生反应，为了减少多糖和腺苷的变质，申请人在萃取中通过控制温度、压力等条件，进行超临界二氧化碳萃取，将酯溶性的萃取物，如腺苷、不饱和脂肪酸和SOD等成分在较低温度萃取出来，而对于多糖、灵芝酸、虫草酸等水溶性的物质，通过控制温度，并使用较少的水对二氧化碳萃取得到的滤渣进行萃取，并进行减压蒸馏的方法，防止长时间在60～80℃减压蒸馏除去水的过程中对多糖等物质的破环，但是由于水萃取过程中使用的水量较少，可能导致少量多糖等物质没有萃取到水溶液中。

在一种优选的实施方式中，本发明步骤(2)水萃取中，将步骤(1)所述滤渣加入助剂和水。

申请人意外发现，通过在水萃取过程中添加海藻糖和碳酸钙，并控制海藻糖、碳酸钙和滤渣的重量比，可促进多糖等物质萃取到水溶液中，这可能是因为通过添加碳酸钙和海藻糖，海藻糖含有的多羟基的结构容易和多糖等发生作用，将多糖分散在水中，且加入少量碳酸钙带来的偏碱性的环境更有利于海藻糖包覆多糖溶解在水中，另外，通过海藻糖对多糖的包覆，有利于在减压蒸馏阶段减少多糖等成分的受热分解，从而有利于灵芝菌丝体和虫草菌丝体中对多糖的萃取和稳定。

实施例

下面通过实施例对本发明进行具体描述。有必要在此指出的是，以下实施例只用于对本发明作进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，该领域的专业技术人员根据上述本发明的内容做出的一些非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。

实施例1

本发明的实施例1提供一种灵芝虫草胶囊，所述灵芝虫草胶囊的制备原料按重量份计，包括60份灵芝菌丝体和40份虫草菌丝体。

所述灵芝菌丝体的制备方法包括以下步骤：种子液培养：将灵芝菌接入YEPD培养基中，装液量为55mL/100mL，在29℃，150～200r/min培养6天，得到所述灵芝菌种子液；发酵液培养：将所述灵芝菌种子液接入灵芝菌发酵培养基中，接种量为7％，装液量为300mL/500mL，在30℃，250r/min培养6天，得到所述灵芝菌丝体发酵液，所述灵芝菌发酵培养基的制备原料按重量百分数计，包括2％葡萄糖、3％燕麦、0.1％无机盐和余量的水，所述无机盐为硫酸镁、磷酸一氢钾和磷酸二氢钾，重量比为1：1：1；干燥：将所述灵芝菌丝体发酵液离心沉淀、得到的湿菌丝体预冻至-50℃，保温3h，在真空度为30Pa将菌丝体在2.5h升温至0℃，保温2.5h，升温至25℃维持7小时，得到所述灵芝菌丝体。

所述YEPD培养基的制备方法包括以下步骤：10g酵母膏、20g蛋白胨加入900mL水中，在高压115℃下灭菌15min，并加入100mL 20g葡萄糖，得到YEPD培养液；所述灵芝菌发酵培养基的制备方法包括以下步骤：将燕麦分别粉碎，加入除燕麦外所述灵芝菌发酵培养基的其他原料，混合，得到所述灵芝菌发酵培养基。

所述虫草菌丝体的制备方法包括以下步骤：种子液培养：将虫草菌接入YEPD培养基，装液量为50mL/100mL，在26℃，200r/min下培养4天，得到虫草菌种子液；发酵液培养：将所述虫草菌种子液接入虫草菌发酵培养基中，接种量为8％，装液量为150mL/250mL，在28℃、400r/min下发酵5天，得到虫草菌丝体发酵液，所述虫草菌发酵培养基的制备原料按重量百分数计，包括2％葡萄糖、3％氮源、2％燕麦、0.2％无机盐和余量的水，所述氮源为大豆蛋白胨和酵母浸出物，重量比为1：1，所述无机盐为硫酸镁、磷酸一氢钾和磷酸二氢钾，重量比为1：1：1；干燥：将所述虫草菌丝体发酵液离心沉淀、冷冻干燥，得到所述虫草菌丝体。

所述虫草菌发酵培养基的制备方法包括以下步骤：

将所述燕麦分别粉碎后，加入除燕麦外虫草菌发酵液培养基其他制备原料，混合，得到所述虫草菌发酵培养基。

所述虫草菌为蝙蝠蛾拟青霉菌。

所述大豆蛋白胨，牌号为FP410，购自安琪酵母股份有限公司。

所述酵母浸出物的牌号为FM888，购自安琪酵母股份有限公司。

本例还提供如上所述的灵芝虫草胶囊的制备方法，包括以下步骤：

(1)超临界二氧化碳萃取：将所述灵芝菌丝体和虫草菌丝体混合，在20MPa、35℃进行超临界二氧化碳萃取，得到酯溶萃取物和滤渣；

(2)水萃取：将步骤(1)所述滤渣和水混合，在60℃下搅拌2h，所述滤渣和水的重量比为1：10，过滤，将滤液在70℃减压蒸馏，得到水溶萃取物，和酯溶萃取物混合，得到浸膏；

(3)将步骤(2)所述浸膏在40MPa下均质、造粒、真空干燥，得到灵芝虫草颗粒，并封装到胶囊中，得到所述虫草胶囊。

实施例2

本发明的实施例2提供一种灵芝虫草胶囊，所述灵芝虫草胶囊的制备原料按重量份计，包括60份灵芝菌丝体和40份虫草菌丝体。

所述灵芝菌丝体的制备方法包括以下步骤：种子液培养：将灵芝菌接入YEPD培养基中，装液量为55mL/100mL，在29℃，150～200r/min培养6天，得到所述灵芝菌种子液；发酵液培养：将所述灵芝菌种子液接入灵芝菌发酵培养基中，接种量为7％，装液量为300mL/500mL，在30℃，250r/min培养6天，得到所述灵芝菌丝体发酵液，所述灵芝菌发酵培养基的制备原料按重量百分数计，包括2％葡萄糖、3％燕麦、0.6％艾叶、0.1％无机盐和余量的水，所述无机盐为硫酸镁、磷酸一氢钾和磷酸二氢钾，重量比为1：1：1；干燥：将所述灵芝菌丝体发酵液离心沉淀、得到的湿菌丝体预冻至-50℃，保温3h，在真空度为30Pa将菌丝体在2.5h升温至0℃，保温2.5h，升温至25℃维持7小时，得到所述灵芝菌丝体。

所述YEPD培养基的制备方法包括以下步骤：10g酵母膏、20g蛋白胨加入900mL水中，在高压115℃下灭菌15min，并加入100mL 20g葡萄糖，得到YEPD培养液；所述灵芝菌发酵培养基的制备方法包括以下步骤：将燕麦和艾叶分别粉碎，加入除燕麦和艾叶外所述灵芝菌发酵培养基的其他原料，混合，得到所述灵芝菌发酵培养基。

所述虫草菌丝体的制备方法包括以下步骤：种子液培养：将虫草菌接入YEPD培养基，装液量为50mL/100mL，在26℃，200r/min下培养4天，得到虫草菌种子液；发酵液培养：将所述虫草菌种子液接入虫草菌发酵培养基中，接种量为8％，装液量为150mL/250mL，在28℃、400r/min下发酵5天，得到虫草菌丝体发酵液，所述虫草菌发酵培养基的制备原料按重量百分数计，包括2％葡萄糖、3％氮源、2％燕麦、0.2％无机盐和余量的水，所述氮源为大豆蛋白胨和酵母浸出物，重量比为1：1，所述无机盐为硫酸镁、磷酸一氢钾和磷酸二氢钾，重量比为1：1：1；干燥：将所述虫草菌丝体发酵液离心沉淀、冷冻干燥，得到所述虫草菌丝体。

所述虫草菌发酵培养基的制备方法包括以下步骤：

将所述燕麦粉碎后，加入除燕麦外虫草菌发酵液培养基其他制备原料，混合，得到所述虫草菌发酵培养基。

所述虫草菌为蝙蝠蛾拟青霉菌。

所述大豆蛋白胨，牌号为FP410，购自安琪酵母股份有限公司。

所述酵母浸出物的牌号为FM888，购自安琪酵母股份有限公司。

本例还提供如上所述的灵芝虫草胶囊的制备方法，包括以下步骤：

(1)超临界二氧化碳萃取：将所述灵芝菌丝体和虫草菌丝体混合，在20MPa、35℃进行超临界二氧化碳萃取，得到酯溶萃取物和滤渣；

(2)水萃取：将步骤(1)所述滤渣和水混合，在60℃下搅拌2h，所述滤渣和水的重量比为1：10，过滤，将滤液在70℃减压蒸馏，得到水溶萃取物，和酯溶萃取物混合，得到浸膏；

(3)将步骤(2)所述浸膏在40MPa下均质、造粒、真空干燥，得到灵芝虫草颗粒，并封装到胶囊中，得到所述虫草胶囊。

实施例3

本发明的实施例3提供一种灵芝虫草胶囊，所述灵芝虫草胶囊的制备原料按重量份计，包括60份灵芝菌丝体和40份虫草菌丝体。

所述灵芝菌丝体的制备方法包括以下步骤：种子液培养：将灵芝菌接入YEPD培养基中，装液量为55mL/100mL，在29℃，150～200r/min培养6天，得到所述灵芝菌种子液；发酵液培养：将所述灵芝菌种子液接入灵芝菌发酵培养基中，接种量为7％，装液量为300mL/500mL，在30℃，250r/min培养6天，得到所述灵芝菌丝体发酵液，所述灵芝菌发酵培养基的制备原料按重量百分数计，包括2％葡萄糖、3％燕麦、0.6％艾叶、0.1％无机盐和余量的水，所述无机盐为硫酸镁、磷酸一氢钾和磷酸二氢钾，重量比为1：1：1；干燥：将所述灵芝菌丝体发酵液离心沉淀、得到的湿菌丝体预冻至-50℃，保温3h，在真空度为30Pa将菌丝体在2.5h升温至0℃，保温2.5h，升温至25℃维持7小时，得到所述灵芝菌丝体。

所述YEPD培养基的制备方法包括以下步骤：10g酵母膏、20g蛋白胨加入900mL水中，在高压115℃下灭菌15min，并加入100mL 20g葡萄糖，得到YEPD培养液；所述灵芝菌发酵培养基的制备方法包括以下步骤：将燕麦和艾叶分别粉碎，加入除燕麦和艾叶外所述灵芝菌发酵培养基的其他原料，混合，得到所述灵芝菌发酵培养基。

所述虫草菌丝体的制备方法包括以下步骤：种子液培养：将虫草菌接入YEPD培养基，装液量为50mL/100mL，在26℃，200r/min下培养4天，得到虫草菌种子液；发酵液培养：将所述虫草菌种子液接入虫草菌发酵培养基中，接种量为8％，装液量为150mL/250mL，在28℃、400r/min下发酵5天，得到虫草菌丝体发酵液，所述虫草菌发酵培养基的制备原料按重量百分数计，包括2％葡萄糖、3％氮源、2％燕麦、0.3％薄荷叶、0.2％无机盐和余量的水，所述氮源为大豆蛋白胨和酵母浸出物，重量比为1：1，所述无机盐为硫酸镁、磷酸一氢钾和磷酸二氢钾，重量比为1：1：1；干燥：将所述虫草菌丝体发酵液离心沉淀、冷冻干燥，得到所述虫草菌丝体。

所述虫草菌发酵培养基的制备方法包括以下步骤：

将所述燕麦和薄荷叶分别粉碎后，加入除燕麦和薄荷外虫草菌发酵液培养基其他制备原料，混合，得到所述虫草菌发酵培养基。

所述虫草菌为蝙蝠蛾拟青霉菌。

所述大豆蛋白胨，牌号为FP410，购自安琪酵母股份有限公司。

所述酵母浸出物的牌号为FM888，购自安琪酵母股份有限公司。

本例还提供如上所述的灵芝虫草胶囊的制备方法，包括以下步骤：

(1)超临界二氧化碳萃取：将所述灵芝菌丝体和虫草菌丝体混合，在20MPa、35℃进行超临界二氧化碳萃取，得到酯溶萃取物和滤渣；

(2)水萃取：将步骤(1)所述滤渣和水混合，在60℃下搅拌2h，所述滤渣和水的重量比为1：10，过滤，将滤液在70℃减压蒸馏，得到水溶萃取物，和酯溶萃取物混合，得到浸膏；

(3)将步骤(2)所述浸膏在40MPa下均质、造粒、真空干燥，得到灵芝虫草颗粒，并封装到胶囊中，得到所述虫草胶囊。

实施例4

本发明的实施例4提供一种灵芝虫草胶囊，所述灵芝虫草胶囊的制备原料按重量份计，包括50份灵芝菌丝体、50份虫草菌丝体和助剂；所述助剂占所述灵芝菌丝体的1wt％，所述助剂为碳酸钙和海藻糖，重量比为1：2。

所述灵芝菌丝体的制备方法包括以下步骤：种子液培养：将灵芝菌接入YEPD培养基中，装液量为50mL/100mL，在28℃，150r/min培养6天，得到所述灵芝菌种子液；发酵液培养：将所述灵芝菌种子液接入灵芝菌发酵培养基中，接种量为6％，装液量为300mL/500mL，在28℃，200r/min培养7天，得到所述灵芝菌丝体发酵液，所述灵芝菌发酵培养基的制备原料按重量百分数计，包括2％葡萄糖、3％燕麦、0.5％艾叶、0.01％无机盐和余量的水，所述无机盐为硫酸镁、磷酸一氢钾和磷酸二氢钾，重量比为1：1：1；干燥：将所述灵芝菌丝体发酵液离心沉淀、得到的湿菌丝体预冻至-45℃，保温3h，在真空度为30Pa将菌丝体在2h升温至0℃，保温3h，升温至20℃维持6小时，得到所述灵芝菌丝体。

所述YEPD培养基的制备方法包括以下步骤：10g酵母膏、20g蛋白胨加入900mL水中，在高压115℃下灭菌15min，并加入100mL 20g葡萄糖，得到YEPD培养液；所述灵芝菌发酵培养基的制备方法包括以下步骤：将燕麦和艾叶分别粉碎，加入除燕麦和艾叶外所述灵芝菌发酵培养基的其他原料，混合，得到所述灵芝菌发酵培养基。

所述虫草菌丝体的制备方法包括以下步骤：种子液培养：将虫草菌接入YEPD培养基，装液量为40L/100mL，在25℃，150r/min下培养4天，得到虫草菌种子液；发酵液培养：将所述虫草菌种子液接入虫草菌发酵培养基中，接种量为5～8％，装液量为150mL/250mL，在28℃、400r/min下发酵5天，得到虫草菌丝体发酵液，所述虫草菌发酵培养基的制备原料按重量百分数计，包括3％葡萄糖、3％氮源、3％燕麦、0.5％薄荷叶、0.3％无机盐和余量的水，所述氮源为大豆蛋白胨和酵母浸出物，重量比为2：3，所述无机盐为硫酸镁、磷酸一氢钾和磷酸二氢钾，重量比为1：1：1；干燥：将所述虫草菌丝体发酵液离心沉淀、冷冻干燥，得到所述虫草菌丝体。

所述虫草菌发酵培养基的制备方法包括以下步骤：

将所述燕麦和薄荷叶分别粉碎后，加入除燕麦和薄荷外虫草菌发酵液培养基其他制备原料，混合，得到所述虫草菌发酵培养基。

所述虫草菌为蝙蝠蛾拟青霉菌。

所述大豆蛋白胨，牌号为FP410，购自安琪酵母股份有限公司。

所述酵母浸出物的牌号为FM888，购自安琪酵母股份有限公司。

本例还提供如上所述的灵芝虫草胶囊的制备方法，包括以下步骤：

(1)超临界二氧化碳萃取：将所述灵芝菌丝体和虫草菌丝体混合，在15MPa、40℃进行超临界二氧化碳萃取，得到酯溶萃取物和滤渣；

(2)水萃取：将步骤(1)所述滤渣、助剂和水混合，在5℃下搅拌3h，所述滤渣和水的重量比为1：8，过滤，将滤液在60℃减压蒸馏，得到水溶萃取物，和酯溶萃取物混合，得到浸膏；

(3)将步骤(2)所述浸膏在30MPa下均质、造粒、真空干燥，得到灵芝虫草颗粒，并封装到胶囊中，得到所述虫草胶囊。

实施例5

本发明的实施例5提供一种灵芝虫草胶囊，所述灵芝虫草胶囊的制备原料按重量份计，包括60份灵芝菌丝体、40份虫草菌丝体和助剂；所述助剂占所述灵芝菌丝体的3wt％，所述助剂为碳酸钙和海藻糖，重量比为1：3。

所述灵芝菌丝体的制备方法包括以下步骤：种子液培养：将灵芝菌接入YEPD培养基中，装液量为60mL/100mL，在30℃，200r/min培养6天，得到所述灵芝菌种子液；发酵液培养：将所述灵芝菌种子液接入灵芝菌发酵培养基中，接种量为8％，装液量为350mL/500mL，在30℃，250r/min培养6天，得到所述灵芝菌丝体发酵液，所述灵芝菌发酵培养基的制备原料按重量百分数计，包括2.5％葡萄糖、4％燕麦、1％艾叶、0.2％无机盐和余量的水，所述无机盐为硫酸镁、磷酸一氢钾和磷酸二氢钾，重量比为1：1：1；干燥：将所述灵芝菌丝体发酵液离心沉淀、得到的湿菌丝体预冻至-50℃，保温2h，在真空度为40Pa将菌丝体在2h升温至0℃，保温2h，升温至30℃维持6小时，得到所述灵芝菌丝体。

所述YEPD培养基的制备方法包括以下步骤：10g酵母膏、20g蛋白胨加入900mL水中，在高压115℃下灭菌15min，并加入100mL 20g葡萄糖，得到YEPD培养液；所述灵芝菌发酵培养基的制备方法包括以下步骤：将燕麦和艾叶分别粉碎，加入除燕麦和艾叶外所述灵芝菌发酵培养基的其他原料，混合，得到所述灵芝菌发酵培养基。

所述虫草菌丝体的制备方法包括以下步骤：种子液培养：将虫草菌接入YEPD培养基，装液量为50mL/100mL，在28℃，200r/min下培养3天，得到虫草菌种子液；发酵液培养：将所述虫草菌种子液接入虫草菌发酵培养基中，接种量为8％，装液量为150mL/250mL，在28℃、500r/min下发酵6天，得到虫草菌丝体发酵液，所述虫草菌发酵培养基的制备原料按重量百分数计，包括2％葡萄糖、2％氮源、2％燕麦、0.1％薄荷叶、0.1％无机盐和余量的水，所述氮源为大豆蛋白胨和酵母浸出物，重量比为3：2，所述无机盐为硫酸镁、磷酸一氢钾和磷酸二氢钾，重量比为1：1：1；干燥：将所述虫草菌丝体发酵液离心沉淀、冷冻干燥，得到所述虫草菌丝体。

所述虫草菌发酵培养基的制备方法包括以下步骤：

将所述燕麦和薄荷叶分别粉碎后，加入除燕麦和薄荷外虫草菌发酵液培养基其他制备原料，混合，得到所述虫草菌发酵培养基。

所述虫草菌为蝙蝠蛾拟青霉菌。

所述大豆蛋白胨，牌号为FP410，购自安琪酵母股份有限公司。

所述酵母浸出物的牌号为FM888，购自安琪酵母股份有限公司。

本例还提供如上所述的灵芝虫草胶囊的制备方法，包括以下步骤：

(1)超临界二氧化碳萃取：将所述灵芝菌丝体和虫草菌丝体混合，在30MPa、35℃进行超临界二氧化碳萃取，得到酯溶萃取物和滤渣；

(2)水萃取：将步骤(1)所述滤渣、助剂和水混合，在70℃下搅拌1h，所述滤渣和水的重量比为1：15，过滤，将滤液在80℃减压蒸馏，得到水溶萃取物，和酯溶萃取物混合，得到浸膏；

(3)将步骤(2)所述浸膏在50MPa下均质、造粒、真空干燥，得到灵芝虫草颗粒，并封装到胶囊中，得到所述虫草胶囊。

实施例6

本发明的实施例6提供一种灵芝虫草胶囊，所述灵芝虫草胶囊的制备原料按重量份计，包括60份灵芝菌丝体、40份虫草菌丝体和助剂；所述助剂占所述灵芝菌丝体的2wt％，所述助剂为碳酸钙和海藻糖，重量比为2：3。

所述灵芝菌丝体的制备方法包括以下步骤：种子液培养：将灵芝菌接入YEPD培养基中，装液量为55mL/100mL，在29℃，150～200r/min培养6天，得到所述灵芝菌种子液；发酵液培养：将所述灵芝菌种子液接入灵芝菌发酵培养基中，接种量为7％，装液量为300mL/500mL，在30℃，250r/min培养6天，得到所述灵芝菌丝体发酵液，所述灵芝菌发酵培养基的制备原料按重量百分数计，包括2％葡萄糖、3％燕麦、0.6％艾叶、0.1％无机盐和余量的水，所述无机盐为硫酸镁、磷酸一氢钾和磷酸二氢钾，重量比为1：1：1；干燥：将所述灵芝菌丝体发酵液离心沉淀、得到的湿菌丝体预冻至-50℃，保温3h，在真空度为30Pa将菌丝体在2.5h升温至0℃，保温2.5h，升温至25℃维持7小时，得到所述灵芝菌丝体。

所述YEPD培养基的制备方法包括以下步骤：10g酵母膏、20g蛋白胨加入900mL水中，在高压115℃下灭菌15min，并加入100mL 20g葡萄糖，得到YEPD培养液；所述灵芝菌发酵培养基的制备方法包括以下步骤：将燕麦和艾叶分别粉碎，加入除燕麦和艾叶外所述灵芝菌发酵培养基的其他原料，混合，得到所述灵芝菌发酵培养基。

所述虫草菌丝体的制备方法包括以下步骤：种子液培养：将虫草菌接入YEPD培养基，装液量为50mL/100mL，在26℃，200r/min下培养4天，得到虫草菌种子液；发酵液培养：将所述虫草菌种子液接入虫草菌发酵培养基中，接种量为8％，装液量为150mL/250mL，在28℃、400r/min下发酵5天，得到虫草菌丝体发酵液，所述虫草菌发酵培养基的制备原料按重量百分数计，包括2％葡萄糖、3％氮源、2％燕麦、0.3％薄荷叶、0.2％无机盐和余量的水，所述氮源为大豆蛋白胨和酵母浸出物，重量比为1：1，所述无机盐为硫酸镁、磷酸一氢钾和磷酸二氢钾，重量比为1：1：1；干燥：将所述虫草菌丝体发酵液离心沉淀、冷冻干燥，得到所述虫草菌丝体。

所述虫草菌发酵培养基的制备方法包括以下步骤：

将所述燕麦和薄荷叶分别粉碎后，加入除燕麦和薄荷外虫草菌发酵液培养基其他制备原料，混合，得到所述虫草菌发酵培养基。

所述虫草菌为蝙蝠蛾拟青霉菌。

所述大豆蛋白胨，牌号为FP410，购自安琪酵母股份有限公司。

所述酵母浸出物的牌号为FM888，购自安琪酵母股份有限公司。

本例还提供如上所述的灵芝虫草胶囊的制备方法，包括以下步骤：

(1)超临界二氧化碳萃取：将所述灵芝菌丝体和虫草菌丝体混合，在20MPa、35℃进行超临界二氧化碳萃取，得到酯溶萃取物和滤渣；

(2)水萃取：将步骤(1)所述滤渣、助剂和水混合，在60℃下搅拌2h，所述滤渣和水的重量比为1：10，过滤，将滤液在70℃减压蒸馏，得到水溶萃取物，和酯溶萃取物混合，得到浸膏；

(3)将步骤(2)所述浸膏在40MPa下均质、造粒、真空干燥，得到灵芝虫草颗粒，并封装到胶囊中，得到所述虫草胶囊。

实施例7

本发明的实施例7提供一种灵芝虫草胶囊，其具体实施方式同实施例6，不同之处在于，所述灵芝菌发酵培养基的制备原料按重量百分数计，包括2％葡萄糖、0.5％燕麦、0.1％无机盐和余量的水，所述无机盐为硫酸镁、磷酸一氢钾和磷酸二氢钾，重量比为1：1：1。

本例还提供一种如上所述的灵芝虫草胶囊的制备方法，其具体实施方式同实施例6。

实施例8

本发明的实施例8提供一种灵芝虫草胶囊，其具体实施方式同实施例6，不同之处在于，所述灵芝菌发酵培养基的制备原料按重量百分数计，包括2％葡萄糖、0.5％燕麦、0.6％艾叶、0.1％无机盐和余量的水，所述无机盐为硫酸镁、磷酸一氢钾和磷酸二氢钾，重量比为1：1：1。

本例还提供一种如上所述的灵芝虫草胶囊的制备方法，其具体实施方式同实施例6。

实施例9

本发明的实施例9提供一种灵芝虫草胶囊，其具体实施方式同实施例6，不同之处在于，所述灵芝菌发酵液培养的转速为400r/min。

本例还提供一种如上所述的灵芝虫草胶囊的制备方法，其具体实施方式同实施例6。

实施例10

本发明的实施例10提供一种灵芝虫草胶囊，其具体实施方式同实施例6，不同之处在于，所述灵芝菌发酵液培养的时间为9天。

本例还提供一种如上所述的灵芝虫草胶囊的制备方法，其具体实施方式同实施例6。

实施例11

本发明的实施例11提供一种灵芝虫草胶囊，其具体实施方式同实施例6，不同之处在于，所述虫草菌发酵培养基的制备原料按重量百分数计，包括2％葡萄糖、3％氮源、0.2％无机盐和余量的水，所述氮源为大豆蛋白胨和酵母浸出物，重量比为1：1，所述无机盐为硫酸镁、磷酸一氢钾和磷酸二氢钾，重量比为1：1：1。

本例还提供一种如上所述的灵芝虫草胶囊的制备方法，其具体实施方式同实施例6。

实施例12

本发明的实施例12提供一种灵芝虫草胶囊，其具体实施方式同实施例6，不同之处在于，所述虫草菌发酵培养基的制备原料按重量百分数计，包括2％葡萄糖、3％氮源、0.3％燕麦、0.3％薄荷叶、0.2％无机盐和余量的水，所述氮源为大豆蛋白胨和酵母浸出物，重量比为1：1，所述无机盐为硫酸镁、磷酸一氢钾和磷酸二氢钾，重量比为1：1：1。

本例还提供一种如上所述的灵芝虫草胶囊的制备方法，其具体实施方式同实施例6。

实施例13

本发明的实施例13提供一种灵芝虫草胶囊，其具体实施方式同实施例6，不同之处在于，所述虫草菌发酵液培养的转速为250r/min。

本例还提供一种如上所述的灵芝虫草胶囊的制备方法，其具体实施方式同实施例6。

实施例14

本发明的实施例14提供一种灵芝虫草胶囊，其具体实施方式同实施例6，不同之处在于，虫草菌发酵液培养的时间为8天。

本例还提供一种如上所述的灵芝虫草胶囊的制备方法，其具体实施方式同实施例6。

实施例15

本发明的实施例15提供一种灵芝虫草胶囊，其具体实施方式同实施例6。

本例还提供一种如上所述的灵芝虫草胶囊的制备方法，其具体实施方式同实施例6，不同之处在于，所述滤渣和水的重量比为1：30。

实施例16

本发明的实施例16提供一种灵芝虫草胶囊，其具体实施方式同实施例6，不同之处在于，所述助剂为海藻糖。

本例还提供一种如上所述的灵芝虫草胶囊的制备方法，其具体实施方式同实施例6。

实施例17

本发明的实施例17提供一种灵芝虫草胶囊，其具体实施方式同实施例6，不同之处在于，所述助剂为碳酸钙。

本例还提供一种如上所述的灵芝虫草胶囊的制备方法，其具体实施方式同实施例6。

实施例18

本发明的实施例18提供一种灵芝虫草胶囊，其具体实施方式同实施例6，不同之处在于，所述助剂为碳酸钙和环糊精，重量比为2：3。

本例还提供一种如上所述的灵芝虫草胶囊的制备方法，其具体实施方式同实施例6。

性能评价

1、抗疲劳功能动物实验：将实施例1～6提供的灵芝虫草胶囊通过卫生部认定保健食品检测机构——四川省疾病预防控制中心进行抗疲劳功能动物实验，将本发明提供的灵芝虫草胶囊根据胶囊内灵芝虫草颗粒分为200mg/kg.bw、400mg/kg.bw和600mg/kg.bw三个剂量组(分别为人体推荐量的10、20、30倍)作为小、中、高剂量实验组，并设隐形对照组，对小鼠进行连续30天经口灌胃，发现对小鼠体重无明显影响；中、高剂量组小鼠的负重游泳时间明显延长，结果为阳性；低、高剂量组小鼠的血清尿素显著降低，其结果为阳性；中、高剂量组的肝糖原含量也显著高于对照组，结果为阳性；三个剂量组血乳酸曲线下面积和对照组之间无显著性差异，结果为阴性。根据保健食品检验和评价技术规范(2003年版)判定，本发明所述灵芝虫草胶囊具有缓解疲劳的功能。

2、增强免疫力功能动物实验：将实施例1～6提供的灵芝虫草胶囊通过广西壮族自治区疾病预防控制中心进行增强免疫力功能动物实验，将本发明提供的灵芝虫草胶囊根据胶囊内灵芝虫草颗粒分为200mg/kg.bw、400mg/kg.bw和600mg/kg.bw三个剂量组(分别为人体推荐量的10、20、30倍)作为小、中、高剂量实验组，并设隐形对照组，对小鼠进行连续30～35天经口灌胃，和对照组进行对比，发现本发明提供的灵芝虫草胶囊可促进小鼠的脾淋巴细胞增殖、转化作用，提高小鼠的抗体生成细胞数和血清溶血素水平，促进小鼠的单核、巨噬细胞的碳廓清和腹腔巨噬细胞的吞噬能力，促进小鼠的迟发型变态反应，提高小鼠的NK细胞的活性，且对小鼠的体重无影响，根据卫生部保健食品检验和评价技术规范(2003年版)作为依据，可判断本发明所述灵芝虫草胶囊具有增强免疫力功能的作用。

3、安全性毒理学试验：将实施例1～6提供的灵芝虫草胶囊通过卫生部认定保健食品检测机构——四川省疾病预防控制中心进行安全性毒理学评价试验，根据保健食品检验与评价技术规范(2003年版)判断发现，将本发明所述灵芝虫草胶囊内的灵芝虫草颗粒进行大、小鼠急性经口毒性试验结果为MTD>15000mg/kg.bw，按急性毒性分级，属无毒级，且经过三项遗传毒性检测(Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验)结果发现本发明所述灵芝虫草胶囊不会致突变作用；另外，将本发明提供的灵芝虫草胶囊根据胶囊内灵芝虫草颗粒分为500mg/kg.bw、1000mg/kg.bw和2000mg/kg.bw三个剂量组(分别为人体推荐量的25、50、100倍)作为高剂量组，令设阴性对照组，对SD大鼠喂食30天，发现动物生长发育良好、体重持续增长、体态活泼，被毛光滑柔顺，试验期间未见动物出现中毒症状及死亡，对动物的体重、食物利用率、脏体比值无明显影响；血液常规检测及血生化指标检测结果与对照组之间无明显差异(P>0.05)，所侧值均在本市正常值范围内。组织病理学检查结果为出动物自发病变外，未见受食物高剂量组引起动物中毒性损伤改变。

4、有效成分含量测试：将实施例1～18提供的灵芝虫草胶囊中的灵芝虫草颗粒通过中国药典2010版的苯酚-硫酸比色法和高效液相色谱法进行多糖和腺苷含量测试，计算每克灵芝虫草颗粒的多糖和腺苷含量，结果见表1。

表1性能表征测试

5、发酵液培养中菌丝体表观评价：将实施例1～14提供的灵芝菌发酵液培养和虫草菌发酵培养的菌丝体进行表观评价，评价标准是菌丝体的大小，根据菌丝体的大小，分为小菌丝体(直径小于1mm)，中菌丝体(直径大于等于1mm，小于2.5mm)和大菌丝体(直径大于等于2.5mm)，并判断灵芝菌丝体发酵培养结束时和虫草菌丝体发酵培养结束时的中菌丝体含量，并分为1～3级，其中，1级为中菌丝体含量小于等于60％，2级为中菌丝体含量大于60％，小于等于80％，3级为中菌丝体含量大于80％，结果见表2。

表2性能表征测试

由抗疲劳功能动物实验和增强免疫力动物实验可知本发明提供的灵芝虫草胶囊具有缓解疲劳和增强免疫力的作用，根据安全性毒性学试验表明本发明提供的灵芝虫草胶囊无毒，具有安全性，另外，根据表1和表2测试结果可知，本发明所述灵芝虫草胶囊具有高的多糖和腺苷等有效成分含量。

前述的实例仅是说明性的，用于解释本发明所述方法的一些特征。所附的权利要求旨在要求可以设想的尽可能广的范围，且本文所呈现的实施例仅是根据所有可能的实施例的组合的选择的实施方式的说明。因此，申请人的用意是所附的权利要求不被说明本发明的特征的示例的选择限制。在权利要求中所用的一些数值范围也包括了在其之内的子范围，这些范围中的变化也应在可能的情况下解释为被所附的权利要求覆盖。

Claims (10)

1.一种灵芝虫草胶囊，其特征在于，所述灵芝虫草胶囊的制备原料按重量份计，包括50～60份灵芝菌丝体和40～50份虫草菌丝体；所述虫草菌丝体为蝙蝠蛾拟青霉菌丝体和/或蝙蝠蛾被毛孢菌丝体。

2.根据权利要求1所述的灵芝虫草胶囊，其特征在于，所述灵芝菌丝体的制备方法包括以下步骤：

种子液培养：将灵芝菌接入种子培养基中，装液量为50～60mL/100mL，在28～30℃，150～200r/min培养6～7天，得到所述灵芝菌种子液；

发酵液培养：将所述灵芝菌种子液接入灵芝菌发酵培养基中，接种量为6～8％，装液量为300～350mL/500mL，在28～30℃，200～250r/min培养6～7天，得到所述灵芝菌丝体发酵液；

干燥：将所述灵芝菌丝体发酵液离心沉淀、冷冻干燥，得到所述灵芝菌丝体。

3.根据权利要求2所述的灵芝虫草胶囊，其特征在于，所述灵芝菌发酵培养基的制备原料按重量百分数计，包括2～2.5％碳源、3～4％燕麦、0.01～0.2％无机盐和余量的水。

4.根据权利要求1所述的灵芝虫草胶囊，其特征在于，所述虫草菌丝体的制备方法包括以下步骤：

种子液培养：将虫草菌接入种子培养基，装液量为40～50mL/100mL，在25～28℃，150～200r/min下培养3～4天，得到虫草菌种子液；

发酵液培养：将所述虫草菌种子液接入虫草菌发酵培养基中，接种量为5～8％，装液量为100～150mL/250mL，在25～28℃、400～500r/min下发酵5～6天，得到虫草菌丝体发酵液；

干燥：将所述虫草菌丝体发酵液离心沉淀、冷冻干燥，得到所述虫草菌丝体。

5.根据权利要求4所述的灵芝虫草胶囊，其特征在于，所述虫草菌发酵培养基的制备原料按重量百分数计，包括2～3％碳源、2～3％氮源、2～3％燕麦、0.1～0.3％无机盐和余量的水。

6.根据权利要求3或5所述的灵芝虫草胶囊，其特征在于，所述碳源选自蔗糖、葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、甘油中的一种或多种。

7.根据权利要求5所述的灵芝虫草胶囊，其特征在于，所述氮源选自蛋白胨、酵母浸出物、牛肉膏、酵母膏中的一种或多种。

8.根据权利要求3或5所述的灵芝虫草胶囊，其特征在于，所述无机盐选自锌盐、钾盐、镁盐、钙盐中的一种或多种。

9.一种根据权利要求1所述的灵芝虫草胶囊，其特征在于，所述灵芝虫草胶囊的制备原料还包括助剂，所述助剂占所述灵芝菌丝体的1～3wt％，所述助剂选自碳酸钙、环糊精、硫酸镁、微晶纤维素中的一种或多种。

10.一种根据权利要求1～9任意一项所述的灵芝虫草胶囊的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)超临界二氧化碳萃取：将所述灵芝菌丝体和虫草菌丝体混合，在15～30MPa、35～40℃进行超临界二氧化碳萃取，得到酯溶萃取物和滤渣；

(2)水萃取：将步骤(1)所述滤渣和水混合，在50～70℃下搅拌1～3h，所述滤渣和水的重量比为1：(8～15)，过滤，将滤液在60～80℃减压蒸馏，得到水溶萃取物，和酯溶萃取物混合，得到浸膏；

(3)将步骤(2)所述浸膏在30～50MPa下均质、造粒、真空干燥，得到灵芝虫草颗粒，并封装到胶囊中，得到所述虫草胶囊。